CN108602873A - 工程化抗原呈递细胞及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及工程化的胞外囊泡内化受体，其具有增强抗原呈递细胞对肿瘤相关抗原的T细胞的摄取、加工和呈递的能力。它还涉及表达所述受体的载体或抗原呈递细胞，其组合物及其用于预防和/或治疗癌症的用途。

Description

工程化抗原呈递细胞及其用途
技术领域
本发明涉及一种包括表达胞外囊泡内化受体的细胞的疫苗及其在免疫疗法中用于预防和/或治疗癌症的用途。
背景技术
免疫疗法在治疗和预防各种人类疾病(包括感染、炎症和退行性疾病以及癌症)中的重要性日益增加。在癌症方面，免疫疗法包括刺激患者自身的免疫系统以攻击癌细胞或肿瘤的其他细胞成分(Waldmann et al.,2003,Nat Med,9:269-277；Miller et al.,2015,Cancer Cell,27(4):439-49)。目前用于治疗癌症的主要类型的免疫疗法包括使用单克隆抗体、免疫检查点抑制剂和癌症疫苗(Miller等，2015，同上)。
在有关癌症的应用中，免疫疗法基于这样的假设：癌细胞在其表面上表达不被正常细胞表达(或以较低水平表达)并且可被免疫系统检测的分子。这些分子被称为癌抗原，通常是蛋白质(正常或突变的)或其他大分子，如碳水化合物和脂质。在过去的十年中，已经鉴定了越来越多来自肿瘤蛋白加工的分子并将其归类为肿瘤相关抗原(TAA)。所谓的主动免疫疗法用于通过靶向TAA使免疫系统攻击肿瘤细胞。TAA可由不同细胞类型识别，包括CD8+细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。在通过CTL识别癌细胞后，这些可以随后参与消除癌细胞。
当前关于免疫疗法方法的研究的主要目标之一是通过针对潜在或已知的TAA接种患者来引发或增强癌症特异性CTL。研发并转移到临床试验的方法包括用离体TAA负载的抗原呈递细胞(APC)进行过继免疫疗法，本文称为APC-TAA。实际上，有效和持久的抗肿瘤免疫力的产生需要通过专业APC(如树突细胞(DC))向CTL呈递TAA(Palucka et al,2012,NatRev Cancer,12(4):265-77)。通过用特异性细胞因子/生长因子组合培养从患者处获得的造血祖细胞或单核细胞离体产生DC。一旦产生，在将APC-TAA再输注到患者体内之前，将DC暴露于离体的总肿瘤裂解物或特异性TAA。在过去十年中，小鼠的临床前研究和一些临床试验表明该方法的安全性，诱导循环CD4+T细胞和特异于肿瘤抗原的CD8+T细胞扩增的能力，以及一些患者的客观临床反应(Palucka等，2012，同上)。目前，只有一种APC-TAA疫苗Sipuleucel-T在美国被批准用于治疗不再通过激素治疗帮助的晚期前列腺癌(Gardner et al.,2012,Hum Vaccin Immunother,8(4):534-9)。该示例证明了主动免疫法治疗既定癌症的可行性。
然而，离体培养的APC-TAA的使用通常劳动强度高(APC需要进行分离、离体操作，然后再输注)、费用昂贵并且通常不是针对每个患者个性化的(Kastenmueller et al.,2014,Nat Rev Immunol.,14(10):705-11)。另一种疫苗接种方法包括在体内将选定的TAA靶向APC，而无需离体操作(Palucka等，2012，同上；Kastenmueller等，2014，同上)。这可以通过几种方法实现，例如，通过使用嵌合蛋白，该嵌合蛋白由对APC受体特异的抗体(例如CD205、CLEC9A、CD11c)组成，其也与选择的TAA融合。嵌合蛋白可靶向APC并促进TAA内化、加工和通过APC呈递给T细胞。然而，这些方法效率不高，且只能递送一种TAA。此外，靶向APC对CTL的诱导还需要提供DC成熟和/或激活信号，因为其不存在可以诱导抗原特异性耐受(Kastenmueller等，2014，同上)。
在一种方法中，DC离体暴露于癌细胞裂解物或胞外囊泡(EV)，然后接种回受试者以激活抗原特异性T细胞并诱导抗肿瘤免疫应答(Gu et al.,2015,Intern Journal ofCancer,136,E74-84)。另一种方法使用工程处理的单核细胞/巨噬细胞来体外和体内表达抗癌胚抗原(CEA)嵌合抗原受体(CAR)，或工程处理DC以表达抗HER2(人表皮生长因子受体2)CAR以直接靶向和裂解癌细胞(Biglari et al.,2006,Gene therapy,13:602-610；Weiet al.,2008,Cancer research,68:3854-62)。在不同类型的方法中，CTL或自然杀伤(NK)细胞经过工程处理可以表达针对特定TAA设计的CAR。然后，CAR工程化T或NK细胞识别表达特异性抗原的癌细胞并将其它们杀死(Ahmed et al.,2015,Journal of clinicaloncology,33,1688-1696；Schonfeld et al.,2015,Molecular therapy,23,330-338)。然而，上述方法的功效受限于一旦重新输注，将工程细胞转运至实体瘤的能力。
因此，仍然需要开发能够以个性化方式诱导特异于多种已知和未知TAA的较强且广泛T细胞应答的抗肿瘤疫苗，但同时仍可适用于绝大多数患者。
发明内容
本发明基于针对癌细胞表达的表面分子的新的胞外囊泡内化受体(EVIR)的设计，以及诸如单核细胞、巨噬细胞、DC或B细胞的APC的基因工程，以便稳定地表达那些新的EVIR。本发明进一步基于以下观察：经工程改造以表达本发明的EVIR的APC有效地摄取和/或内化胞外囊泡(EV)，该胞外囊泡包括任何癌细胞衍生的颗粒或膜，其源自表面分子阳性癌细胞，而非表面分子阴性细胞，不依赖于细胞接触。进一步观察到EVIR表达的APC的EV摄取有利地增强了与所选表面分子无关但与原始的癌细胞相关的TAA的呈递，并促进TAA特异性T细胞的扩增，从而为癌症治疗或诊断提供有价值的工具。
本发明的一个方面涉及针对至少一种癌细胞表面分子的重组EVIR。
本发明的另一方面涉及编码根据本发明EVIR的分离的核酸分子。
另一方面，本发明提供了重组载体，其包含编码根据本发明的EVIR的核酸分子。
本发明的另一方面涉及表达至少一种本发明的EVIR的分离细胞，特别是APC及其组合物。
本发明的另一方面提供了诱导本发明的至少一种EVIR在APC或其干/祖细胞中表达的离体方法(即，在培养基中)，该方法包括以下步骤：
(i)用本发明的载体离体转导所述细胞；以及
(ii)任选地诱导APC分化、成熟或激活。
本发明的另一方面提供了制备EVIR表达的TAA呈递细胞的离体方法，包括以下步骤：
(i)提供至少一种癌症细胞或从癌症受试者获得的至少一种癌细胞衍生的EV；
(ii)提供本发明的EVIR表达细胞；
(iii)离体接触根据(ii)提供的EVIR表达细胞，其中所述至少一种癌细胞或EV根据(i)提供；
(iv)收集步骤(iii)中获得的细胞；
其中，一旦给药给所述受试者，根据(iv)所获细胞与不表达EVIR并且如(iii)中所述进行处理的细胞相比，具有增强的能力，以呈递来自所述癌症受试者的TAA。
本发明的另一方面涉及分离的EVIR表达细胞，或通过可根据本发明的方法获得的表达EVIR的TAA呈递细胞。
本发明的另一方面涉及EVIR表达细胞，表达EVIR的TAA呈递细胞或根据本发明用作药物的重组载体。
本发明的另一方面提供药物组合物，其包括本发明的细胞或至少一种本发明的重组载体和至少一种其药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明的另一方面涉及EVIR表达细胞、表达EVIR的TAA呈递细胞或根据本发明的重组载体，其用于预防和/或治疗癌症。
本发明的另一方面涉及分离的EVIR表达细胞或分离的表达EVIR的TAA呈递细胞在制备用于预防和/或治疗癌症的药物组合物中的用途。
本发明的另一方面提供了疫苗组合物，其包括EVIR表达细胞或根据本发明的表达EVIR的TAA呈递细胞。本发明的另一方面提供离体鉴定来自癌症受试者的新TAA的方法，包括以下步骤：
(i)提供从所述受试者获得的EVIR表达APC，其已经在适合的条件下给药编码根据本发明的EVIR的载体，用于诱导受试者的APC或其干/祖细胞或根据本发明的EVIR表达细胞的转导；或
(ii)提供EVIR表达APC，其中，EVIR表达APC已与至少一种癌细胞或从癌症受试者获得的至少一种癌细胞衍生的EV离体接触；以及
(iii)鉴定加载在(i)或(ii)中提供的细胞中的MHCI或MHCII分子上的肽，其中，所述肽包括新的TAA。
本发明的另一方面提供离体鉴定来自癌症受试者的新T细胞受体的方法，包括以下步骤：
(i)提供来自受试者的肿瘤中分离的T细胞，其已经在适合的条件下给药编码根据本发明的EVIR的载体，用于诱导受试者的APC或其干/祖细胞或根据本发明的EVIR表达细胞的转导；或
(ii)提供来自癌症受试者的分离的T细胞，其已与通过本发明的方法获得的表达EVIR的TAA呈递APC离体接触，其中，表达EVIR的TAA呈递APC呈递相同癌症受试者的TAA；以及
(iii)对来自步骤(i)或(ii)中提供的分离的T细胞的T细胞受体(TCR)进行测序。
本发明的另一方面提供了在有需要的受试者体内诱导本发明的至少一种EVIR在APC或其干/祖细胞中表达的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)在合适的条件下向所述受试者给药编码根据本发明的EVIR的载体，用于在体内用所述载体诱导受试者的APC或其干/祖细胞的转导；以及
(ii)任选地体内诱导APC分化、成熟或激活。
本发明的另一方面提供预防和/或治疗癌症的方法，包括在有需要的受试者中给药有效量的EVIR表达细胞或至少一种本发明的重组载体。
本发明的另一方面涉及预防和/或治疗癌症的方法，包括在有需要的受试者中给药有效量的表达EVIR的TAA呈递细胞。
本发明的另一方面提供了用于实施根据本发明的方法的试剂盒，其包括至少一种EVIR，或至少一种重组表达载体，或至少一种根据本发明的EVIR表达细胞。
附图说明
统计p值在Prism(GraphPad软件)中计算，并在图中表示如下。*p<0.05,**p<0.01,*＊*p<0.001。
图1.EVIR表达LV。用于同时表达代表性EVIR(例如抗HER2)和第二基因(在这种情况下为绿色荧光蛋白(GFP))的双向原病毒LV的示意图。
图2.细胞转导后EVIR的表达。抗-HER2 EVIR-N表达测量为在293T、P388D1和iBMM中通过流式细胞术(抗F(ab’)2染色)分析的F(ab’)2阳性细胞的百分比(平均值±SEM，n＝5)，未转导的(UT；F(ab’)2阳性细胞是不可检测的，并且来自P388D1细胞的信号代表噪声)或用对照或EVIR-N LV转导(示例1中描述的设计)。
图3.细胞转导后具有不同信号域的EVIR的表达。A：抗HER2 EVIR表达测量为在P388D1和iBMM中通过流式细胞术(抗F(ab’)2染色)分析的F(ab')2阳性细胞的百分比(平均值±SEM，n＝5)。B：如示例2中所述，用抗F(ab’)2抗体染色的用对照、EVIR-N、EVIR-T或EVIR-G LV转导的iBMM的免疫荧光分析的代表图。
图4.EVIR表达细胞的持久性。数据显示在用对照或抗HER2 EVIR LV转导的36天期间GFP阳性细胞(A：iBMM、B：P388D1)的百分比，其如示例2中所述通过流式细胞术测量。
图5.共培养测定。A：通过流式细胞术分析HER2+或HER2”(未转导，UT)mTq+MC38细胞的共培养测量的mCherry+、GFP+、GFP+mTq+或mCherry+mTq+iBMM在总iBMM(表示为100％)中的百分比(平均值±SEM，n＝3)。如示例3中所述，iBMM用抗HER2 EVIR表达LV转导(EVIR)或不转导(对照)。对mCherry+mTq+和GFP+mTq+表示mCherry和mTq或GFP和mTq呈阳性的事件，其代表iBMM与MC38细胞结合。B：EVIR-N或对照转导的P388D1细胞与HER2转导的或UT mCherry+MC38细胞之间以不同比例(10：1、1：1或1:10)的结合事件的百分比(平均值±SEM，n＝3)。
图6.通过抗HER2 EVIR摄取EV。A：如示例4中所述，用抗HER2抗体染色的衍生自HER2+MC38细胞的EV的流式细胞术分析的代表性直方图。B：未处理或用从HER2+或HER2-(UT)mCherry+MC38细胞分离的EV处理的抗HER2 EVIR-N+iBMM中mCherry表达的流式细胞术分析(中值荧光强度，MFI；平均值±SEM，n＝2)。通过单因素方差分析借助于Tukey多重比较测试进行统计分析。C：对表达抗HER2 EVIR并用HER2+/mCherry+MC38衍生的EV(1)或从HER2-/mCherry+MC38细胞分离的EV处理的iBMM中mCherry的MFI进行时间进程分析(2)；p<0.001，通过双因素方差分析进行统计分析；D：用从HER2+/mCherry+MC38细胞分离的EV进行处理的抗HER2 EVIR-N+iBMM的免疫荧光成像。
E：BMDC的mCherry MFI，其表达对照EVIR(对照+BMDCs)或抗HER2 EVIR(EVIR-N+BMDC)，未处理或用来自HER2+/mCherry+或HER2-/mCherry+(表示为mCherry+)MC38细胞的EV进行处理。通过双因素方差分析借助于Tukey多重比较测试进行统计分析。F：用从HER2+mCherry+MC38细胞分离的递增浓度的EV进行处理的抗HER2 EVIR-N+或对照EVIR+BMDC中的mCherry荧光的流式细胞术分析(平均值±SEM，n＝3)。
