KR20180108840A

KR20180108840A - Angptl3의 억제제를 투여함으로써 죽상 동맥경화증을 치료하거나 예방하기 위한 방법

Info

Publication number: KR20180108840A
Application number: KR1020187026585A
Authority: KR
Inventors: 제스퍼 그로마다; 빅토리아 구사로바; 앤드류 제이. 머피
Original assignee: 리제너론 파아마슈티컬스, 인크.
Priority date: 2016-02-17
Filing date: 2017-02-13
Publication date: 2018-10-04
Also published as: MA44234A; US20200079841A1; AU2017219602A1; SI3416684T1; MD3416684T2; ES2951262T3; EP3416684B1; ZA201805058B; MX2018009680A; PT3416684T; CA3014928A1; AU2017219602C1; AU2017219602B2; US20220089711A1; HUE062709T2; PL3416684T3; MA44234B1; EA201891853A1; EP3416684A1; IL260931A

Abstract

본 발명은 대상체에서의 죽상 동맥경화증을 치료하거나 예방하기 위한 방법 및 조성물을 제공한다. 본 발명의 방법은 죽상 동맥경화증을 갖거나 죽상 동맥경화증을 발병할 위험이 있는 대상체에게 안지오포이에틴-유사 단백질-3(ANGPTL3)의 억제제를 투여하는 것을 포함한다. 소정 실시형태들에서, 상기 ANGPTL3 억제제는 ANGPTL3에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.

Description

ANGPTL3의 억제제를 투여함으로써 죽상 동맥경화증을 치료하거나 예방하기 위한 방법

서열 서술

본 출원은 ASCII 포맷으로 전자 제출되었고 그 전문이 본원에 인용에 의해 포함되는 서열 목록을 함유한다. 2017년 2월 8일에 생성된 상기 ASCII 사본은 파일명이 0431_23-PCT_SL.txt이고 14,141바이트 크기이다.

본 발명의 분야

본 발명은 죽상 동맥경화성 질환 및 관련 장애의 치료학적 치료의 분야에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 죽상 동맥경화증을 치료하거나 예방하기 위한 ANGPTL3 억제제의 용도 및 대상체에서의 죽상 동맥경화성 플라크 형성 및/또는 죽상 동맥경화성 병변을 제거하거나 감소시키기 위한 방법에 관한 것이다.

배경

죽상 동맥경화증은 동맥 혈관에 영향을 미치는 증후군이다. 죽상 동맥경화증은 동맥 벽에서의 만성 염증성 반응으로부터 초래되고 사망 및 심혈관성 이환율의 주요 원인이다. 죽상 동맥경화증은 동맥 벽의 비후화(thickening)를 수반하고 동맥 플라크의 발생과 혈류의 궁극적 제한 또는 차단을 특징으로 한다. 현재 죽상 동맥경화증 치료로는 식이 및 및 생활 습관 개선(예를 들면, 금연), 약제학적 개재(예를 들면, 스타틴, 항-응고제 등) 및 수술(예를 들면, 혈관 성형술, 스텐트, 바이패스 수술 등)이 포함된다. 사람 대상체에서의 죽상 동맥경화증 발병에 대한 약제학적 개재의 효능의 직접적인 평가는 살아있는 대상체에서의 플라크 및 동맥 병변을 정확하게 검출하고 측정하는 것에 있어서의 어려움으로 인한 문제가 있다. 따라서, 죽상 동맥경화증의 동물 모델은 죽상 동맥경화증에 대한 신규 치료학적 치료의 발달 및 시험에 매우 유용하다.

죽상 동맥경화증의 치료, 예방 또는 개선을 위한 새로운 방법이 당해 분야에 필요하다.

본 발명의 간략한 요약

본 발명은 치료하거나, 대상체에서의 죽상 동맥경화증을 치료하거나, 예방하거나 또는 약화시키기 위한 방법, 용도 및 조성물을 제공한다. 본 발명의 방법은 상기 대상체에게 안지오포이에틴-유사 단백질 3(ANGPTL3) 억제제의 1회 이상의 용량을 투여하는 것을 포함한다. 본 발명의 치료학적 방법은 죽상 동맥경화성 플라크 및 죽상 동맥경화성 병변 형성의 감소를 필요로 하는 대상체에서의 죽상 동맥경화성 플라크 및 죽상 동맥경화성 병변 형성의 감소를 초래한다. 본 발명의 방법은 또한 대상체에서의 혈청 총 콜레스테롤, LDL 콜레스테롤 및 트리글리세라이드를 감소시키는데 그리고 총 콜레스테롤, LDL 콜레스테롤 및/또는 트리글리세라이드 중 하나 이상의 감소에 의해 치료가능한 질환 및 장애를 치료하는데 유용하다.

본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 상기 대상체는 ANGPTL3 억제제의 1회 이상의 용량을 이용한 치료의 개시 전에 또는 상기 치료의 개시 시점에 이형접합성 가족성 고콜레스테롤혈증(HeFH: heterozygous familial hypercholesterolemia) 또는 동형접합성 가족성 고콜레스테롤혈증(HoFH: homozygous familial hypercholesterolemia) 및/또는 상승된 지단백질(a)(Lp[a])로 진단된다. 본 발명은 또한 본래 가족성이 아닌 고콜레스테롤혈증(즉, 비-가족성 고콜레스테롤혈증)을 갖는 대상체에서의 죽상 동맥경화증을 치료하거나, 예방하거나 또는 약화시키는 방법을 포함한다. 본 발명의 방법에 의해 치료가능한 대상체로는, 소정 실시형태들에서는 심혈관 질환(예를 들면, 죽상 동맥경화성 심혈관 질환)을 갖거나 상기 심혈관 질환으로 진단된 이들 대상체가 포함된다. 소정 실시형태들에서, 본 발명의 방법에 의해 치료가능한 대상체는 뇌졸중 또는 심근 경색을 앓았던 대상체이다.

본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, ANGPTL3 억제제는 환자의 기존 지질-변형 치료요법에 대한(예를 들면, 환자의 배경 스타틴 치료요법 외에) 부가(add-on) 치료요법으로서 환자에게 투여된다.

본 발명의 방법과 관련하여 사용될 수 있는 예시의 ANGPTL3 억제제로는 예를 들면, 항-ANGPTL3 항체, 핵산-기반 ANGPTL3 억제제, 소분자 ANGPTL3 억제제 및 스캐폴드-기반 ANGPTL3-결합 분자가 포함된다.

본 발명의 다른 실시형태들은 이어지는 상세한 설명의 검토로부터 명백해질 것이다.

도 1은 본원의 실시예 2에 기술된 연구의 과정에 걸쳐 동물들에 대해 수행된 절차, 투여 및 측정을 설명하는 연구 흐름도이다.
도 2a 및 도 2b는 본원의 실시예 2에 기술된 연구의 과정에 걸친 상이한 시점에서의 상이한 치료 그룹으로부터의 동물들의 콜레스테롤 수준을 보여준다(대조군 치료됨, 흑색 사각형[■]; 또는 에비나쿠맙-치료됨, 흑색 원[●]). 도 2a는 시간(주)에 따른 평균 콜레스테롤 수준(mM)을 보여준다. 도 2b는 13주째의 총 콜레스테롤 노출(mM x 주)을 보여준다.
도 3은 본원의 실시예 2에 기술된 연구의 과정에 걸친 상이한 시점에서의 상이한 치료 그룹으로부터의 동물들의 트리글리세라이드 수준(mM)을 보여준다(대조군 치료됨, 흑색 사각형[■]; 또는 에비나쿠맙-치료됨, 흑색 원[●]).
도 4a, 도 4b 및 도 4c는 본원의 실시예 2에 기술된 연구의 과정에 걸친 상이한 시점에서의 상이한 치료 그룹으로부터의 동물들의 콜레스테롤 지단백질 프로파일(mM, 지단백질 분리 후)을 보여준다(대조군 치료됨, 흑색 사각형[■]; 또는 에비나쿠맙-치료됨, 흑색 원[●]). 지단백질은 수퍼로스(Superose) 컬럼 상에서 분리되었고, 나타내어진 값은 명시된 각종 시점에서의 그룹당 풀링된(pooled) 혈장에서의 콜레스테롤 측정값으로부터의 절대값이다. 도 4a는 해당 연구의 시간=0에서 채취한 혈장의 상이한 분획들로부터의 콜레스테롤 수준을 보여준다. 도 4b는 해당 연구의 시간=6주에서 채취한 혈장의 상이한 분획으로부터의 콜레스테롤 수준을 보여준다. 도 4c는 해당 연구의 시간=13주에서 채취한 혈장의 상이한 분획으로부터의 콜레스테롤 수준을 보여준다.
도 5a, 도 5b 및 도 5c는 본원의 실시예 2에 기술된 연구의 과정에 걸친 상이한 시점에서의 상이한 치료 그룹으로부터의 동물들의 트리글리세라이드 지단백질 프로파일(mM, 지단백질 분리 후)을 보여준다(대조군 치료됨, 흑색 사각형[■]; 또는 에비나쿠맙-치료됨, 흑색 원[●]). 지단백질은 수퍼로스 컬럼 상에서 분리되었고, 해당 값은 명시된 각종 시점에서의 그룹당 풀링된(pooled) 혈장에서의 트리글리세라이드 측정값으로부터의 절대값이다. 도 5a는 해당 연구의 시간=0에서 채취한 혈장의 상이한 분획들로부터의 트리글리세라이드 수준을 보여준다. 도 5b는 해당 연구의 시점=6주에서 채취한 혈장의 상이한 분획들로부터의 트리글리세라이드 수준을 보여준다. 도 5c는 해당 연구의 시점=13주 채취한 혈장의 상이한 분획들로부터의 트리글리세라이드 수준을 보여준다.
도 6a 및 도 6b는 본원의 실시예 2에 기술된 연구의 13주째에 상이한 치료 그룹으로부터의 동물들의 죽상 동맥경화성 병변 면적을 보여준다(대조군 치료됨, 백색 바(bar) 또는 원; 또는 에비나쿠맙-치료됨, 흑색 바 또는 원). 도 6a는 상이한 치료 그룹에 대한 단면적(x1000㎛²)당 평균 죽상 동맥경화성 병변 면적을 보여준다. 도 6b는 상이한 치료 그룹에서 각각의 동물들에 대한 단면적(x1000㎛²)당 죽상 동맥경화성 병변 면적을 보여주는 전체 병변 면적의 산점도이다.
도 7a 및 도 7b는 본원의 실시예 2에 기술된 연구의 13주째에 상이한 치료 그룹으로부터의 동물들에서 관찰된 IV형 또는 V형으로서 분류된 죽상 동맥경화성 병변으로부터의 단면적의 평균 괴사 함량을 보여준다(대조군 치료됨, 백색 바; 또는 에비나쿠맙-치료됨, 흑색 바). 도 7a는 단면당 괴사 면적의 절대값(㎛²x1000)을 보여준다. 도 7b는 해당 병변의 괴사 함량의 상대적 값(병변 면적 중의 백분율)을 보여준다.

상세한 설명

본 발명을 기술하기 전에, 본 발명은 설명된 특정 방법 및 실험 조건에 한정되는 것은 아니고, 이러한 방법 및 조건을 다양할 수 있음을 이해해야 한다. 또한, 본원에 사용된 용어는 단지 특정 실시형태들을 설명할 목적을 위한 것이고, 본 발명의 범위는 첨부된 청구범위에 의해서만 한정될 것이므로, 한정되는 것을 의도하는 것은 아님을 이해해야 한다.

달리 정의하지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 당해 분야의 숙련가들 중 하나에 의해 일반적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 사용되는 바와 같이, 특정 인용된 수적 값과 관련하여 사용되는 경우의 용어 "약"은 해당 값이 인용된 값과 1% 이하만큼 다를 수 있음을 의미한다. 예를 들면, 본원에 사용되는 바와 같은 표현 "약 100"은 99 및 101, 그리고 이들 사이의 모든 값들(예를 들면, 99.1, 99.2, 99.3, 99.4 등)을 포함한다.

본원에 기술된 것들과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 재료를 본 발명의 실행에 사용할 수 있지만, 바람직한 방법 및 재료는 하기에 기술된다. 본원에 언급된 모든 간행물은 이의 전문을 설명하기 위해 본원에 인용에 의해 포함된다.

죽상 동맥경화증을 예방하거나 약화시키기 위한 방법

본 발명은 일반적으로 대상체에서의 죽상 동맥경화증을 예방하거나 약화시키기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 안지오포이에틴-유사 단백질-3(ANGPTL3) 억제제의 1회 이상의 용량을 투여하는 단계를 포함한다. 소정 실시형태들에 따르면, 본 발명의 방법은 대상체에서의 죽상 동맥경화성 플라크 형성의 감소를 초래한다. 예를 들면, 본 발명의 방법은 대상체에서 죽상 동맥경화성 병변 면적의 감소 및/또는 죽상 동맥경화성 병변의 괴사 면적의 감소 중 하나 이상을 초래할 수 있다.

