CN108697797A - 通过施用angptl3的抑制剂治疗或预防动脉粥样硬化的方法 - Google Patents

通过施用angptl3的抑制剂治疗或预防动脉粥样硬化的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供治疗或预防受试者中动脉粥样硬化的方法和组合物。本发明的方法包括向患有动脉粥样硬化或面临形成动脉粥样硬化的风险的受试者施用血管生成素样蛋白‑3(ANGPTL3)的抑制剂。在某些实施方案中，ANGPTL3抑制剂是是特异性结合ANGPTL3的抗体或其抗原结合片段。

Description

通过施用ANGPTL3的抑制剂治疗或预防动脉粥样硬化的方法
序列表
本申请含有已经通过电子方式以ASCII格式提交并因而通过引用方式完整并入的序列表。2017年2月8日创建的所述ASCII副本命名为0431_23-PCT_SL.txt并且大小为14,141比特。
技术领域
本发明涉及动脉粥样硬化疾病和相关病症的治疗性疗法领域。更具体地，本发明涉及ANGPTL3抑制剂治疗或预防动脉粥样硬化的用途，以及消除或减少受试者中动脉粥样硬化斑块形成和/或动脉粥样硬化性损害的方法。
背景技术
动脉粥样硬化是影响动脉血管的综合征。动脉粥样硬化因动脉壁中的慢性炎症反应产生并且是死亡和心血管发病的主要原因。动脉粥样硬化包括动脉壁增厚并且特征在于形成动脉斑块和最终约束或堵塞血流。动脉粥样硬化现有治疗包括膳食和生活方式调整(例如戒烟)、药物干预(例如，他汀类、抗凝剂等)和手术(例如，血管成形术、支架、旁路手术等)。在人类受试者中直接评价药物干预对动脉粥样硬化形成的有效性是棘手的，原因在于难以准确检测和测量活受试者中的斑块和动脉损害。动脉粥样硬化动物模型因此对开发和测试新的动脉粥样硬化治疗性疗法非常有用。
本领域需要用于治疗、预防或改善动脉粥样硬化的新方法。
发明简述
本发明提供治疗、预防或减弱受试者中动脉粥样硬化的方法、用途和组合物。本发明的方法包括向受试者施用一剂或多剂血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)抑制剂。本发明的治疗方法导致减少有需求的受试者中的动脉粥样硬化斑块和动脉粥样硬化损害形成。本发明的方法还可用于降低受试者中的血清总胆固醇、LDL胆固醇和甘油三酯及用于治疗通过降低总胆固醇、LDL胆固醇和/或甘油三酯中一者或多者可治疗的疾病和病症。
根据本发明的某些实施方案，在开始用一剂或多剂ANGPTL3抑制剂治疗之前或之时，受试者经诊断患有杂合家族性高胆固醇血症(HeFH)或纯合家族性高胆固醇血症(HoFH)和/或升高的脂蛋白(a)(Lp[a])。本发明还包括用于治疗、预防或减弱患有本质上并非家族性的高胆固醇血症(即，非家族性高胆固醇血症)的受试者中动脉粥样硬化的方法。在某些实施方案中，通过本发明方法可治疗的受试者包括那些患有或经诊断患有心血管疾病(例如，动脉粥样硬化性心血管疾病)的受试者。在某些实施方案中，通过本发明方法可治疗的受试者是已经罹患卒中或心肌梗死的受试者。
根据本发明的某些实施方案，将ANGPTL3抑制剂作为患者的现有脂质调节疗法的附加疗法(例如，接续患者的背景他汀疗法)施用至患者。
可以在本发明方法的背景下使用的示例性ANGPTL3抑制剂例如包括抗ANGPTL3抗体、基于核酸的ANGPTL3抑制剂、小分子ANGPTL3抑制剂和基于支架的ANGPTL3结合分子。
本发明的其他实施方案将从查看后续详述中变得显而易见。
附图简述
图1是研究流程图，其说明本文实施例2中所述的整个研究过程期间对动物进行的程序、施用法和测量。
图2A和图2B显示在本文实施例2中所述的整个研究过程期间不同时间点，来自不同治疗组(治疗的对照组，实心方块[■]；或evinacumab治疗组，实心圆圈[●])的动物的胆固醇水平。图2A显示随时间推移(以周计)的平均胆固醇水平(mM)。图2B显示在第13周的总胆固醇暴露量(mM x wks)。
图3显示在本文实施例2中所述的整个研究过程期间不同时间点，来自不同治疗组(治疗的对照组，实心方块[■]；或evinacumab治疗组，实心圆圈[●])的动物的甘油三酯水平(mM)。
图4A、图4B和图4C显示在本文实施例2中所述的整个研究过程期间不同时间点，来自不同治疗组(治疗的对照组，实心方块[■]；或evinacumab治疗组，实心圆圈[●])的动物的胆固醇脂蛋白概况(mM，脂蛋白分离后)。在Superose柱上分离脂蛋白，并且显示的值是在所示的多个时间点处每组的混合血浆中来自胆固醇测量的绝对值。图4A显示来自研究时间＝0处抽取的血浆的不同级分的胆固醇水平。图4B显示来自研究时间＝6周处抽取的血浆的不同级分的胆固醇水平。图4C显示来自研究时间＝13周处抽取的血浆的不同级分的胆固醇水平。
图5A、图5B和图5C显示在本文实施例2中所述的整个研究过程期间不同时间点，来自不同治疗组(治疗的对照组，实心方块[■]；或evinacumab治疗组，实心圆圈[●])的动物的甘油三酯脂蛋白概况(mM，脂蛋白分离后)。在Superose柱上分离脂蛋白，并且显示的值是在所示的多个时间点处每组的混合血浆中来自甘油三酯测量的绝对值。图5A显示来自研究时间＝0处抽取的血浆的不同级分的甘油三酯水平。图5B显示来自研究时间＝6周处抽取的血浆的不同级分的甘油三酯水平。图5C显示来自研究时间＝13周处抽取的血浆的不同级分的甘油三酯水平。
图6A和图6B显示在本文实施例2中所述的研究第13周，来自不同治疗组(治疗的对照组，空心棒或圆圈；或evinacumab治疗组，实心棒或圆圈)的动物的动脉粥样硬化性损害面积。图6A显示不同治疗组的每个截面(x1000μm2)的平均动脉粥样硬化性损害面积。图6B是总损害面积的散点图，其显示不同治疗组中单个动物的每个截面(x1000μm2)的动脉粥样硬化性损害面积。
图7A和图7B显示在本文实施例2中所述的研究第13周，来自不同治疗组(治疗的对照组，空心棒；或evinacumab治疗组，实心棒)的动物中所观察到的来自动脉粥样硬化性损害(归类为IV型或V型)中截面的平均坏死水平。图7A显示每截面的坏死面积绝对值(μm2x1000)。图7B显示损害的坏死水平相对值(损害面积的百分数)。
发明详述
在描述本发明之前，应该理解本发明不限于所描述的具体方法和实验条件，因为这样的方法和条件可以变化。还应该理解的是，文中使用的术语仅仅是为了描述特定实施方案的目的，而不是为了限制，因为本发明的范围将仅由所附权利要求来限制。
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。如本文所使用的，术语“约”在用于提及特定的所述数值时意指该值可以不超过1％地与所述值不同。例如，如在此使用的，表述“约100”包括99和101以及之间的所有值(例如99.1、99.2、99.3、99.4等)。
虽然在本发明的实施中可以使用与本文中所述相似或等价的任何方法和材料，现在描述了优选的方法和材料。本文中提到的全部出版物均通过描述其完整性的引用方式并入本文。
用于预防或减弱动脉粥样硬化的方法
本发明一般地涉及预防或减弱受试者中动脉粥样硬化的方法和组合物。本发明的方法包括向有需求的受试者施用一剂或多剂血管生成素样蛋白-3(ANGPTL3)抑制剂。根据某些实施方案，本发明的方法导致受试者中的动脉粥样硬化斑块形成减少。例如，本发明的方法可以导致以下一种或多种情况：受试者中动脉粥样硬化性损害面积减少和/或动脉粥样硬化性损害的坏死面积减少。
患者选择
根据本发明的某些实施方案，通过本发明方法可治疗的受试者包括但不限于患有或经诊断患有动脉粥样硬化的受试者或面临形成动脉粥样硬化的风险的受试者。因此，本发明的方法包括选择患有动脉粥样硬化或面临形成动脉粥样硬化的风险的受试者，并且向受试者施用一剂或多剂血管生成素样蛋白-3(ANGPTL3)抑制剂。如本文所用，“面临形成动脉粥样硬化的风险的”受试者包括具有或显示出一个或多个动脉粥样硬化风险因素的受试者。动脉粥样硬化的风险因素是本领域熟知的并且包括而不限于：血清低密度脂蛋白(LDL)胆固醇水平升高、血清甘油三酯(TG)水平升高、血清高密度脂蛋白(HDL)胆固醇水平降低、高血压、糖尿病、家族史和吸烟。对给定受试者评估动脉粥样硬化风险因素的方法也是本领域熟知的。
根据本发明的某些实施方案，通过本发明方法可治疗的受试者是这样受试者，其中在开始用一剂或多剂ANGPTL3抑制剂治疗之前或之时，所述受试者经诊断患有杂合家族性高胆固醇血症(HeFH)、纯合家族性高胆固醇血症(HoFH)、升高的脂蛋白(a)(Lp[a])、常染色体显性高胆固醇血症(ADH，例如，与LDLR基因、ApoB基因和/或PCSK9基因中一个或多个功能获得型突变相关的ADH)、常染色体隐性高胆固醇血症(ARH，例如，与LDLRAP1中突变相关的ARH)，以及异于家族性高胆固醇血症的高胆固醇血症(非FH)的发生率。可以依据基因分型和/或临床标准作出家族性高胆固醇血症(例如，heFH或hoFH)的诊断。对于未进行基因分型的患者，临床诊断可以基于Simon Broome标准联合确定性FH的标准，或WHO/Dutch脂质网络标准联合>8分的评分。
根据本发明的某些实施方案，通过本发明方法可治疗的受试者是在开始用一剂或多剂ANGPTL3抑制剂治疗之前或之时经诊断患有心血管疾病(CVD)的受试者。也可以基于具有冠状动脉心脏病(CHD)史，选择受试者。如本文所用“CHD史”(或“记录的CHD史”)包括以下一者或多者：(i)急性心肌梗死(MI)；(ii)沉默型MI；(iii)不稳定型心绞痛；(iv)冠状动脉血管再生术(例如，经皮冠状动脉干预治疗[PCI]或冠状动脉旁路移植手术[CABG])；和/或(v)依据侵入型或非侵入型检验(如冠脉血管造影术、使用踏车的负荷试验、负荷超声心动图术或核成像术)诊断的有临床意义的CHD。
根据本发明的某些实施方案，通过本发明方法可治疗的受试者可以基于患有非冠状动脉心脏病心血管疾病(“非CHD CVD”)来选择。如本文所用，“非CHD CVD”包括以下一者或多者：(i)记录的既往缺血性中风伴随迁延超过24小时的视为动脉粥样化血栓形成源性的局灶性缺血性神经系统功能缺损；(ii)外周动脉病；(iii)腹主动脉瘤；(iv)动脉粥样硬化性肾动脉狭窄；和/或(v)颈动脉病(一过性缺血发作或颈动脉阻塞>50％)。
