CN101979532A - 一种综合利用猪血的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属生物活性物质的分离提取技术领域。具体涉及将新鲜猪血经抗凝处理后以血浆和血球为出发底物分别制备凝血酶和猪血水解蛋白的方法。血浆经低温冷冻、沉淀收集凝血酶原、离子激活、酶液纯化等步骤制得高活性的凝血酶；血球经破壁、溶血、复合酶分段酶解、过滤除菌等步骤制得高活性的猪血水解蛋白。该方法制得的猪血水解蛋白中氨基酸含量占蛋白质的80％以上，易于吸收利用。本发明方法充分利用了原料，一次投料可以生产两种高附加值产品。整个生产过程避免使用毒性大的有机溶剂，克服了产品单一、溶剂残留等缺陷，降低了生产成本。用本发明方法，1L猪血可制得凝血酶精品6000U以上、高活性的猪血水解蛋白粉150g以上。

Description

一种综合利用猪血的方法
技术领域
本发明涉及一种从猪血中同时提取凝血酶和猪血水解蛋白的方法，属生物活性物质的分离提取技术领域。
背景技术
猪血是一种优质蛋白质，营养学家称其为液体肉。猪血中含有人体所需要的几乎全部的营养成分：蛋白质、氨基酸、维生素、糖和钠、钾、铁、钙等人体不可缺少的微量元素。其中蛋白质18.9％、非蛋白有机体1.2％、矿物质0.9％、水分79％，另外，其氨基酸组成平衡，含人体所需的8种必需氨基酸的总量高于人乳和全蛋，特别是赖氨酸的含量高达9％，符合联合国粮农组织、世界卫生组织(FAO/WHO)专家组推荐模式。
我国是猪血资源大国，但在猪血资源开发利用上却落后于不少发达国家，由于经简单加工的猪血蛋白不易被消化吸收且颜色较深、血腥味较重适口性差，所以很久以来，许多猪血作为废弃物倒进地沟，既造成巨大浪费，又污染环境。
国外对动物血的开发始于上世纪初，初期主要用于饲料工业。随着高新技术的发展，国内外许多研究部门尤其注重用生化技术加工猪血用于食品、制药等方面的研究。目前血液产品在保健品行业已经形成了一定的规模，产业化前景良好。近年来，我国猪血深度开发也取得了重要进展，猪血作为一个营养宝库，已经得到极其广泛的研究，所提出的加工生产工艺流程不下几十种。从直接食用猪血豆腐，到酶解猪血粉，复合氨基酸粉的生产，已经取得了长足的进展，但是仍然不能满足人类的需要。存在的问题是大多数工艺还不完善，如有的工艺能耗大耗时长、有的工艺只能生产单一产品、有的工艺得率低、有的工艺使用大量有机溶剂，存在环保缺陷等。而本发明方法克服了上述缺点，发明了零排放的利用猪血同时生产凝血酶和猪血水解蛋白的绿色方法。
发明内容
本发明属生物活性物质的分离提取技术领域。具体涉及将新鲜猪血经抗凝处理后以血浆和血球为出发底物分别制备凝血酶和猪血水解蛋白的方法。血浆经低温冷冻、沉淀收集凝血酶原、离子激活、酶液纯化等步骤制得高活性的凝血酶；血球经破壁、溶血、复合酶分段酶解、过滤除菌等步骤制得高活性的猪血水解蛋白。该方法制得的猪血水解蛋白中氨基酸含量占蛋白质的80％以上，易于吸收利用。本发明方法充分利用了原料，一次投料可以生产两种高附加值产品。整个生产过程避免使用毒性大的有机溶剂，克服了产品单一、溶剂残留等缺陷，降低了生产成本。用本发明方法，1L猪血可制得凝血酶精品6000U以上、高活性的猪血水解蛋白粉150g以上。
具体来说，本发明的步骤由以下几步构成：
1、抗凝猪血的制备：取检疫合格的新鲜猪血放入容器1中，该容器中已事先加入了0.5％-5％(w/v)溶于少量去离子水中的抗凝剂柠檬酸三钠，充分搅拌均匀，低温静置备用。
2、血浆、血球分离：低温静置后，抗凝猪血上层为无色透明液体为血浆，下层深红色粘稠液体为血球。用虹吸法将上层血浆吸到容器2中；余下的血球经转速为3000-3500r/min离心后，将上层血浆合并到容器2中低温冷冻备用，血球则冷冻贮藏至容器3中过夜待用。