환자 선택

본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 본 발명의 방법에 의해 치료가능한 대상체로는 죽상 동맥경화증을 갖거나 죽상 동맥경화증으로 진단된 대상체, 또는 죽상 동맥경화증을 발병할 위험이 있는 대상체가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 따라서, 본 발명의 방법은 죽상 동맥경화증을 갖거나 죽상 동맥경화증을 발병할 위험이 있는 대상체를 선택하는 단계 및 상기 대상체에게 안지오포이에틴-유사 단백질-3(ANGPTL3) 억제제의 1회 이상의 용량을 투여하는 단계를 포함한다. 본원에 사용되는 바와 같이, "죽상 동맥경화증을 발병할 위험이 있는" 대상체로는 죽상 동맥경화증을 갖거나 죽상 동맥경화증에 관한 하나 이상의 위험 인자를 나타내는 대상체가 포함된다. 죽상 동맥경화증에 관한 위험 인자는 당해 분야에 익히 공지되어 있고, 이들로는 상승된 혈청 저밀도 지단백질(LDL) 콜레스테롤 수준, 상승된 혈청 트리글리세라이드(TG) 수준, 감소된 혈청 고밀도 지단백질(HCL) 콜레스테롤 수준, 고혈압, 진성 당뇨병, 가족력 및 흡연이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 주어진 대상체에 대해 죽상 동맥경화증 위험 인자를 평가하는 방법도 당해 분야에 익히 공지되어 있다.

본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 본 발명의 방법에 의해 치료가능한 대상체는 ANGPTL3 억제제의 1회 이상의 용량을 이용한 치료의 개시 전에 또는 상기 치료의 개시 시점에 이형접합성 가족성 고콜레스테롤혈증(HeFH: heterozygous familial hypercholesterolemia), 동형접합성 가족성 고콜레스테롤혈증(HoFH: homozygous familial hypercholesterolemia), 상승된 지단백질(a)(Lp[a]), 상염색체 우성 고콜레스테롤혈증(ADH: Autosomal Dominant Hypercholesterolemia, 예를 들면 LDLR 유전자, ApoB 유전자 및/또는 PCSK9 유전자 내의 하나 이상의 기능-획득(gain-of-function) 돌연변이와 관련된 ADH), 상염색체 열성 고콜레스테롤혈증(ARH: autosomal recessive hypercholesterolemia, 예를 들면 LDLRAP1 내의 돌연변이와 관련된 ARH), 및 가족성 고콜레스테롤혈증과 별개인 고콜레스테롤혈증의 발병(비(non)FH)으로 진단된 대상체이다. 가족성 고콜레스테롤혈증(예를 들면, heFH 또는 hoFH)의 진단은 유전형 분석(genotyping) 및/또는 임상학적 기준에 의해 이루어질 수 있다. 유전형 분석되지 않은 환자들의 경우, 임상학적 진단은 사이먼 브룸(Simon Broome) 기준과 확실한 FH에 대한 기준에 또는 8점을 초과하는 스코어를 갖는 WHO/Dutch 지질 네트워크 기준에 기초할 수 있다.

본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 본 발명의 방법에 의해 치료가능한 대상체는 ANGPTL3 억제제의 1회 이상의 용량을 이용한 치료의 개시 전에 또는 상기 치료의 개시 시점에 심혈관 질환(CVD: cardiovascular disease)으로 진단되는 대상체이다. 상기 대상체는 또한 관상동맥 심장 질환(CHD: coronary heart disease)의 병력을 갖는 것에 기초하여 선택될 수 있다. 본원에 사용되는 바와 같은 "CHD의 병력"(또는 "CHD의 기록된 병력")으로는 하기 중 하나 이상이 포함된다: (i) 급성 심근 경색(MI: myocardial infarction); (ii) 무증상 MI; (iii) 불안정 협심증; (iv) 관상동맥 혈관재형성(coronary revascularization) 절차(예를 들면, 경피적 관상동맥 중재술(PCI: percutaneous coronary intervention) 또는 관상 동맥 우회로 이식 수술[CABG: coronary artery bypass graft surgery]); 및/또는 (v) 침습적 또는 비-침습적 시험(관상동맥 혈관조영술, 트레이드밀(treadmill)을 이용한 스트레스 시험, 스트레스 심장 초음파 또는 핵 영상)에 의해 진단된 임상학적으로 유의한 CHD.

본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 본 발명의 방법에 의해 치료가능한 대상체는 비-관상동맥 심장 질환 심혈관 질환("비-CHD CVD")을 갖는 것에 기초하여 선택될 수 있다. 본원에 사용되는 바와 같은 "비-CHD CVD"로는 하기 중 하나 이상이 포함된다: (i) 죽상 동맥혈전성 기원인 것으로서 간주되는, 24시간 초과로 지속된 국소 허혈성 신경학적 결손을 갖는 기록된 이전의 허혈성 뇌졸중; (ii) 말초 동맥 질환; (iii) 복부 대동맥 동맥류; (iv) 죽상 동맥경화성 신장 동맥 협착증; 및/또는 (v) 경동맥 질환(일시적인 허혈성 발작 또는 경동맥의 50% 초과의 폐색).

본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 본 발명의 방법에 의해 치료가능한 대상체는 하나 이상의 추가의 위험 인자들, 예를 들면, (i) 3개월 이상 동안 30 ≤ eGFR < 60mL/min/1.73m2에 의해 정의된 바와 같은 기록된 중간 정도의 만성 신장 질환(CKD: chronic kidney disease); (ii) 표적 기관 손상(예를 들면, 망막병증, 신장병증, 미세알부민뇨증)의 존재 또는 부재 하의 1형 또는 2형 진성 당뇨병; 및/또는 (iii) 계산된 10-년 치명적 CVD 위험 점수 = 5%(ESC/EAS Guidelines for the management of dyslipidemias, Conroy et al., 2003, Eur. Heart J. 24:987-1003)를 갖는 것에 기초하여 선택될 수 있다.

본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 본 발명에 의해 치료가능한 대상체는 연령(예를 들면, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75 또는 80세 초과), 인종, 국적, 성별(남성 또는 여성), 운동 습관(예를 들면, 규칙적인 운동자, 비-운동자), 다른 기존 의학적 병태(예를 들면, II형 당뇨병, 고혈압 등) 및 현재 투약 상태(예를 들면, 현재 복용하고 있는 베타 차단제, 니아신, 에제티미브, 피브레이트, 오메가-3 지방산, 담즙산 수지 등)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 추가의 위험 인자들을 갖는 것에 기초하여 선택될 수 있다.

본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 본 발명에 의해 치료가능한 대상체는 상승된 수준의 하나 이상의 염증 마커를 나타낸다. 전신 염증의 임의의 마커는 본 발명의 목적을 위해 이용할 수 있다. 적합한 염증 마커로는 C-반응성 단백질, 사이토카인(예를 들면, IL-6, IL-8 및/또는 IL-17) 및 세포 부착 분자(예를 들면, ICAM-1, ICAM-3, BL-CAM, LFA-2, VCAM-1, NCAM 및 PECAM)가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 본 발명에 의해 치료가능한 대상체는 상기 선택 기준 또는 치료학적 특성들 중 하나 이상의 조합에 기초하여 선택될 수 있다. 예를 들면, 소정 실시형태들에 따르면 본 발명의 방법을 이용한 치료에 적합한 대상체는 추가로 (i) heFH 또는 비-FH를 기록된 CHD의 병력, (ii) 비-CHD CVD 및/또는 (iii) 표적 기간 손상을 갖는 진성 당뇨병과 조합하여 갖는 것에 기초하여 선택될 수 있고; 이러한 환자는 또한 70mg/dL 초과의 또는 이와 동등한 혈청 LDL-C 농도를 갖는 것에 기초하여 선택될 수 있다.

본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 본 발명에 의해 치료가능한 대상체는 매일 중간-용량 치료학적 스타틴 용법에 의해 적당하게 제어되지 않는 고콜레스테롤혈증을 갖고, 추가로 CHD 또는 비-CHD CVD 부재 하에 heFH 또는 비-FH를 갖지만 (i) 계산된 10-년 치명적 CVD 위험 점수 = 5% 또는 (ii) 표적 기관 손상 부재 하의 진성 당뇨병 중 어느 하나를 갖는 것에 기초하여 선택될 수 있고; 이러한 대상체는 또한 100mg/dL 초과의 또는 이와 동등한 혈청 LDL-C 농도를 갖는 것에 기초하여 선택될 수 있다.

본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 본 발명의 방법에 의해 치료가능한 대상체는 가족성 킬로미크론혈증 증후군(FCS: familial chylomicronemia syndrome; 지단백질 리파제 결핍증으로서도 알려져 있음)을 갖는 대상체이다.

본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 본 발명에 의해 치료가능한 대상체는 지단백질 성분채집술(apheresis)을 경험하고 있거나 또는 (예를 들면, 지난 6개월 이내에, 지난 12주 이내에, 지난 8주 이내에, 지난 6주 이내에, 지난 4주 이내에, 지난 2주 이내에 등) 최근에 경험한 대상체이다.

부가 치료요법으로서의 ANGPTL3 억제제의 투여

본 발명은, 대상체에서의 죽상 동맥경화증을 예방하거나 약화시키는 방법으로서, 상기 대상체에게 특정 투약량 및 빈도에 따라 ANGPTL3 억제제를 투여하고, 여기서 상기 ANGPTL3 억제제는 환자의 기존 지질 변형 치료요법(LMT)에 대한 부가, 예를 들면 환자의 기존 매일 치료학적 스타틴 용법에 대한 부가로서 투여되는, 대상체에서의 죽상 동맥경화증을 예방하거나 약화시키는 방법을 포함한다. (매일 치료학적 스타틴 용법에 대해 ANGPTL3 억제제가 부가될 수 있는 특정한 예시의 매일 치료학적 스타틴 용법은 본원의 다른 곳에 기술되어 있다).

예를 들면, 본 발명의 방법은 상기 ANGPTL3 억제제는 환자가 상기 ANGPTL3 억제제를 투여받기 전에 받은 것과 동일한 안정한 매일 치료학적 스타틴 용법(즉, 동일한 투약량의 스타틴)에 대한 부가 치료요법으로서 투여되는, 부가 치료학적 용법을 포함한다. 다른 실시형태들에서, 상기 ANGPTL3 억제제는 환자가 상기 ANGPTL3 억제제를 투여받기 전에 받은 스타틴의 용량을 초과하거나 상기 스타틴의 용량 미만인 양으로 스타틴을 포함하는 치료학적 스타틴 용법에 대한 부가 치료요법으로서 투여된다. 예를 들면, 특정 투약 빈도 및 양으로 투여되는 ANGPTL3 억제제를 포함하는 치료학적 용법을 개시한 후, 환자에게 투여되거나 처방되는 스타틴의 1일 용량은 환자의 치료학적 필요에 따라 환자가 ANGPTL3 억제제 치료학적 용법을 개시하기 전에 복용하고 있었던 매일 스타틴 용량과 비교하여 (a) 동일하게 유지되거나, (b) 증가되거나 또는 (c) 감소(예를 들면, 상향-적정(up-titrate) 또는 하향-적정(down-titrate))될 수 있다.

치료학적 효능

본 발명의 방법은 대상체의 동맥에서의 죽상 동맥경화성 플라크 형성의 감소 및/또는 대상체에서의 죽상 동맥경화증 진행의 예방을 초래한다. 예를 들면, 본 발명의 방법은 대상체에서의 죽상 동맥경화성 병변에서의 죽상 동맥경화성 병변 면적 및/또는 괴사 중심부 면적을 제한하거나 감소시키는데 유용하다.

본 발명의 방법은 추가로 LDL-C, ApoB100, 비-HDL-C, 총 콜레스테롤, VLDL-C, 트리글리세라이드, Lp(a) 및 잔류 콜레스테롤로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 지질 구성성분의 혈청 수준의 감소를 초래할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 적합한 대상체에 대한 ANGPTL3 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 투여는 혈청 저밀도 지단백질 콜레스테롤(LDL-C)에서 기저선으로부터 적어도 약 25%, 30%, 40%, 50%, 60% 또는 그 이상의 평균 감소 백분율; ApoB100에서 기저선으로부터 적어도 약 25%, 30%, 40%, 50%, 60% 또는 그 이상의 평균 감소 백분율; 비-HDL-C에서 기저선으로부터 적어도 약 25%, 30%, 40%, 50%, 60% 또는 그 이상의 평균 감소 백분율; 총 콜레스테롤에서 기저선으로부터 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35% 또는 그 이상의 평균 감소 백분율; VLDL-C에서 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30% 또는 그 이상의 평균 감소 백분율; 트리글리세라이드에서 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35% 또는 그 이상의 평균 감소 백분율; 및/또는 Lp(a)에서 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25% 또는 그 이상의 평균 감소 백분율을 초래할 것이다.