根据本发明的某些实施方案，通过本发明方法可治疗的受试者可以基于具有以下一个或多个附加风险因素来选择，如，例如，(i)记录的如30≤eGFR<60mL/分钟/1.73m2持续3个月或更长所定义的中等慢性肾脏病(CKD)；(ii)伴随或未伴有靶器官损伤(例如，视网膜病变、肾病、微量白蛋白尿)的1型或2型糖尿病；和/或(iii)计算的10年致命性CVD风险评分≥5％(ESC/EAS Guidelines for the management of dyslipidemias，Conroy等人,2003,Eur.Heart J.24:987-1003)。
根据本发明的某些实施方案，通过本发明方法可治疗的受试者可以基于具有选自以下的一个或多个附加风险因素来选择：年龄(例如，年龄超过40、45、50、55、60、65、70、75或80岁)、人种、国籍、性别(男性或女性)、锻炼习惯(例如，定期锻炼者、从不锻炼者)、其他预存医学病状(例如，II型糖尿病、高血压等)和当前用药状态(例如，目前正在服用β阻滞剂、烟酸、依折麦布(ezetimibe)、贝特类、ω-3脂肪酸、胆汁酸树脂等)。
根据本发明的某些实施方案，通过本发明方法可治疗的受试者显示升高水平的一种或多种炎症标志物。可以出于本发明目的，利用全身性炎症的任何标志物。合适的炎症标志物包括而不限于C-反应蛋白、细胞因子(例如，IL-6、IL-8、和/或IL-17)和细胞黏附分子(例如，ICAM-1、ICAM-3、BL-CAM、LFA-2、VCAM-1、NCAM和PECAM)。
根据本发明的某些实施方案，通过本发明方法可治疗的受试者可以基于一个或多个前述选择标准或治疗性特征的组合来选择。例如，根据某些实施方案，适于本发明方法治疗的受试者还可以基于患有heFH或非FH结合以下项来选择：(i)记录的CHD史，(ii)非CHDCVD，和/或(iii)糖尿病伴随靶器官损伤；这类患者也可以基于具有大于或等于70mg/dL的血清LDL-C浓度来选择。
根据本发明的某些实施方案，通过本发明方法可治疗的受试者患有借助每日中等剂量治疗性他汀治疗方案未充分控制的高胆固醇血症，并且还可以基于以下来选择：患有heFH或非FH未伴有CHD，或患有非CHDCVD，但是具有(i)≥5％的计算的10年致命性CVD风险评分；或(ii)糖尿病未伴有靶器官损伤；这类受试者也可以基于具有大于或等于100mg/dL的血清LDL-C浓度来选择。
根据本发明的某些实施方案，通过本发明方法可治疗的受试者是患有家族性乳糜微粒血症综合征(FCS；也称作脂蛋白脂酶缺乏症)的受试者。
根据本发明的某些实施方案，通过本发明方法可治疗的受试者是正在接受或(例如，在最近六个月以内、最近12周以内、最近8周以内、最近6周以内、最近4周以内、最近2周以内等)曾接受过脂蛋白清血法的受试者。
施用ANGPTL3抑制剂作为附加疗法
本发明包括预防或减弱受试者中动脉粥样硬化的方法，其中根据特定给药量和频率，向受试者施用ANGPTL3抑制剂，并且其中ANGPTL3抑制剂作为患者预存脂质调整疗法(LMT)的附加(如患者预存每日治疗性他汀方案的附加)施用。(本文他处描述了可以向其附加ANGPTL3抑制剂的具体、示例性每日治疗性他汀治疗方案)。
例如，本发明的方法包括附加治疗方案，其中ANGPTL3抑制剂作为患者接受ANGPTL3抑制剂之前正在接受的同一个稳定每日治疗性他汀治疗方案的附加疗法施用(即，相同给药量的他汀)。在其他实施方案中，ANGPTL3抑制剂作为治疗性他汀方案的附加疗法施用，所述治疗性他汀方案包含的他汀量多于或少于患者接受ANGPTL3抑制剂之前正在接受的他汀剂量。例如，在启动包含按特定给药频率和给药量施用的ANGPTL3抑制剂的治疗方案后，根据患者的治疗需要，与启动ANGPTL3抑制剂治疗方案之前患者正在服用的每日他汀剂量相比，向患者施用或开具的每日他汀剂量可以(a)保持相同，(b)增加，或(c)减少(例如，上调或下调)。
疗效
本发明的方法导致受试者的动脉中动脉粥样硬化斑块形成减少和/或防止受试者中动脉粥样硬化进展。例如，本发明的方法可用于限制或减少受试者中的动脉粥样硬化性损害面积和/或动脉粥样硬化性损害的坏死核心面积。
本发明的方法另外可以导致选自LDL-C、ApoB100、非HDL-C、总胆固醇、VLDL-C、甘油三酯、Lp(a)和残余胆固醇的一种或多种脂质组分的血清水平降低。例如，根据本发明的某些实施方案，向合适的受试者施用包含ANGPTL3抑制剂的药物组合物将导致至少约25％、30％、40％、50％、60％或更大的血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)距基线平均降低百分数；至少约25％、30％、40％、50％、60％或更大的ApoB100距基线平均降低百分数；至少约25％、30％、40％、50％、60％或更大的非HDL-C距基线平均降低百分数；至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％或更大的总胆固醇距基线平均降低百分数；至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％或更大的VLDL-C距基线平均降低百分数；至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％或更大的甘油三酯距基线平均降低百分数；和/或至少约5％、10％、15％、20％、25％或更大的Lp(a)距基线平均降低百分数。
ANGPTL3抑制剂
本发明的方法包括向患者施用包含ANGPTL3抑制剂的治疗性组合物。如本文所用，“ANGPTL3抑制剂”是在体外或体内与人ANGPTL3结合或相互作用并且抑制ANGPTL3的正常生物学功能的任何物质。ANGPTL3抑制剂类别的非限制性例子包括小分子ANGPTL3拮抗剂、基于核酸的ANGPTL3表达或活性抑制剂(例如，siRNA或反义)、基于肽的与ANGPTL3特异性相互作用的分子(例如，肽体(peptibody))、与ANGPTL3特异性相互作用的受体分子、结合ANGPTL3的支架分子(例如，DARPin、HEAT重复序列蛋白(tetratricopeptide repeatproteins)，ARM重复序列蛋白、三角形四肽重复序列蛋白、基于纤连蛋白的支架构建体和其他基于天然存在性重复序列蛋白的支架等[参见，例如.，Boersma和Pluckthun,2011,Curr.Opin.Biotechnol.22:849-857，及其中引用的参考文献])和抗ANGPTL3适配体或其部分。根据某些实施方案，可以在本发明背景下使用的ANGPTL3抑制剂是特异性结合人ANGPTL3的抗ANGPTL3抗体或抗体的抗原结合片段。
如本文所用，术语“人血管生成素样蛋白-3”或“人ANGPTL3”或“hANGPTL3”，指具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的ANGPTL3(还参见NCBI登录号NP_055310)或其生物活性片段。
如本文所用的，术语“抗体”意图是指免疫球蛋白分子以及其多聚体(例如IgM)，所述免疫球蛋白分子包含通过二硫键相互连接的四条多肽链，两条重(H)链和两条轻(L)链。每条重链包含重链可变区(本文缩写为HCVR或VH)和重链恒定区。重链恒定区包含三个结构域CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(本文缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域(CL1)。VH和VL区可以进一步细分成称为互补决定区(CDR)的高变区，其中散布有较保守的区，称为框架区(FR)。每个VH和VL由三个CDR和四个FR组成，从氨基末端到羧基末端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本发明的不同实施方案中，抗ANGPTL3抗体(或其抗原结合部分)的FR可以与人种系序列相同，或者可以天然或人工修饰。可以基于两个或更多个CDR的并排分析定义氨基酸共有序列。
如本文所用，术语“抗体”还包括完整抗体分子的抗原结合片段。如本文所使用，术语抗体的“抗原结合部分”、抗体的“抗原结合片段”等等包括任何天然存在的、酶促获得的、合成的或基因工程化的多肽或糖蛋白，其特异性结合抗原以形成复合物。使用任何合适的标准技术如蛋白水解消化或重组基因工程技术，包括操作和表达编码抗体可变和任选恒定结构域的DNA，抗体的抗原结合片段可以来源于例如完整抗体分子。这样的DNA是已知的和/或容易从例如商业来源、DNA文库(包括例如噬菌体抗体文库)获得，或者可以合成。可以对DNA进行测序，并化学地或通过使用分子生物学技术操作，例如，将一个或多个可变和/或恒定结构域排列成合适的构型、或引入密码子、产生半胱氨酸残基、修饰、添加或缺失氨基酸等等。
抗原结合片段的非限制性实例包括：(i)Fab片段；(ii)F(ab')2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段和(vii)最小识别单元，其由模拟抗体高变区的氨基酸残基(例如分离的互补决定区(CDR)，如CDR3肽)或限制性FR3-CDR3-FR4肽组成。其他工程化的分子，如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失的抗体、嵌合抗体、CDR接枝抗体、双抗体、三抗体、四抗体、微抗体、纳米抗体(例如单价纳米抗体、二价纳米抗体等)、小的模块化免疫药物(SMIP)和鲨鱼可变IgNAR结构域，也包括在本文所用的表述“抗原结合片段”内。
抗体的抗原结合片段通常将包含至少一个可变结构域。可变结构域可以是任何大小或氨基酸组成，并且通常将包含至少一个CDR，其与一个或多个框架序列相邻或在相同阅读框内(in frame)。在具有VH结构域和相关的VL结构域的抗原结合片段中，VH和VL结构域可以以任何合适的排列相对于彼此进行定位。例如，可变区可以是二聚体并含有VH-VH，VH-VL或VL-VL二聚体。或者，抗体的抗原结合片段可含有单体VH或VL结构域。
