CN108887498A - 用于哺乳母猪的无抗发酵浓缩饲料及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种用于哺乳母猪的无抗发酵浓缩饲料及其应用，属于饲料与发酵技术领域。该技术方案从仔猪肠道内容物中筛选枯草芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌，对三种菌株分别发酵制种子液，而后分别调整菌体浓度，以等体积混配后与不含有抗生素及化药的12.5％哺乳母猪浓缩料混合，并装袋密封发酵。制得的无抗发酵浓缩饲料对猪胃肠道功能具有确切的调节作用，同时可完善饲料的营养价值。将其按20％的比例配制成全价饲料进行母猪饲喂，可减少母猪便秘，增加哺乳母猪采食量，提高产奶量，增加断奶仔猪重，从而提高母猪产能和仔猪成活率及生长速度；同时，应用本发明可相应减少抗生素用量，缓解耐药菌株的产生，氨臭气味也得到改善，对生态环境具有积极意义。

Description

用于哺乳母猪的无抗发酵浓缩饲料及其应用
技术领域
本发明涉及动物饲料技术领域，进一步涉及发酵饲料的制备与应用，具体涉及一种用于哺乳母猪的无抗发酵浓缩饲料及其应用。
背景技术
现代养猪生产过程中，母猪繁殖障碍系列问题日趋严重，特别是经常使用抗生素的猪场不少母猪处于病理性的亚健康状态，导致生产性能的下降。由于经常使用抗生素和化学制剂，在肠道中杀灭致病菌的同时也杀死了益生菌，破坏了肠道中微生态平衡，导致有益菌群生长失调，母猪便秘、子宫炎、乳房炎等疾病增多，同时，会使仔猪多发肠道疾病、死亡率高，还伴随有断奶后母猪不发情或屡配不孕等生产繁殖问题；此外，抗生素的使用会产生耐药菌株，致使猪场异味严重，而且含有大量抗生素和矿物质的排泄物会对水源土壤造成直接的污染。
大量研究表明，以乳酸菌为主的高品质微生态发酵饲料可起到防治消化道疾病和促进生长的双重作用，还能提高机体特异性免疫水平，通过加强宿主对有害菌非特异性免疫来提高机体抗病力。目前发酵全价饲料在仔猪和生长育肥猪阶段研究较多，而无抗发酵浓缩饲料对生产母猪的报道较少，因此以生产母猪为科研对象，系统研究添加乳酸菌、芽胞杆菌、酵母菌发酵浓缩饲料对母猪繁殖性能、仔猪生长性能及生态环境的影响，为无抗发酵哺乳母猪浓缩饲料在养猪生产中的推广应用提供科学依据。
发明内容
本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种用于哺乳母猪的无抗发酵浓缩饲料及其应用，以解决现有技术中常规饲料对哺乳母猪的营养供给不够全面。
本发明要解决的另一技术问题是现有技术中常规饲料缺乏对母猪体内菌群调节作用。
为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：
用于哺乳母猪的无抗发酵浓缩饲料，是由以下方法制备的：
1)将健康断奶仔猪心脏放血，在无菌条件下，分别取十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠内容物，在5mL灭菌生理盐水中混匀10min，取上清液；
2)取步骤1)所述上清液，液涂布于MC固体培养基，37℃恒温培养24h，挑取有溶钙圈的菌落，反复划线分离纯菌株，得到乳酸菌菌株；取步骤1)所述上清液接种于营养肉汤培养基中，以37℃、200rpm的转速摇瓶培养24h，取培养液以80℃水浴15min，而后接种于新鲜的营养肉汤培养基中，以37℃、200rpm的转速摇瓶培养20h，将培养所得的菌液做系列稀释，涂布于营养肉汤琼脂培养基上，反复划线分离纯菌株，得到芽孢杆菌菌株；取步骤1)所述上清液1g，加0.85％的氯化钠注射液100mL，以30℃、180rpm的转速摇瓶培养30min，而后用平板稀释法在麦芽汁琼脂平板上以30℃的温度培养3d，挑取单菌落进一步用平板划线法纯化2～3次，将纯化后的菌株接种于麦芽汁琼脂斜面上，以30℃的温度静置培养2～3d，得到酵母菌菌株；