ANGPTL3 억제제

본 발명의 방법은 환자에게 ANGPTL3 억제제를 포함하는 치료학적 조성물을 투여함을 포함한다. 본원에 사용되는 바와 같은 "ANGPTL3 억제제"는 사람 ANGPTL3에 결합하거나 이와 상호작용하여 시험관내에서(in vitro) 또는 생체내에서(in vivo) ANGPTL3의 정상 생물학적 기능을 억제하는 임의의 제제(agent)이다. ANGPTL3 억제제의 범주의 비-제한적 예로는 소분자 ANGPTL3 길항제, ANGPTL3 발현 또는 활성의 핵산-기반 억제제(예를 들면, siRNA 또는 안티센스(antisense)), ANGPTL3과 특이적으로 상호작용하는 펩타이드-기반 분자(예를 들면, 펩티바디(peptibody)), ANGPTL3과 특이적으로 상호작용하는 수용체 분자, ANGPTL3-결합 스캐폴드 분자(예를 들면, DARPins, HEAT 반복 단백질, ARM 반복 단백질, 테트라트리코펩타이드 반복 단백질, 피브로넥틴-기반 스캐폴드 작제물, 및 천연 발생 반복 단백질에 기초한 기타 스캐폴드 등[예를 들면, 문헌(Boersma and Pluckthun, 2011, Curr. Opin. Biotechnol. 22:849-857) 및 상기 문헌에 인용된 참조문헌을 참조한다]) 및 항-ANGPTL3 압타머(aptamer) 또는 이의 부분이 포함된다. 소정 실시형태들에 따르면, 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있는 ANGPTL3 억제제는 항-ANGPTL3 항체 또는 사람 ANGPTL3에 특이적으로 결합하는 항체의 항원-결합 단편이다.

본원에서 사용되는 용어 "사람 안지오포이에틴-유사 단백질-3" 또는 "사람 ANGPTL3" 또는 "hANGPTL3"은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 ANGPTL3 또는 이의 생물학적 활성 단편을 말한다.

본원에서 사용되는 용어 "항체"는 4개의 폴리펩타이드 쇄, 디설파이드 결합에 의해 상호-연결된 2개의 중(H)쇄와 2개의 경(L)쇄, 및 이들의 다량체(예를 들면, IgM)를 포함하는 면역글로불린 분자를 나타내는 것으로 의도된다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(본원에서 HCVR 또는 V_H로서 약기됨) 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 상기 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인 C_H1, C_H2 및 C_H3을 포함한다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 LCVR 또는 V_L로서 약기됨) 및 경쇄 불변 영역을 포함한다. 상기 경쇄 불변 영역은 1개의 도메인(C_L1)을 포함한다. 상기 V_H 및 V_L 영역은 프레임워크 영역(FR: framework region)이라고 칭하는 보다 보존적인 영역들 사이에 간삽된(interspersed) 상보성 결정 영역(CDR: complementarity determining region)이라고 칭하는 초가변성 영역들로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 V_H 및 V_L은 아미노-말단으로부터 카복시-말단으로 하기 순서로 배열된 3개의 CDR들 및 4개의 FR들로 이루어진다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 본 발명의 상이한 실시형태들에서, 항-ANGPTL3 항체(또는 이의 항원-결합부)의 FR들은 사람 생식선 서열과 동일할 수 있거나, 자연적으로 또는 인공적으로 변형될 수 있다. 아미노산 컨센서스 서열은 2개 이상의 CDR들의 사이드-바이-사이드(side-by-side) 분석에 기초하여 정의될 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "항체"는 또한 전장 항체 분자의 항원-결합 단편을 포함한다. 본원에서 사용되는 용어 항체의 "항원-결합부" 및 항체의 "항원-결합 단편" 등은 임의의 천연 발생, 효소적으로 수득가능한, 합성의 또는 유전적으로 조작된, 항원에 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는 폴리펩타이드 또는 당단백질을 포함한다. 항체의 항원-결합 단편은 임의의 적합한 표준 기술, 예를 들면 단백질 가수분해적 소화(digestion) 또는 항체 가변 및 임의로 불변 도메인을 암호화하는 DNA의 조작 및 발현에 연관된 재조합 유전자 조작 기술을 이용하여 예를 들면, 전장 항체 분자로부터 유도될 수 있다. 이러한 DNA는 공지되어 있고/있거나 상업적 공급원, DNA 라이브러리(예를 들면, 파지-항체 라이브러리를 포함함)로부터 용이하게 입수가능하거나 또는 합성될 수 있다. DNA는 서열분석되고 화학적으로 또는 분자 생물학 기술을 이용하여 조작되어, 예를 들면, 하나 이상의 가변 및/또는 불변 도메인을 적합한 입체배치(configuration)로 배열하거나, 코돈을 도입하거나, 시스테인 잔기를 생성하거나, 아미노산 등을 변형, 부가 또는 결실시킬 수 있다.

항원-결합 단편의 비-제한적 예로는 (i) Fab 단편; (ii) F(ab')2 단편; (iii) Fd 단편; (iv) Fv 단편; (v) 단일-쇄 Fv(scFv) 분자; (vi) dAb 단편; 및 (vii) 항체의 초가변성 영역(예를 들면, 단리된 상보성 결정 영역(CDR), 예를 들면 CDR3 펩타이드)을 모방하는 아미노산 잔기들로 이루어진 최소 인식 단위, 또는 제한된(constrained) FR3-CDR3-FR4 펩타이드가 포함된다. 다른 조작된 분자, 예를 들면 도메인-특이적 항체, 단일 도메인 항체, 도메인-결실된 항체, 키메라 항체, CDR-절편이식된 항체, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 미니바디, 나노바디(예를 들면, 1가의 나노바디, 2가의 나노바디 등), 소형 모듈 면역약제(SMIP: small modular immunopharmaceutical) 및 상어 가변 IgNAR 도메인은 또한 본원에 사용되는 표현 "항원-결합 단편" 내에 포함된다.

항체의 항원-결합 단편은 전형적으로 적어도 1개의 가변 도메인을 포함할 것이다. 가변 도메인은 임의의 크기 또는 아미노산 조성으로 이루어질 수 있고, 일반적으로 하나 이상의 프레임워크 서열과 인접하거나 하나 이상의 프레임워크 서열과 프레임 내에 존재하는 적어도 1개의 CDR을 포함할 것이다. V_L 도메인과 관련된 V_H 도메인을 갖는 항원-결합 단편에서, V_H 및 V_L 도메인은 임의의 적합한 배열로 서로에 대해 위치할 수 있다. 예를 들면, 가변 영역은 이량체성일 수 있고, V_H-V_H, V_H-V_L 또는 V_L-V_L 이량체를 함유할 수 있다. 대안으로, 항체의 항원-결합 단편은 단량체성 V_H 또는 V_L 도메인을 함유할 수 있다.

소정 실시형태들에서, 항체의 항원-결합 단편은 적어도 1개의 불변 도메인에 공유결합적으로 링크된 적어도 1개의 가변 도메인을 함유할 수 있다. 본 발명의 항체의 항원-결합 단편 내에서 발견될 수 있는 가변 및 불변 도메인의 비-제한적 예시의 입체배치로는 (i) V_H-C_H1; (ii) V_H-C_H2; (iii) V_H-C_H3; (iv) V_H-C_H1-C_H2; (v) V_H-C_H1-C_H2-C_H3; (vi) V_H-C_H2-C_H3; (vii) V_H-C_L; (viii) V_L-C_H1; (ix) V_L-C_H2; (x) V_L-C_H3; (xi) V_L-C_H1-C_H2; (xii) V_L-C_H1-C_H2-C_H3; (xiii) V_L-C_H2-C_H3; 및 (xiv) V_L-C_L이 포함된다. 상기 열거된 예시의 입체배치 중 임의의 것을 포함하는 가변 및 불변 도메인의 임의의 입체배치에서, 가변 및 불변 도메인은 서로에 대해 직접적으로 링크될 수 있거나 전장 또는 부분적 힌지 또는 링커 영역에 의해 링크될 수 있다. 힌지 영역은 단일 폴리펩타이드 분자에서 인접한 가변 및/또는 불변 도메인 사이에 가요성(flexible) 또는 반-가요성 링크를 초래하는 적어도 2개(예를 들면, 5, 10, 15, 20, 40, 60개 또는 그 이상)의 아미노산으로 이루어질 수 있다. 또한, 본 발명의 항체의 항원-결합 단편은 서로와의 그리고/또는 (예를 들면, 디설파이드 결합(들)에 의한) 하나 이상의 단량체성 V_H 또는 V_L 도메인과의 비-공유결합적 회합에서 상기 열거된 가변 및 불변 도메인 입체배치 중 임의의 것의 동종-이량체 또는 이종-이량체(또는 기타 다량체)를 포함할 수 있다.

전장 항체 분자에 관해서, 항원-결합 단편은 단일특이적 또는 다중특이적(예를 들면, 이특이적)일 수 있다. 항체의 다중특이적 항원-결합 단편은 전형적으로 적어도 2개의 상이한 가변 도메인들을 포함할 것이고, 여기서 각각의 가변 도메인은 별도의 항원에 또는 동일한 항원의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 본원에 개시된 예시의 이특이적 항체 포맷을 포함하는 임의의 다중특이적 항체 포맷은 당해 분야에서 이용가능한 일상적 기술을 이용하여 본 발명의 항체의 항원-결합 단편과 관련하여 사용하기 위해 개작될(adapted) 수 있다.

항체의 불변 영역은 보체를 고착시키고 세포-의존적 세포독성을 매개하는 항체의 능력에 있어서 중요하다. 따라서, 항체의 이소타입은 항체가 세포독성을 매개하는 것이 바람직한지의 여부에 기초하여 선택될 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "사람 항체"는 사람 생식선 면역글로불린 서열로부터 유도된 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 그럼에도 불구하고, 본 발명의 사람 항체는 예를 들면, CDR에 그리고 특히 CDR3에 사람 생식선 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않은 아미노산 잔기들(예를 들면, 시험관내 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이 유발(mutagenesis)에 의해 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)을 포함할 수 있다. 그러나, 본원에서 사용되는 용어 "사람 항체"는 마우스와 같은 다른 포유동물 종의 생식선으로부터 유도된 CDR 서열들이 사람 프레임워크 서열에 절편이식된 항체를 포함하는 것으로 의도되지 않는다.

본원에서 사용되는 용어 "재조합 사람 항체"는 숙주 세포 내로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 이용하여 발현된 항체와 같은 재조합 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나 또는 단리된 모든 사람 항체(하기에 추가로 기술됨), 재조합 조합적(combinatorial) 사람 항체 라이브러리로부터 단리된 항체(하기에 추가로 기술됨), 사람 면역글로불린 유전자에 대해 유전자전이된 동물(예를 들면, 마우스)로부터 단리된 항체(예를 들면, 문헌[Taylor et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295]을 참조한다) 또는 다른 DNA 서열에의 사람 면역글로불린 유전자 서열의 스플라이싱(splicing)을 포함하는 임의의 다른 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나 또는 단리된 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 이러한 재조합 사람 항체는 사람 생식선 면역글로불린 서열로부터 유도된 가변 및 불변 영역을 갖는다. 그러나, 소정 실시형태들에서, 이러한 재조합 사람 항체는 시험관내 돌연변이 유발(또는 사람 Ig 서열에 대해 유전자전이된 동물이 사용되는 경우, 생체내 체세포 돌연변이)시키고, 따라서 재조합 항체의 V_H 및 V_L 영역의 아미노산 서열은, 사람 생식선 V_H 및 V_L 서열로부터 유도되고 이들과 관련되어 있지만 생체내 사람 생식선 레퍼토리 내에 자연적으로 존재하지 않을 수 있는 서열이다.

사람 항체는 힌지 이질성(hinge heterogeneity)과 관련된 2개의 형태로 존재할 수 있다. 하나의 형태에서, 면역글로불린 분자는 대략 150 내지 160kDa의 안정한 4개 쇄 작제물을 포함하고, 여기서 이량체는 쇄간 중쇄 디설파이드 결합에 의해 함께 고정된다. 제2 형태에서, 이량체는 쇄간 디설파이드 결합을 통해 링크되지 않고, 공유결합적으로 커플링된 경쇄 및 중쇄(반(half)-항체)로 이루어진 약 75 내지 80kDa의 분자가 형성된다. 이들 형태는 친화성 정제 후에도 분리하기가 극히 어려웠다.

각종 온전한(intact) IgG 이소타입에서의 제2 형태의 출현 빈도는 항체의 힌지 영역 이소타입과 관련된 구조적 차이로 인한 것이지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 사람 IgG4 힌지의 힌지 영역에서의 단일 아미노산 치환은 제2 형태(Angal et al. (1993) Molecular Immunology 30:105)의 출현을 사람 IgG1 힌지를 이용하여 통상적으로 관찰되는 수준으로 유의하게 감소시킬 수 있다. 본 발명은 힌지, C_H2 또는 C_H3 영역에 하나 이상의 돌연변이를 갖는 항체를 포함하고, 이는 원하는 항체 형태의 수율을 향상시키기 위해, 예를 들면, 생산시에 바람직할 수 있다.

본원에서 사용되는 "단리된 항체"는 이의 자연 환경의 적어도 하나의 구성성분으로부터 확인되어 분리되고/되거나 회수된 항체를 의미한다. 예를 들면, 유기체의 적어도 하나의 구성성분으로부터, 또는 항체가 자연적으로 존재하거나 자연적으로 생성되는 조직 또는 세포로부터 분리되거나 제거된 항체는 본 발명의 목적을 위한 "단리된 항체"이다. 단리된 항체는 또한 재조합 세포 내의 동일반응계내(in situ) 항체도 포함한다. 단리된 항체는 적어도 하나의 정제 또는 단리 단계를 행한 항체이다. 소정 실시형태들에 따르면, 단리된 항체는 실질적으로 다른 세포성 재료 및/또는 화학물질을 포함하지 않을 수 있다.

