CN108707595A - 一种提高真菌产纤维素酶产量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种提高真菌产纤维素酶产量的方法，包括以下步骤：S1，提供产纤维素酶的真菌，收集该真菌的孢子；S2，将该孢子接种于种子培养基中培养，获得种子；S3，将二甲基甲酰胺和/或二甲基亚砜添加到发酵培养基中，将该种子接种于含二甲基甲酰胺和/或二甲基亚砜的发酵培养基中培养，使得该真菌产纤维素酶。该方法提高了真菌产纤维素酶的产量且操作较为便捷，成本较低，效率较高。

Description

一种提高真菌产纤维素酶产量的方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种提高真菌产纤维素酶产量的方法。
背景技术
纤维素酶是一种重要的资源，已广泛运用于各个行业，如食品、纺织、酿酒、饲料、洗涤、造纸、纺织、石油勘探、中药成分提取等。特别在纤维素生物质资源化的工业技术中作用日益凸显。纤维素是自然界最丰富的可再生能源，因此，纤维素的利用与转化对于解决目前世界能源危机、粮食短缺、环境污染等问题具有十分重要的意义。纤维素的酶水解是纤维素生物炼制的主要瓶颈之一，纤维素的酶解工艺目前面临的主要问题是纤维素酶的用量大、成本较高。因而提高纤维素酶的产量，降低纤维素酶的生产成本是纤维素生物炼制亟待解决的问题。
纤维素酶来源广泛，细菌、放线菌、丝状真菌等均能产生纤维素酶。其中，真菌所产的纤维素酶酶系结构较全，分泌量大，且多为胞外酶，提取纯化较容易，产酶量较高，成本相对较低，是现在工业的主要生产菌种。研究较多的有木霉属、曲霉属、青霉属、根霉属和漆斑霉属。
目前主要局限于利用传统的方法来提高纤维素酶的产量，包括通过物理或者化学手段诱变菌种，优化发酵培养基，以及利用分子生物学的手段改造工程菌种等，这些手段在提高纤维素酶酶活方面取得了一定的成果。但利用传统方法提高纤维素酶的产量，操作较为复杂，成本较高，效率较低。
发明内容
为解决目前纤维素酶产量低的问题，本发明提供一种提高真菌产纤维素酶产量的方法。
根据本发明提供的一种提高真菌产纤维素酶产量的方法，包括以下步骤：S1，提供产纤维素酶的真菌，收集该真菌的孢子；S2，将该孢子接种于种子培养基中培养，获得种子；S3，将二甲基甲酰胺和/或二甲基亚砜添加到发酵培养基中，将该种子接种于含二甲基甲酰胺和/或二甲基亚砜的发酵培养基中培养，使得该真菌产纤维素酶。
优选的，该发酵培养基包括碳源、氮源、无机盐、生长因子和水；其中碳源包括：葡萄糖、乳糖、纤维素、槐糖、木糖、木聚糖、植物生物质或玉米浆中的至少一种；该氮源包括：无机物铵盐、硝酸盐和含氮有机物中的至少一种。
优选的，该碳源包括：葡萄糖、乳糖、纤维素、槐糖、木糖、木聚糖、植物生物质或玉米浆中的至少一种，该氮源包括：菌糠、蛋白胨、酵母膏、尿素、氯化铵或(NH4)2SO4中的至少一种。
优选的，该无机盐包括CaCl2、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O、MnSO4·H2O、ZnSO4·7H2O和CoCl2·6H2O中的至少一种。
优选的，该生长因子由玉米浆、酵母膏、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O和MnSO4·H2O中的至少一种提供。
优选的，该产纤维素酶的真菌包括木霉属、青霉属和/或曲霉属。
优选的，该木霉属包括瑞氏木霉菌株、拟康木霉菌株和里氏木霉菌株。
优选的，该曲霉属包括黑曲霉菌株。
优选的，该青霉属包括斜卧青霉菌株。
优选的，该步骤S3中，将包括二甲基甲酰胺和/或二甲基亚砜的污水、废水或合成革水添加到发酵培养基中。
优选的，该步骤S3中，该二甲基甲酰胺和/或二甲基亚砜与发酵培养基的体积比介于0.5-2：100。
优选的，该步骤S3中，该二甲基甲酰胺和/或二甲基亚砜与发酵培养基的体积比介于0.8-1.2：100。
总之，本发明通过在发酵培养基中添加二甲基甲酰胺及其类似物，提高了真菌产纤维素酶的产量。并且该方法操作较为便捷，成本较低，效率较高。
附图说明
图1实施例1-8的粗酶液的电泳图；
图2实施例1-4的粗酶液的纤维素相对酶活测试结果示意图；
图3实施例1,3及实施例5-8的纤维素酶的相对酶活测试结果示意图；
图4实施例9的相对滤纸酶活FPA测试结果示意图；
