CN108834904A - 用于根组织培育构树的培养基及培育方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及树木培养技术领域，具体地说，涉及一种用于根组织培育构树的培养基及培育方法。本发明的用于根组织培育构树的培养基包括添加有浓度为1.5‑2.0mg/L的6‑BA以及浓度为0.1‑0.2mg/L的NAA的MS培养基，该MS培养基与常规MS培养基相比，其KNO3和NH4NO3的浓度均为700mg/L且PH值为5.8。本发明的用于根组织培育构树的方法包括以下步骤：步骤一，构树根组织的消毒；步骤二，愈伤组织的诱导；步骤三，丛生状不定芽诱导；步骤四，植株培育。通过本发明能够较佳地通过根组织对构树进行组织培育。

Description

用于根组织培育构树的培养基及培育方法
技术领域
本发明涉及树木培养技术领域，具体地说，涉及一种用于根组织培育构树的培养基及培育方法。
背景技术
构树，又名构桃树、构乳树、楮树、楮实子、沙纸树、谷浆树、假杨梅等，为桑科构属多年生木本植物。构树具有速生、适应性强、分布广、易繁殖、热量高、轮伐期短等特点。其在中国的温带、热带均有分布，不论平原、丘陵或山地都能生长，其叶是很好的猪饲料，其韧皮纤维是造纸的高级原料，材质洁白，其根和种子均可入药，树液可治皮肤病，具有较高经济价值。
树木的繁殖主要有种子繁殖、扦插繁殖、组织培养等方式。但就构树而言，构树的种子繁殖方式存在繁殖时间较长、人工授粉较难等问题；构树的扦插繁殖方式存在受季节限制且种苗质量较低的问题。故采用种子繁殖和扦插繁殖并不能较佳地运用于构树的商业化培育中。虽然采用组织培养培育构树，在效率上要远远高于种子繁殖和扦插繁殖的方式。但是目前国内外对构树的组织培养研究较少，尚未见有报道。
发明内容
本发明提供了一种用于根组织培育构树的培养基，其能够克服现有技术的某种或某些缺陷。
根据本发明的用于根组织培育构树的培养基，其包括添加有浓度为1.5-2.0mg/L的6-BA以及浓度为0.1-0.2mg/L的NAA的MS培养基，该MS培养基与常规MS培养基相比，其KNO3和NH4NO3的浓度均为700mg/L且PH值为5.8。
作为优选，该培养基还包括占总体积比为10％的椰汁，且该培养基中添加有浓度为0.8-1.2g/L的水解乳蛋白。
基于上述的培养基，本发明还提供了一种用于根组织培育构树的方法，其包括以下步骤：
步骤一，构树根组织的消毒
选取粗壮的构树根组织在流水下冲洗10-15min，之后移至超净工作台处于无菌环境下浸入75％的酒精溶液中浸泡10-15s，之后用无菌水冲洗3-5次，之后浸入0.1％的HgCl2溶液内浸泡8-10min，然后用无菌水冲洗3-5次，得到消毒完的外植体材料；
步骤二，愈伤组织的诱导
将步骤一中获取的外植体材料放置于消毒的培养皿中，切除变色部分，之后将根组织切成0.5cm-1.0cm的小段，接种于权利要求1中的培养基中，该培养基曾于121℃下灭菌20min；接种好根组织的培养基置于26±2℃的暗环境中培养30-50天，得到愈伤组织；
步骤三，丛生状不定芽诱导
在步骤二中的愈伤组织生长到直径约0.5cm左右时，切下并转接到分化培养基处，并置于温度为26±2℃，光照为1000-2000lx、10-14h/d的环境中进行培养，得到丛生状不定芽。
步骤四，植株培育。
作为优选，步骤二中的培养基中添加有占总体积比为10％的椰汁以及浓度为0.8-1.2g/L的水解乳蛋白。
与现有技术相比：通过本发明的培养基以及培育方法，能够较佳地通过根组织对构树进行培育，使得构树根组织的愈伤组织发生率能够达到80-100％，且使得所获取植株的无毒率能够达到95％以上。
本发明中的缩略词：
KNO3 硝酸钾
NH4NO3 硝酸铵
6-BA 6-苄氨基嘌呤
NAA 萘乙酸
具体实施方式
为进一步了解本发明的内容，结合实施例对本发明作详细描述。应当理解的是，实施例仅仅是对本发明进行解释而并非限定。
实施例1
本实施例提供了一种用于根组织培育构树的培养基，其包括添加有浓度为1.5-2.0mg/L的6-BA以及浓度为0.1-0.2mg/L的NAA的MS培养基，该MS培养基与常规MS培养基相比，其KNO3和NH4NO3的浓度均为700mg/L且PH值为5.8。
本实施例中，所采用的MS培养基的详细配比如表1所示。
表1本实施例中的MS培养基的配比表
本实施例中，通过将KNO3和NH4NO3的浓度控制为700mg/L，能够有效地降低铵盐的浓度，同时由于添加有浓度为1.5-2.0mg/L的6-BA以及浓度为0.1-0.2mg/L的NAA，进而使得采用本实施例中的培养基对构树的根组织进行培育时，能够有效地提升愈伤组织的发生率。
实施例2
本实施例也提供了一种用于根组织培育构树的培养基，其与实施例1的区别在于：本实施例中的培养基还包括占总体积比为10％的椰汁，且本实施例中的培养基中添加有浓度为0.8-1.2g/L的水解乳蛋白。
本实施例中，水解乳蛋白和椰汁的添加，能够有效地促进愈伤组织的分化和增殖。
实施例3
本实施例中提供了一种用于根组织培育构树的方法，其包括以下步骤：
步骤一，构树根组织的消毒
选取粗壮的构树根组织在流水下冲洗10-15min，之后移至超净工作台处于无菌环境下浸入75％的酒精溶液中浸泡10-15s，之后用无菌水冲洗3-5次，之后浸入0.1％的HgCl2溶液内浸泡8-10min，然后用无菌水冲洗3-5次，得到消毒完的外植体材料；
步骤二，愈伤组织的诱导
将步骤一中获取的外植体材料放置于消毒的培养皿中，切除变色部分，之后将根组织切成0.5cm-1.0cm的小段，接种于实施例1中的培养基中，该培养基曾于121℃下灭菌20min；接种好根组织的培养基置于26±2℃的暗环境中培养30-50天，得到愈伤组织；
步骤三，丛生状不定芽诱导
在步骤二中的愈伤组织生长到直径约0.5cm左右时，切下并转接到分化培养基处，并置于温度为26±2℃，光照为1000-2000lx、10-14h/d的环境中进行培养，得到丛生状不定芽。
步骤四，植株培育。
实施例4
本实施例也提供了一种用于根组织培育构树的方法，其与实施例3的区别在于：步骤二中的培养基中添加有占总体积比为10％的椰汁以及浓度为0.8-1.2g/L的水解乳蛋白。
为验证步骤二中不同培养基对根组织培育构树的影响，特设计多组实验进行验证，该多组实验中所采用的外植体为同一批次且每组投入的外植体数量均为100，所不同之处在于每组实验中在步骤二中所采用的培养基有所区别，如表2所示。
表2不同实验组中的培养基
采用上述编号为1-17的培养基，在同等条件下对构树的根组织进行培育，并记录相关数据，能够得到表3中的数据。
表3不同培养基对构树根组织培育的影响
编号 愈伤组织发生率(％) 愈伤组织平均增殖倍数 污染率(％) 愈伤组织分化率(％)
1 37 3.2 27.0 40.5
2 2 1.7 50.0 0
3 43 4.1 25.6 62.8
4 13 2.4 61.5 38.5
5 41 3.9 29.3 78.0
6 15 3.1 53.3 33.3
7 94 6.4 10.6 85.1
8 53 3.3 18.9 66.0
9 91 6.1 15.4 82.4
10 52 3.2 19.2 67.3
11 100 6.7 8.0 83.0
12 61 3.9 24.6 65.6
13 99 8.6 4.0 96.0
14 100 9.2 2.0 98.0
15 98 8.8 4.1 97.0
16 95 7.0 5.3 97.0
17 96 8.9 4.2 95.0
在表3中，通过1与2的结果可以看出，通过降低MS培养基中铵盐的浓度，能够有效地提升愈伤组织的发生率。通过3与4以及5与6的结果可以看出，通过单独添加6-BA和NAA，能够在一定程度上增加升愈伤组织的发生率，但效果并不明显。通过7与8、9与10以及11与12之间的对比，可以看出，通过添加6-BA和NAA，能够大幅提高愈伤组织的发生率，并且也能够一定程度上的降低污染了和提高分化率。
通过对7、9和11之间的对比可以看出，通过添加浓度为1.5-2.0mg/L的6-BA以及浓度为0.1-0.2mg/L的NAA，能够有效地增加愈伤组织的发生率和分化率，其能够在一定程度上降低污染率。
通过11、13、14、15、16和17之间的对比，能够看出，通过水解乳蛋白和椰汁的添加能够有效地促进愈伤组织的增长，并能够大幅提升愈伤组织的分化率，而且还能够大幅降低所培育植株的污染率。
以上示意性地对本发明及其实施方式进行了描述，该描述没有限制性。所以，如果本领域的普通技术人员受其启示，在不脱离本发明创造宗旨的情况下，不经创造性地设计出与该技术方案相似的方案及实施例，均应属于本发明的保护范围。

