CN108885211A - 细胞收纳芯片和使用该细胞收纳芯片的筛选方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种细胞收纳芯片，其能够以高精度且高效率识别并分取目标检体，另外，处理简单，能够在不对细胞造成损伤的情况下容易地进行回收。细胞收纳芯片(60)具有：基体(60a)；设置于该基体的上表面(60b)且可一对一地收纳多个细胞M的多个孔(61)、(61)、……，和形成于构成该多个孔的各内表面(61a)和基体(60a)的上表面(60b)的被覆层(62)。被覆层(62)的表面具有对细胞的低粘附性以及对特异性结合材料的结合性，所述特异性结合材料具有与收纳于孔(61)的细胞(M)产生的被产生物质或者收纳于孔(61)的细胞(M)释放的被释放物质的结合性。

Description

细胞收纳芯片和使用该细胞收纳芯片的筛选方法
技术领域
本发明涉及筛选目标检体时收纳多个细胞的细胞收纳芯片以及使用该细胞收纳芯片的筛选方法，特别涉及用于对孔和细胞照射光，并基于结合在细胞收纳芯片上的物质发出的荧光来检测成为目标检体的细胞，从而选择性地抽吸并回收该细胞的细胞收纳芯片以及使用该细胞收纳芯片的筛选方法。
背景技术
目前为止，筛选装置作为用于识别、分取细胞等微小检体的装置，已在医疗领域的研究和检测等中广泛地使用。而且，近年来，在研究和检测机构中，希望在实现不伴有检体破坏的识别、分取的同时，通过更准确地进行这些处理来提高研究和检测的效率。特别是在规定领域中，强烈要求从多个细胞中以一个细胞为单位识别和分取特定的细胞，因此，在这样的以一个细胞为单位进行识别和分取的处理中，也需要准确性的提高，并高效率化。
在以非破坏方式进行的细胞的识别和分取处理中，为了能够明确地区别目标检体和非目标检体，希望将包含多个微细粒子的培养基保持在细胞收纳芯片上。因此，以往例如公开了如下方法：使用具有使抗免疫球蛋白(Ig)抗体与芯片上表面的一部分结合而成的被覆层的微孔阵列芯片，将抗体分泌细胞分注于该微孔阵列芯片的各孔，使由孔中所收纳的细胞的至少一部分分泌的抗体与上述被覆层的抗Ig抗体结合，通过用荧光标记抗原检测该分泌抗体来确定目标检体(专利文献1)。
另外，为了从外部环境选择性地结合所期望的目标检体或者为了将非目标检体从表面统一除去，公开了功能性涂层，其通过向板状的支承体供给被固定在该支承体上的低非特异性结合性的基质、和在非特异性结合性基质内通过物理性相互缠结而共价键结合的活性成分而构成(专利文献2)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本专利第4148367号说明书
专利文献2：日本特表2004-531390号公报
发明内容
发明要解决的课题
但是，对于专利文献1的技术而言，在芯片上表面的局部使抗Ig抗体结合后直至确定目标检体期间必须保持芯片上表面为湿润状态，所以，不能长久保持抗Ig抗体。另外，在细胞的抗体分泌中有时该细胞附着于孔的内表面，因此变得难以回收该细胞，即使能够回收，也很有可能对作为目标检体的细胞造成损伤。
另外，专利文献2的构成是使目标检体选择性地结合于设置在板状支承体的上表面的功能性涂层，但不是在各孔内保持一个细胞的构成，不能说以细胞为单位识别和分取特定的细胞的精度、效率高。
本发明的目的在于提供细胞收纳芯片以及使用上述细胞收纳芯片的筛选方法，其能够以高精度且高效率识别和分取目标检体，并且，处理简单，可在不对细胞产生损伤的情况下容易地回收。
用于解决课题的手段
为了实现上述目的，本发明的细胞收纳芯片是用于收纳多个细胞的细胞收纳芯片，其特征在于，具有由透光性材料构成的基体，和在所述基体的至少一个主表面可收纳细胞的多个孔，包含所述多个孔的所述细胞收纳芯片的表面具有低细胞粘附性以及对特异性结合材料的结合性，所述特异性结合材料具有与收纳于所述孔的细胞产生的被产生物质和/或该细胞释放的被释放物质的结合性。
优选所述孔具有相当于收纳1个细胞的大小。
优选所述细胞收纳芯片的表面还具有亲水性。
在所述基体上可以具有被覆层，所述被覆层具有低细胞粘附性、以及对于特异性结合材料的结合性，所述特异性结合材料具有与收纳于所述孔的细胞产生的被产生物质和/或该细胞释放的被释放物质的结合性。
另外，在所述基体上可以具有被覆层，所述被覆层的表面具有亲水性、低细胞粘附性、以及对于特异性结合材料的结合性，所述特异性结合材料具有与收纳于所述孔的细胞产生的被产生物质和/或该细胞释放的被释放物质的结合性。
优选具有所述低细胞粘附性的所述被覆层为具有低细胞粘附性材料的被覆层。
优选所述低细胞粘附性材料为低蛋白质吸附性材料。
优选地，对于所述特异性结合材料具有结合性的所述被覆层为具有结合材料的被覆层，所述结合材料具有与所述特异性结合材料的结合性。
优选具有所述亲水性的所述被覆层为具有亲水性材料的被覆层。
优选所述细胞收纳芯片的表面的接触角为60°以下。
优选所述结合材料为具有选自活性酯基、氨基、羧基、硫醇基、醛基、肼基、羟氨基和溴代乙酰基中的至少1个官能团的含官能团的材料。
优选所述结合材料为选自抗生蛋白链菌素、抗生物素蛋白、生物素或它们的衍生物中的至少1种。
优选所述低蛋白质吸附性材料为高分子化合物。
优选所述细胞收纳芯片用于筛选装置，该筛选装置用于基于从细胞收纳芯片上的物质发出的光信息来检测规定的细胞，并选择性地获取检测到的细胞。
