CN107125132A - 一种杂交构树组织培养快速繁殖方法 - Google Patents
一种杂交构树组织培养快速繁殖方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种杂交构树组织培养快速繁殖方法，涉及植物培育繁殖技术领域，本发明的杂交构树组织培养快速繁殖方法包括如下步骤：(一)组织培养阶段、(二)移栽大田阶段；其中，种子培养阶段包括1)外植体的采集、2)外植体的消毒、3)培养基的准备和4)大棚炼苗；移栽大田阶段包括：(1)整地、(2)播种、(3)施肥管理以及(4)病虫害防治。本发明杂交构树组织培养快速繁殖方法从组织的培养到移栽大田后的培育，都进行严格把关，各个步骤紧密结合，相互作用，提高了杂交构树的成活率，适用于大规模种植。
Description
【技术领域】
本发明涉及植物培育繁殖技术领域，具体涉及一种杂交构树组织培养快速繁殖方法。
【背景技术】
构树别名褚桃等，为落叶乔木，高10-20m；树皮暗灰色；小枝密生柔毛。树冠张开，卵形至广卵形；树皮平滑，浅灰色或灰褐色，不易裂，全株含乳汁。为强阳性树种，适应性特强，抗逆性强。构树具有速生、适应性强、分布广、易繁殖、热量高、轮伐期短的特点。其根系浅，侧根分布很广，生长快，萌芽力和分蘖力强，耐修剪，抗污染性强。在中国的温带、热带均有分布，不论平原、丘陵或山地都能生长，其叶是很好的猪饲料，其韧皮纤维是造纸的高级原料，材质洁白，其根和种子均可入药，树液可治皮肤病，经济价值很高。
构树是我国特有的含纤维树种，属特种经济林，其韧皮纤维输液等利用价值极高，耐干旱瘠薄，是荒山石漠化处理比较合适的树种，也是扶贫攻坚，农民脱贫增收的重要途径。构树的叶片含蛋白质非常高，20-30％左右，远高于玉米，小麦，氨基酸，维生素，碳水化合物非常丰富，用于牲畜饲料，树皮，杆用于造纸。
随着国家提出构树扶贫产业优先要求，构树良种选育和组培研究，选育出适合在全国石山地区范围推广种植的优良品种，保护生态平衡，是目前研究的重点。
【发明内容】
有鉴于此，本发明的目的在于，提供一种杂交构树组织培养快速繁殖方法，在组织培养期间，采用3个培养基进行分阶段培养，能够在短时间内培育出大量健壮试管苗，在移栽大田后，从施肥到防虫，均考虑环保绿色，施肥过程中不添加化肥，而采用天然安全的有机肥料，防虫过程则进行针对性的治疗，同时以防御为主，各个步骤紧密结合，相互作用，提高了杂交构树的成活率。
为了解决上述技术问题，本发明采用了如下的技术方案：
一种杂交构树组织培养快速繁殖方法，具体包括如下步骤：
(一)组织培养阶段
1)外植体的消毒：取杂交构树新长出的嫩芽作为外植体后，用生汞0.1％浸泡3-5分钟，浸泡过程中不断振荡，浸泡后用无菌水冲洗3-4次，然后放置无菌接种盘在超净工作台上，将外植体表面的水分吹干，切去在消毒过程中坏死的周边组织，在超净工作台上将叶片用经过灭菌消毒手术刀切割成0.5-2cm小片待用；
2)培养基的培养：
①外植体诱导培养：将经步骤1)处理所得外植体接种于诱导培养基上培养，经过暗处理48小时后，在光照强度1300-1500lx，光照时间为12-14h/d，温度为22-25℃，PH值为5.6-5.8的条件下培养28-33天；
所述诱导培养基的成分为：MS+3.0mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA；
