CN108703912B - 一种雪菊总黄酮提取物及其制备方法和在化妆品中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种雪菊提取物及其制备方法和在化妆品中的应用。本发明采用乙醇加热浸提法从雪菊中获得雪菊总黄酮，该制备方法包括：取雪菊的头状花絮，干燥，粉碎，与一定浓度的乙醇水溶液混合，加热至一定温度，持续浸提一定时间后，获得提取液；取提取液，减压回收溶剂，获得雪菊总黄酮粗提物；取雪菊总黄酮粗提物，经大孔树脂纯化后，减压回收溶剂，干燥既得。本发明提取工艺流程简单，生产成本低，通过高温加热可加快有效成分的溶出速率，缩短提取时间；且实验表明，雪菊总黄酮提取物在UVB和UVA波段具有强烈的紫外吸收，对酪氨酸酶有着良好的抑制作用，可作为植物添加剂用于防晒和美白化妆品的开发，扩大了雪菊的应用范围。

Description

一种雪菊总黄酮提取物及其制备方法和在化妆品中的应用

技术领域

本发明涉及雪菊总黄酮的提取物及其制备方法与应用，尤其是在防晒和美白化妆品方面的应用。

背景技术

雪菊，学名为两色金鸡菊(Coreopsis tinctoria Nutt.)，是菊科金鸡菊属一年生草本植物，起源于美国的中西部，在我国主要分布于新疆和田地区海拔约3000m的昆仑山区，是世界上唯一一种在雪线上生长的野生纯天然菊花，与雪莲、和田玉一起被称为“新疆三宝”。雪菊作为一种药食同源的植物，其药理作用广泛，研究发现其具有具有降血压、降血脂、抗衰老、抗肿瘤等药用价值。雪菊含有黄酮类、氨基酸、挥发油、糖类等多种化学成分，目前已从中分离鉴定出300多种具有生物活性的天然成分，其中包括30多种黄酮类物质，其黄酮类化合物含量超过了12％，远远超过了其他各种菊类。

紫外线作为人体长期接触的一个外界刺激因素，它对黑色素形成过程中细胞间信号传送与化学递质进行的信息传递会产生直接或者间接作用，可分为UVA、UVB、UVC波段，其中UVC大部分被臭氧层所滤掉，难以到达地面；UVB能穿透到表皮层，使皮肤表现为红斑或晒斑；UVA穿透力极强，可以直达肌肤的真皮层，引起即时红斑和即时黑色素沉积，形成新的黑色素。目前市面上的防晒剂大多是在UVB波段进行防护，且为人工合成，具有一定的刺激性和光敏性，用量大时易导致皮肤过敏。因此寻找一种刺激性低，副作用少，且具有广谱防晒性，能从源头上达到美白功效的天然植物活性成分，具有广阔的前景。

随着生活水品的提高，化妆品已经成为人们日常生活的必需品，对化妆品的品质要求也越来越高。“崇尚自然”成为世界各国化妆品的主要发展趋势，力求在化妆品中使用天然植物原料。邱佳俊等研究发现，雪菊总黄酮提取物体外对DPPH、ABTS自由基具有显著的清除能力，具有优良的抗氧化能力，使其在化妆品领域有潜在的巨大用途。专利CN102961280A报道了雪菊活性部位在抗衰老化妆品中的应用，专利CN102961281A仅通过检测雪菊活性部位对体外酪氨酸美的抑制能力来评价其美白功效。目前对雪菊总黄酮提取物在化妆品中的应用开发处于起步阶段，雪菊总黄酮的提取制备和纯化技术不完善，缺乏全面有效控制雪菊总黄酮质量的标准化生成和检测体系，尚未见雪菊总黄酮对美白和防晒的功效评价和产品开发报道，限制了雪菊在化妆品行业的深入开发和市场化应用。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的是提供一种雪菊总黄酮提取物及其应用，尤其是在制备防晒和美白化妆品中的应用。同时提供了雪菊总黄酮提取物的制备方法，通过该方法制备获得的雪菊总黄酮提取物与现有的技术相比，具有提取工艺简单，可操作性强，得率高等优点。