3)用MRS培养基培养步骤2)所得的乳酸菌菌株，得到乳酸菌发酵种子液；用LB培养基培养步骤2)所得的芽孢杆菌菌株，得到芽孢杆菌发酵种子液；用YPD培养基培养步骤2)所得的酵母菌菌株，得到酵母菌发酵种子液；
4)对步骤3)所得的乳酸菌发酵种子液、芽孢杆菌发酵种子液、酵母菌发酵种子液，将其各自菌体浓度均调整至1010cfu/mL，而后将三者等体积混合，得到混合菌液；取不含有抗生素和化学药物的12.5％哺乳母猪浓缩料，与所述混合菌液按5:3体积比混合，向混合产物中加入5倍体积的水，而后装袋密封发酵6～60d，即得到所述用于哺乳母猪的无抗发酵浓缩饲料。该技术方案所提供的无抗发酵浓缩饲料其水份含量为37.5％左右，可与其它原料混合配制成全价饲料用于母猪饲喂。
作为优选，步骤4)中所述12.5％哺乳母猪浓缩料由以下重量份的成分组成：膨化大豆32份，鱼粉24份，豆油8份，乳化剂0.4份，赖氨酸盐酸盐0.4份，50％的氯化胆碱1.2份，防霉剂0.8份，抗氧化剂0.16份，脱霉剂0.4份，食盐4份，碳酸氢钠1.6份，硫酸镁1.6份，石粉8.8份，沸石粉4.4份，磷酸氢钙9.6份，复合酶0.08份，植酸酶0.08份，甜味剂0.08份，香味剂0.08份，0.1％的有机铬0.2份，0.2％的酵母硒0.12份，50％的维生素E 0.16份，种猪多维0.24份，有机多矿1.6份。
作为优选，步骤3)中所述MRS培养基由以下成分组成：牛肉蛋白粉10g，鱼肉汁10g，酵母浸出汁粉5g，葡萄糖20g，醋酸钠5g，柠檬酸二铵2g，吐温80 0.1g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.28g，蒸馏水补足1000mL。
作为优选，步骤3)中所述LB培养基由以下成分组成：胰蛋白胨10g，酵母浸出物5g，氯化钠10g，蒸馏水补足1000mL；所述LB培养基的pH为6.8～7.2。
作为优选，步骤3)中所述YPD培养基由以下成分组成：胰蛋白胨20g，酵母膏10g，葡萄糖20g，蒸馏水补足1000mL；所述YPD培养基的pH为6.8～7.2。
作为优选，步骤3)中，对乳酸菌菌株的培养条件、对芽孢杆菌菌株的培养条件、对酵母菌菌株的培养条件均为：30～37℃，150～225rpm的转速摇瓶发酵18～36h。
本发明进一步提供了上述无抗发酵浓缩饲料用于饲喂哺乳母猪的应用。
作为优选，该应用是将所述无抗发酵浓缩饲料与能量饲料，蛋白质饲料，麦麸按照20:57.5:20:10的重量比混合均匀，而后利用该混合物饲喂哺乳母猪。
作为优选，所述能量饲料是玉米。
作为优选，所述蛋白质饲料是豆粕。
在以上技术方案中，所述用平板稀释法在麦芽汁琼脂平板上以30℃的温度培养3d，可以是通过以下方式实现的：称取菌液1g，加入盛有99ml无菌水或无菌生理盐水并装有玻璃珠的锥形瓶中。振荡20min，即成10-3的菌源悬液。再一次稀释成10-4、10-5、10-6三个稀释度。取融化并冷却至45～50度左右的麦芽汁琼脂培养基，每皿分别倾注约12ml培养基到培养皿内。注意，温度过高易将菌烫死，皿盖上冷凝水太多也会影响分离效果；低于45度培养基易凝固，平板高低不平。待平板冷却后，用无菌移液管分别吸取上述已经制好的菌源稀释液10-4、10-5、10-6三个稀释度菌悬液各0.1ml，依次滴加于相应编号的麦芽汁琼脂培养基平板上。每个稀释度做2～3个平行皿。左手拿培养皿，并用拇指将皿盖打开一缝，再火焰旁右手持无菌玻璃涂棒将菌液自平板中央均匀向四周涂布扩散。注意，切忌用力过猛，这样会将菌液直接推向平板边缘或将培养基划破。接种后，平版倒置于30度恒温箱中，培养3天。