图5实施例10的相对滤纸酶活FPA测试结果示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明的具体实施方式，对本发明的技术方案进行详细的说明，但如下实施例仅是用以理解本发明，而不能限制本发明，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合，本发明可以由权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。
实施例1
根据本发明提供的一种提高真菌产纤维素酶酶活的方法，包括以下步骤：
S1，提供里氏木霉Rut-C30菌种的孢子液。具体该步骤为：将里氏木霉菌株Rut-C30在土豆培养基(PDA)平板上接种，在28℃下生长4天，使用本领域已知的方法，收集孢子，在无菌水中稀释，使孢子液中孢子的浓度为107-108个/ml。
S2，将孢子接种于种子培养基中，获得种子。具体在本实施例中，该步骤包括：将步骤S1中的孢子接种于种子培养基中，28℃、220rpm振荡培养30小时，获得种子。其中，种子培养基包括：葡萄糖15g/L、玉米浆20g/L、KH2PO4 15g/L、(NH4)2SO4 5g/L、CaCl2 0.5g/L、MgSO4·7H2O 1g/L、FeSO4·7H2O5mg/L、MnSO4·H2O 1.6mg/L、ZnSO4·7H2O 1.4mg/L、CoCl2·6H2O 2mg/L。
S3，将种子接种于发酵培养基中，使种子与发酵培养基的体积比为1：10，28℃、220rpm振荡培养4天，离心取上清液，获得第一对照组粗酶液。具体在本实施例中，发酵培养基包括：葡萄糖5g/L、乳糖37g/L、玉米浆27g/L、KH2PO4 6g/L、(NH4)2SO4 5g/L、CaCl2 0.5g/L、MgSO4·7H2O 1g/L、FeSO4·7H2O5mg/L、MnSO4·H2O 1.6mg/L、ZnSO4·7H2O 1.4mg/L、CoCl2·6H2O 2mg/L。
将得到的第一对照组粗酶液进行SDS-PAGE蛋白电泳，以第三天的实验结果为例，如图1第二列所示，是发酵培养基里氏木霉Rut-C30菌种第一对照组的蛋白表达量。在65kDa、50kDa处分别有表示pNPC外切酶活CBHI、CMCNa内切酶活的EGLI条带。
将得到的粗酶液进行CMCNa内切酶活、pNPC外切酶活、滤纸酶活和半纤维素酶酶活测定。以第三天测得的CMCNa内切酶活、pNPC外切酶活、滤纸酶活FPA和半纤维素酶活均定义为100％。
实施例2
实施例2与实施例1类似，其区别在于，步骤S3为，将种子接种于含二甲基甲酰胺的发酵培养基中，使种子与含二甲基甲酰胺的发酵培养基的体积比为1：10，28℃、220rpm振荡培养4天，离心取上清液，获得粗酶液。具体地，在本实施例中，含二甲基甲酰胺的发酵培养基通过将二甲基甲酰胺添加到发酵培养基中，并使二甲基甲酰胺和发酵培养基的体积比为0.5：100。其中，发酵培养基包括：葡萄糖5g/L、乳糖37g/L、玉米浆27g/L、KH2PO4 6g/L、(NH4)2SO4 5g/L、CaCl2 0.5g/L、MgSO4·7H2O 1g/L、FeSO4·7H2O 5mg/L、MnSO4·H2O 1.6mg/L、ZnSO4·7H2O 1.4mg/L、CoCl2·6H2O 2mg/L。
将得到的粗酶液进行SDS-PAGE蛋白电泳。以第三天的实验结果为例，如图1第三列所示，本实施例提供的含二甲基甲酰胺(DMF)的发酵培养基提高了里氏木霉Rut-C30菌种的蛋白表达量。
将得到的粗酶液进行CMCNa内切酶活、pNPC外切酶活、滤纸酶活和半纤维素酶酶活测定，以第三天的实验结果为例，如图2所示，CMCNa内切酶活相比第一对照组提高了约45％，pNPC外切酶活相比第一对照组提高了约222％，滤纸酶活FPA相比第一对照组提高了约35％，半纤维素酶活相比第一对照组提高了约33％。说明本实施例提供的含二甲基甲酰胺的发酵培养基提高了里氏木霉的CMCNa内切酶、pNPC外切酶、滤纸酶活FPA和半纤维素酶的活力，这也就提高了纤维素酶的产量。
实施例3
实施例3与实施例2类似，其区别在于，步骤S3中含二甲基甲酰胺的发酵培养基中通过将二甲基甲酰胺添加到发酵培养基中，并使二甲基甲酰胺和发酵培养基的体积比为1：100。
将得到的粗酶液进行SDS-PAGE蛋白电泳，以第三天的实验结果为例，如图1第4列所示，采用本实施例提供的含二甲基甲酰胺的发酵培养基提高了里氏木霉Rut-C30的蛋白表达量。
