CN104304019A - 一种挂苦绣球组织培养的快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明研究了一种挂苦绣球组织培养的快速繁殖方法,包括茎段的消毒、腋芽的诱导、丛生芽的增殖、野外生根诱导等步骤。本发明通过对挂苦绣球的诱导、增殖、生根等条件的研究,成功地建立了挂苦绣球的微繁体系。
Description
技术领域
本发明涉及挂苦绣球的组织培养,属于生物技术领域。
背景技术
挂苦绣球,Hydrangea xanthoncura Diels,虎耳草科,又名黄枝挂苦子树、六蛾戏珠、黄脉绣球。灌木至小乔木,高1-7米,当年生小枝黑褐色或灰黄褐色,无毛或疏被柔毛,二年生小枝色较淡,常具明显的浅色皮孔,有时一年生小枝亦具皮孔,树皮稍厚,不易脱落或呈小块状剥落。生于山腰密林或疏林中或山顶灌丛中,海拔1600-2900米。挂苦绣球功效:化瘀疗伤,主治:用于跌打损伤、瘀血肿痛、筋骨疼痛、骨折等。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是挂苦绣球组织培养的快速繁殖方法,本发明通过对挂苦绣球的诱导、增殖、生根等条件的研究,成功地建立了挂苦绣球的微繁体系。
为解决上述技术问题,本发明采用下列技术方案:
选择生长健壮的植株,切取长约3cm的茎段,放入玻璃瓶中,三层纱布封口,流水冲洗1h,洗去附着表面的多数杂菌,浸泡于1g/L多菌灵+800mg/L的羧卞青霉素钠,置于120r/min摇床上振荡1.5h,超净工作台上70%酒精处理1min,1g/L升汞处理15min,无菌水冲洗干净,消毒处理过的无菌茎段接种到BL+6-BA 1.0mg/L+NAA 2.0mg/L+10%椰子汁+2g/LCH的培养基中进行腋芽的诱导,附加葡萄糖30g/L,琼脂6.5g/L,培养温度24±2℃,光照强度2200lx,光照8h,诱导出来的芽苗接入MS+6-BA1.5-2.0mg/L+1.5-2.0mg/LKT+0.5mg/LNAA+4.0g/L琼脂+15-20g/L魔芋粉培养基中进行增殖培养,附加葡萄糖30g/L,琼脂6.5g/L,光照5000lx,光期13h/d,温度24±2℃,选取生长旺盛的芽苗,将其敞口置于温室中炼苗3d后,取出,无菌水洗净底部培养基,移栽到灭菌过的1/2园土+1/2河沙的基质中,移栽后保持湿度85%以上,温度30℃,30天后统计生根成活率。
采用本发明制备的挂苦绣球生根率高,培养周期短,利于大规模种植。
下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述,但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式
实施例1
选择生长健壮的植株,切取长约3cm的茎段,放入玻璃瓶中,三层纱布封口,流水冲洗1h,洗去附着表面的多数杂菌,浸泡于1g/L多菌灵+800mg/L的羧卞青霉素钠,置于120r/min摇床上振荡1.5h,超净工作台上70%酒精处理1min,1g/L升汞处理15min,无菌水冲洗干净,消毒处理过的无菌茎段接种到BL+6-BA1.0mg/L+NAA2.0mg/L+10%椰子汁+2g/LCH的培养基中进行腋芽的诱导,附加葡萄糖30g/L,琼脂6.5g/L,培养温度24±2℃,光照强度2200lx,光照8h,诱导出来的芽苗接入MS+6-BA1.5mg/L+1.5mg/LKT+0.5mg/LNAA+4.0g/L琼脂+15g/L魔芋粉培养基中进行增殖培养,附加葡萄糖30g/L,琼脂6.5g/L,光照5000lx,光期13h/d,温度24±2℃,选取生长旺盛的芽苗,将其敞口置于温室中炼苗3d后,取出,无菌水洗净底部培养基,移栽到灭菌过的1/2园土+1/2河沙的基质中,移栽后保持湿度85%以上,温度30℃,30天后统计生根成活率,成活率88%。
实施例2