在某些实施方案中，抗体的抗原结合片段可以含有与至少一个恒定结构域共价连接的至少一个可变结构域。可以在本发明抗体的抗原结合片段内发现的可变结构域和恒定结构域的非限制性示例性构型包括：(i)VH-CH1；(ii)VH-CH2；(iii)VH-CH3；(iv)VH-CH1-CH2；(v)VH-CH1-CH2-CH3；(vi)VH-CH2-CH3；(vii)VH-CL；(viii)VL-CH1；(ix)VL-CH2；(x)VL-CH3；(xi)VL-CH1-CH2；(xii)VL-CH1-CH2-CH3；(xiii)VL-CH2-CH3；和(xiv)VL-CL。在包括上面列出的任何示例性构型的可变结构域和恒定结构域的任何构型中，可变结构域和恒定结构域可以彼此直接连接或可以通过完整或部分铰链或接头区连接。铰链区可由至少2个(例如5、10、15、20、40、60个或更多个)氨基酸组成，其导致在单个多肽分子中相邻可变和/或恒定结构域之间的柔性或半柔性连接。此外，本发明抗体的抗原结合片段可以包含上面列出的任何可变和恒定结构域构型的同二聚体或异二聚体(或其他多聚体)，彼此非共价(例如通过二硫键)结合和/或与一个或多个单体VH或VL结构域非共价(例如通过二硫键)结合。
与完整抗体分子一样，抗原结合片段可以是单特异性的或多特异性的(例如双特异性的)。抗体的多特异性抗原结合片段通常将包含至少两个不同的可变结构域，其中每个可变结构域能够特异性结合单独的抗原或在相同抗原上结合不同的表位。使用本领域可用的常规技术，任何多特异性抗体形式，包括本文公开的示例性双特异性抗体形式可以适用于本发明抗体的抗原结合片段的上下文中。
抗体的恒定区在抗体固定补体和介导细胞依赖的细胞毒性的能力中重要。因此，抗体的同种型可以基于抗体是否需要它介导细胞毒性来选择。
如本文所用，术语“人抗体”意在包括具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。然而，本发明的人抗体可以包括，例如在CDR和尤其CDR3中包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变导入的突变)。然而，如本文所用，术语“人抗体”不意在包括其中已经将从另一个哺乳动物物种(如小鼠)的种系衍生的CDR序列移植到人构架序列上的抗体。
如本文所用，术语“重组人抗体”旨在包括通过重组手段制备、表达、产生或分离的所有人抗体，如使用转染至宿主细胞的重组表达载体表达的抗体(下文进一步描述)、从重组、组合人抗体文库中分离的抗体(下文进一步描述)、从人免疫球蛋白基因转基因的动物(例如小鼠)中分离的抗体(参见例如Taylor等人(1992)Nucl.Acids Res.20:6287-6295)、或通过任何其他手段制备、表达、产生或分离的抗体，所述任何其他手段包括将人免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列。此类重组人抗体具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。然而，在某些实施方案中，体外诱变这样的重组人抗体(或者当使用人Ig序列转基因的动物时，体内体细胞诱变)，因此，重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列是这样的序列，其虽然来自人种系VH和VL序列并且与人种系VH和VL序列相关，但可能不是人抗体种系库内在体内天然存在的序列。
人抗体可以以与铰链异质性相关的两种形式存在。在一种形式中，免疫球蛋白分子包含约150-160kDa的稳定的四链构建体，其中二聚体通过链间重链二硫键连接在一起。在第二种形式中，二聚体不通过链间二硫键连接，其是由共价偶联的轻链和重链组成的约75-80kDa的分子(半抗体)。甚至在亲和纯化之后，这些形式也极难分离。
第二种形式在各种完整IgG同种型中出现的频率归因于、但不限于与抗体的铰链区同种型相关的结构差异。人IgG4铰链的铰链区中的单个氨基酸取代可以将第二种形式(Angal等人(1993)Molecular Immunology 30：105)的出现显著降低至通常使用人IgG1铰链观察到的水平。本发明包括在铰链、CH2或CH3区具有一个或多个突变的抗体，例如，期望其在生产中改善所需抗体形式的产量。
本文使用的“分离的抗体”是指已经鉴定并从其天然环境的至少一种组分中分离和/或回收的抗体。例如，已经从生物体的至少一种组分或从天然存在抗体或天然产生抗体的组织或细胞中分离或移出的抗体，是本发明目的的“分离的抗体”。分离的抗体还包括重组细胞内的原位抗体。分离的抗体是经历至少一个纯化或分离步骤的抗体。根据某些实施方案，分离的抗体可以基本上不含其他细胞材料和/或化学物质。
术语“特异性结合”等意指抗体或其抗原结合片段与生理条件下相对稳定的抗原形成复合物。用于确定抗体是否与抗原特异性结合的方法是本领域熟知的并且例如包括平衡透析法、表面等离子体共振法等。例如，如本发明背景下所用，“特异性结合”ANGPTL3的抗体包括如表面等离子体共振测定法中测量，以小于约1000nM、小于约500nM、小于约300nM、小于约200nM、小于约100nM、小于约90nM、小于约80nM、小于约70nM、小于约60nM、小于约50nM、小于约40nM、小于约30nM、小于约20nM、小于约10nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、小于约1nM或少于约0.5nM的KD结合ANGPTL3或其部分的抗体。然而，特异性结合人ANGPTL3的分离的抗体对来自其他(非人)物种的其他抗原(如ANGPTL3分子)具有交叉反应性。
如与衍生抗体的相应种系序列相比，可用于本发明方法的抗ANGPTL3抗体可以在重链可变结构域和轻链可变结构域的构架区和/或CDR区包含一个或多个氨基酸置换、插入和/或缺失。可以通过比较本文公开的氨基酸序列与例如从抗体序列公共数据库可获得的种系序列，容易地确定这类突变。本发明包括涉及抗体及其抗原结合片段的用途的方法，所述抗体及其抗原结合片段从本文公开的任一个氨基酸序列衍生，其中一个或多个构架区和/或CDR区内部的一个或多个氨基酸突变成衍生抗体的种系序列的相应残基，或突变成另一个人类种系序列的相应残基，或突变成相应种系残基的保守性氨基酸置换(这类序列变化在本文统称为“种系突变”)。始于本文公开的重链可变区序列和轻链可变区序列，本领域普通技术人员可以容易地产生包含一个或多个独立种系突变或其组合的众多抗体和抗原结合片段。在某些实施方案中，VH和/或VL结构域内部的全部构架残基和/或CDR残基均回复突变成衍生所述抗体的原始种系序列中存在的残基。在其他实施方案中，仅某些残基回复突变成原始种系序列，例如，突变的残基仅存在于FR1的前8个氨基酸内或FR4的最后8个氨基酸内或突变的残基仅存在于CDR1、CDR2或CDR3内。在其他实施方案中，一个或多个构架和/或CDR残基突变成不同种系序列(即，与最初衍生抗体的种系序列不同的种系序列)的相应残基。另外，本发明的抗体可以在构架区和/或CDR区内部含有两个或更多个种系突变的任何组合，例如，其中某些独立残基突变成特定种系序列的相应残基，而与最初种系序列不同的某些其他残基维持或突变成不同种系序列的相应残基。一旦获得，则可以对含有一个或多个种系突变的抗体和抗原结合片段容易地测试一种或多种所需特性，如，改善的结合特异性，增加的结合亲和力、改善或增强的拮抗性或激动性生物学特性(根据具体情况而定)、降低的免疫原性等。本发明内部涵盖以这种一般方式获得的抗体和抗原结合片段的用途。
本发明还包括涉及抗ANGPTL3抗体的用途的方法，所述抗体包含本文公开的具有一个或多个保守性置换的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列中任一者的变体。例如，本发明包括具有HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列的抗ANGPTL3抗体的用途，相对于本文公开的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列中任一者，所述氨基酸序列例如具有10个或更少、8个或更少、6个或更少、4个或更少等的保守性氨基酸置换。
如本文所用，术语“表面等离子体共振”指允许例如使用BIAcoreTM系统(BiacoreLife Sciences division of GE Healthcare，Piscataway，NJ)，通过检测生物传感器基质内部蛋白质浓度的改变来分析实时相互作用的光学现象。
如本文所用的术语“KD”旨在表示特定抗体-抗原相互作用的平衡解离常数。
术语“表位”是指与被称为互补位的抗体分子可变区中的特异性抗原结合位点相互作用的抗原决定簇。单个抗原可以具有多于一个的表位。因此，不同的抗体可以结合抗原上的不同区，并且可能具有不同的生物作用。表位可以是构象的或线性的。构象表位由来自线性多肽链不同区段的空间并列的氨基酸产生。线性表位是由多肽链中相邻氨基酸残基产生的表位。在某些情况下，表位可以包括抗原上的糖、磷酰基或磺酰基的部分。
根据某些实施方案，本发明方法中使用的抗ANGPTL3抗体是具有pH依赖性结合特征的抗体。如本文所用，表达“pH依赖性结合”意指抗体或其抗原结合片段显示“与中性pH相比，在酸性pH与ANGPTL3的结合作用降低”(出于本公开的目的，两种表述可以互换使用)。例如，“具有pH依赖性结合特征”的抗体包括相比酸性pH，在中性pH以更高亲和力结合ANGPTL3的抗体和其抗原结合片段。在某些实施方案中，相比酸性pH，本发明的抗体和抗原结合片在中性pH以至少3、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100或更高倍的亲和力结合ANGPTL3。
