CN108813635A - 一种分段超滤、完全收集的小分子肽口服液的制备方法 - Google Patents

一种分段超滤、完全收集的小分子肽口服液的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种分段超滤、完全收集的小分子肽口服液的制备方法，步骤为：以检疫合格可食用的新鲜动物脏器、血液、鱼类体组织等为原料，使用冻融超微粉碎工艺进行破膜粉碎，料浆进行巴氏灭活、离心得到原料清液。使用复合酶对离心出的原料固形物进行酶解，将原料清液与酶解液混合后进行分段超滤，将超滤截留的不同分子量的截留液与最终超滤得到的料液集中配制、完全收集。将完全收集的混合料液进行冷除菌，制得的无菌料液通过无菌管道输送至B+A无菌环境中进行灌封，制得产品。本发明通过分段超滤、完全收集的工艺，将不同分子量的料液配制成以小分子肽为主要成分的多组分复合料液，使产品有效成分保留更充分，营养更丰富，人体更易于吸收。

Description

一种分段超滤、完全收集的小分子肽口服液的制备方法
技术领域
本发明涉及保健食品制作方法技术领域，具体涉及一种分段超滤、完全收集的小分子肽口服液的制备方法。
背景技术
小分子肽产品具有提高人体免疫力、清除自由基、活化细胞、促进新陈代谢等多种很好的保健功能，最近若干年来在中国市场上得到广泛认同。
目前该技术领域生产的小分子肽产品主要有两类：
其一是固体形态小分子肽，制备工艺为：将动物组织经提取、水解，获取单一分子量的液体（GB31645-2018），再通过喷雾干燥等技术获取固体形态的小分子肽，添加辅料、抑菌剂，制成胶囊、颗粒剂等不同剂型的小分子肽产品。或将大豆等植物通过酶解、发酵等方法，获取单一分子量粉末状小分子肽（GB/T22492-2008），添加辅料、抑菌剂，制成胶囊、颗粒剂等不同剂型的小分子肽产品。
其二是液体形态小分子肽，制备工艺为：将动物组织经提取、水解，获取单一分子量的液体（GB31645-2018），添加纯化水稀释、121℃高温最终灭菌，制得小分子肽口服液。
本发明人通过对不同分子量提取液的研究分析证明，分子量的大小与产品有效成分的提取量正相关，与人体吸收度负相关。分子量越大的小分子肽，有效成分提取越多，但人体吸收度降低。分子量越小的小分子肽，人体吸收度越好，但对有效成分的截留越多。国内目前采用的小分子肽提取工艺，无法同时兼顾多组分复合料液的质量要求。本发明提取、配制的多组分复合料液，很好满足了不同人群对产品品质的要求。
为控制产品染菌，目前市场上同类产品广泛采取121℃灭菌30-45分钟的最终灭菌工艺。此工艺几乎完全破坏了产品的生物活性，严重影响产品质量。本发明采用巴氏灭活、无菌灌封工艺，可以有效解决最终灭菌工艺存在的问题。
发明内容
本发明提出了一种分段超滤、完全收集的小分子肽口服液的制备方法，解决了传统提取工艺无法同时满足多组分复合料液的质量要求的问题，为市场提供了一款高质量的新型小分子肽产品。
实现本发明的技术方案是：选取原料→清洗→冻融破膜粉碎→巴氏灭活→固液分离→固形物酶解→制得混合液→分段超滤→集中配制→无菌灌封。
一种分段超滤、完全收集的小分子肽口服液的制备方法，具体步骤如下：
（1）以动物肝脏、肾脏、脾脏、血液或鱼类体组织等为原料，加入纯化水进行冻融超微粉碎，得到破膜率95%以上的料浆；
（2）将步骤（1）得到的料浆进行巴氏灭活；
（3）将巴氏灭活后的料浆进入沉降式离心机进行固液分离，得到离心出的清液和离心出的固形物；
（4）使用复合酶对离心出的固形物进行酶解，酶解液体与步骤（3）离心出的清液混合得到原料液体；