图7.具有不同胞内信号传导结构域的EVIR。如示例4中所述，未处理或用从HER2+或HER2-(UT)mCherry+MC38细胞分离的EV进行处理的抗HER2 EVIR转导的iBMM的mCherryMFI(平均值±SEM，n＝2)的细胞计数分析。通过双因素方差分析借助于Tukey多重比较测试进行统计分析。
图8.如示例5中所述的T细胞增殖测定。A1：在从HER2+OVA+MC38细胞分离的EV存在的情况下，用表达对照EVIR(对照)或抗HER2 EVIR-N(EVIR-N+)的BMDC培养后用细胞示踪物标记的增殖OT-IT细胞的百分比，其用于测量增殖周期的数目(A2-3中的“峰”)。通过分析图A2-3中的每个“峰”(1-6)获得增殖T细胞的百分比，其中，每个峰均指示一个细胞分裂。B1：用细胞示踪物标记并用表达对照EVIR(对照+)或抗HER2 EVIR-N(EVIR-N+)(用从HER2+OVA+MC38细胞中分离的EV进行预处理达24小时)的BMDC进行培养的增殖OT-IT细胞的百分比，(A1-B1：用于多重比较的Sidak测试后校正的双因素方差分析统计分析(平均值±SEM，n＝3)。A2-3：显示用对照+(A2)或抗HER2 EVIR-N+(A3)BMDC以及EV一起培养后T细胞增殖周期的代表性直方图；B2-3：显示用EV进行预处理的对照+(B2)或抗HER2 EVIR-N+(B3)BMDC培养后的T细胞增殖周期的代表性直方图；通过Sidak多重比较测试的双因素方差分析对A1和B1进行统计分析。C1-3：显示在没有EV的情况下暴露于HER2+OVA+EV(C1)、对照+BMDC(C2)或抗HER2EVIR-N+BMDM(C3)后T细胞增殖的代表性直方图。D：用表达对照或抗HER2 EVIR-N的BMDC培养后用细胞示踪物标记，并用递增浓度的从HER2+OVA+MC38细胞分离的EV进行处理的CD8+OT-IT细胞的增殖。数据点表明3个独立的生物重复。
图9.EVIR针对两种不同的黑素瘤特异性表面抗原，如示例6中所述的DG2和TYRP1。A：未处理或用来自GD2+/mCherry+或GD2-/mCherry+MC38细胞的EV进行处理的对照+或EVIR-N2+iBMM(平均值±SEM，n＝3)的mCherry MFI。B：未经处理或用从TYRP1+或TYRP1-B16黑素瘤细胞分离的EV进行处理的CellTracker TM Blue in Control+或EVIR-N1 iBMM的MFI(平均值±SEM，n＝3)。通过双因素方差分析借助于Tukey多重比较测试进行统计分析。C：用表达对照或EVIR-N1并用从TYRP1+OVA+B16黑素瘤细胞分离的EV进行处理的BMDC培养后用细胞示踪物标记的增殖CD8+OT-IT细胞的数目(平均值±SEM，n＝3)。通过学生t测试进行统计分析。
图10.如示例7中所述，通过EVIR的双向LV以及有利于APC分化、激活和呈递和/或T细胞浸润的因子进行转导。A：使用单独编码对照EVIR的LV，单独编码EVIR-N的LV或编码EVIR-N和指示蛋白质(CXCL9、CSF2、IFNγ、CD40、LIN28)之一的双向LV进行细胞转导后，通过EVIR+BMDC从HER2+或HER2-mCherry+MC38细胞分离的EV的mCherry摄取。数据代表每EVIR3个转导复制的平均值(生物重复；平均值±SEM，n＝3)。通过单因素方差分析借助于Tukey多重比较测试进行统计分析。B：用单独编码对照EVIR、单独编码EVIR-N或编码EVIR-N以及所示蛋白质之一(CXCL9、CSF2、IFNγ、CD40、LIN28)的LV转导细胞后，在BMDC中表达EVIR+。数据代表技术复制(平均值±SEM，n＝3)。C-D：在仅用对照EVIR、单独的EVIR-N或带LIN28的EVIR-N进行转导的BMDC(平均值±SEM，n＝3)中表达CCR7(C)或CD86(D)。数据代表每EVIR 3个转导复制的平均值(生物重复；平均值±SEM，n＝3)。通过单因素方差分析借助于Tukey多重比较测试进行统计分析。
图11.如示例11中所述的T细胞增殖测定。A1-2：数据显示所示MC38细胞的流式细胞术分析，其中B2M基因是完整的(A1)或因CRISPR转导破坏(A2)。B：数据显示用从MHCI缺陷型B2M小鼠分离并表达对照EVIR或EVIR-N的BMDC培养后用细胞示踪物标记的CD8+OT-IT细胞的流式细胞术分析。用从B2M-熟练(B2M+)或缺乏(B2M-)HER2+OVA+MC38癌细胞分离的EV进行处理的培养物。
图12.如示例12中所述的肿瘤疫苗接种研究。同基因小鼠HER2+MC38肿瘤生长皮下注射PBS(无DC；n＝4)或用表达对照EVIR(CTRL DCs；n＝7)或在MC38肿瘤注射后第7天和第14天的抗HER2 EVIR(EVIR-DC；n＝9)的DC接种疫苗。
图13.该图示意性地且通常表示本发明的EVIR的构建体的一些示例，其包括对癌细胞的膜相关分子特异的胞外抗体结构域(1)，例如scFv(11)、蛋白质结构域(2)，该蛋白质结构域包括至少一个跨膜结构域(3)和至少一个胞内结构域(4)。蛋白质结构域可包括将跨膜结构域(3)连接至胞外抗体结构域(1)的铰链结构域(21)。蛋白质结构域(2)可以变化，以包括一个跨膜结构域(3)和一个胞内结构域(4)，例如左侧和中间所示的示例或每个中的一个以上，其中，跨膜结构域(3)通过胞外非铰链结构域(32)和细胞内侧的一个以上胞内结构域(4)在细胞外侧连接在一起，如右边所示的示例所示。此外，EVIR包括与胞外抗体结构域(1)相连的细胞膜输出结构域(5)。胞内结构域(4)还可包括信号传导序列(41)。本发明构建体的具体名称表明本发明构建体所属类型。
具体实施方式
本文提及的术语“抗体”表示结合至抗原的多肽。这包括全功能抗体和任何抗原结合片段。术语“抗体”以其最广泛的含义使用，并且包括单克隆抗体、多克隆抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体等，只要保留本发明的特征性质，特别是结合至靶抗原的能力，更确切地说是癌细胞的膜相关分子。抗体及其片段的示例包括可变结构域片段(由抗体单臂的VH和VL结构域组成的“Fv”)、Fab片段(由VH、VL、CHI和CL结构域组成的单价片段)、Fab2片段(二价)、Fab3片段(三价)、Fab’片段(具有铰链区的Fab)、F(ab’)2片段(包括通过铰链区处的二硫键连接的两个Fab片段的二价片段)、Fd片段(由VH和CH1结构域组成)、rlgG(还原IgG或半IgG)、双抗体、三抗体、四抗体、微抗体、单价抗体、包括一种以上抗体的片段的二价或多价抗体、单链可变片段(ScFv)、bis-scFv(双特异性)和抗体的衍生物(例如二硫键稳定性Fv片段)、含CDR的肽以及任何上述的表位结合片段(Holliger et al.,2005,NatureBiotechnology,23(9):1126-1136)。
本文所用的术语“膜相关分子”或“表面分子”是指物理包埋在脂质双层中或在特定条件下永久或瞬时结合或锚定于细胞膜的任何分子。该分子可与癌细胞的任何膜相关联，包括质膜或细胞内膜。这些分子可以发挥多种功能并属于不同的功能组，包括但不限于糖蛋白、膜受体蛋白、转运蛋白、膜酶、细胞粘附分子及其突变形式。这些分子可以在癌细胞的质膜或与癌细胞衍生的颗粒相关的任何膜上表达，例如胞外囊泡(EV)。该术语包括已知和未知的癌细胞膜相关分子。膜相关分子的示例包括但不限于人表皮生长因子受体2(HER2)、酪氨酸酶相关蛋白-1(TYRP1)、癌胚抗原(CEA)、间皮素、PMEL(gp100)、神经节苷脂(GD2、GD3)和粘蛋白。
术语“胞外囊泡内化受体”或“EVIR”是指针对由癌细胞或任何癌细胞衍生的颗粒/囊泡表达的表面分子的重组受体。根据本发明的EVIR包括以下元素，其称为“胞外抗体结构域”、“蛋白质结构域”和任选的“增加EVIR输出至细胞膜的结构域”。
术语“胞外抗体结构域”是指对由癌细胞或癌细胞衍生的颗粒/囊泡表达的任何膜相关分子具有特异性的任何抗体结构域。根据本发明的抗体结构域的示例包括但不限于：(i)抗-HER2 scFv，例如CHA21(Zhou et al.,2011,The Journal of BiologicalChemistry,286:31676-31683)、曲妥珠单抗基scFv(Morgan et al.,2010,Mol Ther.,18(4):843-51)、帕妥珠单抗基scFv(Franklin et al.,2004,Cancer Cell,5(4):317-28)和FRP5基scFv(Ahmed et al,2009,Mol Ther.,17(10):1779-87)；(ii)抗-GD2scFv(Newik etal.,2016,Mol Ther Oncolytics,68:139-152)；或(iii)抗-TYRPl scFv(Saenger et al.,2008,Cancer Res,68(23)；9884-91)；其他。
术语“跨膜结构域”和“胞内结构域”是指本发明的EVIR的蛋白质片段的部分，其包括将EVIR的“胞外抗体结构域”锚定至细胞表面并延伸至细胞质的多肽。根据一个具体方面，根据本发明的EVIR的跨膜结构域可以允许EVIR锚定至抗原呈递细胞膜。根据一个具体方面，根据本发明的EVIR的胞内结构域可具有信号传导或非信号传导能力。
具体地，形成蛋白质结构域的那些“跨膜结构域”和“胞内结构域”可以是来自其衍生自的天然膜相关蛋白的相应结构域，或者是通过一些截短和/或同源序列修饰衍生自那些的结构域，其不影响它们对细胞膜的锚定能力，例如去除内源信号肽。例如，根据一个具体方面，蛋白质结构域可包括多于一个通过胞外“非铰链”结构域连接在一起的跨膜结构域(在天然膜蛋白中桥接两个“跨膜结构域”的肽片段)，例如在某些如CCR1、-2、-4和-5的膜蛋白中发现的。当EVIR的胞内结构域具有信号传导能力(例如，包括信号传导肽部分)时，它可以称为“信号传导结构域”，并且当EVIR的胞内结构域不具有信号传导能力时，它可以称为“惰性胞内结构域”。根据一个具体方面，蛋白质结构域可包括多于一个通过胞内结构域连接的跨膜结构域。图13中所示为EVIR的构建体的各种示例，特别是各种类型的蛋白质结构域。根据本发明的EVIR的蛋白质结构域可包括“跨膜结构域”、“胞内结构域”和其他任选的“胞外非铰链结构域”，其连接衍生自相同或不同蛋白质的跨膜结构域。跨膜结构域、胞内结构域和任选的胞外非铰链结构域可以衍生自诱导至少一种以下功能的任何蛋白质：细胞存活、分化、增殖、激活、成熟、吞噬、内吞、抗原加工和呈递、T-细胞浸润以及其他功能。较佳地，其包括诱导单核细胞和/或巨噬细胞和/或DC细胞存活、分化、增殖、激活、成熟、吞噬、内吞、抗原加工和呈递、T细胞浸润等功能的任何蛋白质片段(Holliger等，2005，同上；Palucka等，2012，同上；Kastenmueller等，2014，同上)。蛋白质结构域或其跨膜/胞内和任选的胞外非铰链结构域的示例包括来自膜相关蛋白的结构域，例如天然或重组的生长因子受体、Fcγ受体家族、toll样受体、CC趋化因子受体和其他蛋白质分子，其在任何细胞表面表达，可促进单核细胞和/或巨噬细胞和/或DC细胞存活、分化、增殖、激活、成熟、吞噬、内吞、抗原加工和呈递、T细胞浸润以及其他功能。这些结构域的具体示例包括FcγRIIIA受体(由先天免疫系统细胞表达的Fcγ受体家族成员)、受体酪氨酸激酶(FLT3，也称为CD135)、toll样受体4(TLR4)、CC趋化因子受体2型(CCR2)、整合素β链β2受体(ITGB2)、集落刺激因子-2受体B(CSF2RB)、CC趋化因子受体1型(CCR1)、CC趋化因子受体5型(CCR5)、趋化因子受体CXCR4和P-选择素糖蛋白-1配体受体(SELPLG)或人神经生长因子受体(NGFR)的片段。
蛋白质结构域可进一步包括“铰链区”，其是将“跨膜结构域”桥接至本发明的EVIR的“胞外抗体结构域”的肽片段，从而为重组受体提供柔性(Sadelain et al.,2013,CancerDiscov,3(4):388-98).在一个具体实施例中，含有跨膜结构域、胞内结构域和铰链区的蛋白质结构域通过简单地从膜相关蛋白中除去细胞外结构域而获得，该膜结合蛋白来自如本文所例示的跨膜和胞内结构域。在这种情况下，铰链区对应于天然连接膜相关蛋白的跨膜和原始胞外结构域的肽区。
本发明的EVIR还可含有“细胞膜输出结构域”，其指细胞或病毒的任何蛋白质片段，其增加EVIR对细胞膜的分选。非限制性示例是IgK结构域(von Heijne et al.,2006,Nat Rev Mol Cell Biol.,7:909-18)，例如插入EVIR的N末端。
本文提及的术语“抗原呈递细胞”或“APC”是指在其表面上显示与主要组织相容性复合物(MHC)复合的外源抗原的细胞；这个过程称为抗原呈递。这些细胞有时也称为“佐细胞”。T细胞可使用其T细胞受体(TCR)识别这些复合物，因此APC加工抗原并将其呈递给T细胞。APC的示例包括但不限于树突细胞(DC)、单核细胞、巨噬细胞、某些B细胞和某些激活的上皮细胞。
术语“造血细胞”是指具有分化成成熟血细胞能力的细胞，包括单核细胞、巨噬细胞和树突细胞，并且包括造血干细胞(HSC)和造血祖细胞(HPC)。
术语“EVIR表达，TAA呈递细胞”在本文中是指表达根据本发明的EVIR的细胞，并且任选地，是指能够诱导APC分化、存活、激活和/或交叉呈递或吸引和/激活T细胞的蛋白质，其在与癌细胞和/或癌细胞衍生的颗粒(例如EV)接触后已内化了癌细胞和/或癌细胞衍生的颗粒和加工的TAA，从而在表达EVIR的抗原呈递细胞内部实现TAA呈递。