本发明提供了一种用于哺乳母猪的无抗发酵浓缩饲料及其应用。该技术方案从仔猪肠道内容物中筛选枯草芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌，对三种菌株分别发酵制种子液，而后分别调整菌体浓度，以等体积混配后与不含有抗生素和化学药物的12.5％哺乳母猪浓缩料混合，并装袋密封发酵。制得的无抗发酵浓缩饲料对猪胃肠道功能具有确切的调节作用，同时可完善饲料的营养价值。将其按20％的比例配制成全价饲料进行母猪饲喂，可减少母猪便秘，增加哺乳母猪采食量，提高产奶量，增加断奶仔猪重，从而提高母猪产能和仔猪成活率及生长速度；同时，应用本发明可相应减少抗生素用量，缓解耐药菌株的产生，氨臭气味也得到改善，对生态环境具有积极意义。
具体来看，本发明在发酵过程中能够产生如乙酸、乳酸、短链脂肪酸等酸性代谢产物，同时产生细菌素、过氧化氢、诱导酶、双乙酰等物质，可抑制抑菌或杀菌作用，阻止毒素对上皮细胞的粘附和侵入，有效地抑制了腐败性细菌的异常增殖，减少氨、硫化氢、亚胺、酚、吲哚等有害物质的产生，促进子宫快速复原，有利于母猪分娩后体质的恢复，降低了母猪的分娩应激，提高了母猪的繁殖性能。
发酵过程中产生的各种消化酶，如植酸酶、蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和糖苷酶等，能显著提高饲料利用率，促进营养物质的代谢和吸收，增加采食量，提高消化率，与泌乳有关的激素得到了提高，增加了产奶量，提高了母猪在哺乳期的泌乳性能及仔猪的断奶重；同时，还能够减少母猪在哺乳期因泌乳所造成的体重下降，保持适宜的体膘，减少母猪断奶至发情间隔时间，并避免下一胎次产仔数减少的问题。
在发酵过程中，伴随微生物的繁殖和生长，发酵终产品含有丰富的菌体蛋白，可为哺乳母猪提供部分优质蛋白质，消除抗营养因子，提高了维生素、粗蛋白、磷、氨基酸的含量，间接降低饲料生产成本。
无抗发酵浓缩饲料中的活菌在动物肠道内萌发、定植后，快速增加有益菌数量，建立以有益菌为优势菌的肠道微生态系统，同时分泌各种菌素，抑制或杀灭有害菌，减少有害菌及其毒性代谢产物对肠道的影响；同时，代谢产生乳酸、酪酸等有机酸，酸化肠道，刺激肠道的蠕动，从而促进排便，减少便秘；而乙酸、丙酸、丁酸等短链脂肪酸，能被肠上皮细胞直接吸收，营养肠道，为盲肠和结肠的蠕动提供能量，提高肠道平滑肌的收缩能力，显著改善母猪的粪便状态，粪便湿润成型，减少了便秘。
此外，发酵过程中还产生大量的游离氨基酸、小肽、乳酸钙、有机微量元素，有利于哺乳母猪的吸收。减少粪尿中铜、铁、锰、锌、氨、氮、磷等矿物微量元素对水、土壤、空气中的排放，是一种安全、有效、环保的无抗发酵浓缩饲料，有利于生态养殖。
具体实施方式
以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。以下技术方案如未特别说明，均为本领域的常规方案，所用试剂或材料，如未特别说明，均来源于商业化渠道。
以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。在某些情况下，近似性语言可能与测量仪器的精度有关。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。
实施例1：
特定微生物的分离筛选：将健康断奶仔猪心脏放血，无菌操作，分离消化道。分别取十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠内容物，置于5ml灭菌生理盐水中混匀10min，取上清液。
