CN111053031A - 一种适用于沙漠种植的杂交构树的组织培养工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及植物组培技术领域，具体为一种适用于沙漠种植的杂交构树的组织培养工艺，为解决现有培养基存在生根率低、存活率低等问题，本发明提出了一种新的组织培养工艺，并改进了原有启动培养基、增殖培养基以及生根培养基。用本方法培养得到的“杂交构树101”抗旱性能优异。
Description
技术领域
本发明涉及植物组培技术领域，具体为一种适用于沙漠种植的杂交构树的组织培养工艺。
背景技术
中国科学院植物研究所通过对构树不同基因型耐盐生物学研究，包括生长特性、生态学特性和绿化园艺性状等，选育出一些列具高耐盐、生长快、产量高、品种好等特点的杂交构树株系。杂交构树植物蛋白含量高，叶片肥厚较野生构树丰产，适合规模化发展造纸及饲料等产业。“杂交构树101”是由中国科学院植物研究选育的一个杂交构树品种，经抗旱诱导的“杂交构树101”蛋白质含量高达到21-26％，灰分12-15％，粗纤维12-16％，粗脂肪1.4-2.8％。
现已公开的杂交构树组织培养技术公开的启动培养基成分为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+3％蔗糖+0.7％琼脂，若采用上述配方应用于“杂交构树101”出芽率仅为1:3；增殖培养基成分为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+3％蔗糖+0.7％琼脂，若采用上述配方应用于“杂交构树101”增殖系数仅为1.5；生根培养基成分为1/2MS+NAA0.1mg/L+2％蔗糖+0.7％琼脂，若采用上述配方应用于“杂交构树101”生根率仅为70％，种植存活率仅为50％，上述已公开的培养基配方会导致“杂交构树101”组织培养效果不佳，无法满足工厂化生产的需求。
发明内容
基于已公开的培养基配方应用“杂交构树101”品种的组织培养效果不佳的问题，本发明提出一种适用于沙漠种植的杂交构树的组织培养工艺。
本发明所采用的组织培养工艺按以下步骤实施：
1)外植体的的选择及处理：在野外选取生长性状优异的“杂交构树101”植株，采集丰满、肥壮的顶端芽尖，用清洁吸水纸包裹，装入塑料袋中，迅速放入2-8℃的保温箱中保存；用无菌水冲洗3-5次，用滤纸吸干水分，用0.5％-0.7％的升汞溶液浸泡0.5-3分钟，再次用无菌水冲洗2-3次，用滤纸吸干水分，小心对顶端芽尖进行剥离，获取外植体；
2)启动培养将上一步骤处理后得到的外植体移入启动培养基中，所述启动培养基配方采用MS+1.2mg/L6-BA+0.2mg/LKT+0.2mg/LNAA+Sucrose30g/L+Agar6.7g/L，pH值为6.3～6.5,在20-27℃的组织培养环境中进行培养，并提供1500至3000Lux光照强度，初期光照时间为6小时，一周后逐渐递增至14小时，培养时间25天左右；
3)增殖培养：将上一步骤处理后得到的外植体进行分切并移入增殖培养基中，所述增殖培养基配方采用MS+1.2mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+Sucrose30g/L+Agar6.7g/L，pH值为6.5～7.0，在20-27℃的组织培养环境中进行培养，并提供2000至4000Lux光照强度，光照时间为8至12小时，培养时间25天左右；
4)生根培养：将上一步骤处理后得到的外植体移入生根培养基中，并所述生根培养基配方采用1/2MS+0.2mg/L6-BA+1mg/NAA+Sucrose30g/L+Agar6.7g/L，pH值为7.1～7.6，在20-27℃的组织培养环境中进行培养，并提供2000至5000Lux光照强度，光照时间为12小时，培养时间25天左右，生根后即可得到组培苗。
与背景技术公开的启动培养基相比，本方法采用MS+1.2mg/L6-BA+0.2mg/LKT+0.2mg/LNAA+Sucrose30g/L+Ag，上述配方主要调整提高生长素与分裂素的比例，使其形成胚概率提高，新增激素KT能快速形成胚；采用了本方法公开的启动培养基配方，在其他培养条件不变的前提下，“杂交构树101”出芽率提高至80％；
与背景技术公开的增殖培养基相比，本方法采用MS+1.2mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+Sucrose30g/L+Agar6.7g/L，上述配方减少母液MS使用，增加生长素，加入少量分裂素，使其更快生根，调整PH值使其更容易适应盐碱地生长；采用了本方法公开的增殖培养基配方，在其他培养条件不变的前提下，“杂交构树101”的增殖系数提高一倍；
