CN108619504B - 一种猪瘟脾淋弱毒疫苗的生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种猪瘟脾淋弱毒疫苗的生产方法，属于疫苗制备技术领域。猪瘟脾淋弱毒疫苗的生产方法，通过采用实时测温仪，对家兔颈部进行实时测温，并将数据无线传输到终端，经过系统大数据分析，自动判定筛选合格兔，大大提高了测温的精确性和动物福利，并且通过运用脾淋苗智能监测系统所生产出的疫苗效价稳定性更高，提升了产品质量。
Description
技术领域
本发明属于疫苗制备技术领域，具体涉及一种猪瘟脾淋弱毒疫苗的生产方法。
背景技术
猪瘟是由猪瘟病毒引起猪的传染病并伴有高接触和高致死性的特点。被我国列为一类动物传染病。全国每年有大量的猪因猪瘟死亡和淘汰造成巨大经济损失。中国在20世纪50年代创造出猪瘟兔化弱毒疫苗C株，该毒株系猪瘟石门系强毒株在兔子体内传代400多带而筛选出来，用该毒株生产出的疫苗有猪瘟兔化脾淋组织疫苗、细胞培养苗、乳兔组织苗和牛蹄反应组织苗等。其中兔脾淋组织疫苗最好的保持了C株的遗传稳定性、免疫原性和安全性，受到广大养殖户的青睐。通过给猪只接种猪瘟脾淋弱毒疫苗每年可为国家减少数亿的经济损失。
猪瘟脾淋弱毒疫苗是目前对抗猪瘟病毒最有效的防御措施之一，在目前生产工艺中，存在以下两个问题：(1)由于在原料兔的筛选和抗原收获前对兔子要进行数次的肛温测量，大大降低了动物福利。(2)在生产中所有测温环节均是采用人工测温，在测温的时间和读数上必然存在误差，导致定型热的错判，影响了疫苗的品质和抗原效价稳定性，使得疫苗抗原效价不稳定。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种猪瘟脾淋弱毒疫苗的生产方法，提高了猪瘟脾淋弱毒疫苗效价和稳定性，同时提高动物福利。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种猪瘟脾淋弱毒疫苗的生产方法，包括以下步骤：
(1)将实时体温检测仪安装在无特定病原微生物感染的原料兔的颈部，将所述实时体温检测仪连接至抗原收获智能判定系统中，根据所述抗原收获智能判定系统中设置原料兔的筛选参数进行筛选，得到合格的原料兔；
所述原料兔的筛选参数包括以下内容：大兔编号1-10000、大兔温度设定范围:38.2～39.5℃；每隔10min观察一次，体温波动范围值为±0.5℃；符合设定参数范围的大兔为合格，超过或低于所设温度范围则为不合格；
(2)将猪瘟兔化弱毒株液接种于所述合格的原料兔中，得到接毒的原料兔；
(3)将所述脾淋苗智能监测系统实时收集的所述接毒的原料兔的体温数据传输至抗原收获智能判定系统中，根据所述抗原收货智能判定系统中设定的接种后参数确定收获时间，处死原料兔，取免疫组织制备生产用毒种；
所述接种后参数设定：第一阶段潜伏期温度范围设定38.2～39.7℃，潜伏期时间段设定：接种时至接种后24h；第二阶段潜伏期时间设定：接种后第24h至48h，第二阶段潜伏期接种大兔体温最低值设定：超过第一阶段潜伏时最高温1℃以上，观察时间设定：每隔10min，连续温次次数设定：≥108次；第二阶段稽留期维持时间设定：18h～36h，降至常温波动值设定：38.2～42.0℃；符合设定参数范围的大兔为合格，超过或低于所设温度范围则为不合格；合格兔收苗时间设定：连续50个温次≤前一次温度；
(4)将实时体温检测仪安装在新一批的无特定病原微生物感染的原料兔的颈部，将所述实时体温检测仪连接至抗原收获智能判定系统，根据所述抗原收获智能判定系统中设置生产兔的隔离观察参数筛选，得到合格的生产兔；
