CN107922478A - 抗angptl8抗体及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了结合ANGPTL8的抗体及其使用方法。根据某些实施方案，本发明的抗体以高亲和力结合人ANGPTL8。本发明的抗体可以是完整人抗体。本发明的抗体可用于治疗各种特征部分在于升高的血液甘油三酯水平的疾病或病症。

Description

抗ANGPTL8抗体及其用途
技术领域
本发明涉及特异性结合血管生成素样蛋白(ANGPTL)8的抗体及其抗原结合片段、包含这些抗体的组合物及其使用方法。
背景技术
ANGPTL8(或者称为TD26、RIFL、Lipasin、C19orf80和Betatrophin)是新近认可的参与甘油三酯(TG)和葡萄糖代谢的ANGPTL家族成员。其是主要在肝脏和脂肪组织中表达的循环蛋白。与ANGPTL3和ANGPTL4不同，ANGPTL8在C-末端缺少纤维蛋白原样结构域，但含有N-末端卷曲螺旋结构域，非常像其他ANGPTL家族成员。系统发育分析显示ANGPTL8与ANGPTL3和ANGPTL4享有共同的先祖(Fu，Z等人，(2013)，Biochem.Biophys.Res.Commun.430:1126-1131)。
ANGPTL8的肝过表达与高甘油三酯血症相关，而Angptl8的失活引起血浆TG水平的降低(Quagliarini,F.等人(2012),Proc.Natl.Acad.Sci.USA 109(48):19751-19756；Wang,Y.等人(2013),Proc.Natl.Acad.Sci.USA 110:16109-16114)。尽管一致认为ANGPTL8参与脂质调节，负责这一过程的机制仍在争论中。一种提出的机制是ANGPTL8抑制脂蛋白脂肪酶(LPL)活性，导致降低的甘油三酯水解和清除(Zhang,R.等人,(2012),Biochem.Biophys.Res.Commun.424:786-792)。
还报道ANGPTL8在用胰岛素受体拮抗剂S961诱导胰岛素抗性的小鼠中的β细胞增殖和β细胞团块中起作用(Yi,P.等人(2013),Cell 153:747-758)。然而，随后的研究显示ANGPTL8不是β细胞功能所必需的，也不是对胰岛素抗性反应的β细胞生长所必需的。此外，ANGPTL8的过表达不增加β细胞面积，也不改善血糖控制(Gusarova,V.等人(2014)Cell159:691-696)。
由于ANGPTL8的肝脏过表达与高甘油三酯血症相关并且由于Angptl8的失活导致血浆甘油三酯水平的降低，所以可证明ANGPTL8的抑制剂或拮抗剂有效治疗特征部分在于升高的甘油三酯水平的疾病,如，但不限于，高甘油三酯血症。
Zhang报道了向野生型小鼠腹腔内注射lipasin的单克隆抗体时降低血清甘油三酯水平(Zhang,R.(2015),Endocrine Society's 97th Annual Meeting,PresentationNo.OR13-6,March 5-8,San Diego,CA)。然而，迄今为止还没有描述可用于临床环境来治疗特征在于升高的甘油三酯水平(包括高甘油三酯血症)的疾病或病症的特异性针对ANGPTL8的完整人抗体。
因此，本领域需要新型ANGPTL8拮抗剂(如本文所述的抗体)用于治疗患有高甘油三酯血症和其他与升高的甘油三酯和脂质水平相关的疾患或病症的患者。
发明内容
本发明提供了与血管生成素样蛋白8(ANGPTL8)结合的抗体及其抗原结合片段。本发明的一个方面提供了与ANGPTL8结合/相互作用的人抗体及其抗原结合片段，由此这种结合和/或相互作用导致哺乳动物中甘油三酯水平的降低。
因此，第一方面，本发明提供了特异性结合、中和、抑制、阻断、消除、降低或干扰ANGTPL8，特别是人ANGPTL8(参见GenBank登录号NP_061157.3的氨基酸22-198和SEQ IDNO：340的氨基酸1-177)，的至少一种活性的完整人单克隆抗体(mAb)及其抗原结合片段。可被本发明的抗体或其抗原结合片段中和、抑制、阻断、消除、降低或干扰的ANGPTL8的活性包括但不限于抑制LPL活性或降低体内的甘油三酯水平等。
在一个实施方案中，本发明提供了特异性结合ANGPTL8并中和或抑制与ANGPTL8相关的至少一种活性的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段显示出一种或多种以下特征：
a)是完整人单克隆抗体；
b)特异性结合如SEQ ID NO：337所定义的人ANGPTL8的N-末端区中的线性表位；
c)不结合如SEQ ID NO：337所定义的人ANGPTL8的N-末端区中的线性表位；
d)不结合SEQ ID NO：338的人ANGPTL3肽的N-末端卷曲螺旋区或SEQ ID NO：339的人ANGPTL4肽的N-末端卷曲螺旋区；
e)如通过表面等离子体共振所测量的，在25℃以小于约150pM的KD结合人ANGPTL8，并在25℃以小于约90pM的KD结合猴ANGPTL8；
f)当以约10mg/kg的剂量皮下施用时，在哺乳动物中降低甘油三酯水平约68％(最大值)；
g)当以约5mg/kg至约25mg/kg的剂量范围皮下施用时，在哺乳动物中降低甘油三酯水平持续约7天至21天的期间；
h)包含重链可变区(HCVR)，所述重链可变区具有选自SEQ ID NO：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242、258、266、274、282、290、298、306、314和330的氨基酸序列；
i)包含轻链可变区(LCVR)，所述轻链可变区具有选自：SEQ ID NO：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250和322的氨基酸序列；或者
j)与参照抗体交叉竞争，其中所述参照抗体包含选自表1的任何HCVR和LCVR氨基酸序列的重链可变区(HCVR)和轻链可变区(LCVR)氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段可通过与hANGPTL8的表位结合而中和、抑制、阻断、消除、降低或干扰hANGPTL8的活性，所述hANGPTL8的表位直接参与hANGPTL8的靶向活性(例如ANGPTL8的LPL抑制活性)。
在另一个实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段可通过与hANGPTL8的表位结合而中和、抑制、阻断、消除、降低或干扰hANGPTL8的活性，所述hANGPTL8的表位不直接参与hANGPTL8的靶向活性，但与其结合的抗体或片段可通过空间重叠或通过与抗体-抗原接触表面不同的位点上的变构作用抑制、阻断、消除、降低或干扰hANGPTL8的靶向活性。
在另一个实施方案中，本发明的抗体或其片段与hANGPTL8的表位结合，所述hANGPTL8的表位不直接参与hANGPTL8的靶向活性(例如抑制LPL活性等)(即，非阻断抗体)，但是与不存在抗体或其片段时甘油三酯水平的降低相比，抗体或其片段导致体内甘油三酯水平降低。
在一个实施方案中，本发明的特征在于分离的抗hANGPTL8抗体或其抗原结合片段，其结合位于SEQ ID NO：340的残基1-39的N-末端区内的表位(也显示为SEQ ID NO：337)。
在另一个实施方案中，本发明提供了分离的抗体或抗体的抗原结合片段，其结合位于SEQ ID NO：340的残基1-39的人ANGPTL8的N-末端区内的表位(也显示为SEQ ID NO：337)，但不结合hANGPTL3的N-末端卷曲螺旋区(SEQ ID NO：338)或hANGPTL4的N-末端卷曲螺旋区(SEQ ID NO：339)。
在一个实施方案中，本发明的特征在于分离的抗hANGPTL8抗体或其抗原结合片段，其结合位于由SEQ ID NO：340的氨基酸残基1-39所定义的人ANGPTL8区(也显示为SEQID NO：337)之外的表位，即SEQ ID NO：340的氨基酸残基40-177，并且中和、抑制、消除、降低或干扰hANGPTL8的至少一种活性。
在一个实施方案中，本发明的特征在于分离的抗hANGPTL8抗体或其抗原结合片段，其结合人ANGPTL8(SEQ ID NO：340的氨基酸残基1-177；也参见GenBank登录号NP_061157.3的氨基酸残基22-198)，但不与相关蛋白交叉反应，所述相关蛋白如人ANGPTL3(SEQ ID NO：342的氨基酸序列，由SEQ ID NO：343所示的核酸序列编码)或人ANGPTL4(SEQID NO：344的氨基酸序列，由SEQ ID NO：345所示的核酸序列编码)。
本发明的抗体可以是全长的(例如，IgG1或IgG4抗体)或可以仅包含抗原结合部分(例如Fab，F(ab')2或scFv片段)，并且可以被修饰以影响功能性，例如增加宿主中的持久性或消除残留的效应功能(Reddy等人，2000，J.Immunol.164：1925-1933)。在某些实施方案中，抗体可以是双特异性的。
本发明的示例性抗ANGPTL8抗体列于本文的表1和2中。表1列出了示例性抗ANGPTL8抗体的重链可变区(HCVR)、轻链可变区(LCVR)、重链互补决定区(HCDR1，HCDR2和HCDR3)和轻链互补决定区(LCDR1，LCDR2和LCDR3)的氨基酸序列标识。表2列出了示例性抗ANGPTL8抗体的HCVR、LCVR、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3的核酸序列标识。
本发明提供了包含HCVR的抗体或其抗原结合片段，所述HCVR包含选自表1中列出的任何HCVR氨基酸序列的氨基酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。
本发明还提供了包含LCVR的抗体或其抗原结合片段，所述LCVR包含选自表1中列出的任何LCVR氨基酸序列的氨基酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。
本发明还提供包含HCVR和LCVR氨基酸序列对(HCVR/LCVR)的抗体或其抗原结合片段，所述HCVR和LCVR氨基酸序列对包含表1中列出的任何HCVR氨基酸序列与表1中列出的任何LCVR氨基酸序列的配对。
在一个实施方案中，本发明提供了特异性结合ANGPTL8和/或抑制与ANGPTL8相关的至少一种活性的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含选自以下的HCVR/LCVR氨基酸序列对：SEQ ID NO:2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、258/250、266/250、274/250、282/250、290/250、306/250、314/322和330/322。
在一个实施方案中，本发明提供了特异性结合ANGPTL8和/或抑制与ANGPTL8相关的至少一种活性的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含选自SEQ ID NO：66/74、162/170、194/202和314/322的HCVR/LCVR氨基酸序列对。
在一个实施方案中，本发明提供了特异性结合ANGPTL8和/或抑制与ANGPTL8相关的至少一种活性的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含SEQID NO：162/170的HCVR/LCVR氨基酸序列对。
在一个实施方案中，本发明提供了结合ANGPTL8和/或抑制与ANGPTL8相关的至少一种活性的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：(a)三条重链互补决定区(CDR)(HCDR1、HCDR2和HCDR3)，其包含在如表1所示的任一个重链可变区(HCVR)序列内；和(b)三条轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)，其包含在如表1所示的任一个轻链可变区(LCVR)序列内。
在一个实施方案中，本发明提供了特异性结合ANGPTL8和/或抑制与ANGPTL8相关的至少一种活性的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：
(a)HCDR1结构域，其具有选自SEQ ID NO:4、20、36、52、68、84、100、116、132、148、164、180、196、212、228、244、260、268、276、284、292、300、308、316和332的氨基酸序列；
(b)HCDR2结构域，其具有选自SEQ ID NO:6、22、38、54、70、86、102、118、134、150、166、182、198、214、230、246、262、270、278、286、294、302、310、318和334的氨基酸序列；
(c)HCDR3结构域，其具有选自SEQ ID NO:8、24、40、56、72、88、104、120、136、152、168、184、200、216、232、248、264、272、280、288、296、304、312、320和336的氨基酸序列；
(d)LCDR1结构域，其具有选自SEQ ID NO:12、28、44、60、76、92、108、124、140、156、172、188、204、220、236、252和324的氨基酸序列；
(e)LCDR2结构域，其具有选自SEQ ID NO:14、30、46、62、78、94、110、126、142、158、174、190、206、222、238、254和326的氨基酸序列；和
(f)LCDR3结构域，其具有选自SEQ ID NO:16、32、48、64、80、96、112、128、144、160、176、192、208、224、240、256和328的氨基酸序列。
本发明还提供了包含重链CDR1(HCDR1)的抗体或其抗原结合片段，所述重链CDR1(HCDR1)包含选自表1中列出的任何HCDR1氨基酸序列的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。
本发明还提供了包含重链CDR2(HCDR2)的抗体或其抗原结合片段，所述重链CDR2(HCDR2)包含选自表1中列出的任何HCDR2氨基酸序列的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。
本发明还提供了包含重链CDR3(HCDR3)的抗体或其抗原结合片段，所述重链CDR3(HCDR3)包含选自表1中列出的任何HCDR3氨基酸序列的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。
本发明还提供了包含轻链CDR1(LCDR1)的抗体或其抗原结合片段，所述轻链CDR1(LCDR1)包含选自表1中列出的任何LCDR1氨基酸序列的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。
本发明还提供了包含轻链CDR2(LCDR2)的抗体或其抗原结合片段，所述轻链CDR2(LCDR2)包含选自表1中列出的任何LCDR2氨基酸序列的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。
本发明还提供了包含轻链CDR3(LCDR3)的抗体或其抗原结合片段，所述轻链CDR3(LCDR3)包含选自表1中列出的任何LCDR3氨基酸序列的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。
本发明还提供了包含HCDR3和LCDR3氨基酸序列对(HCDR3/LCDR3)的抗体或其抗原结合片段，所述HCDR3和LCDR3氨基酸序列对包含表1中列出的任何HCDR3氨基酸序列与表1中列出的任何LCDR3氨基酸序列配对。根据某些实施方案，本发明提供了包含HCDR3/LCDR3氨基酸序列对的抗体或其抗原结合片段，所述HCDR3/LCDR3氨基酸序列对包含在表1中列出的任何示例性抗ANGPTL8抗体内。在某些实施方案中，HCDR3/LCDR3氨基酸序列对选自SEQID NO：72/80(例如H4H15321P)、168/176(例如H4H15341P)、200/208(例如H4H15345P)和320/328(例如H4H15367P2)。在一个实施方案中，HCDR3/LCDR3氨基酸序列对是SEQ ID NO：168/176(例如H4H15341P)。
本发明还提供了包含一组六个CDR(即，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)的抗体或其抗原结合片段，所述一组六个CDR包含在表1中列出的任何示例性抗ANGPTL8抗体内。在某些实施方案中，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组选自SEQID NO：68-70-72-76-78-80(例如，H4H15321P)；164-166-168-172-174-176(例如，H4H15341P)；196-198-200-204-206-208(例，如H4H15345P)；316-318-320-324-326-328(例如，H4H15367P2)。在一个实施方案中，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组是SEQ ID NO：164-166-168-172-174-176(例如，H4H15341P)。
在一个相关的实施方案中，本发明提供了包含一组六个CDR(即，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)的抗体或其抗原结合片段，所述一组六个CDR包含在表1中列出的任何示例性抗ANGPTL8抗体所定义的HCVR/LCVR氨基酸序列对内。例如，本发明包括包含HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组的抗体或其抗原结合片段，所述氨基酸序列组包含在选自以下的HCVR/LCVR氨基酸序列对内：SEQ ID NO:66/74(例如,H4H15321P)；162/170(例如,H4H15341P)；194/202(例如,H4H15345P)；314/322(例如,H415367P2)。用于鉴定HCVR和LCVR氨基酸序列内的CDR的方法和技术在本领域中是公知的，可以用于鉴定本文公开的特定HCVR和/或LCVR氨基酸序列内的CDR。可用于鉴定CDR边界的示例性约定包括例如Kabat定义、Chothia定义和AbM定义。一般而言，Kabat定义基于序列变异性，Chothia定义基于结构环区的位置，AbM定义是Kabat和Chothia方法之间的折衷。参见例如Kabat,"Sequences of Proteins of Immunological Interest,"NationalInstitutes of Health,Bethesda,Md.(1991)；Al-Lazikani等人,J.Mol.Biol.273:927-948(1997)；和Martin等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:9268-9272(1989)。公共数据库也可用于鉴定抗体内的CDR序列。