术语“胞外囊泡”或“EV”在本文中是指任何含有膜的颗粒或源自癌细胞的片段。EV可包括外来体、微泡、微粒、凋亡小体、细胞碎片、膜片段和类似的肿瘤源亚细胞物质，因此可以与已知和未知的肿瘤抗原相关。在EV与工程化APC融合后，EV相关的肿瘤抗原由工程化APC呈递给T细胞，以启动针对癌症的免疫应答。可以如所描述的那样分离EV(Squadrito etal.,2014,Cell Rep,8(5):1432-46；Thery et al.,2006,Curr Protoc Cell Biol,Chapter 3；Unit 3:22)。如Villadangos et al.,2014,Immunity,29(3):352-61所述，在APC MHCI或MHCII分子上加工和加载抗原(常规和交叉呈递)后，APC呈递肿瘤抗原可能发生，还通过Scholzel et al.,2014,J Hepatol,61(3):600-8所述的交叉敷料直接呈递EV衍生的抗原/MHC复合物。
如本文所定义的术语“癌症”或“肿瘤”是涉及异常细胞生长的疾病，其可能侵入或扩散至身体的其他部分。术语“癌症”表示疾病，例如但不限于癌(例如乳腺癌、前列腺癌、肺癌、胰腺癌和结肠癌)、黑素瘤、肉瘤(例如骨、软骨、神经癌)、淋巴瘤和白血病(造血细胞癌症)、生殖细胞肿瘤(例如精原细胞瘤和无性细胞瘤)和胚细胞瘤。
如本文所用，“治疗”和“正在治疗”等通常意指获得所需的药理学和生理学效果。就预防或部分预防疾病、症状或病症而言，该效果可是预防性的，和/或就部分或完全治愈由疾病引起的疾病、病症、症状或副作用而言可以是治疗性的。本文所用的术语“治疗”包括哺乳动物，特别是人的癌症的任何治疗，包括抑制疾病，即阻止其发展；或者缓解疾病，即引起疾病和/或其症状或病症的消退，例如改善或修复损伤。具体地，根据本发明的细胞、方法、用途、制剂和组合物可用于治疗癌症和/或预防癌症进展为早期癌症患者的晚期或转移期，从而改善癌症分期和患者预后。具体地，癌症的预防和/或治疗可包括给药根据本发明的细胞。
根据本发明的治疗或方法的术语“功效”可以基于响应于根据本发明的用途或方法的疾病或病症过程中的变化来测量。例如，根据本发明的治疗或方法的功效可以通过其对疾病体征或症状的影响来测量。当患者经历部分或完全缓解或减少不想要的疾病症状时，实现了应答。根据一个具体实施例，可以通过测量针对癌细胞的引发的免疫应答来测量功效，例如通过分析肿瘤特异性T细胞或通过评估癌细胞死亡和/或抑制肿瘤生长、进展和传播。
如本文所用的术语“有效量”是指至少一种根据本发明的细胞或其药物制剂的量，其引起所述细胞给药的受试者中疾病症状的可检测的减少，这些症状可包括例如实体瘤数量的减少。
如本文所用的术语“受试者”是指哺乳动物。例如，本发明考虑的哺乳动物包括人、灵长类动物、家养动物，如牛、绵羊、猪、马、实验鼠、其他宠物等。
如本文所用的术语“变体”是指与原始肽序列基本同源但由于一个或多个缺失、插入或取代而具有至少一个与原始序列不同的氨基酸序列的多肽。基本上同源意指变体氨基酸序列，其至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％与如上所述原始氨基酸序列相同。两个氨基酸序列的一致性可通过视觉检查和/或数学计算确定，或者通过使用用于序列比较的已知计算机程序(例如Clustal包版本1.83)比较序列信息会更容易。变体可包括具有至少一个保守替换的氨基酸的序列，意指给定的氨基酸残基由具有相似生理化学特征的残基替换。通常，应该保守地进行原始多肽中存在的一个或多个氨基酸的替换。保守替换的示例包括将一个脂族残基替换为另一个，例如He、Val、Leu或Ala，或将一个极性残基替换为另一个，例如Lys和Arg之间；Glu和Asp；或者Gin和Asn之间。其他这样的保守替换，例如，具有相似疏水性特征的整个区域的替换是众所周知的(Kyte,et al,1982,J.Mol.Biol,157:105-131)。例如，“保守氨基酸替换”可包括用非天然残基替换天然氨基酸残基，使得对该位置处氨基酸残基的极性或电荷几乎没有影响或没有影响。在需要这样的替换时，本领域技术人员可以确定所需的氨基酸替换(无论是保守的还是非保守的)。
根据本发明的EVIR
本发明的胞外囊泡内化受体(EVIR)包括：
(i)胞外抗体结构域，其对癌细胞的膜相关分子特异；
(ii)蛋白质结构域，其包括至少一个跨膜结构域和至少一个胞内结构域；以及
(iii)可选地，细胞膜输出结构域，其增加EVIR向抗原呈递细胞的细胞膜的输出。
本发明的胞外囊泡内化受体包括：
(i)胞外抗体结构域，其对癌细胞的膜相关分子特异；
(ii)蛋白质结构域，其包括一个跨膜结构域和一个胞内结构域；以及
(iii)可选地，细胞膜输出结构域，其增加EVIR向抗原呈递细胞的细胞膜的输出。
在一个具体实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，蛋白质结构域进一步包括将胞外抗体结构域与跨膜结构域连接的铰链区。
在一个具体实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，蛋白质结构域包含至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个或至少七个跨膜结构域(例如七个跨膜结构域)。
在另一具体实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，蛋白质结构域包含至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个或至少七个跨膜结构域，其通过本发明的EVIR的的胞内结构域和/或胞外非铰链结构域连接在一起。
在一个具体实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，蛋白质结构域包含至少两个、至少三个或至少四个胞内结构域(例如四个胞内结构域)。
在另一具体实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，蛋白质结构域包含至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个或至少七个跨膜结构域，其通过至少一个、至少两个或至少三个胞内结构域连接在一起并任选地通过细胞外至少一个、至少两个或至少三个非铰链结构域进一步连接在一起。
在一个具体实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其进一步包括促进DNA工程(例如克隆位点)的氨基酸序列(例如TG)。
在一个具体实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，促进DNA工程(例如克隆位点)的氨基酸序列是SEQ ID NO：104。在一个具体实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，促进DNA工程的氨基酸序列存在于跨膜结构域和胞外抗体结构域之间。
在一个具体实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，胞外抗体结构域是scFv。
在另一个具体实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，胞外抗体结构域包括对人表皮生长因子受体2(HER2)特异的抗体或其片段的序列。
在另一个进一步的具体实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，胞外抗体结构域包括对应于肿瘤相关抗原的至少一种癌细胞膜相关分子特异性的抗体序列，包括但不限于人表皮生长因子受体2(HER2)、酪氨酸酶相关蛋白-1(TYRP1)、癌胚抗原(CEA)、间皮素、PMEL(gp100)、神经节苷脂(GD2、GD3)和粘蛋白。
在一个更具体的实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，胞外抗体结构域包括对抗人表皮生长因子受体2(HER2)特异的抗体序列。
在另一更具体的实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，胞外抗体结构域包括对酪氨酸酶相关蛋白-1(TYRP1)特异的抗体序列。
在另一更具体的实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，胞外抗体结构域包括对神经节苷脂GD2(GD2)特异的抗体序列。
在一个更具体的实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，抗人表皮生长因子受体2(HER2)的序列包括CHA21(SEQ ID NO：27)或其变体的序列。
在另一更具体的实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，抗人表皮生长因子受体2(HER2)的序列包括曲妥珠单抗基scFv(SEQ ID NO：28)或其变体的序列。
在另一更具体的实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，抗人表皮生长因子受体2(HER2)的序列包括帕妥珠单抗基scFv(SEQ ID NO：29)或其变体的序列。
在另一更具体的实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，抗人表皮生长因子受体2(HER2)的序列包括FRP5基scFv(SEQ ID NO：30)或其变体的序列。
在另一更具体的实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，抗酪氨酸酶相关蛋白-1(TYRP1)的序列包括TA99基抗TYRPl scFv(SEQ ID NO：113)或其变体的序列。
在另一更具体的实施方案中，提供了根据本发明的EVIR，其中，抗神经节甘脂GD2(GD2)的序列包括14G2a基抗GD2scFv(SEQ ID NO：114)或其变体的序列。
在一个具体的实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，蛋白质结构域是由骨髓细胞表达的跨膜受体的片段。
在一个具体的实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，蛋白质结构域包括由骨髓细胞表达的G蛋白偶联受体、其片段或变体。
在一个具体的实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，蛋白质结构域包括由骨髓细胞表达的七跨膜结构域受体、其片段或变体。
在一个更具体的实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，其包括蛋白质结构域，该蛋白质结构域包括至少一个跨膜和至少一个胞内结构域，和任选地至少一个胞外非铰链结构域，和任选的铰链结构域，铰链结构域选自生长因子受体、Fcγ受体家族、toll样受体、CC趋化因子受体或其他可促进单核细胞和/或巨噬细胞和/或DC细胞存活、分化、增殖、激活、成熟、吞噬、内吞、抗原加工和呈递、T细胞浸润等功能的信号传导受体。
在一个更具体的实施方案中，提供了根据本发明的EVIR，其中，蛋白质结构域包括铰链结构域、至少一个跨膜和至少一个来自受体的胞内结构域，该受体选自人神经生长因子受体(SEQ ID NO：31的蛋白质结构域)、FcyRIIIA受体(SEQ ID NO：32的蛋白质结构域)、受体酪氨酸激酶FLT3(SEQ ID NO：33的蛋白质结构域)、toll样受体4(SEQ ID NO：34的蛋白质结构域)、CC趋化因子受体2型(SEQ ID NO：35的蛋白质结构域)、整合素β链β2受体(SEQID NO：36的蛋白质结构域)、集落刺激因子-2受体B(CSF2RB)(SEQ ID NO：37的蛋白质结构域)、趋化受体CCR1(SEQ ID NO：38的蛋白质结构域)、趋化受体CCR5(SEQ ID NO：39的蛋白质结构域)、趋化受体CXCR4(SEQ ID NO：40的蛋白质结构域)和P-选择素糖蛋白-1配体受体(SEQ ID NO：41的蛋白质结构域)或其变体。
在一个更具体的实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，蛋白质结构域选自SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39及SEQ ID NO：40或其片段或变体。
在一个更具体的实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其包括衍生自本文所述蛋白质的同种型的蛋白质结构域。
在一个更具体的实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，蛋白质结构域包括选自以下的铰链结构域：SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：88、SEQ IDNO：91、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：100及SEQID NO：101或其变体。