将得到的粗酶液分别进行CMCNa内切酶活、pNPC外切酶活、滤纸酶活和半纤维素酶酶活测定。以第三天的实验结果为例，如图2所示，CMCNa内切酶活相比第一对照组提高了约60％，pNPC外切酶活相比第一对照组提高了约287％，滤纸酶活FPA相比第一对照组提高了约45％，半纤维素酶活相比第一对照组提高了约50％。说明本实施例提供的含二甲基甲酰胺的发酵培养基提高了里氏木霉的CMCNa内切酶、pNPC外切酶、滤纸酶活FPA和半纤维素酶的活力，这也就提高了纤维素酶的产量。
实施例4
实施例4与实施例2类似，其区别在于，步骤S3中含二甲基甲酰胺的发酵培养基中通过将二甲基甲酰胺添加到发酵培养基中，并使二甲基甲酰胺和发酵培养基的体积比为2：100。
将得到的粗酶液进行SDS-PAGE蛋白电泳，以第三天的实验结果为例，如图1第5列所示，结果表明采用本实施例提供的含二甲基甲酰胺的发酵培养基提高了里氏木霉Rut-C30的蛋白表达量。
将得到的粗酶液分别进行CMCNa内切酶活、pNPC、滤纸酶活和半纤维素酶酶活测定。以第三天的实验结果为例，如图2所示，CMCNa内切酶活相比第一对照组提高了约39％，pNPC外切酶活相比第一对照组提高了约237％，滤纸酶活FPA相比第一对照组提高了约24％，半纤维素酶活相比第一对照组提高了约25％。说明本实施例提供的含二甲基甲酰胺的发酵培养基提高了里氏木霉的CMCNa内切酶、pNPC外切酶、滤纸酶活FPA和半纤维素酶的活力，这也就提高了纤维素酶的产量。
实施例5
实施例5与实施例2类似，其区别在于，步骤S3中，含二甲基甲酰胺的发酵培养基通过在发酵培养基中添加二甲基甲酰胺废水形成，其中二甲基甲酰胺与发酵培养基体积比为1：100。
将得到的各个粗酶液进行SDS-PAGE蛋白电泳，以第三天的实验结果为例，如图1第6列所示，结果表明采用本实施例提供的含二甲基甲酰胺的发酵培养基提高了里氏木霉Rut-C30的蛋白表达量。
将得到的各个粗酶液分别进行CMCNa内切酶活、pNPC外切酶活、滤纸酶活和半纤维素酶酶活测定。以第三天为例，结果如图3所示，本实施例提供的含二甲基甲酰胺废水的发酵培养基提高了里氏木霉的CMCNa内切酶、pNPC外切酶、滤纸酶活FPA和半纤维素酶的活力，这也就提高了纤维素酶的产量。
实施例6
实施例6与实施例2类似，其区别在于，步骤S3中，含二甲基甲酰胺的发酵培养基通过在发酵培养基中添加二甲基甲酰胺污水形成，其中，二甲基甲酰胺与发酵培养基中的体积比为1：100。
将得到的各个粗酶液进行SDS-PAGE蛋白电泳，以第三天的实验结果为例，如图1第7列所示，结果表明采用本实施例提供的含二甲基甲酰胺的发酵培养基提高了里氏木霉Rut-C30的蛋白表达量。
将得到的各个粗酶液分别进行CMCNa内切酶活、pNPC外切酶活、滤纸酶活和半纤维素酶酶活测定。以第三天为例，结果如图3所示，本实施例提供的含二甲基甲酰胺废水的发酵培养基提高了里氏木霉的CMCNa内切酶、pNPC外切酶、滤纸酶活FPA和半纤维素酶的活力，这也就提高了纤维素酶的产量。
实施例7
实施例7与实施例2类似，其区别在于，步骤S3中，含二甲基甲酰胺污水的发酵培养基通过在发酵培养基中添加合成革废水，并使二甲基甲酰胺在发酵培养基中的体积比为1：100形成。
将得到的各个粗酶液进行SDS-PAGE蛋白电泳，以第三天的实验结果为例，如图1第8列所示，结果表明采用本实施例提供的含二甲基甲酰胺的发酵培养基提高了里氏木霉Rut-C30的蛋白表达量。
将得到的各个粗酶液分别进行CMCNa内切酶活、pNPC外切酶活、滤纸酶活和半纤维素酶酶活测定。以第三天为例，结果如图3所示，本实施例提供的含二甲基甲酰胺废水的发酵培养基提高了里氏木霉的CMCNa内切酶、pNPC外切酶、滤纸酶活FPA和半纤维素酶的活力，这也就提高了纤维素酶的产量。
实施例8
实施例8与实施例1类似，其区别在于，步骤S3为，将种子接种于含二甲基亚砜的发酵培养基中，使种子与含二甲基亚砜(DMSO)的发酵培养基的体积比为1:100，28℃，220rpm振荡培养4天，离心取上清液，获得粗酶液。具体地，在本实施例中，含二甲基亚砜的发酵培养基通过在发酵培养基中添加二甲基亚砜，并使二甲基亚砜与发酵培养基中的体积比为1:100形成。其中，发酵培养基包括：葡萄糖5g/L、乳糖37g/L、玉米浆27g/L、KH2PO4 6g/L、(NH4)2SO4 5g/L、CaCl2 0.5g/L、MgSO4·7H2O 1g/L、FeSO4·7H2O 5mg/L、MnSO4·H2O 1.6mg/L、ZnSO4·7H2O 1.4mg/L、CoCl2·6H2O 2mg/L。
将得到的各个粗酶液进行SDS-PAGE蛋白电泳，以第三天的实验结果为例，如图1第9列所示，结果表明采用本实施例提供的含二甲基甲酰胺的发酵培养基提高了里氏木霉的蛋白表达量，这也就提高了纤维素酶的产量。
