CN108703989A - 一种工业化制备白芸豆α-淀粉酶抑制剂的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种工业化制备白芸豆α‑淀粉酶抑制剂的方法，属于植物活性成分的制备领域。本发明方法先将白芸豆进行干法脱皮、干法粉碎、过筛制成豆粉，然后将豆粉用水提取、离心后收集浆料，将浆料用β‑淀粉酶充分酶解后得到酶解液，将酶解液采用陶瓷膜过滤，所得滤液采用80～150kDa超滤膜进行超滤，将透过液采用15～30kDa超滤膜进行超滤，将截留液经喷雾干燥，即得白芸豆α‑淀粉酶抑制剂。本发明制备的白芸豆α‑淀粉酶抑制剂产品，不仅α‑淀粉酶抑制剂活力高，不含淀粉，无植物凝集素和胰蛋白酶抑制剂活力，有着可靠的生理功效和安全性，而且制备工艺绿色环保，适应了现代工业化生产的要求，具有显著的经济效益和社会效益。
Description
技术领域
本发明涉及一种工业化制备白芸豆α-淀粉酶抑制剂的方法，属于植物活性成分的制备领域。
背景技术
糖尿病是一种以糖代谢紊乱为主的全身性疾病，其典型特征是餐后高血糖。过高的餐后血糖是造成糖尿病并发症如糖尿病足、糖尿病眼症和糖尿病肾病的根本原因。因此，安全高效地降低餐后血糖是预防糖尿病及其并发症的重要途径。近年来，我国糖尿病患者已达1.36亿，占成年人口的10.6％，糖尿病前期人群已近4.5亿，占成年人口的35.7％，超越美国和印度成为名副其实的糖尿病第一大国。由此可见，工业化制备安全高效的控糖产品具有广阔的市场前景和重要的社会价值。
白芸豆α-淀粉酶抑制剂是一种糖苷水解酶抑制剂，能够特异性地抑制人体口腔和肠道内的α-淀粉酶活力，阻碍人体对食物中淀粉的分解，从而降低餐后血糖水平，已被临床证实对糖尿病人以及糖尿病前期人群的血糖管理具有显著效果。
尽管白芸豆α-淀粉酶抑制剂具有明显的降糖效果，但白芸豆中还含有大量的淀粉、一定量的植物凝集素以及胰蛋白酶抑制剂。这些物质如果残留在白芸豆α-淀粉酶抑制剂产品中，会很大程度的影响产品的有效性和安全性。白芸豆α-淀粉酶抑制剂产品中淀粉的含量直接影响着α-淀粉酶抑制剂对α-淀粉酶的抑制作用，过高的淀粉含量会导致产品无法抑制α-淀粉酶活力而失效。植物凝集素能特异性凝集人体血红细胞，同时会破坏肠道上皮细胞的完整性，影响营养素的吸收与利用。胰蛋白酶抑制剂不仅会降低食物蛋白质的生物利用度，抑制生长，而且还会刺激胰脏分泌更多的α-淀粉酶，导致产品生理作用减弱甚至丧失。
目前已有众多白芸豆α-淀粉酶抑制剂的制备工艺，但这些制备工艺使用了较多的糖化酶、蛋白酶和脂肪酶，并使用了强酸性物质和强碱性物质，对白芸豆α-淀粉酶抑制剂活力有着较大影响，因而所制备的产品α-淀粉酶抑制剂活力较低，也残留着较多的淀粉和一定量的植物凝集素与胰蛋白酶抑制剂，无法保证产品的有效性和安全性。此外，这些制备工艺或使用了有机溶剂，或采用了色谱分离技术，易产生残留问题，也不利于环境保护。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的上述不足，提供一种工业化制备白芸豆α-淀粉酶抑制剂的方法，适用于绿色环保地制备安全高效的白芸豆α-淀粉酶抑制剂。本发明方法采用单一β-淀粉酶进行前处理，在有效去除淀粉的同时不影响白芸豆α-淀粉酶抑制剂活力，并根据相对分子量的差异，采用合适的超滤膜对植物凝集素和胰蛋白酶抑制剂进行了脱除，绿色环保地制备了安全有效的白芸豆α-淀粉酶抑制剂，有助于糖尿病的预防和控制，很好地适应了社会的需求。
本发明提供的一种工业化制备白芸豆α-淀粉酶抑制剂的方法，包括将白芸豆豆粉用水提取、收集浆液，然后添加β-淀粉酶酶解，再经陶瓷膜过滤、超滤、干燥，得到白芸豆α-淀粉酶抑制剂。
在一些实施方法中，白芸豆豆粉的制备：先将白芸豆的豆皮脱去，得
到脱皮白芸豆；然后将脱皮白芸豆用干法粉碎机粉碎，过40～60目筛。
在一些实施方法中，水提取包括：将白芸豆豆粉与水按料液比1:3～1:5(w/w)搅拌提取1～2h。
在一些实施方法中，所述收集浆液，是将水提取后物料在转速2500～3300r/min、差速10～15r/min下离心，然后收集浆液。