在一个更具体的实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，蛋白质结构域包括选自以下的跨膜结构域：SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：89、SEQ IDNO：93、SEQ ID NO：96及SEQ ID NO：102或其变体。
在一个更具体的实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，蛋白质结构域包括选自以下的胞内结构域：SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：90、SEQ IDNO：94、SEQ ID NO：97及SEQ ID NO：103或其变体。
在一个更具体的实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，蛋白质结构域衍生自选自人神经生长因子受体、趋化因子受体CCR5和P-选择素糖蛋白-1配体受体的受体。
在另一更具体的实施例中，提供了根据本发明的EVIR，其中，蛋白质结构域包括选自以下的序列：SEQ ID NO：31、39和41或其变体。
根据一个具体的实施例，根据本发明的EVIR包括细胞膜输出结构域，例如在EVIR序列的N末端。
根据一个具体的实施例，根据本发明的EVIR包括细胞膜输出结构域，该输出域结构包括IgK结构域(von Heijne，2006，同上)。
根据另一具体的实施例，根据本发明的EVIR包括SEQ ID NO：42或其变体的细胞膜输出结构域。
根据本发明的EVIR可以通过任何已知的用于多肽表达的分子克隆方法获得，如以下示例中所述。
根据另一特定实施例，本发明的EVIR包括：
(i)抗HER2 CHA21，其包括SEQ ID NO：27的氨基酸序列；
(ii)蛋白质结构域，其包括选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ IDNO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40及SEQ ID NO：41。
(iii)任选地，促进SEQ ID NO：104的DNA工程的氨基酸序列；以及
(iv)SEQ ID NO：42的细胞膜输出结构域IgK。
根据另一具体实施例，本发明的EVIR包括：
(i)抗TYRPl，其包括SEQ ID NO：113的氨基酸序列；
(i)蛋白质结构域，其包括SEQ ID NO：31的氨基酸序列；
(iii)任选地，促进SEQ ID NO：104的DNA工程的氨基酸序列；以及
(iv)SEQ ID NO：42的细胞膜输出结构域IgK。
根据另一特定实施例，本发明的EVIR包括：
(i)抗GD2，其包括SEQ ID NO：114的氨基酸序列；
(i)蛋白质结构域，其包括SEQ ID NO：31的氨基酸序列；
(iii)任选地，促进SEQ ID NO：104的DNA工程的氨基酸序列；以及
(iv)SEQ ID NO：42的细胞膜输出结构域IgK。
根据另一具体的实施例，根据本发明的EVIR具有选自以下的氨基酸序列：SEQ IDNO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：59、SEQ IDNO：60、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：63及SEQ ID NO：64或其变体。
根据另一具体的实施例，根据本发明的EVIR具有SEQ ID NO：132或其变体的氨基酸序列。
根据另一具体的实施例，根据本发明的EVIR具有SEQ ID NO：133或其变体的氨基酸序列。
根据另一具体实施例，本发明的EVIR的蛋白质结构域包括：
(i)铰链结构域，其包括选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:79、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：95及101；
(ii)跨膜结构域，其包括选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:80、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：96及SEQ ID NO：102；
(iii)胞内结构域，其包括选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:81、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：97及SEQ ID NO：103。
本发明的核酸
编码根据本发明的EVIR的分离的核酸可以是，例如，天然DNA或RNA或重组或合成的DNA、RNA或LNA或包括任何本发明的以单独或结合的方式的核酸分子的重组核酸分子。在一个具体的实施例中，根据本发明的核酸分子是cDNA。
在一个的具体实施例中，提供了编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子，其中，胞外抗体结构域包括对应于肿瘤相关抗原的至少一种癌细胞膜相关分子特异性的抗体的序列，包括但不限于人表皮生长因子受体2(HER2)、酪氨酸酶相关蛋白-1(TYRP1)、癌胚抗原(CEA)、间皮素、PMEL(gp100)、神经节苷脂(GD2、GD3)和粘蛋白。
在一个更具体的实施例中，提供了编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子，EVIR包括由CHA21序列组成的胞外抗体结构域，其中，所述核酸分子包括SEQ ID NO：1或其变体。
在一个更具体的实施例中，提供了编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子，EVIR包括由CHA21序列组成的胞外抗体结构域，其中，所述核酸分子包括SEQ ID NO：1。
在一个更具体的实施例中，提供了编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子，EVIR包括由CHA21序列组成的胞外抗体结构域，其中，所述核酸分子包括SEQ ID NO：128。
在另一更具体的实施例中，提供了编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子，EVIR包括由曲妥珠单抗基scFv组成的胞外抗体结构域，其中，所述核酸分子包括SEQ IDNO：76。
在另一更具体的实施例中，提供了编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子，EVIR包括由帕妥珠单抗基scFv序列组成的胞外抗体结构域，其中，所述核酸分子包括SEQID NO：77。
在另一更具体的实施例中，提供了编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子，EVIR包括由FRP5基scFv序列组成的胞外抗体结构域，其中，所述核酸分子包括SEQ ID NO：78。
在另一更具体的实施例中，提供了编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子，EVIR包括由抗TYRPl scFv序列组成的胞外抗体结构域，其中，所述核酸分子包括SEQ IDNO：111。
在另一更具体的实施例中，提供了编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子，EVIR包括由抗GD2scFv序列组成的胞外抗体结构域，其中，所述核酸分子包括SEQ ID NO：112。
在一个更具体的实施方案中，提供了编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子，EVIR包括至少一个跨膜和至少一个来自受体的胞内结构域，该受体选自人神经生长因子受体(SEQ ID NO：43)、FcyRIIIA受体(SEQ ID NO：44)、受体酪氨酸激酶(SEQ ID NO：45)、toll样受体4(SEQ ID NO：46)、CC趋化因子受体2型(SEQ ID NO：47)、整合素β链β2受体(SEQ IDNO：48)、集落刺激因子-2受体B(SEQ ID NO：49)、趋化受体CCR1(SEQ ID NO：50)、趋化受体CCR5(SEQ ID NO：51)、趋化受体CXCR4(SEQ ID NO：52)和P-选择素糖蛋白-1配体受体(SEQID NO：53)。
在另一实施例中，提供了编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子，EVIR包括具有IgK结构域的细胞膜输出结构域，其中，所述核酸分子包括SEQ ID NO：12，特别地，SEQ IDNO：129，其中，编码所述EVIR的分离的核酸分子进一步包括编码由CHA21组成的胞外抗体结构域的核酸序列(SEQ ID NO：1)。
在另一实施例中，提供了编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子，EVIR包括具有IgK结构域的细胞膜输出结构域，其中，所述核酸分子包括SEQ ID NO：129，其中，编码所述EVIR的分离的核酸分子进一步包括编码由CHA21组成的胞外抗体结构域的核酸序列(SEQID NO：128)。
在另一实施例中，提供了编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子，EVIR包括具有IgK结构域的细胞膜输出结构域，其中，所述核酸分子包括SEQ ID NO：105，其中，编码所述EVIR的分离的核酸分子进一步包括由SEQ ID No：76的曲妥珠单抗基scFv组成的胞外抗体结构域或由SEQ ID NO：78的FRP5基scFv序列组成的胞外抗体结构域。
在另一实施例中，提供了编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子，EVIR包括具有IgK结构域的细胞膜输出结构域，其中，所述核酸分子包括SEQ ID NO：106，其中，编码所述EVIR的分离的核酸分子进一步包括由SEQ ID No：77的帕妥珠单抗基scFv序列组成的胞外抗体结构域。
在一个具体实施例中，提供了编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子，其包括促进DNA工程(例如克隆位点)的氨基酸序列。
在一个具体实施例中，提供了编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子，其包括促进DNA工程(例如克隆位点)的氨基酸序列，其中，所述氨基酸序列包括SEQ ID NO：107或SEQ ID NO：108。
根据另一个实施例，提供了编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子，其包括编码功能蛋白的核酸序列，该功能蛋白在细胞中，优选地在单核细胞、巨噬细胞和/或DC中促进存活、分化、增殖、激活、成熟、吞噬、内吞、M1极化、抗原加工和呈递、T细胞浸润等功能，或能够诱导APC分化、存活、激活和/或交叉呈递的蛋白质(例如CD40(分化40的簇))、GM-CSF(CSF2，集落刺激因子2)、I型和II型干扰素(例如干扰素γ(IFNγ)、LIN28或Rab34))，或吸引和/或激活T细胞(例如IL-2或CXCL9(趋化因子(CXC基序)配体9))。
根据另一实施例，提供了编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子，其进一步包括编码能够诱导APC分化、存活、激活和/或交叉呈递的蛋白质(例如CD40、GM-CSF(CSF2)、I型和II型干扰素(例如IFNγ或Rab34))或吸引和/或激活T细胞的蛋白质(例如IL-2或CXCL9)的核酸序列。
根据另一实施例，提供了编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子，其包括编码能够诱导APC分化、存活、激活和/或交叉呈递的功能蛋白(例如LIN28(由Lin28基因编码的蛋白质))的核酸序列。
根据另一实施例，提供了编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子，其进一步包括编码能够诱导APC分化、存活、激活和/或交叉呈递选自以下蛋白质的核酸序列：SEQ IDNO:117(CXCL9)、SEQ ID NO：120(GM-CSF)、SEQ ID NO：123(IFNf)、SEQ ID NO：126(LIN28)和SEQ ID NO：127(CD40)。
根据另一具体实施例，编码根本发明的EVIR的分离的核酸分子包括：
(i)SEQ ID NO：1或其编码抗HER2 CHA21的变体的核酸序列；
(ii)核酸序列，其编码蛋白质结构域，选自以下：SEQ ID NO:43、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：52及SEQ ID NO：53或其变体；以及
(iii)SEQ ID NO：2或其编码细胞膜输出结构域IgK的变体的核酸序列。
根据另一具体实施例，编码本发明的EVIR的分离的核酸分子包括：
(i)SEQ ID NO：111或其编码抗TYRP1的变体的核酸序列；
(ii)核酸序列，其编码选自SEQ ID NO：43或其变体的蛋白质结构域；以及
(iii)SEQ ID NO：109或其编码细胞膜输出结构域IgK的变体的核酸序列。