本发明提供了一种雪菊总黄酮提取物，其中的总黄酮含量为35～95％，其中绿原酸的含量不低于0.4％。

本发明提供的雪菊总黄酮提取物的制备方法包括以下步骤：

步骤1：取雪菊头状花絮，干燥粉碎，过50目筛后，与一定浓度的乙醇水溶液混合，加热至一定温度，持续浸提一定时间后，获得提取液；

步骤2：取提取液，减压回收溶剂，获得雪菊总黄酮粗提物；

步骤3：取雪菊总黄酮粗提物，经大孔树脂纯化后，减压回收溶剂，干燥获得雪菊总黄酮提取物。

作为优选，本发明提供的雪菊总黄酮提取物的制备方法中，乙醇水溶液中乙醇的体积分数为20～80％；雪菊头状花絮与所述的乙醇水溶液的质量-体积比为1:5～1:50，所述的加热温度为30～80℃，提取时间为0.5～2h。

优选的，乙醇水溶液中乙醇的体积分数为60％，雪菊头状花絮与所述的乙醇水溶液的质量-体积比为1:30，所述的加热温度为50℃，提取时间为1.0h。

作为优选，本发明提供的雪菊总黄酮提取物的制备方法中，提取次数为1～4次；

优选的，提取次数为2次。

作为优选，本发明提供的雪菊总黄酮提取物的制备方法中，所述的步骤2减压干燥步骤具体实现：获得的提取液在45～60℃旋转蒸发，去除经过步骤1得到的提取液中的乙醇，得到雪菊总黄酮的粗提取。

作为优选，本发明提供的雪菊总黄酮提取物的制备方法中，所述的大孔树脂为中等极性或弱极性大孔树脂，所述的步骤3具体实现：将步骤2获得的雪菊总黄酮粗提物用水溶解后，将滤液通过大孔吸附树脂吸附，先后用水和低浓度乙醇洗脱到无色后，依次用40～95％浓度的乙醇梯度洗脱，收集40～95％的乙醇洗脱液。

优选的，乙醇的洗脱浓度为70％，收集70％的乙醇洗脱液。

作为优选，本发明提供的雪菊总黄酮提取物的制备方法中，所述的步骤3的减压干燥步骤具体为：将获得的提取液在45～60℃旋转蒸发，去除经过步骤3得到的洗脱液中的乙醇，经真空干燥或低温冷冻干燥后，得到雪菊总黄酮的提取物。

优选的，雪菊总黄酮提取物的干燥方法为真空干燥。

本发明还提供了雪菊总黄酮提取物作为紫外吸收剂和酪氨酸酶抑制剂在防晒和美白化妆品中的应用。

本发明提供的实验数据表明，本发明提供的雪菊总黄酮提取物在浓度为0.008％时，在UVB波段(280-320nm)和UVA波段(320-400nm)下的平均吸光度分别为1.775和1.793，在紫外线UVB和UVA波段都具有强烈的吸收；此外，本发明提供的雪菊总黄酮提取物对酪氨酸酶有着良好的抑制作用，作用48h时抑制酪氨酸酶活性的IC50值仅为25.88ug/mL，显著优于阳性对照品熊果苷。

本发明的优点和有益效果如下：

1.本发明以雪菊的头状花絮为原料，通过乙醇加热浸提法和大孔树脂纯化法获得雪菊的总黄酮提取物，建立了群体化学特征整体性的HPLC指纹图谱质量评价方法，以保证雪菊总黄酮提取物的质量稳定性。本发明所述的雪菊总黄酮提取物的制备方法工艺合理，简便易行，生产成本低，黄酮类化合物的得率和纯度高，可用于大批量的工业化生产，具有广阔的市场应用前景。

2.本发明制得的雪菊总黄酮提取物在UVB和UVA波段具有强烈的紫外吸收，对小鼠黑色素瘤B16细胞的酪氨酸酶活性具有良好的抑制作用，其酪氨酸酶抑制活性显著优于阳性对照品熊果苷，因此本发明提供的雪菊总黄酮提取物可用于制备防晒美白的化妆品。

附图说明

图1：不同因素对雪菊总黄酮提取物得率的影响，其中图1A为不同乙醇浓度对雪菊总黄酮得率的影响，其中图1B为不同提取温度对雪菊总黄酮得率的影响，其中图1C为不同浸提时间对雪菊总黄酮得率的影响，其中图1D为不同料液比对雪菊总黄酮得率的影响。