将得到的各个粗酶液分别进行CMCNa内切酶活、pNPC外切酶活、滤纸酶活和半纤维素酶酶活测定。以第三天为例，结果如图3所示，本实施例提供的含二甲基甲酰胺废水的发酵培养基提高了里氏木霉的CMCNa内切酶、pNPC外切酶、滤纸酶活FPA和半纤维素酶的活力，这也就提高了纤维素酶的产量。
实施例9
实施例9与实施例3类似，区别在于，步骤S1，分别提供里氏木霉菌株QM6a、QM9414、PC-3-7、RL-P37和Rut-C30的孢子液。具体该步骤为：将里氏木霉菌株QM6a、QM9414、PC-3-7、RL-P37和Rut-C30分别在在各土豆培养基(PDA)平板上接种，在28℃生长4天，使用本领域已知的方法，分别收集孢子，在无菌水中稀释，至各孢子液中孢子的浓度为107-108个/ml。
S2，将里氏木霉菌株QM6a、QM9414、PC-3-7、RL-P37和Rut-C30对应的各孢子液分别接种于种子培养基中培养，获各菌株对应的种子。具体在本实施例中，该步骤包括：将步骤S1中将里氏木霉菌株QM6a、QM9414、PC-3-7、RL-P37和Rut-C30对应的各孢子液分别接种于种子培养基中，28℃，220rpm振荡培养30小时，获各菌株对应的种子。其中，种子培养基包括：葡萄糖15g/L，玉米浆20g/L，KH2PO4 15g/L，(NH4)2SO4 5g/L，CaCl2 0.5g/L，MgSO4·7H2O1g/L，FeSO4·7H2O 5mg/L，MnSO4·H2O 1.6mg/L，ZnSO4·7H2O 1.4mg/L，CoCl2·6H2O2mg/L。
S3，将里氏木霉菌株QM6a、QM9414、PC-3-7、RL-P37和Rut-C30对应的各种子分别接种于含二甲基甲酰胺的发酵培养基中，使种子与含二甲基甲酰胺的发酵培养基的体积比为1：10，28℃，220rpm振荡培养4天，离心取上清液，获得实验组粗酶液。同时，也将里氏木霉菌株QM6a、QM9414、PC-3-7、RL-P37和Rut-C30对应的各种子分别接种于不含二甲基甲酰胺的发酵培养基中，使种子与发酵培养基的体积比为1：10，28℃，220rpm振荡培养4天，离心取上清液，获得第二对照组粗酶液。
具体地，本实施例提供的发酵培养基包括：葡萄糖5g/L、乳糖37g/L、玉米浆27g/L、KH2PO4 6g/L、(NH4)2SO4 5g/L、CaCl2 0.5g/L、MgSO4·7H2O 1g/L、FeSO4·7H2O 5mg/L、MnSO4·H2O 1.6mg/L、ZnSO4·7H2O 1.4mg/L、CoCl2·6H2O2mg/L。含二甲基甲酰胺的发酵培养基通过将二甲基甲酰胺添加到发酵培养基中，并使二甲基甲酰胺与发酵培养基的体积比为1％。
将得到的里氏木霉菌株QM6a、QM9414、PC-3-7、RL-P37和Rut-C30的各个第二对照组粗酶液进行滤纸酶活测定。以第三天测得的滤纸酶活FPA表达量均定义为100％。
将得到的里氏木霉菌株QM6a、QM9414、PC-3-7、RL-P37和Rut-C30对应的各实验组粗酶液进行滤纸酶活测定。。以第三天的实验结果为例，如图4所示，里氏木霉Rut-C30实验组的滤纸酶活相比第二对照组提高了约45％，里氏木霉QM6a实验组的滤纸酶活相比第二对照组提高了约24％，里氏木霉QM9414实验组的滤纸酶活相比第二对照组提高了约30％，里氏木霉PC-3-7实验组的滤纸酶活相比第二对照组提高了约26％，里氏木霉FL-R37实验组的滤纸酶活相比第二对照组提高了约49％。说明采用本实施例提供的含二甲基甲酰胺的发酵培养基，提高了不同里氏木霉菌株的滤纸酶活，这也就提高了纤维素酶的产量。
实施例10
实施例10与实施例1类似，区别在于，步骤S1，分别提供瑞氏木霉、斜卧青霉、拟康木霉和黑曲霉菌株的孢子液。具体该步骤为：将瑞氏木霉、斜卧青霉、拟康木霉和黑曲霉菌株分别在土豆培养基(PDA)平板上接种，在28℃生长4天，使用本领域已知的方法，收集孢子，在无菌水中稀释，至各孢子液中孢子的浓度为107-108个/ml。
S2，将瑞氏木霉、斜卧青霉、拟康木霉和黑曲霉菌株的孢子分别接种于种子培养基中，获得相应的种子。具体在本实施例中，该步骤包括：将步骤S1中的各孢子分别接种于种子培养基中，28℃，220rpm振荡培养30小时，获得对应的种子。其中，种子培养基包括：葡萄糖15g/L、玉米浆20g/L、KH2PO415g/L、(NH4)2SO4 5g/L、CaCl2 0.5g/L、MgSO4·7H2O 1g/L、FeSO4·7H2O 5mg/L、MnSO4·H2O 1.6mg/L、ZnSO4·7H2O 1.4mg/L、CoCl2·6H2O 2mg/L。