选择生长健壮的植株,切取长约3cm的茎段,放入玻璃瓶中,三层纱布封口,流水冲洗1h,洗去附着表面的多数杂菌,浸泡于1g/L多菌灵+800mg/L的羧卞青霉素钠,置于120r/min摇床上振荡1.5h,超净工作台上70%酒精处理1min,1g/L升汞处理15min,无菌水冲洗干净,消毒处理过的无菌茎段接种到BL+6-BA1.0mg/L+NAA2.0mg/L+10%椰子汁+2g/LCH的培养基中进行腋芽的诱导,附加葡萄糖30g/L,琼脂6.5g/L,培养温度24±2℃,光照强度2200lx,光照8h,诱导出来的芽苗接入MS+6-BA2.0mg/L+2.0mg/LKT+0.5mg/LNAA+4.0g/L琼脂+20g/L魔芋粉培养基中进行增殖培养,附加葡萄糖30g/L,琼脂6.5g/L,光照5000lx,光期13h/d,温度24±2℃,选取生长旺盛的芽苗,将其敞口置于温室中炼苗3d后,取出,无菌水洗净底部培养基,移栽到灭菌过的1/2园土+1/2河沙的基质中,移栽后保持湿度85%以上,温度30℃,30天后统计生根成活率,成活率92%。
实施例3
选择生长健壮的植株,切取长约3cm的茎段,放入玻璃瓶中,三层纱布封口,流水冲洗1h,洗去附着表面的多数杂菌,浸泡于1g/L多菌灵+800mg/L的羧卞青霉素钠,置于120r/min摇床上振荡1.5h,超净工作台上70%酒精处理1min,1g/L升汞处理15min,无菌水冲洗干净,消毒处理过的无菌茎段接种到BL+6-BA1.0mg/L+NAA2.0mg/L+10%椰子汁+2g/LCH的培养基中进行腋芽的诱导,附加葡萄糖30g/L,琼脂6.5g/L,培养温度24±2℃,光照强度2200lx,光照8h,诱导出来的芽苗接入MS+6-BA2.0mg/L+1.5mg/LKT+0.5mg/LNAA+4.0g/L琼脂+20g/L魔芋粉培养基中进行增殖培养,附加葡萄糖30g/L,琼脂6.5g/L,光照5000lx,光期13h/d,温度24±2℃,选取生长旺盛的芽苗,将其敞口置于温室中炼苗3d后,取出,无菌水洗净底部培养基,移栽到灭菌过的1/2园土+1/2河沙的基质中,移栽后保持湿度85%以上,温度30℃,30天后统计生根成活率,成活率94%。
Claims (3)
1. 一种挂苦绣球组织培养的快速繁殖方法,包括茎段的消毒、腋芽的诱导、丛生芽的增殖、野外生根诱导等,其主要步骤如下:
(1)取挂苦绣球的茎段,进行消毒处理;
(2)将步骤(1)消毒处理过的无菌茎段接种到BL+6-BA1.0mg/L+NAA2.0mg/L+10%椰子汁+2g/LCH的培养基中进行腋芽的诱导,附加葡萄糖30g/L,琼脂6.5g/L,培养温度24±2℃,光照强度2200lx,光照8h;
(3)取步骤(2)诱导出来的芽苗接入MS+6-BA1.5-2.0mg/L+1.5-2.0mg/LKT+0.5mg/LNAA+4.0g/L琼脂+15-20g/L魔芋粉培养基中进行增殖培养,附加葡萄糖30g/L,琼脂6.5g/L,光照5000lx,光期13h/d,温度24±2℃;
(4)将步骤(3)增殖后的芽苗进行野外生根诱导。
2. 按照权利要求1所述的一种挂苦绣球组织培养的快速繁殖方法,其特征在于:步骤(1)中所述挂苦绣球无菌茎段的获得为选择生长健壮的植株,切取长约3cm的茎段,放入玻璃瓶中,三层纱布封口,流水冲洗1h,洗去附着表面的多数杂菌,浸泡于1g/L多菌灵+800mg/L的羧卞青霉素钠,置于120r/min摇床上振荡1.5h,超净工作台上70%酒精处理1min,1g/L升汞处理15min,无菌水冲洗干净。
3. 按照权利要求1所述的一种挂苦绣球组织培养的快速繁殖方法,其特征在于:步骤(4)中所述挂苦绣球野外生根诱导的方法为选取生长旺盛的芽苗,将其敞口置于温室中炼苗3d后,取出,无菌水洗净底部培养基,移栽到灭菌过的1/2园土+1/2河沙的基质中,移栽后保持湿度85%以上,温度30℃,30天后统计生根成活率。
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