图2：雪菊总黄酮提取物的HPLC指纹图谱，其中含量高、分离度好的特征峰共10个，分别以阿拉伯数字1-10表示，以绿原酸作为对照品，在图中为峰2。

图3：雪菊总黄酮提取物的紫外吸收图谱，其中UVB波段为280-320nm，UVA波段为320-400nm。

图4：雪菊总黄酮提取物对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖活性的影响。

图5：雪菊总黄酮提取物对酪氨酸酶活性的影响。

具体实施方式

本发明下述实施例所指的的雪菊总黄酮提取物中总黄酮的测定方法参照《中国药典》2015版一部附录的山楂叶总黄酮检测的具体方法，以芦丁为对照品，经反应后，在510nm处测定吸收度，并计算总黄酮的含量。

本发明采用的试剂均为普通市售品。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1：雪菊总黄酮提取物的制备方法，步骤如下：

(1)雪菊总黄酮提取物的单因素考察

将雪菊干燥头状花絮粉碎后，精密称定雪菊干燥样品若干份，每份0.5g，置于50mL圆底烧瓶中，考察乙醇浓度、提取温度、提取时间、液料比对黄酮得率的影响，具体结果见图1。

乙醇浓度对雪菊总黄酮提取效率的影响考察：取样品粉末3份，分别加入水、30％、50％、70％和95％的乙醇10mL，60℃加热提取60min，趁热过滤后，用对应浓度的乙醇定容至100mL，测定总黄酮含量，结果见图1A。雪菊总黄酮的提取得率随着乙醇浓度的提高而增加，在乙醇浓度为60％左右时达到最大值，其总黄酮的得率可达200.0mg/g，之后随着乙醇浓度的提升而呈现下降趋势，可能是由于过高的乙醇浓度会使溶剂极性降低，导致总黄酮的提取率下降。单因素考察结果表明，60％左右的乙醇溶液对雪菊总黄酮具有较好的提取效果，所以确定后续正交优化考察的乙醇浓度的水平值为50％、60％和70％。

提取温度对雪菊总黄酮提取效率的影响考察：取样品粉末3份，分别加入60％的乙醇10mL，分别在30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃条件下提取90min，趁热过滤后，用对应浓度的乙醇定容至100mL，测定总黄酮含量，结果见图1B。雪菊总黄酮的提取得率随着提取温度的升高而增加，在提取温度为50℃时达到最大值，其总黄酮的得率可达210.8mg/g，之后随着提取温度的升高而呈现下降趋势，这可能是由于随着温度增加，乙醇逐渐接近沸点，挥发速度加快，使乙醇溶液浓度下降，不利于黄酮类物质的溶出。因此后续正交优化考察的提取温度的水平值为40℃、50℃和60℃。

提取时间对雪菊总黄酮提取效率的影响考察：取样品粉末3份，分别加入60％的乙醇10mL，在60℃加热提取30min、60min、90min、120min、150min，趁热过滤后，用对应浓度的乙醇定容至100mL，测定总黄酮含量，结果见图1C。雪菊总黄酮的提取得率随着提取时间的增加而增加，在提取时间为90min时达到最大值，其总黄酮的得率可达215.8mg/g，之后随着提取时间的增加而呈现下降趋势，可能是随着提取时间的延长，样品中其他醇溶性物质被浸提出来，导致总黄酮提取率下降。单因素考察结果表明，提取时间为90min时对雪菊总黄酮具有较好的提取效果，所以确定后续正交优化考察的提取时间的水平值为60min、90min和120min。

液料比对雪菊总黄酮提取效率的影响考察：取样品粉末3份，分别加入60％的乙醇5mL、10mL、15mL、20mL、25mL，在60℃加热提取90min，趁热过滤后，用对应浓度的乙醇定容至100mL，测定总黄酮含量，结果见图1D。雪菊总黄酮的提取得率随着液料比的增加而增加，在液料比为30:1时达到最大值，其总黄酮的得率可达211.3mg/g，之后随着提取液料比的增加而趋于平缓，这肯能是由于当溶剂用量增大到一定程度后，物料中的总黄酮大部分已被提取出来，此时料液比对提取率的影响不明显。因此，从节能降耗的角度考虑，确定后续正交优化考察的液料比的水平值为25:1、30:1、35:1。

(2)雪菊总黄酮提取物的正交工艺优化

根据单因素实验结果，选取乙醇浓度、液料比、提取时间、提取温度为考察因素，考察雪菊中总黄酮的提取工艺。精密称取干燥的雪菊粉末3份，每份0.5g，按L9(3⁴)正交表进行试验，因素水平见表1，试验安排及结果见表2。