在一些实施方法中，添加β-淀粉酶酶解时，β-淀粉酶的添加量为2.0～6.0U/克白芸豆豆粉干重。
在一些实施方法中，所述β-淀粉酶酶解参数是：酶解温度50～60℃，充分酶解时间为1～2h。
在一些实施方法中，所述的陶瓷膜过滤参数是：陶瓷膜孔径为0.6～1.0μm。
在一些实施方法中，所述超滤包括第一次超滤和第二次超滤。
在一些实施方法中，所述第一次超滤用80～150kDa超滤膜进行超滤，收集透过液；第二次超滤是将第一次超滤后的透过液用15～30kDa超滤膜进行超滤，收集截留液。
在一些实施方法中，所述干燥是采用喷雾干燥；具体是：将截留液用喷雾干燥机以进风温度170～190℃、出风温度80～90℃的参数进行干燥。
在一些实施方法中，所述方法包括如下步骤：
(1)干法脱皮：用干法脱皮机将白芸豆的豆皮脱去，得到脱皮白芸豆；
(2)干法粉碎：将脱皮白芸豆用干法粉碎机粉碎，过40～60目筛，得到白芸豆豆粉；
(3)水提取：将白芸豆豆粉与水按料液比1:3～1:5(w/w)在60～120r/min的搅拌速度下提取1～2h；
(4)离心：用卧螺离心机将物料于转速2500～3300r/min、差速10～15r/min的参数下进行离心，收集浆料；
(5)β-淀粉酶酶解：用管式加热机将浆料加热至50～60℃后，按2.0～6.0U/克白芸豆豆粉干重的比例添加β-淀粉酶，充分酶解1～2h得到酶解液；
(6)陶瓷膜过滤：将酶解液用孔径为0.6～1.0μm的陶瓷膜过滤，收集滤液；
(7)一次超滤：将滤液用80～150kDa超滤膜进行超滤，收集透过液；
(8)二次超滤：将透过液用15～30kDa超滤膜进行超滤，收集截留液；
(9)喷雾干燥：将截留液用喷雾干燥机以进风温度170～190℃、出风温度80～90℃的参数进行干燥，即得白芸豆α-淀粉酶抑制剂。
本发明还要求保护上述方法在制备降血糖保健食品、辅助降血糖药物方面的应用。
有益效果
本发明的一种工业化制备白芸豆α-淀粉酶抑制剂的新方法，采用干法脱皮、干法粉碎、水提取、离心、β-淀粉酶酶解、陶瓷膜过滤、一次超滤、二次超滤、喷雾干燥的方法制备白芸豆α-淀粉酶抑制剂产品。所得产品α-淀粉抑制剂活力高达2.5×104U/g，不含淀粉，无植物凝集素活力和胰蛋白酶抑制剂活力，具有可靠的生理功效和安全性。
本发明的制备工艺中未使用有机溶剂、强酸性物质或强碱性物质，不会产生残留问题，绿色环保，适应了社会的需求。
具体实施方式
通过以下具体实施例对本发明作进一步的具体说明，但应该理解本发明并不受这些内容所限制。
淀粉含量的测定方法
根据GB/T 5009.9-2018《食品中淀粉的测定》中“第二法：酸水解法”进行测定。
α-淀粉酶抑制剂活力的测定方法
将0.25mLα-淀粉酶液(1U/mL)和0.25mL样品(适当稀释)加入到0.5mL 0.1mol/LPBS(pH 6.9)中，于37℃水浴10min后，加入0.5mL 1％(w/v)的可溶性淀粉溶液，精确反应5min后加入l mL DNS试剂，沸水浴10min后迅速冷却，适当稀释后，在540nm波长下测定吸光值。对照管中不加α-淀粉酶液(以同体积PBS补足)，其他与抑制剂管相同，其反应体系如表1所示。
表1α-淀粉酶抑制率测定体系
样品对α-淀粉酶的抑制率可按下式计算：
式中A1、A2、A3和A4分别为540nm下空白管、空白对照管、抑制管和背景对照管的吸光值。通过稀释倍数即可将样品对α-淀粉酶的抑制率转换为样品对α-淀粉酶的抑制活力。
胰蛋白酶抑制剂活力的测定方法
(1)试剂的配制：
BApNA溶液的配制：将30mg BApNA溶于0.5mL二甲亚砜，加0.5mL乙醇使BApNA充分溶解，然后用含有0.03mol/L CaCl2的0.05mol/L Tris-HCl溶液，pH约为8.2，定容至100mL。
胰蛋白酶溶液的配制：将2mg胰蛋白酶溶于100mL 0.001mol/L的HCl即得。
(2)胰蛋白酶抑制剂活力的测定
将0.4mL样品(适当稀释)加入0.4mL的胰蛋白酶溶液中，于37℃水浴振荡保温15min后，加入2.8mL BApNA溶液，水浴振荡保温15min。加入1mL 30％(v/w)的冰醋酸终止反应，定容至10mL，于室温下410nm测吸光度。以不加胰蛋白酶的试样为空白，只加入胰蛋白酶而不加提取物的试样为对照。胰蛋白酶抑制剂抑制活力(TIU)用其抑制的胰蛋白酶活力来表征：