（5）利用30KD超滤机对原料液体进行第一次超滤处理，截留分子量为3万道尔顿以上的液体弃用，收集分子量为3万道尔顿以下的料液暂存备用；
（6）利用10KD超滤机对分子量为3万道尔顿以下的料液做第二次超滤处理，截留分子量为1万道尔顿以上液体暂存备用，收集1万道尔顿以下的料液为第三次超滤的料液；
（7）利用6KD超滤机对分子量为1万道尔顿以下的料液做第三次超滤处理，截留分子量为6千道尔顿以上液体暂存备用，收集6千道尔顿以下的料液为第四次超滤的料液；
（8）利用2KD超滤机对分子量为6千道尔顿以下的料液做第四次超滤处理，截留分子量为2千道尔顿以上液体暂存备用，收集2千道尔顿以下的料液；
（9）将步骤（6）截留的备用料液、步骤（7）截留的备用料液、步骤（8）截留的备用料液，与2千道尔顿以下的料液调配成多组分复合料液；
（10）将步骤（9）得到的复合料液进行冷除菌，得到无菌复合料液，通过无菌管道输送，在无菌环境下进行灌装，得到小分子肽口服液。
所述步骤（1）中原料与水的质量比为1:3，采用乳化细度为2-50μm的多功能胶体磨对原料进行破膜粉碎。
所述步骤（1）中的破膜粉碎，需经过一次常温粗粉、三次液氮冻融细粉，最后一次冻融粉碎的料浆粒度控制在8μm以下。
将所述步骤（2）料浆控制在60±0.5℃条件下灭活12h。
将所述步骤（3）中的料浆温度降至40℃以下，使用转速为3000转/分钟的沉降式离心机，对料浆进行固液分离。
对所述步骤（3）离心出的固形物使用复合酶进行酶解，将得到的酶解液体与所述步骤（3）中的原料清液进行均匀混合，混合液体置于2-8℃间储存。
所述步骤（9）中全部截留的备用液与2千道尔顿以下的料液均匀混合。
所述步骤（9）中的多组分复合料液，通过0.22μm的滤膜进行冷除菌。
所述步骤（10）中的无菌环境，需满足国家2010年版GMP认证标准的B+A无菌环境。
鉴于动物细胞直径为10微米以上，且细胞膜有较强韧性，工艺规定，原料粉碎过程中，必须通过胶体磨动齿、定齿高速相对运动产生的强大剪切力以及小于10微米的齿间隙，借用冻融的帮助打破绝大部分的细胞膜，将原料液体通过分子量分段控制提取出不同分子量的液体，通过配制成为多组分复合料液，有效成分提取、保留更充分，营养成分更丰富，人体更易于吸收。
为更好保留原料的生物活性，动物脏器、血液或鱼类体组织等原料粉碎后制得的料浆，不能进行高温灭活处理。本产品采用了温度控制在60±0.5℃的巴氏灭活制备工艺，可以很好保留产品原料原有的生物活性。
为控制产品染菌，目前市场上同类产品大多采取传统的121℃灭菌30-45分钟的的最终灭菌工艺。鉴于此工艺几乎完全破坏了产品的生物活性，严重影响产品质量，本发明采取了冷除菌工艺，即将调制后的多组分复合料液通过0.22μm的滤膜进行冷除菌，灌封条件亦必须满足国家颁布的2010年版GMP认证标准下的B+A无菌灌封环境要求。具体做法为，首先建设符合国家2010年版GMP认证标准的无菌车间，生产前使用甲醛对车间进行彻底消毒除菌，如连续生产，每10天重复一次甲醛除菌。每天生产前还需要对车间进行臭氧消毒除菌。所有物料运行管道和物料接触的灌注器等，必须使用121℃蒸汽彻底灭菌，产品的灌封必须在此环境下完成。
本发明的有益效果是：
（1）本发明对原料进行超微冻融破膜粉碎，最大限度提取原料中的有效成分；
（2）本发明通过巴氏灭活处理后的料浆，保留了原料中的生物活性，通过0.22微米的滤膜无菌处理后的料液实施无菌灌封，不使用任何抑菌剂而控制染菌；