根据另一具体实施例，编码本发明的EVIR的分离的核酸分子包括：
(i)SEQ ID NO：112或其编码抗GD2的变体的核酸序列；
(ii)核酸序列，其编码SEQ ID NO：43或其变体的蛋白质结构域；以及
(iii)SEQ ID NO：110或其编码细胞膜输出结构域IgK的变体的核酸序列。
根据另一具体实施例，编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子选自以下：SEQID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：70、SEQID NO：71、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：74及SEQ ID NO：75。
根据另一具体实施例，编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子选自以下：SEQID NO：130及SEQ ID NO：131。
在一个更具体的实施例中，提供了编码根据本发明的EVIR的分离的核酸分子，其包括编码本发明的蛋白质结构域的人类同源序列。
用于细胞转导的载体和方法
在一个实施例中，本发明提供了包括根据本发明的核酸分子的重组表达载体，其中，载体任选地包括表达控制序列，允许在编码序列的真核宿主细胞中表达，其与所述核酸分子可操作地连接。
可以使用多种表达系统，包括但不限于染色体、附加体、质粒和病毒衍生的载体。更确切地说，所用重组载体可以衍生自细菌质粒、转座子、酵母附加体、插入元件、酵母染色体元件、如杆状病毒的病毒、如SV40的乳头瘤病毒、痘苗病毒、腺病毒、狐痘病毒、伪狂犬病病毒、逆转录病毒、慢病毒、腺相关病毒(AAV)。这些重组载体同样可以是粘粒或噬菌粒衍生物。
在一个实施例中，重组载体是选自逆转录病毒载体(复制能力和复制缺陷型逆转录病毒载体)、慢病毒载体(特别是双向慢病毒载体)、腺病毒载体和腺相关载体的任何病毒载体。
在一个具体的实施例中，重组载体是逆转录病毒载体。
在一个实施例中，本发明提供了重组表达载体，其包括编码本发明的一种或多种EVIR序列的核酸分子。在一个实施例中，本发明提供了一种重组表达载体，其包括至少一种编码功能蛋白的核酸分子，该功能蛋白在细胞中，优选在单核细胞、巨噬细胞和/或DC中促进存活、分化、增殖、激活、成熟、吞噬、内吞、抗原加工和呈递、T细胞浸润等功能。
在一个实施例中，本发明提供了一种重组表达载体，其包括编码本发明的一种或多种EVIR序列的核酸分子，该核酸分子进一步包括至少一种编码功能蛋白的核酸分子，功能蛋白在细胞中，优选在单核细胞、巨噬细胞和/或DC中促进存活、分化、增殖、激活、成熟、吞噬、内吞、抗原加工和呈递、T细胞浸润等功能。
根据另一具体的实施例，根据本发明的表达载体还可编码能够诱导APC分化、存活、激活和/或交叉呈递的蛋白质(例如CD40、GM-CSF(CSF2)、I型和II型干扰素(例如IFNγ)、LIN28或Rab34)，或吸引和/或激活T细胞的蛋白质(例如IL-2或CXCL9)。
根据一个具体的实施例，本发明提供一种重组表达载体，其包括编码能够诱导APC分化、存活、激活和/或交叉呈递的蛋白质(例如CD40、GM-CSF(CSF2)、I型和II型干扰素(例如IFNγ)、LIN28或Rab34)，或吸引和/或激活T细胞的蛋白质(例如IL-2或CXCL9)的核酸分子。
在另一实施例中，双向或双顺反子表达载体可用于共表达至少一种根据本发明的EVIR以及能够诱导APC分化、存活、激活和/或交叉呈递(例如CD40、GM-CSF(CSF2)、I型和II型干扰素(例如IFNγ)、LIN28或Rab34)的蛋白质，或吸引和/或激活T细胞的蛋白质(例如IL-2或CXCL9)。
可以通过本领域技术人员熟知的方法将核酸序列插入重组表达载体中，例如，Molecular Cloning中描述的那些：A Laboratory Manual,Sambrook et al.,4th Ed.,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.,2001。
重组载体可包括允许、控制或调节本发明的多核苷酸的表达和转录的核苷酸序列以及本发明的EVIR的翻译，这些序列根据所用的宿主细胞进行选择。例如，可以将合适的分泌信号整合到重组载体中，使得由本发明的核酸分子编码的EVIR会被导向膜。
在另一实施例中，提供了包括根据本发明的重组载体的宿主细胞。
在宿主细胞中引入重组载体可以根据本领域技术人员熟知的方法进行，例如Basic Methods in Molecular Biology,Davis et al.,2nded.,McGraw-HillProfessional Publishing,1995和Molecular Cloning:A Laboratory Manual,supra所述的，诸如磷酸钙转染、DEAE葡聚糖转染、转染、显微注射、阳离子脂质转染、电穿孔、转导或感染。
根据另一实施例，本发明提供了一种产生能够表达EVIR的APC的方法，可选地一起产生能够诱导APC分化、存活、激活和/或交叉呈递的蛋白质(例如CD40、GM-CSF(CSF2)、I型和II型干扰素(例如IFNγ)、LIN28或Rab34)，或吸引和/或激活T细胞的蛋白质(例如IL-2或CXCL9)，方法包括使细胞与根据本发明的载体或核酸接触。
根据一个实施例，根据本发明的EVIR任选地与所述蛋白质共表达，或者，通过使用独立的载体在表达EVIR的APC中实现所述蛋白质的表达。
根据另一方面，提供了诱导本发明的至少一种EVIR在APC或其干/祖细胞中表达的离体方法(即，在培养基中)，该方法包括以下步骤：
(i)用本发明的载体离体转导所述细胞；以及
(ii)任选地诱导APC分化，成熟或激活；
其中，在所述APC细胞中表达根据本发明的EVIR以及能够诱导APC分化、存活、激活和/或交叉呈递的蛋白质(例如CD40、GM-CSF(CSF2)、I型和II型干扰素(例如IFNγ)、LIN28或Rab34)，或吸引和/或激活T细胞的蛋白质(例如IL-2或CXCL9)。
本发明的另一方面提供了在有需要的受试者体内诱导本发明的至少一种EVIR在APC或其干/祖细胞中表达的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)在合适的条件下向所述受试者给药编码本发明的EVIR的载体，用于在体内用所述载体诱导受试者的APC或其干/祖细胞的转导；以及
(ii)任选地诱导体内APC分化、成熟或激活；
其中，在所述APC细胞中表达根据本发明的EVIR以及能够诱导APC分化、存活、激活和/或交叉呈递的蛋白质(例如CD40、GM-CSF(CSF2)、I型和II型干扰素(例如IFNγ)、LIN28或Rab34)，或吸引和/或激活T细胞的蛋白质(例如IL-2或CXCL9)。
可以使用慢病毒载体(或可选地病毒或非病毒载体)将EVIR递送至APC，离体在分离的APC(或其前体)上或在体内通过全身(例如，静脉内)或通过系统局部(例如，瘤内、癌周、淋巴瘤等)，递送编码所述EVIR的本发明的载体。
具体地，本发明提供一种产生抗原呈递细胞或其任何干或祖细胞的方法，其表达至少一种根据本发明的EVIR，该方法包括接触所述APC或其干或祖细胞(特别是DC、单核细胞或巨噬细胞)，用载体或根据本发明的核酸离体或体内接触。
EVIR表达APC
根据一个实施例，本发明提供一种表达至少一种根据本发明的EVIR的抗原呈递细胞。
根据一个实施例，本发明提供表达一种根据本发明的EVIR的细胞。
根据另一实施例，本发明提供一种细胞，该细胞表达至少一种EVIR以及能够诱导APC分化、存活、激活和/或交叉呈递的蛋白质(例如CD40、GM-CSF(CSF2)、I型和II型干扰素(例如IFNγ)、LIN28或Rab34)，或吸引和/或激活T细胞的蛋白质(例如IL-2或CXCL9)。
根据一个具体的实施例，本发明提供了表达本发明的至少2种、至少3种、至少4种不同的EVIR的细胞。根据一个具体的实施例，本发明提供了表达至少一种根据本发明的EVIR的细胞，例如本发明的约1至约3种不同的EVIR。
根据一个实施例，提供了包括表达至少一种本发明的EVIR的APC的细胞组合物，其中，至少1％、至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％的APC，特别是单核细胞、巨噬细胞或DC，表达至少一种本发明的EVIR。
根据另一实施例，提供了本发明的细胞组合物，其中，至少1％的细胞群表达至少一种本发明的EVIR。
根据另一实施例，本发明提供一种细胞组合物，其包括APC，APC表达至少一种EVIR以及能够诱导APC分化、存活、激活和/或交叉呈递的蛋白质(例如CD40、GM-CSF(CSF2)、I型和II型干扰素(例如IFNγ)、LIN28或Rab34)，或吸引和/或激活T细胞的蛋白质(例如IL-2或CXCL9)。
根据一个实施例，提供了本发明的细胞组合物，其中，EVIR的表达在用本发明的载体递送后持续至少数小时。
根据一个实施例，提供了本发明的细胞组合物，其中，至少1％的细胞群表达至少一种本发明的EVIR，并且所述表达在用本发明的载体递送后持续至少数小时。
根据一个实施例，提供了本发明的细胞组合物，其中能够诱导APC分化、存活、激活和/或交叉呈递的蛋白质(例如CD40、GM-CSF(CSF2)、I型和II型干扰素(例如IFNγ)、LIN28或Rab34)，或吸引和/或激活T细胞的蛋白质(例如IL-2或CXCL9)的表达，在用本发明的载体递送后持续至少数小时。
根据一个实施例，EVIR的表达水平和时间可以通过诸如流式细胞术、蛋白质分析或核酸扩增的方法测量。
根据另一实施例，本发明提供了根据本发明的细胞，其中，所述细胞是具有分化成单核细胞、巨噬细胞或树突细胞(包括造血干/祖细胞)的能力的造血细胞。
根据另一实施例，本发明提供了根据本发明的细胞，其中，所述细胞选自造血干细胞和祖细胞。
根据另一实施例，本发明提供了根据本发明的细胞，其中，所述细胞是抗原呈递细胞(APC)。
根据另一实施例，本发明提供了根据本发明的细胞，其中，所述细胞是选自单核细胞、巨噬细胞或树突细胞的APC。
根据另一实施例，本发明提供了表达至少一种EVIR的细胞，其中，所述细胞进一步表达至少一种蛋白质，该蛋白质能够诱导APC分化、存活、激活和/或交叉呈递(例如CD40、GM-CSF(CSF2)、I型和II型干扰素(例如IFNγ)、LIN28或Rab34)，或吸引和/或激活T细胞(例如IL-2或CXCL9)。
应理解，当在表达至少一种本发明的EVIR的细胞中共表达时，CD40可以起到增强抗原呈递细胞和T细胞激活的作用；I型和II型干扰素(例如IFNγ)可以起到增强抗原呈递细胞和T细胞成熟和激活的作用；LIN28阻断microRNA Let-7的成熟，促进巨噬细胞和DC的激活和抗原呈递(Baer et al.,2016,Nat Cell Biol,18(7):790-802)；Rab34可以起到增强抗原交叉呈递的作用；GM-CSF(CSF2)可以增强抗原呈递细胞和树突细胞的分化、成熟和激活；IL-2可以起到增加T细胞增殖的作用；CXCL9可以起到增加T细胞浸润的作用。
在另一实施例中，本发明提供了能够将EV内化到细胞质中的EVIR表达细胞。
在另一实施例中，与不表达本发明的EVIR的相同细胞相比，本发明提供了具有癌细胞衍生的EV的增强的内化能力的EVIR表达细胞，该性质与癌细胞的接触无关。
在另一实施例中，本发明提供了EVIR表达细胞，与不表达EVIR的细胞相比，其具有更快的癌细胞衍生的EV的内化，该特性与癌细胞的接触无关。
根据一个实施例，EVIR表达细胞的EV的内化水平和动力学可以通过诸如流式细胞术和蛋白质分析的方法测量。
在另一实施例中，本发明提供了能够摄取、加工和呈递给T细胞肿瘤相关抗原(TAA)的EVIR表达细胞，而无需预先鉴定那些TAA。
在另一实施例中，本发明提供了促进TAA交叉呈递给CD8+T细胞的EVIR表达细胞。
在另一实施例中，本发明提供了EVIR表达细胞，与不表达EVIR的细胞相比，其具有增强的呈递(就TAA的库和每种TAA的量而言)至EV相关TAA的T细胞。
根据一个实施例，可以通过诸如流式细胞术、蛋白质分析和T细胞增殖/激活测定的方法测量由本发明的细胞实现的TAA至T细胞的呈递水平。
在另一实施例中，本发明提供了诱导T细胞增殖的根据本发明的细胞。
在另一实施例中，本发明提供了本发明的细胞，与不表达EVIR的细胞相比，其具有增强的诱导T细胞增殖能力。
根据一个实施例，T细胞增殖可以通过诸如流式细胞术、细胞周期分析、T细胞抑制和混合白细胞反应(MLR)的方法测量。
根据本发明的方法和用途
本发明提供根据本发明的在抗原呈递细胞(APC)或其干细胞或祖细胞中诱导EVIR的表达的方法，任选地还诱导表达能够诱导APC分化、存活、激活和/或交叉呈递的蛋白质(例如CD40、GM-CSF(CSF2)、I型和II型干扰素(例如IFNγ)、LIN28或Rab34)，或吸引和/或激活T细胞的蛋白质(例如IL-2或CXCL9)。
在本发明的一个具体方法中，可以根据涉及在本领域技术人员熟知的细胞培养条件下暴露APC前体(例如单核细胞)的方法进行APC分化。
在一个具体实施例中，本发明提供了在APC中诱导EVIR的表达的方法，所述方法包括以下步骤：用根据本发明的载体转染或转导所述细胞。
在另一实施例中，提供了制备根据本发明的表达EVIR的TAA呈递细胞的离体方法，其中，所提供的EV是肿瘤衍生的颗粒，例如从肿瘤或血液样品中分离的外来体和其他囊泡。
在另一实施例中，提供了制备根据本发明的表达EVIR的TAA呈递细胞的离体方法，其中，共培养APC和癌细胞或EV，并且EV来自离体培养的癌细胞。