所述大兔隔离观察参数设定：大兔编号1～10000、隔离观察温度38.2～39.7℃，观察时间设定：每隔10min一次，体温波动范围值为±0.5℃；符合设定参数范围的大兔为合格，超过或低于所设温度范围则为不合格；
(5)将所述步骤(3)中的生产用毒种接种于所述合格的生产兔中，根据抗原收货智能判定系统中设定的接种后参数确定收获时间，处死生产兔，取免疫组织破碎，过滤，得到猪瘟脾淋弱毒疫苗；
所述接种后参数的设定同步骤(3)中设定的参数；
所述步骤1)～3)与步骤4)之间没有时间顺序的限制。
优选的，所述实时体温检测仪连接至抗原收获智能判定系统的方法是将体温实时测定仪连接至集中器，所述集中器与服务器连接，所述服务器与所述抗原收获智能判定系统连接；所述实时体温检测仪采集的兔体温数据实时输送至服务器，所述服务器对根据所述兔体温数据作时间-体温曲线，并将所述时间-体温曲线传输给抗原收获智能判定系统。
优选的，所述步骤(2)中猪瘟兔化弱毒株液的抗原浓度为0.02～0.05g/ml。
优选的，所述步骤(2)中猪瘟兔化弱毒株液的接种体积为1ml/只兔。
优选的，所述步骤(3)中免疫组织包括脾脏。
优选的，所述步骤(3)中免疫组织制备生产用毒种的方法包括以下步骤：将冻干的免疫组织在无菌条件下研磨，将研磨后的免疫组织粉末用生理盐水稀释，得到生产用毒种；
所述研磨后的免疫组织粉末的质量和生理盐水的体积比1g:10～20ml的量稀释。
优选的，所述步骤(5)中免疫组织包括脾脏和淋巴结。
优选的，所述免疫组织破碎，过滤的方法如下：将所述免疫组织在保护剂作用下破碎，逐层过滤，得到猪瘟脾淋弱毒疫苗。
优选的，所述免疫组织的质量和保护剂的体积比为1g:10～24ml；所述保护剂为含质量浓度5％蔗糖的牛奶。
优选的，所述步骤(3)中生产用毒种按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》的要求进行检测；所述步骤(5)中猪瘟脾淋弱毒疫苗按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》的要求进行检测。
本发明提供了一种猪瘟脾淋弱毒疫苗的生产方法，通过采用实时测温仪，对无特定病原微生物感染的家兔颈部进行实时测温，并将数据无线传输到终端，经过系统大数据分析，自动判定筛选合格兔，大大提高了测温的精确性和动物福利，并且通过运用脾淋苗智能监测系统所生产出的疫苗效价稳定性更高，提升了产品质量。
附图说明
图1传统家兔定型热体温曲线；
图2大兔体温与体内猪瘟病毒含量关。
具体实施方式
本发明提供了一种猪瘟脾淋弱毒疫苗的生产方法，包括以下步骤：
(1)将实时体温检测仪安装在无特定病原微生物感染的原料兔的颈部，将所述实时体温检测仪连接至抗原收获智能判定系统中，根据所述抗原收获智能判定系统中设置原料兔的筛选参数进行筛选，得到合格的原料兔；
所述原料兔的筛选参数包括以下内容：大兔编号1-10000、大兔温度设定范围:38.2～39.5℃；每隔10min观察一次，体温波动范围值为±0.5℃；符合设定参数范围的大兔为合格，超过或低于所设温度范围则为不合格；
(2)将猪瘟兔化弱毒株液接种于所述合格的原料兔中，得到接毒的原料兔；
(3)将所述脾淋苗智能监测系统实时收集的所述接毒的原料兔的体温数据传输至抗原收获智能判定系统中，根据所述抗原收获智能判定系统中设定的接种后参数确定收获时间，处死原料兔，取免疫组织制备生产用毒种；
