CN108721368A - 一种杜仲饮片的炮制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种杜仲饮片的炮制方法，其特征在于：包括以下步骤：选择、清洗优质杜仲皮，置于发酵液中于30‑35摄氏度密闭发酵12‑18小时，将发酵后的杜仲皮冲洗干净后切片，然后经20‑30摄氏度低温干燥至含水量3％以下即得；所述发酵液是将复合发酵菌接种到培养基质中于30‑35摄氏度培养12‑15小时后即得，所述复合发酵菌是由米曲霉、纳豆芽孢杆菌、产朊假丝酵母按照3‑5:2‑3:1‑2的比例组成，复合发酵菌的接种量为发酵基质重量的0.5％‑1.5％。所述培养基质包含以下比例的成分：葡萄糖5‑15％，硫酸铵3‑5％，磷酸氢二钾2‑4％，余量为水。本发明所述的炮制方法，能够显著提高杜仲饮片中有效成分含量。

Description

一种杜仲饮片的炮制方法

技术领域

本发明属于中药饮片加工领域，尤其涉及一种杜仲饮片的炮制方法，可用于杜仲饮片的制备中。

背景技术

杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)，别名胶木、思仲、银丝树、扯丝皮等，为杜仲科落叶乔木，系名贵木本药材，是我国特有的一种经济树种。自古以来，杜仲以干燥树皮入药而著称药用杜仲，是中国名贵滋补药材，味甘，性温，归肝、肾、胃经，功效补益肝肾、强筋壮骨、调理冲任、固经安胎，用于治疗肾阳虚引起的腰腿痛或酸软无力、肝气虚引起的胞胎不固，阴囊湿痒等症。近代大量研究证明，杜仲游离氨基酸极少，含有的少量蛋白质，是和绝大多数食品类似的完全蛋白，即能够水解检出对人体必需的8种氨基酸，其中含有15种矿物元素，包括锌、铜、铁等微量元素，及钙、磷、钾、镁等宏量元素。同时，杜仲还具有清除体内垃圾，加强人体细胞物质代谢，防止肌肉骨骼老化，平衡人体血压，分解体内胆固醇，降低体内脂肪，恢复血管弹性，利尿清热，广谱抗菌，兴奋中枢神经，提高白血球药理作用。

进一步的研究表明，杜仲具有抗肿瘤、补肾、增强免疫等方面的作用，其抑癌、抗癌作用可能与其有效成分木脂素、苯丙素及环烯醚萜类化合物有关；杜仲水煎液可使实验动物血中嗜酸性粒细胞及淋巴细胞显著降低，血糖和血浆皮质醇含量升高，促进肝糖元堆积，具有一定的兴奋垂体－肾上腺皮质系统、增强肾上腺皮质功能的作用；杜仲水煎液对细胞免疫具有双向调节作用：既能激活单核巨噬细胞系统和腹腔巨噬细胞系统的吞噬活性，增强机体的非特异免疫功能，又能对迟发型超敏反应起抑制作用，能够有效增强人体免疫功能。近代，随着医药学的迅速发展和各种现代化检测技术的应用，杜仲的医疗保健作用有了更多更新的内容。与此同时，人们也开始了对杜仲综合应用的研究，研究证明杜仲叶中含有与杜仲皮一样的次生代谢物，如绿原酸、杜仲胶等，具有同样的降低血压、抗衰老、强身健体之功效。杜仲果实及种子也具有较高的药理价值，其果实中含有绿原酸、桃叶珊瑚甙、京尼平甙酸、松脂素双糖甙、多糖、氨基酸以及Zn、Mn、Cu、Fe、Ca、P、B、Mg、K等多种矿质元素，具有和杜仲皮相似的药理功能，并且无毒副作用；杜仲种仁含有丰富的α-亚麻酸等不饱和脂肪酸，其中α-亚麻酸含量达60％以上，具有显著降血脂、降血压和抑制血栓性疾病，预防心肌梗塞和脑梗塞等作用。

近年来，随着杜仲药用功效的不断开发、拓展，保健品种类的增多，人们对杜仲叶的研究和开发越来越重视。但是，杜仲生品在临床使用较少，大多数经盐炙后入药，杜仲经盐水炙时高温加热使其断丝，目的为破坏其硬质胶类成分杜仲胶，使得杜仲活性成分易于煎出，但高温同时也会造成其中其它活性成分如绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷的破坏，导致整体药效受到影响，温度过低则杜仲胶不易被破坏，断丝不够，松脂醇二葡萄糖苷不易被煎出，含量低。

因此，寻求一种活性成分能够有效煎出且未被破坏的杜仲饮片炮制方法对于本领域技术人员而言是一个亟需解决的问题。目前，如何通过多菌种发酵技术来提高杜仲饮片中有效成分的含量，尚未有技术研究或成果报道。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种杜仲饮片的炮制方法，可用于杜仲饮片制备中，能够大大提高杜仲饮片中有效成分含量。