本发明包括具有修饰的糖基化模式的抗ANGPTL8抗体。在一些实施方案中，去除不需要的糖基化位点的修饰可能是有用的，或者，例如，缺乏存在于寡糖链上的岩藻糖部分的抗体，增加抗体依赖性细胞毒性(ADCC)功能(参见Shield等人(2002)JBC 277:26733)。在其他应用中，可以进行半乳糖基化修饰以修饰补体依赖性细胞毒性(CDC)。
本发明还提供了抗体及其抗原结合片段，其与包含HCVR的CDR和LCVR的CDR的参照抗体或其抗原结合片段竞争对ANGPTL8的特异性结合，其中所述HCVR和LCVR各自具有选自表1中列出的HCVR和LCVR序列的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了一种分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其与包含HCVR/LCVR氨基酸序列对的参照抗体竞争对ANGPTL8的结合，所述HCVR/LCVR氨基酸序列对选自SEQ ID NO：2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、258/250、266/250、274/250、282/250、290/250、306/250、314/322和330/322。
本发明还提供了与参照抗体或其抗原结合片段结合ANGPTL8上的相同表位的抗体及其抗原结合片段，所述参照抗体或其抗原结合片段包含HCVR的CDR和LCVR的CDR，其中HCVR和LCVR各自具有选自表1中列出的HCVR和LCVR序列的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了与包含HCVR/LCVR氨基酸序列对的参照抗体结合ANGPTL8上的相同表位的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述HCVR/LCVR氨基酸序列对选自SEQ ID NO：2/10,18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、258/250、266/250、274/250、282/250、290/250、306/250、314/322和330/322。
在一个实施方案中，特异性结合和/或抑制与ANGPTL8相关的至少一种活性的分离的抗体是重组产生的人单克隆抗体。
在一个实施方案中，特异性结合和/或抑制与ANGPTL8相关的至少一种活性的分离的抗体是重组产生的人单克隆抗体，其具有选自表1中存在的氨基酸序列的HCVR和/或LCVR序列。
在一个实施方案中，特异性结合和/或抑制与ANGPTL8相关的至少一种活性的分离的抗体是重组产生的人单克隆抗体，其具有选自以下的HCVR/LCVR氨基酸序列对：SEQ IDNO：2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、258/250、266/250、274/250、282/250、290/250、306/250、314/322和330/322。
在一个实施方案中，本发明提供了中和ANGPTL8活性的完整人单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其片段表现出一种或多种以下特征：(i)包含HCVR，所述HCVR具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242、258、266、274、282、290、298、306、314和330；(ii)包含LCVR，所述LCVR具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250和322；(iii)包含HCDR3结构域和LCDR3结构域，所述HCDR3结构域具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO：8、24、40、56、72、88、104、120、136、152、168、184、200、216、232、248、264、272、280、288、296、304、312、320和336，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列；和所述LCDR3结构域具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO：16、32、48、64、80、96、112、128、144、160、176、192、208、224、240、256和328，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列；(iv)包含HCDR1结构域、HCDR2结构域、LCDR1结构域和LCDR2结构域，所述HCDR1结构域具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO：4、20、36、52、68、84、100、116、132、148、164、180、196、212、228、244、260、268、276、284、292、300、308、316和332，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列；所述HCDR2结构域具有以下的氨基酸序列：SEQ ID NO：6、22、38、54、70、86、102、118、134、150、166、182、198、214、230、246、262、270、278、286、294、302、310、318和334，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列；所述LCDR1结构域具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO：12、28、44、60、76、92、108、124、140、156、172、188、204、220、236、252和324，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列；和所述LCDR2结构域具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO：14、30、46、62、78、94、110、126、142、158、174、190、206、222、238、254和326，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列；(v)特异性结合由SEQ ID NO：337定义的人ANGPTL8的N-末端区；vi)不特异性结合由SEQ ID NO：337定义的人ANGPTL8的N-末端区；vii)不结合SEQID NO：338的人ANGPTL3肽的N-末端卷曲螺旋区，或不结合SEQ ID NO：339的人ANGPTL4肽的N-末端卷曲螺旋区；viii)如通过表面等离子体共振测量的，在25℃以小于约150pM的KD结合人ANGPTL8，并且在25℃以小于约90pM的KD结合猴ANGPTL8；ix)以约10mg/kg的剂量皮下施用时，在哺乳动物中降低甘油三酯水平约68％(最大)；x)以约5mg/kg至约25mg/kg的剂量范围皮下施用时，在哺乳动物中降低甘油三酯水平持续约7天至21天的期间范围；xi)与参照抗体交叉竞争，其中所述参照抗体包含选自表1的任何HCVR和LCVR氨基酸序列的重链可变区(HCVR)和轻链可变区(LCVR)氨基酸序列。
第二方面，本发明还提供了编码抗ANGPTL8抗体或其部分的核酸分子。例如，本发明提供编码表1中列出的任何HCVR氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方案中，核酸分子包含选自表2中列出的任何HCVR核酸序列的多核苷酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。
本发明还提供编码表1中列出的任何LCVR氨基酸序列的核酸分子。在某些实施方案中，核酸分子包含选自表2中列出的任何LCVR核酸序列的多核苷酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。
本发明还提供编码表1中列出的任何HCDR1氨基酸序列的核酸分子。在某些实施方案中，核酸分子包含选自表2中列出的任何HCDR1核酸序列的多核苷酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。
本发明还提供编码表1中列出的任何HCDR2氨基酸序列的核酸分子。在某些实施方案中，核酸分子包含选自表2中列出的任何HCDR2核酸序列的多核苷酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。
本发明还提供编码表1中列出的任何HCDR3氨基酸序列的核酸分子。在某些实施方案中，核酸分子包含选自表2中列出的任何HCDR3核酸序列的多核苷酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。
本发明还提供编码表1中列出的任何LCDR1氨基酸序列的核酸分子。在某些实施方案中，核酸分子包含选自表2中列出的任何LCDR1核酸序列的多核苷酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。
本发明还提供编码表1中列出的任何LCDR2氨基酸序列的核酸分子。在某些实施方案中，核酸分子包含选自表2中列出的任何LCDR2核酸序列的多核苷酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。
本发明还提供编码表1中列出的任何LCDR3氨基酸序列的核酸分子。在某些实施方案中，核酸分子包含选自表2中列出的任何LCDR3核酸序列的多核苷酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。
本发明还提供编码HCVR的核酸分子，其中所述HCVR包含一组三个CDR(即，HCDR1-HCDR2-HCDR3)，其中所述HCDR1-HCDR2-HCDR3氨基酸序列组如表1中列出的任何示例性抗ANGPTL8抗体所定义。
本发明还提供了编码LCVR的核酸分子，其中所述LCVR包含一组三个CDR(即，LCDR1-LCDR2-LCDR3)，其中所述LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组如表1中列出的任何示例性抗ANGPTL8抗体所定义。
本发明还提供了编码HCVR和LCVR的核酸分子，其中所述HCVR包含表1中列出的任何HCVR氨基酸序列的氨基酸序列，并且其中所述LCVR包含表1中列出的任何LCVR氨基酸序列的氨基酸序列。在某些实施方案中，核酸分子包含选自表2中列出的任何HCVR核酸序列的多核苷酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列，以及该核酸分子包含选自表2中列出的任何LCVR核酸序列的多核苷酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。在根据本发明该方面的某些实施方案中，核酸分子编码HCVR和LCVR，其中所述HCVR和LCVR均源自表1中列出的相同抗ANGPTL8抗体。
本发明还提供了能够表达包含抗ANGPTL8抗体的重链或轻链可变区的多肽的重组表达载体。例如，本发明包括包含任何上述核酸分子的重组表达载体，即编码如表1所示的任何HCVR、LCVR和/或CDR序列的核酸分子。也包括在本发明的范围内的是其中导入了这样的载体的宿主细胞，以及通过在允许生产抗体或抗体片段的条件下培养宿主细胞生产抗体或其部分，和回收由此产生的抗体和抗体片段的方法。
在一个实施方案中，特异性结合ANGPTL8和/或抑制与ANGPTL8相关的至少一种活性的分离的抗体是重组产生的人单克隆抗体，其具有由核酸序列编码的HCVR和/或LCVR，所述核酸序列选自表2中存在的核酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供编码特异性结合人ANGPTL8的抗体或其片段的分离的核酸分子，其中抗体或其抗原结合片段包含(a)重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)，其具有如表1所示的氨基酸序列；和(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，其具有如表1所示的氨基酸序列。
在一个实施方案中，本发明提供了编码特异性结合人ANGPTL8的抗体或其抗原结合片段的分离的核酸分子，其中抗体或抗原结合片段包含选自如表1所示的氨基酸序列的HCVR和选自如表1所示的氨基酸序列的LCVR。
第三方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含特异性结合ANGPTL8的重组人单克隆抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载体。
在一个实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其包含至少一种对人ANGPTL8特异的抗体和药学上可接受的载体或稀释剂，所述抗体选自表1中存在的任何抗ANGPTL8抗体的抗体或其抗原结合片段。
在相关方面，本发明的特征在于一种组合物，其是抗ANGPTL8抗体和第二治疗剂的组合。在一个实施方案中，第二治疗剂是有利地与抗ANGPTL8抗体组合的任何试剂。
在一个实施方案中，第二治疗剂可以是能够降低甘油三酯或降低患有特征在于高甘油三酯水平的疾病或病症(如高甘油三酯血症)的患者中至少一种症状的试剂。
在某些实施方案中，第二治疗剂可以是有助于抵消或降低与本发明的抗体或抗体的抗原结合片段相关的任何可能的副作用的试剂，如果发生这样的副作用。
第二治疗剂可以是小分子药物、蛋白质/多肽、抗体、核酸分子如反义分子或siRNA。第二治疗剂可以是合成的或天然衍生的。
还应该理解的是，本发明的抗体和药学上可接受的组合物可以用于其他联合疗法中，即抗体和药学上可接受的组合物可以与一种或多种其他所需的疗法或医疗步骤同时施用、在其之前或在其之后施用。在组合方案中使用的特定治疗组合(疗法或步骤)将考虑期望的疗法和/或步骤的相容性以及期望实现的治疗效果。还将理解，所采用的治疗可针对相同疾患实现期望的效果(例如，抗体可与另一种用于治疗相同疾患的试剂同时施用)，或者其可实现不同的效果(例如控制任何副作用)。如本文所用，通常施用以治疗或预防特定疾病或病症的另外的治疗剂适合于治疗的疾病或病症。
在一个相关的实施方案中，本发明的特征在于一种组合物，其是本发明的抗体或其抗原结合片段与第二治疗剂的组合，所述第二治疗剂如(1)3-羟基-3-甲基戊二酰基-辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂，如西伐他汀(cerivastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、匹伐他汀(pitavastatin)、罗苏伐他汀(rosuvastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、洛伐他汀(lovastatin)、普伐他汀(pravastatin)等；(2)胆固醇吸收和/或胆汁酸再吸收的抑制剂；(3)烟酸，其增加脂蛋白分解代谢；(4)贝特类(fibrates)或两亲性羧酸，其降低TG水平、低密度脂蛋白(LDL)水平和改善高密度脂蛋白(HDL)水平；和(5)在胆固醇消除中起作用的LXR转录因子的激活剂，如22-羟基胆固醇，或固定组合如依折替米贝(ezetimibe)加辛伐他汀；他汀与胆汁树脂(bile resin)(例如考来烯胺(cholestyramine)、考来替泊(colestipol)、考来维仑(colesevelam))，烟酸加他汀的固定组合(例如，烟酸与洛伐他汀)；或与其他降脂剂如ω-3-脂肪酸乙酯(例如omacor)一起。
此外，第二治疗剂可以是ANGPTL8的一种或多种其他抑制剂以及其他分子的抑制剂，所述其他分子如ANGPTL3、ANGPTL4、ANGPTL5、ANGPTL6、载脂蛋白C-III(APOC3)和原蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9型(PCSK9)，其参与脂质代谢，特别是胆固醇和/或甘油三酯内稳态。这些分子的抑制剂包括特异性结合这些分子并阻断其活性的小分子、反义分子和抗体。
在一个实施方案中，如果本发明的抗ANGPTL8抗体用于治疗如糖尿病(例如，2型糖尿病)的疾病，那么这些抗体可以与一种或多种目前可用的以下糖尿病治疗组合。这些治疗包括：胰岛素、胰岛素类似物(见下文)、双胍(二甲双胍)、磺酰脲(例如格列本脲(glyburide)，格列吡嗪(glipizide))、PPARγ激动剂(例如吡格列酮(pioglitazone)，罗格列酮(rosiglitazone))、α葡糖苷酶抑制剂(例如阿卡波糖，伏格列波糖(voglibose))、胰高血糖素样肽1(GLP-1)激动剂(例如(艾塞那肽),TRULICITYTM(度拉糖肽(dulaglutide)),(利拉糖肽),(利司那肽),TanzeumTM(阿必鲁肽))、二肽基肽酶IV(DPP-4)抑制剂(例如沙格列汀西他列汀和维格列汀钠-葡萄糖共转运体2(SGLT2)抑制剂(例如,INVOKANATM(卡格列净),(达格列净),依帕列净(empagliflozin),伊格列净(ipragliflozin),托格列净(tofogliflozin))、(普兰林肽)、胰高血糖素受体拮抗剂(如，例如在US8545847中所述)和胰高血糖素拮抗剂。
在某些相关的实施方案中，组合物可以包括选自以下的第二试剂：非磺酰脲促分泌素、胰岛素类似物，包括速效(例如Lispro，Aspart，Glulisine)和长效(例如Detemir胰岛素、Degludec胰岛素或Glargine胰岛素、毒蜥外泌肽-4多肽、β3肾上腺素受体激动剂、胆固醇摄取和/或胆汁酸再吸收抑制剂、LDL-胆固醇拮抗剂、胆固醇酯转移蛋白拮抗剂(例如托塞曲匹(torcetrapib)、安塞曲匹(anacetrapib)、达塞曲匹(dalcetrapib)或依曲普汀(evacetrapib))、内皮素受体拮抗剂、生长激素拮抗剂、胰岛素增敏剂、糊精模拟素或激动剂、大麻素受体拮抗剂、胰高血糖素样肽-1受体激动剂、黑皮质素、黑色素浓集激素受体激动剂、SNRI、成纤维细胞生长因子21(FGF21)模拟物(参见，例如US20110002845和US20080261236)、成纤维细胞生长因子受体1c(FGFR1c)激动剂(参见例如US20110150901)、晚期糖基化终产物形成的抑制剂，如但不限于氨基胍和蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂。
在相关的实施方案中，第二治疗剂可以是一种或多种其他治疗剂，如镇痛剂、包括非甾体类抗炎药(NSAIDS)的抗炎剂，如Cox-2抑制剂等，如果需要的话，以减轻和/或降低伴随潜在病症的症状。
第四方面，本发明提供了一种用于在有其需要的患者中中和、抑制、阻断、消除、降低或干扰与ANGPTL8相关的至少一种活性的方法，所述方法包括向有其需要的患者施用如表1存在的本发明抗体的任一种或多种、或包含这些抗体的任一种或多种的药物组合物，其中与ANGPTL8相关的至少一种活性降低或减弱。