②继代增殖培养：将经过步骤①诱导培养的构树苗径段上的个腋芽切下，将腋芽接种到增殖培养基上进行继代增殖培养，于光照强度为1800-2200lx，光照时间为12-14h/d，温度为21-25℃，PH值为5.6-5.8的条件下培养30-35天；
所述增殖培养基的成分为：MS+1.1mg/L 6-BA+0.11mg/L NAA；
③生根培养：将经过步骤②继代增殖培养后的构树组培苗放于生根培养基上进行生根培养，培养条件为：光照强度2000-2500lx，光照时间10-12小时/d，温度25-28℃，培养15-20天后即可出瓶炼苗；
所述生根培养基的成分为：1/3MS+0.1mg/L 6-BA+4.8g/L卡拉胶+1g/L琼脂+30g/L蔗糖；
3)大棚炼苗：将经过组织培养的构树苗由培养基中取出，用自来水将小苗根部的培养基洗净，用稀释1000倍的多菌灵或百菌清溶液浸泡10-20分钟，然后种植到混有园土、河沙及少量珍珠岩的培养土苗盘里并喷淋定根水，园土、河沙、珍珠岩的比值是2:4:1，在植株上层套上塑料薄膜保水，保持湿度为75-90％，温度23-26℃，培养20-30天后即可移栽大田；
(二)移栽大田阶段
(1)播种：经大棚炼苗后，弃去黄化和发育不良的种苗，整理出健康种苗放入事先挖好的穴中，每穴放苗一株，放苗时使其根自然展开，覆土过根茎，同时保证枝干与主根的结合部分露出土外，覆土完成后将土压实，并浇灌定根水；
(2)施肥管理：移栽大田2个月后进行初次施肥，初次施肥7-10天后对叶面喷施营养液进行追肥；所用肥料为农家肥与生态肥按照比例为1-3:2-5混合，施肥时间为每年4-8月份，每年施肥4-6次，施肥结合中耕除草进行；每1-2月用营养液进行叶面喷施一次；所述营养液是将20-30重量份的砂土、5-10重量份的草木灰与10-18重量份的蛭石混合后浸泡在60-80重量份的水中，浸泡2天后将其过滤，取液体加入10-15重量份的沼液混合搅拌均匀即可；
所述农家肥为家禽粪便；所述生态肥所述生态肥通过将20-40的重量份的尿素置于容器中，掺拌5-10的重量份乌龟壳、1-8重量份的白砂糖、5-10的重量份椰树皮、7-12重量份的榕树枯枝、7-12重量份的荷花杆、7-12重量份的山野豌豆藤、5-10重量份的野韭菜、7-12重量份的皂荚树枯枝以及3-8重量份的纤维素酶，再浇入10-30重量份的水，然后进行堆沤，待原料全部腐烂变成腐烂质土后得到的。
优选地，所述组织培养阶段还包括外植体的采集步骤，具体为：选择4-6月份的晴天或阴天进行采集，于上午的9-11点之前，采摘生长健壮、发育正常、无病虫害、半木质化的杂交构树嫩芽，去除杂质备用。
优选地，所述移栽大田阶段还包括整地的步骤，具体为：在种植前1-2个月经深翻耕后添加土壤调节剂将土壤pH值调节为5.7-6.6，将碎土耙平，施埋基底肥，按行距1.5-2.0m、株距1.5-2.2m挖穴，并在每个穴内施埋基底肥。
优选地，所述移栽大田阶段还包括病虫害防治的步骤，具体为：在病穴施用生物农药，或者将病株拔出，每隔1-2周喷施消毒液一次；
所述消毒液由艾叶汁、洋葱汁、茴香汁、大蒜汁与水按照质量比(1-2.5)：(2-3.5)：(1.5-2.5)：(3-4)：(30-55)配制而成；所述消毒液的喷施量为：每次每亩喷洒180-250kg。
优选地，所述基底肥是由30-50重量份的厩肥、16-32重量份的骨粉肥、40-50重量份的棉花和21-33重量份的人畜粪便混合均匀后在温度为30-40℃，湿度为60-70％的条件下发酵8-12天得到。