根据本发明的这个方面，具有pH依赖性结合特征的抗ANGPTL3抗体可以相对于亲本抗ANGPTL3抗体拥有一个或多个氨基酸变异。例如，具有pH依赖性结合特征的抗ANGPTL3抗体可以例如，在亲本抗ANGPTL3抗体的一个或多个CDR中含有一个或多个组氨酸置换或插入。因此，根据本发明的某些实施方案，提供这样的方法，所述方法包括施用包含CDR氨基酸序列(例如，重链CDR和轻链CDR)的抗ANGPTL3抗体，所述CDR氨基酸序列与亲本抗ANGPTL3抗体的CDR氨基酸序列相同，例外是亲本抗体的一个或多个CDR的一个或多个氨基酸置换成组氨酸残基。具有pH依赖性结合作用的抗ANGPTL3抗体可以例如拥有1、2、3、4、5、6、7、8、9或更多个组氨酸置换，所述组氨酸置换在亲本抗体的单个CDR内部或分布遍及亲本抗ANGPTL3抗体的多个(例如，2，3、4、5或6个)CDR。例如，本发明包括具有pH依赖性结合作用的抗ANGPTL3抗体的用途，所述抗体包含在亲本抗ANGPTL3抗体的HCDR1中的一个或多个组氨酸置换、在其HCDR2中的一个或多个组氨酸置换、在其HCDR3中的一个或多个组氨酸置换、在其LCDR1中的一个或多个组氨酸置换、在其LCDR2中的一个或多个组氨酸置换和/或在其LCDR3中的一个或多个组氨酸置换。
如本文所用，表述“酸性pH”意指6.0或更小(例如，小于约6.0、小于约5.5、小于约5.0等)的pH。表述“酸性pH”包括约6.0、5.95、5.90、5.85、5.8、5.75、5.7、5.65、5.6、5.55、5.5、5.45、5.4、5.35、5.3、5.25、5.2、5.15、5.1、5.05、5.0或更小的pH值。如本文所用，表述“中性pH”意指约7.0至约7.4的pH。表述“中性pH”包括约7.0、7.05、7.1、7.15、7.2、7.25、7.3、7.35和7.4的pH值。
可以在本发明背景下使用的抗ANGPTL3抗体的非限制性例子例如包括evinacumab，以及如美国专利号9,018,356(egeneron Pharmaceuticals,Inc.)中所述的任何示例性抗ANGPTL3抗体，所述文献的公开因而通过引用方式完整地并入，或如美国专利号8,742,075(Lexicon Pharmaceuticals,Inc.)中所述的任何示例性抗ANGPTL3抗体，所述文献的公开因而通过引用方式完整地并入。
制备人抗体
可以根据本领域已知的产生/分离抗体的任何方法，产生抗ANGPTL3抗体。例如，用于本发明方法中的抗体可以通过杂交瘤技术、通过噬菌体展示、通过酵母展示等产生。用于本发明方法中的抗体可以例如是嵌合抗体、人源化抗体或全人抗体。
转基因小鼠中产生人抗体的方法是本领域已知的。任何这类已知方法可以在本发明的背景下用来产生特异性结合ANGPTL3的人抗体。
例如，使用VELOCIMMUNETM技术(参见例如US 6,596,541，RegeneronPharmaceuticals)或任何其他已知的用于产生单克隆抗体的方法，最初分离具有人可变区和小鼠恒定区的针对ANGPTL3的高亲和力嵌合抗体。技术包括产生转基因小鼠，所述转基因小鼠具有包含与内源性小鼠恒定区基因座可操作连接的人重链和轻链可变区的基因组，使得所述小鼠产生响应于抗原刺激的包含人可变区和小鼠恒定区的抗体。分离编码抗体重链和轻链可变区的DNA并可操作地连接到编码人重链和轻链恒定区的DNA上。然后在能够表达完整人抗体的细胞中表达DNA。
通常，用感兴趣的抗原攻击小鼠，从表达抗体的小鼠中回收淋巴细胞(如B细胞)。可以将淋巴细胞与骨髓瘤细胞系融合以制备永生的杂交瘤细胞系，筛选和选择这些杂交瘤细胞系以鉴定产生对感兴趣的抗原特异的抗体的杂交瘤细胞系。分离编码重链和轻链可变区的DNA并连接到期望的重链和轻链同种型恒定区。这样的抗体蛋白可以在细胞如CHO细胞中产生。或者，可以直接从抗原特异性淋巴细胞中分离编码抗原特异性嵌合抗体或轻链和重链的可变结构域的DNA。
起初，分离具有人可变区和小鼠恒定区的高亲和力嵌合抗体。对所述抗体进行表征和选择期望的特征，包括亲和力、选择性、表位等，使用本领域技术人员已知的标准方法。然后用期望的人恒定区置换小鼠恒定区以产生本发明的完整人抗体，例如野生型或修饰的IgG1或IgG4。虽然所选恒定区可根据具体用途而变化，但高亲和力抗原结合和靶特异性特征存在于可变区中。
通常，通过与固相上固定或在溶液相中的抗原结合所测量时，如上文所述，可以在本发明方法中使用的抗体拥有高亲和力。将小鼠恒定区替换为所需的人类恒定区以产生本发明的全人抗体。尽管选择的恒定区可以根据具体用途变动，但高亲和力抗原结合特征和靶特异性特征驻留于可变区内。
可以在本发明方法的上下文中使用的特异性结合ANGPTL3的人抗体或抗体的抗原结合片段的具体例子包括这样的抗体或抗原结合蛋白，其包含含有来自SEQ ID NO:2/3的重链和轻链可变区(HCVR/LCVR)氨基酸序列对的六个CDR(HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3)。
在本发明的某些实施方案中，可以在本发明方法中使用的抗ANGPTL3抗体或其抗原结合片段包含了包含SEQ ID NO:4、5、6、7、8和9的氨基酸序列的重链和轻链互补决定区(HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3)。
在本发明的某些实施方案中，可以在本发明方法中使用的抗ANGPTL3抗体或其抗原结合片段包含了具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HCVR和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的LCVR。
药物组合物和施用方法
本发明包括这样的方法，所述方法包括向患者施用ANGPTL3抑制剂，其中ANGPTL3抑制剂含于药物组合物内。本发明的药物组合物与合适的载体、赋形剂和提供合适的转运、递送、耐受性等的其他试剂一起配制。在所有药物化学家已知的处方集中可以找到许多合适的制剂：Remington's Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，PA。这些制剂包括例如粉末、糊剂、软膏、凝胶剂、蜡、油、脂质、含脂质(阳离子或阴离子)囊泡(如LIPOFECTINTM)、DNA缀合物、无水吸收膏、水包油和油包水乳液、聚乙二醇乳液(各种分子量的聚乙二醇)、半固体凝胶和含有聚乙二醇的半固体混合物。也参见Powell等人"Compendium of excipients for parenteral formulations"PDA(1998)J Pharm SciTechnol 52:238-311。
各种递送系统是已知的并且可以用于施用本发明的药物组合物，例如包封在脂质体、微粒、微胶囊中、能够表达突变病毒的重组细胞、受体介导的胞吞作用(参见例如Wu等人,1987,J.Biol.Chem.262:4429-4432)。施用的方法包括但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外和口服途径。可以通过任何方便的途径施用组合物，例如通过输注或推注、通过上皮或粘膜皮肤内层(mucocutaneous linings)(例如口腔粘膜、直肠和肠粘膜等)的吸收，并且可以与其他生物学活性剂一起施用。
可以用标准的针头和注射器皮下或静脉内递送本发明的药物组合物。另外，关于皮下递送、笔递送装置容易地应用于递送本发明的药物组合物。这种笔递送装置可以是可重复使用的或一次性的。可重复使用的笔递送装置通常使用含有药物组合物的可更换的药筒。一旦药筒内的所有药物组合物被施用并且药筒是空的，则可以容易地丢弃空药筒并用含有药物组合物的新药筒替换。然后可以重新使用笔递送装置。在一次性笔递送装置中，没有可替换的药筒。相反，一次性笔递送装置预装有容纳在装置内储存器中的药物组合物。一旦储存器中的药物组合物清空，就丢弃整个装置。
许多可重复使用的笔和自动注射器递送装置应用于皮下递送本发明的药物组合物中。实例包括但不限于AUTOPENTM(Owen Mumford,Inc.,Woodstock,UK)、DISETRONICTM笔(Disetronic Medical Systems,Bergdorf,Switzerland)、HUMALOG MIX 75/25TM笔、HUMALOGTM笔、HUMALIN 70/30TM笔(Eli Lilly and Co.,Indianapolis,IN)、NOVOPENTMI,II和III(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark)、NOVOPEN JUNIORTM(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark)、BDTM笔(Becton Dickinson,Franklin Lakes,NJ)、OPTIPENTM、OPTIPEN PROTM、OPTIPEN STARLETTM和OPTICLIKTM(Sanofi-Aventis,Frankfurt,Germany)，仅举几个例子。应用于皮下递送本发明药物组合物的一次性笔递送装置的例子包括但不限于SOLOSTARTM笔(Sanofi-Aventis)、FLEXPENTM(Novo Nordisk)和KWIKPENTM(Eli Lilly)、SURECLICKTM自动注射器(Amgen,Thousand Oaks,CA)、PENLETTM(Haselmeier,Stuttgart,Germany)、EPIPEN(Dey,L.P.)和HUMIRATM笔(Abbott Labs,Abbott Park IL)，仅举几个例子。
在某些情况下，药物组合物可以在控释系统中递送。在一个实施方案中，可以使用泵(参见Langer，同上；Sefton，1987，CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14：201)。在另一个实施方案中，可以使用聚合物材料；参见Medical Applications of Controlled Release,Langerand Wise(eds.),1974,CRCPres.,Boca Raton,Florida。在又一个实施方案中，可以将控释系统放置在组合物的靶标附近，因此仅需要全身剂量的一部分(参见例如Goodson,1984,inMedical Applications of Controlled Release,supra,vol.2,第115-138页)。其他控释系统在Langer，1990，Science 249：1527-1533的综述中进行了讨论。