本发明通过以下技术方案得以实现。

本发明提供一种杜仲饮片的炮制方法，其特征在于，包括以下步骤：选择、清洗优质杜仲皮，置于发酵液中于30-35摄氏度密闭发酵12-18小时，将发酵后的杜仲皮冲洗干净后切片，然后经20-30摄氏度低温干燥至含水量3％以下即得；所述发酵液是将复合发酵菌接种到培养基质中于30-35摄氏度培养12-15小时后即得，所述复合发酵菌是由米曲霉、纳豆芽孢杆菌、产朊假丝酵母按照3-5:2-3:1-2的比例组成。

进一步地，所述复合发酵菌的接种量为发酵基质重量的0.5％-1.5％。

进一步地，所述培养基质包含以下比例的成分：葡萄糖5-15％，硫酸铵3-5％，磷酸氢二钾2-4％，余量为水。

进一步地，所述复合发酵菌是由米曲霉、纳豆芽孢杆菌、产朊假丝酵母按照4:3:2的比例组成。

进一步地，所述复合发酵菌中各菌种的活菌数量分别为：米曲霉不小于1×10⁷cfu/mL，纳豆芽孢杆菌不小于5×10⁷cfu/mL，产朊假丝酵母不小于1×10⁸cfu/mL。

进一步地，所述复合发酵菌中所用单一菌种来自于各菌种的市售单一活菌制剂，或者使用经微生物学鉴定为相应菌种的任意已知的菌株通过常规培养、扩繁而制备的菌剂。

本发明的有益效果：

本发明通过特异性选择三种菌种组合作为杜仲发酵用复合微生物菌剂，对杜仲进行发酵后加以低温干燥工艺，能够显著提高杜仲饮片中有效成分含量。试验证实，多菌种组合的发酵剂比使用单一菌种的发酵剂呈现出明显的协同作用，多菌种发酵后的杜仲饮片中有效成分含量比各单一菌种发酵结果显著提高，显示出这三种菌种之间具有良好的协同增效作用，获得了意料不到的进步效果。这可能是与多菌种发酵时三种菌种在发酵过程中能够相互促进菌种活性有关。此外，通过低温干燥工艺也减少了杜仲有效成分的损失，提高了杜仲饮片中有效成分的含量。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明的技术方案做进一步描述，但以下具体实施例不用于限制本发明。凡在本发明精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

实施例1

一种杜仲饮片的炮制方法，其特征在于，包括以下步骤：选择、清洗优质杜仲皮，置于发酵液中于33摄氏度密闭发酵15小时，将发酵后的杜仲皮冲洗干净后切片，然后经25摄氏度低温干燥至含水量3％以下即得；所述发酵液是将复合发酵菌接种到培养基质中于33摄氏度培养13小时后即得，所述复合发酵菌是由米曲霉、纳豆芽孢杆菌、产朊假丝酵母按照4：3：2的比例组成，所述复合发酵菌的接种量为发酵基质重量的1.0％，所述培养基质包含以下比例的成分：葡萄糖10％，硫酸铵4％，磷酸氢二钾3％，余量为水。

所述复合发酵菌中各菌种的活菌数量分别为：米曲霉不小于1×10⁷cfu/mL，纳豆芽孢杆菌不小于5×10⁷cfu/mL，产朊假丝酵母不小于1×10⁸cfu/mL；所述复合发酵菌中所用单一菌种来自于各菌种的市售单一活菌制剂。

实施例2

一种杜仲饮片的炮制方法，其中除了所用发酵菌仅包含米曲霉之外，其余步骤与参数均同于实施例1。

实施例3

一种杜仲饮片的炮制方法，其中除了所用发酵菌仅包含纳豆芽孢杆菌之外，其余步骤与参数均同于实施例1。

实施例4

一种杜仲饮片的炮制方法，其中除了所用发酵菌仅包含产朊假丝酵母之外，其余步骤与参数均同于实施例1。

实施例5

一种杜仲饮片的炮制方法，其中除了所用发酵菌是由米曲霉、纳豆芽孢杆菌按照4：3的比例组成之外，其余步骤与参数均同于实施例1。

实施例6

一种杜仲饮片的炮制方法，其中除了所用发酵菌是由米曲霉、产朊假丝酵母按照4：2的比例组成之外，其余步骤与参数均同于实施例1。

实施例7

一种杜仲饮片的炮制方法，其中除了所用发酵菌是由纳豆芽孢杆菌、产朊假丝酵母按照3：2的比例组成之外，其余步骤与参数均同于实施例1。

实施例8

随机选择新鲜的杜仲树皮80kg，随机分成8组，每组10kg，前7组分别按照实施例1-7的炮制方法进行制备，第8组按照现有杜仲加工中常用的食盐水浸泡后进行炒制的方法制备作为对照组，这8组制备的杜仲饮片的含水量均控制在3％。从这8组中随机抽样检测样品中的绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷的含量，结果可参见下表1。