在一个实施方案中，本发明提供了一种治疗方法，其包括向有其需要的受试者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含一种或多种本发明的抗hANGPTL8抗体或其抗原结合片段，和任选的一种或多种如上所述的其他治疗剂。
第五方面，本发明提供了用于治疗与升高的ANGPTL8表达和/或活性部分相关的疾病或病症的方法，所述方法包括施用ANGPTL8抑制剂/拮抗剂，其中ANGPTL8抑制剂/拮抗剂是对ANGPTL8特异性的抗体或其抗原结合片段。在一个实施方案中，对ANGPTL8特异性的抗体或其抗原结合片段包含选自表1的氨基酸序列的HCVR和选自表1的氨基酸序列的LCVR。
在一个实施方案中，通过本发明的方法可治疗的疾病或疾患是与没有抗hANGPTL8抗体治疗(例如ANGPTL8介导的疾病或疾患)相比，通过去除、抑制、降低或以其他方式干扰ANGPTL8活性，被改善、减轻、抑制或预防的任何疾病或病症，或与该疾病相关的至少一种症状发生的严重性或发生频率降低。可通过本发明的方法治疗的疾病或疾患的实例包括但不限于参与脂质代谢的疾病或疾患，如高脂血症、高脂蛋白血症和血脂异常，包括致动脉粥样硬化性血脂异常、糖尿病性血脂异常、高甘油三酯血症，包括TG>1000mg/dL的严重高甘油三酯血症和相关的急性胰腺炎、高胆固醇血症、乳糜微粒血症、混合性血脂异常(肥胖、代谢综合征、糖尿病等)、脂肪代谢障碍、脂肪萎缩等，其由例如降低的LPL活性和/或LPL缺乏、改变的ApoC2、ApoE缺乏、增加的ApoB、极低密度脂蛋白(VLDL)增加的产量和/或减少的消除引起、某些药物治疗(例如糖皮质激素治疗诱导的血脂异常)、任何遗传素质、饮食、生活方式等等。
本发明的方法还预防或治疗与以下相关或由以下导致的疾病或疾患：甘油三酯血症、高甘油三酯血症、高脂血症、高脂蛋白血症和/或血脂异常，包括但不限于心血管疾病或疾患，如动脉粥样硬化、动脉瘤、高血压、心绞痛、中风、脑血管疾病、充血性心力衰竭、冠状动脉疾病、心肌梗塞、外周血管疾病等；急性胰腺炎；非酒精性脂肪性肝炎(NASH)；血糖紊乱，如糖尿病；肥胖等。
在一个实施方案中，本发明的至少一种抗体或其抗原结合片段可以用于治疗代谢综合征相关的血脂异常、肥胖或用于预防体重增加或用于维持正常体重。
在一个实施方案中，本发明提供了用于降低血液甘油三酯水平、或用于治疗与高血液甘油三酯水平相关或特征部分在于高血液甘油三酯水平的病症或疾病、或用于治疗与所述病症或疾病相关的至少一种症状或并发症的方法，所述方法包括向有其需要的患者施用包含表1的对人ANGPTL8特异的一种或多种抗体的药物组合物，从而降低血液甘油三酯水平或者调节所述病症或疾病、或者在严重程度上减轻或降低与病症或疾病相关的至少一种症状或并发症。
在一个实施方案中，本发明的至少一种抗体或其抗原结合片段可以单独使用或与第二或第三治疗剂组合使用来治疗高甘油三酯血症、或治疗与高甘油三酯血症相关的至少一种症状、或可用于治疗处于患有高甘油三酯血症风险的患者，例如，具有发生高甘油三酯血症遗传素质的患者，例如家族性高甘油三酯血症或家族性异常β脂蛋白血症。
其他病症可能使患者倾向于高水平的甘油三酯。例如，某些药物如β-阻断剂、避孕药、利尿剂、类固醇、或使用他莫昔芬可导致升高的甘油三酯水平，因此，可增加患者发生与高水平甘油三酯相关的病症或并发症的可能性，如动脉粥样硬化、中风、心脏病发作和其他心脏病症。
另外，某些其他病症可导致高水平的甘油三酯，包括肥胖、控制不良的糖尿病、甲状腺功能减退症、肾病或饮酒。
在一个实施方案中，抗体可用于预防特征部分在于升高的血液甘油三酯水平的疾病或疾患的发作、或预防发生此类疾病或疾患的可能性、或减轻该疾病或疾患的严重性、或与疾病或疾患相关的至少一种症状。可以设想，本发明的抗体可以单独使用、或者作为与已知为标准护理的其他试剂或方法的辅助治疗、用于治疗患有特征部分在于升高的血液甘油三酯水平的疾病或病症的患者，如，但不限于高甘油三酯血症。这种标准治疗可以包括流体施用或施用任何其他可用于降低血液甘油三酯或脂质或用于减轻体重的药物。
在一个实施方案中，使用本文所述的抗体可以是获得正常甘油三酯水平的有效手段，从而减轻或预防与特征在于高甘油三酯水平的疾病相关的一种或多种症状或长期并发症。
在一个实施方案中，本发明的抗体可用于制备用于治疗特征部分在于升高的甘油三酯水平的任何疾病或疾患的药物。
本发明的抗体可以用作急性环境中的短期治疗，或者可以将其设想为慢性治疗中的长期使用。
通过阅读随后的详细描述其他实施方案将变得显而易见。
附图说明
图1显示施用单次皮下剂量H4H15341P的人源化ANGPTL8小鼠中的血清甘油三酯和总胆固醇浓度的平均值+/-SEM。在研究的第0天施用的剂量为1、5、10或25mg/kg。通过双向ANOVA进行与对照Ab差异的统计学比较，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。
图2显示以1、5、10或25mg/kg的剂量施用一次皮下剂量的H4H15341P后循环的抗人抗体的水平。
图3显示与对照抗体相比，H4H15341P mAb对ANGPTL8小鼠中的血清脂蛋白脂肪酶(LPL)和肝脂肪酶的作用。由不配对的学生t检验进行统计；**P<0.01。
图4显示在脂质耐受性测试中mAb H4H15341P在ANGPTL8小鼠的作用。评估急性脂肪负荷后施用H4H15341P mAb与对照抗体相比的甘油三酯水平的降低。通过双向ANOVA与Bonferroni事后检验进行统计；****P<0.0001。
详细说明
在描述本发明之前，应该理解本发明不限于所描述的具体方法和实验条件，因为这样的方法和条件可以变化。还应该理解的是，文中使用的术语仅仅是为了描述特定实施方案的目的，而不是为了限制，因为本发明的范围将仅由所附权利要求来限制。
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。如本文所使用的，术语“约”在用于提及特定的所述数值时意指该值可以不超过1％地与所述值不同。例如，如在此使用的，表述“约100”包括99和101以及之间的所有值(例如99.1、99.2、99.3、99.4等)。
尽管在本发明的实践或测试中可以使用与本文所述的方法和材料相似或等同的任何方法和材料，但是现在描述优选的方法和材料。本说明书中提到的所有专利、申请和非专利出版物均通过引用整体并入本文。
定义
“血管生成素样蛋白8”或“ANGPTL8”是血管生成素家族蛋白的成员，有时称为TD26、RIFL、Lipasin、C19orf80和Betatrophin。本文使用的“ANGPTL8”是指包含如SEQ IDNO：340的氨基酸残基1-177所示的氨基酸序列的人ANGPTL8。包括信号序列的全长人ANGPTL8氨基酸序列也可在GenBank登录号NP_061157.3中找到，而编码人ANGPTL8的全长核酸序列可以在GenBank登录号NM_018687.6中找到。人ANGPTL8的N-末端卷曲螺旋结构域跨越SEQ ID NO：340的氨基酸残基1-39，并且也描述为SEQ ID NO：337。除非明确说明来源于非人物种，所有本文提及的蛋白质、多肽和蛋白质片段意指各蛋白质、多肽或蛋白质片段的人版本。因此，表达“ANGPTL8”是指人ANGPTL8，除非指明来自非人物种，例如“小鼠ANGPTL8”、“猴ANGPTL8”等。
本文使用的术语“人血管生成素样蛋白3”或“hANGPTL3”是指具有SEQ ID NO：343所示的核酸序列和SEQ ID NO：342的氨基酸序列的ANGPTL3，或其生物学活性片段。人ANGPTL3的N-末端卷曲螺旋结构域如SEQ ID NO：338所示。
本文使用的术语“人血管生成素样蛋白4”或“hANGPTL4”是指具有SEQ ID NO：345所示的核酸序列和SEQ ID NO：344的氨基酸序列的ANGPTL4，或其生物学活性片段。人ANGPTL4的N-末端卷曲螺旋结构域如SEQ ID NO：339所示。
本发明的具体实施方案、抗体或抗体片段可以缀合至治疗部分(“免疫缀合物”)，如第二ANGPTL8拮抗剂，或可用于治疗部分由于升高的甘油三酯水平引起的疾病或病症的任何其他治疗部分。
如本文所用，表述“抗ANGPTL8抗体”包括具有单一特异性的单价抗体、以及包含结合ANGPTL8的第一臂和结合第二(靶)抗原的第二臂的双特异性抗体，其中抗ANGPTL8臂包含本文表1中列出的任何HCVR/LCVR或CDR序列。
如本文所用，术语“抗体”是指包含至少一个特异性结合特定抗原(例如ANGPTL8)或与特定抗原(例如ANGPTL8)相互作用的互补决定区(CDR)的任何抗原结合分子或分子复合物。术语“抗体”包括免疫球蛋白分子以及其多聚体(例如IgM)，所述免疫球蛋白分子包含通过二硫键相互连接的四条多肽链，两条重(H)链和两条轻(L)链。每条重链包含重链可变区(本文缩写为HCVR或VH)和重链恒定区。重链恒定区包含三个结构域CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(本文缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域(CL1)。VH和VL区可以进一步细分成称为互补决定区(CDR)的高变区，其中散布有较保守的区，称为框架区(FR)。每个VH和VL由三个CDR和四个FR组成，从氨基末端到羧基末端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本发明的不同实施方案中，抗ANGPTL8抗体(或其抗原结合部分)的FR可以与人种系序列相同，或者可以天然或人工修饰。可以基于两个或更多个CDR的并排分析定义氨基酸共有序列。
如本文所用，术语“抗体”还包括完整抗体分子的抗原结合片段。如本文所使用，术语抗体的“抗原结合部分”、抗体的“抗原结合片段”等等包括任何天然存在的、酶促获得的、合成的或基因工程化的多肽或糖蛋白，其特异性结合抗原以形成复合物。使用任何合适的标准技术如蛋白水解消化或重组基因工程技术，包括操作和表达编码抗体可变和任选恒定结构域的DNA，抗体的抗原结合片段可以来源于例如完整抗体分子。这样的DNA是已知的和/或容易从例如商业来源、DNA文库(包括例如噬菌体抗体文库)获得，或者可以合成。可以对DNA进行测序，并化学地或通过使用分子生物学技术操作，例如，将一个或多个可变和/或恒定结构域排列成合适的构型、或引入密码子、产生半胱氨酸残基、修饰、添加或缺失氨基酸等等。
抗原结合片段的非限制性实例包括：(i)Fab片段；(ii)F(ab')2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段和(vii)最小识别单元，其由模拟抗体高变区的氨基酸残基(例如分离的互补决定区(CDR)，如CDR3肽)或限制性FR3-CDR3-FR4肽组成。其他工程化的分子，如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失的抗体、嵌合抗体、CDR接枝抗体、双抗体、三抗体、四抗体、微抗体、纳米抗体(例如单价纳米抗体、二价纳米抗体等)、小的模块化免疫药物(SMIP)和鲨鱼可变IgNAR结构域，也包括在本文所用的表述“抗原结合片段”内。
抗体的抗原结合片段通常将包含至少一个可变结构域。可变结构域可以是任何大小或氨基酸组成，并且通常将包含至少一个CDR，其与一个或多个框架序列相邻或在相同阅读框内(in frame)。在具有VH结构域和相关的VL结构域的抗原结合片段中，VH和VL结构域可以以任何合适的排列相对于彼此进行定位。例如，可变区可以是二聚体并含有VH-VH，VH-VL或VL-VL二聚体。或者，抗体的抗原结合片段可含有单体VH或VL结构域。
在某些实施方案中，抗体的抗原结合片段可以含有与至少一个恒定结构域共价连接的至少一个可变结构域。可以在本发明抗体的抗原结合片段内发现的可变结构域和恒定结构域的非限制性示例性构型包括：(i)VH-CH1；(ii)VH-CH2；(iii)VH-CH3；(iv)VH-CH1-CH2；(v)VH-CH1-CH2-CH3；(vi)VH-CH2-CH3；(vii)VH-CL；(viii)VL-CH1；(ix)VL-CH2；(x)VL-CH3；(xi)VL-CH1-CH2；(xii)VL-CH1-CH2-CH3；(xiii)VL-CH2-CH3；和(xiv)VL-CL。在包括上面列出的任何示例性构型的可变结构域和恒定结构域的任何构型中，可变结构域和恒定结构域可以彼此直接连接或可以通过完整或部分铰链或接头区连接。铰链区可由至少2个(例如5、10、15、20、40、60个或更多个)氨基酸组成，其导致在单个多肽分子中相邻可变和/或恒定结构域之间的柔性或半柔性连接。此外，本发明抗体的抗原结合片段可以包含上面列出的任何可变和恒定结构域构型的同二聚体或异二聚体(或其他多聚体)，彼此非共价(例如通过二硫键)结合和/或与一个或多个单体VH或VL结构域非共价(例如通过二硫键)结合。
与完整抗体分子一样，抗原结合片段可以是单特异性的或多特异性的(例如双特异性的)。抗体的多特异性抗原结合片段通常将包含至少两个不同的可变结构域，其中每个可变结构域能够特异性结合单独的抗原或在相同抗原上结合不同的表位。使用本领域可用的常规技术，任何多特异性抗体形式，包括本文公开的示例性双特异性抗体形式可以适用于本发明抗体的抗原结合片段的上下文中。
如本文所用，术语“人抗体”旨在包括非天然存在的人抗体。该术语包括在非人哺乳动物或非人哺乳动物的细胞中重组产生的抗体。该术语不意图包括从人受试者分离或在人受试者中产生的抗体。
在一些实施方案中，本发明的抗体可以是重组人抗体。如本文所用，术语“重组人抗体”旨在包括通过重组手段制备、表达、产生或分离的所有人抗体，如使用转染至宿主细胞的重组表达载体表达的抗体(下文进一步描述)、从重组、组合人抗体文库中分离的抗体(下文进一步描述)、从人免疫球蛋白基因转基因的动物(例如小鼠)中分离的抗体(参见例如Taylor等人(1992)Nucl.Acids Res.20:6287-6295)、或通过任何其他手段制备、表达、产生或分离的抗体，所述任何其他手段包括将人免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列。在某些实施方案中，体外诱变这样的重组人抗体(或者当使用人Ig序列转基因的动物时，体内体细胞诱变)，因此，重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列是这样的序列，其虽然与人种系VH和VL序列相关，但可能不是人抗体种系库内在体内天然存在的序列。
人抗体可以以与铰链异质性相关的两种形式存在。在一种形式中，免疫球蛋白分子包含约150-160kDa的稳定的四链构建体，其中二聚体通过链间重链二硫键连接在一起。在第二种形式中，二聚体不通过链间二硫键连接，其是由共价偶联的轻链和重链组成的约75-80kDa的分子(半抗体)。甚至在亲和纯化之后，这些形式也极难分离。
第二种形式在各种完整IgG同种型中出现的频率归因于、但不限于与抗体的铰链区同种型相关的结构差异。人IgG4铰链的铰链区中的单个氨基酸取代可以将第二种形式(Angal等人(1993)Molecular Immunology 30：105)的出现显著降低至通常使用人IgG1铰链观察到的水平。本发明包括在铰链、CH2或CH3区具有一个或多个突变的抗体，例如，期望其在生产中改善所需抗体形式的产量。
本发明的抗体可以是分离的抗体。本文使用的“分离的抗体”是指已经鉴定并从其天然环境的至少一种组分中分离和/或回收的抗体。例如，已经从生物体的至少一种组分或从天然存在抗体或天然产生抗体的组织或细胞中分离或移出的抗体，是本发明目的的“分离的抗体”。分离的抗体还包括重组细胞内的原位抗体。分离的抗体是经历至少一个纯化或分离步骤的抗体。根据某些实施方案，分离的抗体可以基本上不含其他细胞材料和/或化学物质。
本文公开的抗ANGPTL8抗体可以在重链和轻链可变结构域的框架区和/或CDR区中包含一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失。通过比较本文公开的氨基酸序列与从例如公共抗体序列数据库获得的序列，可以容易地确定这样的突变。一旦获得，可容易地测试含有一个或多个突变的抗体和抗原结合片段的一种或多种所需性质，如改善的结合特异性、增加的结合亲和力、改善的或增强的拮抗或激动生物学性质(视情况而定)、降低的免疫原性等。以这种一般方式获得的抗体和抗原结合片段包括在本发明内。
本发明还包括抗ANGPTL8抗体，其包含具有一个或多个保守取代的本文公开的任何HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列的变体。例如，本发明包括具有HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列的抗ANGPTL8抗体，相对于本文表1中列出的任何HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列，该抗ANGPTL8抗体的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列例如具有10个或更少、8个或更少，、6个或更少、4个或更少等保守氨基酸取代。
如本文所用，“阻断抗体”或“中和抗体”(或“中和ANGPTL8活性的抗体”)旨在指其与ANGPTL8的结合和/或相互作用导致抑制至少一种ANGPTL8的生物学活性。例如，本发明的抗体可以抑制ANGPTL8的脂蛋白脂肪酶抑制性活性，或者其可以通过除通过抑制ANGPTL8的LPL抑制性活性以外的机制来降低血浆甘油三酯。可以通过本领域已知的几种标准体外或体内测定法中的一种或多种测量ANGPTL8生物学活性的一种或多种指征来评估这种ANGPTL8生物学活性的抑制。另一活性是与本发明抗体相关的甘油三酯降低的活性。
如本文所用，术语“表面等离子体共振”或“SPR”是指光学现象，其允许通过检测生物传感器基质内蛋白质浓度的改变来分析实时生物分子相互作用，例如使用BIACORETM系统(Pharmacia Biosensor AB，Uppsala，Sweden and Piscataway，NJ)或MASS-1系统(SierraSensors，Hamburg，Germany and Greenville，RI)。
如本文所用的术语“KD”旨在表示特定抗体-抗原相互作用的平衡解离常数。
术语“表位”是指与被称为互补位的抗体分子可变区中的特异性抗原结合位点相互作用的抗原决定簇。单个抗原可以具有多于一个的表位。因此，不同的抗体可以结合抗原上的不同区，并且可能具有不同的生物作用。表位可以是构象的或线性的。构象表位由来自线性多肽链不同区段的空间并列的氨基酸产生。线性表位是由多肽链中相邻氨基酸残基产生的表位。在某些情况下，表位可以包括抗原上的糖、磷酰基或磺酰基的部分。
当提及核酸或其片段时，术语“实质上同一”或“基本上相同”表示当用合适的核苷酸插入或缺失与另一种核酸(或其互补链)进行最佳比对时，核苷酸序列同一性为核苷酸碱基的至少约95％、更优选至少约96％、97％、98％或99％，如通过任何熟知的序列同一性算法(如FASTA，BLAST或Gap)测量，如下讨论。与参照核酸分子具有实质上同一性的核酸分子在某些情况下可以编码与参照核酸分子编码的多肽具有相同或基本上相似的氨基酸序列的多肽。