3、血浆沉淀收集凝血酶原：容器2中的血浆解冻后，滤除上层漂浮的白色絮状物后，用2-8倍生理盐水稀释后再用2mol/L醋酸调pH至5.1-5.2，低温静置过夜，收集沉淀即得凝血酶原。
4、凝血粗酶液制备：将收集的凝血酶原沉淀溶解于生理盐水中，加热保温至37℃，用1.0％CaCl2溶液，低速搅拌(500-800r/min)20-30分钟，激活凝血酶原，过滤收集滤液即得凝血酶粗酶液。
5、凝血酶精品制备：向凝血酶粗酶液中加入8-10倍冷生理盐水，用截留相对分子量(Mr)为60000的超滤膜处理，浓缩至原体积的1/20-1/25后收集截留液。该液体即为精制凝血酶液，也可将截留液冷冻干燥，即得粉状凝血酶精品。
6、血球破壁、溶血：向容器3中加入血球体积的适量生理盐水(使液体中蛋白质含量为8％-10％)，升温至10℃左右，高速搅拌(1000r/min以上)20-30分钟。
7、血球蛋白分段酶解：用4.0mol/L NaOH调节pH至7.5，将温度升至37-40℃，加入适量复合蛋白酶I，保温2小时后，再升温至55-60℃，保温3小时；调节pH至9.0，加入适量复合蛋白酶II，保温4小时使血球蛋白充分水解；
8、猪血水解蛋白制备：酶解结束后，冷却至常温，用0.22um的滤膜过滤除菌即可制成液体猪血水解蛋白，也可将该液体喷雾干燥后制成猪血水解蛋白粉。
具体实施方式
下面的实例将具体说明本发明的操作方法，但不能作为对本发明的限定。
实例1
向50L检疫合格新鲜猪血中加入500g溶于少量去离子水的柠檬酸三钠，充分搅拌均匀，4℃以下静置过夜。按上述发明方法的步骤2操作，得到血浆约35L、血球约15L。血浆按上述发明方法的步骤3操作，用8倍生理盐水稀释后再用2mol/L醋酸调pH至5.2，低温静置过夜，收集沉淀得凝血酶原。凝血酶原沉淀按上述发明方法的步骤4、5操作，不冷冻干燥，得精制凝血酶液1.8L。
向冷冻过夜的20L血球中加入适量生理盐水，使其底物浓度为8-10％，升温至10℃左右，高速搅拌20分钟，按上述发明方法的步骤7、8操作，采用分段复合酶法水解血球蛋白，用0.22um的滤膜过滤除菌后得到猪血水解蛋白液体约150L。该液体可根据需要，进一步浓缩制成复合氨基酸营养液，也可以喷雾干燥制成猪血水解蛋白粉。
实例2
凝血酶活力检测、猪血水解蛋白组分分析试验：
1)材料：凝血酶标准品、纤维蛋白原、牛血清白蛋白(购自中国药品生物制品检定所)；凝血酶样品(按实例1方法自制)。
2)检测方法：
①凝血酶活力检测按中华人民共和国药典(二部)(2000版1056-1057页)所示的方法；
②蛋白质含量测定采用福林-酚法。
③水解氨基酸：高效液相色谱法。
3)结果：连续取3批用上述发明方法制得的样品各100ml，按上述检测方法检测结果见表1、表2。
表1样品检测数据
Figure BSA00000299981400031
注：总活力指1L猪血中可获得的凝血酶活力。
表2猪血水解蛋白氨基酸构成
Figure BSA00000299981400032
Figure BSA00000299981400041
4)结论：
从表1、2的结果可以看出，采用本发明方法制得的样品中2个主要目的产物的品质优良。其中，1L猪血中可获得的凝血酶总活力达6000U以上；猪血水解蛋白含有17种氨基酸，其中必需氨基酸中赖氨酸含量较高，赖氨酸有显著促进青年生长发育的作用，将猪血水解蛋白和谷类食物搭配成营养食品，改变了各种食品中蛋白质的成分，不但能加强食品，而且提高了这类食品氨基酸的吸收与利用率。除此以外，猪血水解蛋白中精氨酸、谷氨酸的含量也很高，这些氨基酸医学上用以治疗昏迷。因此水解蛋白粉对幼儿、青少年、老弱病人均为营养佳品。