绿原酸的检测方法可采用高效液相色谱法对成品中绿原酸含量进行检测。其具体步骤为：

1)供试品溶液制备：取剪碎的杜仲样品2g，置锥形瓶中，加50％甲醇溶液40ml超声30min，过滤，将滤液浓缩干燥，用70％甲醇溶液定容于10ml容量瓶中，摇匀，即得供试品溶液。

2)对照品溶液制备及标准曲线绘制：精密称取甘草酸对照品适量，用50％甲醇溶液定容至10ml容量瓶中，配制成0.4mg/ml的对照品溶液，精密吸取对照品溶液0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0ml分别置于10ml容量瓶中，加甲醇醇至刻度，摇匀，取10μl注入高效液相色谱仪中进行检测，以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，计算得到标准曲线回归方程为：y＝0.9901x+5.9614(R²＝0.9996)；

3)色谱条件：色谱柱：C18反相柱，流动相：甲醇：水(28:72)，流速：1ml/min，柱温：25℃，检测波长：327nm，进样量：10ml。

松脂醇二葡萄糖苷的检测方法可采用2010版中国药典中公开的HPLC法。具体步骤如下：松脂醇二葡萄糖苷标准曲线制作方法：精密称取脂醇二葡萄糖苷对照品适量，用甲醇定容至10ml容量瓶中，配制成0.509mg/ml的对照品溶液，精密吸取对照品溶液0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0ml分别置于10ml容量瓶中，加甲醇醇至刻度，摇匀，取10μl注入高效液相色谱仪中进行检测，以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，计算得到标准曲线回归方程为：y＝10^{- 6}x-0.108(R²＝0.9981)。

上述检测方法中，所使用的药品、试剂、实验仪器如下：松脂醇二葡萄糖苷对照品(中检所提供)，绿原酸对照品(中检所提供)；Agilent infinity 1100液相色谱仪(Agilent,USA)。

表1不同炮制方法制得的杜仲饮片中有效成分的含量

组别	绿原酸％	松脂醇二葡萄糖苷％
			实施例1	0.0743	0.4752
实施例2	0.0597	0.4483
			实施例3	0.0586	0.4469
实施例4	0.0582	0.4451
			实施例5	0.0671	0.4669
实施例6	0.0652	0.4662
			实施例7	0.0658	0.4655
对照组	0.0531	0.4324

由上表1中的数据可知，本发明所述炮制方法能够显著提高杜仲饮片中绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷的含量，显示出发酵可以促进杜仲饮片中有效成分的溶出。并且，本发明通过研究发现，实施例1中采用三种菌种组合发酵的效果要显著优于单一菌种或两种菌种组合发酵的结果，这也显示出三种菌种之间具有协同互生的效应，可能与三种菌种之间可以相互促进菌种活性并产生生物酶进而有效释放杜仲饮片中的活性成分。

以上显示和描述了本发明的具体方案和主要特征，并通过试验数据在一定程度上体现了本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的具体方案，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (6)

1.一种杜仲饮片的炮制方法，其特征在于：包括以下步骤：选择、清洗优质杜仲皮，置于发酵液中于30-35摄氏度密闭发酵12-18小时，将发酵后的杜仲皮冲洗干净后切片，然后经20-30摄氏度低温干燥至含水量3％以下即得；所述发酵液是将复合发酵菌接种到培养基质中于30-35摄氏度培养12-15小时后即得，所述复合发酵菌是由米曲霉、纳豆芽孢杆菌、产朊假丝酵母按照3-5:2-3:1-2的比例的组成。

2.如权利要求1所述的杜仲饮片的炮制方法，其特征在于，所述复合发酵菌的接种量为发酵基质重量的0.5％-1.5％。

3.如权利要求1所述的杜仲饮片的炮制方法，其特征在于，所述培养基质包含以下比例的成分：葡萄糖5-15％，硫酸铵3-5％，磷酸氢二钾2-4％，余量为水。

4.如权利要求1所述的杜仲饮片的炮制方法，其特征在于，所述复合发酵菌是由米曲霉、纳豆芽孢杆菌、产朊假丝酵母按照4:3:2的比例组成。

5.如权利要求1所述的杜仲饮片的炮制方法，其特征在于，所述复合发酵菌中各菌种的活菌数量分别为：米曲霉不小于1×10⁷cfu/mL，纳豆芽孢杆菌不小于5×10⁷cfu/mL，产朊假丝酵母不小于1×10⁸cfu/mL。

6.如权利要求1所述的杜仲饮片的炮制方法，其特征在于，所述复合发酵菌中所用单一菌种来自于各菌种的市售单一活菌制剂，或者使用经微生物学鉴定为相应菌种的任意已知的菌株通过常规培养、扩繁而制备的菌剂。