根据一个具体的实施例，根据本发明的表达EVIR的TAA呈递细胞可以注射给癌症受试者，同时并且任选地在体内诱导APC分化、成熟或激活，并且可以用于根据本发明的治疗方法。
在一个实施例中，提供了在本发明的EVIR表达细胞中诱导TAA呈递的体内方法，包括以下步骤：通过系统(例如，静脉内)或局部途径(例如，瘤内、癌周、淋巴瘤等)将EVIR表达载体递送至癌症受试者。
在另一实施例中，提供了诱导受试者对癌细胞的免疫应答的方法，包括以下步骤：在有需要的患者中给药根据本发明的EVIR表达载体或细胞，其中，所述EVIR表达载体或细胞单独给药，或在与癌细胞的共培养中预处理，或在与癌细胞衍生的EV，特别是外来体的共培养中预处理，或与另一种抗癌疗法组合。可以使用DC疫苗接种程序中使用的标准程序。
在一个具体的实施例中，癌细胞或癌细胞衍生的EV是自体的，即源自待治疗的患者。
在一个具体的实施例中，APC或干/祖细胞是自体的，即源自待治疗的患者。
在一个具体的实施例中，本发明提供鉴定根据本发明加载在MHCI或MHCII分子上的新TAA的方法，其中，通过蛋白质组学方法进行新TAA的鉴定。
另一方面，本发明提供了根据本发明的细胞用于制备治疗和/或预防癌症的疫苗的用途。
根据一个具体的方面，本发明的EVIR可用于摄取含有游离(未加载)TAA的癌细胞衍生的EV。
根据另一具体的方面，本发明的EVIR可用于摄取含有已加载在MHCI或MHCII分子上的TAA的癌细胞衍生的EV。
本发明的另一方面涉及分离的细胞，其表达至少一种本发明的EVIR，并且能够通过MHCI或MHCII分子呈递未加载的TAA。
本发明的另一方面提供了分离的细胞，其表达至少一种本发明的EVIR并且能够呈递已经加载在MHCI或MHCII分子上的TAA。
值得指出的是，使用APC-TAA的目前的现有方法并非旨在指导APC内源性地摄取和呈递TAA，即在患者体内和患者的肿瘤中，而是依赖于离体暴露于肿瘤衍生材料。因此，根据本发明的EVIR表达载体或细胞及其使用的方法相对于免疫疗法和/或癌症的预防和/或治疗中的现有方法特别有利。
根据本发明的组合物
根据本发明的药物组合物或制剂可以作为药物制剂给药，其含有如本文所述的EVIR表达载体或细胞。
本发明的另一方面提供药物组合物，其包括本发明的细胞和至少一种能够促进体内APC分化、成熟和/或激活的药学上可接受的试剂。
本发明提供作为组合物的药物或治疗细胞以及治疗受试者，优选哺乳动物受试者、最优选患有癌症的人类患者的方法。
本发明的细胞或其制剂可作为药物制剂给药，其可以含有本文所述任何形式的一种或多种本发明的活性剂。根据本发明的组合物与常规使用的佐剂、载体、稀释剂或赋形剂一起可以药物组合物和其单位剂型的形式放置，并且这种形式可用作固体(例如片剂或填充胶囊)、液体(例如溶液、混悬剂、乳剂、酏剂或用其填充的胶囊)，全部用于口服，或者以无菌注射溶液的形式，用于通过注射或连续输注进行肠胃外使用。可注射组合物通常基于可注射的无菌盐水或磷酸盐缓冲盐水或本领域已知的其他可注射载体。此类药物组合物和其单位剂型可包括常规比例的成分，有或没有其它活性化合物或原理，并且这种单位剂型可含有与所用剂量范围相当的任何合适有效量的活性成分。
本发明的组合物可是液体制剂，包括但不限于水性或油性混悬剂、溶液、乳剂、糖浆和酏剂。该组合物还可配制成干燥产品，用于在使用前用水或其它合适的载体重建。这些液体制剂可含有添加剂，包括但不限于悬浮剂、乳化剂、非水性载体和防腐剂。悬浮剂包括但不限于山梨糖醇糖浆、甲基纤维素、葡萄糖/糖浆、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶和氢化食用脂。乳化剂包括但不限于卵磷脂、失水山梨醇单油酸酯和阿拉伯胶。防腐剂包括但不限于甲基或对羟基苯甲酸丙酯和山梨酸。分散剂或润湿剂包括但不限于聚乙二醇(乙二醇)、甘油、牛血清白蛋白、Tween、
本发明的组合物还可配制成长效制剂，其可以通过植入或通过肌内注射给药。
本发明化合物还可以以持续释放形式或从持续释放药物递送系统给药。
根据一个具体的实施例，根据本发明的组合物用于静脉注射。
根据一个具体的实施例，根据本发明的组合物用于瘤内使用。
根据一个具体的实施例，根据本发明的组合物用于皮下使用。
根据一个具体的实施例，根据本发明的组合物用于淋巴内使用。
根据一个具体的方面，本发明的组合物是疫苗组合物。
根据一个具体的方面，疫苗组合物可包括一种或多种共同试剂，其选自CpG寡核苷酸(短链的单链合成DNA分子，含有三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸(“C”)，其后是鸟嘌呤三磷酸脱氧核苷酸(“G”)，“p”是指连续核苷酸之间的磷酸二酯键)的白喉毒素、生长因子(非限制性示例为：M-CSF(巨噬细胞集落刺激因子)、GM-CSF、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)、FLT3(FMS样酪氨酸激酶-3)和/或细胞因子(非限制性示例为：IFNγ(干扰素γ)、CXCL9(趋化因子(CXC基序)配体9)、IL12(白细胞介素12)、IL2(白细胞介素2)、IL-4(白细胞介素4))。
在另一具体方面，根据本发明的组合物适于通过单次给药递送。
根据一个具体的方面，本发明的组合物是兽医用组合物。
其他材料以及制剂加工技术等在Remington的“The Science and Practice ofPharmacy”，第22版，2012，费城科学大学，Lippincott Williams&Wilkins的第5部分中列出，其通过引用并入本文。
另一方面，本发明提供了包括根据本发明的载体的组合物。
另一方面，本发明提供了包括根据本发明的EVIR表达细胞的组合物。
给药模式
根据本发明的细胞和其制剂可以任何方式给药，包括肠道外、静脉内、瘤内、皮下、皮内、直肠、手术期间的直接组织灌注或其组合。肠道外给药包括但不限于静脉内、动脉内、腹膜内、皮下和肌肉内给药。本发明的组合物还可以植入物的形式给药，其允许组合物的缓慢释放以及慢速控制的静脉注射。
组合
根据本发明，根据本发明的载体和细胞及其药物制剂可以单独给药或与用于预防和/或治疗癌症的共同试剂组合给药，该共同试剂为增强适应性免疫系统对肿瘤的活性的治疗性抗体(例如抗PD1、抗PDL1、抗CTLA4抗体)、增强先天免疫系统对肿瘤的活性的治疗性抗体或TLR激动剂(例如抗CD40抗体)、消耗内源性单核细胞、巨噬细胞或树突细胞的治疗性抗体或小分子抑制剂(例如抗CSFIR抑制剂)，因此有利于本发明的EVIR表达细胞植入和摄取EV。
根据本发明的细胞还可与已知的化学、放射治疗剂组合，其增强癌细胞杀死和释放癌细胞衍生的EV，如本申请中所定义的。
本发明包括给药本发明的载体或细胞、其药物制剂或组合物，其中，所述载体或细胞或组合物在其他治疗方案之前，以治疗有效量同时或顺序地与有助于预防和/或治疗癌症的其他治疗方案或共同试剂一起给药给个体。
与所述共同试剂同时给药的根据本发明的细胞或组合物或其药物制剂可以在相同或不同的组合物中给药，并且通过相同或不同的给药途径给药。
试剂盒
根据本发明的另一方面，提供了试剂盒，其包括至少一种重组表达载体和/或至少一种本发明的细胞和任选的说明材料。
根据另一实施例，根据本发明的试剂盒包括至少一种重组表达载体，并且进一步包括至少一种用所述重组表达载体转导抗原呈递细胞或其干/祖细胞的试剂。
根据另一实施例，根据本发明的试剂盒包括至少一种本发明的细胞，并且进一步包括至少一种用于用癌症衍生的EV的癌细胞保存所述细胞和/或培养所述细胞的试剂。
患者
在一个实施例中，根据本发明的患者患有任何类型的癌症。
在一个实施例中，根据本发明的患者在任何阶段都患有任何类型的癌症，包括非转移性和转移性癌症。
在一个具体的实施例中，根据本发明的患者患有癌、肉瘤、黑素瘤、脑肿瘤、血液癌症或任何前期恶性肿瘤或恶性肿瘤。
本文引用的参考文献通过引用整体并入本文。本发明的范围不受本文所述的具体实施例和附图的限制，这些实施例和附图旨在作为本发明各个方面的单一说明，并且功能上等同的方法和组件也在本发明的范围内。
示例
以下缩写分别指以下定义：
293T细胞(人胚肾细胞)；4GALNT1(β-1,4-N-乙酰基-半乳糖胺基转移酶1，GD2合成酶)；B16细胞(鼠黑素瘤肿瘤细胞系)；BM(骨髓)；BMDC(骨髓衍生的树突细胞)；BMDM(骨髓衍生的巨噬细胞)；
CCR1(趋化因子受体1型)；CCR2(C-C趋化因子受体2型)；CCR5(趋化因子受体5型)；CSF2(集落刺激因子2)；CSF2RB(集落刺激因子-2受体B)；CXCR4(趋化因子受体CXCR4)；CD40(分化簇40)；DC(树突状细胞)；CXCL9(趋化因子(C-X-C基序)配体9)；EC(胞外结构域)；EV(胞外囊泡)；dLNGFR(截短的低亲和性人神经生长因子受体)；EVIR(胞外囊泡内化受体)；FLT3(受体酪氨酸激酶)；GD2(神经节苷脂GD2)；GFP(绿色荧光蛋白)；iBMM(永生化小鼠骨髓衍生巨噬细胞)；IC(胞内结构域)；IFNγ(干扰素γ)；ITGB2(整合素β链β2受体)；LIN28(由LIN28基因编码的蛋白质)；LV(慢病毒载体)；MC38(结肠癌细胞系)；mTq(绿松石荧光蛋白)；OVA(卵清蛋白)；MFI(平均荧光强度)；P388D1(从淋巴瘤分离的鼠单核细胞系)；PM(腹膜巨噬细胞)；SELPLG(P-选择素糖蛋白-1配体受体)；SFFV(脾病灶形成病毒)；ST8SIA1(ST8α-N-乙酰基-神经氨酸α-2,8-唾液酸转移酶1，GD3合酶)；TLR4(toll样受体4)；TM(跨膜结构域)；TYRP1(酪氨酸酶相关蛋白-1)；UT(未转导)。
示例1：胞外囊泡内化受体的设计
如下设计11种不同的EVIR分子。
EVIR的克隆设计
选择11个跨膜受体，并将其胞内(IC)结构域、跨膜(TM)结构域和短的胞外(EC)结构域与称为CHA21(SEQ ID NO：128)(对癌细胞的表面分子特异的胞外抗体结构域)的HER2特异性scFv的DNA编码序列组合进行克隆。
来自所选择的跨膜受体的DNA编码序列为：人神经生长因子受体(dLNGFR，SEQ IDNO：43)、FcγRIIIA受体(由先天免疫系统的细胞表达的Fcγ受体家族的成员，SEQ ID NO：44)、受体酪氨酸激酶(FLT3，SEQ ID NO：45)、toll样受体4(TLR4，SEQ ID NO：46)、CC趋化因子受体2型(CCR2，SEQ ID NO：47)、整合素β链β2受体(ITGB2，SEQ ID NO：48)、集落刺激因子-2受体B(CSF2RB，SEQ ID NO：49)、趋化受体CCR1(SEQ ID NO：50)、趋化受体CCR5(SEQ IDNO：51)、趋化受体CXCR4(SEQ ID NO：52)和P-选择素糖蛋白-1配体受体(SELPLG，SEQ IDNO：53)。
小鼠优化的CHA21编码DNA序列(SEQ ID NO：128)获自GeneArt(LifeTechnologies)。将IgK信号结构域的编码DNA序列(SEQ ID NO：129)掺入以增加受体向膜的输出。将含有高效Kozak序列和用于克隆的限制性位点的连接序列(SEQ ID NO：3)掺入EVIR编码序列的5’末端。将限制酶位点和终止密码子(SEQ ID NO：4)掺入scFv序列的3’末端，用于在终止密码子之前克隆EVIR的跨膜和胞内结构域的DNA序列。
FcγRIIIa的DNA编码序列获自(Life Technologies)。将连接序列添加至FcγRIIIa编码序列的5’(SEQ ID NO：5)和3’(SEQ ID NO：6)末端的序列。
dLNGFR的DNA编码序列通过PCR从表达dLNGFR和GFP的慢病毒载体(LV)获得(Amendola et al.,2005,Nat biotechnol,23(1):108-16)。含有Agel和Mlul限制性位点的引物按表1规定进行使用。如示例2中所述，通过PCR从BM衍生的DC的cDNA获得FLT3的DNA编码序列，并使用含有Agel和XhoI限制性位点的引物。如示例2中所述，通过PCR从腹膜巨噬细胞的cDNA获得小鼠Tlr4、Ccr2、Itgb2、Csf2rb、Ccr1、Ccr5、Cxcr4、Selplg受体的DNA编码序列，并使用含有Agel、Xmal、Mlul和Sail的限制性位点的引物。
表1
将编码CHA21的合成DNA序列插入含有脾病灶形成病毒(SFFV)启动子和WPRE稳定序列的LV中(Squadrito et al.,2012,Cell Rep,1(2):141-54)。因此，用BamHI和SalI消化含有带BamHI和XhoI的CHA21的质粒，以及含有SFFV.miR-511-3p.OFP.WPRE的质粒(Squadrito等，2012，同上)。然后通过用相应引物中存在的限制酶消化上述PCR产物来插入所选受体的IC、TM和EC结构域。
为了追踪EVIR表达，通过用具有EcoRV和AvrII限制性位点的SFFV.EVIR盒替换hPGK.dLNGFR盒，将得到的SFFV.EVIR.WPRE序列克隆到双向LV(Amendola等，2005，同上)中。在该双向LV中，GFP在最小巨细胞病毒启动子(mCMV)的转录控制下表达。
如制造商所示，通过使用miRNeasy RNA试剂盒(Qiagen)分离从骨髓衍生的巨噬细胞(BMDM)或腹膜巨噬细胞获得的总RNA。然后如制造商所示，使用Vilo逆转录酶(LifeTechnologies)获得cDNA。之后如制造商所示，使用Pfu ultra II(Agilent Technologies)聚合酶通过PCR扩增cDNA或质粒。引物如上所述。PCR在SensoQuest GmbH labcycler中进行，并使用高纯PCR产物纯化试剂盒(Roche)纯化。在1％琼脂糖凝胶中运行扩增子后，使用Jetquick凝胶提取旋转试剂盒(Genomed)提取它们。使用NucleoSpin质粒试剂盒(Macherey-Nagel)进行小量制备。