当应用于多肽时，术语“基本上相同”或“基本上相似”是指两条肽序列，如通过使用默认空位权重的程序GAP或BESTFIT进行最佳比对时，具有至少95％的序列同一性，甚至更优选至少98％或99％的序列同一性。优选地，不相同的残基位置因保守氨基酸取代而不同。“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被具有相似化学性质(例如电荷或疏水性)的侧链(R基)的另一个氨基酸残基取代的氨基酸取代。通常，保守氨基酸取代不会实质上改变蛋白质的功能特性。在两个或更多个氨基酸序列通过保守取代而彼此不同的情况下，可以向上调整百分比序列同一性或相似性程度以校正取代的保守性质。进行这种调整的手段是本领域技术人员所熟知的。参见例如Pearson(1994)Methods Mol.Biol.24:307-331，在此引入作为参照。具有相似化学性质的侧链的氨基酸组的实例包括(1)脂肪族侧链：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；(2)脂肪族-羟基侧链：丝氨酸和苏氨酸；(3)含酰胺侧链：天冬酰胺和谷氨酰胺；(4)芳族侧链：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；(5)碱性侧链：赖氨酸、精氨酸和组氨酸；(6)酸性侧链：天冬氨酸和谷氨酸，和(7)含硫侧链是半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守氨基酸取代组是：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸和天冬酰胺-谷氨酰胺。或者，保守置换是在Gonnet等人(1992)Science 256:1443-1445公开的PAM250对数似然矩阵中具有正值的任何变化，在此引入作为参照。“适度保守”置换是在PAM250对数似然矩阵中具有非负值的任何变化。
通常使用序列分析软件测量多肽的序列相似性。蛋白质分析软件使用分配给各种取代、缺失和其他修饰(包括保守性氨基酸取代)的相似性度量匹配相似的序列。例如，GCG软件包含如GAP和BESTFIT的程序，其可以用默认参数来确定密切相关的多肽之间的序列同源性或序列同一性，如来自不同物种生物体的同源多肽或野生型蛋白质和其突变蛋白之间的序列同源性或序列同一性。参见，例如，GCG版本6.1。也可以使用具有默认或推荐参数的FASTA(GCG版本6.1中的程序)比较多肽序列。FASTA(例如FASTA2和FASTA3)提供查询和搜索序列之间最佳重叠区的比对和百分比序列同一性(Pearson(2000)，同上)。当将本发明的序列与含有大量来自不同生物体的序列的数据库进行比较时，另一个优选算法是使用默认参数的计算机程序BLAST，特别是BLASTP或TBLASTN。参见例如Altschul等人(1990)J.Mol.Biol.215:403 410和(1997)Nucleic Acids Res.25:3389 402，其中的每一个通过引用并入本文。
短语“治疗有效量”是指产生施用所期望的效果的量。确切的量将取决于治疗的目的，并且由本领域技术人员使用已知技术确定(参见例如Lloyd(1999)The Art,Scienceand Technology of Pharmaceutical Compounding)。
如本文所用，术语“治疗”或“治疗”是指用于获得有益的或期望的临床结果的方法。在本发明的一个实施方案中，有益的或期望的临床结果包括但不限于血液甘油三酯水平的改善或任何一种或多种与升高的甘油三酯水平相关或由升高的甘油三酯水平引起的病症、疾病或症状的改善，包括但不限于高甘油三酯血症等。
pH依赖性结合
本发明包括具有pH依赖性结合特征的抗ANGPTL8抗体。例如，与中性pH相比，本发明的抗ANGPTL8抗体可以在酸性pH下表现出与ANGPTL8的结合降低。或者，与中性pH相比，本发明的抗ANGPTL8抗体可以在酸性pH下表现出与ANGPTL8的结合增强。表述“酸性pH”包括小于约6.2的pH值，例如约6.0、5.95、5.9、5.85、5.8、5.75、5.7、5.65、5.6、5.55、5.5、5.45、5.4、5.35、5.3、5.25、5.2、5.15、5.1、5.05、5.0或更低。如本文所用，表述“中性pH”是指约7.0至约7.4的pH。表述“中性pH”包括约7.0、7.05、7.1、7.15、7.2、7.25、7.3、7.35和7.4的pH值。
在某些情况下，“与中性pH相比在酸性pH下与ANGPTL8的结合降低”表现在酸性pH下抗体结合ANGPTL8的KD值与在中性pH下抗体结合ANGPTL8的KD值的比率的方面(反之亦然)。例如，如果抗体或其抗原结合片段表现出约为3.0或更大的酸性/中性KD比率，则可认为抗体或其抗原结合片段表现出本发明目的的“与中性pH相比在酸性pH下与ANGPTL8的结合降低”。在某些示例性实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段的酸性/中性KD比率可以是约3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5、11.0、11.5、12.0、12.5、13.0、13.5、14.0、14.5、15.0、20.0、25.0、30.0、40.0、50.0、60.0、70.0、100.0或更大。
可以通过例如筛选与中性pH相比在酸性pH下与特定抗原的结合降低(或增强)的抗体群来获得具有pH依赖性结合特性的抗体。另外，在氨基酸水平的抗原结合结构域的修饰可能产生具有pH依赖性特征的抗体。例如，通过用组氨酸残基取代抗原结合结构域(例如在CDR内)的一个或多个氨基酸，可以获得在相对于中性pH在酸性pH下具有降低的抗原结合的抗体。
包含Fc变体的抗ANGPTL8抗体
根据本发明的某些实施方案，提供了包含Fc结构域的抗ANGPTL8抗体，所述Fc结构域包含一个或多个例如与中性pH相比在酸性pH下增强或减弱抗体与FcRn受体结合的突变。例如，本发明包括在Fc结构域的CH2或CH3区中包含突变的抗-ANGPTL8抗体，其中所述突变在酸性环境中(例如，在内涵体中，其中pH范围从约5.5至约6.0)增加Fc结构域对FcRn的亲和力。当施用给动物时，这样的突变可导致抗体的血清半衰期增加。这样的Fc修饰的非限制性实例包括例如在位置250(例如E或Q)；250和428(例如L或F)；252(例如，L/Y/F/W或T)，254(例如S或T)和256(例如S/R/Q/E/D或T)上的修饰；或在位置428和/或433(例如H/L/R/S/P/Q或K)和/或434(例如A、W、H、F或Y[N434A、N434W、N434H、N434F或N434Y])上的修饰；或在位置250和/或428上的修饰；或在位置307或308(例如308F、V308F)和434上的修饰。在一个实施方案中，修饰包括428L(例如M428L)和434S(例如N434S)修饰；428L、259I(例如V259I)和308F(例如V308F)修饰；433K(例如H433K)和434(例如434Y)修饰；252、254和256(例如，252Y、254T和256E)修饰；250Q和428L修饰(例如，T250Q和M428L)；和307和/或308修饰(例如，308F或308P)。在又一个实施方案中，修饰包含265A(例如D265A)和/或297A(例如N297A)修饰。
例如，本发明包括包含Fc结构域的抗ANGPTL8抗体，所述Fc结构域含有选自以下的一个或多个突变对或组：250Q和248L(例如T250Q和M248L)；252Y、254T和256E(例如，M252Y、S254T和T256E)；428L和434S(例如M428L和N434S)；257I和311I(例如，P257I和Q311I)；257I和434H(例如P257I和N434H)；376V和434H(例如D376V和N434H)；307A、380A和434A(例如，T307A、E380A和N434A)；和433K和434F(例如H433K和N434F)。上述Fc结构域突变的所有可能的组合以及本文公开的抗体可变结构域内的其他突变都被认为是在本发明的范围内。
本发明还包括包含嵌合重链恒定(CH)区的抗ANGPTL8抗体，其中嵌合CH区包含源自多于一种免疫球蛋白同种型的CH区的区段。例如，本发明的抗体可以包含嵌合CH区，该嵌合CH区包含源自人IgG1、人IgG2或人IgG4分子的部分或全部CH2结构域，与源自人IgG1、人IgG2或人IgG4分子的部分或全部CH3结构域组合。根据某些实施方案，本发明的抗体包含具有嵌合铰链区的嵌合CH区。例如，嵌合铰链可以包含源自人IgG1、人IgG2或人IgG4铰链区的“上铰链”氨基酸序列(来自根据EU编号的位置216-227的氨基酸残基)，与源自人IgG1、人IgG2或人IgG4铰链区的“下铰链”序列(来自根据EU编号的位置228-236的氨基酸残基)组合。根据某些实施方案，嵌合铰链区包含源自人IgG1或人IgG4上铰链的氨基酸残基和源自人IgG2下铰链的氨基酸残基。包含如本文所述的嵌合CH区的抗体在某些实施方案中显示出修饰的Fc效应功能，而不会不利地影响抗体的治疗或药代动力学性质。(参见例如2013年2月1日提交的美国临时申请号61/759,578，其公开内容通过引用整体并入本文)。
抗体的生物学特性
本发明包括以高亲和力结合ANGPTL8的抗体及其抗原结合片段。例如，本发明包括以小于约150nM的KD结合人或猴ANGPTL8的抗ANGPTL8抗体，如在25℃或37℃下通过表面等离子体共振(SPR)测量的，例如在如本文实施例3和4中定义的测定法模式或基本上相似的测定法中使用与小鼠IgG2a Fc C-末端融合的重组ANGPTL8蛋白。根据某些实施方案，提供了抗-ANGPTL8抗体，其在25℃或37℃以小于约90nM、或小于约50nM、小于约3nM、小于约2nM、小于约1nM、小于约900pM、小于约500pM、小于约300pM、小于约150pM或小于约90pM结合人或猴ANGPTL8，如通过表面等离子体共振测量的，例如使用如本文实施例3和4中所定义的测定法模式，或基本相似的测定法。
本发明还包括以大于约100分钟的解离半衰期(t1/2)结合源自人ANGPTL8的N-末端区的SEQ ID NO：337的肽的抗体及其抗原结合片段，如在25℃或37℃下通过表面等离子体共振测量的，例如使用如本文实施例3中定义的测定法模式或基本相似的测定法。根据某些实施方案，提供了抗-ANGPTL8抗体，其在25℃下以大于或等于约110分钟、大于约120分钟、大于约130分钟、大于约200分钟、大于约300分钟、大于约400分钟、大于约500分钟或更长的t 1/2结合来自人ANGPTL8的N-末端区的肽，如通过表面等离子体共振测量的，例如使用如本文实施例3中定义的测定法模式，或基本相似的测定法。
本发明还包括当以约0.1mg/kg、或约1mg/kg、或约10mg/kg、或约25mg/kg、或约50mg/kg、或约100mg/kg的剂量皮下施用时，在哺乳动物中降低甘油三酯约20％、或约30％、或约40％、或约50％、或约60％或更多的抗体及其抗原结合片段。本发明的抗体对降低血浆甘油三酯的作用可持续至施用后的至少7天至约3周、或施用后的4周或更长时间。
本发明的抗体包含重链可变区(HCVR)和轻链可变区(LCVR)，所述重链可变区(HCVR)具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242、258、266、274、282、290、298、306、314和330；和所述轻链可变区(LCVR)具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250和322；或可以与参照抗体交叉竞争，其中所述参照抗体包含选自表1的任何HCVR和LCVR氨基酸序列的重链可变区(HCVR)和轻链可变区(LCVR)氨基酸序列。
本发明的抗体可以包含选自SEQ ID NO：2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、258/250、266/250、274/250、282/250、290/250、306/250、314/322和330/322的HCVR/LCVR氨基酸序列对。
本发明的抗体可以包含：
(a)HCDR1结构域，其具有选自SEQ ID NO:4、20、36、52、68、84、100、116、132、148、164、180、196、212、228、244、260、268、276、284、292、300、308、316和332的氨基酸序列；
(b)HCDR2结构域，其具有选自SEQ ID NO:6、22、38、54、70、86、102、118、134、150、166、182、198、214、230、246、262、270、278、286、294、302、310、318和334的氨基酸序列；
(c)HCDR3结构域，其具有选自SEQ ID NO:8、24、40、56、72、88、104、120、136、152、168、184、200、216、232、248、264、272、280、288、296、304、312、320和336的氨基酸序列；
(d)LCDR1结构域，其具有选自SEQ ID NO:12、28、44、60、76、92、108、124、140、156、172、188、204、220、236、252和324的氨基酸序列；
(e)LCDR2结构域，其具有选自SEQ ID NO:14、30、46、62、78、94、110、126、142、158、174、190、206、222、238、254和326的氨基酸序列；和
(f)LCDR3结构域，其具有选自SEQ ID NO:16、32、48、64、80、96、112、128、144、160、176、192、208、224、240、256和328的氨基酸序列。
本发明的抗体可具有一种或多种前述生物学特征或其任何组合。本发明的抗体的上述生物学特征列表并不是穷举性的。从本发明的综述(包括本文的实施例)得出本发明抗体的其他生物学特征对于本领域普通技术人员而言是显而易见的。
表位作图及相关技术
本发明的抗体所结合的表位可以由3个或更多个(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个)ANGPTL8蛋白的氨基酸的单一连续序列组成。或者，表位可以由ANGPTL8的多个非连续氨基酸(或氨基酸序列)组成。
可以使用本领域普通技术人员已知的各种技术来确定抗体是否与多肽或蛋白质内的“一个或多个氨基酸相互作用”。示例性技术包括例如常规交叉阻断测定法，如描述的Antibodies，Harlow和Lane(Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harb，NY)、丙氨酸扫描突变分析、肽印迹分析(Reineke，2004，Methods Mol Biol 248：443-463)和肽切割分析。另外，可以使用如抗原的表位切除、表位提取和化学修饰的方法(Tomer，2000，ProteinScience 9：487-496)。可用于鉴定与抗体相互作用的多肽内的氨基酸的另一种方法是通过质谱法检测氢/氘交换。一般而言，氢/氘交换方法包括对感兴趣的蛋白质进行氘标记，然后使抗体与氘标记的蛋白质结合。接下来，将蛋白质/抗体复合物转移至水中，以允许在除抗体保护的残基(其保留氘标记)之外的所有残基上发生氢-氘交换。在抗体解离后，对靶蛋白质进行蛋白酶切割和质谱分析，从而揭示对应于与抗体相互作用的特定氨基酸的氘标记残基。参见例如Ehring(1999)Analytical Biochemistry 267(2):252-259；Engen和Smith(2001)Anal.Chem.73:256A-265A。
本发明进一步包括与本文所述的任何特定示例性抗体(例如包含本文表1中所列的任何氨基酸序列的抗体)结合相同表位的抗ANGPTL8抗体。同样，本发明还包括与本文所述的任何特定示例性抗体(例如包含本文表1中所列的任何氨基酸序列的抗体)竞争结合ANGPTL8的抗ANGPTL8抗体。
通过使用本领域已知的和本文示例的常规方法，可以容易地确定抗体是否与参照抗ANGPTL8抗体结合相同的表位或竞争结合。例如，为了确定测试抗体是否与本发明的参照抗ANGPTL8抗体结合相同的表位，允许参照抗体结合ANGPTL8蛋白。接下来，评估测试抗体结合ANGPTL8分子的能力。如果测试抗体能够结合与参照抗ANGPTL8抗体饱和结合后的ANGPTL8，则可以得出结论，测试抗体与参照抗ANGPTL8抗体结合不同的表位。另一方面，如果测试抗体不能结合与参照抗ANGPTL8抗体饱和结合后的ANGPTL8，则测试抗体可能结合与本发明的参照抗ANGPTL8抗体结合的表位相同的表位。然后可进行另外的常规实验(例如肽突变和结合分析)以确认观察到的测试抗体结合的缺失是否实际上是由于与参照抗体结合相同的表位引起、或者是否是空间阻断(或另一种现象)造成观察到的结合缺失。可以使用ELISA、RIA、Biacore、流式细胞术或本领域可用的任何其他定量或定性抗体结合测定法来进行这种实验。根据本发明的某些实施方案，如在竞争性结合测定法中测得的，如果例如1、5、10、20或100倍过量的一种抗体以至少50％、但优选75％、90％或甚至99％抑制另一种抗体的结合，则两种抗体结合相同(或重叠)的表位(参见例如Junghans等人，CancerRes.1990：50：1495-1502)。或者，如果在抗原中降低或消除一种抗体结合的基本上所有的氨基酸突变降低或消除另一种抗体的结合，则认为两种抗体结合相同的表位。如果只有降低或消除一种抗体结合的氨基酸突变的亚组降低或消除另一种抗体的结合，则认为两种抗体具有“重叠的表位”。
为了确定抗体是否与参照抗ANGPTL8抗体竞争结合(或交叉竞争结合)，在两个方向上进行上述结合方法：在第一方向上，允许参照抗体在饱和条件下结合ANGPTL8蛋白，然后评估测试抗体与ANGPTL8分子的结合。在第二方向上，允许测试抗体在饱和条件下结合ANGPTL8分子，然后评估参照抗体与ANGPTL8分子的结合。如果在两个方向上只有第一(饱和)抗体能够结合ANGPTL8分子，则推论测试抗体和参照抗体竞争结合ANGPTL8。如本领域普通技术人员将理解的，与参照抗体竞争结合的抗体可能不一定与参照抗体结合相同的表位，但可通过结合重叠或相邻的表位而空间阻断参照抗体的结合。
人抗体的制备
本发明的抗ANGPTL8抗体可以是完整人(非天然存在的)抗体。产生单克隆抗体(包括完整人单克隆抗体)的方法是本领域已知的。可以在本发明的上下文中使用任何这样的已知方法来制备特异性结合人ANGPTL8的人抗体。
使用技术(参见例如US 6,596,541，RegeneronPharmaceuticals，)或任何其他已知的用于产生单克隆抗体的方法，最初分离具有人可变区和小鼠恒定区的针对变应原的高亲和力嵌合抗体。技术包括产生转基因小鼠，所述转基因小鼠具有包含与内源性小鼠恒定区基因座可操作连接的人重链和轻链可变区的基因组，使得所述小鼠产生响应于抗原刺激的包含人可变区和小鼠恒定区的抗体。分离编码抗体重链和轻链可变区的DNA并可操作地连接到编码人重链和轻链恒定区的DNA上。然后在能够表达完整人抗体的细胞中表达DNA。
通常，用感兴趣的抗原攻击小鼠，从表达抗体的小鼠中回收淋巴细胞(如B细胞)。可以将淋巴细胞与骨髓瘤细胞系融合以制备永生的杂交瘤细胞系，筛选和选择这些杂交瘤细胞系以鉴定产生对感兴趣的抗原特异的抗体的杂交瘤细胞系。分离编码重链和轻链可变区的DNA并连接到期望的重链和轻链同种型恒定区。这样的抗体蛋白可以在细胞如CHO细胞中产生。或者，可以直接从抗原特异性淋巴细胞中分离编码抗原特异性嵌合抗体或轻链和重链的可变结构域的DNA。