为了达成上述目的，本发明的筛选方法，是基于从细胞收纳芯片上的物质发出的光信息来检测规定的细胞，并选择性地获取检测到的细胞的筛选方法，所述筛选方法的特征在于，具有如下工序：准备细胞收纳芯片的准备工序，其中，该细胞收纳芯片具有设置于由透光性材料构成的基体的多个孔，并且具有如下表面，该表面具有低细胞粘附性和对于特异性结合材料的结合性，该特异性结合材料具有与收纳于所述孔的细胞产生的被产生物质和/或该细胞释放的被释放物质的结合性；第1结合工序，其中，在所述细胞收纳芯片的表面结合所述特异性结合材料；细胞收纳工序，其中，将包含多个细胞的液体导入所述细胞收纳芯片，以细胞为单位将所述多个细胞收纳于所述多个孔；第2结合工序，其中，将所述特异性结合材料与来自收纳于所述孔的细胞的被产生物质和/或被释放物质结合；第3结合工序，其中，将具有光信息的光信息存储物质与所述被产生物质或所述被释放物质或者所述特异性结合材料结合；计测工序，其中，计测所述光信息存储物质的光信息；识别、回收工序，其中，基于所述计测工序的计测结果，从所述多个细胞中识别、回收作为目标检体的细胞。
发明的效果
根据本发明，包含多个孔的细胞收纳芯片的表面具有低细胞附着性，同时对特异性结合材料具有结合性，所述特异性结合材料具有与孔中所收纳的细胞产生的被产生物质和/或该细胞释放的被释放物质的结合性。现有的芯片由于是预先使与被产生物质和/或被释放物质具有结合性的物质结合在芯片上的构成，因此，难以长期保存该芯片，并且精度有可能由于干燥等而降低。另一方面，根据本发明，通过细胞收纳芯片的表面具有与上述特异性结合材料结合的结合性，从而不必预先使与被产生物质和/或被释放物质具有结合性的特异性结合材料结合在细胞收纳芯片上，并且能够防止干燥等引起的精度降低。另外，由于细胞收纳芯片表面的与上述特异性结合材料结合的结合性，上述特异性结合材料与包含孔的细胞收纳芯片的表面结合，另外，由孔内的细胞所产生的被产生物质和/或该细胞释放的被释放物质与该特异性结合材料结合，因此，能够将该孔自身作为目标检体识别时的标记部位，并能够在不对细胞产生损伤的情况下识别目标检体。另外，通过细胞收纳芯片的表面具有低细胞附着性，能够防止孔内的细胞粘接于细胞收纳芯片表面，从而不需要使用阻断剂等进行涂布处理，并且能够以高效率回收作为目标检体的细胞，进而在细胞回收时能够在不对该细胞产生损伤的情况下进行回收。
另外，根据本发明，准备细胞收纳芯片，该细胞收纳芯片具有如下表面，该表面具有低细胞粘附性和对特异性结合材料的结合性，该特异性结合材料具有与收纳于孔的细胞产生的被产生物质和/或该细胞释放的被释放物质的结合性；在细胞收纳芯片的表面结合特异性结合材料；将包含多个细胞的液体导入细胞收纳芯片，以细胞为单位将多个细胞收纳于多个孔；将所述特异性结合材料与来自收纳于孔的细胞的被产生物质和/或被释放物质结合；将具有光信息的光信息存储物质与所述被产生物质或被释放物质或者所述特异性结合材料结合，因此，能够以高精度且高效率识别、回收目标检体。另外，处理简单，能够在细胞回收时容易地实现回收，且不对细胞产生损伤。
附图说明
图1为示意性地表示本发明的实施方式涉及的筛选装置的构成的侧视图。
图2为图1的筛选装置的立体图。
图3为表示图2中的移动部和搭载用平台的详细情况的立体图。
图4为表示图3的搭载用平台的构成的立体图。
图5为表示细胞收纳芯片和该细胞收纳芯片的固定构件的构成的放大截面图。
图6为表示图5的细胞收纳芯片的详细构成的局部截面图。
图7(a)～(e)是表示图6的形成于孔的内表面的被覆层所含有的亲水性材料、含官能团的材料和低细胞粘附性材料的组合例的示意图。
图8(a)～(e)为用于说明图6的细胞收纳芯片的使用方法的示意图。
图9是表示使用图8的细胞收纳芯片的筛选方法的流程图。
图10(a)～(d)为用于说明图9的各步骤的示意图。
图11为表示对各种细胞收纳芯片与蒸馏水的接触角进行测定、比较的结果的图。
图12为表示图9的筛选方法的变形例的流程图。
具体实施方式
以下参照附图对本发明的实施方式详细地说明。
(筛选装置的构成)
图1为示意性地表示本实施方式涉及的筛选装置的构成的侧视图，图2为图1的筛选装置的立体图。图1和图2的筛选装置表示其一例，本发明的筛选装置并不限于图1和图2的实施方式。应予说明，为了便于说明，将图1的纸面垂直方向规定为X方向，将左右方向规定为Y方向，将Z方向规定为与X方向和Y方向垂直的方向。
在图1和图2中，筛选装置1是如下装置：基于细胞收纳芯片60内的多个微细粒子(例如生物体的细胞等)发出的光信息检测成为目标检体的规定的细胞，选择性地抽吸并取得收纳细胞的孔内满足回收条件的细胞，将其回收到收纳板50。
具体而言，筛选装置1包括：底座11、支承部12(参照图2)、回收部13、计测部14、图像解析部15和移动部16，如图2中所示，为了防止来自外部的光、异物进入，将上述的各部用盖19覆盖。
底座11是用于保持筛选装置1的各要素的主体框架。该底座11具有大致水平地配置的板构件111、112、113，经由这些板材保持回收部13、计测部14和移动部16。板构件111、112被多个垂直构件114平行地固定，板构件112、113被多个垂直构件115平行地固定。该垂直构件114由阻断振动的材质构成，并构成为可调整高度。
在上述多个板材中位于最上方的板构件113上固定有支承部12和支承台30。支承部12在板构件113上被配置成沿着Z方向垂直地延伸。支承台30具有脚部30a和支承板30b。将板构件111、112、113和支承板30b配置成沿Z方向相互隔开规定间隔。
在支承台30的支承板30b上载置并固定有移动部16。在移动部16上搭载有搭载用平台40、收纳板50和细胞收纳芯片60。移动部16可以将搭载用平台40、即搭载于该搭载用平台40的收纳板50和细胞收纳芯片60沿着X方向和/或Y方向移动来定位。
图3为表示图2中的移动部16和搭载用平台40的详细情况的立体图。
如图3中所示，移动部16具有平台161和在该平台上配置的平台162。平台161被固定于支承台30，并且以能够沿X方向移动进而定位的方式搭载平台162。平台162以能够沿Y方向移动并定位的方式载置搭载用平台40。
在平台161的上表面设置有导轨163、163和马达164。在平台162的下表面设置有截面U字型的卡合构件165、165和螺母166。卡合构件165、165分别与导轨163、163可移动地卡合。马达164的进给丝杆167与螺母166螺合。