接种后参数设定：第一阶段潜伏期温度范围设定38.2～39.7℃，潜伏期时间段设定：接种时至接种后24h；第二阶段潜伏期时间设定：接种后第24h至48h，第二阶段潜伏期接种大兔体温最低值设定：超过第一阶段潜伏时最高温1℃以上，观察时间设定：每隔10min，连续温次次数设定：≥108次；第二阶段稽留期维持时间设定：18h～36h，降至常温波动值设定：38.2～42.0℃；符合设定参数范围的大兔为合格，超过或低于所设温度范围则为不合格；合格兔收苗时间设定：连续50个温次≤前一次温度；
(4)将实时体温检测仪安装在新一批的无特定病原微生物感染的原料兔的颈部，将所述实时体温检测仪连接至抗原收获智能判定系统，根据所述抗原收获智能判定系统中设置生产兔的隔离观察参数筛选，得到合格的生产兔；
所述大兔隔离观察参数设定：大兔编号1～10000、隔离观察温度38.2～39.7℃，观察时间设定：每隔10min一次，体温波动范围值为±0.5℃；符合设定参数范围的大兔为合格，超过或低于所设温度范围则为不合格；
(5)将所述步骤(3)中的生产用毒种接种于所述合格的生产兔中，根据抗原收获智能判定系统中设定的接种后参数确定收获时间，处死生产兔，取免疫组织破碎，过滤，得到猪瘟脾淋弱毒疫苗；
接种后参数设定：第一阶段潜伏期温度范围设定38.2～39.7℃，潜伏期时间段设定：接种时至接种后24h；第二阶段潜伏期时间设定：接种后第24h至48h，第二阶段潜伏期接种大兔体温最低值设定：超过第一阶段潜伏时最高温1℃以上，观察时间设定：每隔10min，连续温次次数设定：≥108次；第二阶段稽留期维持时间设定：18h～36h，降至常温波动值设定：38.2～42.0℃；符合设定参数范围的大兔为合格，超过或低于所设温度范围则为不合格；合格兔收苗时间设定：连续50个温次≤前一次温度；
所述步骤1)～3)与步骤4)之间没有时间顺序的限制。
本发明将实时体温检测仪安装在无特定病原微生物感染的原料兔的颈部，将所述实时体温检测仪连接至抗原收获智能判定系统中，根据所述抗原收获智能判定系统中设置原料兔的筛选参数进行筛选，得到合格的原料兔；所述原料兔的筛选参数包括以下内容：大兔编号1-10000、大兔温度设定范围:38.2～39.7℃；每隔10min观察一次，体温波动范围值为±0.5℃；符合设定参数范围的大兔为合格，超过或低于所设温度范围则为不合格。
本发明对所述实时体温检测仪没有特殊限制，选用能够实时测定动物体温的仪器即可。在本发明实施例中，所述实时体温检测仪购自福州派生特生物科技有限公司生产的电子智能型式(兽用)。将实时体温检测仪安装原料兔的颈部的方法包括以下步骤：将实时体温检测仪的探头固定在大兔颈部的皮肤上，用胶水固定，使大兔肩胛部背上背带，开机，温度处理器上有温度显示，则操作完成。
在本发明中，所述抗原收获智能判定系统是通过兔体温实时监测仪传来的温度数据借助于现代计算机强大的大数据处理能力，通过对上百万头脾淋苗生产大兔体温曲线及相关数据进行统计分析。以电脑程序的形式在电脑软件中固化五条相关性曲线。分别为：环境温度与颈部采集温度之间相关性曲线、环境温度与大兔真实生理体温之间相关性曲线、颈部温度与大兔真实生理体温之间相关性曲线、大兔体内猪瘟弱毒含量与体温变化之间相关性曲线和大兔品种与其体内猪瘟弱毒含量之间相关性曲线。通过这五条曲线互为关联，互为比对、依托密集体温监测所提供的大数据支持，对每一个体温数据进行去噪处理，进而判定该体温数据是否为猪瘟弱毒增殖引起的，然后依据病毒在活体内繁殖规律，对其增殖数量、体温曲线走势进行预判，再结合大兔体温实时监测数据的变化进行判定，从而达到可用兔的智能判定及收获时机的智能选择。这套系统使得整个抗原收获的判定方法的依据与原来定型热判定方法发生了变化。所述抗原收获智能判定系统购自福州派生特生物科技有限公司生产的PLMAJS1型号。