可注射制剂可以包括用于静脉内、皮下、皮内和肌内注射、滴注等的剂型。这些可注射制剂可以通过已知的方法制备。例如，可以通过将上述抗体或其盐溶解、悬浮或乳化在常规用于注射的无菌水性介质或油性介质中来制备可注射制剂。作为注射用水性介质，例如有生理盐水、含有葡萄糖的等渗溶液和其他助剂等，其可以与适当的增溶剂如醇(例如乙醇)、多元醇(例如丙二醇、聚乙二醇)、非离子表面活性剂[例如聚山梨醇酯80、HCO-50(氢化蓖麻油的聚氧乙烯(50mol)加合物)]等组合使用。作为油性介质，例如使用芝麻油、大豆油等，其可以与增溶剂如苯甲酸苄酯、苯甲醇等组合使用。由此制备的注射剂优选填充在合适的安瓿中。
有利地，将上述用于口服或肠胃外使用的药物组合物制备成适于装配活性成分剂量的单位剂量的剂型。这种单位剂量的剂型包括例如片剂、丸剂、胶囊剂、注射剂(安瓿)、栓剂等。
剂量
根据本发明的方法施用至受试者的ANGPTL3抑制剂(例如，抗ANGPTL3抗体)的量通常是治疗有效量。如本文所用，短语“治疗有效量”意指导致选自LDL-C、ApoB100、非HDL-C、总胆固醇、VLDL-C、甘油三酯、Lp(a)和残余胆固醇(remnant cholesterol)的一项或多项参数可检出的降低(距基线降低至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或更多)的ANGPTL3抑制剂的剂量或防止或减弱受试者中动脉粥样硬化的量(如本文他处描述)。
在抗ANGPTL3抗体的情况下，治疗有效量可以是约0.05mg至约600mg，例如，约0.05mg、约0.1mg、约1.0mg、约1.5mg、约2.0mg、约10mg、约20mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约110mg、约120mg、约130mg、约140mg、约160mg、约170mg、约180mg、约190mg、约200mg、约210mg、约220mg、约230mg、约240mg、约250mg、约260mg、约270mg、约280mg、约290mg、约300mg、约310mg、约320mg、约330mg、约340mg、约350mg、约360mg、约370mg、约380mg、约390mg、约400mg、约410mg、约420mg、约430mg、约440mg、约450mg、约460mg、约470mg、约480mg、约490mg、约500mg、约510mg、约520mg、约530mg、约540mg、约550mg、约560mg、约570mg、约580mg、约590mg，或约600mg的抗ANGPTL3抗体。ANGPTL3抑制剂的其他给药量将对本领域普通技术人员而言显而易见并且构思于本发明的范围内。
含于各剂内部的抗ANGPTL3抗体的量可以用毫克抗体/千克患者体重(即，mg/kg)表述。例如，抗ANGPTL3抗体可以按约0.0001至约10mg/kg患者体重的剂量施用给患者。
联合疗法
如本文他处描述，本发明的方法可以包括联合(“接续”)该患者先前开具的降脂疗法，向患者施用ANGPTL3抑制剂。例如，在防止或减弱动脉粥样硬化的背景下，ANGPTL3抑制剂可以与稳定的每日治疗性他汀治疗方案联合施用至患者。在本发明背景下ANGPTL3抑制剂可以与之联合施用的示例性每日治疗性他汀治疗方案例如包括阿托伐他汀(每日10、20、40或80mg)、(每日阿托伐他汀/依折麦布10/10mg或40/10mg)、瑞舒伐他汀(每日5、10或20mg)、西立伐他汀(cerivastatin)(每日0.4或0.8mg)、匹伐他汀(每日1、2或4mg)、氟伐他汀(每日20、40或80mg)、辛伐他汀(每日5、10、20、40或80mg)、辛伐他汀/依折麦布(每日10/10、20/10、40/10或80/10mg)、洛伐他汀(每日10、20、40或80mg)、普伐他汀(每日10、20、40或80mg)及其组合。在本发明背景下ANGPTL3抑制剂可以与之联合施用的其他降脂疗法例如包括(1)抑制胆固醇摄取和或胆汁酸重吸收的活性剂(例如，依折麦布)；(2)增加脂蛋白分解代谢的活性剂(如烟酸)；和/或(3)在胆固醇消除中发挥作用的LXR转录因子的激活物如22-羟胆固醇。
根据某些实施方案，本发明包括通过向受试者与ANGPTL4的抑制剂(例如，抗ANGPTL4抗体或其抗原结合片段)、ANGPTL8的抑制剂(例如，抗ANGPTL8抗体或其抗原结合片段)和/或PCSK9的抑制剂(例如，抗PCSK9抗体或其抗原结合片段)联合施用ANGPTL3抑制剂，预防或减弱受试者中动脉粥样硬化的方法。可以在本发明背景下使用的抗PCSK9抗体的非限制性例子例如包括alirocumab、evolocumab、bococizumab、lodelcizumab、ralpancizumab或前述任何抗体的抗原结合部分。
施用方案
根据本发明的某些实施方案，多剂NGPTL3抑制剂(即，包含ANGPTL3抑制剂的种药物组合物)可以在限定的时间过程范围内(例如，接续每日治疗性他汀治疗方案或其他背景降脂治疗)施用至受试者。根据本发明的这个方面的方法包括向受试者依次施用多剂ANGPTL3抑制剂。如本文所用，“依次施用”意指在不同时间点，例如，在预定间隔(例如，数小时，数天、数周或数月)分隔的不同天向受试者施用每剂ANGPTL3抑制剂。本发明包括这样的方法，所述方法包括向患者依次施用单一初始剂的ANGPTL3抑制剂，随后施用一个或多个第二剂的ANGPTL3抑制剂，并且任选地随后施用一个或多个第三剂的ANGPTL3抑制剂。
术语“初始剂量”，“二级剂量”和“三级剂量”是指各剂包含ANGPTL3抑制剂的药物组合物的施用的时间顺序。因此，“初始剂量”是在治疗方案开始时施用的剂量(也称为“基线剂量”)；“二级剂量”是在初始剂量之后施用的剂量；“三级剂量”是在二级剂量之后施用的剂量。初始、二级和三级剂量都可以含有相同量的ANGPTL3抑制剂，但通常在施用频率方面可能彼此不同。然而，在某些实施方案中，在治疗过程中初始、二级和/或三级剂量中所含的ANGPTL3抑制剂的量彼此不同(例如适当地调高或调低)。在某些实施方案中，在治疗方案开始时将两个或更多个(例如2、3、4或5)剂量作为“负载剂量”施用，随后以较低频率基础施用后续剂量(例如“维持剂量”)。
根据本发明的某些示例性实施方案，在紧接之前的剂量1至26(例如，1,11/2,2,21/2,3,31/2,4,41/2,5,51/2,6,61/2,7,71/2,8,81/2,9,91/2,10,101/2,11,111/2,12,121/2,13,131/2,14,141/2,15,151/2,16,161/2,17,171/2,18,181/2,19,191/2,20,201/2,21,211/2,22,221/2,23,231/2,24,241/2,25,251/2,26,261/2或更多)周之后施用每个二级和/或三级剂量。如本文所用，短语“紧接之前的剂量”是指在多次施用的顺序中，在施用顺序中没有间隔剂量的紧邻下一个剂量之前向患者施用的抗原结合分子的剂量。
根据本发明该方面的方法可以包括向患者施用任何次数的二级和/或三级剂量的ANGPTL3抑制剂。例如，在某些实施方案中，仅向患者施用单次二级剂量。在其他实施方案中，向患者施用两次或更多次(例如2、3、4、5、6、7、8次或更多次)二级剂量。同样地，在某些实施方案中，仅向患者施用单次三级剂量。在其他实施方案中，向患者施用两次或更多次(例如2、3、4、5、6、7、8或更多次)三级剂量。
在包括多次二级剂量的实施方案中，每个二级剂量可以与其他二级剂量以相同的频率施用。例如，可以在紧接之前的剂量后1至2、4、6、8或更多周向患者施用每个二级剂量。相似地，在包括多次三级剂量的实施方案中，每个三级剂量可以与其他三级剂量以相同的频率施用。例如，可以在紧接之前的剂量后1至2、4、6、8或更多周向患者施用每个三级剂量。可选地，向患者施用二级和/或三级剂量的频率可以在治疗方案的过程中变化。也可以在治疗过程中由医生根据临床检查后个体患者的需要调整施用的频率。
实施例
提供以下实施例从而为本领域普通技术人员提供如何产生和使用本发明方法和组合物的完整公开和描述，并且不意图限制本发明人视为其发明的范围。已经作出努力以确保所用数字(例如量、温度等)方面的准确度，但是应当考虑一些实验性误差和偏差。除非另外指明，否则份数是以重量计的份数，分子量是平均分子量，温度是摄氏度，并且压力是在大气压或接近大气压。
实施例1产生针对人ANGPTL3的人抗体
人抗ANGPTL3抗体如美国专利号9,018,356中所述产生。以下实施例中所用的示例性ANGPTL3抑制剂是人抗ANGPTL3抗体，命名为“H4H1276S”，又称作“evinacumab”。Evinacumab具有以下氨基酸序列特征：包含SEQ ID NO:10的重链和包含SEQ ID NO:11的轻链；包含SEQ ID NO:2的重链可变区(HCVR)和包含SEQ ID NO:3的轻链可变结构域(LCVR)；包含含有SEQ ID NO:4的重链互补决定区1(HCDR1)、包含SEQ ID NO:5的HCDR2、包含SEQ IDNO:6的HCDR3、包含SEQ ID NO:7的轻链互补决定区1(LCDR1)、包含SEQ ID NO:8的LCDR2和包含SEQ ID NO:9的LCDR3。
实施例2.抗ANGPTL3抗体在小鼠模型中防止动脉粥样硬化形成
介绍
这项研究的目标是评价ANGPTL3抑制作用对APOE*3Leiden.CETP小鼠中动脉粥样硬化形成的影响，所述小鼠是充分建立的具有混合型或家族性血β脂蛋白异常全部特征的高脂血症和动脉粥样硬化模型。(关于APOE*3Leiden.CETP小鼠模型(本文中备选地称作“E3L.CETP小鼠”)总体描述及其评估药理物质对动脉粥样硬化形成的影响的用途，例如参见Kühnast等人,2014,J Lipid Res 55:2103-2112)。