为了表达EVIR，使用双向慢病毒载体(LV)，其在最小巨细胞病毒(mCMV)启动子的转录控制下以反义方向表达GFP序列，并且在脾病灶形成病毒(SFFV)启动子(图1)的转录控制下沿有义方向表达抗HER2 EVIR。根据EVIR的胞内成分(即胞外结构域、CHA21、常数)鉴定和命名所得的LV，如下：EVIR-N(dLNGFR-CHA21)、EVIR-G(FcyRIIIa-CHA21)、EVIR-F(FLT3-CHA21)、EVIR-T(TLR4-CHA2)、EVIR-C2(CCR2-CHA21)、EVIR-I(ITGB2-CHA21)、EVIR-C(CSF2RB-CHA21)、EVIR-C1(CCR1-CHA21)、EVIR-C5(CCR5-CHA21)、EVIR-CX(CXCR4-CHA21)、EVIR-S(SELPLG-CHA21)。
示例2：抗HER2 EVIR的表达和稳定性
测试了EVIR在不同细胞中的稳定性和表达谱。
先前描述了永生化小鼠骨髓(BM)衍生巨噬细胞(iBMM)(Squadrito et al,2014,Cell Rep.,8(5):1432-46)。
简而言之，通过用表达原癌基因SV40大T-抗原的LV转导小鼠BM细胞获得细胞。iBMM在巨噬细胞无血清培养基(SFM培养基，Life Technologies)中培养，补充有巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF，50ng/ml)。然后在Iscove’s Modified Dulbecco’s Medium培养基(IMDM，Sigma-Aldrich)中培养iBMM，补充有M-CSF(50ng/ml)、20％胎牛血清(FBS，EuroClone Group)、5.5mL L-谷氨酰胺(Life Technologies)和5.5mL青霉素-链霉素(LifeTechnologies)。
如上所述，在补充有10％FBS、谷氨酰胺和青霉素-链霉素的IMDM中培养鼠单核细胞系(P388D1)和结肠癌细胞系(MC38)。
从5-6周的BL6C57小鼠中分离腹膜巨噬细胞(PM)、骨髓衍生树突细胞(BMDCs)和骨髓衍生巨噬细胞(BMDM)。
通过用磷酸盐缓冲盐水(PBS)冲洗安乐死小鼠的腹膜获得PM。然后将细胞接种在含有补充有M-CSF(50ng/ml)的IMDM的板中，1小时后弃去非粘附细胞。通过用PBS冲洗股骨和胫骨获得BMDM和BMDC。然后将BM细胞在IMDM或Roswell Park Memorial Institute(RPMI)培养基中培养8天，该培养基分别补充有用于BMDM的M-CSF(50ng Preprotech)或用于BMDCs的GM-CSF(100ng，Preprotech)。
通过转染293T细胞和细胞转导产生慢病毒载体
如先前所述，通过瞬时四质粒共转染到人胚肾细胞(293T)中产生水泡性口炎病毒(VSV)-假型的第三代慢病毒(De Palma et al,2002,Methods in enzymology,346:514-529)。简而言之，在转染在20ml培养基中之前24h，将9百万个293T细胞接种在15cm培养皿中。转染前2小时，更换培养基。每板，用包膜ENV质粒(VSV-G，9μg)、pMDLg/pRRE质粒(12.5μg)、REV质粒(6.25μg)、pADVANTAGE(15μg)和转移质粒(32μg)制备质粒DNA混合物。将125μl的2.5M CaCl2加入到质粒混合物中，并使用0.1TE/dH2O(2：1)获得1125μl的最终体积。
在全速涡旋该溶液的同时，逐滴添加1125μl的2X HBS溶液(pH 7.12)。将最终的HBS和质粒溶液快速转移到细胞上。12-14小时后更换培养基，每个培养皿加入16ml新鲜培养基。收集细胞上清液并在30小时后过滤(0.22μm)并使用配备有SW31Ti转子的Beckman超速离心机在22’000rpm下在20℃下超速离心2小时。试剂组成如下：2X HBS(281mM NaCl，100mM 4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES缓冲液)、1.5mM Na2HPO4、0.1X TE缓冲液(10mMTris(pH 8.0)、用蒸馏水1:10稀释1mM EDTA(pH8.0))。在-80℃下保存LV原料。
LV(均表达荧光蛋白)是在转导前一天接种于6孔板中的稀释度介于10-3至10-7之间的100’000 293T细胞上的滴定细胞。转导后4-7天通过流式细胞术测量阳性细胞的百分比。使用以下公式计算滴度：TU/ml＝’细胞数’*’阳性细胞百分比’/100/’稀释度’。制剂中使用的’阳性细胞百分比’始终是最低稀释度，值低于15％。293T、P388D1和iBMM用LV剂量转导，范围介于106至107转导单位(TU)/ml。在双转导(例如HER2表达LV和mCherry表达LV)的实验中，进行顺序转导i)用HER2表达LV转导细胞，ii)洗涤并重新铺板细胞和iii)在第一次转导后5-7天用表达mCherry-LV转导细胞。
iBMM的免疫荧光分析
将EVIR/对照转导的iBMM接种在涂有纤连蛋白(200(J.g/ml，Peprotech)的玻璃盖玻片中。除去培养基后第二天，用PBS洗涤细胞3次，每次1分钟。然后将iBMM在4％多聚甲醛(PFA)中在室温下在黑暗中固定15分钟。除去PFA后，用PBS洗涤3次，每次1分钟。然后将细胞在封闭溶液(0.1％Triton和10％正常山羊血清(NGS)的PBS溶液)中孵育30分钟。然后，在封闭溶液中制备含有与Alexa Fluor 647(Jackson ImmunoResearch)缀合的抗FF(ab’)2抗体的染色溶液。每孔加入200μl染色溶液，持续4小时。除去染色溶液，用PBS 3x洗涤载玻片3分钟。加入封闭液中的鬼笔环肽-Alexa Fluor 546(Life Technologies)20分钟。然后将载玻片用PBS洗涤3次，最后加入4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)10分钟并洗涤5次，每次3分钟。加入DAKO封固剂并将样品在室温下干燥过夜。通过共聚焦显微镜(Zeiss LSM 700INVERT)获得图像。
流式细胞术分析
转导和细胞培养后，通过胰蛋白酶分离细胞，用合适的抗体染色，之后进行流式细胞术分析。
为了验证EVIR-N的表达，用EVIR-N LV转导人肾细胞(293T细胞)、永生化骨髓巨噬细胞(iBMM)和单核细胞(P388D1细胞)，或转导为表达GFP和dLNGFR(没有胞外scFv结构域)的对照LV、双向LV。为了测量EVIR-N表达，用抗F(ab’)2抗体染色转导的细胞，该抗体识别EVIR的scFv结构域。观察到EVIR-N在所有细胞类型中的稳健表面表达(图2)。iBMM的免疫荧光染色分析证实了细胞表面的稳健EVIR-N表达(图3B)。
分析了EVIR-N表达单核细胞/iBMM在较长时间段(转导后5周)内的稳定性。在5周时间窗期间，指示转导细胞持续存在的GFP表达在P388D1和iBMM细胞中都是稳定的(图4)。
测试了包含跨膜和胞内信号传导结构域的多种不同蛋白质结构域的附加EVIR(如上所列)。为了研究抗HER2 EVIR是否能以持续方式表达，我们转导iBMM，并用各种GFP/EVIR和对照GFP/dLNGFR LV转导P388D1单核细胞。流式细胞术显示细胞膜上不同EVIR的异质表达，这取决于所测试的EVIR或细胞类型(图3A)。尽管EVIR-N由任一细胞类型强有力地表达，但其他EVIR(例如EVIR-C、EVIR-CX和EVIR-I)的表达效率较低。一些EVIR在两种细胞类型中显示出差异表达，例如，EVIR-G在P388D1细胞中高度表达，但在iBMM中低得多。用EVIR-N、EVIR-G、EVIR-T或对照LV转导的iBMM的免疫荧光分析进一步表明这些EVIR可检测地表达，尽管水平不同(图3B)。研究了EVIR表达在较长时间段内(转导后5周)的稳定性。对于大多数EVIR，在5周时间窗期间，GFP表达在iBMM和P388D1细胞系中是稳定的(图4)。值得注意的是，当至少1％的任何细胞类型的群体，优选单核细胞、巨噬细胞或树突细胞(DC)表达EVIR并且当转导后几周可检测到该表达时，实现了EVIR的良好表达。
总之，这些结果表明LV可用于在几种细胞类型的膜上稳定表达抗HER2 EVIR，包括单核细胞和巨噬细胞谱系细胞。
示例3：抗HER2 EVIR增强单核细胞/巨噬细胞与癌细胞的结合
测试EVIR在与单核细胞/巨噬细胞结合时在细胞中的表达。
共培养中的结合测定
通过用HER2表达LV转导mTq+MC38获得表达HER2的绿松石荧光蛋白(mTq)阳性MC38，其通过取代PGK的GFP编码序列获得。如Amendola et al.,2005中所述的GFP LV(Natbiotechnol,23(1):108-16)，其具有Leto et al.,2015(Clin Cancer Res.21(24):5519-31)中描述的HER2编码序列。根据标准试验方案分离转导或未转导的mTq+MC38，HER2，并接种于24孔板(Corning Costar)，20,000个细胞/孔。24小时后，根据标准方案分离用mCherry或GFP(EVIR)表达LV进行转导的iBMM。将20,000mCherry+和GFP+细胞以约1：1的比例混合并接种在mTq+MC38细胞的顶部。共培养24小时后，用胰蛋白酶分离两种细胞类型，用7-AAD染色并通过流式细胞术(LSRII，BD)分析。
悬液中的结合测定
根据标准试验方案分离并洗涤用对照或EVIR-N LV和mCherry MC38(用HER2-LV或UT转导)转导的P388D1，并重悬于IMDM中至浓度为5’000/μl，最终体积为30μl的细胞。在0.5ml管(Eppendorf)中，将细胞以不同比例(1：10、1：1和10：1)混合，并以20rpm在旋转轮上放置3小时。将细胞混合物在黑暗中保持在4℃以避免受体内化和荧光静噪。孵育时间后，加入30μl 7-AAD 2X，通过流式细胞术(LSRII，BD)分析细胞悬液。测试了EVIR-N表达是否促进单核细胞/巨噬细胞与表达HER2的癌细胞的结合。因此，用绿松石荧光蛋白(mTq)表达LV(有或没有HER2表达LV)转导结肠癌MC38细胞。双转导的MC38细胞(在此称为HER2+mTq+MC38细胞)为69％HER2/mTq双阳性，而对照mTq+MC38细胞则为79％mTq阳性。同时，iBMM用EVIR-N/GFP或mCherry-表达LV转导(分别称为EVIR+GFP+和mCherry+iBMM)。对于EVIR-N/GFP和mCherry-表达LV，iBMM的转导效率分别为78％和97％。接下来，共培养EVIR-N+GFP+和mCherry+iBMMs(1：1)与高密度的HER2+mTq+或mTq+MC38细胞的混合群体。在该测定中，mTq+GFP+或mTq+mCherry+双阳性细胞的存在指示iBMM和MC38癌细胞之间的结合/聚集。发现EVIR-N+GFP+iBMM可以有效结合至HER2+mTq+MC38细胞。仅当EVIR-N表达iBMM和HER2+MC38癌细胞存在于共培养物中时，才出现mTq+GFP+事件(图5A)。相反，mCherry+iBMMs不与mTq+或HER2mTq+MC38细胞结合，这表明巨噬细胞特异性地通过抗HER2 EVIR-N结合MC38癌细胞。此外，EVIR-NGFP+iBMM不与HER2阴性MC38细胞结合，这表明仅在HER2在癌细胞表面上表达时才发生结合。mTq+GFP+双阳性事件的逆向门控显示它们落入物理参数图的非单线态细胞区域，从而证明结合/聚集并排除细胞吞噬作为双荧光的来源。
接下来，研究了EVIR-N表达P388D1细胞是否也能在细胞悬液测定中快速结合HER2+MC38细胞。因此，首先用表达mCherry的LV转导HER2+或HER2-MC38细胞。接下来，用EVIR-N或对照LV(均表达GFP)转导P388D1细胞。转导后几天，将表达HER2或不表达HER2的mCheery+MC38细胞与表达EVIR-N或dLNGFR的GFP+P388D1细胞在4℃共温育2小时，以避免吞噬作用或非特异性结合。与在共培养中使用iBMM获得的数据一致，发现EVIR-N的表达极大地增强了P388D1细胞与HER2阳性癌细胞的结合，无论是低单核细胞浓度还是高单核细胞浓度(图5B)。细胞的共聚焦分析显示，通过流式细胞术测量的大多数双阳性事件确实是包含两种细胞类型的聚集体。
接下来，进行共培养实验以测定表达EVIR的iBMM与表达HER2的MC38细胞的结合，如上所述。发现EVIR GFP+iBMM可有效结合HER2+mTq+MC38细胞，特别是在使用EVIR-N、EVIR-C2、EVIR-F、EVIR-C1或EVIR-C5时(图5A)。
这些结果表明，单核细胞/巨噬细胞表达的抗HER2 EVIR促进其与HER2-癌细胞的结合。
示例4：抗HER2 EVIR通过EV内化增强肿瘤抗原摄取
接下来测试由单核细胞、巨噬细胞或其他APC表达的抗HER2 EVIR是否能够特异性地增强癌细胞衍生的胞外囊泡(EV)中包含的肿瘤相关抗原(TAA)的摄取，而与癌细胞的接触无关。
EV纯化、测量和细胞处理