优选地，所述基底肥的具体施加方式为：在穴底部施加一层3-5cm厚的基底肥，然后在基底肥上面覆盖一层4-6cm厚的泥土，依次交替2-3次；基底肥的用量为每亩施加400-600kg。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
1、本发明的一种杂交构树组织培养快速繁殖方法在种子培养过程中，在传统的培养基的配方上改进，添加一些能够在杂交构树在生根壮苗期间所需的因子，在含有不同激素配比的MS培养基上诱导愈伤组织，以MS培养基为基础培养基，添加生根壮苗的母液配方，通过诱导培养基、增殖培养基以及生根培养基的培养，各培养基提供外植体在生根壮苗期间所需的因子，能够提供生根的良好条件，促进苗健康茁壮，为构树生长所需能量供给得到满足，调节体内养分的平衡，快速促进壮苗生根，使得生根率达到98％以上，且壮苗生根后的植株平均根数达到4-5条，在大棚中采用园土、河沙以及珍珠岩的合理配比，增加土壤的氧气含量，提高土壤透气性，为种苗的生长提供优质的条件。
2、本发明的杂交构树组织培养快速繁殖方法在移栽大田阶段，在种苗定植前先对种植地进行预处理，通过对地块进行深松处理，然后开设种植穴，由于土壤养分含量低，直接播种肥效迟缓，因此在种植穴中加入基底肥，基底肥具有改良土壤肥效的作用，为种子生长提高提出养分，基底肥的施加方式为埋在种植穴内，并在其表面覆盖营养土，能够使养分更集中，施肥效果更佳；定植后采用农家肥与生态肥进行配合施肥，生态肥包括多种绿色植物，并加入纤维素酶进行酶解，使养分更多，植株吸收更充分，同时向植株叶面喷洒营养液，促进生长，另外，病虫害的防治采用消毒液进行定期喷施，预防虫害的发生，消毒液均由绿色安全的原料配制得到，对构树的成品性状无影响。
本发明杂交构树组织培养快速繁殖方法从种子的培养到移栽大田后的培育，都进行严格把关，在种子培养过程中实现构树种子的快速萌发，缩短构树种子的培养时间，在短时间内培育出大量健壮试管苗，在移栽大田后，从施肥到防虫，均考虑环保绿色，施肥过程中不添加化肥，而采用天然安全的有机肥料，防虫过程则进行针对性的治疗，同时以防御为主，各个步骤紧密结合，相互作用，提高了杂交构树的成活率，适用于大规模种植，值得推广。
【具体实施方式】
下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不可以以任何方式限制本发明。
实施例1
本实施例提供一种杂交构树组织培养快速繁殖方法，具体包括如下步骤：
(一)组织培养阶段
1)外植体的采集：选择4-6月份的晴天或阴天进行采集，于上午的9-11点之前，采摘生长健壮、发育正常、无病虫害、半木质化的杂交构树嫩芽，去除杂质备用。
2)外植体的消毒：取杂交构树新长出的嫩芽作为外植体后，用生汞0.1％浸泡3分钟，浸泡过程中不断振荡，浸泡后用无菌水冲洗3次，然后放置无菌接种盘在超净工作台上，将外植体表面的水分吹干，切去在消毒过程中坏死的周边组织，在超净工作台上将叶片用经过灭菌消毒手术刀切割成0.5cm小片待用；
3)培养基的培养：
①外植体诱导培养：将经步骤1)处理所得外植体接种于诱导培养基上培养，经过暗处理48小时后，在光照强度1300lx，光照时间为12h/d，温度为22℃，PH值为5.6的条件下培养28天；其中，诱导培养基的成分为：MS+3.0mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA；
②继代增殖培养：将经过步骤①诱导培养的构树苗径段上的个腋芽切下，将腋芽接种到增殖培养基上进行继代增殖培养，于光照强度为1800lx，光照时间为12h/d，温度为21℃，PH值为5.6的条件下培养30天；
