CN108671228A - 抗原和抗原组合 - Google Patents

Abstract

NTHI蛋白抗原已得到鉴定并发现在数种流感嗜血杆菌病原性菌株中保守。已经从参考菌株中对其进行分离、克隆并对免疫原性进行了测试。还公开了免疫的方法和其来源的疫苗。

Description

抗原和抗原组合

本申请要求2012年4月26日提交的英国临时申请号1207385.4和2012年12月21日提交的欧洲申请号EP12199079.0的权益，其完整内容通过引用纳入本文以用于所有目的。

技术领域

本发明涉及流感嗜血杆菌免疫学和疫苗学的领域，尤其是不可分型流感嗜血杆菌(NTHI)。本发明提供了用于引起抗体和免疫应答并对抗流感嗜血杆菌菌株的抗原多肽和抗原多肽组合。本发明还提供了含有这类抗原的组合物，及其作为对抗流感嗜血杆菌的疫苗或药物的用途。本发明还提供了单独或以组合形式使用或者与其他疫苗共同使用的包含这类抗原的免疫原性组合物。本发明还提供了引起针对流感嗜血杆菌的免疫应答的方法，以及治疗和预防流感嗜血杆菌感染的方法。

背景技术

流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)是一种小型、非运动性、革兰氏阴性球杆菌。它是一种呼吸道病原体，诱发广谱的人感染，包括：无症状的上呼吸道建群(即携带)；延伸自建群的粘膜表面的感染以导致中耳炎(中耳发炎)、支气管炎、结膜炎、鼻窦炎、尿道感染和肺炎的感染；以及侵入性感染，如菌血症、脓毒性关节炎、会厌炎、肺炎、积脓症、心包炎、蜂窝织炎、骨髓炎和脑膜炎。流感嗜血杆菌是第一个公开了全基因组序列的细菌[1]。

流感嗜血杆菌菌株是有荚膜的(可分型)或无荚膜的(不可分型)，且存在六种主要的荚膜菌株血清类型(a至f)。流感嗜血杆菌引起的侵入性疾病中95％是由流感嗜血杆菌b型(‘Hib’)菌株引起的。Hib疾病最严重的表现是脑膜炎，但1980年代基于偶联的Hib荚膜糖的疫苗的引入已大幅降低了该疾病的发病率。

虽然Hib感染目前已被疫苗接种控制，但其他致病性流感嗜血杆菌感染仍然存在风险。例如，不可分型流感嗜血杆菌(NTHI)导致中耳炎(OM)，尤其是慢性和急性OM。OM很少与死亡率相关，但其与显著的发病率相关。失聪是最常见的OM并发症，而行为、教育和语言发育延迟是有溢液的早发OM的其他结果。急性OM是美国儿童中最常见的细菌感染。不可分型流感嗜血杆菌埃及生物群(H.influenzae biogroup aegyptius)引起流行性结膜炎和巴西紫热(BPF)[2]，其中BPF的死亡率高达70％。

迄今为止，抗生素是对抗统称为OM的临床实体谱的主要手段，但由于多重抗生素耐受性微生物的出现，针对OM的抗生素的广泛使用遭遇争议。向疫苗的发展缓慢，原因在于对OM的发病机制及其免疫应答的理解不完整。

血清型d菌株KW20的基因组序列[1,3]可用于理解基本的流感嗜血杆菌生物学，但相对于致病性流感嗜血杆菌菌株的用处不大，原因在于血清型d菌株通常不是病原体。已鉴定到来自致病性不可分型流感嗜血杆菌的多肽并将其作为疫苗候选物进行研究。参考文献4公开了来自致病性不可分型流感嗜血杆菌菌株的免疫原性多肽。

但是，仍需要提供能够保护抵御广谱的流感嗜血杆菌菌株的疫苗。流感嗜血杆菌是高适应性微生物，其具有较高的适应新的小生境(niche)并引起多种疾病的能力。适应性、毒力和定居因子可变化以使微生物适应不同的组织和宿主。因此，潜在的抗原承受高度选择压力，其结果是不同菌株间可能具有序列差异。

因此，仍然存在鉴定用于不可分型流感嗜血杆菌疫苗的其他和改良型抗原的需求，尤其是用于对抗多种NTHI引发的病变的疫苗。

可获自ncbi.nlm.nih.gov网站的基因组(genomes)栏目下的基因组数据库中列有致病性和非致病性流感嗜血杆菌基因组，其蛋白少则仅为2,500种，多则可达4,000种。但是，这种罗列没有指出哪些是在致病性NTHI的主要部分中保守的，如此保守的蛋白中的保守区域是什么，或者数千种潜在蛋白中哪些蛋白可用于疫苗以产生充分的免疫应答来保护抵御致病性NTHI，这需要筛选大量蛋白以鉴定最佳的候选物。

本发明的目的是提供其他和更好的抗原和/或组合，能够有效地针对流感嗜血杆菌的不同菌株产生免疫应答，用于开发能够预防和/或治疗由流感嗜血杆菌病原体(尤其是不可分型流感嗜血杆菌)引起的感染的疫苗。具体而言，目标在于提供多肽和多肽组合，用于改良的免疫原性组合物和疫苗以预防和/或治疗这类感染，尤其是急性中耳炎和慢性阻塞性肺病(COPD)。该多肽也可用于诊断目的，并作为抗生素靶点。

发明内容

本发明描述了免疫中有用的不可分型流感嗜血杆菌(NTHI)多肽，以进行单独或联合使用。这些多肽可与其他NTHI多肽联用。抗原可用于NTHI疫苗，但也可用作疫苗组分从而针对多种病原体进行免疫。

通过使用两种平行方法(即外膜囊泡(OMV)的反向疫苗学和蛋白组学分析)，可鉴定86种不同NTHI菌株中保守的抗原。反向疫苗学使用计算机分析以鉴定不同NTHI菌株的基因组中保守且可能是表面暴露的蛋白。第二种方法则着重通过分析NTHI产生的外膜囊泡中所含蛋白的质谱以鉴定抗原。

NTHI菌株的基因组包含约1800个基因。发明人从目前均为公开可得的15个完整的基因组外加基于地理分布选择的39种菌株以及来源于中耳炎芬兰集合(Finnishcollection)的32种菌株中鉴定到了274个保守的抗原。从这274个中，发明人选择了53种特别感兴趣的多肽。除了CGSHiGG_00130选自PittG，CGSHiGG_02400选自PittG，gi-145633184选自3655菌株，以及gi-145628236选自22.1-21菌株以外，这些抗原选自菌株NP86-028。

在53种抗原的组中，考虑到免疫原性和保守性标准，产生了以下其他选择。

·一组26个抗原在本文中称为“第一抗原组”

·一组6个抗原在本文中称为“第二抗原组”

·一组21个抗原在本文中称为“第三抗原组”

多数优选的抗原组在本文中称为“第一抗原组”。因此，本发明提供了一种免疫原性组合物，所述组合物包含至少一种抗原，优选包含一种或多种(即1、2、3、4、5、6或更多种)选自以下组的抗原：(1)NTHI0915(NT018)、(2)NTHI1416(NT024)、(3)NTHI2017(NT032)、(4)CGSHiGG_02400(NT038)、(5)NTHI1292(NT067)、(6)NTHI0877(NT001)、(7)NTHI0266(NT016)、(8)CGSHiGG_00130(NT052)、(9)NTHI1627(NT002)、(10)NTHI1109(NT026)、(11)NTHI0821(NT009)、(12)NTHI0409(NT025)、(13)NTHI1954(NT028)、(14)NTHI0371(NT029)、(15)NTHI0509(NT031)、(16)NTHI0449(NT015)、(17)NTHI1473(NT023)、(18)gi-145633184(NT100)、(19)NTHI1110(NT040)、(20)gi-46129075(NT048)、(21)gi-145628236(NT053)、(22)NTHI1230(NT066)、(23)NTHI0522(NT097)、(24)NT004、(25)NT014、(26)NT022。这些抗原显示积极的杀菌活性，如表III和表IV所示。

在第一抗原组中，优选的抗原选自以下亚组：(1)NTHI0915(NT018)抗原、(2)NTHI1416(NT024)抗原、(3)NTHI2017(NT032)抗原、(4)CGSHiGG_02400(NT038)、(5)NTHI1292抗原(NT067)、(6)NTHI0877(NT001)抗原、(8)NT052抗原、(24)NT004抗原、(25)NT014抗原、(26)NT022抗原、(7)NTHI0266NT016抗原。这些抗原均显示良好的如表II所示的纯化水平和表III和IV所报道的免疫原性效力。

特别优选的抗原是NT067、NT014、NT016、NT022。

因此，本发明提供了一种免疫原性组合物，所述组合物包含一种或多种(即1、2、3、4、5、6或更多种)抗原，所述抗原选自由所述“第一抗原组”组成的组。

发明人还鉴定到了以下6种多肽：(24)P48(NTHI0254，也定义为NT007)、(25)HtrA(NTHI1905，也定义为NT006)、(26)PE(NTHI0267，也定义为NT035)、(27)P26(NTHI0501，也定义为NT010)、(28)PHiD(NTHI0811，也定义为NT080)、(29)P6(NTHI0501，也定义为NT081)。这组6个抗原在本文中称为“第二抗原组”。

发明人还鉴定到了以下22种多肽：(30)NTHI0532(NT013)、(31)NTHI0363(NT106)、(32)NTHI0370(NT107)、(33)NTHI0205(NT108)、(34)NTHI0374(NT109)、(35)NTHI0579(NT110)、(36)NTHI0837(NT111)、(37)NTHI0849(NT112)、(38)NTHI0921(NT113)、(39)NTHI0995(NT114)、(40)NTHI1091(NT115)、(41)NTHI1169(NT116)、(42)NTHI1208(NT117)、(43)NTHI1318(NT118)、(44)NTHI1796(NT123)、(45)NTHI1930(NT124)、(46)NTHI1565(NT119)、(47)NTHI1569(NT120)、(48)NTHI1571(NT121)、(49)NTHI1667(NT122)、(50)NTHI0588(NT061)、(51)NTHI0915(NT017)。这组22个抗原在本文中称为“第三抗原组”。

在一个实施方式中，组合物包含至少一种(即1、2、3、4、5、6或更多种)选自第一抗原组的抗原和/或至少一种(即1、2、3、4、5、6或更多种)选自第二抗原组的抗原和/或至少一种(即1、2、3、4、5、6或更多种)选自第三抗原组的抗原。来自第一抗原组的抗原可选自最优选的抗原亚组。

优选地，本发明提供了一种免疫原性组合物，所述组合物包含选自第一抗原组或第二抗原组或第三抗原组中任意一个的抗原。

因此，本发明还提供了一种免疫原性组合物，所述组合物包含抗原组合，所述组合包含两种或多种(即2、3、4、5、6或更多种)抗原，所述抗原选自由“第一抗原组”和/或“第二抗原组”和/或“第三抗原组”组成的组。

当组合物包含来自“第二抗原组”的抗原时，优选所述组合物还包含(i)至少一种来自“第二抗原组”的其他抗原或者(i)至少一种来自“第一抗原组”或“第三抗原组”的抗原。因此，本发明不包括仅包含其自身抗原组分的来自“第二抗原组”的单一抗原。当组合物包含两种或多种来自“第二抗原组”的抗原时，优选所述组合物应包含至少一种抗原，所述抗原不是(a)P48抗原(b)HtrA抗原(c)PE抗原或(d)P26抗原。因此，在一些实施方式中，本发明不包括仅含有P48、HtrA、PE和/或P26的组合。类似地，在一些实施方式中，本发明不包括特定的杂交抗原，所述杂交抗原包含仅来自P48、HtrA、PE和/或P26的‘X’部分。

在第一抗原组的11个优选抗原中，可能有55对不同抗原对。所有这类抗原对均在本文中公开并且是本发明的一部分。因此本发明提供一种免疫组合物，所述组合物包含一对抗原，该抗原对是所述55对之一。

在一个实施方式中，组合物包含至少一种(即1、2、3、4、5、6或更多种)选自第一抗原组的抗原和/或至少一种(即1、2、3、4、5、6或更多种)选自第二抗原组的抗原和/或至少一种(即1、2、3、4、5、6或更多种)选自第三抗原组的抗原。

在所有情况下，来自第一抗原组的抗原可优选地选自最优选的以下亚组：(1)NTHI0915(NT018)、(2)NTHI1416(NT024)、(3)NTHI2017(NT032)、(4)CGSHiGG_02400(NT038)、(5)NTHI1292(NT067)、(6)NTHI0877(NT001)、(8)NT052、(24)NT004、(25)NT014、(26)NT022、(7)NT016。

本发明还提供了一种免疫组合物，所述组合物包含抗原组，所述抗原组包含两种或多种(即2、3、4或5种)选自下组的抗原：(1)NTHI0915(NT018)、(2)NTHI1416(NT024)、(3)NTHI2017(NT032)、(4)CGSHiGG_02400(NT038)、(5)NTHI1292(NT067)、(6)NTHI0877(NT001)、(8)NT052、(24)NT004、(25)NT014、(26)NT022、(7)NT016。所述组合物还可包含佐剂，例如包含水包油乳液或铝盐的佐剂。

参考文献5讨论了不可分型流感嗜血杆菌抗原，不限于可潜在用于疫苗的候选物。参考文献6至10分别涉及不可分型流感嗜血杆菌多肽P48、HtrA、PE和P26且不限于其免疫原性潜能。参考文献5还在较多数目的疫苗候选物中单独提到了HtrA、PE和P26，且例如参考文献10涉及多肽PE。然而，这些属于“第二抗原组”的抗原没有联合使用的描述。如今，出乎意料地发现一种或多种这些抗原(第二抗原组)与至少一种“第一抗原组”所列抗原的组合特别适用于产生针对不可分型流感嗜血杆菌的保护性免疫应答，从而实现上文提到的本发明的目标。

本发明的优选组合是两种或多种抗原协同作用的组合。因此，通过联合给药保护免遭NTHI病原体侵扰的效果超过了仅由其单独保护功效叠加的预期效果。

第一抗原组

NT018抗原

“NT018”抗原标注为包含TPR重复的蛋白，且还标注为细胞色素c成熟血红素裂解酶亚基CcmH2。其已标注为菌株86-028NP中的NTHI0915。所述序列在所有分析的菌株中高度保守且预测为膜结合金属肽酶。NT018是表面暴露的，如表III所示。已从另一种不可分型菌株Fil76(一种分离自芬兰中耳炎集合的菌株)中克隆并表达了NT018。

有用的NT018抗原可引发识别SEQ ID NO:1的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:1具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:1的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT018蛋白包含SEQ ID NO:1的变体，如已克隆并表达并测试免疫原性的SEQ ID NO:49(表III、IV)。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:1的表位。其他优选片段缺少SEQ ID NO:1C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或其N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、26、27、28或更多个)氨基酸，而保留SEQ IDNO:1的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT018抗原可与NT018天然的28个N末端氨基酸(MNFTLIFILTTLVVALICFYPLLRQFKA；SEQ ID NO:69)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT024抗原

“NT024”抗原标注为“假拟蛋白”，且已标注为基因组86-028NP中的NTHI1416。已从Fi176菌株中克隆并表达了该抗原。

有用的NT024抗原可引发识别SEQ ID NO:2的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:2具有50％或更高的相同性(如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:2的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些NT024蛋白包含SEQ ID NO:2的变体，如从菌株Fi176克隆的SEQ ID NO:50。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:2的表位。其他优选片段缺少SEQ ID NO:2C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:2的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT024抗原可与NT024天然的20个N末端氨基酸(MKLKLFFHIVLLCFSLPVWA；SEQ ID NO:70)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT032抗原

“NT032”抗原标注为“假拟蛋白”，且已标注为基因组86-028NP中的NTHI2017。测试的菌株中最保守的结构域被描述为“细菌OB折叠(BOF)蛋白”。已从Fi176菌株中克隆并表达了该抗原。

有用的NT032抗原可引发识别SEQ ID NO:3的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:3具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:3的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT032蛋白包含SEQ ID NO:3的变体，如从Fi176菌株克隆的SEQ ID NO:51。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:3的表位。其他优选片段缺少SEQ ID NO:3C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:3的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT032抗原可与NT032天然的19个N末端氨基酸(MKKFALATIFALATTSAFA；SEQ ID NO:71)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT067抗原

“NT067”抗原标注为ABC转运蛋白，且已提出其假拟功能类似周质寡肽结合蛋白OppA。在菌株中86-028NP已标注为NTHI1292。已从Fi176菌株中克隆并表达了该抗原。

有用的NT067抗原可引发识别SEQ ID NO:5的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:5具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:5的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT067蛋白包含SEQ ID NO:5的变体，如从Fi176菌株克隆的SEQ ID NO:52。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:5的表位。其他优选片段缺少SEQ ID NO:5C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:5的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT067抗原可与NT067天然的20个N末端氨基酸(MQHKLLFSAIALALSYSVQA；SEQ ID NO:72)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT038抗原

该抗原称为Hia(流感嗜血杆菌粘附素)蛋白[11]，且已在菌株CGSHiGG_02400中鉴定为长度282个氨基酸，但它是最初描述于菌株86-028NP或其他NTHi菌株的Hia(616个氨基酸)的截短形式。已从R2846菌株中克隆了该抗原。

有用的NT038抗原可引发识别SEQ ID NO:4的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:4具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:4的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT038蛋白包含SEQ ID NO:4的变体，如SEQ ID NO:53，其缺少最初的23个天然N末端氨基酸和位于C末端的102个氨基酸。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:4的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:4C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸(甚至多至102个氨基酸)，和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、23、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:4的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT038抗原可与NT038天然的23个N末端氨基酸(MPFQYVTEDGKTVVKVGNGYYEA；SEQ ID NO:73)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT001抗原

该抗原标注为基因组86-028NP中NTHI0877，且称为D-甲硫氨酸结合脂蛋白MetQ。MetD是ABC转运体，编码DL甲硫氨酸摄取系统。该抗原最初公开为BASB202(28Kda)[12,13]，并提出其作为针对NTHI的疫苗的用途。该抗原与参考文献(4)中描述的同源抗原共有99,63％的匹配编码，且已发现其在本发明涉及的所有菌株中具有良好的保守性。本发明中，该抗原从Fi176菌株中克隆并表达。

有用的NT001抗原可引发识别SEQ ID NO:6的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:6具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:6的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT001蛋白包含SEQ ID NO:4的变体，如SEQ ID NO:54。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:6的表位。其他优选片段缺少SEQ ID NO:6C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、21、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:6的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT001抗原可与NT001天然的21个N末端氨基酸(MKLKQLFAITAIASALVLTGC；SEQ ID NO:74)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT016抗原

该抗原标注为菌株86-028NP中的NTHI0266，并描述为假拟脂蛋白。已从Fi176菌株中克隆并表达了该抗原。

有用的NT016抗原可引发识别SEQ ID NO:7的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:7具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:7的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT016蛋白包含SEQ ID NO:7的变体，如SEQ ID NO:55。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:7的表位。其他优选片段缺少SEQ ID NO:7C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、19、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:7的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT016抗原可与NT016天然的16个N末端氨基酸(MRKIKSLALLAVAALVIGC；SEQ ID NO:75)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT052抗原

该抗原标注为来自PittGG菌株的CGSHiGG_00130。它是含Sel1结构域蛋白家族的一部分。已从R2846菌株中克隆了该抗原并将克隆的序列报道为SEQ ID NO:8。虽然从R2846克隆的序列与标注为CGSHiGG_00130的序列仅有64.16％的相同性，但已显示沿该序列有保守的Sel1结构域重复出现，用于提供有效的抗原性。该重复的共有序列是SEQ ID NO:EAVKWYRKAAEQ。

有用的NT052抗原可引发识别SEQ ID NO:8的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:8具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:8的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT052蛋白包含SEQ ID NO:8的变体，如SEQ ID NO:56。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:8的表位。其他优选片段缺少SEQ ID NO:8C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:8的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT052抗原可与NT052天然的11个N末端氨基酸(MLLFILSIAWA；SEQ IDNO:76)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT002抗原

该抗原标注为86-026NP菌株中的NTHI1627以及脂蛋白。已从Fi176菌株中克隆并表达了该抗原。

有用的NT002抗原可引发识别SEQ ID NO:9的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:9具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:9的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT002蛋白包含SEQ ID NO:9的变体，如SEQ ID NO:57。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:9的表位。其他优选片段缺少SEQ ID NO:9C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:9的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT002抗原可与NT002天然的18个N末端氨基酸(MKVYKSFLIATASLFLFA；SEQ ID NO:77)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

本发明的NT002抗原可以是脂蛋白，例如在N末端半胱氨酸处脂化。

NT026抗原

该抗原标注为86-026NP菌株中的假拟蛋白NTHI1109。其预测为胞质膜蛋白。已从Fi176菌株中克隆并表达了该抗原。

有用的NT026抗原可引发识别SEQ ID NO:10的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:10具有50％或更高的相同性(如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:10的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更高(如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更高)。这些NT026蛋白包含从Fi176菌株克隆的SEQ ID NO:10的变体，如SEQ ID NO:58。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:10的表位。其他优选片段缺少SEQ ID NO:10C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:10的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT026抗原可与NT026天然的24个N末端氨基酸(MQKGMTLVELLIGLAIISIVLNFA；SEQ ID NO:78)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT009抗原

该抗原标注为86-026NP菌株中的NTHI0821并且是OMP85家族蛋白的一部分。该抗原位于细菌外膜中。已从Fi176菌株中克隆并表达了该抗原。

有用的NT009抗原可引发识别SEQ ID NO:11的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:11具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:11的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT009蛋白包含SEQ ID NO:11的变体，如从Fi176克隆的SEQ ID NO:59。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:11的表位。其他优选片段缺少SEQ ID NO:11C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、22、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:11的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT009抗原可与NT009天然的22个N末端氨基酸(MNKTLLKLTALFLALNCFPAFA；SEQ ID NO:79)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT025抗原

该抗原标注为86-026NP菌株中的NTHI0409且属于IV型菌毛素亚基蛋白家族。已从Fi176菌株中克隆并表达了该抗原。

有用的NT025抗原可引发识别SEQ ID NO:12的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:12具有50％或更高的相同性(例如，60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:12的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT025蛋白包含SEQ ID NO:12的变体，如从Fi176克隆的SEQ ID NO:60。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:12的表位。其他优选片段缺少SEQ ID NO:12C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、23、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:12的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT025抗原可与NT025天然的23个N末端氨基酸(MKLTTQQTLKKGFTLIELMIVIA；SEQ ID NO:80)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT028抗原

该抗原标注为86-026NP菌株中的NTHI1954以及脂蛋白NlpC。已从Fi176菌株中克隆并表达了该抗原。

有用的NT028抗原可引发识别SEQ ID NO:13的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:13具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:13的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT028蛋白包含SEQ ID NO:13的变体，如从Fi176克隆的SEQ ID NO:61。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:13的表位。其他优选片段缺少SEQ ID NO:13C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:13的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT028抗原可与NT028天然的21个N末端氨基酸(MLKRILVIIGLAVLATACSNA；SEQ ID NO:81)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

本发明的NT028抗原可以是脂蛋白，例如在N末端半胱氨酸处脂化。

NT029抗原

该抗原标注为86-026NP菌株中的NTHI0371以及血红素/血液结合素结合蛋白A，属于外膜蛋白家族。已从R2846菌株中克隆并表达了该抗原。

有用的NT029抗原可引发识别SEQ ID NO:14的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:14具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:14的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT029蛋白包含SEQ ID NO:14的变体，如从R2846菌株克隆的SEQ ID NO:62。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:14的表位。其他优选片段缺少SEQ ID NO:14C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:14的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT029抗原可与NT029天然的21个N末端氨基酸(MYKLNVISLIILTTYTGATYA；SEQ ID NO:82)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT031抗原

该抗原标注为86-026NP菌株中的饥饿诱导外膜脂蛋白NTHI0509。已从R2846菌株中克隆并表达了该抗原。

有用的NT031抗原可引发识别SEQ ID NO:15的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:15具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:15的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT031蛋白包含SEQ ID NO:15的变体，如从R2846菌株克隆并表达的SEQ ID NO:63。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:15的表位。其他优选片段缺少SEQ ID NO:15C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、18、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:15的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT031抗原可与NT031天然的18个N末端氨基酸(MKGKITLFFTALCFGLTG；SEQ ID NO:83)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

本发明的NT031抗原可以是脂蛋白，例如在N末端半胱氨酸处脂化。

NT015抗原

该抗原标注为86-026NP菌株中的不透明相关蛋白OapB NTHI0449。已从Fi176菌株中克隆并表达了该抗原。

有用的NT015抗原可引发识别SEQ ID NO:16的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:16具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:16的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT015蛋白包含SEQ ID NO:16的变体，如从Fi176克隆并表达的SEQ ID NO:64。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:16的表位。其他优选片段缺少SEQ ID NO:16C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:16的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT015抗原可与NT015天然的17个N末端氨基酸(MLKKTSLIFTALLLAGC；SEQID NO:84)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT023抗原

该抗原标注为86-026NP菌株中的外膜脂蛋白PCP，NTHI1473。已从Fi176菌株中克隆并表达了该抗原。

有用的NT023抗原可引发识别SEQ ID NO:17的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:17具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:17的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT023蛋白包含SEQ ID NO:17的变体，如从菌株Fi176克隆并表达的SEQ ID NO:65。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:17的表位。其他优选片段缺少SEQ ID NO:17C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:17的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT023抗原可与NT023天然的20个N末端氨基酸(MKKTNMALALLVAFSVTGCA；SEQ ID NO:85)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

本发明的NT023抗原可以是脂蛋白，例如在N末端半胱氨酸处脂化。

NT100抗原

该抗原标注为“推定的氧肟酸盐型含铁细胞受体”且在NCBI中是来自菌株3655的gi-145633184。已从R246菌株中克隆了该抗原。

有用的NT100抗原可引发识别SEQ ID NO:18的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:18具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:18的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT100蛋白包含SEQ ID NO:18的变体，如SEQ ID NO:66。(b)的优选片段包含来自SEQ IDNO:18的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:18C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:18的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT100抗原可与NT100天然的30个N末端氨基酸(MDLGPIYNTRDINDGKVINIDNPNYTNPVA；SEQ ID NO:86)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT040抗原

该抗原标注为86-026NP菌株中的假拟蛋白NTHI1110。已从R2846菌株中克隆并表达了该抗原。

有用的NT040抗原可引发识别SEQ ID NO:19的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:19具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:19的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT040蛋白包含SEQ ID NO:19的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:19的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:19C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:19的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT040抗原可与NT040天然的26个N末端氨基酸(MMKTLLKGQTLLALMISLTLSSLLLL；SEQ ID NO:87)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT048抗原