马达164与控制部100电连接，当根据来自控制部100的指令使马达164工作，从而转动进给丝杆167时，平台162沿着X方向移动来定位。
在平台162的上表面设置有导轨168、168和马达169。在搭载用平台40的下表面设置有截面U字型的卡合构件170、170和螺母171。卡合构件170、170分别与导轨168、168可移动地卡合。另外，马达169的进给丝杆172与螺母171螺合。
马达164与控制部100电连接，当根据来自控制部100的指令使马达164工作，从而转动进给丝杆172时，搭载用平台40沿着Y方向移动来定位。
另外，平台161具有开口部173，平台162具有开口部174，进而，搭载用平台40具有开口部175。这些开口部173、174、175具有即使平台162在X方向上移动、搭载用平台40在Y方向上移动也总是重叠的大小。经由这些开口部173、174、175，将来自计测部14的物镜110侧的光L照射于搭载用平台40上的细胞收纳芯片60的细胞。
另外，即使在平台162沿X方向上移动并且搭载用平台40沿Y方向上移动的情况下，来自物镜110侧的光L也通过开口部173、174、175，照射到搭载用平台40上的细胞收纳芯片60的细胞。即，在平台161、162和搭载用平台40处于任意相对位置的情况下，都能够由细胞和/或收纳细胞的孔产生荧光。
图4为表示图3的搭载用平台40上的收纳板50和细胞收纳芯片60的构成的立体图。
搭载用平台40例如为长方形的板状构件，在该搭载用平台40的搭载面40a上以可装卸的方式在Y方向上并列地搭载收纳板50和细胞收纳芯片60。
收纳板50为板状构件，在收纳板50中将多个孔51沿X方向和Y方向等间隔地排列成矩阵状。这些孔51在作为目标检体的细胞从抽吸-排出毛细管140依次被排出时，成为能够分别将该细胞回收并存储的回收存储部。收纳板50的孔51例如为铅直方向截面呈大致U字型的凹部或者杯型的凹部。
细胞收纳芯片60被固定构件120固定在搭载用平台40的搭载面40a上，该固定构件120定位于搭载用平台40的规定位置并被固定。
图5为表示细胞收纳芯片60和固定构件120的构成的放大截面图。如该图所示，固定构件120以如下方式构成：能够将细胞收纳芯片60固定并保持在相对于搭载用平台40的搭载面40a具有一定高度的基准面CL的位置。具体而言，固定构件120具有以包围细胞收纳芯片60的端部的方式配置的框体121、122，由这些构件共同保持细胞收纳芯片60。
将细胞收纳芯片60沿Z方向配置于框体121、122之间，通过被框体121、122夹持，从而与框体121、122分别压接。由此确保细胞收纳芯片60与框体121之间的密封性。
而且，在细胞收纳芯片60与框体121圧接的状态下，细胞收纳芯片60的上表面60b经由框体122被定位于基准面CL。由此可以准确地管理细胞收纳芯片60的上表面60b与计测部14的物镜110和收纳板50之间沿Z方向的距离。换言之，可以准确地管理细胞收纳芯片60的孔61内的细胞M的位置与计测部14的物镜110和收纳板50之间的距离。
另外，框体121具有用于保持液体A的液体保持部129，该液体保持部129被设置于框体121的平面方向中央部且细胞收纳芯片60的上方，从而框体121能够保持培养基、试剂液、反应液等各种液体。即，液体保持部129形成于框体121的内部空间。需要说明的是，框体121能够使用例如未图示的铰链机构部相对于框体122开闭，由此能够将固定构件120内的细胞收纳芯片60取出，更换为新的细胞收纳芯片。细胞收纳芯片60是用于收纳多个细胞M的板状构件。细胞收纳芯片60的详细构成如后所述。
回收部13包括用于分取经识别后的细胞M即目标检体的抽吸-排出毛细管140。抽吸-排出毛细管140是沿着Z2方向(下方向)缩径的前端逐渐变细的中空构件，在其内部形成有管路141。
参见图1，计测部14通过对细胞收纳芯片60的包含多个孔61的区域照射光L，从而从该区域内的细胞M和/或收纳细胞的孔61或者其附近产生荧光，并接收该荧光。利用图像解析部15对接收的来自细胞M和/或收纳细胞的孔61或者其附近的荧光进行图像解析。
具体而言，计测部14通过对细胞收纳芯片60和收纳于细胞收纳芯片60的细胞M照射由至少1个以上的光源导出的光，从而以比各微细粒子的平均尺寸更细的分辨率取得由透射光、反射光或荧光确定的形状和位置信息以及荧光、化学发光等的亮度信息，并且取得细胞收纳芯片60自身的形状、配置在细胞收纳芯片60上的孔61的位置坐标、大小等信息。
另外，计测部14具有物镜110，物镜110向细胞收纳芯片60导出光。将物镜110配置于细胞收纳芯片60和移动部16的下方，将抽吸-排出毛细管140配置于细胞收纳芯片60和移动部16的上方。即，将细胞收纳芯片60和移动部16沿Z方向配置于物镜110与抽吸-排出毛细管140之间。
另外，计测部14具有：作为光源的激发光源181；用于在由激发光源181所照射的光中只选择所期望的激发波长范围的光学滤波器(激发滤波器)184；用于只选择来自细胞收纳芯片60的光信息的所期望的波长范围的光学滤波器(荧光滤波器)185；用于根据激发光与光信息的波长范围之差来切换光路的由二向色镜186构成的荧光滤波器单元183；用于将从激发光源181射出的光导向细胞收纳芯片60并且收集由细胞收纳芯片60得到的光信息的物镜110；使物镜110在光轴方向上可动的具有自动对焦功能的聚焦单元187；作为用于检测来自计测对象的光信息的光检测部的受光部188。将荧光滤波器单元183和受光部188固定于荧光落射单元190。
激发光源181例如由激光光源、汞灯构成。将遮光器单元(shutter unit)182配置于激发光源181与荧光滤波器单元183之间，遮光器单元182在不对细胞收纳芯片60的细胞M照射光L的情况下，可以阻断即将到达荧光滤波器单元183的、激发光源181产生的光L。