所述增殖培养基的成分为：MS+1.1mg/L 6-BA+0.11mg/L NAA；
③生根培养：将经过步骤②继代增殖培养后的构树组培苗放于生根培养基上进行生根培养，培养条件为：光照强度2000lx，光照时间10小时/d，温度25℃，培养15天后即可出瓶炼苗；其中，生根培养基的成分为：1/3MS+0.1mg/L 6-BA+4.8g/L卡拉胶+1g/L琼脂+30g/L蔗糖；
4)大棚炼苗：将经过组织培养的构树苗由培养基中取出，用自来水将小苗根部的培养基洗净，用稀释1000倍的多菌灵或百菌清溶液浸泡10分钟，然后种植到混有园土、河沙及少量珍珠岩的培养土苗盘里并喷淋定根水，园土、河沙、珍珠岩的比值是2:4:1，在植株上层套上塑料薄膜保水，保持湿度为75％，温度23℃，培养20天后即可移栽大田；
(二)移栽大田阶段
(1)整地：在种植前1个月经深翻耕后添加土壤调节剂将土壤pH值调节为5.7，将碎土耙平，施埋基底肥，按行距1.5m、株距1.5m挖穴，并在每个穴内施埋基底肥，其中，基底肥是由30重量份的厩肥、16重量份的骨粉肥、40重量份的棉花和21重量份的人畜粪便混合均匀后在温度为30℃，湿度为60％的条件下发酵8天得到，基底肥的具体施加方式为：在穴底部施加一层3cm厚的基底肥，然后在基底肥上面覆盖一层4cm厚的泥土，依次交替2次；基底肥的用量为每亩施加400kg；
(2)播种：经大棚炼苗后，弃去黄化和发育不良的种苗，整理出健康种苗放入事先挖好的穴中，每穴放苗一株，放苗时使其根自然展开，覆土过根茎，同时保证枝干与主根的结合部分露出土外，覆土完成后将土压实，并浇灌定根水；
(3)施肥管理：移栽大田2个月后进行初次施肥，初次施肥7天后对叶面喷施营养液进行追肥；所用肥料为农家肥与生态肥按照比例为1:2混合，施肥时间为每年4-8月份，每年施肥4次，施肥结合中耕除草进行；每月用营养液进行叶面喷施一次；所述营养液是将20重量份的砂土、5重量份的草木灰与10重量份的蛭石混合后浸泡在60重量份的水中，浸泡2天后将其过滤，取液体加入10重量份的沼液混合搅拌均匀即可；其中，农家肥为家禽粪便；所述生态肥所述生态肥通过将20的重量份的尿素置于容器中，掺拌5的重量份乌龟壳、1重量份的白砂糖、5的重量份椰树皮、7重量份的榕树枯枝、7重量份的荷花杆、7重量份的山野豌豆藤、5重量份的野韭菜、7重量份的皂荚树枯枝以及3重量份的纤维素酶，再浇入10重量份的水，然后进行堆沤，待原料全部腐烂变成腐烂质土后得到的；
(4)病虫害防治：在病穴施用生物农药，或者将病株拔出，每隔1周喷施消毒液一次；其中，消毒液由艾叶汁、洋葱汁、茴香汁、大蒜汁与水按照质量比1：2：1.5：3：30配制而成；所述消毒液的喷施量为：每次每亩喷洒180-250kg。
实施例2
本实施例提供一种杂交构树组织培养快速繁殖方法，具体包括如下步骤：
(一)组织培养阶段
1)外植体的采集：选择4-6月份的晴天或阴天进行采集，于上午的9-11点之前，采摘生长健壮、发育正常、无病虫害、半木质化的杂交构树嫩芽，去除杂质备用。
2)外植体的消毒：取杂交构树新长出的嫩芽作为外植体后，用生汞0.1％浸泡4分钟，浸泡过程中不断振荡，浸泡后用无菌水冲洗3次，然后放置无菌接种盘在超净工作台上，将外植体表面的水分吹干，切去在消毒过程中坏死的周边组织，在超净工作台上将叶片用经过灭菌消毒手术刀切割成1.2cm小片待用；
3)培养基的培养：