在本发明中，所述兔体温实时监测系统和抗原获取智能判定系统组成了脾淋苗智能监测系统。所述实时体温检测仪连接至抗原收获智能判定系统的方法是将体温实时测定仪连接至集中器，所述集中器与服务器连接，所述服务器与所述抗原收获智能判定系统连接；所述实时体温检测仪采集的兔体温数据实时输送至服务器，所述服务器对根据所述兔体温数据作时间-体温曲线，并将所述时间-体温曲线传输给抗原收获智能判定系统。
在本发明中，所述原料兔的筛选参数是根据数年来上百万头大兔时间-体温曲线数据，在原先定型热判定的基础上，结合环境温度对参数进行了改进优化。
在本发明中，所述无特定病原微生物感染的原料兔是指原料兔中猪瘟病毒、寄生虫和病原微生物不得检出的。具体方法采用本领域所熟知的常规方法即可。
得到合格的原料兔后，本发明将猪瘟兔化弱毒株液接种于所述合格的原料兔中，得到接毒的原料兔。
在本发明中，所述猪瘟兔化弱毒株液的抗原浓度优选为0.02～0.05g/ml。所述猪瘟兔化弱毒株液的溶剂优选为生理盐水。所述猪瘟兔化弱毒株由中国兽医药品监察所鉴定、保管和供应。所述猪瘟兔化弱毒株液的接种体积优选为1ml/只兔。所述猪瘟兔化弱毒株液的接种位置为大兔兔耳。
所述接毒的原料兔的养殖环境符合实验动物生产环境标准，具体可参照《实验动物生产环境要求》。
得到所述接毒的原料兔后，本发明将所述兔体温实时监测系统实时收集的所述接毒的原料兔的体温数据传输至抗原获取智能判定系统中，根据所述抗原获取智能判定系统中设定的接种后参数确定收获时间，处死原料兔，取免疫组织制备生产用毒种。
在本发明中，所述抗原获取智能判定系统中设定的接种后参数如下：接种后参数设定：第一阶段潜伏期温度范围设定38.2～39.5℃，潜伏期时间段设定：接种时至接种后24h；第二阶段潜伏期时间设定：接种后第24h至48h，第二阶段潜伏期接种大兔体温最低值设定：超过第一阶段潜伏时最高温1℃以上，观察时间设定：每隔10min，连续温次次数设定：≥108次；第二阶段稽留期维持时间设定：18h～36h，降至常温波动值设定：38.2～42.0℃；符合设定参数范围的大兔为合格，超过或低于所设温度范围则为不合格；合格兔收苗时间设定：连续50个温次≤前一次温度。
在本发明中，所述免疫组织优选包括脾脏。所述免疫组织制备生产用毒种的方法优选包括以下步骤：将冻干的免疫组织在无菌条件下研磨，将研磨后的免疫组织粉末用生理盐水稀释，得到生产用毒种；所述研磨后的免疫组织粉末的质量和生理盐水的体积比1g:10～20ml的量稀释。所述步骤(3)中生产用毒种优选按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》的要求进行检测。所述生产用毒种用漏斗导入无菌玻璃罐中暂存。制备过程中所使用的器具需经过高压灭菌消毒。配好的种毒需在2小时内用完，未用完的需无害化处理。
本发明将实时体温检测仪安装在新一批的无特定病原微生物感染的原料兔的颈部，将所述实时体温检测仪连接至抗原收获智能判定系统，根据所述抗原获取智能判定系统中设置生产兔的隔离观察参数筛选，得到合格的生产兔；所述大兔隔离观察参数设定：大兔编号1～10000、隔离观察温度38.2～39.7℃，观察时间设定：每隔10min一次，体温波动范围值为±0.5℃；符合设定参数范围的大兔为合格，超过或低于所设温度范围则为不合格。
在本发明中，所述安装的方法同上述合格的原料兔筛选时的安装方法，在此不做赘述。