该抗原标注为菌株86-028NP中的NTHI1169。已从R2846菌株中克隆并表达了该抗原。

有用的NT048抗原可引发识别SEQ ID NO:20的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:20具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:20的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT048蛋白包含SEQ ID NO:20的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:20的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:20C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:20的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT048抗原可与NT048天然的18个N末端氨基酸(MKSVPLITGGLSFLLSAC；SEQ ID NO:88)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT053抗原

该抗原标注为R2846菌株中的gi-145628236并已从所述菌株中克隆。

有用的NT053抗原可引发识别SEQ ID NO:21的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:21具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:21的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT053蛋白包含SEQ ID NO:21的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:21的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:21C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:21的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT053抗原可与NT053天然的N末端Met或者替代的N末端序列(例如Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT066抗原

该抗原标注为NP86-028菌株中的NTHI1230且定位于细菌的周质中。已从Fi176菌株中克隆并表达了该抗原。

有用的NT066抗原可引发识别SEQ ID NO:22的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:22具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:22的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT066蛋白包含SEQ ID NO:22的变体，如SEQ ID NO:67。(b)的优选片段包含来自SEQ IDNO:22的表位。其他优选片段缺少SEQ ID NO:22C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、27、30、33或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:22的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT066抗原可与NT066天然的33个N末端氨基酸(MKIYLRFVWILIIILNFLLNLFITTNGVIIVNA；SEQ ID NO:90)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT097抗原

该抗原标注为NP86-028菌株中的NTHI0522并描述为预测存在于外膜环境中的长链脂肪酸FadL样转移蛋白。已从R2846菌株中克隆并表达了该抗原。

有用的NT097抗原可引发识别SEQ ID NO:23的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:23具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:23的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT097蛋白包含SEQ ID NO:23的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:23的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:23C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或自N末端的一个或多个(如1、2、23、4、5、6、7、8、9、10、15、20、22、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:23的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT097抗原可与NT097天然的22个N末端氨基酸(MKKFNQSILATAMLLAAGGANA；SEQ ID NO:91)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT004抗原

该抗原标注为外膜环境中来自菌株PittGG的假拟蛋白CGSHiGG_08215。已从Fi176菌株中克隆并表达了该抗原。

有用的NT004抗原可引发识别SEQ ID NO:122的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:122具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:122的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT004蛋白包含SEQ ID NO:122的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:122的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:122C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或自N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、22、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:122的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT004抗原可与NT004天然的20个N末端氨基酸(MKKKNQILVSLSIVALLGGC；SEQ ID NO:125)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT014抗原

该抗原标注为来自菌株Rd KW20的假拟蛋白HI1658。已从Fi176菌株中克隆并表达了该抗原。

有用的NT014抗原可引发识别SEQ ID NO:123的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:123具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:123的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT014蛋白包含SEQ ID NO:123的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:123的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:123C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或自N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、22、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:123的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT014抗原可与NT014天然的22个N末端氨基酸(MTLSPLKKLAILLGATIFLQGC；SEQ ID NO:126)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT022抗原

该抗原标注为来自菌株NP86-028的NTHI0830并鉴定为可能的外膜抗原脂蛋白B。已从Fi176菌株中克隆并表达了该抗原。还发现该抗原含有LytM催化结构域并且是表面暴露和分泌的。

有用的NT022抗原可引发识别SEQ ID NO:124的抗体(例如，在给予人时)和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:124具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:124的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT022蛋白包含SEQ ID NO:124的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:124的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:124C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或自N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、22、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:124的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT022抗原可与NT022天然的18个N末端氨基酸(MKKSFLLLPLSLVVLSAC；SEQ ID NO:127)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

第二抗原组

抗原P48

P48多肽在文献中标注为Na(+)-易位NADH-醌还原酶亚基A。出于参比目的，P48的全长氨基酸序列在本文中称为SEQ ID NO:24。

本发明所用的优选P48多肽包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:24具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)，例如90％或更高的相同性，或者95％或更高的相同性，或者99％或更高的相同性；和/或(b)包含SEQ ID NO:24的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多；例如20或更多；或者例如50或更多；或者例如80或更多)。这些P48多肽包含SEQ ID NO:24的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:24的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:24C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:24的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

理想情况下，本发明的P48抗原不具有P48天然的25个N末端氨基酸(MITIKKGLDLPIAGKPAQVIHSGNA；SEQ ID NO:92)，因此其应与替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

根据本发明，P48抗原可优选与本文所述的抗原HtrA、PE、P26、PHiD和/或P6中的一个或多个(例如1、2或3个)组合，具体而言例如与HtrA组合。抗原HtrA

HtrA多肽在文献中标注为周质丝氨酸蛋白酶do/HhoA样前体，并描述为热休克蛋白或伴侣蛋白。出于参比目的，HtrA的全长氨基酸序列在本文中称为SEQ ID NO:25。

本发明所用的优选HtrA多肽包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:25具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)，例如90％或更高的相同性，或者95％或更高的相同性，或者99％或更高的相同性；和/或(b)包含SEQ ID NO:25的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多；例如20或更多；或者例如50或更多；或者例如80或更多)。这些HtrA多肽包含SEQ ID NO:25的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:25的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:25C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:25的至少一个表位。其它片段省去一个或多个多肽结构域。

理想情况下，本发明的HtrA抗原不具有HtrA天然的26个N末端氨基酸(MKKTRFVLNSIALGLSVLSTSFVAQA；SEQ ID NO:93)，因此其应与替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

根据本发明，HtrA抗原可优选与本文所述的抗原P48、PE、P26、P6和/或PHiD中的一个或多个(例如1、2或3个)组合，具体而言例如与P48组合。抗原PE

PE多肽标注为脂蛋白–玻璃体结合蛋白，或结合IgD并作为2型肺泡细胞的粘附剂。出于参比目的，PE的全长氨基酸序列在本文中称为SEQ ID NO:26。

本发明所用的优选PE多肽包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:26具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)，例如90％或更高的相同性，或者95％或更高的相同性，或者99％或更高的相同性；和/或(b)包含SEQ ID NO:26的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150或更多；例如20或更多；或者例如50或更多；或者例如80或更多)。这些PE多肽包括SEQID NO:26的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:26的表位。其它优选片段缺少SEQ IDNO:26C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ IDNO:26的至少一个表位。其它片段省去一个或多个多肽结构域。

理想情况下，本发明的PE抗原不具有PE天然的16个N末端氨基酸(MKKIILTLSLGLLTAC；SEQ ID NO:94)，因此其应与替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

根据本发明，PE抗原可优选与本文所述的抗原P48、HtrA、P26、P6和/或PHiD中的一个或多个(例如1、2或3个)组合。

抗原P26

P26多肽也称为外膜蛋白26。该抗原标注为Skp蛋白家族的成员，其推定的功能是外膜蛋白的移位[5]。出于参比目的，P26的全长氨基酸序列在本文中称为SEQ ID NO:27。

本发明所用的优选P26多肽包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:27具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)，例如90％或更高的相同性，或者95％或更高的相同性，或者99％或更高的相同性；和/或(b)包含SEQ ID NO:27的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150或更多；例如20或更多；或者例如50或更多；或者例如80或更多)。这些P26多肽包含SEQID NO:27的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:27的表位。其它优选片段缺少SEQ IDNO:27C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ IDNO:27的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

根据本发明，P26抗原可优选与本文所述的抗原P48、HtrA、PE、PHiD和/或P6中的一个或多个(例如1、2或3个)组合，具体而言可与本文所述的P48、HtrA和或PE中的部分或全部组合。

PHiD抗原

PHiD抗原也称为“蛋白D”并主要用作糖偶联物NTHi疫苗方法中的运载蛋白[95]。已从Fi176菌株中克隆并表达了该抗原。

本发明所用的优选PHiD多肽包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:28具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)，例如90％或更高的相同性，或者95％或更高的相同性，或者99％或更高的相同性；和/或(b)包含SEQ ID NO:28的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150或更多；例如20或更多；或者例如50或更多；或者例如80或更多)。这些PHiD多肽包含SEQ ID NO:28的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:28的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:28C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:28的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的PhiD抗原可与PhiD天然的18个N末端氨基酸(MKLKTLALSLLAAGVLAG；SEQID NO:95)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

根据本发明，PHiD抗原可优选与本文所述的抗原P48、HtrA、PE、P26和/或P6中的任意一个或多个(例如1、2或3个)组合。

本发明的PhiD抗原可以是脂蛋白，例如在N末端半胱氨酸处脂化。

P6抗原

P6抗原也称为OMP 6(外膜蛋白6)[14]。已从Fi176菌株中克隆并表达了该抗原。

本发明所用的优选P6多肽包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:29具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)，例如90％或更高的相同性，或者95％或更高的相同性，或者99％或更高的相同性；和/或(b)包含SEQ ID NO:29的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150或更多；例如20或更多；或者例如50或更多；或者例如80或更多)。这些P6多肽包含SEQID NO:29的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:29的表位。其它优选片段缺少SEQ IDNO:29C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ IDNO:29的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的P6抗原可与P6天然的19个N末端氨基酸(MNKFVKSLLVAGSVAALAA；SEQ IDNO:96)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

根据本发明，P6抗原可优选与本文所述的抗原P48、HtrA、PE、P26和/或PHiD中的任意一个或多个(例如1、2或3个)组合。

本发明的P6抗原可以是脂蛋白，例如在N末端半胱氨酸处脂化。

第三抗原组

NT013抗原

“NT013”抗原标注为包含TPR重复的蛋白，且还标注为细胞色素c成熟血红素裂解酶亚基CcmH2。其已公开为菌株86-028NP中的NTHI0532。NT013已标注为属于金属蛋白酶蛋白家族且其具有LytM催化结构域。

有用的NT013抗原可引发抗体(例如，在给予人时)，所述抗体识别SEQ ID NO:30和/或可包括以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:30具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:20的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT013蛋白包括SEQ ID NO:30的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:30的表位。其他优选片段缺少SEQ ID NO:30C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、30、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:30的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT013抗原可与NT013天然的42个N末端氨基酸(MPVQHVKLARDRRKKRTYIKVGVFFVAILLILTGILLTIKDK；SEQ ID NO:97)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT106抗原

“NT106”抗原标注为脂蛋白，且已公开为基因组86-028NP中的NTHI0363。

有用的NT106抗原可引发抗体(例如，在给予人时)，所述抗体识别SEQ ID NO:31和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:31具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包括SEQ ID NO:31的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT106蛋白包括SEQ ID NO:31的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:31的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:31C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:31的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT106抗原可与NT106天然的17个N末端氨基酸(MKKIILNLVTAIILAGC；SEQID NO:98)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

本发明的NT106抗原可以是脂蛋白，例如在N末端半胱氨酸处脂化。

NT107抗原

“NT107”抗原标注为“血红素/血液结合素结合蛋白B”，且已公开为基因组86-028NP中的NTHI0370。

有用的NT107抗原可引发抗体(例如，在给予人时)，所述抗体识别SEQ ID NO:32和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:32具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:20的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT107蛋白包括SEQ ID NO:32的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:32的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:32C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:32的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT107抗原可与NT107天然的28个N末端氨基酸(MKMRPRYSVIASAVSLGFVLSKSVMALG；SEQ ID NO:99)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT108抗原

“NT108”抗原标注为胞壁质转糖苷酶A脂蛋白。在菌株86-028NP中已标注为NTHI0205。

有用的NT108抗原可引发抗体(例如，在给予人时)，所述抗体识别SEQ ID NO:33和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:33具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包括SEQ ID NO:33的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT108蛋白包括SEQ ID NO:33的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:33的表位。其他优选片段缺少SEQ ID NO:33C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:33的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT108抗原可与NT108天然的24个N末端氨基酸(MSVCKPFWFKTFSISIITALLVSC；SEQ ID NO:100)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

本发明的NT108抗原可以是脂蛋白，例如在N末端半胱氨酸处脂化。

NT109抗原

该抗原标注为硝酸盐/亚硝酸盐传感蛋白NarQ并已鉴定为86-028NP菌株中的NTHI0374并发现在所分析的菌株中保守。

有用的NT109抗原可引发抗体(例如，在给予人时)，所述抗体识别SEQ ID NO:34和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:34具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含SEQ ID NO:20的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT109蛋白包括SEQ ID NO:34的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:34的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:34C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:34的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT109抗原可与NT109天然的33个N末端氨基酸(MYTKGSVSTRIAKYLFIILIVAGVISSLSLAIM；SEQ ID NO:101)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT110抗原

该抗原已标注为基因组86-028NP中的NTHI0579并称为推定的溶血TlyC。已发现该抗原与外膜相关联。

有用的NT110抗原可引发识别SEQ ID NO:35的抗体(例如，在给予人时)。

(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:35的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:35C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:35的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT110抗原可与NT110天然的30个N末端氨基酸(MIMELFHTILAIVALILSSAVVSSAEISLA；SEQ ID NO:102)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT111抗原

该抗原标注为菌株86-028NP中的NTHI0837，并描述为假拟脂蛋白。

有用的NT111抗原可引发抗体(例如，在给予人时)，所述抗体识别SEQ ID NO:36和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:36具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包括SEQ ID NO:36的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT111蛋白包括SEQ ID NO:36的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:36的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:36C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:36的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT111抗原可与NT111天然的19个N末端氨基酸(MKKTLVAALISSVILLTGC；SEQ ID NO:103)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

本发明的NT110抗原可以是脂蛋白，例如在N末端半胱氨酸处脂化。

NT112抗原

该抗原已标注为来自NP86-028菌株的NTHI0849。其标注为VacJ脂蛋白。

有用的NT112抗原可引发抗体(例如，在给予人时)，所述抗体识别SEQ ID NO:37和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:37具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包括SEQ ID NO:37的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT112蛋白包括SEQ ID NO:37的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:37的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:37C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:37的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT112抗原可与NT112天然的19个N末端氨基酸(MKTKVILTALLSAIALTGC；SEQ ID NO:104)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

本发明的NT112抗原可以是脂蛋白，例如在N末端半胱氨酸处脂化。

NT113抗原

该抗原标注为86-026NP菌株中的NTHI0921以及脂蛋白。

有用的NT113抗原可引发抗体(例如，在给予人时)，所述抗体识别SEQ ID NO:38和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:38具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包括SEQ ID NO:38的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT113蛋白包括SEQ ID NO:38的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:38的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:38C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:38的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT113抗原可与NT113天然的16个N末端氨基酸(MKKYLLLALLPFLYAC；SEQID NO:105)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

本发明的NT113抗原可以是脂蛋白，例如在N末端半胱氨酸处脂化。

NT114抗原

该抗原标注为可溶性裂解性胞壁质转糖苷酶蛋白以及86-026NP菌株中的NTHI0995。

有用的NT114抗原可引发抗体(例如，在给予人时)，所述抗体识别SEQ ID NO:39和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:39具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包括SEQ ID NO:39的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT114蛋白包括SEQ ID NO:39的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:39的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:39C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:39的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT114抗原可与NT114天然的19个N末端氨基酸(MKKVALISLCIFTALSAFA；SEQ ID NO:106)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT115抗原

该抗原标注为86-026NP菌株中的NTHI1091以及推定的LptE脂蛋白。其定位在胞外环境中。

有用的NT115抗原可引发抗体(例如，在给予人时)，所述抗体识别SEQ ID NO:40和/或可包括以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:40具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包括SEQ ID NO:40的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT115蛋白包括SEQ ID NO:40的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:40的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:40C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:40的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT115抗原可与NT115天然的35个N末端氨基酸(MKYLHFTRPTIKVIFMINSIKTLLLIATLAILSAC；SEQ ID NO:107)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

本发明的NT115抗原可以是脂蛋白，例如在N末端半胱氨酸处脂化。

NT116抗原

该抗原描述为86-026NP菌株中的NTHI1169且属于转铁蛋白结合蛋白家族。

有用的NT116抗原可引发抗体(例如，在给予人时)，所述抗体识别SEQ ID NO:41和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:41具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包括SEQ ID NO:41的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT116蛋白包括SEQ ID NO:41的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:41的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:41C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:41的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT116抗原可与NT116天然的18个N末端氨基酸(MKSVPLITGGLSFLLSAC；SEQ ID NO:108)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT117抗原

该抗原标注为86-026NP菌株中的NTHI1208以及推定的转谷氨酰胺酶。其定位于外膜中。

有用的NT117抗原可引发抗体(例如，在给予人时)，所述抗体识别SEQ ID NO:42和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:42具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包括SEQ ID NO:42的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT117蛋白包括SEQ ID NO:42的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:42的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:42C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:42的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT117抗原可与NT117天然的19个N末端氨基酸(MKKLIAVAVFSACGSLAHA；SEQ ID NO:109)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT118抗原

该抗原标注为86-026NP菌株中的NTHI1318以及假拟蛋白。

有用的NT118抗原可引发抗体(例如，在给予人时)，所述抗体识别SEQ ID NO:43和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:43具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包括SEQ ID NO:43的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT118蛋白包括SEQ ID NO:43的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:43的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:43C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:43的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT118抗原可与NT118天然的18个N末端氨基酸(MNIRWNVILGVIALCALA；SEQ ID NO:110)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT119抗原

该抗原标注为86-028NP菌株中的NTHI1565假拟蛋白。

有用的NT119抗原可引发抗体(例如，在给予人时)，所述抗体识别SEQ ID NO:114和/或可包含以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:114具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包括SEQ ID NO:114的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT119蛋白包括SEQ ID NO:114的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:114的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:114C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:114的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT119抗原可与NT119天然的26个N末端氨基酸(MRFTKTLFTTALLGASIFSFQSTAWA；SEQ ID NO:118)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT120抗原

该抗原标注为86-028NP菌株中的NTHI1569假拟蛋白。

有用的NT120抗原可引发抗体(例如，在给予人时)，所述抗体识别SEQ ID NO:115和/或可包括以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:115具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包括SEQ ID NO:115的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT120蛋白包括SEQ ID NO:115的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:115的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:115C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:115的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT120抗原可与NT120天然的26个N末端氨基酸(MKLTKTLLTTALFGASVFSFQSTAWA；SEQ ID NO:119)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT121抗原

该抗原标注为86-028NP菌株中的NTHI1571假拟蛋白。

有用的NT121抗原可引发抗体(例如，在给予人时)，所述抗体识别SEQ ID NO:116和/或可包括以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:116具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包括SEQ ID NO:116的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT121蛋白包括SEQ ID NO:116的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:116的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:116C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:116的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT121抗原可与NT121天然的26个N末端氨基酸(MKLTKTLLTTALLGASVFSFQSTAWA；SEQ ID NO:120)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT122抗原

该抗原标注为86-028NP菌株中的NTHI1667假拟蛋白。

有用的NT122抗原可引发抗体(例如，在给予人时)，所述抗体识别SEQ ID NO:117和/或可包括以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:117具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包括SEQ ID NO:117的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT122蛋白包括SEQ ID NO:117的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:117的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:117C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:117的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT122抗原可与NT122天然的23个N末端氨基酸(MEKIMKKLTLALVLGSALAVTGC；SEQ ID NO:121)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT123抗原

该抗原标注为86-026NP菌株中的锌蛋白酶NTHI1796。

有用的NT123抗原可引发抗体(例如，在给予人时)，所述抗体识别SEQ ID NO:44和/或可包括以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:44具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包括SEQ ID NO:44的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT123蛋白包括SEQ ID NO:44的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:44的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:44C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:44的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT123抗原可与NT123天然的17个N末端氨基酸(MKKTTALFLLIFSLIAC；SEQID NO:111)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT124抗原

该抗原标注为86-026NP菌株中的假拟蛋白NTHI1930。

有用的NT124抗原可引发抗体(例如，在给予人时)，所述抗体识别SEQ ID NO:45和/或可包括以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:45具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包括SEQ ID NO:45的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT124蛋白包括SEQ ID NO:45的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:45的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:45C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:45的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT124抗原可与NT124天然的22个N末端氨基酸(MKKSKIAAGVVISLAAVWCAGA；SEQ ID NO:89)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT061抗原

该抗原标注为86-026NP菌株中的存活蛋白SurA样蛋白NTHI0588。

有用的NT061抗原可引发抗体(例如，在给予人时)，所述抗体识别SEQ ID NO:128和/或可包括以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:128具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包括SEQ ID NO:128的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT061蛋白包括SEQ ID NO:128的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:128的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:128C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:128的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT061抗原可与NT061天然的27个N末端氨基酸(MKMKKFILKSFLLATLGCVAFTSMAQA；SEQ ID NO:129)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

NT017抗原

该抗原标注为86-026NP菌株中的存活蛋白SurA样蛋白NTHI0915。

有用的NT017抗原可引发抗体(例如，在给予人时)，所述抗体识别SEQ ID NO:130和/或可包括以下氨基酸序列：(a)与SEQ ID NO:130具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包括SEQ ID NO:130的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)。这些NT017蛋白包括SEQ ID NO:130的变体。(b)的优选片段包含来自SEQ ID NO:130的表位。其它优选片段缺少SEQ ID NO:130C末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸和/或N末端的一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或更多个)氨基酸，而保留SEQ ID NO:130的至少一个表位。其它片段省去一个或多个蛋白结构域。

本发明的NT017抗原可与NT017天然的20个N末端氨基酸(MLRFGVNQKTSLLLTALLSC；SEQ ID NO:131)或者替代的N末端序列(例如简单的N末端甲硫氨酸、或者Met-Ala-、或者以所需方式靶向或运输表达的蛋白的前导肽)共同表达。

杂交多肽

本发明使用的多肽可单独表达或在单独的多肽链上独立表达。或者，本发明使用的两种或多种多肽也可作为单个多肽链(“杂交”多肽)进行表达。杂交多肽可以通式NH₂-A-{-X-L-}_n-B-COOH表示，其中：A是任选的N末端氨基酸序列；B是任选的C末端氨基酸序列；n是2或更大的整数(如2、3、4、5、6等)；至少一个X_n是本发明的抗原的氨基酸序列(如上文所述)；且L是任选的接头氨基酸序列。根据本发明，例如，各X_n可包含选自下组的抗原的氨基酸序列：(1)NTHI0915(NT018)、(2)NTHI1416(NT024)、(3)NTHI2017(NT032)、(4)CGSHiGG_02400(NT038，但该抗原不在优选之列)、(5)NTHI1292(NT067)、(6)NTHI0877(NT001)、(7)NTHI0266(NT016)、(8)CGSHiGG_00130(NT052)、(9)NTHI1627(NT002)、(10)NTHI1109(NT026)、(11)NTHI0821(NT009)、(12)NTHI0409(NT025)、(13)NTHI1954(NT028)、(14)NTHI0371(NT029)、(15)NTHI0509(NT031)、(16)NTHI0449(NT015)、(17)NTHI1473(NT023)、(18)gi-145633184(NT100),(19)NTHI1110(NT040)、(20)gi-46129075(NT048)、(21)gi-145628236(NT053)、(22)NTHI1230(NT066)、(23)NTHI0522(NT097),(24)P48(NTHI0254，也定义为NT007)、(25)HtrA(NTHI1905，也定义为NT006)、(26)PE(NTHI0267，也定义为NT035)、(27)P26(NTHI0501，也定义为NT010)、(28)PHiD(NTHI0811，也定义为NT080)、(29)P6(NTHI0501，也定义为NT081)、(30)NT013、(31)NT106、(32)NT107、(33)NT108、(34)NT109、(35)NT110、(36)NT111、(37)NT112、(38)NT113、(39)NT114、(40)NT115、(41)NT116、(42)NT117、(43)NT118、(44)NT119、(45)NT120、(46)NT121、(47)、NT122、(48)NT123、(49)NT124；(50)NT004；(51)NT014；(52)NT022(也标注为NTHI0830)；(53)NT016(也标注为NTHI0266)。

根据本发明，X_n可包括两种或多种抗原的氨基酸序列，所述抗原选自“第一抗原组”所列任意抗原和“第二抗原组”所列任意抗原组成的组。各X_n可以是本发明的抗原组合中的抗原的氨基酸序列(如上文所述)。在某些实施方式中，n是2。当n是2时，按照本发明还可使用任何两种上述抗原的组合。例如，当n是3时，本发明中可使用任何三种上述抗原的组合。通常，两个或多个X_n可以是同一抗原，或者当n是2、3或4时，各X_n可以是不同的抗原。当两个或多个X_n是同一抗原的序列时，所述两个或多个X_n可具有相同多肽序列或不同多肽序列，例如可以是给定抗原的不同变体或片段，如上文所述。

当这些抗原定义为(a)与给定的序列有50％或更高相同性(例如，60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；和/或(b)包含给定的序列的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多)时，对于各X而言，(a)中的相同性水平和(b)中‘n’的值可以是相同的。

在杂交蛋白中可以包括或缺少各-X-部分的野生型中的前导肽序列。在一些实施方式中，前导肽可缺失，除非-X-部分位于杂交蛋白的N-末端，即保留X₁的前导肽，但略去X₂…X_n的前导肽。这相当于删除所有前导肽并使用X₁的前导肽作为-A-部分。

在{-X-L-}的各个n值的情况下，接头氨基酸序列-L-可存在或不存在。例如，当n＝2时，杂交体可以是NH₂-X₁-L₁-X₂-L₂-COOH、NH₂-X₁-X₂-COOH、NH₂-X₁-L₁-X₂-COOH、NH₂-X₁-X₂-L₂-COOH等。接头氨基酸序列-L-一般较短(如20个或更少个氨基酸，即20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1个)。示例包括有利于克隆的短肽序列，聚-甘氨酸接头(即包含Gly_n，其中n＝2、3、4、5、6、7、8、9、10或更大)，和组氨酸标签(即His_n，其中n＝3、4、5、6、7、8、9、10或更大)。本领域技术人员显然了解其它合适的接头氨基酸序列。有用的接头是GSGGGG(SEQ IDNO:46)或GSGSGGGG(SEQ ID NO:47)，Gly-Ser二肽由BamHI限制位点形成，因而有助于克隆和操作，(Gly)₄四肽是常用的多聚甘氨酸接头。其他合适接头，尤其是用作最后L_n的接头，是Leu-Glu二肽。

-A-是任选的N末端氨基酸序列。其一般较短(如40个或更少个氨基酸，即40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1个)。例子包括指导蛋白运输的前导序列，或有利于克隆或纯化的短肽序列(例如组氨酸标签，即His_n，其中n＝3、4、5、6、7、8、9、10或更多)，如SEQID NO:48。其它合适的N-末端氨基酸序列对于本领域技术人员来说是显而易见的。如果X₁缺少其自身的N末端甲硫氨酸，-A-优选是提供N末端甲硫氨酸的寡肽(例如，具有1、2、3、4、5、6、7或8个氨基酸)，如Met-Ala-Ser或单个Met残基。

-B-是任选的C末端氨基酸序列。其一般较短(如40个或更少个氨基酸，即39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1个)。示例包括指导蛋白运输的前导序列、有利于克隆或纯化的短肽序列(例如包含组氨酸标签，即His_n，其中n＝3、4、5、6、7、8、9、10或更大，例如SEQ IDNO:68)，或增强蛋白稳定性的序列。其它合适的C末端氨基酸序列对于本领域技术人员来说是显而易见的。