如下面的实验部分所述，对分离的具有人可变区和小鼠恒定区的高亲和力嵌合抗体进行表征和选择期望的特征，包括亲和力、选择性、表位等。然后用期望的人恒定区置换小鼠恒定区以产生本发明的完整人抗体，例如野生型或修饰的IgG1或IgG4。虽然所选恒定区可根据具体用途而变化，但高亲和力抗原结合和靶特异性特征存在于可变区中。
通常，本发明的抗体具有非常高的亲和力，当通过与固定在固相上或在溶液相中的抗原结合测量时，其通常具有约10-12至约10-9M的KD。
生物等效
本发明的抗ANGPTL8抗体和抗体片段包括具有与所述抗体不同的氨基酸序列但保留结合人ANGPTL8能力的蛋白质。当与亲本序列比较时，这种变体抗体和抗体片段包含一个或多个氨基酸的添加、缺失或取代，但表现出与所述抗体基本上相同的生物学活性。同样地，当与公开的序列比较时，本发明的编码抗ANGPTL8抗体的DNA序列包括包含一个或多个核苷酸添加、缺失或取代的序列，但是其编码与本发明的抗ANGPTL8抗体或抗体片段基本上生物等效的抗ANGPTL8抗体或抗体片段。上面讨论了这种变体氨基酸和DNA序列的例子。
例如，如果它们是药物等同物或药物替代物，在单次剂量或多次剂量相似的实验条件下、以相同的摩尔剂量给药时其吸收速率和程度没有显示出显著差异，则两种抗原结合蛋白或抗体被认为是生物等效的。如果某些抗体的吸收程度相同但其吸收速率不同，并且因为这种吸收速率的差异是有意的并反映在标签中，例如对于慢性使用获得的有效体内药物浓度而言不是必需的，并且对于所研究的特定药物产品认为是医学上非显著的，所以其仍然被认为是生物等效的，则这些抗体被认为是等同物或药物替代物。
在一个实施方案中，如果在其安全性、纯度和效力方面没有临床上有意义的差异，则两种抗原结合蛋白是生物等效的。
在一个实施方案中，如果患者可以在参照产品和生物产品之间转换一次或多次，而没有预期的副作用的风险增加，包括与没有这种转换的持续治疗相比，临床上显著的免疫原性变化或减弱的效力，则两种抗原结合蛋白是生物等效的。
在一个实施方案中，如果两种抗原结合蛋白针对病症或使用的病症都通过共同机制或作用机制起作用，只要这些机制是已知的，则这两种抗原结合蛋白是生物等效的。
生物等效性可以通过体内和体外方法来证明。生物等效性测量包括例如(a)在人或其他哺乳动物中的体内测试，其中抗体或其代谢物在血液、血浆、血清或其他生物流体中的浓度测量为时间的函数；(b)已经与人体内生物利用度数据相关联并且合理预测人体内生物利用度数据的体外测试；(c)在人或其他哺乳动物中的体内测试，其中抗体(或其靶标)的适当的急性药理学效应测量为时间的函数；和(d)在建立抗体的安全性、功效或生物利用度或生物等效性的良好对照的临床试验中。
可以通过例如制备各种残基或序列的取代或缺失生物学活性不需要的末端或内部残基或序列来构建本发明的抗ANGPTL8抗体的生物等效变体。例如，可以缺失或用其他氨基酸取代对于生物学活性不是必不可少的半胱氨酸残基，以防止在复性时形成不必要或不正确的分子内二硫键。在其他上下文中，生物等效抗体可以包括抗ANGPTL8抗体变体，其包含修饰抗体的糖基化特征的氨基酸改变，例如消除或去除糖基化的突变。
多特异性抗体
本发明的抗体可以是单特异性或多特异性的(例如双特异性的)。多特异性抗体可以对一个靶多肽的不同表位特异，或者可以含有对多于一个的靶多肽特异的抗原结合结构域。参见例如Tutt等人,1991,J.Immunol.147:60-69；Kufer等人,2004,TrendsBiotechnol.22:238-244。本发明的抗ANGPTL8抗体可以与另一功能分子(例如另一肽或蛋白质)连接或共表达。例如，抗体或其片段可以与一个或多个其他分子实体如另一抗体或抗体片段功能性连接(例如，通过化学偶联、基因融合、非共价结合或其他方式)以产生具有第二结合特异性的双特异性或多特异性抗体。
本发明包括双特异性抗体，其中免疫球蛋白的一个臂与人ANGPTL8结合，并且免疫球蛋白的另一个臂对第二抗原是特异的。ANGPTL8结合臂可以包含本文表1中列出的任何HCVR/LCVR或CDR氨基酸序列。
可用于本发明上下文的示例性双特异性抗体形式包括使用第一免疫球蛋白(Ig)CH3结构域和第二Ig CH3结构域，其中第一和第二Ig CH3结构域彼此至少一个氨基酸不同，并且其中与缺乏氨基酸差异的双特异性抗体相比，至少一个氨基酸差异降低双特异性抗体与蛋白A的结合。在一个实施方案中，第一Ig CH3结构域结合蛋白A，第二Ig CH3结构域含有降低或消除蛋白A结合的突变，如H95R修饰(通过IMGT外显子编号；通过EU编号的H435R)。第二CH3可以进一步包含Y96F修饰(通过IMGT；通过EU的436F)。可以在第二CH3中发现的进一步的修饰包括：在IgG1抗体的情况下，D16E、L18M、N44S、K52N、V57M和V82I(通过IMGT；通过EUD356E、L358M、N384S、K392N、V397M和V422I)；在IgG2抗体的情况下，N44S、K52N和V82I(IMGT；通过EU的N384S、K392N和V422I)；和在IgG4抗体情况下，Q15R、N44S、K52N、V57M、R69K、E79Q和V82I(通过IMGT；通过EU的Q355R、N384S、K392N、V397M、R409K、E419Q和V422I)。上述双特异性抗体形式的变异被考虑在本发明的范围内。
可用于本发明上下文中的其他示例性双特异性形式包括但不限于例如基于scFv或双抗体的双特异性形式、IgG-scFv融合体、双可变结构域(DVD)-Ig、四价体瘤(Quadroma)、旋钮入洞(knobs-into-holes)、普通轻链(例如带有旋钮入洞的普通轻链等)、CrossMab、CrossFab、(SEED)体、亮氨酸拉链、Duobody、IgG1/IgG2、双作用Fab(DAF)-IgG和Mab2双特异性形式(参见例如Klein等人2012,mAbs 4:6,1-11，以及其中引用的参照文献，以回顾上述形式)。还可以使用肽/核酸缀合来构建双特异性抗体，例如其中使用具有正交化学反应性的非天然氨基酸产生位点特异性抗体-寡核苷酸缀合物，然后将所述位点特异性抗体-寡核苷酸缀合物自组装成具有限定的组成、化合价和几何形状的多聚体复合物。(参见例如Kazane等人.,J.Am.Chem.Soc.[Epub:Dec.4,2012])。
治疗性制剂和施用
本发明提供了包含本发明的抗ANGPTL8抗体或其抗原结合片段的药物组合物。本发明的药物组合物与合适的载体、赋形剂和提供改善的转运、递送、耐受性等的其他试剂一起配制。在所有药物化学家已知的处方集中可以找到许多合适的制剂：Remington'sPharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，PA。这些制剂包括例如粉末、糊剂、软膏、凝胶剂、蜡、油、脂质、含脂质(阳离子或阴离子)囊泡(如LIPOFECTINTM，LifeTechnologies，Carlsbad，CA)、DNA缀合物、无水吸收膏、水包油和油包水乳液、聚乙二醇乳液(各种分子量的聚乙二醇)、半固体凝胶和含有聚乙二醇的半固体混合物。也参见Powell等人"Compendium of excipients for parenteral formulations"PDA(1998)J PharmSci Technol 52:238-311。
施用给患者的抗体剂量可以根据患者的年龄和尺码、靶疾病、病症、施用途径等变化。典型地通常根据体重或体表面积来计算优选的剂量。在成人患者中，可能有利地是通常以约0.01至约20mg/kg体重、更优选约0.02至约7、约0.03至约5或约0.05至约3mg/kg体重的单次剂量静脉内施用本发明的抗体。根据病症的严重程度，可以调整治疗的频率和持续时间。可凭经验确定施用抗ANGPTL8抗体的有效剂量和时间表；例如，可以通过定期评估监测患者的进展，并相应地调整剂量。此外，可以使用本领域熟知的方法进行物种间剂量的缩放(例如，Mordenti等人,1991,Pharmaceut.Res.8:1351)。
各种递送系统是已知的并且可以用于施用本发明的药物组合物，例如包封在脂质体、微粒、微胶囊中、能够表达突变病毒的重组细胞、受体介导的胞吞作用(参见例如Wu等人,1987,J.Biol.Chem.262:4429-4432)。引入的方法包括但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外和口服途径。可以通过任何方便的途径施用组合物，例如通过输注或推注、通过上皮或粘膜皮肤内层(mucocutaneous linings)(例如口腔粘膜、直肠和肠粘膜等)的吸收，并且可以与其他生物学活性剂一起施用。施用可以是全身或局部的。
可以用标准的针头和注射器皮下或静脉内递送本发明的药物组合物。另外，关于皮下递送、笔递送装置容易地应用于递送本发明的药物组合物。这种笔递送装置可以是可重复使用的或一次性的。可重复使用的笔递送装置通常使用含有药物组合物的可更换的药筒。一旦药筒内的所有药物组合物被施用并且药筒是空的，则可以容易地丢弃空药筒并用含有药物组合物的新药筒替换。然后可以重新使用笔递送装置。在一次性笔递送装置中，没有可替换的药筒。相反，一次性笔递送装置预装有容纳在装置内储存器中的药物组合物。一旦储存器中的药物组合物清空，就丢弃整个装置。
许多可重复使用的笔和自动注射器递送装置应用于皮下递送本发明的药物组合物中。实例包括但不限于AUTOPENTM(Owen Mumford,Inc.,Woodstock,UK)、DISETRONICTM笔(Disetronic Medical Systems,Bergdorf,Switzerland)、HUMALOG MIX 75/25TM笔、HUMALOGTM笔、HUMALIN 70/30TM笔(Eli Lilly and Co.,Indianapolis,IN)、NOVOPENTM I,II和III(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark)、NOVOPEN JUNIORTM(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark)、BDTM笔(Becton Dickinson,Franklin Lakes,NJ)、OPTIPENTM、OPTIPEN PROTM、OPTIPEN STARLETTM和OPTICLIKTM(Sanofi-Aventis,Frankfurt,Germany)，仅举几个例子。应用于皮下递送本发明药物组合物的一次性笔递送装置的例子包括但不限于SOLOSTARTM笔(Sanofi-Aventis)、FLEXPENTM(Novo Nordisk)和KWIKPENTM(Eli Lilly)、SURECLICKTM自动注射器(Amgen,Thousand Oaks,CA)、PENLETTM(Haselmeier,Stuttgart,Germany)、EPIPEN(Dey,L.P.)和HUMIRATM笔(Abbott Labs,Abbott Park IL)，仅举几个例子。
在某些情况下，药物组合物可以在控释系统中递送。在一个实施方案中，可以使用泵(参见Langer，同上；Sefton，1987，CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14：201)。在另一个实施方案中，可以使用聚合物材料；参见Medical Applications of Controlled Release,Langerand Wise(eds.),1974,CRC Pres.,Boca Raton,Florida。在又一个实施方案中，可以将控释系统放置在组合物的靶标附近，因此仅需要全身剂量的一部分(参见例如Goodson,1984,in Medical Applications of Controlled Release,supra,vol.2,第115-138页)。其他控释系统在Langer，1990，Science 249：1527-1533的综述中进行了讨论。
可注射制剂可以包括用于静脉内、皮下、皮内和肌内注射、滴注等的剂型。这些可注射制剂可以通过公知的方法制备。例如，可以通过将上述抗体或其盐溶解、悬浮或乳化在常规用于注射的无菌水性介质或油性介质中来制备可注射制剂。作为注射用水性介质，例如有生理盐水、含有葡萄糖的等渗溶液和其他助剂等，其可以与适当的增溶剂如醇(例如乙醇)、多元醇(例如丙二醇、聚乙二醇)、非离子表面活性剂[例如聚山梨醇酯80、HCO-50(氢化蓖麻油的聚氧乙烯(50mol)加合物)]等组合使用。作为油性介质，例如使用芝麻油、大豆油等，其可以与增溶剂如苯甲酸苄酯、苯甲醇等组合使用。由此制备的注射剂优选填充在合适的安瓿中。
有利地，将上述用于口服或肠胃外使用的药物组合物制备成适于装配活性成分剂量的单位剂量的剂型。这种单位剂量的剂型包括例如片剂、丸剂、胶囊剂、注射剂(安瓿)、栓剂等。在单位剂量中上述所含抗体的量通常为约5至约500mg/剂型；特别是在注射剂的形式中，优选含有上述抗体约5至约100mg，对于其他剂型上述抗体约10至约250mg。
免疫缀合物
本发明包括缀合于治疗部分的人抗ANGPTL8单克隆抗体(“免疫缀合物”)，所述治疗部分如能够降低血液甘油三酯或脂质水平的试剂。可以与抗ANGPTL8抗体缀合的治疗部分的类型将考虑待治疗病症和期望实现的治疗效果。例如，为了治疗高甘油三酯血症或期望降低血液甘油三酯和/或保持正常血液甘油三酯水平的任何其他病症，可以将试剂缀合至ANGPTL8抗体。或者，如果期望的治疗效果是治疗与高甘油三酯血症相关的后遗症或症状，或由高的或不受控制的血液甘油三酯水平引起的任何其他病症，可以有利的是缀合适合于治疗病症的后遗症或症状的试剂。用于形成免疫缀合物的合适试剂的例子是本领域已知的，例如参见WO 05/103081。
抗体的治疗用途
本发明的抗体例如可用于降低患有高甘油三酯血症的患者中的血液甘油三酯水平，以及还可用于治疗其中抑制ANGPTL8活性是有益的多种病症和疾患。因此，抗体可以用于例如预防、治疗或减轻内分泌系统、中枢神经系统、外周神经系统、心血管系统、肺系统和胃肠道系统的疾病或病症或相关症状或后遗症，同时降低和/或消除与当前治疗相关的一种或多种不希望的副作用。
例如，本发明的抗体可用于治疗疾病或病患，所述疾病或病患包括但不限于参与脂质代谢的疾病或疾患，如高脂血症、高脂蛋白血症和血脂异常，包括致动脉粥样硬化性血脂异常、糖尿病性血脂异常、高甘油三酯血症，包括TG>1000mg/dL的严重高甘油三酯血症和相关的急性胰腺炎、高胆固醇血症、乳糜微粒血症、混合性血脂异常(肥胖、代谢综合征、糖尿病等)、脂肪代谢障碍、脂肪萎缩等，其例如由降低的LPL活性和/或LPL缺乏、改变的ApoC2、ApoE缺乏、增加的ApoB、极低密度脂蛋白(VLDL)增加的产量和/或减少的消除、某些药物治疗(例如糖皮质激素治疗诱导的血脂异常)、任何遗传素质、饮食、生活方式等等引起。
本发明的方法还可预防或治疗与以下相关或由以下导致的疾病或疾患：甘油三酯血症、高甘油三酯血症、高脂血症、高脂蛋白血症和/或血脂异常，包括但不限于心血管疾病或疾患，如动脉粥样硬化、动脉瘤、高血压、心绞痛、中风、脑血管疾病、充血性心力衰竭、冠状动脉疾病、心肌梗塞、外周血管疾病等；急性胰腺炎；非酒精性脂肪性肝炎(NASH)；血糖紊乱，如糖尿病(例如II型糖尿病)；肥胖等。
在一个实施方案中，本发明的至少一种抗体或其抗原结合片段可以用于治疗代谢综合征相关的血脂异常、肥胖或用于预防体重增加或用于维持正常体重。
在一个实施方案中，本发明提供了用于降低血液甘油三酯水平、或用于治疗与高血液甘油三酯水平相关或特征部分在于高血液甘油三酯水平的病症或疾病、或用于治疗与所述病症或疾病相关的至少一种症状或并发症的方法，所述方法包括向有其需要的患者施用包含表1的对人ANGPTL8特异的一种或多种抗体的药物组合物，从而降低血液甘油三酯水平或者调节所述病症或疾病、或者在严重程度上减轻或降低与病症或疾病相关的至少一种症状或并发症。
在一个实施方案中，本发明的至少一种抗体或其抗原结合片段可以单独使用或与第二或第三治疗剂组合使用来治疗高甘油三酯血症、或治疗与高甘油三酯血症相关的至少一种症状、或可用于治疗处于患有高甘油三酯血症风险的患者，例如，具有发生高甘油三酯血症遗传素质的患者，例如家族性高甘油三酯血症或家族性异常β脂蛋白血症。
其他病症可能使患者倾向于高水平的甘油三酯。例如，某些药物如β-阻断剂、避孕药、利尿剂、类固醇、或使用他莫昔芬可导致升高的甘油三酯水平，因此，可增加患者发生与高水平甘油三酯相关的病症或并发症的可能性，如动脉粥样硬化、中风、心脏病发作和其他心脏病症。
另外，某些其他病症可导致高水平的甘油三酯，包括肥胖、控制不良的糖尿病、甲状腺功能减退症、肾病或饮酒。
在一个实施方案中，抗体可用于预防特征部分在于升高的血液甘油三酯水平的疾病或疾患的发作、或预防发生此类疾病或疾患的可能性、或减轻该疾病或疾患的严重性、或与疾病或疾患相关的至少一种症状。可以设想，本发明的抗体可以单独使用、或者作为与已知为标准护理的其他试剂或方法的辅助治疗、该标准护理的其他试剂或方法用于治疗患有特征部分在于升高的血液甘油三酯水平的疾病或病症的患者，如，但不限于高甘油三酯血症。这种标准治疗可以包括流体施用或施用任何其他可用于降低血液甘油三酯或脂质或用于减轻体重的药物。
在一个实施方案中，使用本文所述的抗体可以是获得正常甘油三酯水平的有效手段，从而减轻或预防与特征在于高甘油三酯水平的疾病相关的一种或多种症状或长期并发症。
设想本发明的抗体可以用于急性环境中(用于短期治疗)，或者用于长期(慢性)使用。
组合治疗
组合治疗可以包括本发明的抗ANGPTL8抗体和任何其他可以有利地与本发明的抗体或与本发明抗体的生物学活性片段组合的治疗剂。
例如，当考虑本发明的抗体用于治疗特征部分在于升高的甘油三酯水平的疾病或病症(如高甘油三酯血症)时，可以使用第二治疗剂以帮助进一步降低甘油三酯水平、或降低患有特征在于高的血液甘油三酯水平的疾病或病症的患者中的至少一种症状。这样的第二试剂可以选自例如另一种ANGPTL8拮抗剂(例如另一种不同的抗ANGPTL8抗体或ANGPTL8的小分子抑制剂)，或者可以包括用于治疗甘油三酯血症或与升高的血液甘油三酯水平相关或由升高的血液甘油三酯水平引起的其他疾病或病症的其他治疗部分，或用于治疗任何与升高的和/或不受控制的血液甘油三酯水平相关的任何长期并发症的试剂。
在一个相关的实施方案中，本发明的特征在于一种组合物，其是本发明的抗体或其抗原结合片段与第二治疗剂的组合，所述第二治疗剂如(1)3-羟基-3-甲基戊二酰基-辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂，如西伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、罗苏伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀等；(2)胆固醇吸收和/或胆汁酸再吸收的抑制剂；(3)烟酸，其增加脂蛋白分解代谢；(4)贝特类(fibrates)或两亲性羧酸，其降低低密度脂蛋白(LDL)水平、改善高密度脂蛋白(HDL)和TG水平，和降低非致命的心脏病发作次数；和(5)在胆固醇消除中起作用的LXR转录因子的激活剂，如22-羟基胆固醇，或固定组合如依折替米贝加辛伐他汀；他汀与胆汁树脂(bile resin)(例如考来烯胺(cholestyramine)、考来替泊、考来维仑)，烟酸加他汀的固定组合(例如，烟酸与洛伐他汀)；或与其他降脂剂如ω-3-脂肪酸乙酯(例如omacor)一起。
