CN105532469A - 一种杂交构树组织培养的方法 - Google Patents

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杨进
何平礼
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Abstract

本发明公开了一种杂交构树组织培养的方法，包括：杂交构树组织培养外植体的采集，采集带腋芽的嫩枝；对室外采集的外植体进行清洗及消毒；经消毒处理后的外植体愈伤组织的诱导；愈伤组织的再分化及继代培养；脱毒苗木生根培养；炼苗；大田种植。本发明可有效改良杂交构树组织培养的方法，有效缩杂交构树的组培时间、提高杂交构树组培苗的质量，增殖快，组培苗健壮，生根快，生产成本低，污染低，从外植体接种到出苗时间短。

Description

一种杂交构树组织培养的方法
技术领域
本发明属于树木种植领域，尤其涉及一种杂交构树组织培养的方法。
背景技术
目前杂交构树组织培养的方法各异，但都不是很理想，构树生长慢，长势不好，高度不利于炼苗等。
发明内容
本发明的目的在于提供一种杂交构树组织培养的方法，旨在解决现有的杂交构树组织培养的方法，构树生长慢，长势不好，高度不利于炼苗的问题。
本发明是这样实现的，一种杂交构树组织培养的方法包括：
步骤一、杂交构树组织培养外植体的采集，采集带腋芽的嫩枝；
步骤二、对室外采集的外植体进行清洗及消毒；
步骤三、经消毒处理后的外植体愈伤组织的诱导；
步骤四、愈伤组织的再分化及继代培养；
步骤五、脱毒苗木生根培养；
步骤六、炼苗；
步骤七、大田种植。
进一步，采集的外植体长度在2-4cm之间。
进一步，对室外采集的外植体进行清洗及消毒的具体方法为：
经流水冲洗5分钟，1％洗涤灵水浸泡5分钟，消毒剂有70％乙醇，消毒30秒，无菌水冲洗4-5遍；然后放入0.1％氯化汞溶液，消毒5-8分钟，无菌水冲洗5-6次，放入超净台，紫外灯照射30分钟，进行外植体和超净台的同时消毒。
进一步，经消毒处理后的外植体愈伤组织的诱导的具体方法为：
切去在消毒过程中坏死的周边组织，剩余部分切成0.5-1cm长，带有一个腋芽的小径段，置于灭菌后的诱导愈伤组织形成的第一培养基或第二培养基上培养，暗处理48小时后，光照时间为14h/d,光照强度1500lx，补光应安排于白天进行，温度为25±3℃，培养20-25天。
进一步，愈伤组织的再分化及继代培养的具体方法为：
20-25天后，将杂交构树小径段的腋芽抽生出来的枝条割下，分割成带有1个腋芽的小径段继续放到第三培养基上培养，进行增值扩繁，光照时间为10-12h/d,光照强度2000lx，温度为25±3℃，培养20-25天。再长出3～5片小叶后再次进行次继代培养，一直扩繁到所需的量为止，把愈伤组织分化而成的丛生幼苗用剪刀单个分离开，置于第三培养基上进行继代培养。
进一步，脱毒苗木生根培养的具体方法为：
经过大量继代培养的杂交构树组织培养苗，放于第四培养基或第五培养基上进行生根培养，培养2-3个星期后渐渐长出白色的幼根，培养条件是光照时间为10-12h/d，温度为25±3℃，待根生长出4～6条时可以进行炼苗处理。
进一步，炼苗的具体方法为：
将生根后的杂交构树组织培养苗先连同组培瓶放于阳光下，4-5天后松开瓶盖，松盖后3天取掉瓶盖，使组培瓶苗处于与外界环境全开放状态，2天后进行移植工作；将组织培养的构树苗由培养基中取出后洗净培养基，用稀释1000倍的多菌灵或百菌清溶液浸泡10-20分钟，随后将杂交构树苗木接入已用千分之三甲醛灭菌处理过的混有园土、蛭石及少量珍珠岩的基质中培养，蛭石、园土、珍珠岩的比值是6:3:1，炼苗条件是温度25℃左右，湿度为75％-90％，在植株上层套上塑料薄膜保水，结合当地环境进行通风换气，培养10天逐渐取下塑料薄膜，成功渡过炼苗的苗木进行大田种植。
进一步，大田种植优选的时间在春季和秋季。
进一步，所述第一培养基的组分为：MS+BA1.20mg\L+IBA0.20mg\L+NAA0.30mg\L；
第二培养基的组分为：MS+BA1.40mg\L+IBA0.32mg\L+NAA0.43mg\L；