S3，将瑞氏木霉、斜卧青霉、拟康木霉和黑曲霉菌株的种子分别接种于含二甲基甲酰胺的发酵培养基中，使种子与含二甲基甲酰胺的发酵培养基的体积比为1：10，28℃，220rpm振荡培养4天，离心取上清液，获得瑞氏木霉、斜卧青霉、拟康木霉和黑曲霉菌株对应的实验组粗酶液。同时也将瑞氏木霉、斜卧青霉、拟康木霉和黑曲霉菌株的种子分别接种于不含二甲基甲酰胺的发酵培养基中，使种子与发酵培养基的体积比为1：10，28℃，220rpm振荡培养4天，离心取上清液，获得瑞氏木霉、斜卧青霉、拟康木霉和黑曲霉菌株对应的第三对照组粗酶液。具体在本实施例中，发酵培养基包括：葡萄糖5g/L、乳糖37g/L、玉米浆27g/L、KH2PO4 6g/L、(NH4)2SO4 5g/L、CaCl20.5g/L、MgSO4·7H2O 1g/L、FeSO4·7H2O 5mg/L、MnSO4·H2O 1.6mg/L、ZnSO4·7H2O 1.4mg/L、CoCl2·6H2O 2mg/L。含二甲基甲酰胺的发酵培养基通过将二甲基甲酰胺添加到发酵培养基中，并使二甲基甲酰胺与发酵培养基的体积比为1％。
将得到供瑞氏木霉、斜卧青霉、拟康木霉和黑曲霉菌株对应的各个第三对照组粗酶液进行滤纸酶活测定。以第三天测得的滤纸酶活FPA表达量均定义为100％。
将得到供瑞氏木霉、斜卧青霉、拟康木霉和黑曲霉菌株对应的各实验组粗酶液分别进行滤纸酶活测定。以第三天的实验结果为例，如图5所示。瑞氏木霉T.rubrum的滤纸酶活相比第三对照组提高了约45％，斜卧青霉P.decumbens的滤纸酶活相比第三对照组提高了约24％，斜卧青霉T.koraiensis的滤纸酶活相比第三对照组提高了约30％，黑曲霉A.niger的滤纸酶活相比第三对照组提高了约26％，如图5所示。说明采用本实施例提供的含二甲基甲酰胺的发酵培养基，提高了不同产纤维素酶菌株的滤纸酶活FPA表达量，这也就提高了纤维素酶的产量。
以上所述的，仅为本发明的较佳实施例，并非用以限定本发明的范围，本发明的上述实施例还可以做出各种变化。即凡是依据本发明的权利要求书及说明书内容所作的简单、等效变化与修饰，皆落入本发明的权利要求保护范围。本发明未详尽描述的均为常规技术内容。

Claims (12)

1.一种提高真菌产纤维素酶产量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1，提供产纤维素酶的真菌，收集该真菌的孢子；
S2，将所述孢子接种于种子培养基中培养，获得种子；
S3，将二甲基甲酰胺和/或二甲基亚砜添加到发酵培养基中，将所述种子接种于含二甲基甲酰胺和/或二甲基亚砜的发酵培养基中培养，使得该真菌产纤维素酶、木聚糖酶。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基包括碳源、氮源、无机盐、生长因子和水；其中碳源包括：葡萄糖、乳糖、纤维素、槐糖、木糖、木聚糖、植物生物质或玉米浆中的至少一种；所述氮源包括：无机物铵盐、硝酸盐和含氮有机物中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述碳源包括：葡萄糖、乳糖、纤维素、槐糖、木糖、木聚糖、植物生物质或玉米浆中的至少一种，所述氮源包括：菌糠、蛋白胨、酵母膏、尿素、氯化铵或(NH4)2SO4中的至少一种。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述无机盐包括CaCl2、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O、MnSO4·H2O、ZnSO4·7H2O和CoCl2·6H2O中的至少一种。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述生长因子由玉米浆、酵母膏、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O和MnSO4·H2O中的至少一种提供。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述产纤维素酶的真菌包括木霉属、青霉属和/或曲霉属。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述木霉属包括瑞氏木霉菌株、拟康木霉菌株和里氏木霉菌株。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述曲霉属包括黑曲霉菌株。