①外植体诱导培养：将经步骤1)处理所得外植体接种于诱导培养基上培养，经过暗处理48小时后，在光照强度1400lx，光照时间为13h/d，温度为23℃，PH值为5.7的条件下培养30天；其中，诱导培养基的成分为：MS+3.0mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA；
②继代增殖培养：将经过步骤①诱导培养的构树苗径段上的个腋芽切下，将腋芽接种到增殖培养基上进行继代增殖培养，于光照强度为2000lx，光照时间为13h/d，温度为22℃，PH值为5.7的条件下培养33天；其中，增殖培养基的成分为：MS+1.1mg/L 6-BA+0.11mg/L NAA；
③生根培养：将经过步骤②继代增殖培养后的构树组培苗放于生根培养基上进行生根培养，培养条件为：光照强度2250lx，光照时间11小时/d，温度26℃，培养17天后即可出瓶炼苗；其中，生根培养基的成分为：1/3MS+0.1mg/L 6-BA+4.8g/L卡拉胶+1g/L琼脂+30g/L蔗糖；
4)大棚炼苗：将经过组织培养的构树苗由培养基中取出，用自来水将小苗根部的培养基洗净，用稀释1000倍的多菌灵或百菌清溶液浸泡15分钟，然后种植到混有园土、河沙及少量珍珠岩的培养土苗盘里并喷淋定根水，园土、河沙、珍珠岩的比值是2:4:1，在植株上层套上塑料薄膜保水，保持湿度为82％，温度24℃，培养25天后即可移栽大田；
(二)移栽大田阶段
(1)整地：在种植前2个月经深翻耕后添加土壤调节剂将土壤pH值调节为6.0，将碎土耙平，施埋基底肥，按行距1.7m、株距1.8m挖穴，并在每个穴内施埋基底肥，其中，基底肥是由40重量份的厩肥、25重量份的骨粉肥、45重量份的棉花和28重量份的人畜粪便混合均匀后在温度为35℃，湿度为65％的条件下发酵10天得到，基底肥的具体施加方式为：在穴底部施加一层4cm厚的基底肥，然后在基底肥上面覆盖一层5m厚的泥土，依次交替2次；基底肥的用量为每亩施加500kg；
(2)播种：经大棚炼苗后，弃去黄化和发育不良的种苗，整理出健康种苗放入事先挖好的穴中，每穴放苗一株，放苗时使其根自然展开，覆土过根茎，同时保证枝干与主根的结合部分露出土外，覆土完成后将土压实，并浇灌定根水；
(3)施肥管理：移栽大田2个月后进行初次施肥，初次施肥8天后对叶面喷施营养液进行追肥；所用肥料为农家肥与生态肥按照比例为2:3混合，施肥时间为每年4-8月份，每年施肥5次，施肥结合中耕除草进行；每月用营养液进行叶面喷施一次；所述营养液是将25重量份的砂土、7重量份的草木灰与14重量份的蛭石混合后浸泡在70重量份的水中，浸泡2天后将其过滤，取液体加入12重量份的沼液混合搅拌均匀即可；其中，农家肥为家禽粪便；所述生态肥所述生态肥通过将30的重量份的尿素置于容器中，掺拌7的重量份乌龟壳、5重量份的白砂糖、7的重量份椰树皮、10重量份的榕树枯枝、10重量份的荷花杆、10重量份的山野豌豆藤、7重量份的野韭菜、10重量份的皂荚树枯枝以及6重量份的纤维素酶，再浇入20重量份的水，然后进行堆沤，待原料全部腐烂变成腐烂质土后得到的；
(4)病虫害防治：在病穴施用生物农药，或者将病株拔出，每隔1周喷施消毒液一次；其中，消毒液由艾叶汁、洋葱汁、茴香汁、大蒜汁与水按照质量比1.8：2.8：2.0：3.5：38配制而成；所述消毒液的喷施量为：每次每亩喷洒220kg。
实施例3
本实施例提供一种杂交构树组织培养快速繁殖方法，具体包括如下步骤：
(一)组织培养阶段