使用抗ANGPTL3抗体实现ANGPTL3抑制。这些研究中所用的具体抗ANGPTL3抗体是如上文所述称作evinacumab的抗体。这些研究中所用的对照抗体是同种型匹配的针对无关靶的抗体。
研究设计
图1中显示研究设计图示。Evinacumab是全人IgG4抗体。因此在不同小鼠品系中评价时，一些小鼠形成了消除治疗药效力的抗药物抗体。对于每个小鼠模型/遗传背景，形成这种抗药物应答的小鼠的百分数可以不同。出于这个原因，在这第一项研究中每组纳入更多APOE*3Leiden.CETP小鼠，以确定这个特定模型中多少小鼠形成抗人免疫应答。在排除形成抗人免疫应答的小鼠后，剩余小鼠可以用于评价evinacumab对动脉粥样硬化的影响。
六十三只雌性APOE*3Leiden.CETP小鼠饲以膳食T(如Nishina等人,1990,J LipidRes 31:859描述的半合成改良膳食，添加0.15％胆固醇和15％可可脂)。在4周准备期后，从研究中移除13只低反应小鼠并且4小时禁食后(t＝0)，将剩余的50只小鼠再分成一个含二十只小鼠的对照组和一个含三十只小鼠的evinacumab治疗组，体重、血浆胆固醇和甘油三酯匹配。
每周通过皮下注射按照25mg/kg/wk的剂量给予evinacumab或对照抗体处理。治疗阶段期间的注射体积是10mL/kg，使用0.9％NaCl作为溶媒，并且针对最后测量的体重值调整。在第0、3、6、8、11和13周测量体重和食物摄入量(每笼)。
在0、2、4、6、8、11和13周治疗后，血液样品在禁食四小时后取得。分别测量血浆胆固醇和甘油三酯并且采集附加的EDTA血浆供评价hFc和小鼠抗人抗体。在治疗6周后，评价第一次抗药物应答并且从研究移除具有高水平抗药物抗体的3只对照组小鼠和5只治疗组小鼠。
在第0、6和13周在每组汇总的血浆样品中测量脂蛋白曲线。在第12周期间(48小时两次)每笼收集粪便。在t＝13，不禁食处死小鼠。通过心脏穿刺术获得EDTA-血浆并且收集几种组织。在每组15只小鼠中(在排除形成抗药物应答的小鼠后)通过测量损害数目、损害面积和损害严重程度，测量主动脉根中的动脉粥样硬化形成情况。此外，确定损害组成。
(1)参数测量方案如下：
(2)体重(第0、3、6、8、11和13周)；
(3)食物摄入量(每笼，第0、3、6、8、11和13周)；
(4)血浆总胆固醇和甘油三酯(在第0、2、4、6、8、11和13周禁食4小时后)；
(5)采集20μl EDTA血浆供评价hFc和小鼠抗人抗体(在第0、2、4、6、8、11和13周禁食4小时后)；
(6)脂蛋白曲线(胆固醇和甘油三酯，每组汇总；在第0、6和13周)；
(7)主动脉根中的动脉粥样硬化形成情况(每组15只小鼠)：(a)损害数目、(b)总损害面积、(c)损害严重程度、(d)损害组成(例如巨噬细胞、纤维化帽中的平滑肌细胞、坏死和胶原含量)、和(e)单核细胞黏附情况。(处死时[第13周]，从全部小鼠采集主动脉，然而用每组15只小鼠执行动脉粥样硬化分析；选择不形成抗药物抗体的小鼠)。
方法
根据标准程序进行体重和食物摄入量测量。
根据标准程序获得血浆血液样品。使用市售试剂盒测定总血浆胆固醇和甘油三酯。
使用来自Amersham Biosciences的AKTA仪，通过FPLC分析测量脂蛋白曲线。在每组汇总的样品中进行分析。使用市售试剂盒测量级分中的胆固醇和甘油三酯。
在主动脉根区域如先前报道那样评估动脉粥样硬化性损害面积和严重程度(参见，例如，Kühnast等人,2012,J Hypertens 30:107-116)。依据主动脉瓣小叶的出现鉴定主动脉根，并且将完整主动脉根区域的连续截面(5μm厚，间距50μm)封装在3-氨丙基三乙氧基硅烷包覆的切片上并用苏木精-焰红染料-番红花(saffron)(HPS)染色。对于每只小鼠，在4张后续切片中测量损害面积。每张切片由3个区段(由瓣膜分隔)组成。为了确定动脉粥样硬化性损害尺寸和严重程度，根据美国心脏协会(AHA)，将损害划分成五类(参见Stary等人,1995,Arterioscler Thromb Vasc Biol 15:1512–1531)：1型：早期脂质条纹(内膜中多达10个泡沫细胞，无其他变化)；2型：规则的脂质条纹(内膜中十个或更多个泡沫细胞，无其他变化)；3型：轻微斑块(泡沫细胞连同纤维化帽)；4型：中度斑块(更为进展的损害伴随受累基质，但基质的构架未丧失)；5型：重度斑块(基质严重受累；频繁观察到弹性纤维破损、胆固醇裂隙、钙化和坏死)。
用Olympus BX51显微镜拍摄图像并用Image Processing软件测量面积。计算每个截面的总损害面积和损害数目。将无病区段计算为总区段的百分数。还测定损害严重程度作为总损害的百分数。I–III型损害划分为轻度损害并且IV–V型损害划分为重度损害。
用AIA 31240抗血清(1:1000；Accurate Chemical and Scientific,New York,New York,USA)免疫染色后，计数用于定量损害的每个区段中与活化的内皮黏附的单核细胞的数目并每个截面进行计算。
用抗小鼠Mac-3(1:50；BD Pharmingen,the Netherlands)免疫染色后，测量损害的巨噬细胞面积。进行粘胶纤维红染色以染色胶原。用与小鼠α肌动蛋白交叉反应的抗α平滑肌肌动蛋白(1:400；PROGEN Biotechnik GmbH，海德堡，德国)免疫染色后，测量纤维化帽的平滑肌细胞面积。用Olympus BX51显微镜拍摄损害的照片/图像。使用成像软件定量损害的巨噬细胞面积、胶原面积、坏死核心面积和平滑肌细胞面积。损害的巨噬细胞含量、平滑肌细胞(SMC)含量、坏死核心含量和胶原含量计算为损害面积的百分数。通过稳定因素(SMC和胶原)的总和除以去稳定化因素(巨噬细胞和坏死核心)的总和，计算斑块脆弱性/稳定指数。
在第13周，借助CO2不禁食处死小鼠。在第13周期间处死前不给予最后的抗体注射。在处死后，采集尽可能多的EDTA血浆(借助心脏穿刺术)并储存在-70℃直至进一步使用。包含主动脉根的心脏在10％福尔马林中固定。采集胸主动脉并在10％福尔马林中固定。
统计学
根据正态性，使用计算机程序SPSS和独立样品的Mann-Whitneyu-检验，非参数方式计算各组之间的显著性差异。P值<0.05视为统计显著。如与对照组相比，治疗组的统计差异在图中的测量时点以星号指示。
结果
体重
表1中总结了体重结果。值是绝对值(克)并且是来自每组14-15只小鼠的均值±S.D.。
表1
非参数分析：Mann Whitney U检验
evinacumab-治疗组与对照组相比之间不存在体重的差异。
食物摄入量
表2中总结了食物摄入量结果。值是绝对值(克/小鼠/日)并且是17个笼子(全部小鼠；匹配之前)或4-6个笼子(匹配和开始治疗后)的均值±S.D.。
表2
非参数分析：Mann Whitney U检验
如与对照组相比，evinacumab治疗组的食物摄入量不存在差异。
血浆胆固醇
表3和表4和图2A和2B中总结了血浆胆固醇结果。值是绝对值(mM)并且是来自每组14-15只小鼠的均值±S.D.。
表3
非参数分析：Mann Whitney U检验
表4
非参数分析：Mann Whitney U检验
Evinacumab治疗导致血浆胆固醇与对照组相比在全部时间点显著降低(平均降低52％)。在实验结束时，如与对照组相比，evinacumab治疗时，实验期间(0-13周+准备期)的胆固醇暴露量显著地降低(41％，p<0.001)。
血浆甘油三酸酯
表5和图3中总结了血浆甘油三酸酯结果。值是绝对值(mM)并且是来自每组14-15只小鼠的均值±S.D.。
表5
非参数分析：Mann Whitney U检验
Evinacumab治疗导致血浆甘油三酯与对照组相比在全部时间点显著降低(平均降低84％)。
脂蛋白曲线
在Superose柱上分离脂蛋白。图4A、图4B和图4C[胆固醇]和图5A、图5B和图5C[甘油三酯]中显示t＝0、t＝6周和t＝13周的胆固醇分数和甘油三酯分数。值是在t＝0、6周和13周时每组的混合血浆中来自胆固醇和甘油三酯测量的绝对值。为了这项分析的目的，将级分3-7视为VLDL；将级分8-16视为IDL/LDL并将级分17-24视为HDL。
在t＝0，治疗启动之前，未观察到脂蛋白曲线差异，而在evinacumab治疗6周和13周后，如与对照组相比，每组汇总的样品中所测量的血浆胆固醇水平在VLDL-LDL峰中降低并且在HDL峰中看起来升高(参见图4B和图4C)。甘油三酯曲线显示相似的样式(参见图5A、图5B和图5C)。
这些数据与研究期间观察到各个动物总胆固醇水平和甘油三酯水平下降相符。
动脉粥样硬化损害面积
表6和图6A和图6B中总结了动脉粥样硬化性损害面积。值是主动脉根中每个截面的绝对损害面积并且表述为每组14-15只小鼠的均值±S.D.。
表6
非参数分析：Mann Whitney U检验
在t＝13周处死时，对照组的主动脉根中总损害面积是216082μm2/截面。用evinacumab治疗显著地减少总损害面积，处死时如与对照组相比减少39％(p<0.001)。
动脉粥样硬化：损害数目
表7中总结了每个截面的动脉粥样硬化性损害数目。值是绝对值(损害数目)并且表述为每组14-15只小鼠的均值±S.D.。
表7
非参数分析：Mann Whitney U检验
evinacumab-治疗组与对照组相比，之间不存在损害数目的差异。
动脉粥样硬化：损害严重程度
表8中总结了动脉粥样硬化性损害严重程度结果。值是总损害的百分数并且表述为每组14-15只小鼠的均值±S.D.。
表8
非参数分析：Mann Whitney U检验
evinacumab-治疗组与对照组相比，之间不存在损害严重程度的差异。
动脉粥样硬化：无病区段
表9中总结了无病动脉粥样硬化区段的数目。值代表非动脉粥样硬化性(“无病”或健康)区段的百分数。值是每组14-15只小鼠的均值±S.D.。
表9