A、乳酸菌的分离：将上清液涂布于MC固体培养基，37℃恒温培养24h，挑取有溶钙圈的菌落，反复划线分离至获得纯菌株。
B、芽孢杆菌的分离：将上清液接种于营养肉汤，37℃，200r/min培养24h。取培养液置80℃水浴15min，杀死非芽孢菌体，接种于营养肉汤，37℃，200r/min富集培养20h。取富集培养后的菌液做系列稀释，涂布于营养肉汤琼脂培养基，反复划线分离至获得纯菌株。
C、酵母菌的分离：取上清液1g，加0.85％的氯化钠注射液100mL，在180r/min和30℃的恒温摇床中摇瓶培养30min。而后称取菌液1g，加入盛有99ml无菌水或无菌生理盐水并装有玻璃珠的锥形瓶中。振荡20min，即成10-3的菌源悬液。再一次稀释成10-4、10-5、10-6三个稀释度。取融化并冷却至45～50度左右的麦芽汁琼脂培养基，每皿分别倾注约12ml培养基到培养皿内。注意，温度过高易将菌烫死，皿盖上冷凝水太多也会影响分离效果；低于45度培养基易凝固，平板高低不平。呆平板冷却后，用无菌移液管分别吸取上述已经制好的菌源稀释液10-4、10-5、10-6三个稀释度菌悬液各0.1ml，依次滴加于相应编号的麦芽汁琼脂培养基平板上。每个稀释度做2～3个平行皿。左手拿培养皿，并用拇指将皿盖打开一缝，再火焰旁右手持无菌玻璃涂棒将菌液自平板中央均匀向四周涂布扩散。注意，切忌用力过猛，这样会将菌液直接推向平板边缘或将培养基划破。接种后，平版倒置于30度恒温箱中，培养3天，挑取单菌落进一步用平板划线法纯化2～3次。之后用接种环挑取少量纯化后的菌体接种于麦芽汁琼脂斜面上，于30℃恒温培养箱中培养2～3d，然后将其放于4℃冰箱中保存备用。
实施例2：
菌株A(乳酸菌)发酵液的制备：
取2mL菌株A(活菌浓度为1010CFU/mL)，接种于100mL培养基中进行摇瓶发酵培养，发酵温度为28～37℃，PH值为6.0～7.0，转速为200～300r/min，发酵时间为24～48h。摇瓶发酵培养基为MRS培养基，成分为：牛肉蛋白粉10g、鱼肉汁10g、酵母浸出汁粉5g、葡萄糖20g、醋酸钠5g、柠檬酸二铵2g、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.28g、琼脂粉15g，加1g吐温80，溶解于蒸馏水1000mL中，调节pH值为6.0～7.0。
摇瓶发酵结束后进行发酵罐扩大培养，取100mL摇瓶发酵种子液接种到10L发酵罐中，装液量5L，发酵温度为30～37℃，PH值为6.0～7.0，搅拌速度为200～300r/min，发酵24～48h。发酵罐中试培养基与摇瓶发酵培养基成分一致，发酵结束后将培养基置于4℃备用。
实施例3：
菌株B(芽胞杆菌)发酵液的制备：
取2mL菌株B(活菌浓度为1010CFU/mL)，接种于100mL培养基中进行摇瓶发酵培养，发酵温度为28～37℃，PH值为7.2，转速为200～300r/min，发酵时间为24～36h。摇瓶发酵培养基为LB培养基，成分为：胰蛋白胨10g、酵母浸出物5g、氯化钠10g、蒸馏水1000mL，PH值为7.2。
摇瓶发酵结束后进行发酵罐扩大培养，取100mL摇瓶发酵种子液接种到10L发酵罐中，装液量5L，发酵温度为30～37℃，PH值为7.2，搅拌速度为200～300r/min，发酵24～36h。发酵罐中试培养基与摇瓶发酵培养基成分一致，发酵结束后将培养基置于4℃备用。
实施例4：
菌株C(酵母菌)发酵液的制备：