得到检测合格的生产用毒种和合格的生产兔后，本发明将所述的生产用毒种接种于所述合格的生产兔中，根据抗原获取智能判定系统中设定的接种后参数确定收获时间，处死生产兔，取免疫组织破碎，过滤，得到猪瘟脾淋弱毒疫苗；接种后参数设定：第一阶段潜伏期温度范围设定38.2～39.5℃，潜伏期时间段设定：接种时至接种后24h；第二阶段潜伏期时间设定：接种后第24h至48h，第二阶段潜伏期接种大兔体温最低值设定：超过第一阶段潜伏时最高温1℃以上，观察时间设定：每隔10min，连续温次次数设定：≥108次；第二阶段稽留期维持时间设定：18h～36h，降至常温波动值设定：38.2～42.0℃；符合设定参数范围的大兔为合格，超过或低于所设温度范围则为不合格；合格兔收苗时间设定：连续50个温次≤前一次温度。
在本发明中，所述免疫组织优选包括脾脏。所述免疫组织破碎，过滤的方法优选如下：将所述免疫组织在保护剂作用下破碎，逐层过滤，得到猪瘟脾淋弱毒疫苗。所述免疫组织的质量和保护剂的体积比优选为1g:10～24ml的比例保护剂；所述保护剂优选为含质量浓度5％蔗糖的牛奶。
对过滤得到的疫苗液(半成品)进行分装、冻干，检测，得到猪瘟脾淋弱毒疫苗。
在本发明中，所述分装优选按每瓶2～4ml进行定量分装。本发明对所述分装用容器没有特殊限制，采用本领域所熟知的疫苗分装容器即可。所述优选冷冻真空干燥。所述冷冻真空干燥的温度优选为-30℃～-50℃，更优选为-40℃。所述冷冻真空干燥的时间优选为15～22h，更优选为20h。所述猪瘟脾淋弱毒疫苗优选按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》的要求进行检测。
在本发明中，按照上述方法制备得到的猪瘟脾淋弱毒疫苗的半成品效价平均值为279000RID/g，成品效价为1660RID/头份。
下面结合实施例对本发明提供的一种猪瘟脾淋弱毒疫苗的生产方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
一种猪瘟脾淋弱毒疫苗生产新工艺。包括以下步骤：
生产用种毒制备，具体步骤如下：
将本发明中采用体温实时监测仪测量颈温通过智能监测系统判定合格收获兔子的数量与采用人工肛温测量体温定型热判定合格兔子的数量进行对比，试验分别对10批兔子测量判定。结果详见表1。
表1新工艺与传统工艺合格兔判定结果
从表1我们可以看到，通过对10批兔子进行试验，采用新工艺与传统工艺所判定出的合格兔其中有7个批次增高，1个批次相同，2个批次减少，相差数量从0-4头不等，差异不是很明显。
安装实时体温检测仪于原料兔颈部，打开控制器无线连接脾淋苗智能监测系统并设定编号。选择经脾淋苗智能监测系统的判断合格的原料兔作为接种种毒用兔。
将猪瘟兔化弱毒株(中国兽医药品监察所鉴定、保管和供应)用灭菌生理盐水制成20-50倍稀释的乳剂，接种于经脾淋苗智能监测系统判定合格的原料兔，每兔耳静脉注射1ml。
实时收集体温数据根据脾淋苗智能监测系统提示的最佳收获时间。致死后以无菌操作采取脾脏加适当保护剂冷冻或冻干保存，作为生产用毒种。
制苗用抗原制备，具体步骤如下：
安装实时体温检测仪于原料兔颈部，打开控制器无线连接脾淋苗智能监测系统并设定编号。经脾淋苗智能监测系统的判断合格的原料兔作为生产用兔。
接种将检验合格的生产用种毒用无菌生理盐水制成20倍稀释乳剂，接种于经脾淋苗智能监测系统判定合格的原料兔兔，每兔耳静脉注射1ml。
实时收集体温数据根据脾淋苗智能监测系统提示的最佳收获时间。致死后以无菌操作采取脾脏和淋巴结冻结加适当保护剂冻结保存，即得到半成品。