菌株和变体

抗原在上文中依据文献中的命名规范定义，例如“NTHI”编号(来自菌株86-028NP的基因组)或CGSHiGG编号(来自菌株PittGG的基因组)。参考文献15中较详细地解释了这类规范(具体是表1)。本文中表V将现有的命名与本文使用的“NT”命名关联。因此，可在指定菌株的公共序列数据库中容易地找到本发明的任何抗原的示例性氨基酸和核苷酸序列(以及其他信息，如功能标注)，但本发明不限于来自86-028NP、3655或PittGG菌株的序列。可以使用几种其他NTHI菌株的基因组序列(再次参见参考文献15的表1)。可使用标准的搜索和比对技术在这些(或其他)基因组序列中鉴定本文中提供的任意特定序列的同源物。而且，可使用的序列可用于设计引物扩增来自其他菌株的同源序列。因此，本发明不限于这些特定序列，而是可以包括来自其他NTHI菌株的这类变体和同源物，以及非天然变体。通常，特定SEQ ID NO的合适变体包括其等位基因变体、其多态性形式、其同源物、其直系同源物、其旁系同源物、其突变体等。例如，SEQ ID No:49、52、54、55、57-59、64、65和67包括下文所述的突变。

因此，例如，与本文中的SEQ ID NO相比，本发明所用多肽可包括一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9等)氨基酸取代，如保守取代(即用具有相关侧链的另一氨基酸取代某氨基酸)。遗传编码的氨基酸通常分为四类：(1)酸性，即天冬氨酸、谷氨酸；(2)碱性，即赖氨酸、精氨酸、组氨酸；(3)非极性，即丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸；和(4)不带电的极性氨基酸，即甘氨酸、天冬酰胺、谷胺酰胺、胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸。有时将苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸一起归类为芳族氨基酸。通常，这些家族中的单个氨基酸的取代不会对生物活性产生重要影响。相对于SEQ ID NO序列，多肽还可包含一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9等)单个氨基酸的缺失。相对于SEQ ID NO序列，多肽也可包含一个或多个(如1、2、3、4、5、6、7、8、9等)插入(如各1、2、3、4或5个氨基酸)。

类似地，本发明所用多肽可包含具有以下特征的氨基酸序列：

(a)与序列表公开的某一序列相同(即100％相同)；

(b)与序列表公开的某一序列具有序列相同性(如80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高)；

(c)与(a)或(b)的序列相比，含有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个(或更多个)单一氨基酸改变(缺失、插入、取代)，这些改变可以位于分开的位置或连续出现；和/或

(d)用逐对比对算法与序列表中的特定序列比对时，每个从N-末端向C-末端移动的x个氨基酸的窗口(使得在p(p>x)个氨基酸上比对时，存在p-x+1个这种窗口)具有至少x·y个相同的比对氨基酸，其中：x选自20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90、100、150、200；y选自0.50、0.60、0.70、0.75、0.80、0.85、0.90、0.91、0.92、0.93、0.94、0.95、0.96、0.97、0.98、0.99；如果x·y不是整数，则四舍五入至整数。优选的成对比对算法是Needleman-Wunsch全局比对算法[16]，使用默认参数(如缺口开放罚分＝10.0，缺口延伸罚分＝0.5，使用EBLOSUM62积分矩阵)。用EMBOSS软件包中的needle工具能方便地实施这种算法[17]。

使用杂交多肽时，杂交体内的单个抗原(即单个-X-部分)可来自一种或多种菌株。例如，n＝2时，X₂可来自与X₁相同的菌株，或来自不同菌株。当n＝3时，该菌株可以是(i)X₁＝X₂＝X₃(ii)X₁＝X₂/X₃(iii)X₁/X₂＝X₃(iv)X₁/X₂/X₃或(v)X₁＝X₃/X₂等。

在(c)组内，缺失或取代可在N末端和/或C末端，或者可以在两个末端之间。因此，截短是缺失的一个例子。截短可包括在N末端和/或C末端缺失多达40个(或更多个)氨基酸。N末端截短可移除前导肽，从而例如有利于在异源宿主中重组表达。C末端截短可移除锚定序列，从而例如有利于在异源宿主中重组表达。

通常，当抗原包括与来自序列表的NTHI序列不同的序列时(例如，当它包含序列相同性<100％的序列，或包含其片段时)，在各种单独情况下，优选地，该抗原可引发抗体，所述抗体识别相应的来自序列表的NTHI序列。

突变细菌

本发明还提供了NTHi细菌，其中敲除了一种或多种本发明的抗原[18]。产生敲除细菌的技术是公知的，且已报道了来自NTHi菌株的基因的敲除，即在参考文献19中。敲除突变可位于基因的编码区，或者可位于转录控制区内(如启动子内)。敲除突变会将编码抗原的mRNA水平降低至野生型细菌产量水平的<1％，优选降低至<0.5％，更优选降低至<0.1％，最优选降低至0％。

本发明还提供一种NTHI细菌，其中一种或多种本发明的抗原具有抑制其活性的突变。编码该抗原的基因将具有改变所编码氨基酸序列或破坏其表达的突变。突变可包括缺失、取代和/或插入，其中任何一种均可涉及一个或多个氨基酸。

一个实施方式提供了编码本发明的抗原的一个或多个基因的缺失。

已知在大肠杆菌中，具有LytM结构域的两个分裂机制组分(EnvC和NlpD)是负责细胞分离的细胞壁水解酶(酰胺酶)(AmiA、AmiB和AmiC)的直接调节因子[20]。还已知大肠杆菌中的LytM金属蛋白酶是子细胞分离所必需的。

在一个实施方式中，本发明提供了编码具有LytM催化结构域的多肽的NTHI基因。通常金属蛋白酶经鉴定在其催化结构域中含有HxH和HxxxD氨基酸结构域。优选地，这些一个或多个基因编码NT013、NT022或NT017中任意一个。

本发明中描述了编码具有共同的LytM催化结构域的多肽的一种或多种基因的突变或缺失会导致细菌细胞分裂和细菌表型的巨大变化。

发明人还显示所述突变或缺失导致称为OMV或外膜囊泡的囊泡释放，而相同的野生型NTHi菌株通常不会释放OMV。

在一个特别优选实施方式中，通过除去NT013和/或NT022，不仅细菌细胞分裂受到影响，而且在通常不会释放OMV的NTHI菌株中出乎意料地产生并释放了外膜囊泡(OMV)。

优选的实施方式提供了NTHI菌株，其中缺失了编码NT013或NT022或NT017中任一项的一种或多种基因。例如，可使用抗生素抗性盒(如红霉素抗性盒)取代缺失的基因。已发现所有上述多肽都具有共同的LytM催化结构域且都是金属蛋白酶。

还发现NT013和NT022中的LytM结构域是保守的。NT013催化活性位点由位于C-末端部分的以下氨基酸基序–HKGD-和-HLH-表示。NT022催化活性位点由位于C-末端部分的以下氨基酸基序–NKGID-和–KLH-表示。

本发明还提供了过表达本发明的抗原的细菌(如NTHi菌)。

本发明还提供了组成性表达本发明的抗原的细菌(如NTHi菌)。本发明还提供了一种大肠杆菌，所述大肠杆菌包含至少一种编码本发明的抗原的基因，所述基因处于诱导型启动子的控制下。

基于OMV的疫苗

革兰氏阴性菌通过连续的双层膜结构与外部培养基分离。这些称作质膜和外膜(OM)的结构在结构和功能上都有差异。外膜在病原菌与其相应宿主之间的相互作用中起重要作用。因此，表面暴露的细菌分子是宿主免疫应答的重要靶标，使得外膜组分成为提供疫苗、诊断性和治疗性试剂中有吸引力的候选物质。

本发明的突变细菌在制备包括NTHi抗原(例如本发明的抗原)且可用作免疫原的细菌外膜囊泡过程中特别有用。

本发明还提供了过表达至少一种本发明抗原的细菌(如NTHi细菌)，优选通过过量产生OMV。

可以使用上调来增加在OMV中有用的NTHi蛋白的水平。

还提供了一种产生NTHi菌的方法，所述NTHi均过量产生OMV，所述方法包括使用一种或多种以下方法对革兰氏阴性菌株基序进行遗传修饰：(a)对菌株进行基因工程改造以下调一种或多种Tol基因的表达；以及(b)突变一种或多种编码包含肽聚糖相关位点的蛋白的基因，以减弱所述蛋白的肽聚糖结合活性；(c)通过突变或去除一种或多种编码具有共同的LytM催化结构域的多肽的基因。在一个特别优选实施方式中，NTHi可不表达活性NT013、NT022基因和/或任何Tol基因[19],[18]。

本发明还提供了制备NTHi囊泡的方法，所述方法包括处理本发明的NTHi菌的步骤，使其外膜形成囊泡。

本发明还提供了制备NTHi囊泡的方法，所述方法包括在本发明的NTHi菌外膜自发脱落囊泡的条件下培养本发明的NTHi菌的步骤。

本发明还提供了过量产生OMV并过表达本发明的抗原的NTHi菌。

本发明所用多肽

本发明所用多肽可采取各种形式(如天然多肽、融合多肽、糖基化多肽、非糖基化多肽、脂化多肽、非脂化多肽、磷酸化多肽、非磷酸化多肽、肉豆蔻酰化多肽、非肉豆蔻酰化多肽、单体、多聚体、颗粒、变性多肽等)。

本发明所用多肽可通过各种方式(如重组表达、由细胞培养物纯化、化学合成等)制备。优选重组表达的蛋白，特别是杂交多肽。

本发明所用多肽优选以纯化或基本纯化(即基本不含其它多肽(如不含天然产生的多肽)、特别是不含其它流感嗜血杆菌或宿主细胞多肽)的形式提供，本发明多肽的纯度通常为至少约50重量％，通常至少约90％，即组成中少于约50％，更优选少于约10％(如5％)是其它表达的多肽。因此，组合物中的抗原与表达该分子的完整生物体分离。

术语“多肽”指任何长度的氨基酸聚合物。该聚合物可以是线性或支链聚合物，可包含修饰的氨基酸，可被非氨基酸打断。该术语也包括天然修饰或通过介入修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其它操作或修饰，如与标记组分偶联。例如，还包括含有一个或多个氨基酸类似物(包括例如非天然氨基酸等)以及本领域已知其它修饰的多肽。多肽可以单链或结合链的形式产生。

本发明所用多肽可包含序列-P-Q-或-Q-P-，其中：-P-是上文定义的氨基酸序列，-Q-不是上文定义的序列(即以融合蛋白的形式提供)。-P-的N-末端密码子不是ATG且此密码子未出现在多肽的N末端时，它将被翻译成该密码子的标准氨基酸，而不是Met。然而，当该密码子位于多肽N末端时，它将被翻译成Met。-Q-部分的例子包括但不限于组氨酸标签(即His_n，其中n＝3、4、5、6、7、8、9、10或更高，例如SEQ ID NO:68)、麦芽糖结合蛋白或谷胱甘肽-S-转移酶(GST)。

最初作为初生蛋白表达时，本发明所用多肽可包含序列-P-Q-或-Q-P-，但在一些实施方式中，在蛋白的使用点处可能缺失–Q-部分，例如前导肽可能被翻译后切割。

有用的用于表达的N末端序列是SEQ ID NO:48。

虽然本发明所用多肽可在流感嗜血杆菌中表达，但本发明通常使用异源宿主进行表达(重组表达)。异源宿主可以是原核(例如细菌)或真核生物。可以是大肠杆菌(E.coli)，其他合适的宿主包括枯草杆菌(Bacillus subtilis)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、伤寒沙门菌(Salmonella typhi)、鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)、乳酰胺奈瑟菌(Neisseria lactamica)、灰色奈瑟菌(Neisseria cinerea)、分枝杆菌(Mycobacteria)(例如结核分支杆菌(M.tuberculosis))、酵母等。与编码本发明多肽的野生型流感嗜血杆菌基因相比，改变密码子以优化这类宿主中的表达效率而不影响编码氨基酸是有帮助的。

本发明所用多肽可通过特定方法合成，所述方法包括通过化学手段合成至少部分所述多肽的步骤。

核酸

本发明还提供了核酸(例如核酸组合、载体或载体组合)，所述核酸编码本发明所用多肽、本发明的多肽或杂交多肽组合。还提供核酸，所述核酸包含编码一种或多种(例如2、3或4种)本发明的抗原组合的多肽或杂交多肽的核苷酸序列。核酸可以是例如载体(例如克隆或表达载体)。

编码一种或多种(至少一种)本发明抗原和抗原组合的多肽的核苷酸序列是已知的(参见例如参考文献6-9)或者是根据遗传密码设计的。因此，在本发明的内容中，这类核苷酸序列可编码以下一种或多种抗原：(1)NTHI0915(NT018)、(2)NTHI1416(NT024)、(3)NTHI2017(NT032)、(4)CGSHiGG_02400(NT038)、(5)NTHI1292(NT067)、(6)NTHI0877(NT001)、(7)NTHI0266(NT016)、(8)CGSHiGG_00130(NT052)、(9)NTHI1627(NT002)、(10)NTHI1109(NT026)、(11)NTHI0821(NT009)、(12)NTHI0409(NT025)、(13)NTHI1954(NT028)、(14)NTHI0371(NT029)、(15)NTHI0509(NT031)、(16)NTHI0449(NT015)、(17)NTHI1473(NT023)、(18)gi-145633184(NT100),(19)NTHI1110(NT040)、(20)gi-46129075(NT048)、(21)gi-145628236(NT053)、(22)NTHI1230(NT066)、(23)NTHI0522(NT097)或P48抗原(如SEQ ID NO:24)；HtrA抗原(如SEQ ID NO:25)；PE抗原(如SEQ ID NO:26)；P26抗原(如SEQID NO:27)；PHiD抗原(如SEQ ID NO:28)；P6抗原(如SEQ ID NO:29)、(24)NT004、(25)NT014、(26)NT022或者一种或多种来自“第三抗原组”的抗原或者可编码以下氨基酸序列：(a)与上述任意多肽具有50％或更高的相同性(例如60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或更高；例如90％或更高的相同性，或者95％或更高的相同性)；和/或(b)包含任意所述多肽:1的至少‘n’个连续氨基酸的片段，其中‘n’是7或更多(例如，8、10、12、14、16、18、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250或更多；例如20或更多；或者例如50或更多；或者例如80或更多)。

本发明也提供可与这些核酸杂交的核酸。可以在不同“严谨性”的条件下进行杂交反应。提高杂交反应严谨性的条件是本领域众所周知的，且已公开过(如参考文献121的第752页)。相关条件的例子包括(按严谨性提高的顺序)：培育温度25℃、37℃、50℃、55℃和68℃；缓冲液浓度10x SSC、6x SSC、1x SSC、0.1x SSC(其中SSC是0.15M NaCl和15mM柠檬酸盐缓冲液)和使用其它缓冲液体系的等同条件；甲酰胺浓度0％、25％、50％和75％；培育时间5分钟至24小时；1个、2个或多个洗涤步骤；洗涤培育时间1、2或15分钟；洗涤溶液6x SSC、1xSSC、0.1x SSC或去离子水。杂交技术和其优化方法为本领域熟知(例如，参见参考文献21、22和123)。

核酸可与靶标在低严谨条件下杂交；在其它实施方式中，其在中等严谨条件下杂交；在优选实施方式中，其在高严谨条件下杂交。一组示范性的低严谨杂交条件是50℃和10x SSC。一组示范性的中等严谨杂交条件是55℃和1x SSC。一组示范性的高严谨杂交条件是68℃和0.1x SSC。

本发明包括含有这些序列的互补序列的核酸(例如，用于反义或检测，或用作引物)。

本发明核酸可采取各种形式(如单链、双链、载体、引物、探针、标记形式等)。本发明核酸可以是环状或分枝状核酸，但通常是线性核酸。除非另有说明或要求，利用核酸的本发明任何实施方式可利用双链形式和构成该双链形式的两条互补单链形式的每条链。引物、探针以及反义核酸通常是单链。

编码本文所述抗原的核酸优选以纯化或基本纯化的形式提供，即基本不含其它核酸(如不含天然产生的核酸)，特别是不含其它流感嗜血杆菌或宿主细胞核酸，通常其至少为约50％纯(重量)，通常至少为约90％纯。本发明核酸优选为流感嗜血杆菌核酸。

可以多种方式制备编码本文所述抗原的核酸，例如，完全或部分化学合成(例如DNA的亚磷酰胺合成)、利用核酸酶(例如限制性酶)消化较长核酸、连接较短核酸或核苷酸(例如使用连接酶或聚合酶)、由基因组或cDNA文库制备等。

核酸可连接于固体支持物(如珠、平板、滤器、膜、玻片、微阵列支持物、树脂等)。可用例如放射性或荧光标记、或生物素标记来标记核酸。在准备将核酸用于检测技术时，例如核酸是引物或探针时，这特别有用。

术语“核酸”通常包括任何长度的核苷酸聚合形式，其包含脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸和/或其类似物。它包括DNA、RNA、DNA/RNA杂交体。它也包括DNA或RNA类似物，如含有修饰主链(如肽核酸(PNA)或硫代磷酸酯)或修饰碱基的类似物。因此，本发明包括mRNA、tRNA、rRNA、核酶、DNA、cDNA、重组核酸、分枝核酸、质粒、载体、探针、引物等。本发明的核酸是RNA形式时，它可能具有或不具有5'帽。

编码本文所述抗原的核酸可以是载体的一部分，即设计用于转导/转染一种或多种细胞类型的核酸构建的一部分。载体可以是，例如，设计用于分离、增殖和复制所插入核苷酸的“克隆载体”，设计用于在宿主细胞中表达核苷酸序列的“表达载体”，设计用于产生重组病毒或病毒样颗粒的“病毒载体”，或具有一种以上载体类型的属性的“穿梭载体”。优选的载体是质粒。“宿主细胞”包括单个细胞或细胞培养物，其可能是或已经是外源核酸的受体。宿主细胞包括单个宿主细胞的后代，由于天然、偶然或有意的突变和/或改变，这些后代与原始亲本细胞不必需完全相同(形态或总DNA互补方面)。宿主细胞包括用本发明的核酸体内或体外转染或感染的细胞。

涉及核酸使用的术语“互补”或“互补的”指沃森克里克碱基配对。因此，C的互补物是G，G的互补物是C，A的互补物是T(或U)，T(或U)的互补物是A。也能使用如I(嘌呤肌苷)等碱基，例如与嘧啶(C或T)互补。

可使用编码本文所述抗原的核酸，例如：产生多肽；作为检测生物样品中的核酸的杂交探针；产生额外的核酸拷贝；产生核酶或反义寡核苷酸；作为单链DNA引物或探针；或作为形成三链体的寡核苷酸。

本发明提供了产生编码本文所述抗原的核酸的方法，其中所述核酸部分或完全用化学方式合成。

本发明提供了包含编码本文所述抗原的核苷酸序列的载体(如克隆或表达载体)和用这种载体转化的宿主细胞。

在本发明的某些实施方式中，核酸的长度优选为至少7个核苷酸(如8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、45、50、55、60、65、70、75、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、225、250、275、300个核苷酸或更长)。

在本发明的某些实施方式中，核酸长度优选至多为500个核苷酸(如450、400、350、300、250、200、150、140、130、120、110、100、90、80、75、70、65、60、55、50、45、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15个核苷酸或更短)。

免疫原性组合物和药物

本发明的免疫原性组合物可用作疫苗。本发明的疫苗可以是预防性(即预防感染)或治疗性(即治疗感染)疫苗，但通常是预防性疫苗。

因此，组合物可以是药学上可接受的。除抗原外，它们通常还包含其它组分，例如它们一般包含一种或多种药物载体和/或赋形剂。对这类组分的充分讨论参见参考文献118。

组合物通常以水性形式给予哺乳动物。然而在给药前，该组合物可以是非水性形式。例如，虽然一些疫苗制备成水性形式然后以水性形式填装、分销和给药，但其他疫苗在制备过程中冻干，并在使用时重建成水性形式。因此，本发明的组合物可被干燥，例如冻干制剂。

该组合物可含有防腐剂，如硫柳汞或2-苯氧乙醇。然而，疫苗优选应基本不含(即少于5μg/ml)含汞物质，如不含硫柳汞。更优选无汞的疫苗。特别优选不含防腐剂的疫苗。

为了提高热稳定性，组合物可包含温度保护剂。这类试剂的更多详情如下所述。

为了控制张度，优选包含生理盐如钠盐。优选氯化钠(NaCl)，它的浓度可以是1至20mg/ml，例如约10±2mg/ml NaCl。可存在的其它盐包括氯化钾、磷酸二氢钾、无水磷酸氢二钠、氯化镁、氯化钙等。

组合物的渗透压通常为200mOsm/kg-400mOsm/kg，优选为240-360mOsm/kg，更优选落入290-310mOsm/kg的范围内。

组合物可含有一种或多种缓冲剂。典型的缓冲剂包括：磷酸盐缓冲剂；Tris缓冲剂；硼酸盐缓冲剂；琥珀酸盐缓冲剂；组氨酸缓冲剂(具体是有氢氧化铝佐剂时)；或柠檬酸盐缓冲剂。包含的缓冲剂的浓度一般为5-20mM。

组合物的pH通常为5.0至8.1，更常为6.0至8.0，例如6.5至7.5，或者7.0至7.8。

该组合物优选无菌。该组合物优选无热原，如每剂量含有小于1EU(内毒素单位，标准量度)，优选每剂量小于0.1EU。该组合物优选不含谷蛋白。

所述组合物可含有一次免疫的物质，或者可含有多次免疫的物质(即“多剂量”药盒)。多剂量配置优选含有防腐剂。作为多剂量组合物中包含防腐剂的替代方案(或补充方案)，所述组合物可包含在装有无菌接头以取出物质的容器中。

人疫苗的给药剂量体积一般为约0.5ml，但可将一半剂量(即约0.25ml)给予儿童。

本发明免疫原性组合物也可包含一种或多种免疫调节剂。优选地，一种或多种免疫调节剂包括一种或多种佐剂。佐剂可包括TH1佐剂和/或TH2佐剂，详述见下。

可用于本发明组合物的佐剂包括但不限于：

·矿物盐，例如铝盐和钙盐，包括氢氧化物(例如，氢氧化合物)、磷酸盐(例如羟基磷酸盐、正磷酸盐)和硫酸盐等[例如，参见参考文献23的第8和第9章]；

·水包油乳剂，例如鲨烯-水乳剂，包括MF59(5％鲨烯、0.5％吐温80和0.5％司盘85，采用微射流机制成亚微米颗粒)[参考文献23的第10章，还参见参考文献24-26，和参考文献27的第12章]，完全弗氏佐剂(CFA)和不完全弗氏佐剂(IFA)；

·皂苷制剂[参考文献23的第22章]，例如QS21[28]和ISCOM[参考文献23的第23章]；

·病毒体和病毒样颗粒(VLP)[29-35]；

·细菌或微生物衍生物，例如肠细菌脂多糖(LPS)的无毒衍生物、脂质A衍生物[36,37]、免疫刺激性寡核苷酸[38-43]，例如IC-31^TM[44](包含26-基体序列5'-(IC)₁₃-3'的脱氧核苷酸(SEQ ID NO:112)和包含11-聚体氨基酸序列KLKLLLLLKLK的多聚阳离子聚合肽(SEQ ID NO:113))，和ADP-核糖基化毒素及其脱毒化的衍生物[45-54]；

·人免疫调节剂，包括细胞因子，如白介素(如IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12[55,56])，干扰素(如干扰素-γ)、巨噬细胞集落刺激因子和肿瘤坏死因子；

·生物粘着剂和粘膜粘着剂，例如壳聚糖及其衍生物、酯化透明质酸微球[57]或粘膜粘着剂，如聚(丙烯酸)、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、多糖和羧甲基纤维素的交联衍生物[58]。

·微颗粒(即，直径为约100nm至约150μm的颗粒，更优选直径为约200nm至约30μm的颗粒，且最优选直径为约500nm至约10μm的颗粒)，所述微颗粒由生物可降解且无毒的材料形成(例如，聚(α-羟酸)、聚羟基丁酸、聚原酸酯(polyorthoester)、聚酸酐、聚己酸内酯等)；

·脂质体[参考文献23的第13和14章、参考文献59-61]。

·聚氧乙烯醚和聚氧乙烯酯[62]；

·PCPP制剂[63和64]；

·胞壁酰肽，包括N-乙酰基-胞壁酰-L-苏氨酰-D-异谷酰胺(thr-MDP)、N-乙酰基-正胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷酰胺(nor-MDP)和N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺酰-L-丙氨酸-2-(1’-2’-二棕榈酰-sn-甘油-3-羟基磷酰氧基)-乙胺MTP-PE)；和

·咪唑并喹诺酮化合物，包括咪喹莫特及其同系物(例如，“瑞喹莫德3M”)[65和66]。

本发明的免疫原性组合物和疫苗还可包含上述鉴定的一种或多种佐剂各方面的组合。例如，可将以下佐剂组合物用于本发明：(1)皂苷和水包油乳液[67]；(2)皂苷(例如QS21)+无毒LPS衍生物(例如3dMPL)[68]；(3)皂苷(例如QS21)+无毒LPS衍生物(如3dMPL)+胆固醇；(4)皂苷(例如QS21)+3dMPL+IL-12(任选+固醇)[69]；(5)3dMPL与(例如)QS21和/或水包油乳液的组合[70]；(6)SAF，含有10％鲨烯、0.4％吐温80^TM、5％普流罗尼-嵌段聚合物L121和thr-MDP，微流体化形成亚微米乳液或涡旋产生粒度较大的乳液。(7)Ribi^TM佐剂系统(RAS)(瑞比免疫化学公司(Ribi Immunochem))，含有2％鲨烯、0.2％吐温80和一种或多种细菌细胞壁组分，所述组分选自单磷酰脂质A(MPL)、海藻糖二霉菌酸酯(TDM)和细胞壁骨架(CWS)，优选MPL+CWS(Detox^TM)；和(8)一种或多种矿物盐(如铝盐)+LPS的无毒衍生物(如3dMPL)。

用作免疫刺激剂的其它物质参见参考文献23的第7章。

特别优选使用氢氧化铝和/或磷酸铝佐剂，抗原通常吸附于这些盐。磷酸钙是另一种优选佐剂。其它优选的佐剂组合包括Th1和Th2佐剂的组合，如CpG和铝或雷西莫特和铝。可使用磷酸铝和3dMPL的组合(已报道这种组合在肺炎球菌免疫中有效[71])。优选使用MF59佐剂，尤其在IM(肌肉内)或IP(腹膜内)免疫的情况下。