용어 "특이적으로 결합한다" 등은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 생리학적 조건 하에 상대적으로 안정한 항원과 복합체를 형성함을 의미한다. 항체가 항원에 특이적으로 결합하는지를 결정하는 방법은 당해 분야에 익히 공지되어 있고, 이로는 예를 들면, 평형 투석, 및 표면 플라스몬 공명 등이 포함된다. 예를 들면, 본 발명의 맥락에서 사용되는 ANGPTL3에 "특이적으로 결합하는" 항체로는 표면 플라스몬 공명 검정에 의한 측정시 약 1000nM 미만, 약 500nM 미만, 약 300nM 미만, 약 200nM 미만, 약 100nM 미만, 약 90nM 미만, 약 80nM 미만, 약 70nM 미만, 약 60nM 미만, 약 50nM 미만, 약 40nM 미만, 약 30nM 미만, 약 20nM 미만, 약 10nM 미만, 약 5nM 미만, 약 4nM 미만, 약 3nM 미만, 약 2nM 미만, 약 1nM 미만 또는 약 0.5nM 미만의 K_D로 ANGPTL3 또는 이의 부분에 결합하는 항체가 포함된다. 그러나, 사람 ANGPTL3에 특이적으로 결합하는 단리된 항체는 다른 항원, 예를 들면 다른 (비-사람) 종 유래의 ANGPTL3 분자에 대한 교차-반응성을 갖는다.

본 발명의 방법에 유용한 항-ANGPTL3 항체는 항체가 유도된 상응하는 생식선 서열과 비교하여 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 프레임워크 및/또는 CDR 영역에 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 포함할 수 있다. 이러한 돌연변이는 본원에 개시된 아미노산 서열을, 예를 들면, 공공의 항체 서열 데이터베이스로부터 입수가능한 생식선 서열과 비교함으로써 용이하게 확인할 수 있다. 본 발명은 본원에 개시된 아미노산 서열들 중 임의의 것으로부터 유도된 항체 및 이의 항원-결합 단편의 사용과 관련된 방법을 포함하고, 여기서, 하나 이상의 프레임워크 및/또는 CDR 영역 내의 하나 이상의 아미노산은 항체가 유도된 생식선 서열의 상응하는 잔기(들) 또는 다른 사람의 생식선 서열의 상응하는 잔기(들), 또는 상응하는 생식선 잔기(들)의 보존적 아미노산 치환(이러한 서열 변화 본원에서 총체적으로 "생식선 돌연변이"로서 나타냄)으로 돌연변이된다. 당해 분야 숙련가는 본원에 개시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열로 시작하여, 하나 이상의 각각의 생식선 돌연변이 또는 이들의 조합을 포함하는 다수의 항체 및 항원-결합 단편을 용이하게 생산할 수 있다. 소정 실시형태들에서, V_H 및/또는 V_L 도메인 내의 프레임워크 및/또는 CDR 잔기의 전부는 항체가 유도된 본래 생식선 서열에서 발견된 잔기들로 역 돌연변이된다. 다른 실시형태들에서, 소정 잔기들만이, 예를 들면, FR1의 처음 8개의 아미노산들 내에서 또는 FR4의 마지막 8개의 아미노산들 내에서 발견된 돌연변이된 잔기들만이 또는 CDR1, CDR2 또는 CDR3 내에서 발견된 돌연변이된 잔기들만이 본래 생식선 서열로 역 돌연변이된다. 다른 실시형태들에서, 프레임워크 및/또는 CDR 잔기(들) 중 하나 이상은 상이한 생식선 서열(즉, 항체가 본래 유도된 생식선 서열과 상이한 생식선 서열)의 상응하는 잔기(들)로 돌연변이된다. 또한, 본 발명의 항체는 프레임워크 및/또는 CDR 영역 내에 2개 이상의 생식선 돌연변이의 임의의 조합을 함유할 수 있고, 예를 들면, 여기서 소정의 각각의 잔기들은 특정 생식선 서열의 상응하는 잔기들로 돌연변이되고, 한편 본래 생식선 서열과 상이한 소정의 다른 잔기들은 유지되거나 상이한 생식선 서열의 상응하는 잔기로 돌연변이된다. 일단 수득되면, 하나 이상의 생식선 돌연변이를 함유하는 항체 및 항원-결합 단편은 하나 이상의 바람직한 특성, 예를 들면 개선된 결합 특이성, 증가된 결합 친화도, 개선되거나 향상된 길항작용적(antagonistic) 또는 효능작용적(agonistic) 생물학적 특성(경우에 따라), 감소된 면역원성 등에 대해 용이하게 시험될 수 있다. 이러한 일반적 방식으로 수득된 항체 및 항원-결합 단편의 사용은 본 발명 내에 포함된다.

본 발명은 또한 하나 이상의 보존적 치환을 갖는 본원에 개시된 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열 중 임의의 것의 변이체를 포함하는 항-ANGPTL3 항체의 사용과 관련된 방법을 포함한다. 예를 들면, 본 발명은 본원에 개시된 HCVR, LCVR 및/또는 CDR 아미노산 서열 중 임의의 것에 비하여 예를 들면, 10개 이하, 8개 이하, 6개 이하, 4개 이하 등의 보존적 아미노산 치환을 갖는 HCVR, LCVR 및/또는 CDR 아미노산 서열을 갖는 항-ANGPTL3 항체의 용도를 포함한다.

본원에서 사용되는 용어 "표면 플라스몬 공명"은 예를 들면, BIAcore™ 시스템(Biacore Life Sciences division of GE Healthcare, Piscataway, NJ)을 이용하여 바이오센서 매트릭스 내에서의 단백질 농도의 변화를 검출함으로써 실시간 상호작용의 분석을 가능하게 하는 광학적 현상을 말한다.

본원에서 사용되는 용어 "K_D"는 특정 항체-항원 상호작용의 평형 해리 상수를 나타는 것으로 의도된다.

용어 "에피토프(epitope)"는 파라토프(paratope)로서 공지되어 있는 항체 분자의 가변 영역에서 특이적 항원 결합 부위와 상호작용하는 항원성 결정인자를 말한다. 단일 항원은 1개 초과의 에피토프를 가질 수 있다. 따라서, 상이한 항체들은 항원 상의 상이한 영역들에 결합할 수 있고, 상이한 생물학적 효과를 가질 수 있다. 에피토프는 입체구조적이거나 선형일 수 있다. 입체구조적(conformational) 에피토프는 선형 폴리펩타이드 쇄의 상이한 절편들로부터 공간적으로 병치된 아미노산들에 의해 생성된다. 선형 에피토프는 폴리펩타이드 쇄에서 인접한 아미노산 잔기들에 의해 생성된 것이다. 소정 상황에서, 에피토프는 항원 상의 사카라이드, 포스포릴 그룹 또는 설포닐 그룹의 모이어티(moiety)를 포함할 수 있다.

소정 실시형태들에 따르면, 본 발명의 방법에서 사용된 항-ANGPTL3 항체는 pH-의존적 결합 특성을 갖는 항체이다. 본원에서 사용되는 표현 "pH-의존적 결합"은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 "중성 pH에 비하여 산성 pH에서 ANGPTL3에 대해 감소된 결합"을 나타냄을 의미한다(본 개시의 목적을 위해 상기 표현 둘 다는 상호교환적으로 사용될 수 있다). 예를 들면, "pH-의존적 결합 특성을 갖는" 항체로는 산성 pH에서보다 중성 pH에서 보다 높은 친화도로 ANGPTL3에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편이 포함된다. 소정 실시형태들에서, 본 발명의 항체 및 항원-결합 단편은 산성 pH에서보다 중성 pH에서 적어도 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100배 또는 그 이상 더 높은 친화도로 ANGPTL3에 결합한다.

본 발명의 이러한 양상에 따르면, pH-의존적 결합 특성을 갖는 항-ANGPTL3 항체는 모(parental) 항-ANGPTL3 항체에 비하여 하나 이상의 아미노산 변이를 가질 수 있다. 예를 들면, pH-의존적 결합 특성을 갖는 항-ANGPTL3 항체는 모 항-ANGPTL3 항체의 하나 이상의 CDR들에 하나 이상의 히스티딘 치환 또는 삽입을 함유할 수 있다. 따라서, 본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 히스티딘 잔기를 갖는 모 항체의 하나 이상의 CDR들의 하나 이상의 아미노산의 치환을 제외하고는 모 항-ANGPTL3 항체의 CDR 아미노산 서열과 동일한 CDR 아미노산 서열(예를 들면, 중쇄 및 경쇄 CDR)을 포함하는 항-ANGPTL3 항체를 투여하는 단계를 포함하는 방법이 제공된다. pH-의존적 결합을 갖는 항-ANGPTL3 항체는 모 항체의 단일 CDR 내에, 또는 모 항-ANGPTL3 항체의 다중(예를 들면, 2, 3, 4, 5 또는 6개)의 CDR들에 걸쳐 분포되는 예를 들면, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9개 또는 그 이상의 히스티딘 치환을 가질 수 있다. 예를 들면, 본 발명은 모 항-ANGPTL3 항체의, HCDR1에 하나 이상의 히스티딘 치환, HCDR2에 하나 이상의 히스티딘 치환, HCDR3에 하나 이상의 히스티딘 치환, LCDR1에 하나 이상의 히스티딘 치환, LCDR2에 하나 이상의 히스티딘 치환 및/또는 LCDR3에 하나 이상의 히스티딘 치환을 포함하는 pH-의존적 결합을 갖는 항-ANGPTL3 항체의 사용을 포함한다.

본원에서 사용되는 표현 "산성 pH"는 6.0 이하(예를 들면, 약 6.0 미만, 약 5.5 미만, 약 5.0 미만 등)의 pH를 의미한다. 표현 "산성 pH"는 약 6.0, 5.95, 5.90, 5.85, 5.8, 5.75, 5.7, 5.65, 5.6, 5.55, 5.5, 5.45, 5.4, 5.35, 5.3, 5.25, 5.2, 5.15, 5.1, 5.05, 5.0 또는 그 이하의 pH 값을 포함한다. 본원에서 사용되는 표현 "중성 pH"는 약 7.0 내지 약 7.4의 pH를 의미한다. 표현 "중성 pH"는 약 7.0, 7.05, 7.1, 7.15, 7.2, 7.25, 7.3, 7.35, 및 7.4의 pH 값을 포함한다.

본 발명의 맥락에서 사용될 수 있는 항-ANGPTL3 항체의 비-제한적 예로는 예를 들면, 에비나쿠맙, 및 문헌[US 특허 제9,018,356호(Regeneron Pharmaceuticals, Inc.), 상기 문헌의 개시는 그 전문이 본원에 인용에 의해 포함된다]에 제시되는 바와 같은 임의의 항-ANGPTL3 항체, 또는 문헌[US 특허 제8,742,075호(Lexicon Pharmaceuticals, Inc.), 상기 문헌의 개시는 그 전문이 본원에 인용에 의해 포함된다] 임의의 예시의 항-ANGPTL3 항체가 포함된다.

사람 항체의 제조

항-ANGPTL3 항체는 당해 분야에 공지되어 있는 임의의 항체 생산/단리 방법에 따라 제조될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 방법에 사용하기 위한 항체는 하이브리도마(hybridoma) 기술에 의해, 파지 디스플레이(phage display)에 의해, 효모 디스플레이 등에 의해 이루어질 수 있다. 본 발명의 방법에 사용하기 위한 항체는 예를 들면, 키메라 항체, 사람화된(humanized) 항체 또는 완전 사람 항체일 수 있다.

유전자전이 마우스에서 사람 항체를 생성시키는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 이러한 임의의 공지의 방법은 ANGPTL3에 특이적으로 결합하는 사람 항체를 제조하기 위해 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있다.

예를 들면, VELOCIMMUNE™ 기술(예를 들면, US 6,596,541을 참조한다, Regeneron Pharmaceuticals) 또는 모노클로날 항체를 생성하기 위한 임의의 다른 공지의 방법을 이용하여, 사람 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 갖는, ANGPTL3에 대한 고 친화성 키메라 항체를 처음으로 단리한다. VELOCIMMUNE® 기술은 내인성 마우스 불변 영역 유전자좌에 작동가능하게 링크된 사람 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 게놈을 갖는 유전자전이 마우스의 생성을 포함하여, 상기 마우스가 항원성 자극에 반응하여 사람 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 포함하는 항체를 생성시키도록 한다. 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 DNA는 단리되고 사람 중쇄 및 경쇄 불변 영역을 암호화하는 DNA에 작동가능하게 링크된다. 이어서, DNA는 전장 사람 항체를 발현할 수 있는 세포에서 발현된다.

일반적으로, VELOCIMMUNE® 마우스에 목적하는 항원을 이용하여 챌린징하고(challenged), 항체를 발현하는 마우스로부터 림프 세포(예를 들면, B-세포)를 회수한다. 불멸의 하이브리도마 세포주를 제조하기 위해 상기 림프 세포를 골수종 세포주와 융합하고, 이러한 하이브리도마 세포주를 스크리닝하고 선택하여 목적하는 항원에 대해 특이적인 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주를 동정할 수 있다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 DNA를 단리하여 중쇄 및 경쇄의 바람직한 이소타입 불변 영역에 링크시킬 수 있다. 이러한 항체 단백질은 세포, 예를 들면 CHO 세포에서 생성될 수 있다. 대안으로, 항원-특이적 키메라 항체 또는 경쇄 및 중쇄의 가변 도메인을 암호화하는 DNA는 항원-특이적 림프구로부터 직접 단리될 수 있다.