另外，计测部14具有未图示的半透反射镜，通过切换半透反射镜和荧光滤波器单元183，能够将来自激发光源181的光的一部分照射于观察对象，并且将来自观察对象的反射光的一部分导入受光部188，从而计测细胞收纳芯片60的上表面60b和在该上表面形成的孔61的形状和位置信息。
另外，在该计测部14中，通过多个物镜110a、110b···例如进行循环式(revolver)旋转，从而能够将所需倍率的物镜定位于细胞收纳芯片60的下方位置。聚焦单元187通过根据例如来自控制部100的指令使马达189工作，使配置在细胞收纳芯片60的下方位置的例如物镜110沿着Z方向移动来定位，从而能够相对于细胞收纳芯片60的微细粒子M调整物镜110的焦距。
图像解析部15算出各孔61内的多个细胞M和/或收纳细胞的孔61内或其附近的、至少发出最大强度的荧光的细胞M和/或收纳细胞的孔61或其附近的荧光亮度。
具体而言，图像解析部15通过对所计测的形状信息和光信息进行解析，从而取得用于确认至少在各孔61内存在满足能够由测定者设定的亮度条件的细胞M的数据。而且，图像解析部15通过将透射光或反射光所给出的孔61的位置坐标信息和荧光-化学发光的光信息相互对照，提取来自细胞M和/或收纳细胞的孔61内或其附近的光信息。另外，计测部14具有自动对焦功能，所以，能够在规定位置以对焦的状态进行计测，并且对于抽吸-排出毛细管140的尖端部与细胞收纳芯片60上表面的位置关系，能够通过对两者实施自动对焦来进行判断。
控制部100在X-Y平面内检测发出满足回收条件的亮度的荧光的孔61的位置。而且，控制部100通过向图3的马达164、169发出控制驱动信号，从而能够使移动部16上的细胞收纳芯片60的孔61位于抽吸-排出毛细管140的正下方。即，抽吸-排出毛细管140以如下方式构成：能够以特定的孔为目标，抽吸该孔内的细胞。另外，抽吸-排出毛细管140可从多个孔内的被选择的孔、即装有满足规定的回收条件的细胞的孔内抽吸一个或多个细胞。并且，抽吸-排出毛细管140可将上述所抽吸的一个或多个细胞排出至收纳板50的规定的孔51。
(细胞收纳芯片的构成)
图6为表示图5的细胞收纳芯片60的详细构成的局部截面图。如该图中所示，细胞收纳芯片60具有：由透光性材料构成的基体60a；和设置在该基体的上表面60b(至少一个主表面)、并能够一对一地收纳多个细胞M的多个孔61，61，···。
通过该细胞收纳芯片60的表面形状和利用干法的表面改性，可以是在不形成被覆层的情形下构成细胞收纳芯片的表面的实施方式，但以下对于形成被覆层的情形进行详细说明。
细胞收纳芯片60具有在构成该多个孔61，61，···的各孔的内表面61a和基体60a的上表面60b形成的被覆层62。被覆层62可以只形成于孔61的内表面61a，也可以形成于孔61的内表面61a和基体60a的上表面60b这两者。
细胞收纳芯片60例如由玻璃、塑料或者以它们中的任一者作为主成分的材料构成，在其上表面60b将多个孔61例如排列成矩阵状。各孔61例如为铅直方向的截面大致梯形或者大致杯型的凹部，孔61的水平方向的截面形状优选为大致圆形。在细胞收纳芯片60上将细胞M分注或一齐注入时，孔61具有相当于收纳1个细胞M的大小，例如，在孔61的水平方向的截面形状为圆形的情况下，当细胞M的直径为15(m时，孔的内径和深度优选比细胞的直径略大，为20(m左右。另外，孔61优选具有相当于1个细胞M的大小，更优选具有只是1个细胞M进入的大小。
被覆层的62的表面具有对细胞的低细胞粘附性以及对于特异性结合材料的结合性，所述特异性结合材料具有与收纳于孔61的细胞M产生的被产生物质和/或收纳于孔61的细胞M放出的被释放物质的结合性。
具体而言，例如，被覆层62包含结合特异性结合材料的结合材料和对于孔61内的细胞M为低粘附的低细胞粘附性材料，所述特异性结合材料具有与收纳于孔61的细胞M产生的被产生物质或收纳于孔61的细胞M放出的被释放物质的结合性。
此外，被覆层62的表面优选具有亲水性、低细胞粘附性以及对特异性结合材料的结合性，所述特异性结合材料具有与收纳于孔61的细胞M产生的被产生物质和/或收纳于孔61的细胞M放出的被释放物质的结合性。具体而言，例如被覆层62可以包含亲水性材料、对于孔61内的细胞M为低粘附的低细胞粘附性材料和结合特异性结合材料的结合材料，所述特异性结合材料具有与收纳于孔61的细胞M产生的被产生物质和/或收纳于孔61的细胞M放出的被释放物质的结合性。或者，被覆层62中，对于孔61内的细胞M为低粘附的低细胞粘附性材料或者结合特异性结合材料的结合材料可以具有亲水性，所述特异性结合材料具有与收纳于孔61的细胞M产生的被产生物质和/或收纳于孔61的细胞M放出的被释放物质的结合性。
上述结合材料优选为具有选自后述官能团的至少一种的含官能团的材料，或者，优选为选自抗生蛋白链菌素、抗生物素蛋白、生物素或它们的衍生物中的至少1种。由此，被覆层62的表面的上述结合材料和特异性结合材料结合，所述特异性结合材料与收纳于孔61的细胞产生的被产生物质和/或收纳于孔61的细胞释放的被释放物质结合，该特异性结合材料与上述被产生物质和/或被释放物质结合。
低细胞粘附性材料构成被覆层62的主要成分，结合上述特异性材料的结合材料在被覆层62的面内方向均匀分散配置在被覆层62内。该低细胞粘附性材料例如优选针对蛋白质的低蛋白质吸附性材料。亲水性材料可以与低细胞粘附性材料一起构成被覆层62的主要成分，也可以与结合上述特异性结合材料的结合材料一起在被覆层62的面内方向均匀分散配置在被覆层62内。
可以如下的组合来构成被覆层62中所含的亲水性材料、上述结合材料和低细胞粘附性材料。以下举例说明结合材料含有官能团的材料的情形。