半成品检验按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》的要求进行检测。
配苗及分装，步骤如下:
在无菌操作下，将制苗抗原组织称重，加入适量稳定剂于同一捣碎机内捣碎，然后用脾淋组织分滤器进行组织液的过滤除杂，扣除残渣量，再按实际滤过组织量计算，根据需要按预定比例加入余量稳定剂。同时加入适宜抗生素。充分搅匀后，放2～8℃处理2～3h。
按每头份淋脾苗组织0.005g～0.01g的加量定量分装。
冻干在分装后迅速进行冷冻真空干燥，按《中国兽用生物制品规程》附录进行，需符合规定。
成品检验按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》的要求进行检测。
将本发明新工艺与传统工艺所生产出的疫苗进成品效价检测，结果详见表2。
表2猪瘟脾淋弱毒疫苗成品效价检测结果：
注：“++”表示示合格。“-”表示不合格。
从表2可以看到采用传统工艺生产的10批疫苗中成品效价800RID的共有4批，达到850RID的共有3批，达到900RID的共有2批，达到950RID的共有1批，。采用本发明新工艺生产出的10批疫苗中成品效价达到950RID的有1批，达到1000RID的有9批。这些数据说明采用本发明新工艺生产出的疫苗效价比采用工艺生产出的疫苗效价稳定性要好。
实施例2
一种猪瘟脾淋弱毒疫苗生产新工艺。包括以下步骤：
生产用种毒制备，具体步骤如下：
将本发明中采用体温实时监测仪测量颈温通过智能监测系统判定合格收获兔子的数量与采用人工肛温测量体温定型热判定合格兔子的数量进行对比，试验分别再对10批兔子测量判定。结果详见表3。
表3新工艺与传统工艺合格兔判定结果
从表3我们可以看到，通过对10批兔子进行试验，采用新工艺与传统工艺所判定出的合格兔其中有5个批次增高，1个批次相同，4个批次减少，相差数量从0-5头不等，差异不是很明显。
安装实时体温检测仪于原料兔颈部，打开控制器无线连接脾淋苗智能监测系统并设定编号。选择经脾淋苗智能监测系统的判断合格的原料兔作为接种种毒用兔。
将猪瘟兔化弱毒株(中国兽医药品监察所鉴定、保管和供应)用灭菌生理盐水制成20-50倍稀释的乳剂，接种于经脾淋苗智能监测系统判定合格的原料兔，每兔耳静脉注射1ml。
实时收集体温数据根据脾淋苗智能监测系统提示的最佳收获时间。致死后以无菌操作采取脾脏加适当保护剂冷冻或冻干保存，作为生产用毒种。
制苗用抗原制备，具体步骤如下：
安装实时体温检测仪于原料兔颈部，打开控制器无线连接脾淋苗智能监测系统并设定编号。经脾淋苗智能监测系统的判断合格的原料兔作为生产用兔。
接种将检验合格的生产用种毒用无菌生理盐水制成50倍稀释乳剂，接种于经脾淋苗智能监测系统判定合格的原料兔兔，每兔耳静脉注射1ml。
实时收集体温数据根据脾淋苗智能监测系统提示的最佳收获时间。致死后以无菌操作采取脾脏和淋巴结冻结加适当保护剂冻结保存，即得到半成品。
半成品检验。按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》的要求进行检测。
配苗及分装，步骤如下:
在无菌操作下，将制苗抗原组织称重，加入适量稳定剂于同一捣碎机内捣碎，然后用脾淋组织分滤器进行组织液的过滤除杂，扣除残渣量，再按实际滤过组织量计算，根据需要按预定比例加入余量稳定剂。同时加入适宜抗生素。充分搅匀后，放2～8℃处理2～3h。
按每头份淋脾苗组织0.005g～0.01g的加量定量分装。
冻干在分装后迅速进行冷冻真空干燥，按《中国兽用生物制品规程》附录进行，需符合规定。