처음으로, 사람 가변 영역 및 마우스 불변 영역을 갖는 고 친화성 키메라 항체가 단리된다. 항체를 특성확인하고, 당해 분야 숙련가들에게 공지되어 있는 표준 절차를 이용하여 친화도, 선택성, 에피토프 등을 포함하는 바람직한 특성들에 대해 선택한다. 마우스 불변 영역을 원하는 사람 불변 영역으로 대체하여 본 발명의 완전한 사람 항체, 예를 들면, 야생형 또는 변형된 IgG1 또는 IgG4를 생성시킨다. 선택된 불변 영역은 특정 용도에 따라 다를 수 있지만, 고 친화성 항원-결합 및 표적 특이성 특성은 가변 영역에 존재한다.

일반적으로, 본 발명의 방법에서 사용될 수 있는 항체는 고체상에 고정화된 항원 또는 용액상 중의 항원에의 결합에 의한 측정시 상기 기술된 바와 같이 높은 친화도를 갖는다. 마우스 불변 영역을 원하는 사람 불변 영역으로 대체하여 본 발명의 완전한 사람 항체를 생성시킨다. 선택된 불변 영역은 특정 용도에 따라 다를 수 있지만, 고 친화성 항원-결합 및 표적 특이성 특성은 가변 영역에 존재한다.

본 발명의 방법과 관련하여 사용될 수 있는 ANGPTL3에 특이적으로 결합하는 사람 항체 또는 항체의 항원-결합 단편의 구체예로는 서열번호 2/서열번호 3을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역(HCVR/LCVR) 아미노산 서열 쌍 유래의 6개의 CDR들(HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하는 항체 또는 항원-결합 단백질이 포함된다.

본 발명의 소정 실시형태들에서, 본 발명의 방법에 사용될 수 있는 상기 항-ANGPTL3 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 상보성 결정 영역들(HCDR1-HCDR2, HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3)을 포함한다.

본 발명의 소정 실시형태들에서, 본 발명의 방법에 사용될 수 있는 상기 항-ANGPTL3 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 HCVR 및 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 LCVR을 포함한다.

약제학적 조성물 및 투여 방법

본 발명은 환자에게 약제학적 조성물 내에 함유된 ANGPTL3 억제제를 투여함을 포함하는 방법을 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물은 적합한 담체, 부형제 및 적합한 이동, 전달, 및 내성 등을 제공하는 기타 제제와 함께 제형화된다. 모든 약제학 화학자들에게 공지되어 있는 처방집: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA에서 여러 가지 적절한 제형을 찾을 수 있다. 이들 제형으로는 예를 들면, 분말, 페이스트, 연고, 젤리, 왁스, 오일, 지질, 소포체를 함유하는 지질(양이온성 또는 음이온성)(예를 들면, LIPOFECTIN™), DNA 접합체, 무수 흡수 페이스트, 수-중-유 및 유-중-수 에멀젼, 에멀젼 카보왁스(carbowax)(다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜), 반-고체 겔 및 카보 왁스를 함유하는 반-고체 혼합물이 포함된다. 또한, 문헌[Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311]을 참조한다.

각종 전달 시스템, 예를 들면 리포솜 내의 캡슐화, 미세입자, 미세캡슐, 돌연변이체 바이러스를 발현할 수 있는 재조합 세포, 수용체 매개된 엔도사이토시스(endocytosis)(예를 들면, 문헌[Wu et al., 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432]을 참조한다)가 공지되어 있고, 본 발명의 약제학적 조성물을 투여하는데 사용할 수 있다. 투여 방법으로는 피부내, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 비강내, 경막외, 및 경구 경로가 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 상기 조성물은 임의의 편리한 경로에 의해, 예를 들면, 주입 또는 볼루스(bolus) 주사에 의해, 상피 또는 점막 피부 라이닝(예를 들면, 구강 점막, 직장 및 장 점막 등)을 통한 흡수에 의해 투여될 수 있고, 다른 생물학적 활성제와 함께 투여될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 표준 니들(needle) 및 시린지(syringe)를 이용하여 피하 또는 정맥내 전달될 수 있다. 또한, 피하 전달과 관련하여, 펜 전달 장치는 본 발명의 약제학적 조성물을 전달하는데 용이하게 적용된다. 이러한 펜 전달 장치는 재사용가능하거나 일회용일 수 있다. 재사용가능한 펜 전달 장치는 일반적으로 약제학적 조성물을 함유하는 대체가능한 카트리지를 이용한다. 일단 카트리지 내의 약제학적 조성물이 전부 투여되어 카트리지가 비워지면, 빈 카트리지는 용이하게 폐기되고 약제학적 조성물을 함유하는 새로운 카트리지로 대체될 수 있다. 이어서, 펜 전달 장치를 재사용할 수 있다. 일회용 펜 전달 장치에서는 대체가능한 카트리지가 존재하지 않는다. 더 정확히 말하면, 일회용 펜 전달 장치는 장치 내의 저장소에 보유된 약제학적 조성물로 미리 채워진다. 일단 저장소에 약제학적 조성물이 비워지면, 전체 장치를 폐기한다.

다수의 재사용가능한 펜 및 오토인젝터(autoinjector) 전달 장치가 본 발명의 약제학적 조성물의 피하 전달에 적용된다. 예로는 단지 몇몇을 언급하자면 AUTOPEN™(Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK), DISETRONIC™ 펜(Disetronic Medical Systems, Bergdorf, Switzerland), HUMALOG MIX 75/25™ 펜, HUMALOG™ 펜, HUMALIN 70/30™ 펜(Eli Lilly and Co., Indianapolis, IN), NOVOPEN™ I, II 및 III(Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), NOVOPEN JUNIOR™(Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), BD™ 펜(Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™, 및 OPTICLIK™(sanofi-aventis, Frankfurt, Germany)이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물의 피하 전달에 적용되는 일회용 펜 전달 장치의 예로는 단지 몇몇을 언급하자면 SOLOSTAR™ 펜(sanofi-aventis), FLEXPEN™(Novo Nordisk), 및 KWIKPEN™(Eli Lilly), SURECLICK™ 오토인젝터(Amgen, Thousand Oaks, CA), PENLET™(Haselmeier, Stuttgart, Germany), EPIPEN(Dey, L.P.), 및 HUMIRA™ 펜(Abbott Labs, Abbott Park IL)이 포함되지만, 이들에 한정되는 것은 아니다.

소정 상황에서, 상기 약제학적 조성물은 제어된 방출 시스템으로 전달될 수 있다. 한 실시형태에서, 펌프가 사용될 수 있다(문헌[Langer, supra; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201]을 참조한다). 다른 실시형태에서, 중합체성 재료가 사용될 수 있고; 문헌[Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Florida]을 참조한다. 또 다른 실시형태에서, 제어된 방출 시스템을 상기 조성물의 표적 부근에 위치시킴으로써 전신 용량의 분획만을 필요로 할 수 있다(예를 들면, 문헌[Goodson, 1984, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138]을 참조한다). 기타 제어된 방출 시스템은 문헌[Langer, 1990, Science 249:1527-1533]에 의한 검토에서 논의된다.

주사가능한 조제(preparation)는 정맥내, 피하, 피내 및 근육내 주사, 드립 주입 등을 위한 투여형(dosage form)을 포함할 수 있다. 이들 주사가능한 조제는 공지의 방법에 의해 조제될 수 있다. 예를 들면, 주사가능한 조제는 상기 기술된 항체 또는 이의 염을 종래 주사용으로 사용되는 멸균 수성 매체 또는 유성 매체에 용해시키거나, 현탁시키거나 또는 유화시킴으로써 조제할 수 있다. 주사용 수성 매체로서, 예를 들면 생리학적 염수, 글루코스, 및 알코올(예를 들면, 에탄올), 다가 알코올(예를 들면, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜), 비이온 계면활성제[예를 들면, 폴리소르베이트 80, HCO-50(수소첨가된 피마자유의 폴리옥시에틸렌(50mol) 부가물)] 등과 같은 적절한 가용화제와 조합하여 사용할 수 있는 기타 보조제 등을 함유하는 등장성 용액이 존재한다. 유성 매체로서, 예를 들면, 벤질 벤조에이트, 벤질 알코올 등과 같은 가용화제와 조합하여 사용할 수 있는 참깨 오일, 대두 오일 등이 사용된다. 이렇게 조제된 주사제는 적절한 앰풀(ampoule)에 충진하는 것이 바람직하다.

유리하게는, 상기에 기술된 경구적 또는 비경구적 사용을 위한 약제학적 조성물은 활성 성분의 용량에 맞춘 단위 용량의 투여형으로 조제된다. 이러한 단위 용량의 투여형으로는 예를 들면 정제, 환제, 캡슐제, 주사제(앰풀), 좌제 등이 포함된다.

용량

본 발명의 방법에 따라 대상체에게 투여되는 ANGPTL3 억제제(예를 들면, 항-ANGPTL3 항체)의 양은 일반적으로 치료학적 유효량이다. 본원에서 사용되는 어구 "치료학적 유효량"은 LDL-C, ApoB100, 비-HDL-C, 총 콜레스테롤, VLDL-C, 트리글리세라이드, Lp(a) 및 잔류 콜레스테롤로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 매개변수에서 검출가능한 감소(기저선으로부터 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 또는 그 이상)를 초래하는 ANGPTL3 억제제의 용량 또는 대상체에서의 죽상 동맥경화증을 예방하거나 약화시키는 양(본원의 다른 곳에 정의됨)을 의미한다.

항-ANGPTL3 항체의 경우, 치료학적 유효량은 약 0.05mg 내지 약 600mg, 예를 들면, 약 0.05mg, 약 0.1mg, 약 1.0mg, 약 1.5mg, 약 2.0mg, 약 10mg, 약 20mg, 약 30mg, 약 40mg, 약 50mg, 약 60mg, 약 70mg, 약 80mg, 약 90mg, 약 100mg, 약 110mg, 약 120mg, 약 130mg, 약 140mg, 약 160mg, 약 170mg, 약 180mg, 약 190mg, 약 200mg, 약 210mg, 약 220mg, 약 230mg, 약 240mg, 약 250mg, 약 260mg, 약 270mg, 약 280mg, 약 290mg, 약 300mg, 약 310mg, 약 320mg, 약 330mg, 약 340mg, 약 350mg, 약 360mg, 약 370mg, 약 380mg, 약 390mg, 약 400mg, 약 410mg, 약 420mg, 약 430mg, 약 440mg, 약 450mg, 약 460mg, 약 470mg, 약 480mg, 약 490mg, 약 500mg, 약 510mg, 약 520mg, 약 530mg, 약 540mg, 약 550mg, 약 560mg, 약 570mg, 약 580mg, 약 590mg, 또는 약 600mg의 항-ANGPTL3 항체일 수 있다. ANGPTL3의 다른 투약량은 당해 분야 숙련가에게 명백할 것이고, 본 발명의 범위 내에서 고려된다.

각각의 용량 내에 함유된 항-ANGPTL3 항체의 양은 환자 체중 킬로그램당 항체의 밀리그램(즉, mg/kg)의 단위로 표현될 수 있다. 예를 들면, 항-ANGPTL3 항체는 환자에게 환자 체중 kg당 약 0.0001 내지 약 10mg의 용량으로 투여될 수 있다.

병용 치료요법

본원 다른 곳에 기술되어 있는 바와 같이, 본 발명의 방법은 환자의 이전에 처방된 지질 저하 치료요법과 병용하여("의 외에") 환자에게 ANGPTL3 억제제를 투여하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들면, 죽상 동맥경화증을 예방하거나 약화시키는 것과 관련하여, ANGPTL3 억제제는 안정한 매일 치료학적 스타틴 용법과 병용하여 환자에게 투여될 수 있다. 본 발명과 관련하여 ANGPTL3 억제제가 병용하여 투여될 수 있는 예시의 매일 치료학적 스타틴 용법으로는 예를 들면, 아토르바스타틴(매일 10, 20, 40 또는 80mg), (매일 아토르바스타틴/에제티미브 10/10 또는 40/10mg), 로수바스타틴(매일 5, 10 또는 20mg), 세리바스타틴(매일 0.4 또는 0.8mg), 피타바스타틴(매일 1, 2 또는 4mg), 플루바스타틴(매일 20, 40 또는 80mg), 심바스타틴(매일, 5, 10, 20, 40 또는 80mg), 심바스타틴/에제티미브(매일 10/10, 20/10, 40/10 또는 80/10mg), 로바스타틴(매일 10, 20, 40 또는 80mg), 프라바스타틴(매일 10, 20, 40 또는 80mg) 및 이들의 조합이 포함된다. ANGPTL3 억제제가 본 발명의 맥락에서 병용하여 투여될 수 있는 다른 지질 저하 치료요법으로는 예를 들면, (1) 콜레스테롤 흡수 및 담즙산 재-흡수를 억제하는 제제(예를 들면, 에제티미브); (2) 지단백질 대사를 증가시키는 제제(예를 들면, 니아신); 및/또는 (3) 22-하이드록시콜레스테롤과 같은 콜레스테롤 제거시 역할을 행하는 LXR 전사 인자의 활성화제가 포함된다.