非参数分析：Mann Whitney U检验
evinacumab-治疗组与对照组相比，之间不存在无病区段量的差异。
动脉粥样硬化：巨噬细胞含量
表10和图7A中总结了损害的巨噬细胞含量。值是绝对值(μm2*1000)或相对值(％损害)并且表述为每组14-15只小鼠的均值±S.D.。
表10
非参数分析：Mann Whitney U检验
如与对照组相比，evinacumab治疗倾向于降低IV-V型动脉粥样硬化性损害中的巨噬细胞含量/截面。然而，针对总损害面积修正并且表述为IV-V型损害中巨噬细胞百分数后，未观察到这个差异(图7A)。
动脉粥样硬化：坏死含量
表11和图7A中总结了损害的坏死含量。值是绝对值(μm2*1000)或相对值(％损害)并且表述为每组14-15只小鼠的均值±S.D.。
表11
非参数分析：Mann Whitney U检验
如与对照组相比，evinacumab治疗显著地降低IV-V型动脉粥样硬化性损害中的坏死含量/截面(69％，p<0.001)。针对总损害面积修正后，如与对照组相比，IV-V型损害中坏死面积的百分数也显著地降低(45％，p＝0.001)(图7A)。
动脉粥样硬化：纤维化帽中的平滑肌细胞
表12和图7B中总结了损害的纤维化帽中平滑肌细胞(SMC)的定量。值是绝对值(μm2*1000)或相对值(％损害)并且表述为每组14-15只小鼠的均值±S.D.。
表12
非参数分析：Mann Whitney U检验
如与对照组相比，evinacumab治疗显著地降低IV-V型动脉粥样硬化性损害中的平滑肌细胞(SMC)面积/截面(39％，p＝0.009)。然而，针对总损害修正后，如与对照组相比，IV-V型损害的纤维化帽中SMC的百分数并未显著地降低(图7B)。
动脉粥样硬化：胶原含量
表13和图7B中总结了损害的胶原含量。值是绝对值(μm2*1000)或相对值(％损害)并且表述为每组14-15只小鼠的均值±S.D.。
表13
非参数分析：Mann Whitney U检验
如与对照组相比，evinacumab治疗显著地降低IV-V型动脉粥样硬化性损害中的胶原含量/截面(40％，p＝0.009)。然而，针对总损害面积修正后，如与对照组相比，IV-V型损害中胶原的百分数并未显著地降低(图7B)。
动脉粥样硬化：单核细胞黏附
表14中总结了每个截面的单核细胞百分数。值是绝对值(黏附性单核细胞数目/截面)并且表述为每组14-15只小鼠的均值±S.D.。
表14
非参数分析：Mann Whitney U检验
如与对照组相比，与主动脉根血管壁中单核细胞与活化的内皮黏附不受evinacumab治疗影响。
动脉粥样硬化：稳定指数
表15中总结了损害的斑块稳定性(根据稳定指数表述)。稳定指数定义为稳定化标志物(SMC和胶原含量)的总和除以去稳定化标志物(巨噬细胞和坏死含量)的总和。这个值提供对斑块稳定性的度量。值是每组14-15只小鼠的均值±S.D.。
表15
非参数分析：Mann Whitney U检验
如与对照组相比，evinacumab治疗并不影响稳定指数。
概述
安全性方面
如与对照相比，对体重(增加)和食物摄入量的影响不因evinacumab治疗而明显。
VLDL水平和LDL水平降低
APOE*3Leiden.CETP小鼠是充分建立的特征在于残余脂蛋白堆积和VLDL-C对LDL-C比率升高的人类家族性血β脂蛋白异常(FD)模型。APOE*3Leiden.CETP小鼠中的脂蛋白曲线反映与对脂质调整疗法具有相似反应的FD患者的脂蛋白曲线。通过具有他汀类药物治疗25和非诺贝特和烟酸的全部含apoB的脂蛋白子级分中胆固醇的可比性降低，展示这一点。
在本研究中，如与对照相比，evinacumab治疗显著地降低平均总胆固醇(TC)(-52％，p<0.001)和甘油三酯(TG)(-84％，p<0.001)，这限于非HDL级分。
损害尺寸和坏死面积减少
在本研究中的，如与对照组相比，evinacumab显著地减少损害尺寸(-39％，p<0.001)。发现损害数目、无病区段或损害严重程度无显著差异。
Evinacumab治疗显著地减少重度IV-V型损害中作为总损害尺寸百分数的坏死含量(45％，p＝0.001)，但是不影响巨噬细胞含量、胶原含量或SMC面积，产生与对照组相似的损害稳定指数。Evinacumab不影响召集单核细胞至活化的内皮。
坏死含量是斑块组成的唯一标志物，该标志物就绝对面积而言并且还作为总损害面积的百分数改变。一种可能解释可能是斑块中巨噬细胞群体的组成从更多促炎性M1“杀伤”巨噬细胞转变成更有愈合作用的“修复”M2巨噬细胞，后者可以从斑块移除胆固醇。
结论
总体上，这个实施例中所述的结果显示，抗ANGPTL3单克隆抗体evinacumab在APOE*3Leiden.CETP小鼠中降低血浆脂质并且防止动脉粥样硬化进展。Evinacumab不影响损害数目、损害严重程度或斑块稳定性，但是显著减少损害面积和坏死性核心面积。
本发明在范围方面不受本文中描述的具体实施方案限制。实际上，除了本文描述的那些修改之外，本发明的各种修改将因前文描述和附图是本领域技术人员显而易见的。这类修改意在落入所附权利要求的范围内。

Claims (21)

1.一种用于预防或减弱受试者中动脉粥样硬化的方法，所述方法包括选择患有动脉粥样硬化或面临出现动脉粥样硬化的风险的受试者并且向施受试者用一剂或多剂血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)抑制剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其中在开始用一剂或多剂ANGPTL3抑制剂治疗之前或之时，受试者经诊断患有杂合家族性高胆固醇血症(HeFH)或纯合家族性高胆固醇血症(HoFH)和/或升高的脂蛋白(a)(Lp[a])。
3.根据权利要求1所述的方法，其中在开始用一剂或多剂ANGPTL3抑制剂治疗之前或之时，受试者经诊断患有心血管疾病(CVD)。
4.根据权利要求1所述的方法，其中在开始用一剂或多剂ANGPTL3抑制剂治疗之前或之时，受试者已经罹患卒中或心肌梗死。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中在开始用一剂或多剂ANGPTL3抑制剂治疗之前或之时，受试者正接受稳定的背景脂质调节疗法(LMT)。
6.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中患者正接受稳定的背景脂质调节疗法(LMT)，与之同时施用一剂或多剂ANGPTL3抑制剂。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其中稳定的背景LMT是低剂量、中等剂量或大剂量他汀疗法。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中向受试者施用一剂或多剂ANGPTL3抑制剂导致选自以下的一种或多种治疗结果：
(a)血清总胆固醇(TC)水平降低，
(b)血清甘油三酯(TG)水平降低，
(c)血清低密度脂蛋白(LDL)水平降低，和
(d)血清极低密度脂蛋白(VLDL)水平降低；
其中在开始用一剂或多剂ANGPTL3抑制剂治疗之前或之时，相对于受试者的血清TC水平、血清TG水平、血清LDL水平和/或血清VLDL水平，确定(a)、(b)、(c)和/或(d)降低。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中向受试者施用一剂或多剂ANGPTL3抑制剂导致动脉粥样硬化斑块形成减少。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中ANGPTL3抑制剂是特异性结合ANGPTL3的抗体或其抗原结合片段。
11.根据权利要求10所述的方法，其中特异性结合ANGPTL3的抗体或其抗原结合片段包含了包含SEQ ID NO:2/3的HCVR/LCVR氨基酸序列对的重链CDR和轻链CDR。
12.根据权利要求11所述的方法，其中特异性结合ANGPTL3的抗体或其抗原结合片段包含了具有SEQ ID NO:4、5、6、7、8和9的重链和轻链CDR氨基酸序列。
13.根据权利要求12所述的方法，其中特异性结合ANGPTL3的抗体或其抗原结合片段包含了具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列的HCVR和具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的LCVR。
14.根据权利要求10所述的方法，其中特异性结合ANGPTL3的抗体或其抗原结合片段是evinacumab。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，还包括向受试者施用一剂或多剂前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶kexin-9(PCSK9)抑制剂。
16.根据权利要求15所述的方法，其中PCSK9抑制剂是特异性结合PCSK9的抗体或其抗原结合片段。
17.根据权利要求16所述的方法，其中特异性结合PCSK9的抗体或其抗原结合片段选自alirocumab、evolocumab、bococizumab、lodelcizumab和ralpancizumab。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，还包括向受试者施用一剂或多剂ANGPTL4抑制剂和/或ANGPTL8抑制剂。
19.血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)抑制剂预防或减弱受试者中动脉粥样硬化的用途，其中受试者患有动脉粥样硬化或面临形成动脉粥样硬化的风险，并且其中向受试者施用一剂或多剂血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)抑制剂。