此外，第二治疗剂可以是胰高血糖素的一种或多种其他抑制剂/拮抗剂或胰高血糖素受体的抑制剂/拮抗剂，以及其他分子的抑制剂如ANGPTL8的其他抑制剂，以及其他分子的抑制剂，所述其他分子如ANGPTL3、ANGPTL4、ANGPTL5、ANGPTL6、载脂蛋白C-III(也称为APOC3；参见例如US8530439、US7750141、US7598227中描述的APOC3抑制剂，和volanesorsen，也称为ISIS-APOCIIIRx)和原蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9型(PCSK9)，其参与脂质代谢，特别是胆固醇和/或甘油三酯内稳态。这些分子的抑制剂包括特异性结合这些分子并阻断其活性的小分子、反义分子和抗体。
在一个实施方案中，如果本发明的抗ANGPTL3抗体用于治疗如糖尿病(例如，2型糖尿病)的疾病，那么这些抗体可以与一种或多种目前可用的以下糖尿病治疗组合。这些治疗包括：胰岛素、胰岛素类似物(见下文)、双胍(二甲双胍)、磺酰脲(例如格列本脲，格列吡嗪)、PPARγ激动剂(例如吡格列酮，罗格列酮)、α葡糖苷酶抑制剂(例如阿卡波糖，伏格列波糖)、胰高血糖素样肽1(GLP-1)受体激动剂(例如(艾塞那肽),TRULICITYTM(度拉糖肽),(利拉糖肽),(利司那肽),TanzeumTM(阿必鲁肽)，或任何前述物质的类似物)、二肽基肽酶IV(DPP-4)抑制剂(例如沙格列汀西他列汀和维格列汀钠-葡萄糖共转运体2(SGLT2)抑制剂(例如,INVOKANATM(卡格列净),(达格列净),依帕列净,伊格列净,托格列净)、((普兰林肽)，一种胰高血糖素受体拮抗剂(如，例如在US8545847中所述)，和胰高血糖素拮抗剂。
在某些相关的实施方案中，组合物可以包括选自以下的第二试剂：非磺酰脲促分泌素、胰岛素类似物，包括速效(例如Lispro，Aspart，Glulisine)和长效(例如Detemir胰岛素、Degludec胰岛素或Glargine胰岛素、毒蜥外泌肽-4多肽、β3肾上腺素受体激动剂、胆固醇摄取和/或胆汁酸再吸收抑制剂、LDL-胆固醇拮抗剂、胆固醇酯转移蛋白拮抗剂(例如托塞曲匹、安塞曲匹、达塞曲匹或依曲普汀)、内皮素受体拮抗剂、生长激素拮抗剂、胰岛素增敏剂、糊精模拟素或激动剂、大麻素受体拮抗剂、胰高血糖素样肽-1受体激动剂、黑皮质素、黑色素浓集激素受体激动剂、SNRI、成纤维细胞生长因子21(FGF21)模拟物(参见，例如US20110002845和US20080261236)、成纤维细胞生长因子受体1c(FGFR1c)激动剂(参见例如US20110150901)、晚期糖基化终产物形成的抑制剂，如但不限于氨基胍和蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂。
在相关的实施方案中，第二治疗剂可以是一种或多种其他治疗剂，如镇痛剂、包括非甾体类抗炎药(NSAIDS)的抗炎剂，如Cox-2抑制剂等，如果需要的话，以减轻和/或降低伴随潜在病症的症状。
其他治疗活性组分可以在施用本发明的抗ANGPTL8抗体之前、同时或之后施用。为了本公开的目的，这样的施用方案被认为是与第二治疗活性组分“组合”施用抗ANGPTL8抗体。
施用方案
根据本发明的某些实施方案，可在限定的时间过程期间向受试者施用多剂量的抗ANGPTL8抗体(或包含抗ANGPTL8抗体和本文提及的任何其他治疗活性剂的组合的药物组合物)。根据本发明该方面的方法包括向受试者顺次施用多剂量的本发明抗ANGPTL8抗体。如本文所用，“顺次施用”是指在不同的时间点(例如被预定的间隔(例如，数小时、数天、数周或数月)分开的不同天)施用每个剂量的抗ANGPTL8抗体。本发明包括这样的方法，其包括向患者顺次施用单次初始剂量的抗ANGPTL8抗体，随后施用一次或多次二级剂量的抗ANGPTL8抗体，并任选地随后施用一次或多次三级剂量的抗ANGPTL8抗体。
术语“初始剂量”，“二级剂量”和“三级剂量”是指本发明抗ANGPTL8抗体的施用的时间顺序。因此，“初始剂量”是在治疗方案开始时施用的剂量(也称为“基线剂量”)；“二级剂量”是在初始剂量之后施用的剂量；“三级剂量”是在二级剂量之后施用的剂量。初始、二级和三级剂量都可以含有相同量的抗ANGPTL8抗体，但通常在施用频率方面可能彼此不同。然而，在某些实施方案中，在治疗过程中初始、二级和/或三级剂量中所含的抗ANGPTL8抗体的量彼此不同(例如适当地调高或调低)。在某些实施方案中，在治疗方案开始时将两个或更多个(例如2、3、4或5)剂量作为“负载剂量”施用，随后以较低频率基础施用后续剂量(例如“维持剂量”)。
在本发明的某些示例性实施方案中，在紧接之前的剂量1至26(例如，1,11/2,2,21/2,3,31/2,4,41/2,5,51/2,6,61/2,7,71/2,8,81/2,9,91/2,10,101/2,11,111/2,12,121/2,13,131/2,14,141/2,15,151/2,16,161/2,17,171/2,18,181/2,19,191/2,20,201/2,21,211/2,22,221/2,23,231/2,24,241/2,25,251/2,26,261/2或更多)周之后施用每个二级和/或三级剂量。如本文所用，短语“紧接之前的剂量”是指在多次施用的顺序中，在施用顺序中没有间隔剂量的紧邻下一个剂量之前向患者施用的抗ANGPTL8抗体的剂量。
根据本发明该方面的方法可以包括向患者施用任何次数的二级和/或三级剂量的抗ANGPTL8抗体。例如，在某些实施方案中，仅向患者施用单次二级剂量。在其他实施方案中，向患者施用两次或更多次(例如2、3、4、5、6、7、8次或更多次)二级剂量。同样地，在某些实施方案中，仅向患者施用单次三级剂量。在其他实施方案中，向患者施用两次或更多次(例如2、3、4、5、6、7、8或更多次)三级剂量。可以在特定受试者的一生中无限期地进行施用方案，或者直到这种治疗不再是治疗上需要的或有利的。
在包括多次二级剂量的实施方案中，每个二级剂量可以与其他二级剂量以相同的频率施用。例如，可以在紧接之前的剂量后1至2周或1至2个月向患者施用每个二级剂量。相似地，在包括多次三级剂量的实施方案中，每个三级剂量可以与其他三级剂量以相同的频率施用。例如，可以在紧接之前的剂量后2至12周向患者施用每个三级剂量。在本发明的某些实施方案中，向患者施用二级和/或三级剂量的频率可以在治疗方案的过程中变化。也可以在治疗过程中由医生根据临床检查后个体患者的需要调整施用的频率。
抗体的诊断用途
本发明的抗ANGPTL8抗体还可以用于检测和/或测量样品中的ANGPTL8，例如用于诊断目的。例如，抗ANGPTL8抗体或其片段可以用于诊断特征在于ANGPTL8异常表达(例如，过表达、表达不足、表达缺乏等)的病症或疾病。用于ANGPTL8的示例性诊断测定法可以包括，例如使获得自患者的样品与本发明的抗ANGPTL8抗体接触，其中抗ANGPTL8抗体标记有可检测标记或报告分子或用作捕获配体以从患者样品中选择性分离ANGPTL8蛋白。或者，未标记的抗ANGPTL8抗体可以与其本身是可检测标记的第二抗体组合用于诊断应用。可检测标记或报告分子可以是放射性同位素，如3H、14C、32P、35S或125I；荧光或化学发光部分，如异硫氰酸荧光素或罗丹明；或酶如碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶或萤光素酶。
可用于检测或测量样品中ANGPTL8的具体示例性测定法包括酶联免疫吸附测定法(ELISA)、放射免疫测定法(RIA)和荧光激活细胞分选(FACS)。
可以在根据本发明的ANGPTL8诊断测定法中使用的样品包括可以从患者获得的任何组织或液体样品，其含有在正常或病理条件下可检测量的ANGPTL8蛋白或其片段。通常，测量从健康患者(例如未患有与异常的ANGPTL8水平或活性相关的疾病或病症的患者)获得的特定样品中ANGPTL8的水平，以初始建立基线或标准的ANGPTL8水平。然后可以比较ANGPTL8的基线水平与从怀疑患有ANGPTL8相关疾病或病症或与这种疾病或病症相关的症状的个体获得的样品中测量的ANGPTL8水平。
实施例
在描述本发明的方法之前，应该理解本发明不限于所描述的具体方法和实验条件，因为这样的方法和条件可以变化。还应该理解，文中使用的术语仅仅是为了描述特定实施方案的目的，而不是为了限制，因为本发明的范围将仅由所附权利要求来限制。已经努力确保所使用的数字(例如数量，温度等)的准确性，但是应当考虑到一些实验误差和偏差。除非另有说明，否则份数是重量份，分子量是平均分子量，温度是摄氏度，压力是在大气压下或接近大气压。
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。如本文所使用的，术语“约”在用于提及特定的所述数值时意指该值可以不超过1％地不同于所述值。例如，如在此使用的，表述“约100”包括99和101以及之间的所有值(例如99.1、99.2、99.3、99.4等)。
尽管在本发明的实践或测试中可以使用与本文所述的方法和材料相似或等同的任何方法和材料，但是现在描述优选的方法和材料。本说明书中提到的所有出版物均通过引用整体并入本文。
实施例1.抗ANGPTL8抗体的产生
通过用包含表达有C-末端小鼠IgG2a标签的重组人ANGPTL8(参见SEQ ID NO：340)的免疫原免疫小鼠(即，包含编码人免疫球蛋白重链和κ轻链可变区的DNA的工程化小鼠)获得抗ANGPTL8抗体。通过ANGPTL8特异性免疫测定法来监测抗体免疫应答。当获得期望的免疫应答时，如US 2007/0280945A1中所述从抗原-阳性B细胞产生几种完整人抗ANGPTL8抗体，US 2007/0280945A1全部内容通过引用并入本文。
根据本实施例的方法产生的示例性抗ANGPTL8抗体的某些生物学特性详细描述于下文阐述的实施例中。
实施例2.重链和轻链可变区氨基酸和核酸序列
表1列出了本发明选择的抗ANGPTL8抗体的重链和轻链可变区和CDR的氨基酸序列标识。表2列出了相应的核酸序列标识。
表1：氨基酸序列标识
表2：核酸序列标识
文中抗体通常根据以下命名法被指代：Fc前缀(例如“H1H”、“H1M”、“H2M”、“H4H”等)，随后是数字标识(例如“15321”、“15341”、“15350”等)，随后是“P”或“N”后缀，如在表1和2中所示。因此，根据该命名法，抗体在本文中可以被称为，例如“H4H15321P”等。本文使用的抗体名称上的H4H前缀指示抗体的特定Fc区同种型。例如，“H4H”抗体具有人IgG4Fc，“H1M”抗体具有小鼠IgG1Fc，“H2M”抗体具有小鼠IgG2Fc(所有可变区都是完全人的，如在抗体名称中的第一个“H”所指代)。如本领域普通技术人员将理解的，具有特定Fc同种型的抗体可以被转化成具有不同Fc同种型的抗体(例如，具有小鼠IgG1Fc的抗体可以被转化成具有人IgG4的抗体，等)，但无论如何，表1和表2中显示的数字标识所指示的可变结构域(包括CDR)将保持不变，并且不管Fc结构域的性质如何，预期结合性质是相同的或基本上相似。
实施例3：表面等离子体共振(SPR)测定ANGPTL8抗体结合ANGPTL8、ANGPTL3和ANGPTL4肽的解离速率常数(kd)
先前已经证明，与ANGPTL3[WO 2012/174178 A1；Lee等人(2009)JBC,284:13735-13745]和ANGPTL4[Desai等人(2007)PNAS,104:11766-11771]的N-末端卷曲螺旋区结合的抗体阻断ANGPTL蛋白的LPL抑制活性。在该实验中，测试针对ANGPTL8的抗体与来自ANGPTL8的N-末端区的肽的结合。
使用基于实时表面等离子体共振的MASS-1生物传感器平台测定ANGPTL8抗体结合人ANGPTL8肽(hANGPTL8肽，SEQ ID NO：337)的解离速率常数。测定法使用了其中ANGPTL8抗体被捕获在传感器表面上并且将肽注射到抗体表面上的形式。还包括作为对照的来自人ANGPTL3的N-末端卷曲螺旋区的肽(hANGPTL3肽，SEQ ID NO：338)和人ANGPTL4的N-末端卷曲螺旋区的肽(hANGPTL4肽，SEQ ID NO：339)。还包括结合ANGPTL4肽的对照抗体(来自US2011/0159015A1的H4H268P)和阴性同种型对照抗体。所有结合研究在25℃、在10mMHEPES pH 7.4、150mM NaCl、3mM EDTA和0.05％v/v表面活性剂Tween-20(HBS-ET运行缓冲液)中进行。将HCA传感器表面衍生通过胺偶联至单克隆小鼠抗人Fc抗体(GE，#BR-1008-39)，并向该表面捕获约1000RU的各ANGPTL8抗体或对照抗体。将肽储备溶液在HBS-ET运行缓冲液中稀释至500nM，并以30μL/分钟的流速注射到抗体捕获表面上，持续4分钟，然后在HBS-ET运行缓冲液中解离结合的肽10分钟。
肽结合捕获的ANGPTL8抗体的结合相不能拟合至1：1结合模型；因此，使用Scrubber 2.0c曲线拟合软件通过拟合实时结合传感图，仅计算解离速率常数(kd)值。从kd计算解离半衰期(t1/2)为：
ANGPTL8、ANGPTL3和ANGPTL4N-末端区肽结合捕获的ANGPTL8抗体、对照ANGPTL4抗体和同种型对照抗体的结合参数显示在表3-5中。
结果：
在这些实验条件下，由500nM hANGPTL8、hANGPTL3或hANGPTL4肽对空白抗hFc表面显示的最大非特异性结合信号为3RU。因此，信号比3RU的非特异性背景高3倍(即≥9RU)的结合相互作用被认为是特异性结合相互作用。基于该标准，小于9RU的抗体-肽结合信号被认为是非结合(表1中的NB)。
根据该结合研究，显示ANGPTL8抗体H4H15321P、H4H15367P2和H4H15345P特异性结合ANGPTL8肽N-末端区(SEQ ID NO：337)。没有ANGPTL8抗体结合hANGPTL3的N-末端区肽(SEQ ID NO：338)或hANGPTL4的N-末端区肽(SEQ ID NO：339)。
表3：抗ANGPTL8单克隆抗体在25℃与hANGPTL8肽的结合
*此栏显示用于结合ANGPTL8的抗体表面密度的平均值和标准偏差。
表4：抗ANGPTL8单克隆抗体在25℃与hANGPTL3移位肽的结合
*此栏显示用于结合ANGPTL3肽的抗体表面密度的平均值和标准偏差。
表5：抗ANGPTL8单克隆抗体在25℃与hAngPTL4肽的结合
*此栏显示用于结合ANGPTL4肽的抗体表面密度的平均值和标准偏差。
实施例4：通过表面等离子体共振(SPR)测定H4H15341P与全长人和猴ANGPTL8蛋白结合的动力学结合参数
使用基于实时表面等离子共振的MASS-1生物传感器平台测定ANGPTL8抗体H4H15341P与全长人和食蟹猴ANGPTL8蛋白结合的平衡解离常数(KD)。对于测定法，将H4H15341P注射到其上固定有人或猴ANGPTL8蛋白质的传感器表面上。在25℃、在10mMHEPES pH7.4、150mM NaCl、3mM EDTA和0.05％v/v表面活性剂Tween-20(HBS-ET运行缓冲液)中进行所有结合研究。首先将HCA传感器表面衍生通过胺偶联至山羊抗小鼠IgG2a多克隆抗体(Southern Biotech，#1080-01)，然后其上捕获约30RU(结合单位)的表达有C-末端小鼠IgG2a Fc标签的人ANGPTL8(hANGPTL8-mFc；SEQ ID NO：340)或表达有C-末端小鼠IgG2a Fc标签的猴ANGPTL8(MfANGPTL8-mFc；SEQ ID NO：341)。首先在HBS-ET运行缓冲液(300nM-1.23nM；3倍系列稀释)中制备不同浓度的ANGPTL8 mAb，然后以30μL/分钟的流速注射到ANGPTL8-mFc捕获表面，持续4分钟，随后在HBS-ET运行缓冲液中解离结合的mAb 10分钟。
使用Scrubber 2.0c曲线拟合软件通过将实时结合传感图拟合至具有质量传输限制的1：1结合模型来确定动力学结合(ka)和解离(kd)速率常数。从动力学速率常数计算结合解离平衡常数(KD)和解离半衰期(t1/2)为：
和
抗ANGPTL8mAb在25℃结合hANGPTL8-mFc和MfANGPTL8-mFc的结合动力学参数显示在表6中。
结果：
抗体H4H15341与固定在传感器表面上的人和猴ANGPTL8蛋白质结合，并且在记录的解离相期间不显示可测量的解离。为了获得结合亲和力的估计值，在实验条件下将解离速率常数kd固定在检测上限，1.0E-05 1/s。H4H15341P结合hANGPTL8-mFc和MfANGPTL8-mFc的平衡解离常数(KD)分别估计为117pM和86pM或更低。
表6：H4H15341P在25℃结合hANGPTL8-mFc和MfANGPTL8-mFc的结合动力学参数。
*在实验条件下没有观察到抗ANGPTL8mAb的解离；因此，kd的值固定在1.00E-05s-1的检测上限。
实施例5：通过生物层干涉测定法(BLI)测定人和猴ANGPTL8结合特异性
使用具有Octet HTX生物传感器平台(ForteBio，A Division of Pall LifeSciences)的生物层干涉测定法研究ANGPTL8抗体与人和猴ANGPTL8蛋白质的结合。所有实验均在25℃下在10mM HEPES pH 7.4、150mM NaCl、0.05％v/v表面活性剂Tween-20和1mg/ml BSA中进行，反应多孔板在1000rpm下摇动。通过将传感器浸入含有10μg/mL各蛋白质的孔中4分钟，将产生的约1.6nm带有C-末端小鼠IgG2a Fc标签的人ANGPTL8(hANGPTL8-mFc；SEQ ID NO：340)或产生的带有C-末端小鼠IgG2a Fc标签的食蟹猴ANGPTL8(MfANGPTL8-mFc；SEQ ID NO：341)捕获至抗mFc(AMC)Octet生物传感器上。在相同条件下，将带有相同mFc标签的阴性对照蛋白(hLDLR-mFc)也偶联至AMC传感器。然后将所有四种传感器(三种蛋白偶联和一种空白)浸入含有100nM不同ANGPTL8单克隆抗体或同种型对照的孔中4分钟。结合步骤4分钟后观察到的结合信号列于表7中。结果：
在本研究测试的25种ANGPTL8mAb中，24种抗体显示比无关对照传感器尖端上的最大结合信号(0.03nm；该值用于计算高于背景的结合信号倍数)更高的结合信号。在24种人ANGPTL8结合物中，20种表现出对猴ANGPTL8蛋白质的阳性结合。不与猴ANGPTL8蛋白质结合的4种抗体在人ANGPTL8蛋白质上也表现出低的结合信号，其值高于背景结合信号1-2倍。对于与人ANGPTL8蛋白质结合的24种抗体，4种抗体(H4H15362P2、H4H15321P、H4H15330P、H4H15367P2)显示高于背景10倍的结合信号。另一组12种抗体表现出高于背景5-10倍的结合信号。其余的抗体以高于背景水平1-5倍的结合信号结合人ANGPTL8蛋白质。
表7：100nM ANGPTL8单克隆抗体与Octet生物传感器上捕获的人和猴ANGPTL8-mFc的结合特异性
实施例6：在人源化ANGPTL8小鼠中IgG4抗hANGPTL8抗体对循环的甘油三酯水平的体内作用
在人源化ANGPTL8小鼠中测定了抗hANGPTL8抗体对血清甘油三酯(TG)水平的作用。在实验前7天对小鼠预先采血，并针对每种测试抗体分成每组5只小鼠的组。在研究的第0天通过皮下注射以10mg/kg剂量施用抗体(抗hANGPTL8和具有无关特异性的同种型匹配(hIgG4)对照)。小鼠在抗体注射后的连续天数上采血(未禁食)，通过血清化学分析仪(Siemens)测定血清中的TG水平。针对所有测试抗体的每个时间点计算平均值。结果以血清TG浓度(平均值±SEM)表示，显示在表8-13中。