본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 본 발명은 대상체에게 ANGPTL3 억제제를 ANGPTL4의 억제제(예를 들면, 항-ANGPTL4 항체 또는 이의 항원-결합 단편), ANGPTL8의 억제제(예를 들면, 항-ANGPTL8 항체 또는 이의 항원-결합 단편) 및/또는 PCSK9의 억제제(예를 들면, 항-PCSK9 항체 또는 이의 항원-결합 단편)와 병용하여 투여함으로써 대상체에서의 죽상 동맥경화증을 예방하거나 약화시키기 위한 방법을 포함한다. 본 발명의 맥락에서 사용될 수 있는 항-PCSK9 항체의 비-제한적 예로는 예를 들면, 알리로쿠맙, 에볼로쿠맙, 보코시주맙, 로델시주맙, 랄판시주맙 또는 상기 항체들 중 임의의 항체의 항원-결합부가 포함된다.

투여 용법

본 발명의 소정 실시형태들에 따르면, 다중 용량의 ANGPTL3 억제제(즉, ANGPTL30 억제제를 포함하는 약제학적 조성물)은 (예를 들면, 매일 치료학적 스타틴 용법 또는 기타 배경(background) 지질 저하 치료요법 외에) 정의된 시간 과정에 걸쳐 대상체에게 투여될 수 있다. 본 발명의 이러한 양상에 따른 방법은 대상체에게 다중 용량의 ANGPTL3 억제제를 순차적으로 투여함을 포함한다. 본원에서 사용되는 "순차적으로 투여하는"은 ANGPTL3 억제제의 각각의 용량이 상이한 시점, 예를 들면 사전 결정된 간격(예를 들면, 시간, 일, 주 또는 개월)에 의해 분리된 상이한 일자에 대상체에게 투여됨을 의미한다. 본 발명은 ANGPTL3 억제제의 단일 최초 용량을 환자에게 투여하고, 이어서 ANGPTL3 억제제의 1회 이상의 2차 용량을 투여하고, 그리고 임의로 ANGPTL3 억제제의 1회 이상의 3차 용량을 순차적으로 투여하는 것을 포함하는 방법을 포함한다.

용어 "최초 용량", "2차 용량" 및 "3차 용량"이란 ANGPTL3 억제제를 포함하는 약제학적 조성물의 개별 용량의 투여의 임시적 순서를 말한다. 따라서, "최초 용량"은 치료 용법의 시작시에 투여되는 용량("기저선 용량"으로서도 나타냄)이고; "2차 용량"은 상기 최초 용량 후에 투여되는 용량이고; 그리고 "3차 용량"은 상기 2차 용량 후에 투여되는 용량이다. 상기의 최초, 2차 및 3차 용량은 모두 동일한 양의 ANGPTL3 억제제를 함유할 수 있지만, 일반적으로 투여 빈도에 따라 서로 다를 수 있다. 그러나, 소정 실시형태들에서, 최초, 2차 및/또는 3차 용량에 함유된 ANGPTL3 억제제의 양은 치료 과정 동안에 서로 다르다(예를 들면, 필요에 따라 상향 또는 하향 조정된다). 소정 실시형태들에서, 2회 이상(예를 들면, 2, 3, 4 또는 5회)의 용량이 "부하(loading) 용량"으로서 치료 용법의 시작시에 투여되고, 이어서 후속적 용량(예를 들면, "유지 용량")은 덜 빈번한 기준으로 투여하게 된다.

본 발명의 예시의 실시형태들에 따르면, 각각의 2차 및/또는 3차 용량은 직전 투약의 1 내지 26주(예를 들면, 1, 1½, 2, 2½, 3, 3½, 4, 4½, 5, 5½, 6, 6½, 7, 7½, 8, 8½, 9, 9½, 10, 10½, 11, 11½, 12, 12½, 13, 13½, 14, 14½, 15, 15½, 16, 16½, 17, 17½, 18, 18½, 19, 19½, 20, 20½, 21, 21½, 22, 22½, 23, 23½, 24, 24½, 25, 25½, 26, 26½주, 또는 그 이상) 후에 투여된다. 본원에 사용되는 어구 "직전 용량"은 다중 투여의 순차에서 개재하는(intervening) 용량이 없는 순차에서 바로 다음 용량의 투여 전에 환자에게 투여되는 항원-결합 분자의 용량을 의미한다.

본 발명의 이러한 양상에 따른 방법은 ANGPTL3 억제제의 임의의 횟수의 2차 및/또는 3차 용량을 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 예를 들면, 소정 실시형태들에서 단일 2차 용량만이 환자에게 투여된다. 다른 실시형태들에서, 2회 이상(예를 들면, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8회, 또는 그 이상)의 2차 용량이 환자에게 투여된다. 유사하게, 소정 실시형태들에서 단일 3차 용량만이 환자에게 투여된다. 다른 실시형태들에서, 2회 이상(예를 들면, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8회, 또는 그 이상)의 3차 용량이 환자에게 투여된다.

다중 2차 용량과 관련된 실시형태들에 있어서, 각각의 2차 용량은 다른 2차 용량과 동일한 빈도로 투여될 수 있다. 예를 들면, 각각의 2차 용량은 직전 용량의 1 내지 2, 4, 6, 8주 또는 그 이상 후에 환자에게 투여될 수 있다. 유사하게, 다중 3차 용량과 관련된 실시형태에서, 각각의 3차 용량은 다른 3차 용량과 동일한 빈도로 투여될 수 있다. 예를 들면, 각각의 3차 용량은 직전 용량의 1 내지 2, 4, 6, 8주 또는 그 이상 후에 환자에게 투여될 수 있다. 대안으로, 2차 및/또는 3차 용량이 환자에게 투여되는 빈도는 치료 용법의 과정에 걸쳐서 다를 수 있다. 또한 투여 빈도는 치료 과정 동안 임상 검사 후 개별 환자의 필요에 따라 의사에 의해 조정될 수 있다.

실시예

당해 분야 숙련가에게 본 발명의 방법 및 조성물의 제조법 및 사용법에 대한 완전한 개시와 설명을 제공하도록 하기 실시예가 제시되고, 본 발명자들이 이들의 발명으로서 간주하는 것의 범위를 제한하도록 의도되는 것은 아니다. 사용된 수치(예를 들면, 양, 온도 등)와 관련하여 정확성을 확보하기 위한 노력이 이루어져 왔지만, 약간의 실험적 오류와 편차가 고려되어야만 한다. 달리 나타내지 않는 한, 부(part)는 중량부이고, 분자량은 평균 분자량이며, 온도는 섭씨 도이고, 압력은 대기압 또는 대기압 부근이다.

실시예 1. 사람 ANGPTL3에 대한 사람 항체의 생성

사람 항-ANGPTL3 항체는 US 특허 제9,018,356호에 기술된 바와 같이 생성되었다. 하기 실시예에서 사용된 예시의 ANGPTL3 억제제는 "에비나쿠맙"으로서도 공지되어 있는 "H4H1276S"로 명명된 사람 항-ANGPTL3 항체이다. 에비나쿠맙은 하기 아미노산 서열 특성을 갖는다: 서열번호 10을 포함하는 중쇄 및 서열번호 11을 포함하는 경쇄; 서열번호 2를 포함하는 중쇄 가변 영역(HCVR) 및 서열번호 3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(LCVR); 서열번호 4를 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), 서열번호 5를 포함하는 HCDR2; 서열번호 6을 포함하는 HCDR3, 서열번호 7을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), 서열번호 8을 포함하는 LCDR2 및 서열번호 9를 포함하는 LCDR3.

실시예 2. 항-ANGPTL3 항체는 마우스 모델에서 죽상 동맥경화증 발병을 예방한다

도입

본 연구의 목적은 복합(mixed) 또는 가족성 이상 베타지질단백혈증(Dysbetalipoproteinemia) 및 죽상 동맥경화증의 모든 특성을 갖는 고지혈증에 대해 양호하게 확립된 모델인 APOE^*3Leiden.CETP 마우스에서 죽상 동맥경화증의 발병에 대한 ANGPTL3 억제의 효과를 평가하는 것이었다. (예를 들면, APOE^*3Leiden.CETP 마우스 모델(대안으로 본원에서 "E3L.CETP 마우스"로서도 칭함) 및 죽상 동맥경화증 발병에 대한 약리학적 제제의 효과를 평가하는데 있어서의 이의 사용의 일반적인 설명을 위해, 문헌[Kuehnast et al., 2014, J Lipid Res 55: 2103-2112]을 참조한다).

ANGPTL3 억제는 항-ANGPTL3 항체를 이용하여 달성하였다. 이들 연구에서 사용된 특정 항-ANGPTL3 항체는 상기 기술된 바와 같은 에비나쿠맙으로서 나타내어진 항체였다. 이들 연구에서 사용된 대조군 항체는 무관한 표적에 대한 이소타입-매칭된(isotype-matched) 항체이다.

연구 고안

연구 고안의 도해는 도 1에 나타낸다. 에비나쿠맙은 완전 사람 IgG4 항체이다. 따라서, 상이한 마우스 스트레인(strain)에서 평가하는 경우, 몇몇의 마우스는 치료제의 효능을 제거하는 항-약물 항체를 발현시킨다. 이러한 항-약물 반응을 발현시키는 마우스의 백분율은 각각의 마우스 모델/유전적 배경에 대해 상이할 수 있다. 이러한 이유로 APOE^*3Leiden.CETP 마우스에서의 이러한 첫번째 연구에서 그룹당 보다 많은 마우스를 포함시켜 몇 마리의 마우스가 이러한 특정 모델에서 항-사람 면역 반응을 발현시키는지를 측정하였다. 항-사람 면역 반응을 발현시키는 마우스의 배제 후 나머지 마우스들은 죽상 동맥경화증에 대한 에비나쿠맙의 효과를 평가하기 위해 사용될 수 있다.

63마리의 암컷 APOE^*3Leiden.CETP 마우스를 식이요법 T(문헌[Nishina et al. 1990, J Lipid Res 31:859]에 기술된 바와 같은 반-합성 변형된 식이요법, 0.15% 부가된 콜레스테롤 및 15% 코코아 버터 포함)를 시켰다. 4주의 실행(run-in) 기간 후, 13마리의 저-반응자 마우스를 해당 연구에서 제거하였고, 나머지 50마리의 마우스를 20마리 마우스의 하나의 대조군 그룹과 30마리 마우스의 하나의 에비나쿠맙 치료군 그룹으로 하위-분류하여, 체중, 혈장 콜레스테롤 및 4시간 금식(fasting) 후 트리글리세라이드(t=0)에 대해 매칭하였다.

에비나쿠맙 또는 대조군 항체를 이용한 치료는 25mg/kg/주의 용량으로 피하 주사를 통해 매주 제공하였다. 치료 기간 동안의 주사 용적은 비히클로서 0.9% NaCl을 이용하여 10mL/kg이었고, 마지막으로 측정된 체중 값에 대해 조정되었다. 체중 및 음식물 섭취(케이지(cage)당)는 0, 3, 6, 8, 11 및 13주째에 측정하였다.

치료의 0, 2, 4, 6, 8, 11 및 13주 후, 금식 4시간 후에 혈액 샘플을 채취하였다. 혈장 콜레스테롤 및 트리글리세라이드를 개별적으로 측정하였고, hFc 및 마우스 항-사람 항체 평가를 위해 추가의 EDTA 혈장을 수집하였다. 치료 6주 후, 첫 번째 항-약물 반응을 평가하였고, 대조군 그룹의 3마리 마우스 및 높은 수준의 항-약물 항체를 갖는 치료군 그룹의 5마리 마우스를 해당 연구로부터 제거하였다.

지단백질 프로파일은 그룹당 풀링된 혈장 샘플에서 0, 6 및 13주째에 측정하였다. 배설물은 케이지당 12주째 동안 수집되었다(48시간 동안 2회). t=13일째에, 마우스를 금식하지 않고 희생시켰다. 심장 천자(heart puncture)를 통해 EDTA-혈장을 얻었고 몇몇의 조직을 수집하였다. 대동맥근의 죽상 동맥경화증은 병변 수, 병변 면적 및 병변의 중증도를 측정함으로써 (항-약물 반응을 발현한 마우스를 제외한 후) 그룹당 15마리의 마우스에서 측정하였다. 또한, 병변 조성을 측정하였다.

(1) 매개변수 측정의 스케쥴은 하기와 같다:

(2) 체중(0, 3, 6, 8, 11 및 13주째);

(3) 음식물 섭취(케이지당, 0, 3, 6, 8, 11 및 13주째);

(4) 혈장 총 콜레스테롤 및 트리글리세라이드(0, 2, 4, 6, 8, 11 및 13주째에 4h 금식 후)

(5) hFc 및 마우스 항-사람 항체 평가를 위한 20μl EDTA 혈장의 수집(0, 2, 4, 6, 8, 11 및 13주째에 4h 금식 후)

(6) 지단백질 프로파일(그룹당 풀링된, 콜레스테롤 및 트리글리세라이드; 0, 6 및 13주째);

(7) 대동맥근에서의 죽상 동맥경화증 발병(그룹당 15마리 마우스): (a) 병변 수, (b) 총 병변 면적, (c) 병변 중증도, (d) 병변 조성(예를 들면, 대식세포, 캡(cap)에서의 평활근 세포, 괴사 및 콜라겐 함량), 및 (e) 단핵구 부착. (희생시[13주째], 모든 마우스로부터 대동맥을 수집하였지만, 죽상 동맥경화증 분석은 그룹당 15마리 마우스로 수행하였다; 항-약물 항체를 발현시키지 않은 마우스를 선택하였다).