本发明的组合物可引起细胞介导的免疫应答以及体液免疫应答。此种免疫应答优选诱导能在接触NTHI时迅速作出反应的持续性(如中和性)抗体和细胞介导的免疫。

通常认为两种T细胞类型CD4和CD8细胞是启动和/或增强细胞介导免疫和体液免疫所必需的。CD8T细胞可表达CD8共受体，通常称为细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。CD8T细胞能够识别MHC I型分子上展示的抗原或与之相互作用。

CD4T细胞可表达CD4共受体，并通常称为T辅助细胞。CD4T细胞能够识别结合MHCII型分子的抗原性肽。与MHC II型分子相互作用后，CD4细胞可分泌诸如细胞因子等因子。这些分泌的细胞因子可激活B细胞、细胞毒性T细胞、巨噬细胞和参与免疫应答的其它细胞。辅助T细胞或CD4+细胞可进一步分为两个功能不同的亚组：即细胞因子和效应功能不同的TH1表型和TH2表型。

活化的TH1细胞能增强细胞免疫(包括抗原特异性CTL生产增加)，因而对响应胞内感染具有特定价值。活化的TH1细胞可分泌IL-2、IFN-γ和TNF-β中的一种或多种。TH1免疫应答可通过激活巨噬细胞、NK(自然杀伤)细胞和CD8细胞毒性T细胞(CTL)导致局部炎症反应。通过用IL-12刺激B和T细胞的生长，TH1免疫应答也可用于放大免疫应答。TH1刺激的B细胞可分泌IgG2a。

活化的TH2细胞提高抗体生成，因此对响应胞外感染具有价值。活化的TH2细胞可分泌IL-4、IL-5、IL-6和IL-10中的一种或多种。TH2免疫应答可引起生成IgG1、IgE、IgA和记忆B细胞来用于未来的保护。

增强的免疫应答可包括增强的TH1免疫应答和TH2免疫应答中的一种或多种。

TH1免疫应答可包括CTL增加，与TH1免疫应答相关的一种或多种细胞因子(如IL-2、IFNγ和TNF-β)增加，活化巨噬细胞增加，NK活性增加，或者IgG2a产量增加中的一种或多种现象。增强的TH1免疫应答优选包括IgG2a生成增加。

可使用TH1佐剂引发TH1免疫应答。相对于不用佐剂的抗原免疫，TH1佐剂通常引起IgG2a生成水平增加。适用于本发明的TH1佐剂可包括例如，皂苷制剂、病毒体和病毒样颗粒、肠细菌脂多糖(LPS)的无毒衍生物、免疫刺激性寡核苷酸。免疫刺激性寡核苷酸，如含有CpG基序的寡核苷酸是本发明所用的优选TH1佐剂。

TH2免疫应答可包括以下一种或多种：与TH2免疫应答相关的一种或多种细胞因子(如IL-4，IL-5，IL-6和IL-10)增加，或者IgG1、IgE、IgA和记忆B细胞生成增加。增强的TH2免疫应答优选包括IgG1生成增加。

可使用TH2佐剂引发TH2免疫应答。相对于不用佐剂的抗原免疫，TH2佐剂通常引起IgG1生成水平增加。适用于本发明的TH2佐剂包括例如，含矿物质组合物、油乳剂和ADP-核糖基化毒素及其脱毒衍生物。含矿物质组合物如铝盐是本发明使用的优选TH2佐剂。

本发明优选包括含TH1佐剂和TH2佐剂组合的组合物。这种组合物优选引起增强的TH1和增强的TH2反应，即IgG1和IgG2a的生成相对于不用佐剂的免疫均有增加。更优选地，相对于用单一佐剂的免疫(即，相对于只用TH1佐剂的免疫或只用TH2佐剂的免疫)，包含TH1和TH2佐剂组合的组合物引起TH1和/或TH2免疫应答增强。

所述免疫应答可以是TH1免疫应答和TH2免疫应答之一或两种。免疫应答优选提供增强的TH1反应和增强的TH2反应之一或两种。

增强的免疫应答可以是全身免疫应答和粘膜免疫应答之一或两种。该免疫应答优选提供增强的全身免疫应答和增强的粘膜免疫应答之一或两种。优选粘膜免疫应答为TH2免疫应答。粘膜免疫应答优选包括IgA生成增加。

流感嗜血杆菌感染可影响躯体的各个部分，因此可将本发明组合物制备成各种形式。例如，可将所述组合物制备为液体溶液或悬浮液形式的注射剂。也可制备适合在注射前溶解或悬浮于液体载剂的固体形式(如冻干组合物或喷雾冻干组合物)。所述组合物可以制备成局部制剂，例如油膏、乳膏或粉末。所述组合物可制备成口服给药制剂，如片剂或胶囊，喷雾剂，或糖浆剂(任选调味)。所述组合物可以制备成使用细粉或喷雾的肺部给药制剂，例如吸入剂。所述组合物可制备为栓剂或子宫托。所述组合物可以制成鼻部、耳部或眼部给药制剂，例如滴剂。可将所述组合物设计为药盒的形式，从而在临对患者给予之前重建合并的组合物。此类药盒可包含一种或多种液体形式的抗原以及一种或多种冻干抗原。

临用前制备组合物(例如，以冻干形式提供组分时)和以药盒形式提供组合物时，该药盒可包括两个药瓶，或者可包括一个填充好的注射器和一个药瓶，注射器内容物用于在注射前重激活药瓶内容物。

用作疫苗的免疫原性组合物包含免疫有效量的抗原，以及需要的任何其它组分。“免疫有效量”是指以单一剂量或一系列剂量的部分给予个体的对治疗或预防有效的量。此量取决于待治疗个体的健康和身体状况、年龄、待治疗个体的分类组(如非人灵长动物、灵长动物等)、个体的免疫系统合成抗体的能力、所需的保护程度、疫苗制剂、治疗医生对医学情况的评估和其它相关因素。预计所述量将落入可通过常规试验可确定的较宽范围内。组合物中包含一种以上抗原时，存在的两种抗原的剂量可以相同或不同。

如上所述，一种组合物可包含温度保护剂，此种组分可能在佐剂化组合物(特别是含有矿物质佐剂，如铝盐的组合物)中特别有用。如参考文献72所述，可将液体温度保护剂加入水性疫苗组合物中，以降低其凝固点，例如将凝固点降低至0℃以下。因此该组合物可以储存于0℃以下但在其凝固点以上，以抑制热裂解。温度保护剂也允许冷冻该组合物，同时保护矿物盐佐剂在冻融后不发生团聚或沉降，还可在较高温度，例如40℃以上保护该组合物。可混合初始的水性疫苗与液体温度保护剂使液体温度保护剂占最终混合物体积的1-80％。合适的温度保护剂应该是对人给药安全的、易于混溶/可溶于水的、并且不应破坏组合物的其他成分(如抗原和佐剂)。示例包括甘油、丙二醇和/或聚乙二醇(PEG)。合适PEG的平均分子量可为200-20,000Da。在优选实施方式中，聚乙二醇的平均分子量可以约为300Da(‘PEG-300’)。

可通过混合(i)包含本发明的抗原组合中两种或多种(例如1、2、3、4种)抗原的水性组合物与(ii)温度保护剂来形成本发明的组合物。然后，该混合物可储存于例如0℃以下、0-20℃、20-35℃、35-55℃或更高温度。它可以液体或冻结形式储存。该混合物可以是冻干的混合物。或者，可通过混合(i)包含本发明的抗原组合中两种或多种(例如1、2、3、4种)抗原的干燥组合物与(ii)包含温度保护剂的液体组合物来形成组合物。因此，可利用组分(ii)重建组分(i)。

治疗方法和疫苗的给予

本发明还提供了一种在哺乳动物中产生免疫应答的方法，所述方法包括给予有效量的本发明的组合物的步骤，或给予至少一种或多种(如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10种)本发明的抗原的一个或多个步骤。所述免疫应答优选为保护性免疫应答，并优选涉及抗体和/或细胞介导的免疫。所述方法可以产生加强的应答。

本发明还提供联合用作(例如)使哺乳动物产生免疫应答的药物的至少一种或多种本发明抗原。

本发明也提供至少一种或多种本发明抗原在制备使哺乳动物产生免疫应答的药物中的应用。

在本发明的方法和用途中，可同时、分别或依次给予至少一种或多种(例如1、2、3、4种)本发明的抗原。

借助这些应用和方法在哺乳动物中产生免疫应答后，则能保护该哺乳动物免遭流感嗜血杆菌感染。本发明有效针对各种不同血清型的流感嗜血杆菌，但在针对不可分型流感嗜血杆菌(NTHI)感染导致疾病的保护中特别有用。根据本发明，感染可与选自下组的疾病或病症相关：例如，中耳炎(包括急性中耳炎)、支气管炎、结膜炎、鼻窦炎、尿道感染、肺炎、菌血症、脓毒性关节炎、会厌炎、肺炎、积脓症、心包炎、蜂窝织炎、骨髓炎、下呼吸道感染或脑膜炎。通过引起防止细胞从喉部通过咽鼓管移动至中耳(中耳随即会受到感染)的免疫应答，本发明对于治疗或预防中耳炎症或者对于治疗或预防COPD疾病特别有用。

本发明还提供了包含第一种组分和第二种组分的药盒，其中第一种组分和第二种组分均非如上所述本发明的组合物，但其中可将第一种组分和第二种组分组合以提供如上所述本发明的组合物。所述药盒还可以包括含有下列一种或多种的第三种组分：说明书、注射器或其它递送装置、佐剂或药学上可接受的制剂溶液。

本发明还提供了一种预填充本发明的免疫原性组合物的递送装置。

优选地，所述哺乳动物是人，例如，人患者。当所述疫苗用于预防性用途时，人优选是儿童(如幼童或婴儿)或青少年；当疫苗用于治疗用途时，人优选是青少年或成人。意图用于儿童的疫苗也可给予成年人，例如，以评估安全性、剂量、免疫原性等。哺乳动物(例如人，例如患者)可以自身处于发生该疾病的风险中，或者可以是妊娠女性，例如，女性(“母体免疫”)。

检测治疗性治疗功效的一种方式包括在给予本发明组合物后监测流感嗜血杆菌感染。一种检查预防性治疗疗效的途径包括给予组合物后监测对抗本发明的组合物中的抗原的全身免疫应答(如监测IgG1和IgG2a产生水平)和/或粘膜免疫应答(如监测IgA产生水平)。本发明组合物的免疫原性可通过以下方法测定：给予受试对象(如12-16个月大的儿童，或动物模型，如南美栗鼠(chinchilla)模型[73])，然后测定标准参数，包括IgG的ELISA效价(GMT)。通常在给予该组合物后约4周测定这些免疫应答，并与给予该组合物之前测定的值作比较。给予一个以上剂量的组合物时，可以进行超过一次的给药后测定。通常，在免疫后但在刺激前测定抗原特异性血清抗体应答，而在免疫后且刺激后测定抗原特异性粘膜抗体应答。

另一评价本发明组合物免疫原性的途径是重组表达蛋白，通过免疫印迹和/或微阵列筛查患者血清或粘膜分泌物。蛋白质和患者样品间的阳性反应表明患者已经产生对受试蛋白的免疫应答。该方法也可用于鉴定免疫显性抗原和/或抗原中的表位。

通过在流感嗜血杆菌感染的动物模型(如豚鼠、南美栗鼠或小鼠)中进行免疫研究，可在体内测定疫苗组合物的效果。参考文献74中描述了一种此类模型。

用于体内测定本发明疫苗组合物效果的其他有用的动物模型描述于参考文献75中。

本发明的组合物通常直接给予患者。可通过胃肠道外注射(如皮下、腹膜内、静脉内、肌肉内或组织间隙)，或通过粘膜，如通过直肠、口腔(如片剂、喷雾)、阴道、局部、透皮或经皮、鼻内、眼、耳、肺或其它粘膜途径完成直接递送。

本发明可用于引发全身和/或粘膜免疫，优选引发增强的全身和/或粘膜免疫。

增强的全身和/或粘膜免疫优选表现为提高的TH1和/或TH2免疫应答。增强的免疫应答优选包括IgG1和/或IgG2a和/或IgA生成增加。

可通过单剂量方案或多剂量方案来进行给药。多剂量可用于初次免疫方案和/或加强的免疫方案。在多剂量方案中，可通过相同或不同的途径(如肠胃外初次和粘膜加强，粘膜初次和肠胃外加强等)给予多个剂量。一般以至少1周(例如约2周、约3周、约4周、约6周、约8周、约10周、约12周、约16周等)的间隔给予多个剂量。

根据本发明制备的疫苗可用于治疗儿童和成人。因此，人患者可以小于1岁、1-5岁、5-15岁、15-55岁或至少55岁。接受疫苗的患者优选老年人(如大于或等于50岁、大于或等于60岁并优选大于或等于65岁)、幼儿(如小于或等于5岁)、住院病人、保健护理人员、武装人员和军人、孕妇、慢性病人或免疫缺陷病人。然而所述疫苗不仅适用于这些人群，还可用于更广泛的群体。

可将本发明产生的疫苗与其它疫苗基本上同时(在健康护理专业人员或疫苗接种中心的同一用药咨询或访问期间)给予患者，例如与麻疹疫苗、腮腺炎疫苗、风疹疫苗、MMR疫苗、水痘疫苗、MMRV疫苗、白喉疫苗、破伤风疫苗、百日咳疫苗、DTP疫苗、偶联的B型流感嗜血杆菌疫苗、脊髓灰质炎病毒灭活疫苗、乙型肝炎病毒疫苗、脑膜炎球菌偶联疫苗(如四价A-C-W135-Y疫苗)、呼吸道合胞病毒疫苗等基本同时给药。

粘膜免疫

本发明提供了用于粘膜免疫的抗原、抗原组合和本发明的组合物。例如，本发明提供一种免疫原性组合物，其包含(i)本发明的多肽抗原组合，和(ii)细菌ADP-核糖基化毒素和或其脱毒衍生物。本发明还提供一种使哺乳动物产生免疫应答的方法，包括给予哺乳动物有效量的这种免疫原性组合物的步骤。优选将该组合物通过粘膜给予(给予到粘膜表面)，如可进行鼻内给药。

毒素组分(i)可以，例如，源于大肠杆菌(E.coli)不耐热肠毒素(“LT”)。衍生物可在其A亚基中具有脱毒突变，例如可为LT-K63或LT-R72。具体地，其可以是LT-K63。在其他实施方式中，其不是LT-K63。

优选经鼻内给予本发明的抗原或组合物和LT-K63佐剂。这会降低鼻咽、肺和血液中流感嗜血杆菌的加载量，并增加受感染哺乳动物的存活率。

本发明组合物的其它抗原性组分

本发明还提供了包含至少一种其它不可分型流感嗜血杆菌抗原的组合物。

本发明还提供了包含至少一种除不可分型流感嗜血杆菌抗原以外抗原的组合物。

具体而言，本发明还提供了包含一种或多种本发明的多肽和一种或多种以下其它其他抗原的组合物：

–来自脑膜炎奈瑟球菌血清组A、B、C、W135和/或Y的抗原。

–来自肺炎链球菌的糖或多肽抗原[例如76、77、78]。

–来自甲型肝炎病毒如灭活病毒的抗原[例如79、80]。

–来自乙型肝炎病毒的抗原，如表面和/或核心抗原[例如80、81]。

–白喉抗原，如白喉类毒素[例如参考文献82的第3章]或CRM₁₉₇突变体[例如83]。

–破伤风抗原，如破伤风类毒素[如参考文献82的第4章]。

–来自百日咳博德特菌(Bordetella pertussis)的抗原，如百日咳博德特菌的百日咳全毒素(PT)和丝状血凝素(FHA)，也可任选与百日咳杆菌黏附素(pertactin)和/或凝集原2和3的组合[例如参考文献84和85]。

–全细胞百日咳抗原

–来自流感嗜血杆菌B的糖抗原[例如86]。

–脊髓灰质炎病毒抗原[例如87、88]，如IPV。

–麻疹、腮腺炎和/或风疹抗原[如参考文献82的第9、10和11章]。

–流感抗原[如参考文献82的第19章]，如血细胞凝集素和/或神经氨酸酶表面蛋白。

–来自粘膜炎莫拉菌(Moraxella catarrhalis)的抗原[例如89]。

–来自无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)(B型链球菌)的蛋白抗原[例如90、91]。

–来自无乳链球菌(B型链球菌)的糖抗原。

–来自酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)(A型链球菌)的抗原[例如91、92、93]。

–来自金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抗原[例如94]。

–来自呼吸道合胞病毒的抗原，例如重组蛋白F[例如142]

–包含白喉(D)、破伤风(T)、百日咳(无细胞、组分)(Pa)、乙肝(rDNA)(HBV)、脊髓灰质炎(已灭活)(IPV)和流感嗜血杆菌b型(Hib)偶联疫苗(吸附)的疫苗组合物，例如Infanrix-hexa

所述组合物可以包含一种或多种这些其它抗原。特别感兴趣的是与RSV疫苗和/或与含DTPa疫苗的组合。

必要时，可以使有毒的蛋白质抗原脱毒(例如，通过化学和/或遗传方式使百日咳毒素脱毒[85])。

所述组合物中包含白喉抗原时，也优选包含破伤风抗原和百日咳抗原。相似地，包含破伤风抗原时，也优选包含白喉和百日咳抗原。相似地，包含百日咳抗原时，也优选包含白喉和破伤风抗原。因此，优选DTP组合。

糖抗原优选偶联物形式。偶联物的载体蛋白包括白喉毒素、破伤风毒素、脑膜炎奈瑟球菌外膜蛋白[95]、合成肽[96、97]、热激蛋白[98、99]、百日咳蛋白[100、101]、来自流感嗜血杆菌的蛋白D[102]、细胞因子[103]、淋巴因子[103]、链球菌蛋白、激素[103]、生长因子[103]、艰难梭菌(C.difficile)的毒素A或B[104]、摄铁蛋白[105]等。优选的载体蛋白是白喉类毒素的CRM197突变体[106]。

所述组合物中抗原存在的浓度一般是至少各1μg/ml。通常，任何给定抗原的浓度将足以引发针对该抗原的免疫应答。

作为在本发明免疫原性组合物中使用蛋白质抗原的替代方式，可以使用编码该抗原的核酸(优选DNA，例如质粒形式的DNA)。

抗原优选吸附于铝盐。

抗体

针对本发明抗原的抗体可用于被动免疫[i]。因此，本发明提供了特异性针对本发明抗原的抗体以用于治疗。这些抗体可单独或联合使用。本发明还提供了包含这类抗体的免疫原性和药物组合物。

所述抗体可用于药物和治疗，例如用于对抗NTHI的被动免疫，或用于清除NTHI感染。本发明还提供了此类抗体在药物制造中的应用。本发明还提供了一种治疗哺乳动物的方法，所述方法包括给予有效量的本发明抗体的步骤。如上述免疫原性组合物，这些方法和应用能够保护哺乳动物对抗NTHI感染。具体地，本发明的抗体可用于治疗或预防NTHI引起的感染，包括向哺乳动物给予有效量的上述抗体或包含这类抗体的组合物的步骤。

术语“抗体”包括完整的免疫球蛋白分子(像帕丽珠单抗)及其能结合NTHI抗原的片段。这些包括杂交(嵌合)抗体分子[108,109]；F(ab′)2和F(ab)片段和Fv分子；非共价异源二聚体[110,111]；单链Fv分子(sFv)[112]；二聚和三聚抗体片段构建；微型抗体[113,114]；人源化抗体分子)[115-117]；任何获自此类分子的功能性片段，以及通过非常规工艺(如噬菌体展示)获得的抗体。优选所述抗体为单克隆抗体。获取单克隆抗体的方法为本领域熟知。优选人源化或完全人抗体。可纯化或分离本发明的抗体和抗体组合。

概述

除非另有说明，本发明的实施将采用化学、生物化学、分子生物学、免疫学和药理学的常规方法，这些方法在本领域技术范围内。这些技术在文献中已有充分描述。参见例如，参考文献118-125等。

当本发明涉及“表位”时，该表位可以是B细胞表位和/或T细胞表位。这类表位可凭经验确定(例如，使用PEPSCAN[126,127]或相似方法)，或它们可被预测(如利用詹姆森-沃尔夫抗原性指数(Jameson-Wolf antigenic index)

[128]、基于矩阵的方法[129]、MAPITOPE[130]、TEPITOPE[131,132]、神经网络[133]、OptiMer和EpiMer[134,135]、ADEPT[136]、T位点(Tsites)[137]、亲水性[138]、抗原性指数[139]或参考文献140-144公开的方法等)。表位是由抗体或T细胞受体的抗原结合位点识别并与之结合的抗原某部分，它们也称作“抗原决定簇”。

当抗原“结构域”被省略时，可以包括省略信号肽、胞质结构域、跨膜结构域、胞外结构域等。

术语“包括”涵盖“包含”以及“由……组成”，例如，“包含”X的组合物可以仅由X组成或可包含其它物质，例如X+Y。

与数值x相关的术语“约”是可任选的，并且表示，例如x±10％。

两个氨基酸序列间的序列相同性百分数表示进行比对时所比较的两条序列中相同氨基酸的百分数。这种比对和同源性百分数或序列相同性百分数可利用本领域所知软件程序来确定，例如用参考文献22的7.7.18部分所描述的那些。优选的比对通过史密斯-沃特曼(Smith-Waterman)同源性搜索算法使用仿射缺口搜索确定，其中缺口开放罚12分，缺口延伸罚2分，BLOSUM矩阵计62分。参考文献145中公开了史密斯-沃特曼(Smith-Waterman)同源性搜索算法。

附图说明

图1显示了确认BL21(DE3)T1^r细胞中抗原强表达的小型诱导。(a):

(LMWM：分子量标准标记物)

图2显示了NT001、NT007、NT018、NT024、NT032和NT067的多个结果。可使用其他优选的抗原(如NT052、NT004、NT014、NT016或NT022)获得类似的表达结果。各图显示了western印记和FACS数据。western印记使用小鼠血清进行，且泳道显示了与总细菌提取物(“TE”)、与从NTHI外膜中制备的囊泡(“OMV”)、或者与纯化的重组蛋白(“PP”)的反应活性。将灭活的细菌与来自经多种抗原组合物免疫的小鼠的血清孵育后进行FACS分析，仅使用铝作为阴性对照；免疫前血清阴性对照以实心区域的形式显示，而样品血清所获得的表面表达信号以单线的形式显示。

图3显示了血清杀菌试验的96孔板布局，该试验用于证明针对本发明抗原的抗血清具有杀死NTHI的能力。

具体实施方式

概述

在发明人使用至少86种不同NTHI菌株进行的比较分析中被鉴定为保守的所有抗原都进行了克隆和表达。纯化蛋白并用于免疫小鼠。来自经免疫小鼠的抗血清用于证明免疫所用蛋白的表面定位和保护能力(表III和/或表IV)。结果显示，免疫NT052、NT024、NT032、NT001、NT067、NT004、NT014、NT022、NT016对NTHI具有高度保护性，并且甚至与“第二抗原组”相比，其也显示了较高或至少相当的杀菌活性SBA(血清杀菌试验)效价。

菌株和变体

发明人发现编码NT022、NT016、NT014、NT018、NT024、NT032、NT067和NT001的基因存在于经分析的所有86种基因组序列中并保守。

编码的NT018序列在由来自芬兰中耳炎集合(Finnish otitis collection)的15种完整基因组和32种菌株组成的组中具有95-100％相同性。编码的NT024序列在由来自芬兰中耳炎集合的15种完整基因组和32种菌株组成的组中具有90-100％相同性。

编码的NT032序列在由来自芬兰中耳炎集合的15种完整基因组和32种菌株组成的组中具有95-100％相同性；编码的NT067序列在由来自芬兰中耳炎集合的15种完整基因组和32种菌株组成的组中具有95-100％相同性。编码的NT001序列在由来自芬兰中耳炎集合的15种完整基因组和32种菌株组成的组中具有95-100％相同性。

编码的氨基酸序列的保守性如表I所示。

表I：嗜血杆菌基因组和菌株中的抗原保守性(相同性百分比)

抗原	NT018	NT024	NT032	NT067	NT001
						％	95-100	90-100	95-100	95-100	95-100

为进行表达，从菌株Fil76(从获自中耳炎患者菌株的芬兰集合中分离的菌株)或从菌株R2846中克隆属于“第一抗原组”和/或“第二抗原组”的抗原[146]。还发现多数经选择并在动物模型中进一步测试的抗原在菌株中具有良好的保守性，例如NT016、NT067、NT022、NT014。

在一些情况下，突变已经被导入野生型序列中。这些突变在NT018、NT067、NT001、NT016、NT002、NT026、NT009、NT015、NT023和NT066的序列列表中用下划线表示(参见SEQ IDNO:49、52、54、55、57-59、64、65和67)。NTHI重组蛋白的克隆和表达

抗原的克隆和表达可通过标准方法进行[121]。

使用特异性寡核苷酸并使用NTHI染色体DNA作为模板PCR扩增来自NTHI菌株Fi176或R2846抗原的ORF。使用PIPE法将所得的PCR产物克隆至pET15b(诺瓦基公司(Novagen))[147]，包括克隆载体的PCR扩增(V-PCR)和插入片段的PCR扩增(I-PCR)。随后，将1μl的V-PCR和1μl的I-PCR混合并转化至化学感受态HK100细胞中[148]。设定I-PCR反应，含有1μM各正向和反向药物、1x克隆Pfu DNA聚合酶反应缓冲液、2.5单位的Pfu TurboDNA聚合酶(司查塔基公司(Stratagene))、200μM的各dNTP(英杰公司(Invitrogen))和50ng的基因组DNA模板。按如下条件进行反应：95℃起始变性2分钟，随后进行95℃ 30秒、55℃ 45秒和68℃ 3分钟的25次循环，最后冷却至4℃。V-PCR反应与I-PCR反应相同，只是68℃的步骤持续14分钟并使用2ng的pET15b质粒作为DNA模板。通过载体-插入接头的PCR筛选和DNA质粒测序选择正确的转化子。随后从选择的HK100克隆中制备正确的质粒并用于转化BL21(DE3)T1^r细胞(西格玛公司(Sigma))以进行蛋白表达。

为表达克隆的蛋白，在37℃下使含有pET15b构建体的BL21(DE3)T1^r克隆在含100μg/ml氨苄青霉素的LB培养基上生长直至OD₆₀₀＝0.5。随后通过加入1mM IPTG诱导蛋白表达并在相同温度下再生长3小时。进行常规蛋白提取和SDS-Page以检查蛋白表达。图1显示了确认抗原良好表达的小型诱导。

蛋白纯化

蛋白通过以下常规方法纯化：在裂解缓冲液中悬浮BL21(DE3)T1湿生物质并通过离心使之澄清。对于可溶性蛋白的纯化()，将裂解后的上清液用于HisMultitrap HP 50μlNiSepharose高效96孔板。对于不溶性蛋白(HtrA、PE和P48)，使用6M盐酸胍溶解裂解后含不溶性组分的沉淀并再次离心，将上清液用于HisMultitrap HP 50μl NiSepharose高效96孔板。