TIU＝AU*(A0-A)/A0*100％*稀释倍数
抑制率(％)＝(A0-A)/A*100％
其中A为加入样品的吸光值，A0为对照组的吸光值，AU为对照组中胰蛋白酶的活力。胰蛋白酶的活力为10mL测定体系中吸光度每增加0.01个单位为一个单位的AU。AU的绝对活性则通过测定单位时间内胰蛋白酶分解底物BApNA产生对硝基苯胺的微摩尔数来获得。
植物凝集素活力的测定
(1)试剂的配制
Alsever’s液(血球缓冲液)的配制；称取葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.80g、柠檬酸0.05g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100mL，加热溶解后调pH值至7.2，高压灭菌后，置4℃冰箱保存备用。
红血球悬液的配制；利用采血管抽取兔耳静脉血，将新鲜血液倒入离心管，并于离心机中3 000r/min离心3min。用移液枪去除上层血清，向沉淀中添加生理盐水以清洗血红细胞。轻轻颠倒摇匀洗涤，然后再次3 000r/min离心3min，去除上清液，如此重复操作洗涤3次。根据红细胞压积，按照离心出的红细胞体积，加入生理盐水配成2％(w/v)浓度的红血球悬液，4℃保存备用。
(2)植物凝集素活力的测定
将50μL样品于96V孔板中进行倍比稀释，然后向加有样品的孔中加入50μL红血球悬液，于4℃下静置2h后观察凝血情况。凝血活力按下式计算：
凝血活力(HU)＝2n×1 000μL/mL×体积(mL)/每孔添加体积(μL)
实施例1
取1kg白芸豆用干法脱皮机脱皮；
将脱皮白芸豆用干法粉碎机粉碎，过40目筛，得到白芸豆豆粉；
将白芸豆豆粉与水按料液比1:3(w/w)在60r/min的搅拌转速下提取1h；
用卧螺离心机将物料于转速3000r/min、差速10r/min的参数下进行离心，收集浆料；
用管式加热机将浆料加热至50℃后，按2.0U/克白芸豆豆粉干重的比例添加β-淀粉酶，充分酶解2h得到酶解液；
将酶解液用孔径为0.6μm的陶瓷膜过滤，收集滤液；
将滤液用150kDa超滤膜进行超滤，收集透过液；
将透过液用15kDa超滤膜进行超滤，收集截留液；
将截留液用喷雾干燥机以进风温度170℃、出风温度90℃的参数进行干燥，得到白芸豆α-淀粉酶抑制剂产品。
测定白芸豆α-淀粉酶抑制剂产品中α-淀粉酶抑制剂活力、植物凝集素活力、胰蛋白酶抑制剂活力以及淀粉含量，结果显示：产品α-淀粉酶抑制剂活力为2.2×104U/g，植物凝集素活力为8.5×10-3HU/g，胰蛋白酶抑制剂活力为1.5×10-2TIU/g，淀粉含量为1.2％。
实施例2
取1kg白芸豆用干法脱皮机脱皮；
将脱皮白芸豆用干法粉碎机粉碎，过50目筛，得到白芸豆豆粉；
将白芸豆豆粉与水按料液比1:4(w/w)在100r/min的搅拌转速下提取2h；
用卧螺离心机将物料于转速2500r/min、差速15r/min的参数下进行离心，收集浆料；
用管式加热机将浆料加热至60℃后，按4.0U/克白芸豆豆粉干重的比例添加β-淀粉酶，充分酶解2h得到酶解液；
将酶解液用孔径为0.8μm的陶瓷膜过滤，收集滤液；
将滤液用120kDa超滤膜进行超滤，收集透过液；
将透过液用20kDa超滤膜进行超滤，收集截留液；
将截留液用喷雾干燥机以进风温度190℃、出风温度85℃的参数进行干燥，得到白芸豆α-淀粉酶抑制剂产品。
测定白芸豆α-淀粉酶抑制剂产品中α-淀粉酶抑制剂活力、植物凝集素活力、胰蛋白酶抑制剂活力以及淀粉含量，结果显示：产品α-淀粉酶抑制剂活力为2.0×104U/g，植物凝集素活力为2.3×10-3HU/g，淀粉含量为0.7％。未检测到胰蛋白酶抑制剂活力。
实施例3
取1kg白芸豆用干法脱皮机脱皮；
将脱皮白芸豆用干法粉碎机粉碎，过60目筛，得到白芸豆豆粉；
将白芸豆豆粉与水按料液比1:5(w/w)在120r/min的搅拌转速下提取2h；
用卧螺离心机将物料于转速3300r/min、差速12r/min的参数下进行离心，收集浆料；