（3）通过分段超滤、完全采集的工艺，提取多段分子量复合的、以小分子肽为主要成分的多组分复合料液，既留取了分子量为1-3万道尔顿之间的具有免疫活性的小分子片段和补体，分子量在6千-1万道尔顿之间的转移因子，又提取了分子量小于1万道尔顿的多段小分子肽。使产品有效成分保留更充分，营养更丰富，人体更易于吸收；
（4）运用无菌灌封工艺，避免了抑菌剂的使用，提高了产品的内在品质；
（5）经此制备工艺提取的小分子肽产品，不仅具有提高人体免疫力、清除自由基、活化细胞、促进新陈代谢等多种很好的保健功能，更具有辅助和补充特异性抗体的靶向作用。
本发明工艺同样适用于以新鲜植物为原料的植物小分子肽的制备。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，本发明对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单展示。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图，都属于本发明保护的范围。
图1是本发明的破膜显微图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种分段超滤、集中配制、完全采集的小分子肽口服液的制备方法，步骤如下：
（1）选用多种可食用新鲜动物的肝脏为原料，按料水比1:3的比例，使用乳化细度为2-50微米的JM-LB140多功能胶体磨对原料进行破膜粉碎（一次常温粗粉、三次液氮冻融细粉，最后一次冻融粉碎粒度控制在8微米以下），破膜率控制在95%以上；
（2）将粉碎后的料浆装入巴氏灭菌罐，温度控制在60℃（正负0.5℃）灭活12小时；
（3）取出降温至40℃以下的料浆，使用转速为3000转/分钟的LSL-600沉降式离心机对原料进行固液分离，离心液体在2-8℃低温储罐中留置备用；
（4）使用复合酶对离心出的固形物进行酶解，酶解液体与步骤（3）离心出的清液混合得到原料液体；在2-8℃低温储罐中留置备用；
（5）利用30KD超滤机对原料液体进行第一次超滤处理，截留分子量为3万道尔顿以上的液体弃用，收集分子量为3万道尔顿以下的料液暂存备用；
（6）利用10KD超滤机对分子量为3万道尔顿以下的料液做第二次超滤处理，截留分子量为1万道尔顿以上液体暂存备用，收集1万道尔顿以下的料液为第三次超滤的料液；
（7）利用6KD超滤机对分子量为1万道尔顿以下的料液做第三次超滤处理，截留分子量为6千道尔顿以上液体暂存备用，收集6千道尔顿以下的料液为第四次超滤的料液；
（8）利用2KD超滤机对分子量为6千道尔顿以下的料液做第四次超滤处理，截留分子量为2千道尔顿以上液体暂存备用，收集2千道尔顿以下的料液；
（9）将分子量在1万道尔顿以下、6千道尔顿以上、2千道尔顿以上的备用料液，与2千道尔顿以下的料液调配成多组分复合料液；
（10）将调制后的混合液通过0.22微米的滤膜进行常温除菌，制得无菌料液，通过无菌管道输送至2010年版GMP认证标准下的B+A无菌环境中进行灌封，制得产品。
实施例2
一种分段超滤、集中配制、完全采集的小分子肽口服液的制备方法，以可食用新鲜动物的肾脏和脾脏为原料，制备方法同实施例1。
实施例3
一种分段超滤、集中配制、完全采集的小分子肽口服液的制备方法，以可食用新鲜动物的血液为原料，制备方法同实施例1。
实施例4
一种分段超滤、集中配制、完全采集的小分子肽口服液的制备方法，以可食用新鲜动物的鱼类体组织为原料，制备方法同实施例1。
实施例5