방법

체중 및 음식물 섭취 측정값은 표준 절차에 따라 수행하였다.

혈장 혈액 샘플은 표준 절차에 따라 수득하였다. 총 혈장 콜레스테롤 및 트리글리세라이드는 상업적으로 입수가능한 키트를 이용하여 측정하였다.

Amersham Biosciences로부터의 AKTA 기기를 이용한 FPLC 분석에 의한 지단백질 프로파일의 측정. 그룹당 풀링된 샘플에서 분석을 수행하였다. 콜레스테롤 및 트리글리세라이드는 상업적으로 입수가능한 키트를 이용하여 측정하였다.

죽상 동맥경화성 병변 면적 및 중증도는 이전에 보고된 바와 같이 대동맥근 영역에서 평가하였다(예를 들면, 문헌[Kuehnast et al., 2012, J Hypertens 30:107-116]을 참조한다). 대동맥근은 대동맥 판막편(aortic valve leaflet)의 외관(appearance)에 의해 확인되었고, 전체 대동맥근 면적의 일련의 단면(50㎛의 간격으로 5㎛ 두께)을 3-아미노프로필 트리에톡시실란-코팅된 슬라이드 상에 마운팅하였고, 헤마톡실린-플록신-사프론(HPS: hematoxylin-phloxine-saffron)으로 염색하였다. 각각의 마우스에 대해, 병변 면적은 4개의 후속적 박편(section)들에서 측정하였다. 각각의 박편은 3개의 절편들(판막에 의해 분리됨)로 이루어진다. 죽상 동맥경화성 병변 크기 및 중증도의 측정을 위해, 병변은 미국 심장 협회(American Heart Association, AHA)에 따른 5개의 범주로 분류하였다(문헌[Stary et al., 1995, Arterioscler Thromb Vasc Biol 15:1512-1531]을 참조한다): 유형 1: 조기 지방 선조(fatty streak)(다른 변화가 없는 내막에서의 10개 이하의 거품 세포); 유형 2: 규칙적인 지방 선조(다른 변화가 없는 내막에서의 10개 이상의 거품 세포); 유형 3: 경미한 플라크(섬유증 캡(fibrotic cap)을 갖는 거품 세포); 유형 4: 중간 정도의 플라크(이환된(affected) 배지를 갖는 보다 진행된 병변, 그러나 배지의 구성(architecture)은 손실되지 않음); 유형 5: 중증의 플라크(배지가 심하게 이환됨; 깨진 탄성 섬유, 콜레스테롤 균열, 석회화 및 괴사가 빈번하게 관찰됨).

올림푸스(Olympus) BX51 현미경으로 이미지를 촬영하였고, 이미지 처리 소프트웨어로 면적을 측정하였다. 전체 병변 면적 및 병변의 수는 단면당 계산되었다. 이환되지 않은 절편들은 전체 절편의 백분율로서 계산되었다. 전체 병변의 백분율로서의 병변의 중증도도 결정되었다. 유형 I 내지 유형 III 병변은 경미한 병변으로서 분류되었고 유형 IV 내지 유형 V 병변은 중증의 병변으로서 분류되었다.

AIA 31240 항혈청(1:1000, Accurate Chemical and Scientific, New York, New York, USA)으로 면역염색(immunostaining)한 후, 병변 정량화를 위해 사용된 각각의 절편에서 활성화된 내피에 부착되는 단핵구의 수를 계수하고 단면당 계산하였다.

병변의 대식세포 면적을 항-마우스 Mac-3(1:50, BD Pharmingen, 네덜란드)로 면역염색한 후 측정하였다. 시리우스 레드(Sirius Red) 염색은 콜라겐을 염색하기 위해 수행되었다. 마우스 알파 액틴과 교차 반응하는 항-알파 평활근 액틴(1:400, PROGEN Biotechnik GmbH, Heidelberg, Germany)으로 면역염색한 후 섬유증 캡의 평활근 세포 면적을 측정하였다. 병변의 사진/이미지는 올림푸스 BX51 현미경으로 촬영하였다. 병변의 대식세포, 콜라겐, 괴사성 코어 및 평활근 세포 면적을 이미징 소프트웨어를 사용하여 정량하였다. 병변의 대식세포, 평활근 세포(SMC), 괴사성 코어 및 콜라겐 함량을 병변 면적의 백분율로서 계산하였다. 플라크 취약성(vulnerability)/ 안정성 지수는 안정화 인자 SMC 및 콜라겐의 합을 불안정화 인자, 대식세포 및 괴사성 코어의 합으로 나누어 계산하였다.

13주째에, 마우스를 금식시키지 않고 CO2를 통해 희생시켰다. 마지막 항체 주사는 희생시키기 전에 13주째 동안 제공되지 않았다. 희생시킨 후, 가능한 많은 EDTA-혈장을 (심장 천자를 통해) 수집하였고 추가 사용시까지 -70℃에서 보관하였다. 대동맥근을 포함하는 심장은 10% 포르말린에서 고정시켰다. 흉부 대동맥을 수집하여 10% 포르말린에서 고정시켰다.

통계학

정규성(normality)에 따라 그룹들 사이의 차이의 유의성은 독립 샘플에 대해 만-휘트니(Mann-Whitney) U-시험 및 컴퓨터 프로그램 SPSS을 사용하여 비-매개변수적으로 계산하였다. P-값<0.05는 통계학적으로 유의한 것으로 간주되었다. 대조군 그룹과 비교한 치료군 그룹의 통계학적 차이는 도면에 측정 지점에서 별표로 표시하였다.

결과

체중

체중 결과는 표 1에 요약한다. 값은 절대값(그램)이고 그룹당 14 내지 15마리로부터의 평균 ± S.D.이다.

대조군 그룹과 비교한 에비나쿠맙-치료된 그룹들 사이의 체중에는 차이가 없었다.

음식물 섭취

음식물 섭취 결과는 표 2에 요약한다. 값은 절대값(그램/마우스/일)이고 17개 케이지(모든 마우스; 매칭 전) 또는 4 내지 6개 케이지(매칭 및 치료 개시 후)의 평균 ± S.D.이다.

대조군 그룹과 비교한 에비나쿠맙-치료된 그룹에 대한 음식물 섭취에는 차이가 없었다.

혈장 콜레스테롤

혈장 콜레스테롤 결과는 표 3 및 표 4, 그리고 도 2a 및 도 2b에 요약한다. 값은 절대값(mM)이고 그룹당 14 내지 15마리 마우스로부터의 평균 ± S.D.이다.

에비나쿠맙을 이용한 치료는 모든 시점에서 대조군 그룹과 비교하여 혈장 콜레스테롤의 유의한 감소(평균 52%의 감소)를 유도하였다. 실험의 종료시 실험 동안(0 내지 13주 + 실행 기간) 콜레스테롤 노출은 대조군 그룹과 비교하여 에비나쿠맙(41%, p<0.001)으로 치료시에 유의하게 감소하였다.

혈장 트리글리세라이드

혈장 트리글리세라이드 결과는 표 5 및 도 3에 요약한다. 값은 절대값(mM)이고 그룹당 14 내지 15마리로부터의 평균 ± S.D.이다.

에비나쿠맙을 이용한 치료는 모든 시점에서 대조군 그룹과 비교하여 혈장 트리글리세라이드의 유의한 감소(평균 84%의 감소)를 유도하였다.

지단백질 프로파일

지단백질은 수퍼로스(Superose) 컬럼 상에 분리되었다. t=0, t=6주 및 t=13주에서의 콜레스테롤 및 트리글리세라이드 분획은 도 4a, 도 4b 및 도4c[콜레스테롤] 및 도 5a, 도 5b 및 도 5c[트리글리세라이드]에 나타낸다. 값은 t=0, t=6주 및 t=13주에서 그룹당 풀링된 혈장 중의 콜레스테롤 및 트리글리세라이드 측정값으로부터의 절대값이다. 이러한 분석의 목적을 위해, 분획 3 내지 7은 VLDL로서 간주되었고, 분획 8 내지 16은 IDL/LDL로서 간주되었고, 분획 17 내지 24는 HDL로서 간주되었다.

t=0에서, 치료를 개시하기 전에 지단백질 프로파일에서의 차이는 관찰되지 않았지만, 에비나쿠맙을 이용한 치료의 6주 및 13주 후에 그룹당 풀링된 샘플에서 측정된 혈장 콜레스테롤 수준은 대조군 그룹과 비교하여 VLDL-LDL 피크가 감소되었고, HDL 피크가 증가된 것으로 밝혀졌다(도 4b 및 도 4c를 참조한다). 트리글리세라이드 프로파일은 유사한 패턴을 보였다(도 5a, 도 5b 및 도 5c를 참조한다).

이들 데이터는 연구 동안에 관찰된 개별 동물 총 콜레스테롤 및 트리글리세라이드 수준의 감소와 일치한다.

죽상 동맥경화증 병변 면적

죽상 동맥경화증 병변 면적은 표 6 및 도 6a 및 도 6b에 요약한다. 값은 단면당 대동맥근 중의 병변 면적의 절대값이고 그룹당 14 내지 15마리 마우스의 평균 ± S.D.로서 표현된다.

대조군 그룹의 대동맥근에서의 총 병변 면적은 t=13주에서 희생시 단면당 216082㎛²이었다. 에비나쿠맙을 이용한 치료는 희생시 대조군 그룹과 비교하여 총 병변 면적을 39%(p<0.001)로 감소시켰다.

죽상 동맥경화증: 병변의 수

단면당 죽상 동맥경화성 병변의 수는 표 7에 요약한다. 값은 절대값(병변의 수)이고 그룹당 14 내지 15마리의 마우스의 평균 ± S.D.로서 표현된다.

대조군 그룹과 비교하여 에비나쿠맙-치료된 그룹 사이의 병변 수에는 차이가 없었다.

죽상 동맥경화증: 병변 중증도

죽상 동맥경화성 병변 중증도 결과는 표 8에 요약한다. 값은 총 병변 중의 백분율이고, 그룹당 14 내지 15마리 마우스의 평균 ± S.D.로서 표현된다.

대조군 그룹과 비교하여 에비나쿠맙-치료된 그룹 사이의 병변 중증도에는 차이가 없었다.

죽상 동맥경화증: 이환되지 않은 절편

이환되지 않은 죽상 동맥경화성 절편의 수는 표 9에 요약한다. 값은 비-죽상 동맥경화성("이환되지 않은" 또는 건강한) 절편의 백분율을 나타낸다. 값은 그룹당 14 내지 15마리의 마우스의 평균 ± S.D.이다.

대조군 그룹과 비교하여 에비나쿠맙-치료된 그룹 사이의 이환되지 않은 절편의 양에는 차이가 없었다.

죽상 동맥경화증: 대식세포 함량

병변의 대식세포 함량은 표 10 및 도 7a에 요약한다. 값은 절대값(㎛²*1000) 또는 상대값(병변 중의 %)이고 그룹당 14 내지 15마리의 마우스의 평균 ± S.D.으로서 표현된다.

에비나쿠맙을 이용한 치료는 대조군 그룹과 비교하여 죽상 동맥경화성 유형 IV 내지 V에서 단면당 대식세포 함량을 감소시키는 경향이 있었다. 그러나, 총 병변 면적에 대한 보정 후에 이러한 차이는 관찰되지 않았고, 유형 IV 내지 V 병변에서의 대식세포의 백분율로서 표현되었다(도 7a).

죽상 동맥경화증: 괴사 함량

병변의 괴사 함량은 표 11 및 도 7a에 요약한다. 값은 절대값(㎛²*1000) 또는 상대값(병변 중의 %)이고 그룹당 14 내지 15마리의 마우스의 평균 ± S.D.으로서 표현된다.

에비나쿠맙을 이용한 치료는 대조군 그룹과 비교하여 죽상 동맥경화성 병변 유형 IV 내지 V에서의 단면당 괴사 함량을 유의하게 감소시켰다(69%, p<0.001). 총 병변 면적에 대한 보정 후, 유형 IV 내지 V 병변에서의 괴사 면적의 백분율은 또한 대조군 그룹과 비교하여 유의하게 감소되었다(45%, p=0.001)(도 7a).

죽상 동맥경화증: 섬유증 캡에서의 평활근 세포

병변의 섬유증 캡에서의 평활근 세포(SMC)의 정량화는 표 12 및 도 7b에 요약한다. 값은 절대값(㎛²*1000) 또는 상대값(병변 중의 %)이고 그룹당 14 내지 15마리의 마우스의 평균 ± S.D.으로서 표현된다.