收集流通物并使用含20mM咪唑的缓冲液清洗所有孔。随后使用250mM咪唑洗脱His融合蛋白。使用真空系统进行该过程。经纯化的抗原用于本文所述免疫方案。

下面的方案如下：

1)在1,5ml B-PER^TM(PIERCE)缓冲液中充悬BL21(DE3)T1沉淀(1g)，加入15μl的溶菌酶、7.5μl DNA酶和3μl的MgCl₂ 1M

2)孵育30分钟以进行裂解

3)4℃下20000rpm离心30分钟；对于任意不溶性蛋白的纯化，使用6M盐酸胍溶解裂解后含不溶性组分的沉淀并再次离心

4)回收上清液并过滤(0.8μm的孔)

5)使用His Multitrap HP 50μl NiSepharose高效96孔，连接至真空系统

缓冲液A：50mM NaPPi，300mM NaCl，pH8

缓冲液B：50mM NaPPi，300mM NaCl，250mM咪唑，pH8

缓冲液C：50mM NaPPi，300mM NaCl，20mM咪唑，pH8

第1步：除去板上的乙醇。

第2步：使用400μl的milliQ水清洗板。

第3步：使用400μl的缓冲液A平衡板。

第4步：在12个栏之一中加载600μl的各蛋白起始材料。如果体积较大，重复直至完全地加载了所有材料。

回收流通物。

第5步：清洗步骤：使用400μl的缓冲液C清洗4次。弃去流通物。

第6步：洗脱：2x 300μl缓冲液B(2次洗脱步骤)。

加入缓冲液后15分钟启动真空。

通过SDS-PAGE分析1μl的总提取物、1μl的起始材料、1μl的流通物和10μl的洗脱体积(对各蛋白)。

对于不溶性蛋白，用10mM tris，50mM Na₂HPO₄，8M脲，250mM咪唑，40％甘油代替缓冲液B。

LAL测试

LAL测试是一种使用-PTS^TM Charles River技术测量疫苗样品中内毒素浓度的测试。

测试技术

PTS利用LAL动态发色技术测量样品中内毒素浓度直接相关的颜色强度。各筒含有精确量的批准的LAL试剂、发色底物和对照标准内毒素(CSE)。筒根据刚性质量控制方法制造以确保试验精确性和产品稳定性。

表II:优选抗原的纯化

小鼠的免疫和抗血清的生产

通过3次腹膜内注射(每2周1次)10微克经纯化的蛋白抗原(带有弗氏佐剂(每只小鼠200微升)或带有铝(氢氧化铝佐剂；2mg/ml))免疫5周龄CD1小鼠(各抗原8只)。第三次注射后两周收集血清并储存于-20℃下。使用单独的弗氏佐剂或单独的铝注射对照组。

FACS分析

通过FACS进行表面标记试验以检测不同菌株中所选抗原的表面暴露和表达水平。将NTHI与使用重组蛋白或阴性对照免疫的小鼠来源的血清孵育，并通过FACS分析。结果示于图2。图2中，免疫前血清阴性对照如实心区域所示，而使用样品血清获得的信号如单线所示。抗原P48、HtrA、PE和P26的FACS分析结果表明，这些抗原中的每一个都暴露在细菌表面并因此能够与抗体结合。

该分析中使用了以下材料和方法：

材料

1.96孔U形底板。

2.封闭和清洗缓冲液：含1％(w/v)BSA的PBS。

3.山羊抗小鼠IgG-荧光素异硫氰酸FITC。

4.含0.5％(v/v)多聚甲醛的PBS：在试验前将含4％(v/v)多聚甲醛的PBS母液新鲜稀释至0.5％(v/v)并过滤灭菌(0.22μm滤器)。

5.含1％(w/v)BSA的PBS。为制备该溶液，将1％(w/v)BSA溶解在PBS中，对各菌株制备至少100ml。对该溶液过滤灭菌(0.22μm滤器)并新鲜制备进行使用。

6.FACScan管(碧迪公司(Becton Dickson))。

7.FACScalibur流式细胞仪(碧迪公司(Becton Dickson))。

方法

1.使NTHI生长直至ODλ₆₀₀nm值达到0.5，随后将1ml的培养物转移至无菌的1.5mlEP管中并在小型离心机中13000g离心3分钟以沉淀细菌。弃去上清液并将沉淀悬浮于1ml含1％(w/v)BSA的PBS中。最后，在含1％(w/v)BSA的PBS中1/50稀释细菌悬浮液。

2.在96孔板中加入50μl封闭缓冲液中稀释(以1/100、1/200和1/400稀释)的血清样品。包括阳性对照，如抗OMV抗血清，

3.向各孔中加入50μl的细菌细胞并将板在4℃下储存2小时。

4.对细胞3500g离心5分钟，弃去上清液并通过加入200μl/孔的清洗缓冲液清洗细胞。

5.向各孔中加入50μl 1/100稀释的FITC偶联的山羊抗小鼠Ig并将板在4℃下储存1小时。

6.对细胞3500g离心5分钟，并使用200μl/孔的PBS清洗细胞。

7.重复离心步骤，弃去上清液并加入200μl/孔的含0.5％(v/v)多聚甲醛的PBS以固定细胞。

8.将经固定的样品转移至单个FACScan管并根据设备生产商的说明书通过流式细胞术进行分析。

血清杀菌活性(SBA)

使用重组蛋白免疫的小鼠来源的抗血清在血清杀菌活性试验中测试以证明能够诱导杀死NTHI的功能性抗体的存在。免疫前血清和来源于仅注射佐剂小鼠的血清用作阴性对照。将NTHI(菌株176)培养物(BHI+NAD和氯高铁血红素)在37℃下振荡孵育直至OD595nm为0.25-0.27。在D-PBS缓冲液中以1:50000的工作稀释比例稀释细菌细胞。将血清在56°下失活30分钟，随后在96孔U形底板中使用D-PBS梯度稀释(参见图3)。图3中板的11和12栏含有阴性对照以评估细菌的生长并检测任意非补体介导的杀伤。向除接受经热灭活的补体的补体对照孔以外的各孔中加入细菌和补体源(兔7504，塞得兰公司(Cedarlane))。

如图3所示，栏1-10中的孔含有25μl稀释的血清、12.5μl活性补体和12.5μl细菌。栏11中的孔含有25μl缓冲液、12.5μl活性补体和12.5μl细菌。栏12中的孔含有25μl缓冲液、5μl血清、12.5μl经热失活的补体和12.5μl细菌。

通过点样和倾斜法(spot and tilt method)将10μl的零时间(T0)试验对照(栏11-12)置于琼脂巧克力平板(生物制品公司(Biomerieux))上。将板在37℃下孵育过夜。将试验微量滴定板在37℃下孵育1小时。该期间(T60)后，将7μl的各孔点样在巧克力平板上(每个孔重复两次)。使用菌落计数器或手动对菌落数目(菌落形成单元，CFU)进行计数。当菌落数目低于T＝0的50％时，认为观察到了杀菌作用。

下文表III和表IV提供了结果概述。表III：免疫原性结果

这些结果显示，所选抗原能够高效地杀死NTHI病原体。具体而言，NT018、NT001、NT024、NT032、NT067、NT016都显示出了特别强的保护效果。

表IV：使用包含NTHI抗原和铝的组合物进行的免疫实验

这些结果进一步证明，在使用铝作为佐剂的免疫原性组合物中使用时，所选抗原也能够高效地杀死NTHI病原体。

具体而言，经血清抗菌试验(SBA)的测量，NT016、NT052、NT018、NT001、NT024、NT032、NT067、NT014、NT022都确认具有特别强的保护效果。

特别优选的抗原是NT067、NT014、NT016、NT022。还根据参考文献75中所述方案在体内动物模型中测试了这些抗原。

体内疫苗效力测试

使用体内模型(如Junbo和Jeff小鼠突变体)测试表IV所列单个抗原针对中耳炎(OM)感染的保护能力[75]。

3次(第0、21、35天)给予10毫克/小鼠的经纯化重组蛋白抗原(配制含或不含佐剂)，随后使用选择的NTHI病原体菌株经鼻内接种，以测试体内保护实验中的疫苗效力。

收集免疫前血清、免疫后血清和NTHI接种后7天的最终血清并储存在-80℃下。使用佐剂或使用作为对照不相关抗原免疫对照组。收集中耳大疱和鼻咽癌(NP)清洗样品并放置以确定NTHi数目；大疱感染和鼻咽癌携带率，并计算大疱NTHi效价。

应理解，仅以实施例的方式描述了本发明，对之进行的修改仍在本发明的范围和精神内。

表V:代表性菌株的命名交叉参考

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序列表

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<120> 抗原和抗原组合

<130> PAT054802-WO-PCT

<140> PCT/EP2013/

<141> 同此日期

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<160> 131

<170> BiSSAP 1.2

<210> 1

<211> 277

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT018

<400> 1

Lys His Gly Gln Lys Arg Asp Asp Leu Asn Lys Ala Leu Tyr Phe Ser

1 5 10 15

Arg Leu Glu Glu Ile Glu Gln Asp Asn Ser Gln Gly Leu Val Glu Asn

20 25 30

Val Glu Gln Leu Lys Gln Glu Leu Gln Lys Thr Leu Leu Asp Asp Val

35 40 45

Pro Ser Lys Val Gln Glu Asn Val Asp Tyr Ser Gly Lys Ser Tyr Gly

50 55 60

Lys Ile Trp Phe Val Ser Gly Val Leu Ala Leu Gly Ile Ile Ala Gly

65 70 75 80

Ser Ser Tyr Phe Met Val Gly Ser Trp Gln Ala Glu Ser Met Leu Glu

85 90 95

Gln Thr Tyr Ala Lys Leu Pro Tyr Phe Phe Asp Arg Met Lys Asp Glu

100 105 110

Asp Lys Asn Pro Phe Ser Asp Ala Glu Met Gln Gln Phe Ser Ile Ala

115 120 125

Leu Arg Ile Asp Leu Gln Lys Asn Pro Thr Asp Ala Lys Lys Trp Trp

130 135 140

Met Leu Gly Gln Ile Gly Met Asn Leu Gly Asp Ala Arg Leu Ala Phe

145 150 155 160

Asp Ser Tyr Gln Lys Ala Asn Lys Leu Glu Pro Asp Asn Val Gln Tyr

165 170 175

Lys Leu Gly Tyr Ala Arg Ile Leu Met Phe Ser Glu Asp Ala Thr Asp

180 185 190

Lys Leu Lys Gly Gly Asn Leu Leu Arg Glu Val Ile Arg Gln Glu His

195 200 205

Thr Asn Ile Glu Ala Leu Ser Leu Leu Ala Phe Arg Tyr Phe Glu Thr

210 215 220

Glu Asp Tyr Lys Met Ala Ala Val Thr Trp Ala Met Met Leu Arg Leu

225 230 235 240

Met Pro Lys Asp Asp Glu Arg Val Pro Leu Ile Glu Lys Ser Ile Arg

245 250 255

Thr Ala Arg Asp Ala Leu Glu Ala Gln Asn Glu Glu Lys Ser Lys Ser

260 265 270

Ile Thr Pro Glu Lys

275

<210> 2

<211> 160

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT024

<400> 2

Met Lys Thr Ile Asp Ile Thr Ala Asn Ser Lys Met Asp Asp Gln Ala

1 5 10 15

Arg Met Asn Leu Ala Gln Glu Phe Ala Asn Lys Gln Gln Trp Ser Ser

20 25 30

Val Phe Asp Ile Met Tyr Pro Met Ala Leu Glu Gly Asn Thr Thr Ala

35 40 45

Gln Ser Asn Leu Gly Met Leu Tyr Asn Leu Gly Arg Gly Thr Val Arg

50 55 60

Asp Tyr Glu Lys Ala Tyr Trp Trp Phe Ser Glu Ala Ala Glu Lys Gly

65 70 75 80

Ser Val Lys Gly Leu Asn Asn Leu Gly Val Met Tyr Leu Arg Gly Asp

85 90 95

Tyr Val Lys Gln Asn Thr Glu Gln Ala Ile Lys Leu Phe Glu Arg Thr

100 105 110

Ala Arg Ala Lys Asp Thr Asp Ala Met Met Met Leu Ser Asn Ile Tyr

115 120 125

Arg Leu Gln Asn Gln Pro Glu Lys Ser Leu Glu Trp Leu Lys Lys Ala

130 135 140

Ala Glu Leu Gly Asn Lys Glu Ala Lys Gln Arg Leu Ser Ser Gln Pro

145 150 155 160

<210> 3

<211> 102

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT032

<400> 3

Gly Phe Asn Gly Asn Asn Ser Gln Gly Gly Phe Gln Gln Thr Ala Pro

1 5 10 15

Ala Ala Ile Ser Val Lys Gln Ala Leu Ser Ala Ala Asp Asn Ser Met

20 25 30

Ile Thr Leu Val Gly Asn Ile Thr Gln Gln Ile Asp Asp Asp Glu Phe

35 40 45

Trp Phe Thr Asp Gly Thr Gly Gln Ile Lys Ile Glu Ile Lys Lys Arg

50 55 60

Val Trp Asn Gly Leu Asn Val Asp Ser Lys Asp Lys Val Lys Ile Tyr

65 70 75 80

Gly Lys Leu Asp Asn Glu Ala Phe Glu Lys Ala Glu Leu Asp Val Leu

85 90 95

Arg Val Glu Lys Ala Glu

100

<210> 4

<211> 259

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT038

<400> 4

Lys Gln Asp Gly Ser Ala Asp Met Asp Lys Lys Val Lys Asn Gly Glu

1 5 10 15

Leu Val Lys Thr Lys Val Lys Leu Val Ser Ala Asn Gly Thr Asn Pro

20 25 30

Val Lys Ile Ser Asn Val Ala Glu Gly Thr Glu Asp Thr Asp Ala Val

35 40 45

Ser Phe Lys Gln Leu Lys Ala Leu Gln Asn Lys Gln Val Thr Leu Ser

50 55 60

Ala Ser Asn Ala Tyr Ala Asn Gly Gly Ser Asp Ala Asp Val Gly Lys

65 70 75 80

Val Thr Gln Thr Leu Ser Asn Gly Leu Asn Phe Lys Phe Lys Ser Thr

85 90 95

Asp Gly Glu Leu Leu Asn Ile Lys Ala Asp Lys Asp Thr Val Thr Ile

100 105 110

Thr Arg Ala Ser Gly Ala Asn Gly Ala Ala Ala Thr Asp Ala Asp Lys

115 120 125

Ile Lys Val Ala Ser Asp Gly Ile Ser Ala Gly Asn Lys Ala Val Lys

130 135 140

Asn Val Ala Ala Gly Glu Ile Ser Ala Thr Ser Thr Asp Ala Ile Asn

145 150 155 160

Gly Ser Gln Leu Tyr Ala Val Ala Lys Gly Val Thr Asn Leu Ala Gly

165 170 175

Gln Val Asn Lys Val Gly Lys Arg Ala Asp Ala Gly Thr Ala Ser Ala

180 185 190

Leu Ala Ala Ser Gln Leu Pro Gln Ala Ser Met Pro Gly Lys Ser Met

195 200 205

Val Ser Ile Ala Gly Ser Ser Tyr Gln Gly Gln Ser Gly Leu Ala Ile

210 215 220

Gly Val Ser Arg Ile Ser Asp Asn Gly Lys Leu Ile Ile Arg Leu Ser

225 230 235 240

Gly Thr Thr Asn Ser Gln Gly Lys Thr Gly Val Ala Ala Gly Val Gly

245 250 255

Tyr Gln Trp

<210> 5

<211> 521

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT067

<400> 5

Val Ile Val Pro Glu Gly Thr Gln Leu Asp Glu Lys Gln His Ile Val

1 5 10 15

Ile Asn Asn Gly Ala Glu Pro Gln Ser Phe Asn Pro His Lys Thr Glu

20 25 30

Gly Val Pro Glu Ser Asn Val Ala Tyr Gln Leu Leu Glu Gly Leu Val

35 40 45

Thr Ser Asp Ser Glu Gly Lys Leu Gln Pro Gly Ala Ala Glu Ser Trp

50 55 60

Glu Asn Thr Pro Asp Phe Lys Thr Trp Thr Phe His Leu Arg Lys Asp

65 70 75 80

Ala Lys Trp Ser Asn Gly Asp Pro Val Thr Ala His Asp Phe Val Phe

85 90 95

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<220>

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<212> PRT

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<220>

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<400> 16

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<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

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65 70 75 80

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Ser Phe Val Ala Gly Arg Arg Val Arg Ile Val Gly Gly Gly Ser Ser

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Leu Asn Val Ser Val Leu

130

<210> 18

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<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT100

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85 90 95

Arg Thr Leu Ile Ile Asn Gly Glu Leu Pro Ala Glu Gln Gly Lys Ser

100 105 110

Phe Glu Thr Gly Leu Lys Tyr Glu Asn Ala Tyr Leu Asn Ala Thr Val

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Ala Leu Phe Asn Ile Asn Lys Arg Asn Val Ala Glu Thr Val Asn Val

130 135 140

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<212> PRT

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<220>

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<400> 19

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<213> 细菌<原核生物>

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180 185 190

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195 200 205

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<213> 细菌<原核生物>

<220>

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<400> 21

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Ala Gly Ser Phe Ser Gly Ser Glu Lys Ile Val Gly Ala Gly Val Ser

100 105 110

Trp Lys Phe Gly Ser Lys Ser Lys Pro Ala Val Ser Thr Gln Ser Ala

115 120 125

Val Asn Ser Ala Glu Val Leu Gln Leu Arg Gln Glu Ile Ser Ala Met

130 135 140

Gln Lys Glu Leu Ala Glu Leu Lys Lys Ala Leu Arg Lys

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<210> 22

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<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT066

<400> 22

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1 5 10 15

Phe Asn Ser Ala Thr Ala Glu Leu Val Tyr Lys Pro Leu Glu Gln Pro

20 25 30

Val Glu Pro Ala Lys Pro Asp Leu Lys Ile Glu Ser Val Asn Glu Lys

35 40 45

Phe Ala Glu Lys Tyr Pro Asn Gln Tyr Asn Ser Trp Arg Ser Thr Ala

50 55 60

Asn Gly Asp Gly Glu Asn Ile Ile Tyr Ala Asp Glu Glu Asn Pro Arg

65 70 75 80

Leu Ile Val Leu Trp Gly Gly Tyr Ala Phe Ala Lys Glu Tyr Asn Ala

85 90 95

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115 120 125

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130 135 140

Glu Lys Asp Tyr Phe Asn Ala Lys Trp Ala Lys Gly Gly Pro Glu Ile

145 150 155 160

Val Asn Ser Ile Gly Cys Ala Asp Cys His Asp Thr Thr Ser Lys Asp

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180 185 190

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435 440 445

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Val Met Gly Ile Asp Ile Glu Lys Glu Arg Lys Ala Lys Glu Glu Phe

465 470 475 480

Leu Lys Thr Val Val Pro Gln Trp Glu Gln Gln Ala Arg Glu Lys Gly

485 490 495

Leu Leu Val Asp Pro Pro Ala Gln Lys

500 505

<210> 23

<211> 429

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

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<400> 23

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Gly Gly Lys Thr Asp Leu Asn Ala Ile Asn Leu Asn Leu Ser Gly Ala

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Tyr Ala Asn Ala Gln Val Glu Arg Asn Ala Gly Ile Ile Ala Asp Ser

165 170 175

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180 185 190

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275 280 285

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<210> 24

<211> 422

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

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<400> 24

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115 120 125

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195 200 205

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Gly Lys Leu Phe Thr Thr Gly Glu Leu Tyr Ser Glu Arg Val Ile Ser

225 230 235 240

Leu Ala Gly Pro Gln Val Lys Glu Pro Arg Leu Val Arg Thr Ile Ile

245 250 255

Gly Ala Asn Leu Ser Gln Leu Thr Gln Asn Glu Leu Ser Ala Gly Lys

260 265 270

Asn Arg Val Ile Ser Gly Ser Val Leu Cys Gly Gln Ile Ala Lys Asp

275 280 285

Ser His Asp Tyr Leu Gly Arg Tyr Ala Leu Gln Val Ser Val Ile Ala

290 295 300

Glu Gly Asn Glu Lys Glu Phe Phe Gly Trp Ile Met Pro Gln Ala Asn

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Lys Tyr Ser Val Thr Arg Thr Val Leu Gly His Phe Ser Lys Lys Leu

325 330 335

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370 375 380

Gly Cys Leu Glu Leu Asp Glu Glu Asp Leu Ala Leu Cys Ser Phe Val

385 390 395 400

Cys Pro Gly Lys Tyr Glu Tyr Gly Ser Ile Leu Arg Gln Val Leu Asp

405 410 415

Lys Ile Glu Lys Glu Gly

420

<210> 25

<211> 437

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> HtrA (NT006)

<400> 25

Thr Leu Pro Ser Phe Val Ser Glu Gln Asn Ser Leu Ala Pro Met Leu

1 5 10 15

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20 25 30

Lys Gly Asp Ser Arg Ser Pro Phe Leu Asp Asp Ile Pro Glu Glu Phe

35 40 45

Lys Phe Phe Phe Gly Asp Arg Phe Ala Glu Gln Phe Gly Gly Arg Gly

50 55 60

Glu Ser Lys Arg Asn Phe Arg Gly Leu Gly Ser Gly Val Ile Ile Asn

65 70 75 80

Ala Ser Lys Gly Tyr Val Leu Thr Asn Asn His Val Ile Asp Gly Ala

85 90 95

Asp Lys Ile Thr Val Gln Leu Gln Asp Gly Arg Glu Phe Lys Ala Lys

100 105 110

Leu Val Gly Lys Asp Glu Gln Ser Asp Ile Ala Leu Val Gln Leu Glu

115 120 125

Lys Ser Ser Asn Leu Thr Glu Ile Lys Phe Ala Asp Ser Asp Lys Leu

130 135 140

Arg Val Gly Asp Phe Thr Val Ala Ile Gly Asn Pro Phe Gly Leu Gly

145 150 155 160

Gln Thr Val Thr Ser Gly Val Val Ser Ala Leu Gly Arg Ser Thr Gly

165 170 175

Ser Asp Ser Gly Thr Tyr Glu Asn Tyr Ile Gln Thr Asp Ala Ala Val

180 185 190

Asn Arg Gly Asn Ser Gly Gly Ala Leu Val Asn Leu Asn Gly Glu Leu

195 200 205

Ile Gly Ile Asn Thr Ala Ile Ile Ser Pro Ser Gly Gly Asn Ala Gly

210 215 220

Ile Ala Phe Ala Ile Pro Ser Asn Gln Ala Ser Asn Leu Val Gln Gln

225 230 235 240

Ile Leu Glu Phe Gly Gln Val Arg Arg Gly Leu Leu Gly Ile Lys Gly

245 250 255

Gly Glu Leu Asn Ala Asp Leu Ala Lys Ala Phe Asn Val Ser Ala Gln

260 265 270

Gln Gly Ala Phe Val Ser Glu Val Leu Pro Lys Ser Ala Ala Glu Lys

275 280 285

Ala Gly Leu Lys Ala Gly Asp Ile Ile Thr Ala Met Asn Gly Gln Lys

290 295 300

Ile Ser Ser Phe Ala Glu Met Arg Ala Lys Ile Ala Thr Thr Gly Ala

305 310 315 320

Gly Lys Glu Ile Ser Leu Thr Tyr Leu Arg Asp Gly Lys Ser His Asp

325 330 335

Val Lys Val Lys Leu Gln Ala Asp Asp Gly Ser Gln Leu Ser Ser Lys

340 345 350

Thr Glu Leu Leu Ala Leu Asp Gly Ala Thr Leu Lys Asp Tyr Asp Thr

355 360 365

Lys Gly Val Lys Gly Ile Glu Ile Thr Lys Ile Gln Pro Asn Ser Leu

370 375 380

Ala Ala Gln Arg Gly Leu Lys Ala Gly Asp Ile Ile Ile Gly Ile Asn

385 390 395 400

Arg Gln Met Ile Glu Asn Ile Arg Glu Leu Asn Lys Val Leu Glu Thr

405 410 415

Glu Pro Ser Ala Ile Ala Leu Asn Ile Leu Arg Gly Asn Ser Asn Phe

420 425 430

Tyr Leu Leu Val Gln

435

<210> 26

<211> 144

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> PE (NT035)

<400> 26

Ser Ala Gln Ile Gln Lys Ala Glu Gln Asn Asp Val Lys Leu Ala Pro

1 5 10 15

Pro Thr Asp Val Arg Ser Gly Tyr Ile Arg Leu Val Lys Asn Val Asn

20 25 30

Tyr Tyr Ile Asp Ser Glu Ser Ile Trp Val Asp Asn Gln Glu Pro Gln

35 40 45

Ile Val His Phe Asp Ala Val Val Asn Leu Asp Lys Gly Leu Tyr Val

50 55 60

Tyr Pro Glu Pro Lys Arg Tyr Ala Arg Ser Val Arg Gln Tyr Lys Ile

65 70 75 80

Leu Asn Cys Ala Asn Tyr His Leu Thr Gln Val Arg Thr Asp Phe Tyr

85 90 95

Asp Glu Phe Trp Gly Gln Gly Leu Arg Ala Ala Pro Lys Lys Gln Lys

100 105 110

Lys His Thr Leu Ser Leu Thr Pro Asp Thr Thr Leu Tyr Asn Ala Ala

115 120 125

Gln Ile Ile Cys Ala Asn Tyr Gly Lys Ala Phe Ser Val Asp Lys Lys

130 135 140

<210> 27

<211> 197

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> P26 (NT010)

<400> 27

Met Lys Asn Ile Ala Lys Val Thr Ala Leu Ala Leu Gly Ile Ala Leu

1 5 10 15

Ala Ser Gly Tyr Ala Ser Ala Glu Glu Lys Ile Ala Phe Ile Asn Ala

20 25 30

Gly Tyr Ile Phe Gln His His Pro Asp Arg Gln Ala Val Ala Asp Lys

35 40 45

Leu Asp Ala Glu Phe Lys Pro Val Ala Glu Lys Leu Ala Ala Ser Lys

50 55 60

Lys Glu Val Asp Asp Lys Ile Ala Ala Ala Arg Lys Lys Val Glu Ala

65 70 75 80

Lys Val Ala Ala Leu Glu Lys Asp Ala Pro Arg Leu Arg Gln Ala Asp

85 90 95

Ile Gln Lys Arg Gln Gln Glu Ile Asn Lys Leu Gly Ala Ala Glu Asp

100 105 110

Ala Glu Leu Gln Lys Leu Met Gln Glu Gln Asp Lys Lys Val Gln Glu

115 120 125

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130 135 140

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Tyr Thr Tyr Val Leu Asp Ala Asn Ser Val Val Phe Ala Val Glu Gly