由表2可知，4个因素对总黄酮提取率的影响从大到小依次是：乙醇浓度>液料比>提取时间>提取温度，得到的理论最佳工艺为A₃B₂C₃D₂，即提取溶剂为70％的乙醇，液料比为30:1，提取时间为120min，提取温度为50℃。由于A₃B₂C₁D₂与理论最优工艺相差不大，且提取时间减少一半，有利于节约成本，故将这两个组合分别再提取做验证试验。

根据以上结果，按提取溶剂为70％的乙醇，液料比为30:1，提取温度为50℃，提取时间60、120min，分别提取三次进行验证，验证结果见表3。试验结果表明：提取时间为60min和120min时黄酮得率分别为250.27和249.63mg/g，差异不大，因此综合得率与成本，最佳的提取工艺为提取溶剂为70％的乙醇，液料比为30:1，提取温度为50℃，提取时间为60min，且三次实验RSD值为1.93％，结果稳定，说明该工艺组合可靠，适合于进行雪菊总黄酮的提取。

表1正交实验因素水平表

表2正交直观分析结果

表3雪菊总黄酮提取工艺验证

(3)雪菊总黄酮提取物的纯化

称取处理好的AB-8大孔树脂，湿法装柱。将由10g雪菊干燥粉末得到的雪菊总黄酮粗提物用水充分溶解过滤后，以2mL/min流速上柱，直至用1％FeCl₃溶液检查流出液，待反应呈阳性(检测显色时)，表明有黄酮流出，树脂吸附达到饱和，停止上样；吸附1小时后，先用去离子水洗脱至无色，再用70％的乙醇溶液进行洗脱，流速控制为3BV/h，洗脱剂用量5BV，收集洗脱液，减压浓缩至粘稠状，再于真空干燥箱中干燥而得。最终得到的雪菊总黄酮提取物干燥粉末有1.12g，其黄酮含量为92％，与纯化前的总黄酮粗提物相比，其纯度增加了2.3倍。

实施例2：雪菊总黄酮提取物的品质检测

(1)指纹图谱

精密称取干燥至衡重的提取物粉末50mg，置于5mL容量瓶中，加入超纯水溶解后定容至刻度，配成10mg/mL的溶液，取上清液，过0.22μm微孔滤膜后取滤液上高效液相色谱仪进行检测，其中流动相A为pH＝2.5的冰醋酸水溶液，流动相B为乙腈；色谱柱为AglientPoroshell 120EC-C18(4.6*100mm，2.7μm)；色谱条件为流速为1.0mL/min，波长280nm，柱温35℃，进样量10μL，以绿原酸作为对照品。

雪菊总黄酮提取物的色谱结果如图3所示，共得到了27个色谱峰，其中含量高、分离度较好的色谱峰有10个，分别在图中标记为阿拉伯数字1-10，上述色谱峰可用于雪菊总黄酮提取物的质量控制。以绿原酸作为对照品，计算获得的雪菊总黄酮提取物中绿原酸含量为0.88％。

(2)感官性状

启开试样后，立即嗅其味；取适量样品置于白色瓷盘或透明塑料瓶中，在自然光照下，观察其色泽、状态，并检查有无异物。结果表明雪菊提取物气香，味甜，呈黄色至红棕色粉末。

(3)折光率、相对密度、pH、水分、灰分

水分检测参照《中国药典》2015年版第四部(通则0832)，灰分检测参照照《中国药典》2015年版第四部(通则0841)炽灼残渣检查法。

将干燥粉末，溶于50％1,3-丁二醇中，浓度为0.2％，分别用阿贝折光仪、比重瓶以及精密pH检测复溶液的折光率、相对密度、以及pH，结果见表4：

表4雪菊提取物基本理化参数

实施例3：雪菊总黄酮提取物的防晒功效评价

化妆品防晒功效评价可采用体外法以及人体实验法，其中体外法包括紫外分光光度计法与紫外透射率分析仪测定法。对于植物提取物来说，可以通过紫外分光光度计法来进行评价其防晒功效。因此。将本发明所得的雪菊总黄酮提取物用蒸馏水配制成浓度为0.008％的溶液，用紫外分光光度计在280-400nm范围内，每隔10nm进行扫描，色谱图结果见图3。由图可知，雪菊总黄酮提取物在波长为372nm时有最大吸收波长，吸光度值为1.903；UVA和UVB波段的平均吸光度为1.775和1.793，因此雪菊总黄酮提取物在长波、短波紫外区域都具有强烈的吸收，是广谱性的紫外吸收剂。