Claims (3)

1.一种综合利用猪血的方法，该方法组成步骤如下：
1)抗凝猪血的制备：取检疫合格的新鲜猪血放入容器1中，该容器中已事先加入了0.5％-5％(w/v)溶于少量去离子水中的抗凝剂柠檬酸三钠，充分搅拌均匀，低温静置备用；
2)血浆、血球分离：低温静置后，抗凝猪血上层为无色透明液体为血浆，下层深红色粘稠液体为血球，用虹吸法将上层血浆吸到容器2中；余下的血球经转速为3000-3500r/min离心后，将上层血浆合并到容器2中低温冷冻备用，血球则冷冻贮藏至容器3中过夜待用；
3)血浆沉淀收集凝血酶原：容器2中的血浆解冻后，滤除上层漂浮的白色絮状物后，用2-8倍生理盐水稀释后再用2mol/L醋酸调pH至5.1-5.2，低温静置过夜，收集沉淀即得凝血酶原；
4)凝血粗酶液制备：将收集的凝血酶原沉淀溶解于生理盐水中，加热保温至37℃用1.0％CaCl2溶液，低速搅拌(500-800r/min)20-30分钟，激活凝血酶原，过滤收集滤液即得凝血酶粗酶液。
5)凝血酶精品制备：向凝血酶粗酶液中加入8-10倍冷生理盐水，用截留相对分子量(Mr)为60000的超滤膜处理，浓缩至原体积的1/20-1/25后收集截留液，该液体即为精制凝血酶液，也可将截留液冷冻干燥，即得粉状凝血酶精品；
6)血球破壁、溶血：向容器3中加入血球体积的适量生理盐水(使液体中蛋白质含量为8％-10％)，升温至10℃左右，高速搅拌(1000r/min以上)20-30分钟；
7)血球蛋白分段酶解：用4.0mol/L NaOH调节pH至7.5，将温度升至37-40℃，加入适量复合蛋白酶I，保温2小时后，再升温至55-60℃，保温3小时；调节pH至9.0，加入适量复合蛋白酶II，保温4小时使血球蛋白充分水解；
8)猪血水解蛋白制备：酶解结束后，冷却至常温，用0.22um的滤膜过滤除菌即可制成液体猪血水解蛋白，也可将该液体喷雾干燥后制成猪血水解蛋白粉。
2.如权利要求1所述的方法，其特征是复合蛋白酶I由胰蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶按一定比例混合而成。
3.如权利要求1所述的方法，其特征是复合蛋白酶II由碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶按一定比例混合而成。
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Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104431413A (zh) * 2014-10-16 2015-03-25 浙江索纳克生物科技有限公司 一种综合利用猪血的方法
CN104450656A (zh) * 2014-09-09 2015-03-25 青岛康大食品有限公司 兔血中凝血酶的纯化制备方法
CN105132399A (zh) * 2015-09-28 2015-12-09 海安县华润食品有限公司 一种猪血提取血浆蛋白粉的方法
CN105950576A (zh) * 2016-05-26 2016-09-21 成都远睿生物技术有限公司 一种从牛血中提取多种蛋白的方法
CN106086140A (zh) * 2016-08-10 2016-11-09 柳江县渡庄生物科技有限公司 一种微波辅助与膜过滤制备淡水鱼血肽的方法
CN106107574A (zh) * 2016-08-11 2016-11-16 安徽省农业科学院农产品加工研究所 一种猪血源复合微量元素补充剂的制备方法
CN106261816A (zh) * 2016-08-11 2017-01-04 安徽省农业科学院农产品加工研究所 一种猪血源补铁剂中间体及其成品的制备方法
CN106261817A (zh) * 2016-08-11 2017-01-04 安徽省农业科学院农产品加工研究所 一种猪血的高效酶解利用方法
CN107699555A (zh) * 2017-11-17 2018-02-16 浙江丰安生物制药有限公司 一种猪血凝血酶的制备方法
CN108902502A (zh) * 2018-07-20 2018-11-30 福建永诚农牧科技集团有限公司 一种中猪全价配合饲料