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述青霉属包括斜卧青霉菌株。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S3中，将包括二甲基甲酰胺和/或二甲基亚砜的污水、废水或合成革水添加到发酵培养基中。
11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S3中，所述二甲基甲酰胺和/或二甲基亚砜与发酵培养基的体积比介于0.5-2：100。
12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S3中，所述二甲基甲酰胺和/或二甲基亚砜与发酵培养基的体积比介于0.8-1.2：100。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111500559A (zh) * 2020-04-22 2020-08-07 湖南农业大学 一种纤维素酶发酵调控剂及应用
CN112553181A (zh) * 2020-12-29 2021-03-26 宜昌东阳光生化制药有限公司 一种葡糖淀粉酶的生产方法

Citations (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS57174090A (en) * 1981-04-21 1982-10-26 Kanebo Ltd Insoluble enzyme and its preparation
JPH05236985A (ja) * 1992-02-26 1993-09-17 Amano Pharmaceut Co Ltd セルラーゼ阻害剤およびその製造法
JPH05339882A (ja) * 1992-06-10 1993-12-21 Toyobo Co Ltd 微細孔を有する繊維シート状物
WO2000001221A2 (de) * 1998-07-03 2000-01-13 Heide Schnabl Verfahren zur interspezifischen hybridisierung
US7718128B2 (en) * 2005-10-20 2010-05-18 Postech Foundation Application using non-covalent bond between a cucurbituril derivative and a ligand
CN101778940A (zh) * 2007-06-06 2010-07-14 丹尼斯科美国公司 改进多种蛋白质性质的方法
WO2012165577A1 (ja) * 2011-06-01 2012-12-06 株式会社県南衛生工業 サーモスポロスリックス・ハザケンシスに由来する新規セルラーゼ
CN102994481A (zh) * 2012-12-05 2013-03-27 天津工业生物技术研究所 一种高效降解木质纤维素的复合酶系的制备方法及其应用
CN103998617A (zh) * 2011-12-20 2014-08-20 花王株式会社 木质素分解物的制造方法
US20140273104A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 Suganit Systems, Inc. Pretreatment and fractionation of lignocellulosic biomass
CN104520355A (zh) * 2012-08-20 2015-04-15 国际人造丝公司 去除半纤维素的方法
CN104611283A (zh) * 2012-12-27 2015-05-13 北京市农林科学院 一种重组利迪链霉菌及其应用
CN104946701A (zh) * 2014-03-27 2015-09-30 中国科学院大连化学物理研究所 一种提高纤维素酶解产糖率的方法
CN105506025A (zh) * 2014-09-26 2016-04-20 中国科学院大连化学物理研究所 一种提高木质纤维素生物质酶解产糖率的方法
CN105802854A (zh) * 2014-12-30 2016-07-27 中国科学院上海生命科学研究院 一种纤维素酶高产菌株及其应用