例如，如图7(a)所示，可举出将具有亲水性和低细胞粘附性两者的材料作为第1材料并将具有含官能团的材料作为第2材料的实施方式。此时，第1材料可以构成为被覆层62的主要成分。
另外，如图7(b)所示，可举出将具有亲水性和低细胞粘附性两者的材料作为第1材料、将具有亲水性的含官能团的材料作为第2材料的实施方式，如图7(c)所示，可举出将具有低细胞粘附性的材料作为第1材料、将具有亲水性的含官能团的材料作为第2材料的实施方式。或者如图7(d)所示，可举出将具有低细胞粘附性的材料作为第1材料、将具有亲水性的材料作为第2材料、将含官能团的材料作为第3材料的实施方式。
此外，如图7(e)所示，可举出将具有低细胞粘附性的材料作为第1材料、将含官能团的材料作为第2材料的实施方式。
上述亲水性材料为对于含有细胞M的液体具有良好的润湿性的材料。作为良好的润湿性的基准，优选蒸馏水与被覆层62的接触角为60°以下。
上述含官能团的材料优选具有选自活性酯基、氨基、羧基、硫醇基、醛基、肼基、羟氨基和溴代乙酰基中的至少1个官能团的材料。由此，上述官能团与特异性结合材料化学结合，可在收纳于孔61的被覆层62中与被产生物质和/或被释放物质良好地结合。
在上述结合材料为抗生蛋白链菌素、抗生物素蛋白、生物素或它们的衍生物的情形下，可以通过共价键以外的化学或物理因素产生的亲和性而被结合。
(细胞收纳芯片的使用方法)
图8(a)～(e)为用于说明如上所述构成的细胞收纳芯片60的使用方法的示意图。
首先，在形成于孔61的内表面61a的被覆层62中(图8(a))，使该被覆层中所含有的含有官能团的材料的规定官能团62a、例如活性酯基与一次抗体等特异性结合材料81结合(图8(b))。此时，通过使用含有将规定官能团62a与孔61中所收纳的细胞M产生的被产生物质m结合的特异性结合材料81的固定液，将该固定液引入细胞收纳芯片60上，从而使规定官能团62a与特异性结合材料81结合。
使用PEG或其衍生物作为低蛋白质吸附性材料的情况下，上述固定液优选为碱性，具体地优选为pH7～10。通过使用上述这样的固定液，能够保持缓冲作用产生的自然状态，防止特异性结合材料81(蛋白质等)的变性等产生的损害，能够获得规定官能团62a与被产生物质m的良好结合。
特异性结合材料81是与被产生物质特异性结合的结合性物质。该特异性结合材料81并不限于一次抗体，也可以是抗原，另外，还可以是蛋白质以外的物质。本发明中所使用的特异性结合材料81例如为包含细胞因子、免疫球蛋白、抗免疫球蛋白、激素的蛋白质、螯合剂之类的化学物质。另外，不限于特异性结合材料81，也可使用能够结合来自收容于孔61的细胞的被产生物质的结合性物质。
接下来，将孔61内清洗后，将包含细胞M的培养液收纳于孔61中，将细胞M在孔61内培养(图8(c))。通过该培养，细胞M产生被产生抗体等被产生物质m，被产生物质m在孔61内与特异性结合材料81结合(图8(d))。其结果，规定官能团62a经由特异性结合材料81与被产生物质m结合。本发明能够应用于所有种类细胞的识别，细胞种类例如为B细胞、T细胞、树状细胞等免疫细胞系、CTC细胞等癌细胞系、iPS细胞、ES细胞等干细胞系、杂种细胞、CHO细胞、酵母细胞等，被产生物质为包含细胞因子、免疫球蛋白、抗免疫球蛋白、激素的蛋白质、维生素之类的化学物质。另外，也可以使用从细胞放出的钙离子等金属离子、即被释放物质代替被产生物质m。
然后，将孔61内清洗后，使与被产生物质m或特异性结合材料81特异性结合的荧光分子(例如带有荧光的二次抗体)等光信息存储物质83结合(图8(e))。由此，使细胞M产生的被产生物质m与在收纳该细胞M的孔61内的被覆层62上结合的特异性结合材料81结合，另外，使光信息存储物质83结合于被产生物质m或特异性结合材料81，并检测该光信息存储物质83的光信息，从而可以在将细胞M和被产生物质m保持在湿润状态的孔61内的状态下，以该孔61作为标记，准确识别目标检体。
(筛选方法)
如上所述构成的筛选装置1使用上述的细胞收纳芯片60，如下所述将目标检体回收。
图9为表示使用图8的细胞收纳芯片60的筛选方法的流程图，图10(a)～(d)为用于说明图9的各步骤的示意图。
如图9中所示，准备如上所述构成的细胞收纳芯片60(步骤S1)，使被覆层62中所含的规定官能团62a(参照图8)与具有与收纳于孔61中的细胞产生的被产生物质m结合的结合性的特异性结合材料81(结合性物质)结合(步骤S2)(图10(a))。例如，在孔61内的被覆层62上滴下或涂布含有一次抗体的固定液，并使一次抗体结合。
然后，对细胞收纳芯片60上表面和孔61内表面进行清洗，将没有与被覆层62结合的特异性结合材料除去。清洗后，将细胞收纳芯片60安装于筛选装置1的固定构件120(步骤S3)。另外，可在上述步骤S1与步骤S2之间进行步骤S3。
接下来，将包含多个细胞M的液体(例如培养液)导入细胞收纳芯片60上的孔61，以细胞为单位将多个细胞M收纳于多个孔61(步骤S4)(图10(b))。此时，在液体导入后放置规定的时间，等待各细胞沉降并逐个地进入各孔内。然后，将没有被收纳于孔61中的细胞M清洗除去。
清洗后，对收纳于孔61的细胞M进行培养，促进被产生物质m的产生，使从细胞M产生的被产生物质m与特异性结合材料81结合(步骤S5)。细胞培养条件(温度、气体种类、浓度等)可根据细胞种类、用途等来选择。此时，根据需要能够改变收纳于孔61中的细胞M的培养时间。然后，使被产生物质m与特异性结合的荧光分子等具有光信息的光信息存储物质83结合(步骤S6)(图10(c))。此时，也可以将被产生物质m或特异性结合材料81与具有特异性结合的荧光分子等的光信息的光信息存储物质83结合。例如，将含有带有荧光的二次抗体的溶液滴到细胞收纳芯片60上，使该带有荧光的二次抗体和被产生物质m结合。光信息存储物质83除了上述带有荧光的二次抗体以外，也可以是带有官能团的荧光色素、生物素化抗体+抗生物素蛋白化荧光色素、带有荧光珠的二次抗体等。另外，步骤S6的处理可与步骤S5的处理同时地进行。然后，对细胞收纳芯片60上表面和孔61内表面进行清洗，将没有与被产生物质m或特异性结合材料81结合的光信息存储物质83除去。