用管式加热机将浆料加热至55℃后，按6.0U/克白芸豆豆粉干重的比例添加β-淀粉酶，充分酶解1h得到酶解液；
将酶解液用孔径为1.0μm的陶瓷膜过滤，收集滤液；
将滤液用80kDa超滤膜进行超滤，收集透过液；
将透过液用30kDa超滤膜进行超滤，收集截留液；
将截留液用喷雾干燥机以进风温度180℃、出风温度80℃的参数进行干燥，得到白芸豆α-淀粉酶抑制剂产品。
测定白芸豆α-淀粉酶抑制剂产品中α-淀粉酶抑制剂活力、植物凝集素活力、胰蛋白酶抑制剂活力以及淀粉含量，结果显示：产品α-淀粉酶抑制剂活力为2.5×104U/g，未检测到淀粉、植物凝集素活力和胰蛋白酶抑制剂活力。
实施例4对照例
参照《一种安全高效白芸豆α-淀粉酶抑制剂的工业化制备方法》(申请号：201510313145.1)制备白芸豆α-淀粉酶抑制剂，具体实施步骤如下：
将白芸豆粉碎，收集过60目筛网的豆粉；
取100g豆粉与500mL蒸馏水混合，用1mol/L NaOH溶液调节pH至10.0，室温搅拌提取2h；
将混合液于4℃，8000r/min下离心30min，收集上清液；
用1mol/L HCl溶液调节上清液pH至4.0，于60℃水浴灭酶20min，离心(5000r/min，10min)取上清液；
用1mol/L NaOH溶液将上清液pH调至10.0，室温搅拌2h后，用1mol/L HCl溶液调节上清液pH至6.9，离心(5000r/min，10min)取上清液；
将上清液超滤，所用超滤膜孔径为30kDa，收集截留液；
将截留液冷冻干燥，超微粉碎后即得粉末状的白芸豆α-淀粉酶抑制剂产品。
对照产品的性质
对照产品α-淀粉酶抑制剂活力为1.6×103U/g，淀粉含量为27.9％，未检测到植物凝集素活力和胰蛋白酶抑制剂活力。尽管对照产品中无植物凝集素活力和胰蛋白酶抑制剂活力，但其α-淀粉酶抑制剂活力仅为本发明所得产品α-淀粉酶抑制剂活力的6％左右，而且淀粉含量较高，因此对照产品的生理功效远不及本发明所得产品。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (9)
1.一种工业化制备白芸豆α-淀粉酶抑制剂的方法，其特征在于，包括将白芸豆豆粉用水提取、收集浆液，然后添加β-淀粉酶酶解，再经陶瓷膜过滤、超滤、干燥，得到白芸豆α-淀粉酶抑制剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述添加β-淀粉酶酶解时，β-淀粉酶的添加量为2.0～6.0U/克白芸豆豆粉干重。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述β-淀粉酶酶解参数是：酶解温度50～60℃，充分酶解时间为1～2h。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超滤包括第一次超滤和第二次超滤。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述第一次超滤用80～150kDa超滤膜进行超滤，收集透过液；第二次超滤是将第一次超滤后的透过液用15～30kDa超滤膜进行超滤，收集截留液。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述水提取包括：将白芸豆豆粉与水按料液比1:3～1:5(w/w)搅拌提取1～2h。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述干燥是采用喷雾干燥；具体是：将截留液用喷雾干燥机以进风温度170～190℃、出风温度80～90℃的参数进行干燥。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)干法脱皮：用干法脱皮机将白芸豆的豆皮脱去，得到脱皮白芸豆；
(2)干法粉碎：将脱皮白芸豆用干法粉碎机粉碎，过40～60目筛，得到白芸豆豆粉；
(3)水提取：将白芸豆豆粉与水按料液比1:3～1:5(w/w)在60～120r/min的搅拌速度下提取1～2h；