成品检验按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》的要求进行检测。
将本发明新工艺与传统工艺所生产出的疫苗进成品效价检测，结果详见表4。
表4猪瘟脾淋弱毒疫苗成品效价检测结果
注：“++”表示合格。“-”表示不合格。
从表4可以看到采用传统工艺生产的10批疫苗中成品效价达到750RID的有2批，800RID的共有2批，达到850RID的共有2批，达到900RID的共有3批，达到950RID的共有1批。采用本发明新工艺生产出的10批疫苗中成品效价达到950RID的有2批，达到1000RID的有8批。这些数据说明采用本发明新工艺生产出的疫苗效价比采用工艺生产出的疫苗效价稳定性要好。
综上2个实施例子，可以得出结论，新工艺的测颈温方法与系统判定方法与传统工艺的人工测肛温、人工判定方法发生了改变，用不同方法所筛选出的合格兔数量差异不明显。采用本发明的新工艺降低了大量人力，节约了生产成本，提高了动物福利，最重要的是所生产出的疫苗效价稳定性比传统工艺的好。提高了产品品质，值得大量推广。
实施例3
为了检测传统工艺生产的疫苗效价和采用脾淋苗智能监测系统生产出猪瘟疫苗效价，对6000只原料兔兔子进行了试验。原料兔分随机分成A、B两组，每组100头，A组采用传统的脾淋苗抗原制备工艺进行，B组采用脾淋苗智能监测系统的新工艺抗原制备进行。其它环节如种毒的制备与鉴定、配苗、分装、冻干等保持不变。重复30批次。
表5半成品与成品效价情况
如表5所示，经过试验，结果发现采用传统工艺(A组)的30个批次半成品效价平均值为130000RID/g，成品效价为744RID/头份。采用脾淋苗智能监测系统工艺(B组)的30个批次半成品效价平均值为279000RID/g，成品效价为1660RID/头份。B组的半成品效价还是成品效价都高于A组2倍以上。采用新工艺生产出来的疫苗效价大大提高，从而提高生产效益。
猪瘟脾淋苗监测系统解决的问题
在猪瘟脾淋苗的生产上，该系统以体温实监测仪时采集温度代替了人工测温不仅减少了的人工误差，还减轻了劳动力，从传统的人工兔子筛选和定型热判定，变为系统自动判定标记。再次，大大提高了疫苗抗原效价。
在猪生产上，该系统为母猪发情及分娩温度的监测和收集提供有力保障。该系统在多种实验动物上的温度测及数据收集分析上都能够提供技术支持。降低频繁测温对动物的应激，提高了动物福利。
猪瘟脾淋苗监测系统的效益
据不完全统计，我每年因疾病死亡的猪只数占猪总数的8％～10％，直接经济损失高到数亿，而其中1/3是由猪瘟引起的。因此猪瘟疫病防控的新情况对猪瘟疫苗的质量提出更高的要求。猪瘟脾淋苗智能监测系统应用到到猪瘟脾淋苗的生产中，不仅大大提高疫苗效价给猪提供更好的保护，而且减少了人工测温误差，提高经济效，益弥补每年由于猪瘟死亡造成的损失。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种猪瘟脾淋弱毒疫苗的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将实时体温检测仪安装在无特定病原微生物感染原料兔的颈部，将所述实时体温检测仪连接至抗原收获智能判定系统中，根据所述抗原收获智能判定系统中设置原料兔的筛选参数进行筛选，得到合格的原料兔；
所述原料兔的筛选参数包括以下内容：大兔编号1-10000、大兔温度设定范围:38.2～39.5℃；每隔10min观察一次，体温波动范围值为±0.5℃；符合设定参数范围的大兔为合格，超过或低于所设温度范围则为不合格；
