CN108822230A - 一种超声提取刺梨果渣的多糖 - Google Patents

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Abstract

本发明一种超声提取刺梨果渣的多糖，其制备包括：（1）原料处理：刺梨果榨汁后的刺梨渣干燥至恒重后粉碎制成刺梨果渣粉，低温密封保存；（2）提取：称量刺梨果渣粉，加入蒸馏水浸泡，辅以超声波法提取刺梨果渣多糖，过滤后得提取液；（3）去除脂质：将提取液浓缩，向多糖溶液中加入无水石油醚搅拌震荡使之成乳状，静置使溶液上下分层为止，去除石油醚层；(4)去除蛋白：加入Sevag试剂充分溶解再振荡后离心，去除变性蛋白层，取上清液；(5)醇沉：滤液中加入无水乙醇充分搅拌、静置，收集沉淀；(6)干燥：将沉淀放在干燥滤纸的培养皿中进行干燥，既得刺梨果渣多糖。本发明提取时间短且活性高，提高了果蔬资源的综合利用。

Description

一种超声提取刺梨果渣的多糖
技术领域
本发明属于食品饮料加工领域，具体地涉及一种采用超声波辅助从果蔬副产物刺梨果渣中提取的多糖。
背景技术
刺梨属于蔷薇属植物，主要在西南地区有分布，其中贵州地区的刺梨产量尤为突出。刺梨鲜果中有着丰富的维生素、多糖、有机酸、酚类、氨基酸和微量元素等营养成分。近些年来刺梨加工产品渐渐走入市场，如刺梨果汁饮料、浓缩果汁、刺梨酥等，不难发现利用的大都是汁液，这些果渣绝大部分被当作动物饲料、肥料或者直接废弃为垃圾，不恰当的处理不仅会造成资源浪费，而且很容易引起环境污染。
多糖除具有调节免疫、抗肿瘤的生物学效应外，还有着降血糖、抗衰老等功效作用，而且对机体的副作用较小，从而使得多糖成为了功能食品甚至是新药制品中极具发展潜力的方向。刺梨作为药食两用资源被大力研究并开发的果品之一，其多糖作为果实的一种重要提取物也有着巨大的生理作用，杨江涛报道了刺梨粗多糖具有提高衰老小鼠体内抗氧化的能力；陈代雄等发现刺梨多糖可以增强动物的非特异性免疫和体液免疫应答；崔昊等也发现刺梨多糖对补体途径和替代途径均有着积极的作用。既然刺梨多糖的作用较为显著，因此，通过特定的处理方法和技术手段提取刺梨渣多糖具有十分重要的理论意义和经济价值。
发明内容
本发明目的在于提供一种超声提取刺梨果渣的多糖，该多糖是从天然资源中提取，尤其从果蔬废弃资源中提取的活性成分，不仅能够提高果蔬资源的综合利用，还为开发食品添加剂的研制及进一步推广应用提供依据。
本发明目的及解决其主要技术问题是采用以下技术方案来实现的：一种超声提取刺梨果渣的多糖，其制备方法包括以下步骤：
（1）原料处理：刺梨果榨汁后的刺梨果渣干燥至恒重后粉碎制成刺梨果渣粉，低温密封保存；
（2）提取：称量2 g 刺梨果渣粉，加入蒸馏水浸泡，辅以超声波法提取刺梨果渣多糖，过滤后得提取液；
所述超声波法提取具体为：在果渣中按1:15～1:25 g/mL加水浸提30～40min，功率为100W，提取温度为50～ 60℃；
（3）去除脂质：将提取液浓缩，向多糖溶液中加入无水石油醚搅拌震荡使之成乳状，静置使溶液上下分层为止，去除石油醚层；重复以上操作3-4次，直到石油醚层无油状小液滴出现，表明脱脂完成；
(4) 去除蛋白：入Sevag试剂充分溶解放置于摇床内振荡后离心，去除变性蛋白层，取上清液；将上清液重复上述步骤重复处理3-5次，直到没有白色的胶状物质产生，即无变性的蛋白质产生，得到脱蛋白的多糖液；
(5) 醇沉：滤液中加入无水乙醇充分搅拌、静置，收集沉淀；
(6) 干燥：将沉淀放在干燥滤纸的培养皿中进行干燥，既得刺梨果渣多糖。
所述步骤(1)中，将刺梨果渣粉碎至80～120目。
所述步骤(3)中浓缩具体为：将提取液经旋转蒸发仪浓缩至原体积1/4 ～ 1/6。
所述步骤(3) 中去脂质具体为：加入3倍体积的无水石油醚搅拌震荡使之成乳状，静置3-4小时使溶液上下分层为止。
所述步骤(4)去除蛋白具体为：按5:1加入Sevag试剂(氯仿与正丁醇体积比为4:1)后振荡30 min，立即取出，将其放置于离心机中，4000 r/min离心20 min，去除变性蛋白层，取上清液。
所述步骤(5)醇沉步骤具体为：加入糖溶液3～4 倍体积的无水乙醇，0 ～ 4℃静置16 ～ 24h，离心收集沉淀。
所述步骤(6)干燥：将所得的多糖置于40-55℃条件下干燥18-24h，即得刺梨果渣活性多糖。
本发明的原理：通过将刺梨果渣粉碎至80 ～ 120 目，增加了果渣的比表面积，提高了多糖的溶出率；然后，利用超声波加速了多糖的溶出，另外超声波的次级效应如机械振动、乳化、扩散、化学效应等也能加速多糖的扩散释放并充分与溶剂混合，有利于提取。