Claims (4)

1.用于根组织培育构树的培养基，其包括添加有浓度为1.5-2.0mg/L的6-BA以及浓度为0.1-0.2mg/L的NAA的MS培养基，该MS培养基与常规MS培养基相比，其KNO3和NH4NO3的浓度均为700mg/L且PH值为5.8。
2.根据权利要求1所述的用于根组织培育构树的方法，其特征在于：该培养基还包括占总体积比为10％的椰汁，且该培养基中添加有浓度为0.8-1.2g/L的水解乳蛋白。
3.用于根组织培育构树的方法，其包括以下步骤：
步骤一，构树根组织的消毒
选取粗壮的构树根组织在流水下冲洗10-15min，之后移至超净工作台处于无菌环境下浸入75％的酒精溶液中浸泡10-15s，之后用无菌水冲洗3-5次，之后浸入0.1％的HgCl2溶液内浸泡8-10min，然后用无菌水冲洗3-5次，得到消毒完的外植体材料；
步骤二，愈伤组织的诱导
将步骤一中获取的外植体材料放置于消毒的培养皿中，切除变色部分，之后将根组织切成0.5cm-1.0cm的小段，接种于权利要求1中的培养基中，该培养基曾于121℃下灭菌20min；接种好根组织的培养基置于26±2℃的暗环境中培养30-50天，得到愈伤组织；
步骤三，丛生状不定芽诱导
在步骤二中的愈伤组织生长到直径约0.5cm左右时，切下并转接到分化培养基处，并置于温度为26±2℃，光照为1000-2000lx、10-14h/d的环境中进行培养，得到丛生状不定芽；
步骤四，植株培育。
4.根据权利要求3所述的用于根组织培育构树的方法，其特征在于：步骤二中的培养基中添加有占总体积比为10％的椰汁以及浓度为0.8-1.2g/L的水解乳蛋白。
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