(2)将猪瘟兔化弱毒株液接种于所述合格的原料兔中，得到接毒的原料兔；
(3)将所述脾淋苗智能监测系统实时收集的所述接毒的原料兔的体温数据传输至脾淋苗智能监测系统中，根据所述抗原收获智能判定系统中设定的接种后参数确定收获时间，处死原料兔，取免疫组织制备生产用毒种；
所述接种后参数设定：第一阶段潜伏期温度范围设定38.2～39.7℃，潜伏期时间段设定：接种时至接种后24h；第二阶段潜伏期时间设定：接种后第24h至48h，第二阶段潜伏期接种大兔体温最低值设定：超过第一阶段潜伏时最高温1℃以上，观察时间设定：每隔10min，连续温次次数设定：≥108次；第二阶段稽留期维持时间设定：18h～36h，降至常温波动值设定：38.2～42.0℃；符合设定参数范围的大兔为合格，超过或低于所设温度范围则为不合格；合格兔收苗时间设定：连续50个温次≤前一次温度；
(4)将实时体温检测仪安装在新一批无特定病原微生物感染的原料兔的颈部，将所述实时体温检测仪连接至抗原收获智能判定系统，根据所述抗原收获智能判定系统中设置生产兔的隔离观察参数筛选，得到合格的生产兔；所述大兔隔离观察参数设定：大兔编号1～10000、隔离观察温度38.2～39.7℃，观察时间设定：每隔10min一次，体温波动范围值为±0.5℃；符合设定参数范围的大兔为合格，超过或低于所设温度范围则为不合格；
(5)将所述步骤(3)中的生产用毒种接种于所述合格的生产兔中，根据抗原收获智能判定系统中设定的接种后参数确定收获时间，处死生产兔，取免疫组织破碎，过滤，得到猪瘟脾淋弱毒疫苗；
所述接种后参数设定同步骤(3)中的设定参数；
所述步骤1)～3)与步骤4)之间没有时间顺序的限制；
所述实时体温检测仪连接至抗原收获智能判定系统的方法是将体温实时测定仪连接至集中器，所述集中器与服务器连接，所述服务器与所述抗原收获智能判定系统连接；所述实时体温检测仪采集的兔体温数据实时输送至服务器，所述服务器对根据所述兔体温数据作时间-体温曲线，并将所述时间-体温曲线传输给抗原收获智能判定系统；所述步骤(2)中猪瘟兔化弱毒株液的抗原浓度为0.02～0.05g/ml；所述步骤(2)中猪瘟兔化弱毒株液的接种体积为1ml/只兔。
2.根据权利要求1所述生产方法，其特征在于，所述步骤(3)中免疫组织包括脾脏。
3.根据权利要求2所述生产方法，其特征在于，所述步骤(3)中免疫组织制备生产用毒种的方法包括以下步骤：将冻干的免疫组织在无菌条件下研磨，将研磨后的免疫组织粉末用生理盐水稀释，得到生产用毒种；
所述研磨后的免疫组织粉末的质量和生理盐水的体积比1g:10～20ml的量稀释。
4.根据权利要求1所述生产方法，其特征在于，所述步骤(5)中免疫组织包括脾脏。
5.根据权利要求4所述生产方法，其特征在于，所述免疫组织破碎，过滤的方法如下：将所述免疫组织在保护剂作用下破碎，逐层过滤，得到猪瘟脾淋弱毒疫苗。
6.根据权利要求5所述生产方法，其特征在于，所述免疫组织的质量和保护剂的体积比为1g:10～24ml；所述保护剂为含质量浓度5％蔗糖的牛奶。
7.根据权利要求1~6任意一项所述生产方法，其特征在于，所述步骤(3)中生产用毒种按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》的要求进行检测；所述步骤(5)中猪瘟脾淋弱毒疫苗按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》的要求进行检测。
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