(4)离心：用卧螺离心机将物料于转速2500～3300r/min、差速10～15r/min的参数下进行离心，收集浆料；
(5)β-淀粉酶酶解：用管式加热机将浆料加热至50～60℃后，按2.0～6.0U/克白芸豆豆粉干重的比例添加β-淀粉酶，充分酶解1～2h得到酶解液；
(6)陶瓷膜过滤：将酶解液用孔径为0.6～1.0μm的陶瓷膜过滤，收集滤液；
(7)一次超滤：将滤液用80～150kDa超滤膜进行超滤，收集透过液；
(8)二次超滤：将透过液用15～30kDa超滤膜进行超滤，收集截留液；
(9)喷雾干燥：将截留液用喷雾干燥机以进风温度170～190℃、出风温度80～90℃的参数进行干燥，即得白芸豆α-淀粉酶抑制剂。
9.权利要求1-8任一所述的方法在制备降血糖保健食品、辅助降血糖药物方面的应用。
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|---|---|
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Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111387401A (zh) * | 2020-04-30 | 2020-07-10 | 南通大学 | 一种复合食品保鲜剂及其制备方法 |
| CN111560057A (zh) * | 2020-05-29 | 2020-08-21 | 颜如玉医药科技有限公司 | 一种从白芸豆中提取α-淀粉酶抑制剂的方法 |
| CN111903977A (zh) * | 2019-05-08 | 2020-11-10 | 无锡华康生物科技有限公司 | 一种白芸豆淀粉酶抑制剂的提取方法 |
| CN112608961A (zh) * | 2020-12-07 | 2021-04-06 | 中国农业科学院农产品加工研究所 | 高α-淀粉酶抑制活力芸豆提取物及其制备方法和应用 |
| CN112898397A (zh) * | 2021-04-07 | 2021-06-04 | 合肥工业大学 | 一种低温膜过滤制备高安全性白芸豆α-淀粉酶抑制剂的方法 |
| CN112961883A (zh) * | 2021-02-24 | 2021-06-15 | 苏州朗邦营养科技有限公司 | 一种高活力耐热型白芸豆淀粉酶抑制剂及制备方法 |
| CN113100445A (zh) * | 2021-03-30 | 2021-07-13 | 苏州朗邦营养科技有限公司 | 一种强力吸附油脂的白芸豆纳米纤维素及其制备方法与应用 |
| CN114199863A (zh) * | 2021-12-03 | 2022-03-18 | 无锡华康生物科技有限公司 | 一种α-淀粉酶抑制剂活力的检测方法 |
| CN114306419A (zh) * | 2021-12-27 | 2022-04-12 | 无锡江大百泰科技有限公司 | 一种从白芸豆中提取α-淀粉酶抑制剂的方法 |
| CN116270793A (zh) * | 2023-02-07 | 2023-06-23 | 湖南朗林生物资源股份有限公司 | 一种白芸豆提取物的制备方法及其应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104131057A (zh) * | 2014-07-23 | 2014-11-05 | 山西大学 | 一种功能性白芸豆多肽及其制备方法和应用 |
| CN104857062A (zh) * | 2015-06-09 | 2015-08-26 | 江南大学 | 一种安全高效白芸豆α-淀粉酶抑制剂的工业化制备方法 |
| CN105747231A (zh) * | 2016-03-16 | 2016-07-13 | 宝健（北京）生物技术有限公司 | 一种白芸豆中淀粉阻碍剂的提取制备工艺 |
-
2018
- 2018-05-25 CN CN201810516208.7A patent/CN108703989B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104131057A (zh) * | 2014-07-23 | 2014-11-05 | 山西大学 | 一种功能性白芸豆多肽及其制备方法和应用 |