接下来，作为细胞收纳芯片60的配置信息，取得该细胞收纳芯片的基准位置的信息、校正参数等(步骤S7)，进行图像解析，取得各孔的中心位置坐标信息(步骤S8)。
然后，对细胞收纳芯片60照射光，取得光信息存储物质83的光信息，进行亮度解析(步骤S9)。此时，可取得基于步骤S9中的光照射而发出荧光的光信息存储物质83的光信息，也可预先取得发出荧光的光信息存储物质83的光信息。作为亮度解析，可测定由光信息存储物质83得到的荧光信息的时间变化。
接下来，基于取得的亮度信息，将用户所期望的微细粒子的回收条件作为回收条件，所述回收条件例如为某荧光的亮度超过了规定阈值、或者在使用多种荧光(例如荧光的颜色不同)的情况下至少一种荧光的亮度超过规定阈值、或者它们的任意组合。另外，关于任意的荧光亮度，也可组合从回收中排除的条件(比阈值低)。输入这样确定的几个条件(步骤S10)，基于上述回收条件来确定细胞M作为目标检体(步骤S11)。例如，将发出满足上述回收条件的亮度的光的、收纳于孔61中的细胞M确定为目标检体。
然后，通过图像解析等取得抽吸-排出毛细管140的中心位置，将该中心位置或相对于该中心位置偏离了规定距离的位置设定为细胞回收时的各孔的中心位置(位置信息)(步骤S12)。然后，使收纳有目标检体的孔61的中心位置移动以与步骤S12中设定的孔的中心位置一致，依次回收步骤S11中确定的目标检体(步骤S13)(图10(d))。将回收的目标检体收纳于用户预先设定的收纳板50上的规定的孔51中。
(细胞收纳芯片的亲水性评价)
图11为表示对各种细胞收纳芯片与蒸馏水的接触角进行测定、比较的结果的图。
在该评价中，作为发明例样品，使用包含具有亲水性和蛋白质低吸附性这两者的第1材料和作为含有官能团的材料的第2材料的被覆层(参照图7(a))。具体而言，使用PEG衍生物作为第1材料，使用具有活性酯基的材料作为第2材料。另外，作为比较例样品1，使用只包含含有官能团的材料的被覆层，作为比较例样品2，使用只包含亲水性材料的被覆层，作为比较例样品3，使用不具有被覆层的未处理的细胞收纳芯片。另外，使全部样品中的基体的材质和形状以及基体的制法相同。
就接触角的测定而言，按照JIS R3257，采用以下所示的静态法算出。由将1(L的蒸馏水滴到细胞收纳芯片上时的半径r(mm)和高度h(mm)求出接触角θ(°)。其中，半径r为水滴与芯片表面接触的面的半径，高度h为从芯片表面到水滴的顶点的高度。而且，对于1个试样测定了6点，并计算出平均值。
如图11中所示，在被覆层只包含含有官能团的材料的情况下(比较例样品1)，被覆层与蒸馏水的接触角为69°～75°，平均值为72°。而本实施方式的被覆层(发明例样品)包含具有亲水性和蛋白质低吸附性这两者的材料和含有官能团的材料，接触角为44°～53°，平均值为50°，可知亲水性大幅地得到改善。在被覆层只包含亲水性材料的情况下(比较例样品2)，细胞收纳芯片与包含细胞的液体的接触角为14°～17°，平均值为15°，但是难以使被产生物质与具有结合性的特异性结合材料结合，并且有可能在孔内收纳的细胞、被产生物质等蛋白质吸附于被覆层。另外，在未处理的细胞收纳芯片的情况下(比较例样品3)，接触角为78°～86°，平均值为83°，显而易见润湿性差。由这些测定结果可知，本实施方式的被覆层可使被产生物质与具有结合性的特异性结合材料结合，同时抑制蛋白质的吸附，能够实现良好的亲水性。
(基于孔的气泡率评价亲水性)
由于形成于细胞收纳芯片的孔微细，因此，包含孔的细胞收纳芯片的亲水性对包含细胞的液体向孔内的流入产生大的影响。因此，为了确认、评价作为亲水性的指标的细胞收纳芯片的接触角对孔中产生的气泡率产生的影响，进行了以下的试验。
首先，将各细胞收纳芯片安装于固定构件，在该细胞收纳芯片上导入常温的PBS(磷酸缓冲生理盐水)，求出芯片上任意500孔中内部产生气泡的孔的个数的比例，并将其作为气泡率。对于刚导入缓冲液后(气泡率(1))、自导入缓冲液经过时间t(t＝5分钟)后(气泡率(2))和自导入缓冲液经过时间2t(10分钟)后(气泡率(3))分别求出气泡率。在该评价中，使用与上述亲水性的评价相同的发明例样品和比较例样品。将结果示于表1中。
[表1]
接触角(平均值) 气泡率(1) 气泡率(2) 气泡率(3)
发明例样品 50° 98％ 7％ 0％
比较例样品1 72° 100％ 100％ 96％
比较例样品2 15° 0％ 0％ 0％
比较例样品3 83° 100％ 100％ 100％
由表1的结果可知：在本实施方式的被覆层(发明例样品)的情况下，孔的气泡率(1)～(3)分别为98％、7％、0％，虽然在PBS刚导入后在许多孔内发现气泡，但气泡迅速地消失，一定时间后气泡几乎从全部的孔中消失。另一方面，在只包含含有官能团的材料的被覆层的情况下(比较例样品1)，孔的气泡率(1)～(3)分别为100％、100％、96％，在PBS刚导入后几乎在全部的孔中产生气泡，即使经过一定时间后气泡也残留于几乎全部的孔中。另外，在只包含亲水性材料的被覆层的情况下(比较例样品2)，孔的气泡率(1)～(3)均为0％，在PBS刚导入后和经过一定时间后都没有发现产生气泡的孔。另外，在未处理的细胞收纳芯片的情况下(比较例样品3)，孔的气泡率(1)～(3)分别为100％，在PBS刚导入后在全部的孔中产生气泡，即使在经过一定时间后气泡也残留于全部的孔中。