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Lys Asp Ile Thr Glu Glu Val Leu Lys Ser Ile Pro Ala Ser Glu Lys

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Ala Gln Glu Lys Lys

195

<210> 28

<211> 346

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> PHiD (NT080)

<400> 28

Cys Ser Ser His Ser Ser Asn Met Ala Asn Thr Gln Met Lys Ser Asp

1 5 10 15

Lys Ile Ile Ile Ala His Arg Gly Ala Ser Gly Tyr Leu Pro Glu His

20 25 30

Thr Leu Glu Ser Lys Ala Leu Ala Phe Ala Gln Gln Ala Asp Tyr Leu

35 40 45

Glu Gln Asp Leu Ala Met Thr Lys Asp Gly Arg Leu Val Val Ile His

50 55 60

Asp His Phe Leu Asp Gly Leu Thr Asp Val Ala Lys Lys Phe Pro His

65 70 75 80

Arg His Arg Lys Asp Gly Arg Tyr Tyr Val Ile Asp Phe Thr Leu Lys

85 90 95

Glu Ile Gln Ser Leu Glu Met Thr Glu Asn Phe Glu Thr Lys Asp Gly

100 105 110

Lys Gln Ala Gln Val Tyr Pro Asn Arg Phe Pro Leu Trp Lys Ser His

115 120 125

Phe Arg Ile His Thr Phe Glu Asp Glu Ile Glu Phe Ile Gln Gly Leu

130 135 140

Glu Lys Ser Thr Gly Lys Lys Val Gly Ile Tyr Pro Glu Ile Lys Ala

145 150 155 160

Pro Trp Phe His His Gln Asn Gly Lys Asp Ile Ala Ala Glu Thr Leu

165 170 175

Lys Val Leu Lys Lys Tyr Gly Tyr Asp Lys Lys Thr Asp Met Val Tyr

180 185 190

Leu Gln Thr Phe Asp Phe Asn Glu Leu Lys Arg Ile Lys Thr Glu Leu

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Asn Tyr Asn Tyr Asp Trp Met Phe Lys Pro Gly Ala Met Ala Glu Val

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Val Lys Tyr Ala Asp Gly Val Gly Pro Gly Trp Tyr Met Leu Val Asn

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Lys Glu Glu Ser Lys Pro Asp Asn Ile Val Tyr Thr Pro Leu Val Lys

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<220>

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<220>

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Pro

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<400> 34

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Glu Ile Ser Ala Arg Ile Asn Ala Glu Gly Glu Tyr Glu Ile Leu Val

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<400> 37

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180 185 190

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<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT113

<400> 38

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180 185 190

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210 215 220

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Leu Tyr Asp Pro Ala Asn Asn Ile Asp Ala Gly Val Ser Tyr Leu Trp

245 250 255

Ile Leu Gln Asn Gln Tyr Leu Asp Gly Ile Thr Asn Pro Thr Ser Lys

260 265 270

Arg Phe Ala Met Ile Ser Ala Tyr Asn Ser Gly Ala Gly Ala Val Leu

275 280 285

Arg Val Phe Asp Asn Asp Lys Asp Thr Ala Ile Tyr Lys Ile Asn Gln

290 295 300

Met Tyr Pro Glu Gln Val Tyr Arg Ile Leu Thr Thr Val His Pro Ser

305 310 315 320

Ser Gln Ala Arg Asn Tyr Leu Leu Lys Val Asp Lys Ala Gln Lys Lys

325 330 335

Phe Arg Val Arg Arg

340

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<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT114

<400> 39

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Gln Arg Glu Val Phe Leu Gln Val Glu Gly Leu Leu Lys Ser Ala Val

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Lys Lys Gln Gln Phe Ser Glu Ala Ile Gln Asn Ile Thr Lys Thr Leu

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85 90 95

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<223> 来自Fi176的NT018变体

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<223> 来自Fi176的NT024变体

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<210> 51

<211> 102

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> 来自Fi176的NT032变体

<400> 51

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Ala Ala Ile Ser Val Lys Gln Ala Leu Ser Ala Ala Asp Asn Ser Met

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35 40 45

Trp Phe Thr Asp Gly Thr Gly Gln Ile Lys Ile Glu Ile Lys Lys Arg

50 55 60

Val Trp Asn Gly Leu Asn Val Asp Ser Lys Asp Lys Val Lys Ile Tyr

65 70 75 80

Gly Lys Leu Asp Asn Glu Ala Phe Glu Lys Ala Glu Leu Asp Val Leu

85 90 95

Arg Val Glu Lys Ala Glu

100

<210> 52

<211> 521

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> 来自Fi176的NT067变体

<400> 52

Val Ile Val Pro Glu Gly Thr Gln Leu Asp Glu Lys Gln His Ile Val

1 5 10 15

Phe Asn Asn Gly Ala Glu Pro Gln Ser Phe Asp Pro His Lys Thr Glu

20 25 30

Gly Val Pro Glu Ser Asn Val Ala Tyr Gln Leu Leu Glu Gly Leu Val

35 40 45

Thr Ser Asp Ser Glu Gly Lys Leu Gln Pro Gly Val Ala Glu Ser Trp

50 55 60

Glu Asn Thr Pro Asp Phe Lys Thr Trp Thr Phe His Leu Arg Lys Asp

65 70 75 80

Ala Lys Trp Ser Asn Gly Asp Pro Val Thr Ala His Asp Phe Val Phe

85 90 95

Ala Trp Arg Arg Leu Val Asp Pro Ala Thr Ala Ala Pro Tyr Ala Ser

100 105 110

Tyr Leu Ser Tyr Leu Gln Val Glu Asn Ala Gln Asp Ile Ile Asp Gly

115 120 125

Lys Lys Lys Pro Ala Glu Leu Gly Val Glu Ala Lys Asp Asp Tyr Thr

130 135 140

Phe Val Val His Ala Ile Asn Pro Val Pro Tyr Ala Val Ser Leu Thr

145 150 155 160

Thr His Gln Ser Leu Leu Pro Leu Pro Gln Lys Val Val Glu Lys Leu

165 170 175

Gly Asp Ala Trp Val Lys Lys Glu Asn Tyr Val Gly Asn Gly Ala Tyr

180 185 190

Lys Leu Ala Asn His Ile Ile Asn Glu Lys Ile Glu Phe Glu Arg Asn

195 200 205

Pro Leu Tyr Trp Asn Asp Lys Glu Thr Val Ile Asn Ser Ala Thr Phe

210 215 220

Leu Ala Ile Glu Asn Pro Ser Thr Asp Val Ala Arg Tyr Arg Ala Gly

225 230 235 240

Asp Leu Asp Met Thr Ser Tyr Gly Leu Pro Pro Glu Gln Phe Ala Lys

245 250 255

Leu Lys Lys Glu Leu Leu Gly Glu Val Tyr Val Thr Arg Thr Leu Gly

260 265 270

Thr Tyr Ser Tyr Glu Leu Asn Asn Lys Lys Ala Pro Phe Asp Asn Val

275 280 285

Asn Ile Arg Lys Ala Leu Asn Leu Ser Leu Asp Arg His Val Ile Thr

290 295 300

Asp Lys Val Leu Gly Gln Gly Gln Thr Pro Thr Tyr Val Phe Thr Pro

305 310 315 320

Thr Tyr Ile Glu Glu Gly His Leu Ile Gln Gln Pro Ala Tyr Ser Lys

325 330 335

Glu Pro Met Ala Gln Arg Asn Glu Glu Ala Ile Lys Leu Leu Glu Glu

340 345 350

Ala Gly Tyr Ser Lys Ala Asn Pro Leu Lys Phe Ser Ile Leu Tyr Asn

355 360 365

Thr Asn Glu Asn His Lys Lys Val Ala Ile Ala Ala Ala Ser Met Trp

370 375 380

Lys Ala Asn Thr Lys Gly Leu Ile Asp Val Lys Leu Glu Asn Gln Glu

385 390 395 400

Trp Lys Thr Tyr Ile Asp Ser Arg Arg Ala Gly Arg Tyr Asp Ala Ala

405 410 415

Arg Ala Gly Trp Ser Ala Asp Tyr Asn Gln Ala Thr Thr Phe Gly Asn

420 425 430

Tyr Phe Leu Ser Asn Ser Ser Asn Asn Thr Ala Lys Tyr Ala Asn Pro

435 440 445

Glu Tyr Asp Lys Ala Met Ala Glu Ser Tyr Ala Ala Thr Asp Ala Glu

450 455 460

Gly Arg Ala Lys Ala Tyr Ala Lys Ala Glu Glu Ile Leu Ala Lys Asp

465 470 475 480

Tyr Gly Ile Val Pro Ile Phe Asn Tyr Val Asn Pro Arg Leu Val Lys

485 490 495

Pro Tyr Val Lys Gly Tyr Ser Gly Lys Asp Pro Gln Asp His Ile Tyr

500 505 510

Leu Arg Asn Leu Tyr Ile Ile Lys His

515 520

<210> 53

<211> 157

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> 来自R2846的NT038变体

<400> 53

Lys Gln Asp Gly Ser Ala Asp Met Asp Lys Lys Val Lys Asn Gly Glu

1 5 10 15

Leu Val Lys Thr Lys Val Lys Leu Val Ser Ala Asn Gly Thr Asn Pro

20 25 30

Val Lys Ile Ser Asn Val Ala Glu Gly Thr Glu Asp Thr Asp Ala Val

35 40 45

Ser Phe Lys Gln Leu Lys Ala Leu Gln Asn Lys Gln Val Thr Leu Ser

50 55 60

Ala Ser Asn Ala Tyr Ala Asn Gly Gly Ser Asp Ala Asp Val Gly Lys

65 70 75 80

Val Thr Gln Thr Leu Ser Asn Gly Leu Asn Phe Lys Phe Lys Ser Thr

85 90 95

Asp Gly Glu Leu Leu Asn Ile Lys Ala Asp Lys Asp Thr Val Thr Ile

100 105 110

Thr Arg Ala Ser Gly Ala Asn Gly Ala Ala Ala Thr Asp Ala Asp Lys

115 120 125

Ile Lys Val Ala Ser Asp Gly Ile Ser Ala Gly Asn Lys Ala Val Lys

130 135 140

Asn Val Ala Ala Gly Glu Ile Ser Ala Thr Ser Thr Asp

145 150 155

<210> 54

<211> 252

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> 来自Fi176的NT001变体

<400> 54

Lys Glu Asp Lys Lys Pro Glu Ala Ala Ala Ala Pro Leu Lys Ile Lys

1 5 10 15

Val Gly Val Met Ser Gly Pro Glu His Gln Val Ala Glu Ile Ala Ala

20 25 30

Lys Val Ala Lys Glu Lys Tyr Gly Leu Asp Val Gln Phe Val Glu Phe

35 40 45

Asn Asp Tyr Ala Leu Pro Asn Glu Ala Val Ser Lys Gly Asp Leu Asp

50 55 60

Ala Asn Ala Met Gln His Lys Pro Tyr Leu Asp Glu Asp Ala Lys Ala

65 70 75 80

Lys Asn Leu Asn Asn Leu Val Ile Val Gly Asn Thr Phe Val Tyr Pro

85 90 95

Leu Ala Gly Tyr Ser Lys Lys Ile Lys Asn Val Asn Glu Leu Gln Glu

100 105 110

Gly Ala Lys Val Val Val Pro Asn Asp Pro Thr Asn Arg Gly Arg Ala

115 120 125

Leu Ile Leu Leu Glu Lys Gln Gly Leu Ile Lys Leu Lys Asp Ala Asn

130 135 140

Asn Leu Leu Ser Thr Val Leu Asp Ile Val Glu Asn Pro Lys Lys Leu

145 150 155 160

Asn Ile Thr Glu Val Asp Thr Ser Val Ala Ala Arg Thr Leu Asp Asp

165 170 175

Val Asp Leu Ala Val Val Asn Asn Thr Tyr Ala Gly Gln Val Gly Leu

180 185 190

Asn Ala Gln Asp Asp Gly Val Phe Val Glu Asp Lys Asp Ser Pro Tyr

195 200 205

Val Asn Ile Ile Val Ser Arg Thr Asp Asn Lys Asp Ser Lys Ala Val

210 215 220

Gln Asp Phe Val Lys Ser Tyr Gln Thr Glu Glu Val Tyr Gln Glu Ala

225 230 235 240

Gln Lys His Phe Lys Asp Gly Val Val Lys Gly Trp

245 250

<210> 55

<211> 243

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> 来自Fi176的NT016变体

<400> 55

Ser Ser Gly Ser Lys Asp Val Glu Gln Ala Ser Val Asn Glu Leu Tyr

1 5 10 15

Thr Lys Gly Thr Thr Ser Leu Gln Glu Gly Ser Tyr Ser Glu Ala Ile

20 25 30

Arg Tyr Leu Lys Ala Thr Thr Glu Arg Phe Pro Gly Ser Val Tyr Gln

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Glu Gln Ala Met Leu Asp Leu Ile Tyr Ala Asn Tyr Lys Thr Gln Asp

50 55 60

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65 70 75 80

Gln Ser Pro Asn Gln Ala Tyr Ala Val Tyr Met Ala Gly Leu Thr Asn

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Ala Ala Thr Gly Asp Asn Phe Ile Gln Asp Phe Phe Gly Ile Asp Arg

100 105 110

Ala Thr Arg Glu Thr Thr Ser Met Arg Thr Ala Phe Ser Asn Phe Gln

115 120 125

Asn Leu Val Arg Val Phe Pro Asn Ser Pro Tyr Ser Gln Asp Ala Leu

130 135 140

Ala Arg Met Ala Tyr Ile Lys Asp Ala Leu Ala Arg His Glu Leu Glu

145 150 155 160

Ile Ala Lys Phe Tyr Ala Lys Arg Lys Ala Trp Val Ala Val Ala Asn

165 170 175

Arg Val Val Gly Met Leu Lys Gln Tyr Pro Asp Thr Lys Ala Thr Tyr

180 185 190

Glu Gly Leu Phe Leu Met Gln Glu Ala Tyr Glu Lys Met Gly Leu Thr

195 200 205

Ala Leu Ala Asn Asp Thr Gln Lys Ile Ile Asp Ala Asn Lys Asp Lys

210 215 220

Thr Phe Ala Pro Ile Glu Lys Pro Asn Glu Pro Asp Leu Lys Val Pro

225 230 235 240

Ala Val Lys

<210> 56

<211> 337

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> 来自R2846的NT052变体

<400> 56

Asp Thr Leu Glu Gln Gln Phe Gln Gln Gly Leu Glu Ala Thr Lys Arg

1 5 10 15

Gly Asp Tyr Gln Thr Ala Phe Lys Leu Trp Leu Pro Leu Ala Glu Gln

20 25 30

Gly Asn Ala Ser Ile Gln Phe Asn Leu Gly Leu Met Tyr Lys Lys Gly

35 40 45

Gln Gly Ile Lys Gln Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Trp Tyr Arg Lys

50 55 60

Ala Ala Glu Gln Gly Val Ala Asp Ala Gln Leu Asn Leu Gly Asn Met

65 70 75 80

Tyr Ala Lys Gly Leu Gly Val Lys Gln Asp Asp Val Glu Ala Val Lys

85 90 95

Trp Tyr Arg Gln Ala Ala Glu Gln Gly Asn Ala Lys Ala Gln Phe Asn

100 105 110

Leu Gly Leu Met Tyr Asp Asn Gly Arg Gly Val Lys Gln Asp Tyr Phe

115 120 125

Glu Ala Val Lys Trp Phe Arg Lys Ala Ala Glu Gln Gly Tyr Ala Asp

130 135 140

Ala Gln Phe Asn Leu Gly Asn Met Tyr Tyr Asn Gly His Gly Val Lys

145 150 155 160

Gln Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Trp Tyr Arg Lys Ala Ala Glu Gln

165 170 175

Gly Tyr Ala Asp Ala Gln Phe Asn Leu Gly Asn Met Tyr Tyr Asn Gly

180 185 190

His Gly Val Lys Gln Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Trp Tyr Arg Lys

195 200 205

Ala Ala Glu Gln Gly His Ala Lys Ala Gln Tyr Asn Leu Gly Asn Met

210 215 220

Tyr Ala Asn Gly Arg Gly Val Lys Gln Asp Tyr Phe Glu Ala Val Lys

225 230 235 240

Trp Tyr Arg Lys Ala Ala Glu Gln Gly Tyr Ala Asp Ala Gln Ala Asn

245 250 255

Leu Gly Ser Ala Tyr Ser Ala Gly His Gly Val Arg Gln Asp Tyr Ile

260 265 270

Glu Ala Val Lys Trp Phe Lys Lys Ala Ala Glu Asn Gly Ser Ala Asp

275 280 285

Gly Gln Phe Lys Leu Gly Leu Val Tyr Leu Ile Gly Gln Gly Ile Gln

290 295 300

Lys Asp Arg Thr Leu Ala Lys Glu Trp Leu Gly Lys Ala Cys Asp Asn

305 310 315 320

Gly Asn Gln Asn Gly Cys Glu Tyr Tyr Gly Glu Leu Asn Arg Gly Glu

325 330 335

Arg

<210> 57

<211> 143

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> 来自Fi176的NT002变体

<400> 57

Cys Ser Ser Phe Gln Asn Asp Asp Tyr Ala Met Asn Tyr Lys Gly Gln

1 5 10 15

Ile Gly Asp Pro Ile Met Ala Ile Ala Met Leu Ser Glu Gln Gln His

20 25 30

Glu Trp Ala Gly Thr Pro Tyr Val Leu Gly Gly Val Ser Arg Arg Gly

35 40 45

Val Asp Cys Ser Gly Phe Val Gln Lys Thr Phe Phe Asp Arg Phe Asn

50 55 60

Leu Arg Leu Pro Arg Ser Thr Val Glu Gln Ala Asn Tyr Gly Lys His

65 70 75 80

Val Arg Lys Glu Asp Ile Gln Thr Gly Asp Leu Ile Phe Phe Lys Thr

85 90 95

Gly Arg Gly Pro Asn Gly Tyr His Val Gly Ile Tyr Val Lys Glu Asp

100 105 110

Lys Phe Leu His Ala Ser Thr Arg Gly Gly Val Val Tyr Ser Ser Met

115 120 125

Asn Asn Pro Tyr Trp Ser Lys Ala Phe Trp Gln Val Arg Arg Ile

130 135 140

<210> 58

<211> 146

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> 来自Fi176的NT026变体

<400> 58

Val Pro Leu Trp Lys Thr Asp Ser Pro Lys Thr Ile Leu Ala Lys Glu

1 5 10 15

Gln His Arg Leu Tyr Leu Phe Leu Arg Gln Ile Gln Ala Arg Ala Glu

20 25 30

Asn Ser Ser Glu Val Trp Phe Leu Leu Ile Asn Arg Asn Leu Ala Thr

35 40 45

Gln Gln Trp Cys Leu Thr Ala Gln Val Lys Asn Asn Gln Thr Cys Asp

50 55 60

Cys Leu Asn Pro Ile Asn Cys Pro Lys Glu Val Tyr Val His Phe Tyr

65 70 75 80

Tyr Pro Tyr Phe Pro Asn Lys Thr Ile Ile Gln Ser His His Ile Tyr

85 90 95

Pro Lys Glu Ile Thr Arg Phe Asp Gly Ile Arg Asn Thr Ile Val Thr

100 105 110

Arg Cys Phe Ile Leu Gln Ala Glu Asn Glu Arg Thr Leu Phe Leu Phe

115 120 125

Phe Asn Val Gly Ser Ile Arg Leu Lys Thr Asn Gln Phe Asp Ser Ala

130 135 140

Cys Asn

145

<210> 59

<211> 556

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> 来自Fi176的NT009变体

<400> 59

Glu Gln Thr Val Asp Ile Glu Val Gln Gly Ile Arg Gly Phe Arg Ala

1 5 10 15

Val Arg Asn Thr Asp Leu Asn Val Asn Leu Ile Asn Lys Glu Glu Met

20 25 30

Asp Gly Ser Glu Arg Tyr Gln His Leu Val Thr Lys Ala Val Asp Arg

35 40 45

Gly Leu Arg Val Phe Gly Tyr Tyr Asp Ser Ser Val Arg Phe Glu Arg

50 55 60

Lys Gln Arg Gln Gly Lys Arg Asp Leu Leu Ile Ala His Val Thr Pro

65 70 75 80

Gly Glu Pro Thr Lys Ile Ala Gly Thr Asp Val Gln Ile Glu Gly Glu

85 90 95

Ala Ala Gln Asp Glu Asn Phe Asn Ala Leu Arg Lys Asn Leu Pro Lys

100 105 110

Asp Gly Val Leu Val Glu His Gln Thr Tyr Asp Asp Tyr Lys Thr Ala

115 120 125

Ile Ser Arg Leu Ala Leu Asn Arg Gly Tyr Phe Asp Gly Glu Phe Lys

130 135 140

Ile Ser Arg Leu Glu Ile Ser Pro Glu Thr His Gln Ala Trp Trp Arg

145 150 155 160

Met Leu Phe Asp Ser Gly Val Arg Tyr His Tyr Gly Asn Ile Thr Phe

165 170 175

Ser His Ser Gln Ile Arg Asp Asp Tyr Leu Asn Asn Ile Leu Asn Ile

180 185 190

Lys Ser Gly Asp Pro Tyr Leu Met Asn Asn Leu Ser Asp Leu Thr Ser

195 200 205

Asp Phe Ser Ser Ser Asn Trp Phe Ser Ser Val Leu Val Gln Pro Asn

210 215 220

Ile Asn His Lys Ser Lys Thr Val Asp Ile Glu Ile Ile Leu Tyr Pro

225 230 235 240

Arg Lys Lys Asn Ala Met Glu Leu Gly Val Gly Phe Asp Thr Asp Gly

245 250 255

Gly Val His Gly Gln Ile Gly Trp Thr Lys Pro Trp Ile Asn Ser Arg

260 265 270

Gly His Ser Leu Arg Ser Asn Leu Tyr Leu Ser Ala Pro Lys Gln Thr

275 280 285

Leu Glu Ala Thr Tyr Arg Ile Pro Leu Leu Lys Asn Pro Leu Asn Tyr

290 295 300

Tyr Tyr Asp Phe Ala Val Gly Trp Glu Gly Glu Lys Glu Asn Asp Thr

305 310 315 320

Asn Thr Arg Ala Leu Thr Leu Ser Ala Leu Arg Tyr Trp Asn Asn Ala

325 330 335

His Gly Trp Gln Tyr Phe Gly Gly Leu Arg Thr Arg Tyr Asp Ser Phe

340 345 350

Thr Gln Ala Asp Ile Thr Asp Lys Thr Leu Leu Leu Tyr Pro Thr Val

355 360 365

Gly Phe Thr Arg Thr Arg Leu Arg Gly Gly Ser Phe Ala Thr Trp Gly

370 375 380

Asp Val Gln Lys Ile Thr Phe Asp Leu Ser Lys Arg Ile Trp Leu Ser

385 390 395 400

Glu Ser Ser Phe Ile Lys Val Gln Ala Ser Ser Ala Trp Ile Arg Thr

405 410 415

Tyr Ala Glu Asn His Arg Ile Val Ala Arg Ala Glu Ile Gly Tyr Leu

420 425 430

His Thr Lys Asp Ile Glu Lys Ile Pro Pro Thr Leu Arg Phe Phe Ala

435 440 445

Gly Gly Asp Arg Ser Val Arg Gly Tyr Gly Tyr Lys Lys Ile Ala Pro

450 455 460

Lys Asn Arg Asn Gly Lys Leu Val Gly Gly Ser Arg Leu Leu Thr Thr

465 470 475 480

Ser Leu Glu Tyr Gln Tyr Gln Val Tyr Pro Asn Trp Trp Ala Ala Thr

485 490 495

Phe Ala Asp Ser Gly Leu Ala Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Lys Glu Leu