20.血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)抑制剂在制备预防或减弱受试者中动脉粥样硬化的药物中的用途，其中受试者患有动脉粥样硬化或面临形成动脉粥样硬化的风险，并且其中向受试者施用一剂或多剂血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)抑制剂。
21.预防或减弱受试者中动脉粥样硬化的药物组合物，其中受试者患有动脉粥样硬化或面临形成动脉粥样硬化的风险，其中组合物包含血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)抑制剂，并且其中向受试者施用一剂或多剂血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)抑制剂。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110694068A (zh) * 2019-11-06 2020-01-17 北京市心肺血管疾病研究所 一种抑制血管生成素样蛋白8的物质的应用
CN112062845A (zh) * 2019-06-10 2020-12-11 山东博安生物技术有限公司 Angptl3结合片段及其用途
WO2021147984A1 (zh) * 2020-01-22 2021-07-29 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗angptl3抗体及其应用

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AR087329A1 (es) 2011-06-17 2014-03-19 Regeneron Pharma Anticuerpos humanos contra proteina 3 de tipo angiopoietina humana
CN109096369B (zh) * 2018-09-10 2020-07-07 云南民族大学 一种特异性检测铜离子和硫离子的多肽、化学荧光传感器及其制备方法与应用
WO2020099482A2 (en) * 2018-11-13 2020-05-22 Lipigon Pharmaceuticals Ab Angptl 3 oligonucleotides influencing the regulation of the fatty acid metabolism
WO2020099525A2 (en) * 2018-11-13 2020-05-22 Lipigon Pharmaceuticals Ab Oligonucleotides influencing the regulation of the fatty acid metabolism
JP2022507464A (ja) * 2018-11-13 2022-01-18 リピゴン ファーマスーティカルス アー・ベー 脂肪酸代謝の調節に影響を与えるａｎｇｐｔｌ４オリゴヌクレオチド
US20220380425A1 (en) * 2019-07-04 2022-12-01 Cadila Healthcare Limited Angptl3 based vaccine for the treatment of liver disease
CN110596399B (zh) * 2019-08-29 2022-07-22 首都医科大学附属北京安贞医院 检测血管生成素样蛋白8含量的物质的应用
TWI833641B (zh) 2022-05-02 2024-02-21 丹麥商諾佛 儂迪克股份有限公司 適於高濃度組成物及皮下投藥之新穎抗ａｎｇｐｔｌ３抗體

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102245641A (zh) * 2008-12-15 2011-11-16 瑞泽恩制药公司 抗pcsk9的高亲和力人抗体
CN102753186A (zh) * 2010-01-08 2012-10-24 Isis制药公司 血管生成素样3表达的调节
CN103732624A (zh) * 2011-06-17 2014-04-16 瑞泽恩制药公司 抗angptl3抗体及其用途
WO2015100394A1 (en) * 2013-12-24 2015-07-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of angiopoietin-like 3 expression

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020035058A1 (en) * 1996-05-15 2002-03-21 The University Of Sheffield Isopentenyl pyrophosphate isomerase (IPI) and/or prenyl transferase inhibitors
US6172071B1 (en) * 1998-07-30 2001-01-09 Hughes Institute Lipid-lowering quinazoline derivative
CA2361335A1 (en) * 1999-02-12 2000-08-17 President And Fellows Of Harvard College Inhibiting formation of atherosclerotic lesions
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
BRPI0720218A2 (pt) 2006-12-08 2013-12-24 Lexicon Pharmaceuticals Inc Anticorpos monoclonais contra angptl3
US8722093B2 (en) * 2009-02-23 2014-05-13 NanoRx, Inc. Policosanol nanoparticles
MX2015012818A (es) * 2013-03-14 2016-05-12 Uab Research Foundation Mimeticos de apolipoproteina y usos de los mismos.
EA201592267A1 (ru) * 2013-06-07 2016-04-29 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Способы ингибирования атеросклероза посредством введения ингибитора pcsk9
TW201713690A (zh) * 2015-08-07 2017-04-16 再生元醫藥公司 抗ａｎｇｐｔｌ８抗體及其用途

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102245641A (zh) * 2008-12-15 2011-11-16 瑞泽恩制药公司 抗pcsk9的高亲和力人抗体
CN102753186A (zh) * 2010-01-08 2012-10-24 Isis制药公司 血管生成素样3表达的调节
CN103732624A (zh) * 2011-06-17 2014-04-16 瑞泽恩制药公司 抗angptl3抗体及其用途
WO2015100394A1 (en) * 2013-12-24 2015-07-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of angiopoietin-like 3 expression

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SUSAN KÜHNAST等: "Alirocumab inhibits atherosclerosis, improves the plaque morphology, and enhances the effects of a statin", 《J LIPID RESEARCH》 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112062845A (zh) * 2019-06-10 2020-12-11 山东博安生物技术有限公司 Angptl3结合片段及其用途
CN112062844A (zh) * 2019-06-10 2020-12-11 山东博安生物技术有限公司 抗angptl3抗体及其用途
CN112062844B (zh) * 2019-06-10 2022-07-19 山东博安生物技术股份有限公司 抗angptl3抗体及其用途
CN112062845B (zh) * 2019-06-10 2022-09-02 山东博安生物技术股份有限公司 Angptl3结合片段及其用途
CN110694068A (zh) * 2019-11-06 2020-01-17 北京市心肺血管疾病研究所 一种抑制血管生成素样蛋白8的物质的应用
WO2021147984A1 (zh) * 2020-01-22 2021-07-29 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗angptl3抗体及其应用
CN114829395A (zh) * 2020-01-22 2022-07-29 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗angptl3抗体及其应用
CN114829395B (zh) * 2020-01-22 2023-12-12 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗angptl3抗体及其应用

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