在将细胞收纳于孔中的情况下，通过将包含细胞的液体(也称为细胞悬浮液)导入细胞收纳芯片上，进行静置，从而细胞在液体中缓慢地沉降，被收纳于孔内。但是，如果细胞收纳芯片的表面、孔的表面的润湿性差，则在孔内产生气泡，在细胞沉降时由于孔内的气泡而妨碍其进行，不能将细胞收纳于孔内。因此，细胞收纳芯片的表面需要如下程度的亲水性：在细胞在液体中沉降之前使孔内的气泡消失。根据本实施方式，确认了如果细胞收纳芯片的表面的接触角为60°以下，则具有足以抑制气泡在孔内滞留的亲水性，从而能够可靠地将细胞收纳于微细的孔内。
(细胞收纳芯片的低细胞附着性的评价)
接下来，测定、比较细胞对于与图11中所示的评价中使用的样品同样的被覆层的附着率。
如下实施细胞的附着率的测定和评价。首先，如图9中所示，在各细胞收纳芯片上滴下含有一次抗体的固定液，使一次抗体结合。然后，清洗该细胞收纳芯片表面，将没有结合的一次抗体和固定液的成分除去。清洗后，将各细胞收纳芯片安装于固定构件，将包含多个293T细胞的培养液导入该细胞收纳芯片上，以细胞为单位将多个该细胞收纳于多个孔中。然后，将未收纳于孔中的该细胞清洗除去。清洗后，将该细胞收纳芯片和孔中收纳的该细胞培养60分钟，在希望利用包含回收机构的细胞的筛选装置回收48个存储在该细胞收纳芯片上的孔中的该细胞时，求出粘接于该细胞收纳芯片表面而未能回收的该细胞的比例，将其作为附着率。测定点数设为n＝48。
在本评价中，使用与上述亲水性的评价相同的发明例样品和比较例样品1、2。将结果示于表2中。
[表2]
细胞种 接触角(平均值) 附着率
发明例样品 293T 50° 4％
比较例样品1 293T 72° 96％
比较例样品2 293T 15° 83％
如表2中所示，在本实施方式的被覆层(发明例样品)的情况下，293T细胞的附着率约为4％(2个)，可知几乎全部的293T细胞没有粘接于被覆层。另一方面，在只包含含有官能团的材料的被覆层的情况下(比较例样品1)，293T细胞的附着率约为96％(46个)，可知几乎全部的细胞粘接于被覆层。另外，在只包含亲水性材料的被覆层的情况下(比较例样品2)，附着率约为83％(40个)，可知几乎全部的细胞粘接于被覆层。由该结果可知，采用本实施方式的被覆层，细胞对于被覆层的附着率格外低，孔内的被覆层不易与收纳于该孔中的细胞粘接，能够实现良好的低细胞附着性。
如上所述，根据本实施方式，多个孔61内的被覆层62的表面具有低细胞附着性，同时对特异性结合材料81具有结合性，所述特异性结合材料81具有与孔61中所收纳的细胞M产生的被产生物质m的结合性。利用该被覆层62的亲水性材料，包含细胞M的液体能够容易进入微细的孔61内，并提高在各孔中收纳单一细胞的精度，而且能够提高识别和分取目标检体的精度、效率。另外，对于现有的芯片而言，由于是在芯片上预先使具有与被产生物质的结合性的物质(Ig抗体等)结合的构成，因此，难以长期保存该芯片，有可能由于干燥等而使精度降低。另一方面，根据本实施方式，通过被覆层62的表面具有与特异性结合材料81的结合性，从而不必使具有与被产生物质m的结合性的特异性结合材料81预先结合在细胞收纳芯片60上，并能够防止干燥等引起的精度降低。另外，由于被覆层62的亲水性，孔61内变得比以往更难以干燥，因此，结合特异性结合材料81后也能够将孔61内保持在湿润状态下，从而能够防止特异性结合材料81的干燥等引起的精度的降低。另外，由于被覆层62表面的与特异性结合材料81的结合性，特异性结合材料81与规定官能团62a结合，并且，由被覆层62的孔61内的细胞M所产生的被产生物质m与特异性结合材料81结合，因此，能够使该孔61自身成为目标检体识别时的标记部位，并能够在不对细胞M造成损伤的情况下识别目标检体。而且，通过被覆层62的表面具有低细胞附着性，能够防止孔内的细胞M附着于孔61的内表面、基体60a的上表面60b，从而不需要使用阻断剂等的涂布处理，能够高效率地回收作为目标检体的细胞M，进而在细胞回收时能够在没有对该细胞M造成损伤的情况下进行回收。另外，由于被覆层62具有蛋白质低吸附性材料，因此，在被产生物质m为蛋白质的情况下，能够防止被产生物质m对细胞收纳芯片表面的非特异性吸附，并能够在不需要使用阻断剂等的涂布处理的情况下维持良好的检测灵敏度。
另外，根据本实施方式，准备包括被覆层62的细胞收纳芯片60，被覆层62具有如下表面，该表面具有低细胞附着性并且对于具有与孔61中所收纳的细胞M产生的被产生物质m的结合性的特异性结合材料81具有结合性，将特异性结合材料81结合于被覆层62的表面，并将包含多个细胞M的液体导入细胞收纳芯片60，以细胞为单位将多个细胞M收纳于多个孔61，将来自孔61中所收纳的细胞M的被产生物质m和上述特异性结合材料81结合，并将被产生物质m或特异性结合材料81与具有光信息的光信息存储物质83结合，因此，能够以高精度且高效率来识别和分取目标检体。另外，处理简单，在细胞回收时能够在不对细胞M产生损伤的情况下容易地进行回收。
以上对于本实施方式涉及的细胞收纳芯片、筛选装置和筛选方法进行了说明，但本发明并不限定于记述的实施方式，基于本发明的技术构思可进行各种的变形和改变。
例如，在图9、10中，将发出满足上述回收条件的亮度的光的孔61中所收纳的细胞M确定为目标检体(步骤S11)。即，在图9、10中，使用与由细胞M分泌的被产生物质m(图10的白色的Y)特异性结合的光信息存储物质83，所以，由细胞M产生的被产生物质m与收纳有该细胞M的孔61结合。因此，如上所述，使光信息存储物质83与特异性结合材料81结合的时间(步骤S6)可以在步骤S5之后或者与步骤S5同时进行。
也可以使用如下筛选方法，即、将发出上述回收条件中使用的阈值以上的亮度的光的孔以外的孔61中所收纳的细胞M确定为目标检体。以下对于与图9的流程图相同的部分省略说明，对不同的部分进行说明。