也使用标准ELISA测定法测定循环中抗hANGPTL8(血清Ab)的水平。简而言之，用山羊抗人Fc抗体(Sigma-Aldrich)包被板以捕获血清Ab。然后将血清加入板中，使用辣根过氧化物酶(HRP)缀合的山羊抗人IgG抗体(Sigma-Aldrich)通过化学发光检测捕获的抗体。结果表示为(平均值±SEM)，示于表14-19中。对照：接受同种型匹配的对照Ab的小鼠。
结果：
在人源化ANGPTL8小鼠中测试25种针对hANGPTL8的mAb对循环中TG水平的作用。抗体H4H15341P(与对照mAb相比)在施用后导致循环中TG的显著降低(平均高达68％)。
表8.研究1，血清甘油三酯(mg/dL)
表9.研究2，血清甘油三酯(mg/dL)
表9(续)
表10.研究3，血清甘油三酯(mg/dL)
表11.研究4，血清甘油三酯(mg/dL)
表12.研究5，血清甘油三酯(mg/dL)
表12(续)
表13.研究6，血清甘油三酯(mg/dL)
表14.研究1、血清Ab(μg/mL)
表15.研究2、血清Ab(μg/mL)
表15(续)
表16.研究3、血清Ab(μg/mL)
表17.研究4、血清Ab(μg/mL)
表18.研究5、血清Ab(μg/mL)
表18(续)
表19.研究6、血清Ab(μg/mL)
实施例7：hANGPTL8抗体H4H15341P在人源化ANGPTL8小鼠中的剂量反应
在人源化ANGPTL8小鼠中评估了不同剂量的hANGPTL8mAb，H4H15341P对血清甘油三酯(TG)的作用。在实验前7天对小鼠预先采血，并针对每个测试剂量分成每组5只小鼠的组。在研究的第0天，通过单次剂量皮下注射以1、5、10和25mg/kg施用H4H15341P以及以10mg/kg施用无关特异性的同种型匹配(hIgG4)对照。在抗体注射后第2、7、14和21天对小鼠采血(未禁食)，并通过1800化学系统(Siemens)测定血清中的TG水平。计算每个时间点的平均值。结果表示为血清TG浓度(平均值±SEM)，示于图1中。
使用标准ELISA测定法测定循环中抗人抗体(血清Ab)的水平。简而言之，用山羊抗人Fc抗体(Sigma-Aldrich)包被板以捕获血清Ab。然后将血清加入板中，使用辣根过氧化物酶(HRP)缀合的山羊抗人IgG抗体(Sigma-Aldrich)通过化学发光检测捕获的抗体。结果以(平均值±SEM)表示，示于图2中。
对照Ab是指接受同种型匹配的对照Ab的小鼠。
结果：
在人源化ANGPTL8小鼠中测试了4种不同剂量的H4H15341P(抗hANGPTL8)对循环中TG和胆固醇水平的作用。H4H15341P导致剂量依赖性的持续血清TG的显著降低(与对照mAb相比，平均高达66％)，5mg/kg是最低有效剂量。对总胆固醇水平没有影响。
实施例8.在人源化ANGPTL8小鼠中评估hANGPTL8mAb治疗后脂蛋白脂肪酶(LPL)活性
在人源化ANGPTL8小鼠中评估hANGPTL8mAb(H4H15341P)施用对LPL活性的作用。在实验前7天对小鼠预先采血，并针对每种测试mAb分成每组5只小鼠的组。在研究的第0天通过单次剂量皮下注射以10mg/kg施用H4H15341P和对照Ab。在研究的第4天，通过尾静脉静脉注射向小鼠给药250U/kg的肝素，其从血管内皮表面释放LPL。五分钟后，从小鼠眼眶后静脉窦取血并收集和分级肝素注射后血浆，使用肝素-琼脂糖色谱法从肝脂肪酶分离LPL。将肝素注射后血浆加载到用0.25M NaCl、20％甘油、1％BSA、10mM磷酸钠，pH6.5平衡的由GEAkta Prime控制的1.0-ml肝素-琼脂糖HiTrap柱(GE Healthcare)上。用10ml平衡缓冲液洗涤柱，用30ml NaCl梯度(在20％甘油、1％BSA、10mM磷酸钠，pH6.5中0.25-1.5M)洗脱。通过肝脂酶和LPL峰合并得到的级分，并使用Invitrogen Enzchek脂肪酶底物(目录号E33955)测定脂肪酶活性。在Molecular Devices SpectraMax i3读板器上在482nm激发/518nm发射读取动力学反应。以相对荧光单位(RFU)表示的结果(平均值±SEM)显示在图3中。对照Ab是指接受同种型匹配的阴性对照Ab的小鼠。
结果
结果显示，向人源化ANGPTL8小鼠施用H4H15341P(抗hANGPTL8)导致LPL活性显著增加并且对肝脂酶活性没有影响。
实施例9.在用hANGPTL8mAb H4H15341P处理的人源化ANGPTL8小鼠中的脂质耐受性测试
通过急性脂肪负荷评估用mAb H4H15341P抑制ANGPTL8对甘油三酯清除的作用。在实验前8天对人源化的ANGPTL8小鼠预先采血，并针对每种测试mAb分成每组6只小鼠的组。在研究的第0天通过单次剂量的皮下注射以10mg/kg施用H4H15341P和同种型匹配的对照Ab。在研究的第4天，在静脉内施用2.5μl/g体重的20％脂肪乳剂(intralipid)(BaxterHealthcare，IL)后对小鼠禁食4小时。在随后的时间点在从尾静脉收集的血液中评估TG水平。以TG浓度(平均值±SEM)表示的结果显示在图4中。对照Ab是指接受同种型匹配的阴性对照Ab的小鼠。
结果
与对照抗体相比，向人源化ANGPTL8小鼠施用H4H15341P(抗hANGPTL8)导致急性脂肪负荷后的TG水平显著较低。这些数据表明H4H15341P通过阻断ANGPTL8促进TG从循环中加速清除。
实施例10.血管生成素样蛋白8的HiSense线性表位作图
采用使用HiSense线性肽的Pepscan分析建立抗体H4H15341P和H4H15367P2的线性表位。在Pepscan Presto BV(Zuidersluisweg 2,8243RC Lelystad,The Netherlands)进行该研究。所有Pepscan数据都存储在PeplabTM软件包中，该软件包是内部开发的专有数据库应用，基于PostgreSQL存储后端建立。
肽的合成
为了重建靶分子的表位，合成了肽文库。通过用专有的亲水性聚合物制剂接枝获得氨基官能化的聚丙烯载体，随后使用二环己基碳化二亚胺(DCC)与N-羟基苯并三唑(HOBt)与叔丁氧基羰基-六亚甲基二胺(BocHMDA)反应，随后使用三氟乙酸(TFA)裂解Boc-基团。通过定制改良的JANUS液体处理站(custom modified JANUS liquid handlingstations(Perkin Elmer))，使用标准的Fmoc肽合成在氨基官能化的固体载体上合成肽。
将血管生成素样蛋白8偶联到阵列上
靶蛋白作为阳性对照在小卡(mini-card)上偶联。为了将血管生成素样蛋白8(hANGPTL8-mFc)偶联到阵列上，使用两种交联剂-间马来酰亚胺苯甲酰-N-羟基琥珀酰亚胺酯(MBS)和戊二醛(GDA)。对于MBS，将40μl的hANGPTL8-mFc与1μl的MBS(2mg/ml)混合，在室温下温育45分钟，然后在含有接头基序CGGCGG(SEQ ID NO：346)的位置施加到阵列上。对于GDA连接，将磷酸盐缓冲液(pH 5.0)中的0.05％GDA施加到阵列上，在室温下孵育4小时，然后将在磷酸盐缓冲液pH8.0中浓度为5或20μg/ml的hANGPTL8-mFc加入到阵列上含有Gly的位置，只允许偶联至游离的N-末端。
ELISA筛选
在基于PEPSCAN的ELISA中测试抗体与每种合成肽的结合。将肽阵列与初级抗体溶液孵育(4℃过夜)。洗涤后，将肽阵列与适当的抗体过氧化物酶缀合物(山羊抗人HRP缀合物，Southern Biotech，目录号2010-05)的1/1000稀释液在25℃孵育1小时。洗涤后，加入过氧化物酶底物2,2'-连氮基-二-3-乙基苯并噻唑啉磺酸盐(ABTS)和20μl/ml的3％H2O2。一小时后，测量显色。用电荷耦合设备(CCD)-照相机和图像处理系统对显色进行量化。
筛选细节
抗体结合取决于多种因素的组合，包括抗体的浓度以及ELISA缓冲液中竞争蛋白质的量和性质。而且，预包被的条件(与实验样品孵育之前肽阵列的特定处理)影响结合。这些细节总结如下：
对于Pepscan缓冲液和预处理(SQ)，数字表示竞争蛋白质(马血清和卵清蛋白的组合)的相对量。
数据处理
从CCD照相机获得的值范围为0至3000mAU，与标准96孔板ELISA读数器相似。量化结果并存储到Peplab数据库中。有时候，含有气泡的孔导致假阳性值，手动检查卡，由气泡引起的任何值都记为0。
合成质量控制
为了验证合成肽的质量，平行合成独立组的阳性和阴性对照肽。用抗体57.9筛选这些肽(Posthumus等人，1990 J Virol 64：3304-3309)。
结果
肽的设计
在靶序列上合成以下肽组：
人ANGPTL8，成熟序列，来自NP_061157.3的氨基酸22-198
测试抗体对覆盖ANGPTL8全序列的一系列15-mer肽的结合，每个肽与下一个肽具有一个氨基酸的偏移。还包括用于更精确表位分析的一系列测试肽中的双丙氨酸(“AA”)取代。
组1.模拟：线性类型：LIN
描述源自血管生成素样蛋白8的靶序列的长度为15的肽，具有一个残基的偏移。
序列(前10)
APMGGPELAQHEELT(SEQ ID NO：348)
PMGGPELAQHEELTL(SEQ ID NO：349)
MGGPELAQHEELTLL(SEQ ID NO：350)
GGPELAQHEELTLLF(SEQ ID NO：351)
GPELAQHEELTLLFH(SEQ ID NO：352)
PELAQHEELTLLFHG(SEQ ID NO：353)
ELAQHEELTLLFHGT(SEQ ID NO：354)
LAQHEELTLLFHGTL(SEQ ID NO：355)
AQHEELTLLFHGTLQ(SEQ ID NO：356)
QHEELTLLFHGTLQL(SEQ ID NO：357)
组2.模拟：线性类型：LIN.AA
描述组1的肽，但位置10和11上的残基被Ala置换。当天然Ala在任一位置上出现时，其被Gly置换。该组中肽的顺序是随机的。显示阵列上的实际顺序。
序列(前10)
TAEVLGEVAAGQKVL(SEQ ID NO：358)
VYRTTEGRLAAARNS(SEQ ID NO：359)
GVYRTTEGRAAKARN(SEQ ID NO：360)
VQRLEVQLRAGWLGP(SEQ ID NO：361)
LTGHVQRQRAAMVAQ(SEQ ID NO：362)
VLKAHADKQAAILWA(SEQ ID NO：363)
LRDSVQRLEAALRSA(SEQ ID NO：364)
RREMVAQQHAARQIQ(SEQ ID NO：365)
VSRGRDAAQAARASL(SEQ ID NO：366)
AYREFEVLKGAADKQ(SEQ ID NO：367)
提供并绘制筛选的原始ELISA结果(框图，数据未显示)以描绘每个数据集并且指出每个数据集内的平均ELISA信号、分布和异常值。根据实验条件(抗体量、阻断强度等)，获得不同的ELISA数据分布。抗体H4H15367P2
当在高度严谨条件下测试时，抗体H4H15367P2仅仅亲和地结合一个由序列1APMGGPELAQHEELT15(SEQ ID NO：348)组成的线性肽。在相同的条件下测试该样品两次并重复得到相同的结果。抗体H4H15367P2也强结合偶联到阵列上作为阳性对照的血管生成素样蛋白8。有趣的是，与GDA偶联相比时，使用MBS偶联的靶蛋白获得稍弱的结合。
抗体H4H15341P
当在高度严谨条件下测试时，抗体H4H15341P亲和地结合一系列含有共同序列150QRQRREMVAQ159(SEQ ID NO：368)的线性肽。比较组1(天然线性表位模拟物)和组2(双Ala突变体)上记录的强度分布表明残基R154、E155和Q159是抗体结合所必需的。抗体H4H15341P也强结合偶联到阵列上作为阳性对照的血管生成素样蛋白8，而与固定方式无关。
阴性同种型对照
阴性同种型对照不结合阵列上存在的任何肽。此外，使用偶联到阵列上作为阳性对照的血管生成素样蛋白8没有检测到结合。使用在Pepscan ELISA中使用的山羊抗人第二缀合物另外测试阴性同种型对照。通过该第二缀合物可以识别抗体。
结论
在HiSense肽阵列上测试提供用于该研究的三种抗体。有可能为两种抗体建立暂定的线性表位。尽管重复孵育，但抗体阴性同种型对照不结合阵列。本研究中鉴别的核心暂定表位如下：
因此，抗体H4H15341P和H4H15367P2分别识别在C和N-末端内不同的线性序列。对于抗体H4H15367P2用MBS偶联获得的的信号比用GDA偶联的信号小、以及其位置在极其N-末端的事实表明N末端胺本身可以是表位的一部分。此外，对于抗体H4H15341P，双丙氨酸突变体用于精确定位对结合至关重要的残基(浅灰色阴影的残基，上面)。
抗体H4H15341P靶向血管生成素样蛋白8的C-末端区，而H4H15367P2靶向非常N-末端。抗体阴性同种型对照不与阵列结合。

Claims (19)

1.一种抗体或其抗原结合片段，其与参照抗体结合ANGPTL8上的相同表位，和/或与参照抗体竞争结合ANGPTL8，其中所述参照抗体包含分别具有SEQ ID NO：164/166/168/172/174/176或316/318/320/324/326/328的氨基酸序列的HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3结构域。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述参照抗体：
a)包含具有SEQ ID NO：164/166/168/172/174/176的氨基酸序列的HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3结构域，并且特异性结合SEQ ID NO：368所定义的表位；或者
b)包含具有SEQ ID NO：316/318/320/324/326/328的氨基酸序列的HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3结构域，并且特异性结合SEQ ID NO：348所定义的人ANGPTL8的N-末端区中的线性表位。
3.根据权利要求1所述的抗体，其中所述参照抗体：
a)是完整人单克隆抗体；
b)不结合SEQ ID NO：338的人ANGPTL3肽的N-末端卷曲螺旋区或SEQ ID NO：339的人ANGPTL4肽的N-末端卷曲螺旋区；
c)如通过表面等离子共振所测量的，在25℃以小于约150pM的KD结合人ANGPTL8，并在25℃以小于约90pM的KD结合猴ANGPTL3；
d)当以约10mg/kg的剂量皮下施用时，降低哺乳动物中甘油三酯的水平约68％；
e)当以约5mg/kg至约25mg/kg的剂量范围皮下施用时，降低哺乳动物的甘油三酯水平持续约7天至21天的期间范围；
f)包含具有SEQ ID NO：162或314的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)；
g)包含具有SEQ ID NO：170或322的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)；或者
h)与参照抗体交叉竞争，其中所述参照抗体包含选自表1的任何HCVR和LCVR氨基酸序列的重链可变区(HCVR)和轻链可变区(LCVR)氨基酸序列。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗体，其中所述抗体是重组产生的人抗体。
5.一种分离的核酸分子，其编码特异性结合人ANGPTL8的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含(a)具有如SEQ ID NO：162或314所示的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)；或(b)具有如SEQ ID NO：170或322所示的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)的CDR。
6.一种药物组合物，其包含权利要求1至4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段和药学上可接受的载体或稀释剂。
7.一种抑制有其需要的患者中ANGPTL8活性的方法，所述方法包括向所述患者施用任何一种或多种权利要求1-4中任一项的抗体或其抗原结合片段、或包含任何一种或多种权利要求1-4中任一项的抗体或其抗原结合片段的药物组合物，其中至少一种ANGPTL8的活性降低或减弱。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述施用导致患者中血液甘油三酯水平的降低。
9.一种用于治疗与升高的ANGPTL8活性水平部分相关的疾病或病症的方法，所述方法包括施用ANGPTL8抑制剂/拮抗剂，其中ANGPTL8抑制剂/拮抗剂是ANGPTL8特异性的抗体或其抗原结合片段。
10.根据权利要求9所述的方法，其中ANGPTL8特异性的抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO：162/170或314/322所示的HCVR/LCVR序列。
11.一种用于治疗与高的血液甘油三酯水平相关或特征部分在于高的血液甘油三酯水平的疾病或病症、或与所述病症或疾病相关的至少一种症状或并发症的方法，所述方法包括向有其需要的患者施用权利要求1-4中任一项的抗体或其抗原结合片段、或权利要求6的药物组合物，从而降低血液甘油三酯水平或者调节所述病症或疾病、或者在频率或严重程度上减轻或降低与病症或疾病相关的至少一种症状或并发症。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述病症或疾病选自高脂血症、高脂蛋白血症和血脂异常(致动脉粥样硬化性血脂异常、糖尿病性血脂异常、混合性血脂异常)、高甘油三酯血症、TG>1000mg/dL的严重高甘油三酯血症和相关的急性胰腺炎、高胆固醇血症、乳糜微粒血症、肥胖、代谢综合征、糖尿病、脂肪代谢障碍、源自或由改变的ApoC2、ApoE缺乏、增加的ApoB、极低密度脂蛋白(VLDL)增加的产量和/或减少的消除引起的脂肪萎缩、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、某些药物治疗(例如糖皮质激素治疗诱导的血脂异常)、和导致升高的甘油三酯或脂质的任何遗传素质、饮食、或生活方式。
13.根据权利要求11所述的方法，其中所述病症或疾病是选自动脉粥样硬化、动脉瘤、高血压、心绞痛、中风、脑血管疾病、充血性心力衰竭、冠状动脉疾病、心肌梗塞和外周血管疾病的心血管疾病或病患。
14.根据权利要求11所述的方法，其中所述药物组合物与第二治疗剂组合施用给患者。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述第二治疗剂选自：3-羟基-3-甲基戊二酰基-辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂；载脂蛋白C-III抑制剂；胆固醇吸收和/或胆汁酸再吸收的抑制剂；烟酸；贝特类或两亲性羧酸；LXR转录因子的激活剂(例如22-羟基胆固醇)；或固定组合(例如依折替米贝加辛伐他汀)；他汀与胆汁树脂(例如考来烯胺、考来替泊、考来维仑)，烟酸加他汀的固定组合(例如，烟酸与洛伐他汀)；和其他降脂剂(例如ω-3-脂肪酸乙酯)。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述HMG-CoA还原酶抑制剂选自西伐他汀、阿托伐他汀、辛伐他汀、匹伐他汀、罗苏伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀和普伐他汀。
