CN104304019A - 一种挂苦绣球组织培养的快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明研究了一种挂苦绣球组织培养的快速繁殖方法，包括茎段的消毒、腋芽的诱导、丛生芽的增殖、野外生根诱导等步骤。本发明通过对挂苦绣球的诱导、增殖、生根等条件的研究，成功地建立了挂苦绣球的微繁体系。
Description
技术领域
本发明涉及挂苦绣球的组织培养，属于生物技术领域。
背景技术
挂苦绣球，Hydrangea xanthoncura Diels，虎耳草科，又名黄枝挂苦子树、六蛾戏珠、黄脉绣球。灌木至小乔木，高1-7米，当年生小枝黑褐色或灰黄褐色，无毛或疏被柔毛，二年生小枝色较淡，常具明显的浅色皮孔，有时一年生小枝亦具皮孔，树皮稍厚，不易脱落或呈小块状剥落。生于山腰密林或疏林中或山顶灌丛中，海拔1600-2900米。挂苦绣球功效：化瘀疗伤，主治：用于跌打损伤、瘀血肿痛、筋骨疼痛、骨折等。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是挂苦绣球组织培养的快速繁殖方法，本发明通过对挂苦绣球的诱导、增殖、生根等条件的研究，成功地建立了挂苦绣球的微繁体系。
为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案：
选择生长健壮的植株，切取长约3cm的茎段，放入玻璃瓶中，三层纱布封口，流水冲洗1h，洗去附着表面的多数杂菌，浸泡于1g/L多菌灵+800mg/L的羧卞青霉素钠，置于120r/min摇床上振荡1.5h，超净工作台上70%酒精处理1min，1g/L升汞处理15min，无菌水冲洗干净，消毒处理过的无菌茎段接种到BL+6-BA 1.0mg/L+NAA 2.0mg/L+10%椰子汁+2g/LCH的培养基中进行腋芽的诱导，附加葡萄糖30g/L，琼脂6.5g/L，培养温度24±2℃，光照强度2200lx，光照8h，诱导出来的芽苗接入MS+6-BA1.5-2.0mg/L+1.5-2.0mg/LKT+0.5mg/LNAA+4.0g/L琼脂+15-20g/L魔芋粉培养基中进行增殖培养，附加葡萄糖30g/L，琼脂6.5g/L，光照5000lx，光期13h/d，温度24±2℃，选取生长旺盛的芽苗，将其敞口置于温室中炼苗3d后，取出，无菌水洗净底部培养基，移栽到灭菌过的1/2园土+1/2河沙的基质中，移栽后保持湿度85%以上，温度30℃，30天后统计生根成活率。
采用本发明制备的挂苦绣球生根率高，培养周期短，利于大规模种植。
下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式
实施例1
选择生长健壮的植株，切取长约3cm的茎段，放入玻璃瓶中，三层纱布封口，流水冲洗1h，洗去附着表面的多数杂菌，浸泡于1g/L多菌灵+800mg/L的羧卞青霉素钠，置于120r/min摇床上振荡1.5h，超净工作台上70%酒精处理1min，1g/L升汞处理15min，无菌水冲洗干净，消毒处理过的无菌茎段接种到BL+6-BA1.0mg/L+NAA2.0mg/L+10%椰子汁+2g/LCH的培养基中进行腋芽的诱导，附加葡萄糖30g/L，琼脂6.5g/L，培养温度24±2℃，光照强度2200lx，光照8h，诱导出来的芽苗接入MS+6-BA1.5mg/L+1.5mg/LKT+0.5mg/LNAA+4.0g/L琼脂+15g/L魔芋粉培养基中进行增殖培养，附加葡萄糖30g/L，琼脂6.5g/L，光照5000lx，光期13h/d，温度24±2℃，选取生长旺盛的芽苗，将其敞口置于温室中炼苗3d后，取出，无菌水洗净底部培养基，移栽到灭菌过的1/2园土+1/2河沙的基质中，移栽后保持湿度85%以上，温度30℃，30天后统计生根成活率，成活率88%。
实施例2