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1294257C (zh) * 2004-09-15 2007-01-10 黄耀江 一种制备凝血酶的方法
CN101509030A (zh) * 2009-03-20 2009-08-19 四川省食品发酵工业研究设计院 复合酶法水解猪血生产血肽素

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1294257C (zh) * 2004-09-15 2007-01-10 黄耀江 一种制备凝血酶的方法
CN101509030A (zh) * 2009-03-20 2009-08-19 四川省食品发酵工业研究设计院 复合酶法水解猪血生产血肽素

Non-Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
《Biochemistry》 19710630 Roger L. Lundblad A Rapid Method for the Purification of Bovine Thrombin and the Inhibition of the Purified Enzyme with Phenylmethylsulfonyl Fluoride 2501-2506页 1-3 第10卷, 第13期 2 *
《中国生化药物杂志》 20050831 李耀曾 超滤法从藏牦牛血中分离纯化凝血酶 237-238页 1-3 第26卷, 第4期 2 *
《兰州大学学报(医学版)》 20090630 曹芳等 二次膜分离提取藏耗牛血凝血酶的工艺 51-53页 1-3 第35卷, 第2期 2 *
《化学与生物工程》 20090831 吴保承等 酶法提取猪血中血红素的工艺研究 61-63页 1-3 第26卷, 第8期 2 *
《卫生职业教育》 20090615 曹芳等 采用膜分离法从猪血中分离纯化凝血酶的工艺研究 119-121页 1-3 第27卷, 第11期 2 *
《氨基酸和生物资源》 19990930 张华山 猪血蛋白的酶水解及氨基酸含量 35-37页 1-3 第21卷, 第3期 2 *
《江西农业学报》 20070731 瞿桂香等 不同蛋白酶水解猪血红蛋白制备血红素的对比研究 92-93页 1-3 第19卷, 第7期 2 *
《河北省科学院学报》 20021130 辛春艳等 从猪血综合提取凝血酶等生化产品的研究 250-253页 1-3 第19卷, 第4期 2 *
《肉类工业》 20050531 于美娟等 复合酶水解猪血液工艺条件的研究 14-17页 1-3 , 第5期 2 *

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104450656A (zh) * 2014-09-09 2015-03-25 青岛康大食品有限公司 兔血中凝血酶的纯化制备方法
CN104431413A (zh) * 2014-10-16 2015-03-25 浙江索纳克生物科技有限公司 一种综合利用猪血的方法
CN105132399A (zh) * 2015-09-28 2015-12-09 海安县华润食品有限公司 一种猪血提取血浆蛋白粉的方法
CN105950576A (zh) * 2016-05-26 2016-09-21 成都远睿生物技术有限公司 一种从牛血中提取多种蛋白的方法
CN106086140A (zh) * 2016-08-10 2016-11-09 柳江县渡庄生物科技有限公司 一种微波辅助与膜过滤制备淡水鱼血肽的方法
CN106107574A (zh) * 2016-08-11 2016-11-16 安徽省农业科学院农产品加工研究所 一种猪血源复合微量元素补充剂的制备方法
CN106261816A (zh) * 2016-08-11 2017-01-04 安徽省农业科学院农产品加工研究所 一种猪血源补铁剂中间体及其成品的制备方法
CN106261817A (zh) * 2016-08-11 2017-01-04 安徽省农业科学院农产品加工研究所 一种猪血的高效酶解利用方法
CN107699555A (zh) * 2017-11-17 2018-02-16 浙江丰安生物制药有限公司 一种猪血凝血酶的制备方法
CN108902502A (zh) * 2018-07-20 2018-11-30 福建永诚农牧科技集团有限公司 一种中猪全价配合饲料

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