| CN104857062A (zh) * | 2015-06-09 | 2015-08-26 | 江南大学 | 一种安全高效白芸豆α-淀粉酶抑制剂的工业化制备方法 |
| CN105747231A (zh) * | 2016-03-16 | 2016-07-13 | 宝健（北京）生物技术有限公司 | 一种白芸豆中淀粉阻碍剂的提取制备工艺 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 让一峰等: "低胰蛋白酶抑制剂活力的白芸豆α-淀粉酶抑制剂的工业化制备方法探究 ", 《食品与发酵工业》 * |
| 迟永楠等: "白芸豆中α-淀粉酶抑制剂的提取及其性能研究 ", 《食品科技》 * |
| 马艳丽等: "白芸豆α-淀粉酶抑制剂在低GI方便粥中的应用 ", 《江苏大学学报(自然科学版)》 * |
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111903977A (zh) * | 2019-05-08 | 2020-11-10 | 无锡华康生物科技有限公司 | 一种白芸豆淀粉酶抑制剂的提取方法 |
| CN111387401A (zh) * | 2020-04-30 | 2020-07-10 | 南通大学 | 一种复合食品保鲜剂及其制备方法 |
| CN111560057B (zh) * | 2020-05-29 | 2021-07-06 | 颜如玉医药科技有限公司 | 一种从白芸豆中提取α-淀粉酶抑制剂的方法 |
| CN111560057A (zh) * | 2020-05-29 | 2020-08-21 | 颜如玉医药科技有限公司 | 一种从白芸豆中提取α-淀粉酶抑制剂的方法 |
| CN112608961A (zh) * | 2020-12-07 | 2021-04-06 | 中国农业科学院农产品加工研究所 | 高α-淀粉酶抑制活力芸豆提取物及其制备方法和应用 |
| CN112961883A (zh) * | 2021-02-24 | 2021-06-15 | 苏州朗邦营养科技有限公司 | 一种高活力耐热型白芸豆淀粉酶抑制剂及制备方法 |
| CN112961883B (zh) * | 2021-02-24 | 2023-05-26 | 苏州朗邦营养科技有限公司 | 一种耐热型白芸豆淀粉酶抑制剂及制备方法 |
| CN113100445A (zh) * | 2021-03-30 | 2021-07-13 | 苏州朗邦营养科技有限公司 | 一种强力吸附油脂的白芸豆纳米纤维素及其制备方法与应用 |
| CN113100445B (zh) * | 2021-03-30 | 2022-09-06 | 苏州朗邦营养科技有限公司 | 一种强力吸附油脂的白芸豆纳米纤维素及其制备方法与应用 |
| CN112898397A (zh) * | 2021-04-07 | 2021-06-04 | 合肥工业大学 | 一种低温膜过滤制备高安全性白芸豆α-淀粉酶抑制剂的方法 |
| CN114199863A (zh) * | 2021-12-03 | 2022-03-18 | 无锡华康生物科技有限公司 | 一种α-淀粉酶抑制剂活力的检测方法 |
| CN114306419A (zh) * | 2021-12-27 | 2022-04-12 | 无锡江大百泰科技有限公司 | 一种从白芸豆中提取α-淀粉酶抑制剂的方法 |
| CN116270793A (zh) * | 2023-02-07 | 2023-06-23 | 湖南朗林生物资源股份有限公司 | 一种白芸豆提取物的制备方法及其应用 |
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| CN108703989B (zh) | 2021-03-02 |
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