本发明通过将以上技术进行有效集成，显著提高了刺梨果渣多糖的提取率、缩短提取时间，降低提取成本，促进了刺梨资源的综合利用。
具体实施方式
以下结合较佳实施例，对依据本发明提出的一种超声提取刺梨果渣的多糖具体实施方式、特征及其功效，详细说明如后。
一种超声提取刺梨果渣的多糖，其制备方法包括以下步骤：
（1）原料处理：刺梨果榨汁后的刺梨渣干燥至恒重后粉碎制成刺梨果渣粉，低温密封保存；
（2）提取：称量2 g 刺梨果渣粉，加入蒸馏水浸泡，辅以超声波法提取刺梨果渣多糖，过滤后得提取液；
所述超声波法提取具体为：在果渣中按1:15～1:25 g/mL加水浸提30～40min，功率为100W，提取温度为50～ 60℃；
（3）去除脂质：将提取液浓缩，向多糖溶液中加入无水石油醚搅拌震荡使之成乳状，静置使溶液上下分层为止，去除石油醚层；重复以上操作3-4次，直到石油醚层无油状小液滴出现，表明脱脂完成；
(4) 去除蛋白：入Sevag试剂充分溶解放置于摇床内振荡后离心，去除变性蛋白层，取上清液；将上清液重复上述步骤重复处理3-5次，直到没有白色的胶状物质产生，即无变性的蛋白质产生，得到脱蛋白的多糖液；
(5) 醇沉：滤液中加入无水乙醇充分搅拌、静置，收集沉淀；
(6) 干燥：将沉淀放在干燥滤纸的培养皿中进行干燥，既得刺梨果渣多糖。
所述步骤(1)中，将刺梨果渣粉碎至80～120目。
所述步骤(3)中浓缩具体为：将提取液经旋转蒸发仪浓缩至原体积1/4 ～ 1/6。
所述步骤(3) 中去脂质具体为：加入3倍体积的无水石油醚搅拌震荡使之成乳状，静置3-4小时使溶液上下分层为止。
所述步骤(4)去除蛋白具体为：按5:1加入Sevag试剂(氯仿与正丁醇体积比为4:1)后振荡30 min，立即取出，将其放置于离心机中，4000 r/min离心20 min，去除变性蛋白层，取上清液。
所述步骤(5)醇沉步骤具体为：加入糖溶液3～4 倍体积的无水乙醇，0 ～ 4℃静置16 ～ 24h，离心收集沉淀。
所述步骤(6)干燥：将所得的多糖置于40-55℃条件下干燥18-24h，即得刺梨果渣活性多糖。
本发明的工艺参数是由以下正交试验（表1）确定，结果见表2。
由表2分析得出，影响多糖提取量的因素，主次顺序为粉碎目数＞超声浸提时间＞超声温度＞料液比。即提取时间为40 min，提取温度60 ℃，刺梨果渣与蒸馏水比例为1 g:15mL，刺梨果渣粉碎度为120目，所得多糖提取率为3.61 %。
本发明人对实施例的多糖做了以下测定，说明了本发明的有益效果：
1）DPPH自由基清除能力测定：
0.2 mmoL/L DPPH溶液的配置：准确称取DPPH，用70% 乙醇溶解后定容至50 mL用作储备液，然后吸取DPPH储备液2 mL，用70% 乙醇定容至100 mL。
移取样品液2 mL于10 mL试管中，向其中加入0.2 mmoL/L 的DPPH溶液2 mL，摇匀后避光存放30 min，让其充分反应，以70% 乙醇溶液作空白调零，在波长为517 nm处测定样品液的吸光值Ai；另一组加入2 mL样品液和2 mL 70% 乙醇溶液，测定吸光值Aj；加入2 mLDPPH溶液和2 mL 70% 乙醇溶液作为空白对照，在同波长下测吸光值Ao。根据公式计算清除率，清除率/%＝[1-( Ai-Aj)/ Ao] ×100%。
2）Fe3+ 还原力测定：
吸取样品液2.5 mL于离心管中，在离心管中依次加入0.2 moL/L磷酸盐缓冲液 (pH=6.6) 2.5 mL和1% 的铁氰化钾溶液2.5 mL，置于50 ℃水浴锅中加热反应20 min，取出后迅速放入冰水浴中冷却，向管中加入10% 的三氯乙酸溶液2.5 mL，摇匀后在3000 r/min条件下离心10 min。取5 mL上清液于试管中，加1 mL 1% 的三氯化铁溶液，摇匀后静置片刻，在波长为700 nm处测定吸光值。若样液吸光值越高，说明它的还原能力越强。
本发明通过将以上技术进行有效集成，显著提高了刺梨果渣多糖的提取率、缩短提取时间，降低提取成本，且刺梨果渣多糖的抗氧化活性高于刺梨果渣原样（对DPPH自由基清除率分别为82.8%±4.6% VS 78.7%±2.4%；还原能力分别为 0.97±0.07 VS 0.87±0.06），促进了刺梨资源的综合利用。
以上所述，仅是本发明的较佳实例而已，并非对本发明做任何形式上的限制，任何未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (7)