第三培养基的组分为：MS+BA1.00mg\L+NAA0.50mg\L+GA1.00mg\L；
第四培养基的组分为：1\2MS(MS)+NAA0.31mg\L+GA1.00mg\L；
第五培养基的组分为：l\2MS(MS)+NAA0.4mg/l+IAA1.5mg/l。
本发明可有效改良杂交构树组织培养的方法，有效缩杂交构树的组培时间、提高杂交构树组培苗的质量，增殖快，组培苗健壮，生根快，生产成本低，污染低，从外植体接种到出苗时间短。
附图说明
图1是本发明实施例提供的杂交构树组织培养的方法流程图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明做进一步描述：
请参阅图1：
一种杂交构树组织培养的方法，包括：
S101、杂交构树组织培养外植体的采集，采集带腋芽的嫩枝；
S102、对室外采集的外植体进行清洗及消毒；
S103、经消毒处理后的外植体愈伤组织的诱导；
S104、愈伤组织的再分化及继代培养；
S105、脱毒苗木生根培养；
S106、炼苗；
S107、大田种植。
进一步，采集的外植体长度在2-4cm之间。
进一步，对室外采集的外植体进行清洗及消毒的具体方法为：
经流水冲洗5分钟，1％洗涤灵水浸泡5分钟，消毒剂有70％乙醇，消毒30秒，无菌水冲洗4-5遍；然后放入0.1％氯化汞溶液，消毒5-8分钟，无菌水冲洗5-6次，放入超净台，紫外灯照射30分钟，进行外植体和超净台的同时消毒。
进一步，经消毒处理后的外植体愈伤组织的诱导的具体方法为：
切去在消毒过程中坏死的周边组织，剩余部分切成0.5-1cm长，带有一个腋芽的小径段，置于灭菌后的诱导愈伤组织形成的第一培养基或第二培养基上培养，暗处理48小时后，光照时间为14h/d,光照强度1500lx，补光应安排于白天进行，温度为25±3℃，培养20-25天。
进一步，愈伤组织的再分化及继代培养的具体方法为：
20-25天后，将杂交构树小径段的腋芽抽生出来的枝条割下，分割成带有1个腋芽的小径段继续放到第三培养基上培养，进行增值扩繁，光照时间为10-12h/d,光照强度2000lx，温度为25±3℃，培养20-25天。再长出3～5片小叶后再次进行次继代培养，一直扩繁到所需的量为止，把愈伤组织分化而成的丛生幼苗用剪刀单个分离开，置于第三培养基上进行继代培养。
进一步，脱毒苗木生根培养的具体方法为：
经过大量继代培养的杂交构树组织培养苗，放于第四培养基或第五培养基上进行生根培养，培养2-3个星期后渐渐长出白色的幼根，培养条件是光照时间为10-12h/d，温度为25±3℃，待根生长出4～6条时可以进行炼苗处理。
进一步，炼苗的具体方法为：
将生根后的杂交构树组织培养苗先连同组培瓶放于阳光下，4-5天后松开瓶盖，松盖后3天取掉瓶盖，使组培瓶苗处于与外界环境全开放状态，2天后进行移植工作；将组织培养的构树苗由培养基中取出后洗净培养基，用稀释1000倍的多菌灵或百菌清溶液浸泡10-20分钟，随后将杂交构树苗木接入已用千分之三甲醛灭菌处理过的混有园土、蛭石及少量珍珠岩的基质中培养，蛭石、园土、珍珠岩的比值是6:3:1，炼苗条件是温度25℃左右，湿度为75％-90％，在植株上层套上塑料薄膜保水，结合当地环境进行通风换气，培养10天逐渐取下塑料薄膜，成功渡过炼苗的苗木进行大田种植。
进一步，大田种植优选的时间在春季和秋季。
进一步，所述第一培养基的组分为：MS+BA1.20mg\L+IBA0.20mg\L+NAA0.30mg\L；
第二培养基的组分为：MS+BA1.40mg\L+IBA0.32mg\L+NAA0.43mg\L；
第三培养基的组分为：MS+BA1.00mg\L+NAA0.50mg\L+GA1.00mg\L；
第四培养基的组分为：1\2MS(MS)+NAA0.31mg\L+GA1.00mg\L；
第五培养基的组分为：l\2MS(MS)+NAA0.4mg/l+IAA1.5mg/l。
本发明可有效改良杂交构树组织培养的方法，有效缩杂交构树的组培时间、提高杂交构树组培苗的质量，增殖快，组培苗健壮，生根快，生产成本低，污染低，从外植体接种到出苗时间短。