US20160215306A1 (en) * 2013-08-30 2016-07-28 Evolva Sa Method for producing modified resveratrol
CN107012188A (zh) * 2012-07-20 2017-08-04 青岛蔚蓝生物集团有限公司 一种基因表达诱导剂的制备方法
CN107073052A (zh) * 2014-09-26 2017-08-18 希乐克公司 被增溶酶及其用途
CN107205404A (zh) * 2014-09-17 2017-09-26 拜耳作物科学有限合伙公司 包含重组芽孢杆菌属细胞和其他生物防治试剂的组合物
CN107236757A (zh) * 2016-03-28 2017-10-10 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种提高丝状真菌木质纤维素酶系表达及生物基化学品生产的方法
EP3259350A1 (en) * 2015-02-16 2017-12-27 Ozymes Multi-domain enzymes having cutinase activity, compositions comprising same and uses thereof
CN107667177A (zh) * 2015-04-07 2018-02-06 诺维信公司 用于选择具有增强活性的酶的方法
CN107864658A (zh) * 2015-04-07 2018-03-30 诺维信公司 用于选择具有脂肪酶活性的酶的方法
CN108048473A (zh) * 2017-11-07 2018-05-18 复旦大学 一种阿魏酸酯酶基因、基因工程菌株以及制备方法和用途

Patent Citations (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS57174090A (en) * 1981-04-21 1982-10-26 Kanebo Ltd Insoluble enzyme and its preparation
JPH05236985A (ja) * 1992-02-26 1993-09-17 Amano Pharmaceut Co Ltd セルラーゼ阻害剤およびその製造法
JPH05339882A (ja) * 1992-06-10 1993-12-21 Toyobo Co Ltd 微細孔を有する繊維シート状物
WO2000001221A2 (de) * 1998-07-03 2000-01-13 Heide Schnabl Verfahren zur interspezifischen hybridisierung
US7718128B2 (en) * 2005-10-20 2010-05-18 Postech Foundation Application using non-covalent bond between a cucurbituril derivative and a ligand
CN101778940A (zh) * 2007-06-06 2010-07-14 丹尼斯科美国公司 改进多种蛋白质性质的方法
WO2012165577A1 (ja) * 2011-06-01 2012-12-06 株式会社県南衛生工業 サーモスポロスリックス・ハザケンシスに由来する新規セルラーゼ
CN103998617A (zh) * 2011-12-20 2014-08-20 花王株式会社 木质素分解物的制造方法
CN107012188A (zh) * 2012-07-20 2017-08-04 青岛蔚蓝生物集团有限公司 一种基因表达诱导剂的制备方法
CN104520355A (zh) * 2012-08-20 2015-04-15 国际人造丝公司 去除半纤维素的方法
CN102994481A (zh) * 2012-12-05 2013-03-27 天津工业生物技术研究所 一种高效降解木质纤维素的复合酶系的制备方法及其应用
CN104611283A (zh) * 2012-12-27 2015-05-13 北京市农林科学院 一种重组利迪链霉菌及其应用
US20140273104A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 Suganit Systems, Inc. Pretreatment and fractionation of lignocellulosic biomass