参照Mansur^[1]经典数学方程式计算SPF值和UVA与UVB的比值来具体评价防晒功效，计算方法如下：

SPF＝CF x∑_290-320EE(λ)xI(λ)xA(λ)

其中，SPF(Sun Protect Factor，防晒指数)表示对紫外线UVB的防御能力；UVA/UVB表示UVA下紫外吸收能力与UVB下的比值，值大于1，表示UVA下的紫外吸收能力强于UVB，且比值越大，表示对长波紫外线的防御能力越强。CF为相关系数10，EE(λ)为中波紫外线λ下的红斑系数，EE(λ)与I(λ)的乘积为实验常数，具体见表5。

表5 EE(λ)与I(λ)的乘积

Wavelength(nm)	EE xI(normalized)	Abs
			290	0.0150	1.457
295	0.0817	1.447
			300	0.2874	1.390
305	0.3278	1.359
			310	0.1864	1.379
315	0.0839	1.386
			320	0.0180	1.378

由以上公式计算，雪菊提取物在0.008％的浓度下UVB的SPF值13.62，UVA/UVB＝2.97。与文献对比研究，芦丁、奥丙酮-3等经典防晒剂在0.02％浓度时，UVB下的SPF值分别为3.44和8.75，UVA/UVB分别为1.20、0.33(Kostyuk V，Potapovich A，Albuhaydar AR，etal.Natural Substances for Prevention of Skin Photoaging：Screening Systems inthe Development of Sunscreen and Rejuvenation Cosmetics[J].RejuvenationRes.2018.21(2)：91-101.)；印度苦楝树、芦荟、番木瓜、欧薄荷叶等6种植物提取物在0.01％时，最佳的防晒指数为欧薄荷叶，其SPF值仅有8.18(Gupta D.UV AbsorbingProperties of Some Plant Derived Extracts[J].Res J Chem Environ Sci.2013.1(2)：34-36.)。上述实验结果表明，本发明所获得的雪菊总黄酮提取物对UVB和UVA具有很好的吸收和防护效果，可作为添加剂用于防晒化妆品的开发。

实施例4：雪菊总黄酮提取物对小鼠B16黑素瘤细胞存活率的影响

本发明采用噻唑蓝(MTT)法检测雪菊总黄酮提取物对小鼠B16细胞增殖的影响。将本发明提供的雪菊总黄酮提取物用培养基配制成1mg/mL的母液冻存，备用。测试开始前，取配置好的母液1mL，向母液中加入9mL培养基，配制成100μg/mL的储备加药浓度。取对数生长期的细胞，用培养基调节成细胞密度至3.5×10⁴个/mL，将细胞接种于96孔板中，每孔100μL，37℃，5％CO₂饱和湿度环境下孵育24h。向检测组的培养孔中加入不同终浓度的本发明提供的雪菊总黄酮提取物，使每孔中雪菊总黄酮提取物的终浓度分别为：25μg/mL，50μg/mL，70μg/mL，80μg/mL，90μg/mL，100μg/mL，并设立对照组：单纯培养基组、阳性药对照组(熊果苷，浓度：320μg/mL)，和空白对照组(培养基)，置于孵箱中作用48h。向每孔加20μL浓度为5mg/mL MTT溶液，在孵箱中作用4h后.小心吸除培养孔内的上清，再向每孔加入100μLDMSO，震荡10min，使结晶完全溶解后，放置于酶标仪上，选取检测波长为492nm，测定吸光度值，并计算细胞存活率，细胞存活率的计算公式如下：

结果如图4所示，本发明提供的纯化雪菊总黄酮在浓度为25μg/mL，50μg/mL，70μg/mL，80μg/mL，90μg/mL，100μg/mL时使B16黑素瘤细胞的存活率分别为56.00％，54.64％，54.73％，56.03％，46.85％，50.27％。用Graphpad Prism 5.0计算纯化雪菊总黄酮导致细胞存活率下降50％的抑制浓度(IC₅₀)为41.57μg/mL。