1)外植体的采集：选择4-6月份的晴天或阴天进行采集，于上午的9-11点之前，采摘生长健壮、发育正常、无病虫害、半木质化的杂交构树嫩芽，去除杂质备用。
2)外植体的消毒：取杂交构树新长出的嫩芽作为外植体后，用生汞0.1％浸泡5分钟，浸泡过程中不断振荡，浸泡后用无菌水冲洗4次，然后放置无菌接种盘在超净工作台上，将外植体表面的水分吹干，切去在消毒过程中坏死的周边组织，在超净工作台上将叶片用经过灭菌消毒手术刀切割成2cm小片待用；
3)培养基的培养：
①外植体诱导培养：将经步骤1)处理所得外植体接种于诱导培养基上培养，经过暗处理48小时后，在光照强度1500lx，光照时间为14h/d，温度为25℃，PH值为5.8的条件下培养33天；其中，诱导培养基的成分为：MS+3.0mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA；
②继代增殖培养：将经过步骤①诱导培养的构树苗径段上的个腋芽切下，将腋芽接种到增殖培养基上进行继代增殖培养，于光照强度为2200lx，光照时间为14h/d，温度为21-25℃，PH值为5.8的条件下培养35天；其中，增殖培养基的成分为：MS+1.1mg/L 6-BA+0.11mg/L NAA；
③生根培养：将经过步骤②继代增殖培养后的构树组培苗放于生根培养基上进行生根培养，培养条件为：光照强度2500lx，光照时间12小时/d，温度28℃，培养20天后即可出瓶炼苗；其中，生根培养基的成分为：1/3MS+0.1mg/L 6-BA+4.8g/L卡拉胶+1g/L琼脂+30g/L蔗糖；
4)大棚炼苗：将经过组织培养的构树苗由培养基中取出，用自来水将小苗根部的培养基洗净，用稀释1000倍的多菌灵或百菌清溶液浸泡20分钟，然后种植到混有园土、河沙及少量珍珠岩的培养土苗盘里并喷淋定根水，园土、河沙、珍珠岩的比值是2:4:1，在植株上层套上塑料薄膜保水，保持湿度为90％，温度26℃，培养30天后即可移栽大田；
(二)移栽大田阶段
(1)整地：在种植前2个月经深翻耕后添加土壤调节剂将土壤pH值调节为6.6，将碎土耙平，施埋基底肥，按行距2.0m、株距2.2m挖穴，并在每个穴内施埋基底肥，其中，基底肥是由50重量份的厩肥、32重量份的骨粉肥、50重量份的棉花和33重量份的人畜粪便混合均匀后在温度为40℃，湿度为70％的条件下发酵12天得到，基底肥的具体施加方式为：在穴底部施加一层5cm厚的基底肥，然后在基底肥上面覆盖一层6cm厚的泥土，依次交替3次；基底肥的用量为每亩施加600kg；
(2)播种：经大棚炼苗后，弃去黄化和发育不良的种苗，整理出健康种苗放入事先挖好的穴中，每穴放苗一株，放苗时使其根自然展开，覆土过根茎，同时保证枝干与主根的结合部分露出土外，覆土完成后将土压实，并浇灌定根水；
(3)施肥管理：移栽大田2个月后进行初次施肥，初次施肥10天后对叶面喷施营养液进行追肥；所用肥料为农家肥与生态肥按照比例为3:5混合，施肥时间为每年4-8月份，每年施肥6次，施肥结合中耕除草进行；每2月用营养液进行叶面喷施一次；所述营养液是将30重量份的砂土、10重量份的草木灰与18重量份的蛭石混合后浸泡在80重量份的水中，浸泡2天后将其过滤，取液体加入15重量份的沼液混合搅拌均匀即可；其中，农家肥为家禽粪便；所述生态肥所述生态肥通过将40的重量份的尿素置于容器中，掺拌10的重量份乌龟壳、8重量份的白砂糖、10的重量份椰树皮、12重量份的榕树枯枝、12重量份的荷花杆、12重量份的山野豌豆藤、10重量份的野韭菜、12重量份的皂荚树枯枝以及8重量份的纤维素酶，再浇入30重量份的水，然后进行堆沤，待原料全部腐烂变成腐烂质土后得到的；