取2mL菌株C(活菌浓度为1010CFU/mL)，接种于100mL培养基中进行摇瓶发酵培养，发酵温度为26～30℃，PH值为6.6，转速为200r/min，发酵时间为24～48h。摇瓶发酵培养基为YPD培养基，其成分为：胰蛋白胨20g、酵母膏10g、葡萄糖20g、蒸馏水1000mL，PH值6.8～7.2。
摇瓶发酵结束后进行发酵罐扩大培养，取100mL摇瓶发酵种子液接种到10L发酵罐中，装液量5L，发酵温度为28～37℃，PH值为6.6～6.8，搅拌速度为200～300r/min，发酵36～72h。发酵罐中试培养基与摇瓶发酵培养基成分一致，发酵结束后将培养基置于4℃备用。
实施例5：
一种哺乳母猪无抗发酵浓缩饲料的制备方法，其步骤是：
(1)特定微生物的分离筛选：将健康断奶仔猪心脏放血，无菌操作，分离消化道。分别取十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠内容物，置于5mL灭菌生理盐水中混匀10min，取上清液。
A、乳酸菌的分离：将上清液涂布于MC固体培养基，37℃恒温培养24h，挑取有溶钙圈的菌落，反复划线分离至获得纯菌株。
B、芽孢杆菌的分离：将上清液接种于营养肉汤，37℃，200r/min培养24h。取培养液置80℃水浴15min，杀死非芽孢菌体，接种于营养肉汤，37℃，200r/min富集培养20h。取富集培养后的菌液做系列稀释，涂布于营养肉汤琼脂培养基，反复划线分离至获得纯菌株。
C、酵母菌的分离：取上清液1g，加0.85％的氯化钠注射液100mL，在180r/min和30℃的恒温摇床中摇瓶培养30min。而后称取菌液1g，加入盛有99ml无菌水或无菌生理盐水并装有玻璃珠的锥形瓶中。振荡20min，即成10-3的菌源悬液。再一次稀释成10-4、10-5、10-6三个稀释度。取融化并冷却至45～50度左右的麦芽汁琼脂培养基，每皿分别倾注约12ml培养基到培养皿内。注意，温度过高易将菌烫死，皿盖上冷凝水太多也会影响分离效果；低于45度培养基易凝固，平板高低不平。呆平板冷却后，用无菌移液管分别吸取上述已经制好的菌源稀释液10-4、10-5、10-6三个稀释度菌悬液各0.1ml，依次滴加于相应编号的麦芽汁琼脂培养基平板上。每个稀释度做2～3个平行皿。左手拿培养皿，并用拇指将皿盖打开一缝，再火焰旁右手持无菌玻璃涂棒将菌液自平板中央均匀向四周涂布扩散。注意，切忌用力过猛，这样会将菌液直接推向平板边缘或将培养基划破。接种后，平版倒置于30度恒温箱中，培养3天，挑取单菌落进一步用平板划线法纯化2～3次。之后用接种环挑取少量纯化后的菌体接种于麦芽汁琼脂斜面上，于30℃恒温培养箱中培养2～3d，然后将其放于4℃冰箱中保存备用。
(2)菌株液体发酵：对选出的菌株A、菌株B、菌株C分别进行常规液体发酵，制作液体发酵种子液。
所述的菌株A采用MRS培养基(组成成份为：牛肉蛋白粉10g、鱼肉汁10g、酵母浸出汁粉5g、葡萄糖20g、醋酸钠5g、柠檬酸二铵2g、吐温80为0.1g、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.28g，用蒸馏水配制成1000mL)，摇瓶发酵培养条件为：发酵温度30～37℃，发酵时间18～36h，转速150～225r/min。
所述的菌株B采用LB培养基(成分为：胰蛋白胨10g、酵母浸出物5g、氯化钠10g、蒸馏水1000mL，PH值6.8～7.2)，摇瓶发酵培养条件为：发酵温度30～37℃，发酵时间18～36h，转速150～225r/min。
所述的菌株C采用YPD培养基(成分为：胰蛋白胨20g、酵母膏10g、葡萄糖20g、蒸馏水1000mL，PH值6.8～7.2)，摇瓶发酵培养条件为：发酵温度30～37℃，发酵时间18～36h，转速150～225r/min。