一种分段超滤、集中配制、完全采集的小分子肽口服液的制备方法，以可食用新鲜动物的肝脏和鱼类体组织为原料，制备方法同实施例1。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种分段超滤、完全收集的小分子肽口服液的制备方法，其特征在于具体步骤如下：
（1）以动物肝脏、肾脏、脾脏、血液或鱼类体组织为原料，加入纯化水进行冻融超微粉碎，得到破膜率95%以上的料浆；
（2）将步骤（1）得到的料浆进行巴氏灭活；
（3）将巴氏灭活后的料浆进入沉降式离心机进行固液分离，得到离心出的清液和离心出的固形物；
（4）使用复合酶对离心出的固形物进行酶解，酶解液体与步骤（3）离心出的清液混合得到原料液体；
（5）利用30KD超滤机对原料液体进行第一次超滤处理，截留分子量为3万道尔顿以上的液体弃用，收集分子量为3万道尔顿以下的料液暂存备用；
（6）利用10KD超滤机对分子量为3万道尔顿以下的料液做第二次超滤处理，截留分子量为1万道尔顿以上液体暂存备用，收集1万道尔顿以下的料液为第三次超滤的料液；
（7）利用6KD超滤机对分子量为1万道尔顿以下的料液做第三次超滤处理，截留分子量为6千道尔顿以上液体暂存备用，收集6千道尔顿以下的料液为第四次超滤的料液；
（8）利用2KD超滤机对分子量为6千道尔顿以下的料液做第四次超滤处理，截留分子量为2千道尔顿以上液体暂存备用，收集2千道尔顿以下的料液；
（9）将步骤（6）截留的备用料液、步骤（7）截留的备用料液、步骤（8）截留的备用料液，与2千道尔顿以下的料液调配成多组分复合料液；
（10）将步骤（9）得到的复合料液进行冷除菌，得到无菌复合料液，通过无菌管道输送，在无菌环境下进行灌装，得到小分子肽口服液。
2.根据权利要求1所述的分段超滤、完全收集的小分子肽口服液的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中原料与纯化水的质量比为1:3，采用乳化细度为2-50μm的多功能胶体磨对原料进行破膜粉碎。
3.根据权利要求1所述的分段超滤、完全收集的小分子肽口服液的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中的冻融超微粉碎，需经过一次常温粗粉、三次液氮冻融细粉，最后一次冻融粉碎的料浆粒度控制在8μm以下。
4.根据权利要求1所述的分段超滤、完全收集的小分子肽口服液的制备方法，其特征在于：将所述步骤（2）料浆控制在60±0.5℃条件下灭活12h。
5.根据权利要求1所述的分段超滤、完全收集的小分子肽口服液的制备方法，其特征在于：将所述步骤（3）中的料浆温度降至40℃以下，使用转速为3000转/分钟的沉降式离心机，对料浆进行固液分离。
6.根据权利要求1所述的分段超滤、完全收集的小分子肽口服液的制备方法，其特征在于：对所述步骤（3）离心出的固形物使用复合酶进行酶解，将得到的酶解液体与所述步骤（3）中的原料清液进行均匀混合，混合液体置于2-8℃储存。
7.根据权利要求1所述的分段超滤、完全收集的小分子肽口服液的制备方法，其特征在于：所述步骤（9）中全部截留的备用料液与2千道尔顿以下的料液均匀混合。
8.根据权利要求1所述的分段超滤、完全收集的小分子肽口服液的制备方法，其特征在于：所述步骤（9）的多组分复合料液，通过0.22μm的滤膜进行冷除菌。
9.根据权利要求1所述的分段超滤、完全收集的小分子肽口服液的制备方法，其特征在于：所述步骤（10）中的无菌环境，需满足国家2010年版GMP认证标准的B+A无菌环境。
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