如图12中所示，首先，以细胞为单位将多个细胞M收纳于多个孔61后(步骤S4)，对各细胞进行培养，促进被产生物质m的产生，将由细胞M产生的被产生物质m与孔61内的特异性结合材料81结合(步骤S5)。由此，收纳有成为目标检体的细胞M的孔61内的特异性结合材料81由被产生物质m覆盖，未收纳成为目标检体的细胞M的孔61内的特异性结合材料81未由被产生物质m覆盖。而且，在本变形例中，使用没有与被产生物质m特异性结合而与特异性结合材料81特异性结合的其他光信息存储物质，使该其他光信息存储物质与特异性结合材料81结合(步骤S6’)。由此，收纳有产生被产生物质m的细胞M的孔61没有发出光，而收纳有未产生被产生物质m的细胞M的孔61发出光。因此，在本方法中，没有将步骤S5和步骤S6’同时地进行，而是在步骤S5之后进行步骤S6’。
然后，取得光信息存储物质83的光信息，进行亮度解析(步骤S9)。基于取得的亮度信息，输入用户所期望的微细粒子的回收条件(步骤S10)，基于上述回收条件将细胞M确定为目标检体(步骤S11)。此时，将未发出光或者亮度为规定的阈值以下作为回收条件，将满足该回收条件的孔61中所收纳的细胞M确定为目标检体。采用本方法也能够将所期望的目标检体回收。
附图标记说明
1筛选装置；11底座；12支持部；13回收部；14计测部；15图像解析部；16移动部；19盖；30支承台；30a脚部；30b支承板；40搭载用平台；40a搭载面；50收纳板；51孔；60细胞收纳芯片；60a基体；60b上表面；61孔；61a内表面；62被覆层；62a规定的官能团；81特异性结合材料；83光信息存储物质；100控制部；110物镜；110a物镜；110b物镜；111，112，113板构件；114垂直构件；115垂直构件；120固定构件；121框体；122框体；129液体保持部；140抽吸-排出毛细管；141管路；161平台；162平台；163导轨；164马达；165卡合构件；166螺母；167进给丝杆；168导轨；169马达；170卡合构件；171螺母；172进给丝杆；173，174，175开口部；181激发光源；182遮光器单元；183荧光滤波器单元；184光学滤波器；185光学滤波器；186二向色镜；187聚焦单元；188受光部；189马达；190荧光落射单元；A液体；CL基准面；M细胞；m被产生物質；L光。

Claims (15)

1.一种细胞收纳芯片，是用于收纳多个细胞的细胞收纳芯片，其特征在于，
具有由透光性材料构成的基体，和在所述基体的至少一个主表面可收纳细胞的多个孔，
包含所述多个孔的所述细胞收纳芯片的表面具有低细胞粘附性以及对特异性结合材料的结合性，所述特异性结合材料具有与收纳于所述孔的细胞产生的被产生物质和/或该细胞释放的被释放物质的结合性。
2.根据权利要求1所述的细胞收纳芯片，其特征在于，所述孔具有相当于收纳1个细胞的大小。
3.根据权利要求1或2所述的细胞收纳芯片，其特征在于，所述细胞收纳芯片的表面还具有亲水性。
4.根据权利要求1～3任一项所述的细胞收纳芯片，其特征在于，在所述基体上具有被覆层，
所述被覆层具有低细胞粘附性、以及对特异性结合材料的结合性，所述特异性结合材料具有与收纳于所述孔的细胞产生的被产生物质和/或该细胞释放的被释放物质的结合性。
5.根据权利要求3所述的细胞收纳芯片，其特征在于，在所述基体上具有被覆层，
所述被覆层的表面具有亲水性、低细胞粘附性、以及对特异性结合材料的结合性，所述特异性结合材料具有与收纳于所述孔的细胞产生的被产生物质和/或该细胞释放的被释放物质的结合性。
6.根据权利要求4或5所述的细胞收纳芯片，其特征在于，具有所述低细胞粘附性的所述被覆层为具有低细胞粘附性材料的被覆层。
7.根据权利要求6所述的细胞收纳芯片，其特征在于，所述低细胞粘附性材料为低蛋白质吸附性材料。
8.根据权利要求4或5所述的细胞收纳芯片，其特征在于，对所述特异性结合材料具有结合性的所述被覆层是具有结合材料的被覆层，所述结合材料具有与所述特异性结合材料的结合性。
9.根据权利要求5所述的细胞收纳芯片，其特征在于，具有所述亲水性的所述被覆层为具有亲水性材料的被覆层。
10.根据权利要求3～5任一项所述的细胞收纳芯片，其特征在于，所述细胞收纳芯片的表面的接触角为60°以下。
11.根据权利要求8所述的细胞收纳芯片，其特征在于，所述结合材料为具有选自活性酯基、氨基、羧基、硫醇基、醛基、肼基、羟氨基和溴代乙酰基中的至少1个官能团的含官能团材料。
12.根据权利要求8所述的细胞收纳芯片，其特征在于，所述结合材料为选自抗生蛋白链菌素、抗生物素蛋白、生物素或它们的衍生物中的至少1种。
13.根据权利要求7所述的细胞收纳芯片，其特征在于，所述低蛋白质吸附性材料为高分子化合物。
14.根据权利要求1～13任一项所述的细胞收纳芯片，其特征在于，用于筛选装置，该筛选装置用于基于从细胞收纳芯片上的物质发出的光信息来检测规定的细胞，并选择性地回收检测到的细胞。
15.一种筛选方法，是基于从细胞收纳芯片上的物质发出的光信息来检测规定的细胞，并将检测到的细胞选择性地回收的筛选方法，其特征在于，具有如下工序：
准备细胞收纳芯片的准备工序，该细胞收纳芯片具有设置于由透光性材料构成的基体的多个孔，并且具有如下表面，该表面具有低细胞粘附性和对特异性结合材料的结合性，该特异性结合材料具有与收纳于孔的细胞产生的被产生物质和/或该细胞释放的被释放物质的结合性；
第1结合工序，在所述细胞收纳芯片的表面结合所述特异性结合材料；
细胞收纳工序，将包含多个细胞的液体导入所述细胞收纳芯片，以细胞为单位将所述多个细胞收纳于所述多个孔；
第2结合工序，将所述特异性结合材料与来自收纳于所述孔的细胞的被产生物质和/或被释放物质结合；
第3结合工序，将具有光信息的光信息存储物质与所述被产生物质或所述被释放物质或者所述特异性结合材料结合；
计测工序，计测所述光信息存储物质的光信息；
识别、回收工序，基于所述计测工序的计测结果，从所述多个细胞中识别、回收作为目标检体的细胞。
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