(3)袋装厌氧发酵：菌株A、菌株B和菌株C分别计数后调整浓度为1010cfu/mL，按体积比1:1:1进行混合制备发酵接种菌剂，发酵的底物为不含任何抗生素和化学制剂日粮的传统型(添加比例为12.5％)哺乳母猪浓缩料(该浓缩料由以下重量份的成分组成：膨化大豆32份，鱼粉24份，豆油8份，乳化剂0.4份，赖氨酸盐酸盐0.4份，50％的氯化胆碱1.2份，防霉剂0.8份，抗氧化剂0.16份，脱霉剂0.4份，食盐4份，碳酸氢钠1.6份，硫酸镁1.6份，石粉8.8份，沸石粉4.4份，磷酸氢钙9.6份，复合酶0.08份，植酸酶0.08份，甜味剂0.08份，香味剂0.08份，0.1％的有机铬0.2份，0.2％的酵母硒0.12份，50％的维生素E 0.16份，种猪多维0.24份，有机多矿1.6份)，发酵时发酵液接种比为发酵液：水＝5％：25％，菌液质量和浓缩料比为3:5。混合后装袋密封发酵，发酵时间6～30天，获得一种哺乳母猪无抗发酵浓缩饲料。
实施例6：
一种哺乳母猪无抗发酵浓缩饲料在制备哺乳母猪饲料中的应用，其步骤是：
A、对照组饲料配制：根据表1的配方进行饲料配制，按照玉米粉、豆粕、麦皮、12.5％的哺乳母猪浓缩饲料(无抗生素)的顺序依次加入到混合机中，混合5～10分钟。
B、实验组饲料配制：根据表1的配方进行饲料配制按照玉米粉、豆粕、麦皮、20％的哺乳母猪无抗发酵浓缩饲料(水份在37.5％，折合成风干物添加比例为12.5％)的顺序依次加入到混合机中，混合5～10分钟。
表1猪全价料配方
哺乳母猪无抗发酵浓缩饲料养猪试验：
选择胎次(第4胎)、体重和体况相近、健康无病、妊娠后期(91～95d)的长大杂二元母猪30头，随机分成2组(试验组和对照组)，每组15头，饲养于妊娠舍，母猪于预产期前7天由妊娠舍转入到哺乳舍，舍内为产床饲养，哺乳期21d。
试验组与对照组基础饲粮的组成都相同，以猪场使用的不含任何抗生素和化学制剂日粮为对照组(传统型母猪浓缩料添加量为12.5％)，以添加20％无抗生素发酵传统型浓缩饲料(水份在37.5％，折合成风干的为12.5)为试验组，试验期58d。各组的日常饲养管理方法都保持一致，并记录各组的窝产仔数、窝初生重、窝断奶重、母猪产后10天内采食情况、母猪粪便情况、母猪断奶后发情情况、仔猪腹泻情况进行统计分析。
经过58天的饲养试验，试验母猪的滞产数、早产数、MMA发病数，窝产仔数、窝初生重、窝断奶重、母猪产后5天内采食恢复情况、母猪断奶后发情情况、仔猪腹泻情况见表2。
表2饲喂无抗发酵浓缩饲料对母猪、仔猪生产性能的影响
结果表明，从表2可以看出，试验母猪通过饲喂无抗发酵浓缩饲料后的滞产数、早产数、MMA发病数，窝产仔数、窝初生重、窝断奶重、母猪产后5天内采食恢复情况、母猪断奶后发情情况、仔猪腹泻情况明显优于对照组。
以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.用于哺乳母猪的无抗发酵浓缩饲料，其特征在于是由以下方法制备的：
1)将健康断奶仔猪心脏放血，在无菌条件下，分别取十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠内容物，在5mL灭菌生理盐水中混匀10min，取上清液；
2)取步骤1)所述上清液，液涂布于MC固体培养基，37℃恒温培养24h，挑取有溶钙圈的菌落，反复划线分离纯菌株，得到乳酸菌菌株；取步骤1)所述上清液接种于营养肉汤培养基中，以37℃、200rpm的转速摇瓶培养24h，取培养液以80℃水浴15min，而后接种于新鲜的营养肉汤培养基中，以37℃、200rpm的转速摇瓶培养20h，将培养所得的菌液做系列稀释，涂布于营养肉汤琼脂培养基上，反复划线分离纯菌株，得到芽孢杆菌菌株；取步骤1)所述上清液1g，加0.85％的氯化钠注射液100mL，以30℃、180rpm的转速摇瓶培养30min，而后用平板稀释法在麦芽汁琼脂平板上以30℃的温度培养3d，挑取单菌落进一步用平板划线法纯化2～3次，将纯化后的菌株接种于麦芽汁琼脂斜面上，以30℃的温度静置培养2～3d，得到酵母菌菌株；