选择生长健壮的植株，切取长约3cm的茎段，放入玻璃瓶中，三层纱布封口，流水冲洗1h，洗去附着表面的多数杂菌，浸泡于1g/L多菌灵+800mg/L的羧卞青霉素钠，置于120r/min摇床上振荡1.5h，超净工作台上70%酒精处理1min，1g/L升汞处理15min，无菌水冲洗干净，消毒处理过的无菌茎段接种到BL+6-BA1.0mg/L+NAA2.0mg/L+10%椰子汁+2g/LCH的培养基中进行腋芽的诱导，附加葡萄糖30g/L，琼脂6.5g/L，培养温度24±2℃，光照强度2200lx，光照8h，诱导出来的芽苗接入MS+6-BA2.0mg/L+2.0mg/LKT+0.5mg/LNAA+4.0g/L琼脂+20g/L魔芋粉培养基中进行增殖培养，附加葡萄糖30g/L，琼脂6.5g/L，光照5000lx，光期13h/d，温度24±2℃，选取生长旺盛的芽苗，将其敞口置于温室中炼苗3d后，取出，无菌水洗净底部培养基，移栽到灭菌过的1/2园土+1/2河沙的基质中，移栽后保持湿度85%以上，温度30℃，30天后统计生根成活率，成活率92%。
实施例3
选择生长健壮的植株，切取长约3cm的茎段，放入玻璃瓶中，三层纱布封口，流水冲洗1h，洗去附着表面的多数杂菌，浸泡于1g/L多菌灵+800mg/L的羧卞青霉素钠，置于120r/min摇床上振荡1.5h，超净工作台上70%酒精处理1min，1g/L升汞处理15min，无菌水冲洗干净，消毒处理过的无菌茎段接种到BL+6-BA1.0mg/L+NAA2.0mg/L+10%椰子汁+2g/LCH的培养基中进行腋芽的诱导，附加葡萄糖30g/L，琼脂6.5g/L，培养温度24±2℃，光照强度2200lx，光照8h，诱导出来的芽苗接入MS+6-BA2.0mg/L+1.5mg/LKT+0.5mg/LNAA+4.0g/L琼脂+20g/L魔芋粉培养基中进行增殖培养，附加葡萄糖30g/L，琼脂6.5g/L，光照5000lx，光期13h/d，温度24±2℃，选取生长旺盛的芽苗，将其敞口置于温室中炼苗3d后，取出，无菌水洗净底部培养基，移栽到灭菌过的1/2园土+1/2河沙的基质中，移栽后保持湿度85%以上，温度30℃，30天后统计生根成活率，成活率94%。
Claims (3)
1. 一种挂苦绣球组织培养的快速繁殖方法，包括茎段的消毒、腋芽的诱导、丛生芽的增殖、野外生根诱导等，其主要步骤如下：
（1）取挂苦绣球的茎段，进行消毒处理；
（2）将步骤（1）消毒处理过的无菌茎段接种到BL+6-BA1.0mg/L+NAA2.0mg/L+10%椰子汁+2g/LCH的培养基中进行腋芽的诱导，附加葡萄糖30g/L，琼脂6.5g/L，培养温度24±2℃，光照强度2200lx，光照8h；
（3）取步骤（2）诱导出来的芽苗接入MS+6-BA1.5-2.0mg/L+1.5-2.0mg/LKT+0.5mg/LNAA+4.0g/L琼脂+15-20g/L魔芋粉培养基中进行增殖培养，附加葡萄糖30g/L，琼脂6.5g/L，光照5000lx，光期13h/d，温度24±2℃；
（4）将步骤（3）增殖后的芽苗进行野外生根诱导。
2. 按照权利要求1所述的一种挂苦绣球组织培养的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（1）中所述挂苦绣球无菌茎段的获得为选择生长健壮的植株，切取长约3cm的茎段，放入玻璃瓶中，三层纱布封口，流水冲洗1h，洗去附着表面的多数杂菌，浸泡于1g/L多菌灵+800mg/L的羧卞青霉素钠，置于120r/min摇床上振荡1.5h，超净工作台上70%酒精处理1min，1g/L升汞处理15min，无菌水冲洗干净。
3. 按照权利要求1所述的一种挂苦绣球组织培养的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（4）中所述挂苦绣球野外生根诱导的方法为选取生长旺盛的芽苗，将其敞口置于温室中炼苗3d后，取出，无菌水洗净底部培养基，移栽到灭菌过的1/2园土+1/2河沙的基质中，移栽后保持湿度85%以上，温度30℃，30天后统计生根成活率。
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2014
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