에비나쿠맙을 이용한 치료는 대조군 그룹과 비교하여 죽상 동맥경화성 병변 유형 IV 내지 V에서 단면당 평활근 세포(SMC) 면적을 유의하게 감소시켰다(39%, p=0.009). 그러나, 총 병변에 대한 보정 후, 유형 IV 내지 V 병변에서의 섬유증 캡 중의 SMC의 백분율은 대조군 그룹과 비교하여 유의하게 감소된 것은 아니었다(도 7b).

죽상 동맥경화증: 콜라겐 함량

병변의 콜라겐 함량은 표 13 및 도 7b에 요약한다. 값은 절대값(㎛²*1000) 또는 상대값(병변 중의 %)이고 그룹당 14 내지 15마리의 마우스의 평균 ± S.D.으로서 표현된다.

에비나쿠맙을 이용한 치료는 대조군 그룹과 비교하여 죽상 동맥경화성 병변 유형 IV 내지 V에서 단면당 콜라겐 함량을 유의하게 감소시켰다(40%, p=0.009). 그러나, 총 병변 면적에 대한 보정 후, 유형 IV 내지 V 병변에서의 콜라겐의 백분율은 대조군 그룹과 비교하여 유의하게 감소된 것은 아니었다(도 7b).

죽상 동맥경화증: 단핵구 부착

단면당 단핵구의 백분율은 표 14에 요약한다. 값은 절대값(단면당 부착성 단핵구의 수)이고 그룹당 14 내지 15마리의 마우스의 평균 ± S.D.으로서 표현된다.

대동맥근의 혈관벽에서 활성화된 내피에의 단핵구 부착은 대조군 그룹과 비교하여 에비나쿠맙을 이용한 치료에 의해 영향을 받지 않았다.

죽상 동맥경화증: 안정성 지수

병변의 플라크 안정성(안정성 지수의 관점에서 표현됨)은 표 15에 요약한다. 안정성 지수는 불안정(destabilization) 마커 대식세포 및 괴사 함량의 총합으로 나눈 안정화 마커 SMC 및 콜라겐 함량의 총합으로서 정의된다. 이러한 값은 플라크 안정성에 대한 측정값을 제공한다. 값은 그룹당 14 내지 15마리의 마우스의 평균 ± S.D.으로서 표현된다.

에비나쿠맙을 이용한 치료는 대조군 그룹과 비교하여 안정성 지수에 대한 영향을 갖지 않았다.

요약

안전성 양상

대조군과 비교하여 에비나쿠맙 치료에 의한 체중(증가) 및 음식물 섭취에 대한 영향은 언급되지 않았다.

VLDL 및 LDL 수준의 감소

APOE^*3Leiden.CETP 마우스는 잔류 지단백질의 축적 및 증가된 VLDL-C 대 LDL-C 비를 특징으로 하는 사람에서의 가족성 이상 베타지질단백혈증(FD)에 대해 양호하게 확립된 모델이다. APOE^*3Leiden.CETP 마우스에서의 지단백질 프로파일은 지질 변형 치료요법에 대해 유사한 반응을 갖는 FD 환자의 프로파일을 반영한다. 이는 스타틴 치료 25 및 페노피브레이트 및 니아신을 갖는 모든 apoB-함유 지단백질 하위분획에서의 콜레스테롤의 비교할만한 감소에 의해 설명된다.

본 연구에서, 에비나쿠맙을 이용한 치료는 대조군과 비교하여 평균 총 콜레스테롤(TC)(-52%, p<0.001) 및 트리글리세라이드(TG)(-84%, p<0.001)를 유의하게 감소시켰고, 이는 비-HDL 분획에 한정되었다.

병변 크기 및 괴사 면적의 감소

현재 연구에서, 에비나쿠맙은 대조군 그룹과 비교하여 병변 크기를 유의하게 감소시켰다(-39%, p<0.001). 병변의 수, 이환되지 않은 절편 또는 병변 중증도에서 유의한 차이는 발견되지 않았다.

에비나쿠맙을 이용한 치료는 중증의 유형 IV 내지 V 병변에서 총 병변 크기 중의 백분율로서의 괴사 함량을 유의하게 감소시켰지만(45%, p=0.001), 대식세포 함량, 콜라겐 함량 또는 SMC 면적에는 영향을 미치지 않았고, 이는 대조군 그룹과 유사한 병변 안정성 지수를 초래하였다. 에비나쿠맙은 활성화된 내피에의 단핵구 유입(recruitment)에 영향을 미치지 않았다.

괴사 함량은 절대 면적 및 또한 전체 병변 면적의 백분율로서 둘 다의 관점에서 변화된 플라크 조성의 유일한 마커였다. 잠재적인 설명은 플라크에서의 대식세포 집단의 조성에 있어서 보다 염증촉진성인(pro-inflammatory) M1 "살해(killer)" 대식세포로부터 보다 치유성인(healing) "수복(repair)" M2 대식세포로의 전환(shift)일 수 있고, 이는 플라크로부터 콜레스테롤을 제거할 수 있다.

결론

총체적으로, 이러한 실시예에 제시된 결과는 항-ANGPTL3 모노클로날 항체, 에비나쿠맙이 혈장 지질을 감소시키고 APOE^*3Leiden.CETP 마우스에서 죽상 동맥경화증의 진행을 예방한다는 것을 보여준다. 에비나쿠맙은 병변의 수, 병변의 중증도 또는 플라크 안정성에 대한 영향을 갖지 않았지만, 병변 면적 및 괴사성 코어 면적을 유의하게 감소시켰다.

본 발명은 본원에 기술된 특정 실시형태들에 의해 범위가 한정되는 것은 아니다. 실제로, 본원에 기술된 것들 이외의 본 발명의 각종 변형은 이전의 상세한 설명 및 첨부된 도면으로부터 당해 분야 숙련가들에게 명백해질 것이다. 이러한 변형은 첨부된 청구범위의 범위 내인 것으로 의도된다.

SEQUENCE LISTING <110> REGENERON PHARMACEUTICALS, INC. <120> METHODS FOR TREATING OR PREVENTING ATHEROSCLEROSIS BY ADMINISTERING AN INHIBITOR OF ANGPTL3 <130> 0431.23/PCT <150> US 62/296,110 <151> 2016-02-17 <160> 11 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 460 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Phe Thr Ile Lys Leu Leu Leu Phe Ile Val Pro Leu Val Ile Ser 1 5 10 15 Ser Arg Ile Asp Gln Asp Asn Ser Ser Phe Asp Ser Leu Ser Pro Glu 20 25 30 Pro Lys Ser Arg Phe Ala Met Leu Asp Asp Val Lys Ile Leu Ala Asn 35 40 45 Gly Leu Leu Gln Leu Gly His Gly Leu Lys Asp Phe Val His Lys Thr 50 55 60 Lys Gly Gln Ile Asn Asp Ile Phe Gln Lys Leu Asn Ile Phe Asp Gln 65 70 75 80 Ser Phe Tyr Asp Leu Ser Leu Gln Thr Ser Glu Ile Lys Glu Glu Glu 85 90 95 Lys Glu Leu Arg Arg Thr Thr Tyr Lys Leu Gln Val Lys Asn Glu Glu 100 105 110 Val Lys Asn Met Ser Leu Glu Leu Asn Ser Lys Leu Glu Ser Leu Leu 115 120 125 Glu Glu Lys Ile Leu Leu Gln Gln Lys Val Lys Tyr Leu Glu Glu Gln 130 135 140 Leu Thr Asn Leu Ile Gln Asn Gln Pro 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Claims

대상체에서의 죽상 동맥경화증을 예방하거나 약화시키는 방법으로서, 상기 방법은 죽상 동맥경화증을 갖거나 죽상 동맥경화증을 발병할 위험이 있는 대상체를 선택하는 단계, 및 상기 대상체에게 안지오포이에틴-유사 단백질 3(ANGPTL3) 억제제의 1회 이상의 용량을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서의 죽상 동맥경화증을 예방하거나 약화시키는 방법.
제1항에 있어서, 상기 대상체가, ANGPTL3 억제제의 1회 이상의 용량을 이용한 치료의 개시 전에 또는 상기 치료의 개시 시점에 이형접합성 가족성 고콜레스테롤혈증(HeFH: heterozygous familial hypercholesterolemia) 또는 동형접합성 가족성 고콜레스테롤혈증(HoFH: homozygous familial hypercholesterolemia) 및/또는 상승된 지단백질(a)(Lp[a])로 진단되는, 방법.
제1항에 있어서, 상기 대상체가, ANGPTL3 억제제의 1회 이상의 용량을 이용한 치료의 개시 전에 또는 상기 치료의 개시 시점에 심혈관 질환(CVD)으로 진단되는, 방법.
제1항에 있어서, 상기 대상체가, ANGPTL3 억제제의 1회 이상의 용량을 이용한 치료의 개시 전에 또는 상기 치료의 개시 시점에 뇌졸중 또는 심근 경색을 앓았던, 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가, ANGPTL3 억제제의 1회 이상의 용량을 이용한 치료의 개시 전에 또는 상기 치료의 개시 시점에 안정한 배경 지질 변형 치료요법(LMT: lipid modifying therapy) 중인, 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자가 ANGPTL3 억제제의 1회 이상의 용량의 투여와 동시에 안정한 배경 지질 변형 치료요법(LMT) 중인, 방법.
제5항 또는 제6항에 있어서, 상기 안정한 배경 LMT가 저-용량, 중간-용량 또는 고-용량 스타틴 치료요법인, 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에게의 상기 ANGPTL3 억제제의 1회 이상의 용량의 투여가
(a) 혈청 총 콜레스테롤(TC) 수준의 감소,
(b) 혈청 트리글리세라이드(TG) 수준의 감소,
(c) 혈청 저-밀도 지단백질(LDL) 수준의 감소, 및
(d) 혈청 초저밀도 지단백질(VLDL) 수준의 감소
로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 치료학적 결과(들)를 초래하고;
여기서, 상기 (a), (b), (c) 및/또는 (d)의 감소는 ANGPTL3 억제제의 1회 이상의 용량을 이용한 치료의 개시 전의 또는 상기 치료의 개시 시점의 상기 대상체의 혈청 TC 수준, 혈청 TG 수준, 혈청 LDL 수준, 및/또는 혈청 VLDL 수준에 대해 결정되는, 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에게의 상기 ANGPTL3 억제제의 1회 이상의 용량의 투여가 죽상 동맥경화성 플라크 형성의 감소를 초래하는, 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ANGPTL3 억제제가 ANGPTL3에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 방법.
제10항에 있어서, ANGPTL3에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 서열번호 2/서열번호 3을 포함하는 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍의 중쇄 및 경쇄 CDR들을 포함하는, 방법.
제11항에 있어서, ANGPTL3에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8 및 서열번호 9를 갖는 중쇄 및 경쇄 CDR 아미노산 서열들을 포함하는, 방법.
제12항에 있어서, ANGPTL3에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 HCVR 및 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 LCVR을 포함하는, 방법.
제10항에 있어서, ANGPTL3에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 에비나쿠맙인, 방법.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에게 프로단백질 컨버타제 서브틸리신 켁신-9(PCSK9: proprotein convertase subtilisin kexin-9) 억제제의 1회 이상의 용량을 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
제15항에 있어서, 상기 PCSK9 억제제가 PCSK9에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편인, 방법.
제16항에 있어서, PCSK9에 특이적으로 결합하는 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 알리로쿠맙, 에볼로쿠맙, 보코시주맙, 로델시주맙 및 랄판시주맙으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에게 ANGPTL4 억제제 및/또는 NAGPTL8 억제제의 1회 이상의 용량을 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
대상체에서의 죽상 동맥경화증의 예방 또는 약화시 안지오포이에틴-유사 단백질 3(ANGPTL3) 억제제의 용도로서, 상기 대상체는 죽상 동맥경화증을 갖거나 죽상 동맥경화증을 발병할 위험이 있고, 상기 안지오포이에틴-유사 단백질 3(ANGPTL3) 억제제의 1회 이상의 용량이 상기 대상체에게 투여되는, 대상체에서의 죽상 동맥경화증의 예방 또는 약화시 안지오포이에틴-유사 단백질 3(ANGPTL3) 억제제의 용도.
대상체에서의 죽상 동맥경화증을 예방하거나 약화시키기 위한 의약의 조제시 안지오포이에틴-유사 단백질 3(ANGPTL3) 억제제의 용도로서, 상기 대상체가 죽상 동맥경화증을 갖거나 죽상 동맥경화증을 발병할 위험이 있고, 상기 안지오포이에틴-유사 단백질 3(ANGPTL3) 억제제의 1회 이상의 용량이 상기 대상체에게 투여되는, 대상체에서의 죽상 동맥경화증을 예방하거나 약화시키기 위한 의약의 조제시 안지오포이에틴-유사 단백질 3(ANGPTL3) 억제제의 용도.
대상체에서의 죽상 동맥경화증을 예방하거나 약화시키기 위한 약제학적 조성물로서, 상기 대상체가 죽상 동맥경화증을 갖거나 죽상 동맥경화증을 발병할 위험이 있고, 상기 조성물은 안지오포이에틴-유사 단백질 3(ANGPTL3) 억제제를 포함하고, 상기 안지오포이에틴-유사 단백질 3(ANGPTL3) 억제제의 1회 이상의 용량은 상기 대상체에게 투여되는, 약제학적 조성물.