500 505 510

Arg Tyr Gly Ala Gly Val Gly Val Arg Trp Ala Ser Pro Val Gly Ala

515 520 525

Ile Lys Phe Asp Ile Ala Thr Pro Ile Arg Asp Lys Asp Asn Ser Lys

530 535 540

Asn Ile Gln Phe Tyr Ile Gly Leu Gly Thr Glu Ile

545 550 555

<210> 60

<211> 126

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> 来自Fi176的NT025变体

<400> 60

Ile Ile Ala Ile Leu Ala Thr Ile Ala Ile Pro Ser Tyr Gln Asn Tyr

1 5 10 15

Thr Lys Lys Ala Ala Val Ser Glu Leu Leu Gln Ala Ser Ala Pro Tyr

20 25 30

Lys Ala Asp Val Glu Leu Cys Val Tyr Ser Thr Asn Glu Thr Thr Asn

35 40 45

Cys Thr Gly Gly Lys Asn Gly Ile Ala Ala Asp Ile Thr Thr Ala Lys

50 55 60

Gly Tyr Val Lys Ser Val Thr Thr Ser Asn Gly Ala Ile Thr Val Lys

65 70 75 80

Gly Asp Gly Thr Leu Ala Asn Met Glu Tyr Ile Leu Gln Ala Thr Gly

85 90 95

Asn Ala Ala Thr Gly Val Thr Trp Thr Thr Thr Cys Lys Gly Thr Asp

100 105 110

Ala Ser Leu Phe Pro Ala Asn Phe Cys Arg Ser Val Thr Lys

115 120 125

<210> 61

<211> 162

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> 来自Fi176的NT028变体

<400> 61

Pro Arg Thr Val Ser His Gln Val Ile Ser Glu Asn Asp Asp Ile Gln

1 5 10 15

Leu Thr Gly Leu Ile Asn Asn Leu Glu Lys Asp Asn Arg Thr Gly Ile

20 25 30

Phe His Lys Val Arg Thr Asn Arg Ser Ser Ala Leu Met Gly Asp Lys

35 40 45

Ala Leu Ala Ser Val Tyr Asn Glu Trp Val Gly Thr Arg Tyr Arg Met

50 55 60

Gly Gly Thr Thr Lys Arg Gly Ile Asp Cys Ser Ala Phe Met Gln Thr

65 70 75 80

Thr Phe Ser Glu Val Phe Gly Ile Glu Leu Pro Arg Ser Thr Ala Glu

85 90 95

Gln Arg His Leu Gly Arg Lys Ile Asn Lys Ser Glu Leu Lys Lys Gly

100 105 110

Asp Leu Val Phe Phe Arg Lys Asn Asn His Val Gly Val Tyr Ile Gly

115 120 125

Asn Asn Gln Phe Met His Ala Ser Thr Gly Gln Gly Val Thr Ile Ser

130 135 140

Ser Leu Asp Glu Lys Tyr Trp Ala Arg Thr Tyr Thr Gln Ser Arg Arg

145 150 155 160

Ile Met

<210> 62

<211> 895

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> 来自R2846的NT029变体

<400> 62

Ser Thr Pro Asp Leu Pro Gln Asn His Lys Ile Ile Thr Gly Thr Ala

1 5 10 15

Thr Val Ser His Thr Glu Asn Glu Met Thr Ile Lys Gln Thr Thr Pro

20 25 30

Thr Thr Gln Ile Asn Trp Asp Ser Phe Asn Ile Gly Lys Asp Lys Glu

35 40 45

Val Lys Phe Glu Gln Pro Ser Thr Ser Ala Val Ala Tyr Asn Arg Val

50 55 60

Thr Gly Gly Asn Ala Ser His Ile Gln Gly Lys Leu Thr Ala Asn Gly

65 70 75 80

Lys Val Tyr Leu Ala Asn Pro Asn Gly Val Ile Ile Thr Lys Gly Ala

85 90 95

Glu Ile Asn Val Ala Gly Leu Leu Ala Thr Thr Lys Asp Leu Glu Arg

100 105 110

Ile Ser Glu Asn Gly Asn Thr Asn Thr Asn Lys Phe Thr Arg Lys Ala

115 120 125

Lys Glu Gly Lys Val Leu Thr Glu Gly Gln Val Ile Asn Glu Gly Glu

130 135 140

Ile Lys Ala Lys Asp Phe Val Val Leu Asn Gly Asp Glu Val Ile Asn

145 150 155 160

Lys Gly Asn Ile Asn Val Glu Lys Asn Ser Thr Ile Asn Gly Glu Val

165 170 175

Tyr Leu Ser Ser Ser Asn Asn Phe Thr Phe Thr Leu Ser Asp Ser Gly

180 185 190

Ile Ser Val Ala Leu Glu Asp Asn Thr Val Gln Gly Ile Val Lys Asn

195 200 205

Glu Gly Ile Val Lys Asn Glu Gly Ser Ile Lys Ala Gly Glu Ile Thr

210 215 220

Leu Ser Ala Lys Gly Arg Lys Glu Ala Leu Asp Ser Leu Val Val Asn

225 230 235 240

Asn Gly Val Leu Glu Ala Thr Lys Val Ser Asn Arg Lys Gly Lys Ile

245 250 255

Val Leu Ser Ala Asp Asp Val Gln Leu Asn Asn Asn Ser Asp Ile Lys

260 265 270

Gly Glu Ile Val Asn Phe Gly Thr Glu Val Thr Ser Asn Glu Asp Lys

275 280 285

Lys Leu Lys Ile Thr Ser Gln Thr Gly Ser Lys Val Thr Ser Pro Lys

290 295 300

Ile Asn Phe Lys Gly Lys Ser Val Asn Ile Lys Gly Asp Phe Gly Arg

305 310 315 320

Glu Asp Asn Thr Thr Tyr Tyr Asp Asp Glu His Lys Lys Leu Lys Thr

325 330 335

Glu Val Asn Ile Asp Val Pro Asn Thr Glu Asn Ile Gln Ile Ala Asp

340 345 350

Lys Asp Asn Ala Gly Thr Asp Ser Phe Ile Gln Thr Gly Ala Leu Ser

355 360 365

Ser Leu Leu Ala Asn Asn Gly Lys Val Asn Leu Lys Gly Lys Asp Val

370 375 380

Asn Ile Ser Gly Asn Ile Asn Ile Asn Ser Phe Arg Gly Thr Asp Ser

385 390 395 400

Leu Leu Lys Leu Thr Asn Lys Gly His Ile Asn Ile Asn His Ala Asp

405 410 415

Ile His Ser Lys Gly Arg Leu Phe Phe Ile Thr Ser Leu Gln Asn Asp

420 425 430

Val Asp Phe Gln Ser Asn Ile Thr Ile Thr Asp Ser Lys Ile Asn Leu

435 440 445

Gly Asn Gly Ala Met Gly Leu Gly Arg Ser Val Asn Glu Asn Asp Leu

450 455 460

Asp Arg Trp Arg Arg Thr Glu Tyr Ser Gln Arg Lys Lys Phe Asn Val

465 470 475 480

Asn Met Arg Asn Val Val Phe Asp Gln Val Asp Asp Val Val Val Ala

485 490 495

Gly Gly Phe Lys Glu Val Asn Leu Asn Asn Ile Val Ala Thr Gly Gln

500 505 510

Thr Asn Phe Tyr Ile Asp Gly Gly Val Ser Arg Asn Arg Asn Gly Val

515 520 525

Ser Ser Lys Tyr Glu Tyr Gly Val Leu Asp Leu Asp Lys Arg Thr Gln

530 535 540

Leu Ser Glu Leu Asp Gln Arg Arg Arg Arg Trp Gly Tyr Tyr Pro Asp

545 550 555 560

Leu Asp Leu Asp Met Asn Lys Ala Tyr Trp His Arg Phe Asp Met Phe

565 570 575

Ala Ser Lys Asn Thr Gly Arg Ser Thr Ile Lys Asp Thr Glu Ile Asn

580 585 590

Ile Ser Asn Ser Lys Ile Asn Leu Lys Asn Gly Phe Val His Leu Leu

595 600 605

Ala Glu Lys Ile Lys Leu Asp Asn Ser Lys Ile Asp Ile Thr Phe Asp

610 615 620

Lys Asp Asn Ser Gln Asp Ile Ser Thr Gln Ile Asn Arg Leu Gly Met

625 630 635 640

Asn Gly Lys Val Ser Met Val Asn Ser His Ile Lys Ile Val Gly Asp

645 650 655

Glu Lys Ile Asp Ile Ser Ala Lys Ala Pro Tyr Ala Thr Met Phe Leu

660 665 670

Ile Gly Glu Leu Ile Gly Glu Lys Ser Ser Ile Phe Val Lys Ser His

675 680 685

Gln Gly Tyr Thr Phe Arg Thr Asp Gly Asp Thr Lys Ile Ala Gly Lys

690 695 700

Asn Ser Lys Asp Asp Leu Lys Ile Thr Ala Ile Asn Thr Gly Gly Arg

705 710 715 720

Thr Gly Lys Glu Val Ile Ile Asn Gly Ala Pro Gly Ser Ile Asp Asn

725 730 735

Asp Ala Asn Ile Ala Asn Met Ala Phe Thr Ile Gly Asp Asn Ala Asn

740 745 750

Thr Lys Thr Thr Ile Glu Asn Ala Asp Ile Thr Ala Leu Ala Pro Asn

755 760 765

Gly Gly Thr Ala Tyr Leu Ser Ser Lys Gly Val Glu Ile Glu Val Asn

770 775 780

Pro Asn Ser Asn Phe Thr Phe Phe Glu Leu Pro Arg Glu Lys Asn Phe

785 790 795 800

Asn Gln Thr Lys Ile Asn Gly Asp Ser Thr Lys Leu Ser Glu Arg Gly

805 810 815

Phe Ala Arg Leu Tyr Asp Lys Ile Asn Gly Val Arg Ala Ser Asn Leu

820 825 830

Ser Ala Glu Gln Leu Asn Val Thr Asp Ser Ser Glu Lys Ile Ile Asn

835 840 845

Thr Lys Leu Val Ser Ser Leu Asp Val Glu Lys Leu Val Ser Val Ala

850 855 860

Val Cys Asp Ala Gly Lys Gly Cys Glu Glu Gln Gln Phe Gly Asp Lys

865 870 875 880

Gly Asn Asn Thr Lys Val Ser Val Gly Glu Leu Glu Ala Glu Gln

885 890 895

<210> 63

<211> 183

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> 来自R2846的NT031变体

<400> 63

Met Lys Gly Lys Ile Thr Leu Phe Phe Thr Ala Leu Cys Phe Gly Leu

1 5 10 15

Thr Gly Cys Ile Ala Pro Pro Lys Gly Leu Glu Lys Glu Arg Phe Ser

20 25 30

Ile Asn Ser Tyr Arg Glu Ile Ser Pro Gln Asp Leu Thr Cys His Cys

35 40 45

Asn Thr Val Arg Leu Gly Gly Lys Ile Val Asn Thr Thr Val Leu Ala

50 55 60

Asn Gln Thr Lys Ile Glu Val Leu Ser Leu Pro Val Ser Ser Ile Ser

65 70 75 80

Gly Lys Pro Phe Val Glu Leu Gln Ser Asp Gly Arg Phe Ile Val Tyr

85 90 95

Phe Asn Gly Phe Val Glu Pro Glu Asn Leu Lys Glu Arg Tyr Ile Thr

100 105 110

Val Gly Gly Gln Leu Thr Gly Thr Glu Lys Gly Lys Ile Glu Gln Ala

115 120 125

Asp Tyr Thr Tyr Pro Val Val Gln Ala Asp Lys Tyr Arg Ile Trp Thr

130 135 140

Leu Ser Thr Thr Tyr Asn Tyr Pro Thr Asp Asp Trp Asp Glu Asp Asp

145 150 155 160

Asp Trp Gly Phe Phe Arg Trp Arg His Arg Pro Trp Tyr Val Gln Pro

165 170 175

Glu Ile His Tyr Tyr Leu Asn

180

<210> 64

<211> 117

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> 来自Fi176的NT015变体

<400> 64

Ala Gln Asn Ala Asn Val Thr Thr Pro Gln Ala Gln Lys Met Gln Val

1 5 10 15

Glu Lys Val Asp Lys Ala Leu Gln Lys Gly Glu Ala Asp Arg Tyr Leu

20 25 30

Cys Gln Asp Asp Lys Val Val Arg Val Val His Ala Thr His Lys Lys

35 40 45

Tyr Lys Lys Asn Leu His Tyr Val Thr Val Thr Phe Gln Gly Val Ser

50 55 60

Glu Lys Leu Thr Leu Met Ile Ser Glu Arg Gly Lys Asn Tyr Ala Asn

65 70 75 80

Ile Arg Trp Met Trp Gln Glu Arg Asp Asp Phe Ser Thr Leu Lys Thr

85 90 95

Asn Leu Gly Glu Ile Leu Ala Thr Gln Cys Val Ser Gln Thr Ser Glu

100 105 110

Arg Leu Ser Gly Gln

115

<210> 65

<211> 134

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> 来自Fi176的NT023变体

<400> 65

Asn Thr Asp Ile Phe Ser Gly Asp Val Tyr Ser Ala Ser Gln Ala Lys

1 5 10 15

Glu Ala Arg Ser Ile Thr Tyr Gly Thr Ile Val Ser Val Arg Pro Val

20 25 30

Lys Ile Gln Ala Asp Asn Gln Gly Val Val Gly Thr Leu Gly Gly Gly

35 40 45

Ala Leu Gly Gly Ile Ala Gly Ser Ala Ile Gly Gly Gly Arg Gly Gln

50 55 60

Ala Ile Ala Ala Val Val Gly Ala Ile Gly Gly Ala Ile Ala Gly Ser

65 70 75 80

Lys Ile Glu Glu Lys Met Ser Gln Val Asn Gly Ala Glu Leu Val Ile

85 90 95

Lys Lys Asp Asp Gly Gln Glu Ile Val Val Val Gln Lys Ala Asp Ser

100 105 110

Ser Phe Val Ala Gly Arg Arg Val Arg Ile Val Gly Gly Gly Ser Ser

115 120 125

Leu Asn Val Ser Val Leu

130

<210> 66

<211> 345

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> 来自R2846的NT100变体

<400> 66

Met Asp Leu Gly Pro Ile Tyr Asn Thr Arg Asp Ile Asn Asp Gly Lys

1 5 10 15

Val Ile Asn Ile Asp Asn Pro Asn Tyr Thr Asn Pro Val Ala Ile Lys

20 25 30

Lys Asn Glu Asn Asn Asn Ala Tyr Gln Phe Asn His Leu Lys Thr Leu

35 40 45

Gly Leu Tyr Ile Gln Asn Thr Thr Tyr Phe Thr Asp Asn Phe Ile Ile

50 55 60

Thr Gly Gly Leu Arg Tyr Glu Tyr Phe Asp Gln Val Val Gly Arg Ser

65 70 75 80

Thr Leu Lys Asn Ile Arg Ser Gly Tyr Leu Ala Gln Lys Asp Gly Lys

85 90 95

Leu Leu Tyr Gln Leu Gly Ser Val Tyr Lys Phe Thr Pro Asn Ile Ala

100 105 110

Thr Phe Phe Asn His Ala Glu Ser Phe Arg Pro Gln Asn Asn Arg Thr

115 120 125

Leu Ile Ile Asn Gly Glu Leu Pro Ala Glu Gln Gly Lys Ser Phe Glu

130 135 140

Thr Gly Leu Lys Tyr Glu Asn Ala Tyr Leu Asn Ala Thr Val Ala Leu

145 150 155 160

Phe Asn Ile Asn Lys Arg Asn Val Ala Glu Thr Val Asn Val Asn Gly

165 170 175

Thr Asn Glu Leu Gln Ile Val Gly Lys Gln Arg Ser Arg Gly Ile Glu

180 185 190

Phe Asp Leu Asn Gly Gln Leu Thr Asp Asn Leu Ser Ile Ala Ala Asn

195 200 205

Tyr Thr Tyr Thr Lys Val Lys Asn Leu Glu Asn His Asn Asn Lys Leu

210 215 220

Ala Val Gly Lys Gln Leu Ser Gly Val Pro Lys His Gln Ala Ser Leu

225 230 235 240

Phe Leu Ala Tyr Asn Ile Gly Glu Phe Asp Phe Gly Asn Ile Arg Val

245 250 255

Gly Gly Gly Ala Arg Tyr Leu Gly Ser Trp Tyr Ala Tyr Asn Asn Thr

260 265 270

Tyr Thr Lys Ala Tyr Lys Leu Pro Gln Ala Ile Val Tyr Asp Ala Phe

275 280 285

Ile Ala Tyr Asp Thr Lys Ile Ser Gly Lys Lys Val Ser Phe Gln Leu

290 295 300

Asn Gly Lys Asn Leu Ser Asn Lys Val Tyr Ser Pro Ser Thr Ser Gly

305 310 315 320

Asn Ala Ser Arg Thr Leu Ile Pro Val Ala Leu Gly Tyr Ala Arg Glu

325 330 335

Val Ile Leu Asn Thr Lys Ile Glu Phe

340 345

<210> 67

<211> 505

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> 来自Fi176的NT066变体

<400> 67

Phe Lys Lys Ser Leu Ile Val Ala Ala Ser Phe Ala Ser Leu Ser Leu

1 5 10 15

Phe Asn Ser Ala Thr Ala Glu Leu Val Tyr Lys Pro Leu Glu Gln Pro

20 25 30

Val Glu Pro Ala Lys Pro Asp Leu Lys Ile Glu Ser Val Asn Glu Lys

35 40 45

Phe Ala Glu Lys Tyr Pro Asn Gln Tyr Asn Ser Trp Arg Ser Thr Ala

50 55 60

Asn Gly Asp Gly Glu Asn Ile Ile Tyr Ala Asp Glu Glu Asn Pro Arg

65 70 75 80

Leu Ile Val Leu Trp Gly Gly Tyr Ala Phe Ala Lys Glu Tyr Asn Ala

85 90 95

Pro Arg Gly His Phe Tyr Ala Val Thr Asp Val Arg Asn Ile Leu Arg

100 105 110

Thr Gly Ala Pro Lys Thr Ala Asn Asp Gly Pro Gln Ala Met Ala Cys

115 120 125

Trp Thr Cys Lys Gly Pro Asp Val Pro Arg Leu Ile Ala Glu Trp Gly

130 135 140

Glu Lys Asp Tyr Phe Asn Ala Lys Trp Ala Lys Gly Gly Pro Glu Ile

145 150 155 160

Val Asn Ser Ile Gly Cys Ala Asp Cys His Asp Thr Thr Ser Lys Asp

165 170 175

Phe Ala Glu Gly Lys Pro Ala Leu Arg Ile Ala Arg Pro His Ile Leu

180 185 190

Arg Ala Leu Asp Ala Leu Glu Lys Ala Thr Ala Glu Lys Asp Lys Ala

195 200 205

Glu Gly Arg Pro His Asn Asn Leu Ser Phe Asn Thr Ala Ala Arg Thr

210 215 220

Glu Lys Arg Ala Glu Ile Cys Ala Asn Cys His Val Glu Tyr Tyr Phe

225 230 235 240

Ala Gly Asp Ile Lys Gln Val Thr Phe Pro Trp Asp Asn Gly Gln Thr

245 250 255

Val Asp Asp Ile Glu Lys Tyr Tyr Asp Asp Ile Gly Phe Thr Asp Trp

260 265 270

Thr His Ser Leu Ser Lys Ala Pro Met Leu Lys Ala Gln His Pro Asp

275 280 285

Phe Glu Ile Trp Ser Leu Gly Met His Gly Lys Asn Gly Val Thr Cys

290 295 300

Val Asp Cys His Met Pro Lys Val Gln Gly Ala Asp Gly Lys Val Tyr

305 310 315 320

Thr Asp His Gln Ile Gln Asn Pro Phe Glu Ala Phe Asp His Thr Cys

325 330 335

Ala Asn Cys His Asp Gln Ser Lys Glu Lys Leu Arg Asp Ile Val Thr

340 345 350

Ser Arg Lys Lys Glu Val Lys Asp Val Met Gly Arg Leu Glu Asp Gln

355 360 365

Val Val Lys Ala His Phe Glu Ala Lys Ala Ala Trp Asp Ala Gly Ala

370 375 380

Thr Lys Glu Glu Met Glu Ala Ala Leu Met Asp Ile Arg His Ala Gln

385 390 395 400

Trp Arg Trp Asp Tyr Thr Ala Ala Ser His Gly Gly His Met His Ala

405 410 415

Pro Glu Val Val Leu Arg Val Leu Ala Ser Gly Leu Asp Lys Val Ala

420 425 430

Asp Ala Arg Thr Lys Leu Ala Val Ile Leu Thr Lys His Gly Val Lys

435 440 445

Thr Pro Val Gln Ile Pro Asp Ile Ser Thr Ala Asp Lys Ala Trp Lys

450 455 460

Val Met Gly Ile Asp Ile Glu Lys Glu Arg Lys Ala Lys Glu Glu Phe

465 470 475 480

Leu Lys Thr Val Val Pro Gln Trp Glu Gln Gln Ala Arg Glu Lys Gly

485 490 495

Leu Leu Val Asp Pro Pro Ala Gln Lys

500 505

<210> 68

<211> 6

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> His标签

<400> 68

His His His His His His

1 5

<210> 69

<211> 28

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT018 N端

<400> 69

Met Asn Phe Thr Leu Ile Phe Ile Leu Thr Thr Leu Val Val Ala Leu

1 5 10 15

Ile Cys Phe Tyr Pro Leu Leu Arg Gln Phe Lys Ala

20 25

<210> 70

<211> 20

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT024 N端

<400> 70

Met Lys Leu Lys Leu Phe Phe His Ile Val Leu Leu Cys Phe Ser Leu

1 5 10 15

Pro Val Trp Ala

20

<210> 71

<211> 19

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT032 N端

<400> 71

Met Lys Lys Phe Ala Leu Ala Thr Ile Phe Ala Leu Ala Thr Thr Ser

1 5 10 15

Ala Phe Ala

<210> 72

<211> 20

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT067 N端

<400> 72

Met Gln His Lys Leu Leu Phe Ser Ala Ile Ala Leu Ala Leu Ser Tyr

1 5 10 15

Ser Val Gln Ala

20

<210> 73

<211> 23

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT038 N端

<400> 73

Met Pro Phe Gln Tyr Val Thr Glu Asp Gly Lys Thr Val Val Lys Val

1 5 10 15

Gly Asn Gly Tyr Tyr Glu Ala

20

<210> 74

<211> 21

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT001 N端

<400> 74

Met Lys Leu Lys Gln Leu Phe Ala Ile Thr Ala Ile Ala Ser Ala Leu

1 5 10 15

Val Leu Thr Gly Cys

20

<210> 75

<211> 19

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT016 N端

<400> 75

Met Arg Lys Ile Lys Ser Leu Ala Leu Leu Ala Val Ala Ala Leu Val

1 5 10 15

Ile Gly Cys

<210> 76

<211> 11

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT052 N端

<400> 76

Met Leu Leu Phe Ile Leu Ser Ile Ala Trp Ala

1 5 10

<210> 77

<211> 18

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT002 N端

<400> 77

Met Lys Val Tyr Lys Ser Phe Leu Ile Ala Thr Ala Ser Leu Phe Leu

1 5 10 15

Phe Ala

<210> 78

<211> 24

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT026 N端

<400> 78

Met Gln Lys Gly Met Thr Leu Val Glu Leu Leu Ile Gly Leu Ala Ile

1 5 10 15

Ile Ser Ile Val Leu Asn Phe Ala

20

<210> 79

<211> 22

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT009 N端

<400> 79

Met Asn Lys Thr Leu Leu Lys Leu Thr Ala Leu Phe Leu Ala Leu Asn

1 5 10 15

Cys Phe Pro Ala Phe Ala

20

<210> 80

<211> 23

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT025 N端

<400> 80

Met Lys Leu Thr Thr Gln Gln Thr Leu Lys Lys Gly Phe Thr Leu Ile

1 5 10 15

Glu Leu Met Ile Val Ile Ala

20

<210> 81

<211> 21

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT028 N端

<400> 81

Met Leu Lys Arg Ile Leu Val Ile Ile Gly Leu Ala Val Leu Ala Thr

1 5 10 15

Ala Cys Ser Asn Ala

20

<210> 82

<211> 21

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT029 N端

<400> 82

Met Tyr Lys Leu Asn Val Ile Ser Leu Ile Ile Leu Thr Thr Tyr Thr

1 5 10 15

Gly Ala Thr Tyr Ala

20

<210> 83

<211> 18

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT031 N端

<400> 83

Met Lys Gly Lys Ile Thr Leu Phe Phe Thr Ala Leu Cys Phe Gly Leu

1 5 10 15

Thr Gly

<210> 84

<211> 17

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT015 N端

<400> 84

Met Leu Lys Lys Thr Ser Leu Ile Phe Thr Ala Leu Leu Leu Ala Gly

1 5 10 15

Cys

<210> 85

<211> 20

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT023 N端

<400> 85

Met Lys Lys Thr Asn Met Ala Leu Ala Leu Leu Val Ala Phe Ser Val

1 5 10 15

Thr Gly Cys Ala

20

<210> 86

<211> 30

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT100 N端

<400> 86

Met Asp Leu Gly Pro Ile Tyr Asn Thr Arg Asp Ile Asn Asp Gly Lys

1 5 10 15

Val Ile Asn Ile Asp Asn Pro Asn Tyr Thr Asn Pro Val Ala

20 25 30

<210> 87

<211> 26

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT040 N端

<400> 87

Met Met Lys Thr Leu Leu Lys Gly Gln Thr Leu Leu Ala Leu Met Ile

1 5 10 15

Ser Leu Thr Leu Ser Ser Leu Leu Leu Leu

20 25

<210> 88

<211> 18

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT048 N端

<400> 88

Met Lys Ser Val Pro Leu Ile Thr Gly Gly Leu Ser Phe Leu Leu Ser

1 5 10 15

Ala Cys

<210> 89

<211> 22

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT124 N端

<400> 89

Met Lys Lys Ser Lys Ile Ala Ala Gly Val Val Ile Ser Leu Ala Ala

1 5 10 15

Val Trp Cys Ala Gly Ala

20

<210> 90

<211> 33

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT066 N端

<400> 90

Met Lys Ile Tyr Leu Arg Phe Val Trp Ile Leu Ile Ile Ile Leu Asn

1 5 10 15

Phe Leu Leu Asn Leu Phe Ile Thr Thr Asn Gly Val Ile Ile Val Asn

20 25 30

Ala

<210> 91

<211> 22

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT097 N端

<400> 91

Met Lys Lys Phe Asn Gln Ser Ile Leu Ala Thr Ala Met Leu Leu Ala

1 5 10 15

Ala Gly Gly Ala Asn Ala

20

<210> 92

<211> 25

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> P48 N端

<400> 92

Met Ile Thr Ile Lys Lys Gly Leu Asp Leu Pro Ile Ala Gly Lys Pro

1 5 10 15

Ala Gln Val Ile His Ser Gly Asn Ala

20 25

<210> 93

<211> 26

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> HtrA N端

<400> 93

Met Lys Lys Thr Arg Phe Val Leu Asn Ser Ile Ala Leu Gly Leu Ser

1 5 10 15

Val Leu Ser Thr Ser Phe Val Ala Gln Ala

20 25

<210> 94

<211> 16

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> PE N端

<400> 94

Met Lys Lys Ile Ile Leu Thr Leu Ser Leu Gly Leu Leu Thr Ala Cys

1 5 10 15

<210> 95

<211> 18

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> PhiD N端

<400> 95

Met Lys Leu Lys Thr Leu Ala Leu Ser Leu Leu Ala Ala Gly Val Leu

1 5 10 15

Ala Gly

<210> 96

<211> 19

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> P6 N端

<400> 96

Met Asn Lys Phe Val Lys Ser Leu Leu Val Ala Gly Ser Val Ala Ala

1 5 10 15

Leu Ala Ala

<210> 97

<211> 42

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT013 N端

<400> 97

Met Pro Val Gln His Val Lys Leu Ala Arg Asp Arg Arg Lys Lys Arg

1 5 10 15

Thr Tyr Ile Lys Val Gly Val Phe Phe Val Ala Ile Leu Leu Ile Leu

20 25 30

Thr Gly Ile Leu Leu Thr Ile Lys Asp Lys

35 40

<210> 98

<211> 17

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT106 N端

<400> 98

Met Lys Lys Ile Ile Leu Asn Leu Val Thr Ala Ile Ile Leu Ala Gly

1 5 10 15

Cys

<210> 99

<211> 28

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT107 N端

<400> 99

Met Lys Met Arg Pro Arg Tyr Ser Val Ile Ala Ser Ala Val Ser Leu

1 5 10 15

Gly Phe Val Leu Ser Lys Ser Val Met Ala Leu Gly

20 25

<210> 100

<211> 24

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT108 N端

<400> 100

Met Ser Val Cys Lys Pro Phe Trp Phe Lys Thr Phe Ser Ile Ser Ile

1 5 10 15

Ile Thr Ala Leu Leu Val Ser Cys

20

<210> 101

<211> 30

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT109 N端

<400> 101

Met Ile Met Glu Leu Phe His Thr Ile Leu Ala Ile Val Ala Leu Ile

1 5 10 15

Leu Ser Ser Ala Val Val Ser Ser Ala Glu Ile Ser Leu Ala

20 25 30

<210> 102

<211> 30

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT110 N端

<400> 102

Met Ile Met Glu Leu Phe His Thr Ile Leu Ala Ile Val Ala Leu Ile

1 5 10 15

Leu Ser Ser Ala Val Val Ser Ser Ala Glu Ile Ser Leu Ala

20 25 30

<210> 103

<211> 19

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT111 N端

<400> 103

Met Lys Lys Thr Leu Val Ala Ala Leu Ile Ser Ser Val Ile Leu Leu

1 5 10 15

Thr Gly Cys

<210> 104

<211> 19

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT112 N端

<400> 104

Met Lys Thr Lys Val Ile Leu Thr Ala Leu Leu Ser Ala Ile Ala Leu

1 5 10 15

Thr Gly Cys

<210> 105

<211> 16

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT113 N端

<400> 105

Met Lys Lys Tyr Leu Leu Leu Ala Leu Leu Pro Phe Leu Tyr Ala Cys

1 5 10 15

<210> 106

<211> 19

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT114 N端

<400> 106

Met Lys Lys Val Ala Leu Ile Ser Leu Cys Ile Phe Thr Ala Leu Ser

1 5 10 15

Ala Phe Ala

<210> 107

<211> 35

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT115 N端

<400> 107

Met Lys Tyr Leu His Phe Thr Arg Pro Thr Ile Lys Val Ile Phe Met

1 5 10 15

Ile Asn Ser Ile Lys Thr Leu Leu Leu Ile Ala Thr Leu Ala Ile Leu

20 25 30

Ser Ala Cys

35

<210> 108

<211> 18

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT116 N端

<400> 108

Met Lys Ser Val Pro Leu Ile Thr Gly Gly Leu Ser Phe Leu Leu Ser

1 5 10 15

Ala Cys

<210> 109

<211> 19

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT117 N端

<400> 109

Met Lys Lys Leu Ile Ala Val Ala Val Phe Ser Ala Cys Gly Ser Leu

1 5 10 15

Ala His Ala

<210> 110

<211> 18

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT118 N端

<400> 110

Met Asn Ile Arg Trp Asn Val Ile Leu Gly Val Ile Ala Leu Cys Ala

1 5 10 15

Leu Ala

<210> 111

<211> 17

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT123 N端

<400> 111

Met Lys Lys Thr Thr Ala Leu Phe Leu Leu Ile Phe Ser Leu Ile Ala

1 5 10 15

Cys

<210> 112

<211> 26

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> 免疫刺激寡核苷酸

<400> 112

Ile Cys Ile Cys Ile Cys Ile Cys Ile Cys Ile Cys Ile Cys Ile Cys

1 5 10 15

Ile Cys Ile Cys Ile Cys Ile Cys Ile Cys

20 25

<210> 113

<211> 11

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> 多聚阳离子寡肽

<400> 113

Lys Leu Lys Leu Leu Leu Leu Leu Lys Leu Lys

1 5 10

<210> 114

<211> 122

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT119

<400> 114

Asp Thr Leu Glu Gln Gln Phe Gln Gln Gly Ser Glu Ala Thr Thr Arg

1 5 10 15

Gly Asp Tyr Gln Thr Thr Phe Lys Phe Leu Leu Pro Leu Ala Glu Gln

20 25 30

Gly Asn Ala Glu Ala Gln Leu Met Leu Gly Val Met Tyr Ala Arg Gly

35 40 45

Ile Gly Val Lys Gln Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Trp Tyr Arg Gln