利用本发明所述的技术方案，或本领域的技术人员在本发明技术方案的启发下，设计出类似的技术方案，而达到上述技术效果的，均是落入本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种杂交构树组织培养的方法，其特征在于，所述的杂交构树组织培养的方法包括：
步骤一、杂交构树组织培养外植体的采集，采集带腋芽的嫩枝；
步骤二、对室外采集的外植体进行清洗及消毒；
步骤三、经消毒处理后的外植体愈伤组织的诱导；
步骤四、愈伤组织的再分化及继代培养；
步骤五、脱毒苗木生根培养；
步骤六、炼苗；
步骤七、大田种植。
2.如权利要求1所述的杂交构树组织培养的方法，其特征在于，采集的外植体长度在2-4cm之间。
3.如权利要求1所述的杂交构树组织培养的方法，其特征在于，对室外采集的外植体进行清洗及消毒的具体方法为：
经流水冲洗5分钟，1％洗涤灵水浸泡5分钟，消毒剂有70％乙醇，消毒30秒，无菌水冲洗4-5遍；然后放入0.1％氯化汞溶液，消毒5-8分钟，无菌水冲洗5-6次，放入超净台，紫外灯照射30分钟，进行外植体和超净台的同时消毒。
4.如权利要求1所述的杂交构树组织培养的方法，其特征在于，经消毒处理后的外植体愈伤组织的诱导的具体方法为：
切去在消毒过程中坏死的周边组织，剩余部分切成0.5-1cm长，带有一个腋芽的小径段，置于灭菌后的诱导愈伤组织形成的第一培养基或第二培养基上培养，暗处理48小时后，光照时间为14h/d,光照强度1500lx，补光应安排于白天进行，温度为25±3℃，培养20-25天。
5.如权利要求1所述的杂交构树组织培养的方法，其特征在于，愈伤组织的再分化及继代培养的具体方法为：
20-25天后，将杂交构树小径段的腋芽抽生出来的枝条割下，分割成带有1个腋芽的小径段继续放到第三培养基上培养，进行增值扩繁，光照时间为10-12h/d,光照强度2000lx，温度为25±3℃，培养20-25天，再长出3～5片小叶后再次进行次继代培养，一直扩繁到所需的量为止，把愈伤组织分化而成的丛生幼苗用剪刀单个分离开，置于第三培养基上进行继代培养。
6.如权利要求1所述的杂交构树组织培养的方法，其特征在于，脱毒苗木生根培养的具体方法为：
经过大量继代培养的杂交构树组织培养苗，放于第四培养基或第五培养基上进行生根培养，培养2-3个星期后渐渐长出白色的幼根，培养条件是光照时间为10-12h/d，温度为25±3℃，待根生长出4～6条时进行炼苗处理。
7.如权利要求1所述的杂交构树组织培养的方法，其特征在于，炼苗的具体方法为：
将生根后的杂交构树组织培养苗先连同组培瓶放于阳光下，4-5天后松开瓶盖，松盖后3天取掉瓶盖，使组培瓶苗处于与外界环境全开放状态，2天后进行移植工作；将组织培养的构树苗由培养基中取出后洗净培养基，用稀释1000倍的多菌灵或百菌清溶液浸泡10-20分钟，随后将杂交构树苗木接入已用千分之三甲醛灭菌处理过的混有园土、蛭石及少量珍珠岩的基质中培养，蛭石、园土、珍珠岩的比值是6:3:1，炼苗条件是温度25℃，湿度为75％-90％，在植株上层套上塑料薄膜保水，结合当地环境进行通风换气，培养10天逐渐取下塑料薄膜，成功渡过炼苗的苗木进行大田种植。
8.如权利要求1所述的杂交构树组织培养的方法，其特征在于，大田种植优选的时间在春季和秋季。
9.如权利要求1所述的杂交构树组织培养的方法，其特征在于，所述第一培养基的组分为：MS+BA1.20mg\L+IBA0.20mg\L+NAA0.30mg\L；
第二培养基的组分为：MS+BA1.40mg\L+IBA0.32mg\L+NAA0.43mg\L；
第三培养基的组分为：MS+BA1.00mg\L+NAA0.50mg\L+GA1.00mg\L；
第四培养基的组分为：1\2MS(MS)+NAA0.31mg\L+GA1.00mg\L；
第五培养基的组分为：l\2MS(MS)+NAA0.4mg/l+IAA1.5mg/l。
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