(4)病虫害防治：在病穴施用生物农药，或者将病株拔出，每隔2周喷施消毒液一次；其中，消毒液由艾叶汁、洋葱汁、茴香汁、大蒜汁与水按照质量比2.5：3.5：2.5：4：55配制而成；所述消毒液的喷施量为：每次每亩喷洒250kg。
效果验证
为了进一步说明本发明杂交构树组织培养快速繁殖方法的应用价值，实施人选择无病害，无残缺，大小相近的构树蒴果，分为以下四组做对比试验：
第一组：实施例1所述的培养繁殖方法；
第二组：实施例2所述的培养繁殖方法；
第三组：实施例3所述的培养繁殖方法；
第四组：常规培养繁殖方法。
S1：观察上述四组在种子培养阶段的组培苗情况，记录各组的生根率、生根数、及出甁综合状态，结果见表1；
表1四组构树组培苗情况表
S2：进行移栽大田阶段的观察，在移栽大田两个月后统计移栽成活率，并将结果记录如表2所示：
表2四组构树移栽苗生长情况表
由上述两表得知：采用本发明的培育法培育得到的构树，不仅在组织培养阶段得到高品质的种苗，且在移栽大田阶段具有良好的长势，各个步骤紧密结合，相互作用，提高了杂交构树的成活率，适用于大规模种植，值得推广。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (6)
1.一种杂交构树组织培养快速繁殖方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
(一)组织培养阶段
1)外植体的消毒：取杂交构树新长出的嫩芽作为外植体后，用生汞0.1％浸泡3-5分钟，浸泡过程中不断振荡，浸泡后用无菌水冲洗3-4次，然后放置无菌接种盘在超净工作台上，将外植体表面的水分吹干，切去在消毒过程中坏死的周边组织，在超净工作台上将叶片用经过灭菌消毒手术刀切割成0.5-2cm小片待用；
2)培养基的培养：
①外植体诱导培养：将经步骤1)处理所得外植体接种于诱导培养基上培养，经过暗处理48小时后，在光照强度1300-1500lx，光照时间为12-14h/d，温度为22-25℃，PH值为5.6-5.8的条件下培养28-33天；
所述诱导培养基的成分为：MS+3.0mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA；
②继代增殖培养：将经过步骤①诱导培养的构树苗径段上的个腋芽切下，将腋芽接种到增殖培养基上进行继代增殖培养，于光照强度为1800-2200lx，光照时间为12-14h/d，温度为21-25℃，PH值为5.6-5.8的条件下培养30-35天；
所述增殖培养基的成分为：MS+1.1mg/L 6-BA+0.11mg/L NAA；
③生根培养：将经过步骤②继代增殖培养后的构树组培苗放于生根培养基上进行生根培养，培养条件为：光照强度2000-2500lx，光照时间10-12小时/d，温度25-28℃，培养15-20天后即可出瓶炼苗；
所述生根培养基的成分为：1/3MS+0.1mg/L 6-BA+4.8g/L卡拉胶+1g/L琼脂+30g/L蔗糖；
3)大棚炼苗：将经过组织培养的构树苗由培养基中取出，用自来水将小苗根部的培养基洗净，用稀释1000倍的多菌灵或百菌清溶液浸泡10-20分钟，然后种植到混有园土、河沙及少量珍珠岩的培养土苗盘里并喷淋定根水，园土、河沙、珍珠岩的比值是2:4:1，在植株上层套上塑料薄膜保水，保持湿度为75-90％，温度23-26℃，培养20-30天后即可移栽大田；