1.一种超声提取刺梨果渣的多糖，其特征在于：其制备方法包括以下步骤：
（1）原料处理：刺梨果榨汁后的刺梨果渣干燥至恒重后，粉碎制成刺梨果渣粉，低温密封保存；
（2）提取：称量2 g 刺梨果渣粉，加入蒸馏水浸泡，辅以超声波法提取刺梨果渣多糖，过滤后得提取液；
所述超声波法提取具体为：在果渣中按1:15～1:25 g/mL加水浸提30～40 min，功率为100 W，提取温度为50～ 60℃；
（3）去除脂质：将提取液浓缩，向多糖溶液中加入无水石油醚搅拌震荡使之成乳状，静置使溶液上下分层为止，去除石油醚层；重复以上操作3-4次，直到石油醚层无油状小液滴出现，表明脱脂完成；
(4) 去除蛋白：加入Sevag试剂充分溶解放置于摇床内振荡后离心，去除变性蛋白层，取上清液；将上清液重复上述步骤重复处理3-5次，直到没有白色的胶状物质产生，即无变性的蛋白质产生，得到脱蛋白的多糖液；
(5) 醇沉：滤液中加入无水乙醇充分搅拌、静置，收集沉淀；
(6) 干燥：将沉淀放在干燥滤纸的培养皿中进行干燥，既得刺梨果渣多糖。
2.如权利要求1所述的一种超声提取刺梨果渣的多糖，其特征在于：所述步骤(1)中，将刺梨果渣粉碎至80～120目。
3.如权利要求1所述的一种超声提取刺梨果渣的多糖，其特征在于：所述步骤(3)中浓缩具体为：将提取液经旋转蒸发仪浓缩至原体积1/4 ～ 1/6。
4.如权利要求1所述的一种超声提取刺梨果渣的多糖，其特征在于：所述步骤(3) 中去脂质具体为：加入3倍体积的无水石油醚搅拌震荡使之成乳状，静置3-4小时使溶液上下分层为止。
5.如权利要求1所述的一种超声提取刺梨果渣的多糖，其特征在于：所述步骤(4)去除蛋白具体为：按5:1加入Sevag试剂后振荡30 min，立即取出，将其放置于离心机中，4000 r/min离心20 min，去除变性蛋白层，取上清液；所述Sevag试剂为氯仿与正丁醇体积比4:1组成。
6.如权利要求1所述的一种超声提取刺梨果渣的多糖，其特征在于：所述步骤(5)醇沉步骤具体为：加入糖溶液3～4 倍体积的无水乙醇，0 ～ 4℃静置16 ～ 24h，离心收集沉淀。
7.如权利要求1所述的一种超声提取刺梨果渣的多糖，其特征在于：所述步骤(6)干燥：将所得的多糖置于40-55℃条件下干燥18-24h，即得刺梨果渣多糖。
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