3)用MRS培养基培养步骤2)所得的乳酸菌菌株，得到乳酸菌发酵种子液；用LB培养基培养步骤2)所得的芽孢杆菌菌株，得到芽孢杆菌发酵种子液；用YPD培养基培养步骤2)所得的酵母菌菌株，得到酵母菌发酵种子液；
4)对步骤3)所得的乳酸菌发酵种子液、芽孢杆菌发酵种子液、酵母菌发酵种子液，将其各自菌体浓度均调整至1010cfu/mL，而后将三者等体积混合，得到混合菌液；取不含有抗生素和化学药物的12.5％哺乳母猪浓缩料，与所述混合菌液按5:3体积比混合，向混合产物中加入5倍体积的水，而后装袋密封发酵6～60d，即得到所述用于哺乳母猪的无抗发酵浓缩饲料。
2.根据权利要求1所述的用于哺乳母猪的无抗发酵浓缩饲料，其特征在于步骤4)中所述12.5％哺乳母猪浓缩料由以下重量份的成分组成：膨化大豆32份，鱼粉24份，豆油8份，乳化剂0.4份，赖氨酸盐酸盐0.4份，50％的氯化胆碱1.2份，防霉剂0.8份，抗氧化剂0.16份，脱霉剂0.4份，食盐4份，碳酸氢钠1.6份，硫酸镁1.6份，石粉8.8份，沸石粉4.4份，磷酸氢钙9.6份，复合酶0.08份，植酸酶0.08份，甜味剂0.08份，香味剂0.08份，0.1％的有机铬0.2份，0.2％的酵母硒0.12份，50％的维生素E 0.16份，种猪多维0.24份，有机多矿1.6份。
3.根据权利要求1所述的用于哺乳母猪的无抗发酵浓缩饲料，其特征在于步骤3)中所述MRS培养基由以下成分组成：牛肉蛋白粉10g，鱼肉汁10g，酵母浸出汁粉5g，葡萄糖20g，醋酸钠5g，柠檬酸二铵2g，吐温80 0.1g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.28g，蒸馏水补足1000mL。
4.根据权利要求1所述的用于哺乳母猪的无抗发酵浓缩饲料，其特征在于步骤3)中所述LB培养基由以下成分组成：胰蛋白胨10g，酵母浸出物5g，氯化钠10g，蒸馏水补足1000mL；所述LB培养基的pH为6.8～7.2。
5.根据权利要求1所述的用于哺乳母猪的无抗发酵浓缩饲料，其特征在于步骤3)中所述YPD培养基由以下成分组成：胰蛋白胨20g，酵母膏10g，葡萄糖20g，蒸馏水补足1000mL；所述YPD培养基的pH为6.8～7.2。
6.根据权利要求1所述的用于哺乳母猪的无抗发酵浓缩饲料，其特征在于步骤3)中，对乳酸菌菌株的培养条件、对芽孢杆菌菌株的培养条件、对酵母菌菌株的培养条件均为：30～37℃，150～225rpm的转速摇瓶发酵18～36h。
7.权利要求1～6任一项所述无抗发酵浓缩饲料用于饲喂哺乳母猪的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：是将所述无抗发酵浓缩饲料与能量饲料，蛋白质饲料，麦麸按照20:57.5:20:10的重量比混合均匀，而后利用该混合物饲喂哺乳母猪。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于所述能量饲料是玉米。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于所述蛋白质饲料是豆粕。
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