50 55 60

Ala Ala Glu Gln Gly Tyr Ala Asn Ala Gln Ala Ile Leu Gly Phe Ser

65 70 75 80

Tyr Leu Leu Gly Gln Ser Gly Val Gln Val Asn Lys Ser Leu Ala Lys

85 90 95

Glu Trp Phe Gly Lys Ala Cys Asp Asn Gly Asp Gln Asn Gly Cys Glu

100 105 110

Tyr Tyr Gly Lys Leu Asn Arg Gly Glu Leu

115 120

<210> 115

<211> 158

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT120

<400> 115

Asp Thr Leu Glu Gln Gln Phe Gln Gln Gly Leu Thr Ala Tyr Glu Gln

1 5 10 15

Ser Asn Tyr Gln Thr Ala Phe Lys Leu Trp Leu Pro Met Ala Glu Gln

20 25 30

Gly Tyr Ala Lys Ala Gln Phe Asn Leu Gly Val Met Tyr Ala Lys Gly

35 40 45

Gln Gly Val Lys Gln Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Trp Phe Arg Lys

50 55 60

Ala Ala Glu Gln Gly Tyr Ala Glu Ala Lys Phe Asn Leu Gly His Met

65 70 75 80

Tyr Ser Lys Gly Arg Gly Val Lys Gln Asp Asp Phe Glu Ala Val Asn

85 90 95

Trp Tyr Arg Lys Ala Ala Glu Gln Gly Asp Ala Asp Ala Gln Ala Ile

100 105 110

Leu Gly Phe Leu Tyr Leu Leu Gly Glu Arg Gly Val Gln Val Asn Lys

115 120 125

Ser Leu Ala Lys Glu Trp Phe Gly Lys Ala Cys Asp Asn Gly Asn Gln

130 135 140

Asn Gly Cys Glu Tyr Tyr Gly Lys Leu Asn Arg Gly Glu Leu

145 150 155

<210> 116

<211> 157

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT121

<400> 116

Asp Thr Leu Glu Gln Gln Phe Gln Gln Gly Leu Thr Ala Tyr Glu Gln

1 5 10 15

Ser Asn Tyr Gln Thr Ala Phe Lys Leu Trp Leu Pro Leu Ala Glu Gln

20 25 30

Gly Asp Ala Asn Val Gln Phe Asn Leu Gly Val Met Tyr Ala Glu Gly

35 40 45

Gln Gly Val Lys Gln Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Trp Tyr Arg Lys

50 55 60

Ala Ala Glu Gln Gly Asp Ala Asn Ala Gln Ala Tyr Leu Gly Leu Ala

65 70 75 80

Tyr Thr Glu Gly Arg Gly Val Arg Gln Asp Tyr Thr Glu Ala Val Lys

85 90 95

Trp Phe Arg Lys Ala Ala Glu Gln Gly His Ala Asn Ala Gln Ala Ile

100 105 110

Leu Gly Phe Ser Tyr Leu Leu Gly Lys Gly Val Gln Val Asn Lys Ser

115 120 125

Leu Ala Lys Glu Trp Phe Gly Lys Ala Cys Asp Asn Gly Asp Gln Gly

130 135 140

Gly Cys Lys Tyr Tyr Gly Lys Leu Asn Arg Gly Glu Arg

145 150 155

<210> 117

<211> 168

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT122

<400> 117

Phe Asp Lys Gln Glu Ala Lys Gln Lys Val Glu Asp Thr Lys Gln Thr

1 5 10 15

Val Ala Ser Val Ala Ser Glu Thr Lys Asp Ala Ala Ala Asn Thr Met

20 25 30

Thr Glu Val Lys Glu Lys Ala Gln Gln Leu Ser Thr Asp Val Lys Asn

35 40 45

Lys Val Ala Glu Lys Val Glu Asp Ala Lys Glu Val Ile Lys Ser Ala

50 55 60

Thr Glu Thr Ala Ser Glu Lys Ala Thr Glu Ile Lys Glu Ala Val Ser

65 70 75 80

Glu Lys Ala Ser Glu Met Lys Glu Ala Ala Ser Glu Lys Ala Ser Glu

85 90 95

Met Lys Glu Ala Ala Ser Glu Lys Ala Ser Glu Met Lys Glu Ala Ala

100 105 110

Ser Glu Lys Ala Ser Glu Met Lys Glu Ala Ala Ser Glu Lys Ala Ser

115 120 125

Glu Met Lys Glu Ala Ala Ser Glu Lys Val Gly Glu Met Lys Glu Lys

130 135 140

Ala Thr Glu Met Lys Glu Ala Val Ser Glu Lys Ala Thr Gln Ala Val

145 150 155 160

Asp Ala Val Lys Glu Ala Thr Lys

165

<210> 118

<211> 26

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT119编码的N端

<400> 118

Met Arg Phe Thr Lys Thr Leu Phe Thr Thr Ala Leu Leu Gly Ala Ser

1 5 10 15

Ile Phe Ser Phe Gln Ser Thr Ala Trp Ala

20 25

<210> 119

<211> 26

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT120编码的N端

<400> 119

Met Lys Leu Thr Lys Thr Leu Leu Thr Thr Ala Leu Phe Gly Ala Ser

1 5 10 15

Val Phe Ser Phe Gln Ser Thr Ala Trp Ala

20 25

<210> 120

<211> 26

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT121编码的N端

<400> 120

Met Lys Leu Thr Lys Thr Leu Leu Thr Thr Ala Leu Leu Gly Ala Ser

1 5 10 15

Val Phe Ser Phe Gln Ser Thr Ala Trp Ala

20 25

<210> 121

<211> 23

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT122编码的N端

<400> 121

Met Glu Lys Ile Met Lys Lys Leu Thr Leu Ala Leu Val Leu Gly Ser

1 5 10 15

Ala Leu Ala Val Thr Gly Cys

20

<210> 122

<211> 173

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT004

<400> 122

Ser Glu Glu Gln Val Gln Arg Asp Val Tyr Gln Ser Leu Asp Asp Cys

1 5 10 15

Leu Ala Asp Trp Lys Lys Ile Glu Leu Cys Glu Ala Asp Lys Asn Thr

20 25 30

Glu Ser Thr Gln Lys Thr Glu Thr Thr Pro Gln Gln Gly Leu Gly Leu

35 40 45

Asn Ile Arg Asp Asn Gly Asn Ala Glu Ser Ala Val Lys Asn Pro Ala

50 55 60

Glu Asn Asn Val Gln Ala Asn Gln Ser Glu Asn Asn Ala Glu Ser Thr

65 70 75 80

Thr Lys Ala Glu Ser Thr Asp Pro Ser Leu Gly Ala Ala Ile Ala Gly

85 90 95

Gly Val Met Gly Tyr Leu Ala Ala Arg Ala Ile Ser Ser Phe Leu Gly

100 105 110

Pro Ser Tyr His Pro Gly Asn Arg Ala Val Thr Thr Pro Thr Gly Gln

115 120 125

Val Val Gln Pro Gln Thr Asn Arg Ser Val Gly Lys Pro Met Leu Val

130 135 140

Lys Gly Asn Ala Gly Ser Met Asn Ser Lys Pro Val Ser Arg Gly Gly

145 150 155 160

Phe Ser Ser Pro Asn Asn Thr His Arg Ser Ser Gly Gly

165 170

<210> 123

<211> 171

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT014

<400> 123

Val Ala Ala Val Ile Gly Gly Gly Ala Val Ala Ala Lys Val Ala Thr

1 5 10 15

Asp Pro Arg Thr Thr Gly Thr Gln Ile Asp Asp Glu Thr Leu Glu Phe

20 25 30

Lys Val Glu Asn Ala Val Glu Lys Asp Ala Gln Ile Lys Ala Glu Gly

35 40 45

Arg Val Asn Ala Val Ser Tyr Asn Gly Arg Val Leu Leu Ile Gly Gln

50 55 60

Val Pro Asn Ser Asp Val Lys Asp Thr Ala Thr Ala Leu Ala Lys Gly

65 70 75 80

Val Lys Gly Val Asn Glu Val Tyr Asn Glu Leu Thr Val Ser Ser Lys

85 90 95

Ile Ser Phe Ala Gln Ile Ser Lys Asp Ser Trp Leu Thr Thr Gln Val

100 105 110

Lys Ser Lys Met Phe Val Asp Gly Arg Val Lys Ala Thr Asp Val Lys

115 120 125

Val Ile Ser Glu Asn Gly Glu Val Phe Leu Leu Gly Asn Val Thr Gln

130 135 140

Ser Gln Ala Asn Ala Ala Ala Asp Ile Ala Ser Lys Ile Ser Gly Val

145 150 155 160

Lys Lys Val Ile Lys Val Phe Lys Tyr Leu Asp

165 170

<210> 124

<211> 387

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT022

<400> 124

Thr Ser Asn Phe Pro Ala Pro Ile Ser Asp Ala Asp Gly Asn Leu Ser

1 5 10 15

Pro Ser Val Ile Gln Ser Val Asn Gly Ser Asn Val Gly Gly Ala Trp

20 25 30

Gln Pro Glu Ile Gln Lys Asn Ser Leu Pro Thr Thr Gly Asn Met Val

35 40 45

Thr Pro Gln Pro Asn Phe Gln Pro Ile Asn Gln Gln Pro Thr Met Pro

50 55 60

Thr Ala Pro Ala Gln Pro Ala Phe Gln Pro Ser Pro Lys Thr Val Val

65 70 75 80

Ser Ala Pro Thr Val Gln Thr Lys Thr Val Thr Lys Thr Val Ala Asp

85 90 95

Cys Val Asp Gly Gln His Ile Asn Ile Pro Arg Asn Pro Asn Thr Asn

100 105 110

Val Pro Asp Tyr Ser Lys Ile Ser Lys Gly Ser Tyr Lys Gly Asn Thr

115 120 125

Tyr Lys Val Asn Lys Gly Asp Thr Met Phe Leu Ile Ala Tyr Leu Ala

130 135 140

Gly Ile Asp Val Lys Glu Leu Ala Ala Leu Asn Asn Leu Ser Glu Pro

145 150 155 160

Tyr Asn Leu Ser Leu Gly Gln Val Leu Lys Ile Ser Asn Cys Ser Thr

165 170 175

Lys Thr Val Thr Thr Thr Val Ser Val Lys Gln Pro Ala Val Thr Thr

180 185 190

Ser Thr Ala Thr Pro Val Lys Pro Ala Val Thr Tyr Thr Pro Gly Ala

195 200 205

Asn Gly Thr Gln Ile Gly Ser Asp Gly Thr Ile Ile Gly Pro Ile Lys

210 215 220

Ser Glu Ala Gly Thr Ser Pro Ser Val Pro Val Ala Thr Ser Ser Thr

225 230 235 240

Gln Val Thr Ser Ser Val Asn Asn Ala Asn Ser Thr Pro Ile Asn Ser

245 250 255

Asn Val Val Ala Pro Ile Ala Ser His Val Val Trp Gln Trp Pro Thr

260 265 270

Ser Gly Asn Ile Ile Gln Gly Phe Ser Ser Thr Asp Gly Gly Asn Lys

275 280 285

Gly Ile Asp Ile Ser Gly Ser Arg Gly Gln Ala Val Lys Ala Ala Ala

290 295 300

Ala Gly Arg Ile Val Tyr Ala Gly Asn Ala Leu Arg Gly Tyr Gly Asn

305 310 315 320

Leu Ile Ile Ile Lys His Asn Asp Asp Phe Leu Ser Ala Tyr Ala His

325 330 335

Asn Asp Lys Ile Leu Val Ala Asp Gln Gln Glu Val Lys Ala Gly Gln

340 345 350

Asp Ile Ala Lys Met Gly Ser Ser Gly Thr Asn Thr Val Lys Leu His

355 360 365

Phe Glu Ile Arg Tyr Lys Gly Lys Ser Val Asp Pro Val Arg Tyr Leu

370 375 380

Pro Arg His

385

<210> 125

<211> 20

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT004 N端

<400> 125

Met Lys Lys Lys Asn Gln Ile Leu Val Ser Leu Ser Ile Val Ala Leu

1 5 10 15

Leu Gly Gly Cys

20

<210> 126

<211> 22

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT014 N端

<400> 126

Met Thr Leu Ser Pro Leu Lys Lys Leu Ala Ile Leu Leu Gly Ala Thr

1 5 10 15

Ile Phe Leu Gln Gly Cys

20

<210> 127

<211> 22

<212> PRT

<213> 细菌<原核生物>

<220>

<223> NT022 N端

<400> 127

Met Thr Leu Ser Pro Leu Lys Lys Leu Ala Ile Leu Leu Gly Ala Thr

1 5 10 15

Ile Phe Leu Gln Gly Cys

20

<210> 128

<211> 286

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> NT061

<400> 128

Glu Glu Arg Val Val Ala Thr Val Asp Gly Ile Pro Ile Leu Glu Ser

1 5 10 15

Gln Val Arg Ala Asn Met Gly Lys Lys Gly Asp Arg Gln Ser Ala Leu

20 25 30

Asp Lys Ile Ile Asp Asp Leu Leu Val Gln Lys Ala Ile Gln Glu Ser

35 40 45

Gly Val Lys Ile Asp Pro Arg Glu Ile Asp Arg Val Val Glu Asp Thr

50 55 60

Ala Ala Arg Asn Gly Leu Thr Tyr Gly Gln Phe Leu Asp Ala Leu Asp

65 70 75 80

Tyr Gln Gly Ile Ser Leu Asn Thr Phe Arg Gln Gln Ile Ala Asn Gln

85 90 95

Met Val Met Gly Ala Val Arg Asn Lys Ala Ile Gln Glu Ser Ile Asp

100 105 110

Val Thr Arg Glu Glu Val Val Ala Leu Gly Gln Lys Met Leu Asp Glu

115 120 125

Ala Lys Ser Gln Gly Thr Ala Gln Lys Val Thr Gly Lys Glu Tyr Glu

130 135 140

Val Arg His Ile Leu Leu Lys Leu Asn Pro Leu Leu Asn Asp Ala Gln

145 150 155 160

Ala Lys Lys Gln Leu Ala Lys Ile Arg Ser Asp Ile Ile Ala Gly Lys

165 170 175

Thr Thr Phe Ala Asp Ala Ala Leu Lys Tyr Ser Lys Asp Tyr Leu Ser

180 185 190

Gly Ala Asn Gly Gly Ser Leu Gly Tyr Ala Phe Pro Glu Thr Tyr Ala

195 200 205

Pro Gln Phe Ala Gln Thr Val Met Lys Ser Lys Gln Gly Val Ile Ser

210 215 220

Ala Pro Phe Lys Thr Glu Phe Gly Trp His Ile Leu Glu Val Thr Gly

225 230 235 240

Val Ser Asp Gly Asp Leu Thr Ala Glu Ala Tyr Thr Gln Lys Ala Tyr

245 250 255

Glu Arg Leu Val Asn Thr Gln Leu Gln Asp Ala Thr Asn Asp Trp Val

260 265 270

Lys Ala Leu Arg Lys Arg Ala Asn Ile Gln Tyr Phe Asn Lys

275 280 285

<210> 129

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> NT061 N端

<400> 129

Met Lys Met Lys Lys Phe Ile Leu Lys Ser Phe Leu Leu Ala Thr Leu

1 5 10 15

Gly Cys Val Ala Phe Thr Ser Met Ala Gln Ala

20 25

<210> 130

<211> 390

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> NT017

<400> 130

Gly Leu Leu Ile Phe Ser Pro Val Ser Gln Ser Ser Asp Leu Asn Gln

1 5 10 15

Ile Gln Lys Gln Ile Lys Gln Gln Glu Ser Lys Ile Glu Lys Gln Lys

20 25 30

Arg Glu Gln Ala Lys Leu Gln Ala Asn Leu Lys Lys His Glu Ser Lys

35 40 45

Ile Asn Thr Val Glu Gly Glu Leu Leu Glu Thr Glu Ile Ser Leu Lys

50 55 60

Glu Ile Arg Lys Gln Ile Ala Asp Ala Asp Lys Gln Phe Lys Gln Leu

65 70 75 80

Glu Lys Gln Glu Arg Glu Gln Lys Ala Arg Leu Ala Lys Gln Met Asp

85 90 95

Ile Ile Tyr Arg Ser Gly Ile Asn Pro Ser Leu Ile Glu Arg Met Phe

100 105 110

Ala Gln Asp Pro Thr Lys Ala Glu Arg Met Lys Val Tyr Tyr Gln His

115 120 125

Leu Asn Gln Val Arg Ile Glu Met Ile Asp Asn Leu Lys Ala Thr Gln

130 135 140

Ala Gln Ile Ala Val Gln Lys Glu Ala Ile Leu Ala Gln Gln Lys Asn

145 150 155 160

His Arg Asn Gln Leu Ser Thr Gln Lys Lys Gln Gln Gln Ala Leu Gln

165 170 175

Lys Ala Gln Gln Glu His Gln Ser Thr Leu Asn Glu Leu Asn Lys Asn

180 185 190

Leu Ala Leu Asp Gln Asp Lys Leu Asn Ala Leu Lys Ala Asn Glu Gln

195 200 205

Ala Leu Arg Gln Glu Ile Gln Arg Ala Glu Gln Ala Ala Arg Glu Gln

210 215 220

Glu Lys Arg Glu Arg Glu Ala Leu Ala Gln Arg Gln Lys Ala Glu Glu

225 230 235 240

Lys Arg Thr Ser Lys Pro Tyr Gln Pro Thr Val Gln Glu Arg Gln Leu

245 250 255

Ile Asn Ser Thr Ser Gly Leu Gly Ala Ala Lys Lys Gln Tyr Ser Leu

260 265 270

Pro Val Ser Gly Ser Ile Leu His Thr Phe Gly Ser Ile Gln Ala Gly

275 280 285

Glu Val Arg Trp Lys Gly Met Val Ile Gly Ala Ser Ala Gly Thr Pro

290 295 300

Val Lys Ala Ile Ala Ala Gly Arg Val Ile Leu Ala Gly Tyr Leu Asn

305 310 315 320

Gly Tyr Gly Tyr Met Val Ile Val Lys His Gly Glu Thr Asp Leu Ser

325 330 335

Leu Tyr Gly Phe Asn Gln Ala Val Ser Val Lys Val Gly Gln Leu Val

340 345 350

Ser Ala Gly Gln Val Ile Ala Gln Val Gly Asn Thr Gly Glu Ile Ser

355 360 365

Arg Ser Ala Leu Tyr Phe Gly Ile Ser Arg Lys Gly Thr Pro Val Asn

370 375 380

Pro Ala Gly Trp Val Arg

385 390

<210> 131

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> NT017 N端

<400> 131

Met Leu Arg Phe Gly Val Asn Gln Lys Thr Ser Leu Leu Leu Thr Ala

1 5 10 15

Leu Leu Ser Cys

20

Claims (10)

1.一种免疫原性组合物，所述组合物包含一种或多种不可分型流感嗜血杆菌分离或重组的多肽抗原，所述抗原选自：(5)NTHI1292(NT067)、(8)CGSHiGG_00130(NT052)、(1)NTHI0915(NT018)、(2)NTHI1416(NT024)、(3)NTHI2017(NT032)、(4)CGSHiGG_02400(NT038)、(6)NTHI0877(NT001)、(7)NTHI0266(NT016)、(9)NTHI1627(NT002)、(10)NTHI1109(NT026)、(11)NTHI0821(NT009)、(12)NTHI0409(NT025)、(13)NTHI1954(NT028)、(14)NTHI0371(NT029)、(15)NTHI0509(NT031)、(16)NTHI0449(NT015)、(17)NTHI1473(NT023)、(18)gi-145633184(NT100)、(19)NTHI1110(NT040)、(20)gi-46129075(NT048)、(21)gi-145628236(NT053)、(22)NTHI1230(NT066)、(23)NTHI0522(NT097)、(24)NT004、(25)NT014、(26)NT022。

2.如权利要求1所述的组合物，其中

所述NT067抗原是包含氨基酸序列的多肽，所述序列：(a)与SEQ ID NO:5或与SEQ IDNO:52存在80％或更高的相同性；和/或(b)是SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:52的至少10个连续氨基酸的片段，且包含SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:52的表位；

所述NT016抗原是包含氨基酸序列的多肽，所述序列：(a)与SEQ ID NO:7或与SEQ IDNO:55存在80％或更高的相同性；和/或(b)是SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:55的至少10个连续氨基酸的片段，且包含SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:55的表位；

所述NT014抗原是包含氨基酸序列的多肽，所述序列：(a)与SEQ ID NO:123存在80％或更高的相同性；和/或(b)是SEQ ID NO:123的至少10个连续氨基酸的片段，且包含SEQ IDNO:123的表位；

所述NT022抗原是包含氨基酸序列的多肽，所述序列：(a)与SEQ ID NO:124存在80％或更高的相同性；和/或(b)是SEQ ID NO:124的至少10个连续氨基酸的片段，且包含SEQ IDNO:124的表位。

3.如权利要求1所述的免疫原性组合物，所述组合物还包含至少一种选自下组的多肽：(24)P48(NTHI0254，也定义为NT007)、(25)HtrA(NTHI1905，也定义为NT006)、(26)PE(NTHI0267，也定义为NT035)、(27)P26(NTHI0501，也定义为NT010)、(28)PHiD(NTHI0811，也定义为NT080)、(29)P6(NTHI0501，也定义为NT081)。

4.如前述权利要求中任一项所述的免疫原性组合物，所述组合物还包含至少一种选自下组的多肽：(30)NT013、(31)NT106、(32)NT107、(33)NT108、(34)NT109、(35)NT110、(36)NT111、(37)NT112、(38)NT113、(39)NT114、(40)NT115、(41)NT116、(42)NT117、(43)NT118、(44)NT123、(45)NT124、(46)NT119、(47)NT120、(48)NT121、(49)NT122和/或(50)NT061。

5.如权利要求1-4所述的免疫原性组合物，所述组合物包含两种或多种抗原的组合。

6.如权利要求1所述的组合物，所述至少一种不可分型流感嗜血杆菌分离或重组的多肽抗原在不同的病原性不可分型流感嗜血杆菌菌株之间具有保守性。

7.如前述权利要求中任一项所述的组合物，所述组合物还包含至少一种不可分型流感嗜血杆菌抗原以外的疫苗抗原，所述疫苗抗原选自：

–来自脑膜炎奈瑟球菌血清组A、B、C、W135和/或Y的抗原

–来自肺炎链球菌的糖或多肽抗原

–来自甲型肝炎病毒的抗原

–来自乙型肝炎病毒的抗原

–白喉抗原，如白喉类毒素

–破伤风抗原

–来自百日咳博德特菌的抗原

–全细胞百日咳抗原

–来自乙型流感嗜血杆菌的糖抗原

–脊髓灰质炎抗原

–麻疹、腮腺炎和/或风疹抗原

–流感病毒抗原

–来自粘膜炎莫拉菌的抗原

–来自呼吸道合胞病毒的抗原

–包含白喉(D)、破伤风(T)、百日咳(无细胞、组分)(Pa)、乙肝(rDNA)(HBV)、脊髓灰质炎(已灭活)(IPV)和流感嗜血杆菌b型(Hib)偶联疫苗(吸附)的疫苗组合物，例如Infanrix-hexa。

8.如前述权利要求中任一项所述的组合物，所述组合物还包含一种或多种药学上可接受的载剂、稀释剂和/或佐剂。

9.用于药物的前述权利要求中任一项所述的组合物。

10.如权利要求1-8中任一项所述的组合物，所述组合物是疫苗。