与背景技术公开的生根培养基相比，本方法采用1/2MS+0.2mg/L6-BA+1mg/LNAA+Sucrose30g/L+Agar6.7g/L，上述配方增加了0.2mg/L6-BA及0.9mg/LNAA,有利于根的生长，有利于茎叶适应沙漠环境育苗生长，从此培养基出来的“杂交构树101”苗生根率高、根生长快、根系发达、叶片蒸发量小；采用了本方法公开的生根培养基配方，在其他培养条件不变的前提下，“杂交构树101”生根率达95％以上，种植存活率达90％以上。生根培养基配方为本组培方法的核心技术特征。
生根培养的另一核心特征在于生根培养基的pH值控制在7.1-7.6，关系到“杂交构树101”在盐碱地的存活率。不同pH值在盐碱地的存活率如下表：
| 培养基ph值 | 5.8-6.0 | 6.2-6.5 | 6.5-7.0 | 7.1-7.6 |
| 盐碱地存活率 | 30％以下 | 40％-50％ | 55％-75％ | 80％以上 |
采用本方法公开的适用于沙漠种植的杂交构树的组织培养工艺，获得组培苗的时间短，成活率高，培育出的植株适合在沙漠种植，值得推广。
具体实施方式
实施例1：适用于沙漠种植的杂交构树的组织培养工艺，按以下步骤实施：本发明所采用的组织培养工艺按以下步骤实施：在野外选取生长性状优异的“杂交构树101”植株，采集丰满、肥壮的顶端芽尖，用清洁吸水纸包裹，装入塑料袋中，迅速放入2-8℃的保温箱中保存；用无菌水冲洗3-5次，用滤纸吸干水分，用0.5％-0.7％的升汞溶液浸泡0.5-3分钟，再次用无菌水冲洗2-3次，用滤纸吸干水分，小心对顶端芽尖进行剥离，获取“杂交构树101”外植体；将处理后得到的外植体移入启动培养基中，启动培养基用MS+1.2mg/L6-BA+0.2mg/LKT+0.2mg/LNAA+Sucrose30g/L+Agar6.7g/L，pH值为6.3～6.5,在20-27℃的组织培养环境中进行培养，并提供1500至3000Lux光照强度，初期光照时间为6小时，一周后逐渐递增至14小时，培养时间25天左右；将处理后得到的外植体进行分切并移入增殖培养基中，增殖培养基用MS+1.2mg/L6-BA+0.3mg/LNAA+Sucrose30g/L+Agar6.7g/L，pH值为6.5～7.0，在20-27℃的组织培养环境中进行培养，并提供2000至4000Lux光照强度，光照时间为8至12小时，培养时间25天左右；将处理后得到的外植体移入生根培养基中，并所述生根培养基配方采用1/2MS+0.2mg/L6-BA+1mg/NAA+Sucrose30g/L+Agar6.7g/L，pH值为7.1～7.6，在20-27℃的组织培养环境中进行培养，并提供2000至5000Lux光照强度，光照时间为12小时，培养时间25天左右，生根后即可得到组培苗。
选取“杂交构树101”600株，采用相同的栽培试验环境、相同的栽培技术和培育管理措施，把环境误差控制在尽可能小的范围内，研究内容尽可能结合生产需要开展，密度1200株/亩；调查内容包括树高、冠幅、单构树叶单片长、宽，根冠比等，以验证组培苗的生长状态良好。测定结果如下表：
Claims (1)
1.适用于沙漠种植的杂交构树的组织培养工艺，按以下步骤实施：
1）外植体的的选择及处理：在野外选取生长性状优异的 “杂交构树101”植株，采集丰满、肥壮的顶端芽尖，用清洁吸水纸包裹，装入塑料袋中，迅速放入2-8℃的保温箱中保存；用无菌水冲洗3-5次，用滤纸吸干水分，用0.5%-0.7%的升汞溶液浸泡0.5-3分钟，再次用无菌水冲洗2-3次，用滤纸吸干水分，小心对顶端芽尖进行剥离，获取外植体；
2）启动培养将上一步骤处理后得到的外植体移入启动培养基中，所述启动培养基配方采用MS+1.2mg/L6-BA+0.2mg/LKT+0.2mg/LNAA+Sucrose30g/L+Agar6．7g/L，pH值为6.3～6.5, 在20-27℃的组织培养环境中进行培养，并提供1500至3000Lux光照强度，初期光照时间为6小时，一周后逐渐递增至14小时，培养时间25天左右；
3）增殖培养：将上一步骤处理后得到的外植体进行分切并移入增殖培养基中，所述增殖培养基配方采用MS+1.2mg/L6-BA +0.3mg/LNAA+Sucrose30g/L+Agar6．7g/L，pH值为6.5～7.0，在20-27℃的组织培养环境中进行培养，并提供2000至4000Lux光照强度，光照时间为8至12小时，培养时间25天左右；
4）生根培养：将上一步骤处理后得到的外植体移入生根培养基中，并所述生根培养基配方采用1／2MS+0.2mg/L6-BA+1mg/NAA+Sucrose30g/L+Agar6．7g/L，pH值为7.1～7.6，在20-27℃的组织培养环境中进行培养，并提供2000至5000Lux光照强度，光照时间为12小时，培养时间25天左右，生根后即可得到组培苗。
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