实施例5：雪菊总黄酮提取物对酪氨酸酶活性的影响

酪氨酸酶是黑素合成的主要限速酶，通过抑制酪氨酸酶的活性，可以减少黑素的合成。本发明采用多巴氧化法测定小鼠B16细胞酪氨酸酶活性，评价雪菊总黄酮提取物的美白功效。将本发明提供的雪菊总黄酮提取物用培养基配制成1mg/mL的母液冻存，备用。测试开始前，取配制好的雪菊总黄酮提取物母液1mL，向母液中加入9mL培养基，配制成100μg/mL的储备加药浓度；取配制好的雪菊总黄酮提取物配制成400μg/mL的储备加药浓度。取对数生长期的细胞，用培养基调节成细胞密度至3.5×10⁴个/mL，将细胞接种于96孔板中，每孔100μL，37℃，5％CO₂饱和湿度环境下孵育24h。向检测组的培养孔中加入不同终浓度的本发明提供的雪菊总黄酮提取物，使每孔中雪菊总黄酮提取物终浓度分别为：25μg/mL，50μg/mL，70μg/mL，80μg/mL，90μg/mL，100μg/mL，并设立对照组：单纯培养基组、阳性药对照组(熊果苷，浓度：320μg/mL)，和空白对照组(培养基)，置于孵箱中作用48h。吸去药液，用PBS洗2次后，每孔加1％TritonX-100溶液100μL，迅速放入-80℃冰箱冻存1h，随后移至室温下融化使细胞完全破裂、分解，在37℃预温后每孔加入0.1％L-DOPA 100μL，于37℃水浴2h，后置酶标仪下测A₄₉₂，测定吸光度值，并计算细胞存活率，细胞存活率的计算公式如下：实验重复三次。

测试结果如图5所示：本发明提供的雪菊总黄酮提取物在浓度为25μg/mL，50μg/mL，70μg/mL，80μg/mL，90μg/mL，100μg/mL时使B16黑素瘤细胞中酪氨酸酶的活性分别降低为58.50％，30.05％，20.04％，16.28％，13.60％，13.42％。用Graphpad Prism 5.0计算雪菊总黄酮提取物浓度导致酪氨酸酶活性下降50％的抑制浓度(IC₅₀)为25.88μg/mL。熊果苷作为阳性对照，在浓度为320μg/mL时，B16黑素瘤细胞中酪氨酸酶活性降低仅为41.68％，显著低于本发明所提供的雪菊总黄酮提取物。说明本发明提供的雪菊总黄酮提取物具有显著的抑制酪氨酸酶活性，可作为添加剂应用于美白化妆品中。

Claims (2)

1.一种雪菊总黄酮提取物，其特征在于所述雪菊总黄酮提取物中黄酮的含量为92～95％，其中绿原酸的浓度不低于0.4％；且其制备方法包括如下步骤：

步骤1：取雪菊的头状花絮，干燥、粉碎，与质量浓度为70％的乙醇水溶液混合，所述的雪菊头状花絮与所述的乙醇水溶液的质量-体积比为1g:30ml，提取温度为50℃，提取时间为60min或120min，

步骤2：将获得的提取液在45～60℃旋转蒸发，去除经过步骤1得到的提取液中的乙醇，得到雪菊总黄酮的粗提物；

步骤3：取雪菊总黄酮粗提物，经大孔树脂纯化后，减压回收溶剂，干燥获得雪菊总黄酮提取物，具体：称取处理好的AB-8大孔树脂，湿法装柱；将得到的雪菊总黄酮粗提物用水充分溶解过滤后，以2mL/min流速上柱，直至用1％FeCl₃溶液检查流出液，待反应呈阳性，表明有黄酮流出，树脂吸附达到饱和，停止上样；吸附1小时后，先用去离子水洗脱至无色，再用70％的乙醇溶液进行洗脱，流速控制为3BV/h，洗脱剂用量5BV，收集洗脱液，减压浓缩至粘稠状，再于真空干燥箱中干燥而得；最终得到的雪菊总黄酮提取物干燥粉末。

2.根据权利要求1所述的雪菊总黄酮提取物在制备美白和防晒化妆品中的应用，其特征在于雪菊总黄酮提取物在长波、短波紫外区域都具有强烈的吸收，是广谱性的紫外吸收剂，且雪菊总黄酮提取物具有显著的抑制酪氨酸酶活性。

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