US20160215306A1 (en) * 2013-08-30 2016-07-28 Evolva Sa Method for producing modified resveratrol
CN104946701A (zh) * 2014-03-27 2015-09-30 中国科学院大连化学物理研究所 一种提高纤维素酶解产糖率的方法
CN107205404A (zh) * 2014-09-17 2017-09-26 拜耳作物科学有限合伙公司 包含重组芽孢杆菌属细胞和其他生物防治试剂的组合物
CN105506025A (zh) * 2014-09-26 2016-04-20 中国科学院大连化学物理研究所 一种提高木质纤维素生物质酶解产糖率的方法
CN107073052A (zh) * 2014-09-26 2017-08-18 希乐克公司 被增溶酶及其用途
CN105802854A (zh) * 2014-12-30 2016-07-27 中国科学院上海生命科学研究院 一种纤维素酶高产菌株及其应用
EP3259350A1 (en) * 2015-02-16 2017-12-27 Ozymes Multi-domain enzymes having cutinase activity, compositions comprising same and uses thereof
CN107667177A (zh) * 2015-04-07 2018-02-06 诺维信公司 用于选择具有增强活性的酶的方法
CN107864658A (zh) * 2015-04-07 2018-03-30 诺维信公司 用于选择具有脂肪酶活性的酶的方法
CN107236757A (zh) * 2016-03-28 2017-10-10 中国科学院天津工业生物技术研究所 一种提高丝状真菌木质纤维素酶系表达及生物基化学品生产的方法
CN108048473A (zh) * 2017-11-07 2018-05-18 复旦大学 一种阿魏酸酯酶基因、基因工程菌株以及制备方法和用途

Non-Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
J. R. LOEWENBERG 等: "Sophorose Metabolism and Cellulase Induction in Trichoderma", 《ARCH. MICROBIOL.》 *
中国科学技术协会 主编: "《2012-2013植物生物学学科发展报告》", 30 April 2014, 中国科学技术出版社 *
余晓斌 等: "里氏木霉RutC-30液态发酵法生产纤维素酶", 《无锡轻工大学学报》 *
刘宇 等: "产纤维素酶黑曲霉菌的研究进展", 《畜牧与兽医》 *
李建颖 主编: "《食品添加剂速查手册》", 30 November 2017, 南开大学出版社 *
李辉: "里氏木霉产纤维素酶诱导剂的筛选与过程优化", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库》 *
胡冬学: "环境友好纤维素酶在离子液体-溶剂体系中的应用基础研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）》 *
陈玲 等: "钙离子信号转导通路在里氏木霉纤维素酶生产过程中的作用研究", 《第九届中国模式真菌研讨会摘要集》 *
陈磷娜 等: "产纤维素酶真菌混合发酵研究进展", 《中国土壤与肥料》 *
陈雨蒙: "锰离子和N,N-二甲基甲酰胺诱导里氏木霉高产纤维素酶的机制研究", 《中国优秀博士学位论文全文数据库》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111500559A (zh) * 2020-04-22 2020-08-07 湖南农业大学 一种纤维素酶发酵调控剂及应用
CN112553181A (zh) * 2020-12-29 2021-03-26 宜昌东阳光生化制药有限公司 一种葡糖淀粉酶的生产方法
CN112553181B (zh) * 2020-12-29 2022-09-02 宜昌东阳光生化制药有限公司 一种葡糖淀粉酶的生产方法

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