17.根据权利要求14所述的方法，其中所述第二治疗剂选自：分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)、血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)、血管生成素样蛋白5(ANGPTL5)、血管生成素样蛋白6(ANGPTL6)和人原蛋白原转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9型(PCSK9)。
18.根据权利要求14所述的方法，其中所述第二治疗剂选自胰岛素、胰岛素类似物、双胍(二甲双胍)、磺酰脲(例如格列本脲，格列吡嗪)、PPARγ激动剂(例如吡格列酮，罗格列酮)、α葡糖苷酶抑制剂(例如阿卡波糖，伏格列波糖)、胰高血糖素样肽1(GLP-1)激动剂(例如(艾塞那肽),TRULICITYTM(度拉糖肽),(利拉糖肽),(利司那肽),TANZEUMTM(阿必鲁肽)，或任何前述物质的类似物)、二肽基肽酶IV(DPP-4)抑制剂(例如沙格列汀西他列汀和维格列汀钠-葡萄糖共转运体2(SGLT2)抑制剂(例如,INVOKANATM(卡格列净),(达格列净),依帕列净,伊格列净,托格列净)、(普兰林肽)、胰高血糖素受体拮抗剂、非磺酰脲促分泌素、胰岛素类似物(例如速效Lispro，Aspart，Glulisine和长效Detemir胰岛素、Degludec胰岛素或Glargine胰岛素)、毒蜥外泌肽-4多肽、β3肾上腺素受体激动剂、胆固醇摄取和/或胆汁酸再吸收抑制剂、LDL-胆固醇拮抗剂、胆固醇酯转移蛋白拮抗剂(例如托塞曲匹、安塞曲匹、达塞曲匹或依曲普汀)、内皮素受体拮抗剂、生长激素拮抗剂、胰岛素增敏剂、糊精模拟素或激动剂、大麻素受体拮抗剂、黑皮质素、黑色素浓集激素受体激动剂、SNRI、成纤维细胞生长因子21(FGF21)模拟物、成纤维细胞生长因子受体1c(FGFR1c)激动剂、晚期糖基化终产物形成的抑制剂(例如氨基胍)和蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂。
19.根据权利要求14所述的方法，其中所述第二治疗剂是镇痛剂或抗炎剂。
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Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109789194A (zh) * 2016-04-08 2019-05-21 瑞泽恩制药公司 用angptl8抑制剂和angptl3抑制剂治疗高脂血症的方法
CN110036029A (zh) * 2016-11-17 2019-07-19 瑞泽恩制药公司 用抗angptl8抗体处理肥胖的方法
CN110613847A (zh) * 2019-10-23 2019-12-27 北京市心肺血管疾病研究所 一种抑制血管生成素样蛋白8的物质的应用
CN110694068A (zh) * 2019-11-06 2020-01-17 北京市心肺血管疾病研究所 一种抑制血管生成素样蛋白8的物质的应用
CN110694067A (zh) * 2019-11-06 2020-01-17 首都医科大学附属北京安贞医院 一种抑制血管生成素样蛋白8的物质的应用
CN111135303A (zh) * 2020-01-17 2020-05-12 北京市心肺血管疾病研究所 一种抑制血管生成素样蛋白8的物质的应用
CN113453754A (zh) * 2018-12-21 2021-09-28 伊莱利利公司 抗angptl3/8复合物抗体和使用所述抗体的方法
CN113453754B (zh) * 2018-12-21 2024-05-03 伊莱利利公司 抗angptl3/8复合物抗体和使用所述抗体的方法

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JO3412B1 (ar) 2011-06-17 2019-10-20 Regeneron Pharma أجسام مضادة ل angptl3 واستخداماتها
CA2954082A1 (en) * 2014-10-03 2016-04-07 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treatment of conditions associated with elevated triglycerides
TW201713690A (zh) 2015-08-07 2017-04-16 再生元醫藥公司 抗ａｎｇｐｔｌ８抗體及其用途
MX2018009680A (es) * 2016-02-17 2018-09-10 Regeneron Pharma Metodos para tratar o prevenir la aterosclerosis administrando un inhibidor de angptl3.
US11542332B2 (en) 2016-03-26 2023-01-03 Bioatla, Inc. Anti-CTLA4 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof
KR20190039937A (ko) 2016-07-08 2019-04-16 스태튼 바이오테크놀로지 비.브이. 항-ApoC3 항체 및 이의 사용 방법
JP6853716B2 (ja) * 2017-03-31 2021-03-31 信越化学工業株式会社 レジスト下層膜材料、パターン形成方法、及びレジスト下層膜形成方法
CN110506056A (zh) 2017-04-21 2019-11-26 斯塔滕生物技术有限公司 抗apoc3抗体和其使用方法
US11434303B2 (en) 2017-06-28 2022-09-06 Bluefin Biomedicine, Inc. Anti-LY6H antibodies and antibody drug conjugates
US10538583B2 (en) 2017-10-31 2020-01-21 Staten Biotechnology B.V. Anti-APOC3 antibodies and compositions thereof
CA3080103A1 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Staten Biotechnology B.V. Anti-apoc3 antibodies and methods of use thereof
CA3080148A1 (en) * 2017-11-10 2019-05-16 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Angptl8-binding agents and methods of use thereof
US20200393470A1 (en) * 2017-12-18 2020-12-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Angptl8 assay and uses thereof
US11633471B2 (en) 2018-03-06 2023-04-25 Unm Rainforest Innovations Compositions and methods for reducing serum triglycerides
MX2022000726A (es) 2019-07-19 2022-02-10 Oncoresponse Inc Anticuerpos inmunomoduladores y metodos de uso de los mismos.
KR20210095781A (ko) 2020-01-24 2021-08-03 주식회사 에이프릴바이오 항원결합 단편 및 생리활성 이펙터 모이어티로 구성된 융합 컨스트럭트를 포함하는 다중결합항체 및 이를 포함하는 약학조성물
JP2023539245A (ja) * 2020-08-26 2023-09-13 ツイスト バイオサイエンス コーポレーション Ｇｌｐ１ｒ変異体に関する方法および組成物

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012170977A1 (en) * 2011-06-10 2012-12-13 President And Fellows Of Harvard College Modulation of pancreatic beta cell proliferation
WO2013106547A1 (en) * 2012-01-10 2013-07-18 President And Fellows Of Harvard College Beta-cell replication promoting compounds and methods of their use
US20140178988A1 (en) * 2012-10-08 2014-06-26 Biotime, Inc. Differentiated Progeny of Clonal Progenitor Cell Lines
WO2014183207A1 (en) * 2013-05-17 2014-11-20 Exerkine Corporation Therapeutic method of treating metabolic syndrome
CN104164451A (zh) * 2014-08-09 2014-11-26 高连如 一种治疗2型糖尿病的基因工程干细胞

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7368531B2 (en) 1997-03-07 2008-05-06 Human Genome Sciences, Inc. Human secreted proteins
US20030059780A1 (en) 1997-06-16 2003-03-27 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US7393663B2 (en) 1997-08-01 2008-07-01 Serono Genetics Institute S.A. Expressed sequence tags and encoded human proteins
JP2002502589A (ja) 1998-02-09 2002-01-29 ヒューマン ジノーム サイエンシーズ， インコーポレイテッド ４５個のヒト分泌タンパク質
KR20050004240A (ko) 1999-08-31 2005-01-12 제넨테크, 인크. 종양 치료용 조성물 및 방법
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US7598227B2 (en) 2003-04-16 2009-10-06 Isis Pharmaceuticals Inc. Modulation of apolipoprotein C-III expression
JP5848861B2 (ja) 2004-04-20 2016-01-27 ジェンマブ エー／エスＧｅｎｍａｂ Ａ／Ｓ Ｃｄ２０に対するヒトモノクローナル抗体
US7537903B2 (en) 2007-04-23 2009-05-26 Board Of Regents, The University Of Texas System FGF21 upregulates expression of GLUT-1 in a βklotho-dependent manner
US20110002845A1 (en) 2007-05-22 2011-01-06 Novartis Ag Methods of treating, diagnosing or detecting fgf21-associated disorders
JP2013512672A (ja) 2009-12-02 2013-04-18 アムジエン・インコーポレーテツド ヒトＦＧＦＲ１ｃ、ヒトβ−クロト−、ならびにヒトＦＧＦＲ１ｃおよびヒトβ−クロト−の両方に結合する結合タンパク質
JO3274B1 (ar) 2009-12-24 2018-09-16 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية للبروتين 4 المشابه لأجيوبيوتين البشري
US20120021409A1 (en) * 2010-02-08 2012-01-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Common Light Chain Mouse
JO3756B1 (ar) * 2010-11-23 2021-01-31 Regeneron Pharma اجسام مضادة بشرية لمستقبلات الجلوكاجون
JO3412B1 (ar) 2011-06-17 2019-10-20 Regeneron Pharma أجسام مضادة ل angptl3 واستخداماتها
CA2954082A1 (en) * 2014-10-03 2016-04-07 Ngm Biopharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treatment of conditions associated with elevated triglycerides
TW201713690A (zh) 2015-08-07 2017-04-16 再生元醫藥公司 抗ａｎｇｐｔｌ８抗體及其用途
RS62769B1 (sr) 2016-04-08 2022-01-31 Regeneron Pharma Postupci za lečenje hiperlipidemije inhibitorom angptl8 i inhibitorom angptl3
EA201991203A1 (ru) 2016-11-17 2019-10-31 Способы лечения ожирения антителами к angptl8

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012170977A1 (en) * 2011-06-10 2012-12-13 President And Fellows Of Harvard College Modulation of pancreatic beta cell proliferation
CN104039357A (zh) * 2011-06-10 2014-09-10 哈佛学院校长同事会 胰腺β-细胞增殖的调节
WO2013106547A1 (en) * 2012-01-10 2013-07-18 President And Fellows Of Harvard College Beta-cell replication promoting compounds and methods of their use
US20140178988A1 (en) * 2012-10-08 2014-06-26 Biotime, Inc. Differentiated Progeny of Clonal Progenitor Cell Lines
WO2014183207A1 (en) * 2013-05-17 2014-11-20 Exerkine Corporation Therapeutic method of treating metabolic syndrome
CN104164451A (zh) * 2014-08-09 2014-11-26 高连如 一种治疗2型糖尿病的基因工程干细胞

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BIOLEGEND: "Purified anti-Betatrophin(ANGPTL8)", 《BIOLEGEND PRODUCT DATA》 *
REN ZHANG: "A Monoclonal Neutralizing Antibody Against Lipasin(Angptl8), a Novel Lipid Regulator, Reduces Serum Triglycerides in Mice By Enhancing Lipoprotein Lipase-Mediated Triglyceride Clearance", 《ENDOCRINE SOCIETY’S 97TH ANNUAL MEETING AND EXPO》 *
VIKTORIA GUSAROVA等: "ANGPTL8/Betatrophin Does Not Control Pancreatic Beta Cell Expansion", 《CELL》 *

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109789194A (zh) * 2016-04-08 2019-05-21 瑞泽恩制药公司 用angptl8抑制剂和angptl3抑制剂治疗高脂血症的方法
CN109789194B (zh) * 2016-04-08 2022-08-02 瑞泽恩制药公司 用angptl8抑制剂和angptl3抑制剂治疗高脂血症的方法
CN110036029A (zh) * 2016-11-17 2019-07-19 瑞泽恩制药公司 用抗angptl8抗体处理肥胖的方法
CN113453754A (zh) * 2018-12-21 2021-09-28 伊莱利利公司 抗angptl3/8复合物抗体和使用所述抗体的方法
CN113453754B (zh) * 2018-12-21 2024-05-03 伊莱利利公司 抗angptl3/8复合物抗体和使用所述抗体的方法
CN110613847A (zh) * 2019-10-23 2019-12-27 北京市心肺血管疾病研究所 一种抑制血管生成素样蛋白8的物质的应用
CN110613847B (zh) * 2019-10-23 2022-02-11 北京市心肺血管疾病研究所 一种抑制血管生成素样蛋白8的物质的应用
CN110694068A (zh) * 2019-11-06 2020-01-17 北京市心肺血管疾病研究所 一种抑制血管生成素样蛋白8的物质的应用
CN110694067A (zh) * 2019-11-06 2020-01-17 首都医科大学附属北京安贞医院 一种抑制血管生成素样蛋白8的物质的应用
CN111135303A (zh) * 2020-01-17 2020-05-12 北京市心肺血管疾病研究所 一种抑制血管生成素样蛋白8的物质的应用

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