(二)移栽大田阶段
(1)播种：经大棚炼苗后，弃去黄化和发育不良的种苗，整理出健康种苗放入事先挖好的穴中，每穴放苗一株，放苗时使其根自然展开，覆土过根茎，同时保证枝干与主根的结合部分露出土外，覆土完成后将土压实，并浇灌定根水；
(2)施肥管理：移栽大田2个月后进行初次施肥，初次施肥7-10天后对叶面喷施营养液进行追肥；所用肥料为农家肥与生态肥按照比例为1-3:2-5混合，施肥时间为每年4-8月份，每年施肥4-6次，施肥结合中耕除草进行；每1-2月用营养液进行叶面喷施一次；所述营养液是将20-30重量份的砂土、5-10重量份的草木灰与10-18重量份的蛭石混合后浸泡在60-80重量份的水中，浸泡2天后将其过滤，取液体加入10-15重量份的沼液混合搅拌均匀即可；
所述农家肥为家禽粪便；所述生态肥所述生态肥通过将20-40的重量份的尿素置于容器中，掺拌5-10的重量份乌龟壳、1-8重量份的白砂糖、5-10的重量份椰树皮、7-12重量份的榕树枯枝、7-12重量份的荷花杆、7-12重量份的山野豌豆藤、5-10重量份的野韭菜、7-12重量份的皂荚树枯枝以及3-8重量份的纤维素酶，再浇入10-30重量份的水，然后进行堆沤，待原料全部腐烂变成腐烂质土后得到的。
2.根据权利要求1所述的一种杂交构树组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述组织培养阶段还包括外植体的采集步骤，具体为：选择4-6月份的晴天或阴天进行采集，于上午的9-11点之前，采摘生长健壮、发育正常、无病虫害、半木质化的杂交构树嫩芽，去除杂质备用。
3.根据权利要求1所述的一种杂交构树组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述移栽大田阶段还包括整地的步骤，具体为：在种植前1-2个月经深翻耕后添加土壤调节剂将土壤pH值调节为5.7-6.6，将碎土耙平，施埋基底肥，按行距1.5-2.0m、株距1.5-2.2m挖穴，并在每个穴内施埋基底肥。
4.根据权利要求1所述的一种杂交构树组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述移栽大田阶段还包括病虫害防治的步骤，具体为：在病穴施用生物农药，或者将病株拔出，每隔1-2周喷施消毒液一次；
所述消毒液由艾叶汁、洋葱汁、茴香汁、大蒜汁与水按照质量比(1-2.5)：(2-3.5)：(1.5-2.5)：(3-4)：(30-55)配制而成；所述消毒液的喷施量为：每次每亩喷洒180-250kg。
5.根据权利要求3所述的一种杂交构树组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述基底肥是由30-50重量份的厩肥、16-32重量份的骨粉肥、40-50重量份的棉花和21-33重量份的人畜粪便混合均匀后在温度为30-40℃，湿度为60-70％的条件下发酵8-12天得到。
6.根据权利要求3或5所述的一种杂交构树组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述基底肥的具体施加方式为：在穴底部施加一层3-5cm厚的基底肥，然后在基底肥上面覆盖一层4-6cm厚的泥土，依次交替2-3次；基底肥的用量为每亩施加400-600kg。
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