将500万HER2+/UT mCherry+MC38细胞或HER2+/UT卵清蛋白(OVA)+MC38接种于15ml平板中的16ml补充有10％FBS(LifeTechnologies)的IMDM培养基中，预先在4℃，28,000rpm下在配备SW32Ti转子的Beckman超速离心机中超速离心16小时。收集培养基72小时后，通过三步差速离心以500g离心5分钟，2000g离心5分钟，最后4600g×20分钟弃去碎片。然后如上所述将上清液超速离心，但是需要持续1至10小时。将小丸重悬于80μl的36ml培养基PBS中。然后将EV在PBS中1：1000稀释，并使用标准试验方案使用NanoSight装置(MalvernInstrument)定量。EV的浓度范围为0.8x107至6x109个颗粒/μl。
在测量mCherry转移的实验中，将每孔20,000个iBMM或BMDC接种于各自500μl的培养基中的24孔板(Corning)中。然后将2×109EV颗粒/500μl加入培养基中的细胞中。孵育(范围从5分钟到48小时)后，通过流式细胞术(LSRII，BD)分析细胞。在通过免疫荧光测量mCherry的实验中，如方法中所述接种iBMM并用1×109EV-颗粒/250μl处理。在以逐渐增加的EV浓度测量EV摄取的实验中，将BMDC接种在平底96孔板(10,000个细胞/200μl培养基/孔)中，并用0.8x107、4x107、2x108、1x109、3x109或6x109mCherry+EV处理。
越来越多地认识到癌细胞会释放EV，其包括可含有免疫原性TAA的外来体或微泡(Zeelenberget al.,2011,Journal of Immunology(Baltimore,Mel:1950),187:1281-1288)。基于抗HER2 EVIR-N有效结合HER2阳性癌细胞的能力，假设表达EVIR-N的APC也会与癌细胞衍生的EV结合，内化它们，并呈递EV衍生的TAA。分离从mCheery+、HER2阳性或阴性MC38细胞释放的EV。使用NS3000装置(Malvern)的Nanosight分析证实在MC38细胞调节的培养基中存在EV(直径：100-400nm，平均～150nm)。此外，EV的流式细胞术分析显示在源自HER2+MC38细胞的EV中HER2的良好可检测的表达(图6A)。接下来，用匹配量的从HER2+mCheery+或HER2-mCheery+MC38细胞分离的EV处理EVIR-N+GFP+iBMM。处理后24小时，与HER2-mCheery+EV相比，EVIR-N+GFP+iBMM在暴露于HER2+m Cheery+MC38细胞衍生的EV时显示出更高的mCherry平均荧光强度(MFI)(图6B)。还发现在没有48小时内饱和的证据的情况下(图6C)，表达EVIR-N的iBMM比对照(EVIR-N-)iBMM更快地摄取HER2+m Cheery+MC38细胞衍生的EV，。为了研究EV是否内化或仍然与iBMM的细胞表面相关联，通过共聚焦显微镜分析EV处理的iBMM。发现mCherry信号大部分与细胞质共定位，这表明表达EVIR-N的iBMM对HER2+EV内化(图6D)。值得注意的是，在使用mTq+MC38细胞的共培养实验中也观察到EV内化。
接下来，研究了EVIR-N是否可以通过树突细胞(DC)增强癌细胞衍生的EV的内化。用EVIR-N或对照LV转导BMDC。然后用从mCheery+HER2+或mCheery+HER2-MC38细胞分离的EV处理转导后的BMDC。与iBMM中的发现一致，EVIR-N+BMDCs在广泛的EV剂量范围内内化了比对照细胞(图6F)更大量的癌细胞衍生的HER2+EV(图6E)。此外，其他表达EVIR的iBMM内化来自HER2+mCheery+MC38细胞的EV比来自对照HER-mCheery+MC38细胞的EV更快，特别是在使用EVIR-N、EVIR-C5和EVIR-S时(图7)。
总之，这些结果均表明抗HER2 EVIR增强巨噬细胞或DC对癌细胞衍生的EV的摄取。
示例5：抗HER2 EVIR增强APC的TAA呈递
测试了表达EVIR-N的DC增强的EV内化是否与不相关的TAA的呈递增加相关。
OT-IT细胞增殖测定
OT-I CD8+T细胞获自OT-I TCR转基因小鼠系，其产生MHC I类限制性卵清蛋白特异性CD8+T细胞(OT-I细胞)(Hogquist等，1994，同上)。从获自OT-I BL6/C57小鼠的脾中纯化CD8+OT-1T细胞。首先，我们通过使用具有抗CD11c微珠(Miltenyi biotech)的自动MACS分离器来耗尽CD11c+细胞。随后，我们使用抗CD8微珠(Miltenyi biotech)积极选择CD8+T细胞。按照制造商的说明，用Cell Tracer-violet(Life Technologies)对OT-I CD8+T细胞染色。将2x105纯化的OT-IT细胞与2x104EVIR/对照转导的BMDC一起在平底96孔板中共培养。将从用HER2或UT转导的OVA MC38细胞分离的EV与BMDC和T细胞一起在第0天加入孔中并保持3天。在预孵育实验中，将BMDC与从MC38细胞分离的EV孵育24小时，然后用PBS洗涤并加入到OT-1T细胞中。在第3天，通过对CD8+CD11b-7AAD-T细胞进行门控的流式细胞术(LSRII，BD)测量CD8T细胞的增殖。所用抗体如下：山羊抗-F(ab’)2-Alexa Fluor 647(JacksonImmunoResearch)、抗HER2-Alexa Fluor 647(BioLegend，24B2)、抗CD8-PE(BioLegend，53-6.7)、抗-CD11b-APC-Cy7(BioLegend，M1/70)、抗-Fc(BD，2.4G2)。在测量OT-I CD8T细胞增殖的实验中，如示例4的方法中所述，将8×109/ml EV-颗粒加入BMDCs或BMDC+T细胞中。在测量不同EV浓度的OT-I CD8T细胞增殖的实验中，如示例4中所述添加EV。
用表达HER2的LV转导表达OVA的MC38细胞。与此同时，分离来自OT-I小鼠的CD8+T细胞，其表达MHCI限制的抗OVA TCR。将从MC38分离的HER2+OVA+EV在(i)GFP BMDC和(ii)细胞示踪染色的OT-I CD8+T细胞存在的情况下共培养72小时，该GFP BMDC表达EVIR-N或dLNGFR。值得注意的是，与其他共培养条件相比，当OT-IT细胞与表达EVIR-N的BMDC和HER2+OVA+EV共培养时，观察到明显更大的T细胞增殖(图8A)。
为了解EVIR-N+BMDCs是否从癌细胞衍生的EV获得OVA抗原，将以下细胞共培养72小时，即(i)表达EVIR-N或dLNGFR并用HER2+OVA+EV预处理的GFP+BMDC、(ii)示踪染色的OT-ICD8+T细胞。与其他条件相比，观察到在预处理的EVIR-N+BMDM存在的情况下更大的OT-ICD8+T细胞增殖(图8B)。值得注意的是，在缺乏BMDC的情况下，当用HER2+OVA+EV处理OT-ICD8+T细胞时，或当OT-I CD8+T细胞与GFP+BMDC(表达EVIR-N或dLNGFR)共培养时，未观察到OT-I CD8+T细胞增殖(图8C)。此外，当在剂量-反应测定中使用低EV剂量时，也观察到表达EVIR的BMDC刺激OT-I CD8+T增殖(图8D)。
这些结果表明DC和BMDC对EVIR-N的表达极大地增强了其摄取、加工和呈递给T细胞、EV相关TAA的能力。
示例6：EVIR-N2和EVIR-N1增强APC的EV摄取并促进癌症特异性T细胞增殖
此外，设计了针对两种不同的黑素瘤特异性表面抗原DG2和TYRP1的EVIR。设计了EVIR-N2，其特异于在黑素瘤细胞上表达的神经节苷脂GD2。GD2之前曾被用作黑色素瘤免疫治疗的靶点，例如，用于设计GD2特异性CAR-T细胞(Yvon et al.,Clin Cancer Res.2009,15(18):5852-60)。接下来，设计EVIR-N1，其对黑素瘤细胞上表达的黑素瘤抗原TYRP1具有特异性(Saenger et al.,2008,Cancer Res,68(23)；9884-91)。测试EVIR-N1和EVIR-N2是否增强APC的EV摄取并促进癌症特异性T细胞增殖。
EVIR-N1和EVIR-N2的克隆设计
小鼠优化的TA99scFv(SEQ ID NO：111；抗TYRP1)和小鼠优化的14G2a scFv(SEQID NO：112；抗-GD2)编码DNA序列获自GeneArt(LifeTechnologies)。对于两种scFv序列，掺入IgK信号域的编码DNA序列(EVIR-N1的SEQ ID NO：109和EVIR-N2的SEQ ID NO：110)，以增加嵌合受体向细胞膜的输出。将含有高效Kozak序列和限制性位点(SEQ ID NO：3)的连接序列掺入EVIR编码序列的5’末端。将Agel的限制酶位点掺入scFv序列的3’末端，用于克隆(与DNA序列的其余部分一致)EVIR的跨膜和胞内结构域。然后将IgK-抗-HER2scFv CHA21序列分别用EVK-N慢病毒替换为IgK-抗-TARRP1scFv TA99或IgK-抗-GD2scFv 14G2a序列，并且将来自截短的人神经生长因子受体(dLNGFR，SEQ ID NO：43)的DNA编码序列用于两种构建体中，如示例1中所述。
制备TYRP1+细胞和GD2+细胞
通过用小鼠TYRP1-表达LV转导B16细胞(鼠黑素瘤肿瘤细胞系)获得TYRP1+B16。使用来自B16细胞的cDNA作为模板和特异性引物(SEQ ID NO：134的TYRP1Fw和SEQ ID NO：135的TYRP1Rv)通过PCR获得TYRP1序列。通过用表达B4GALNT1(β-1,4-N-乙酰基-半乳糖胺基转移酶1，GD2合酶)和ST8SIA1(ST8α-N-乙酰基-神经氨酸酰胺α-2,8-)的LV转导mCherry+MC38细胞获得GD2+mCherry+MC38细胞，该酶参与GD2合成(Dall’Olio et al.,2014,BiochimBiophys Acta,1840(9):2752-64)。小鼠优化的GD2和GD3合酶DNA序列获自(LifeTechnologies)。如示例4中所述获得衍生自GD2+mCheny MC3 8和TYRP1+B16的EV。
如示例4中所述的测量和细胞处理。
如示例5中所述的OT-IT细胞增殖测定。
如图9A-9B所示，GD2和TYRP1特异性EVIR(分别为EVIR-N2和EVIR-N1)增强了表达相应诱饵抗原的EV的工程化iBMM的摄取，因为EVIR-N2+和EVIR-N1+iBMM内化比对照细胞更多的癌细胞衍生的GD2+EV和TYRP1+EV(图9A、图9B)。此外，与工程化以表达对照EVIR的BMDC相比，当与从OVATYRP1+黑素瘤细胞(OVATYRP1+B16)获得的EV共孵育时，工程化BMDC以表达EVIR-N1的BMDC会增加OT-I CD8+T细胞的增殖(图9C)。
这些数据表明，EVIR可以针对癌细胞(包括黑素瘤细胞)表达的各种表面抗原进行设计。
示例7：EVIR可与APC刺激因子共同递送给APC
已经如下测试了EVIRS与APC刺激因子的共表达。
APC刺激因子的DNA编码序列：Cxcl9(SEQ ID NO：117、Csf2(SEQ ID NO：120)和IFNγ(SEQ ID NO：123)如示例2所述，通过PCR从腹膜巨噬细胞的cDNA获得，并且使用含有Xmal、Sal和NheI限制性位点的引物(表2)。通过PCR从小鼠滋养细胞的cDNA获得Lin28的DNA编码序列(SEQ ID NO：126)(Baer等，2016，同上)，并且使用含有Xmal、Sal和NheI限制性位点的引物(表2)。CD40的DNA编码序列(SEQ ID NO：127)获自GeneArt(LifeTechnologies)。然后通过替换示例1中所述的双向LV(Amendola等，2005，同上)中的GFP编码序列，在最小CMV启动子的转录控制下克隆这些APC刺激因子的DNA编码序列。
如示例4中所述的EV纯化、测量和细胞处理。
如示例2中所述的EVIR表达的测量。
如示例2中所述的对表面分子CD86和CCR7的表达进行流式细胞术分析。
表2
如图10A-10B所示，增强APC分化、活化和呈递和/或T细胞浸润的蛋白质的共表达不损害EVIR的表达或其促进BMDCs中EV摄取的能力。此外(图10C-10D)，发现LIN28(一种阻断Let-7miRNA活性的蛋白质)的共转导增加了指示APC活化的表面分子的BMDCs中的表达，例如CD86(分化簇86)和CCR7(CC趋化因子受体7型)。
总之，这些数据表明辅助蛋白与EVIR的共同递送不仅不会损害其EV内化活性，还可以帮助增强APC功能。
示例8：EVIR可以促进MHC-抗原复合物从癌细胞向APC的转移
如下测试潜在的EVIR介导的MHCI-抗原复合物从癌细胞向APC的转移。
破坏癌细胞中的MHC表达
为了破坏B2m并消除癌细胞中MHCI的表达，我们基于CRISPR/Cas9系统产生了自诱导的LV。我们获得了还表达反向tTA(rtTA)和选择标记(嘌呤霉素)的TetO-CAS9LV。进一步修饰该LV以包括U6启动子驱动的抗52m单指导RNA(sgRNA)序列(SEQ ID NO：136)，其被克隆到TetO-CAS9表达盒的上游以获得多西环素-自诱导LV：U6-sgRNA.TetO-CAS9.Pgk-PURO/2A/rtTA LV。通过用上述LV转导HER2+OVA+MC38癌细胞获得B2M缺陷型EV。将转导的HER2+OVA+MC38细胞在含有嘌呤霉素(2μg，g/ml)和多西环素(10μg，ml/ml)的细胞培养基中培养3天，以激活CRISPR/Cas9系统并选择具有破坏的B2m基因的克隆细胞群体(图11A)。然后如示例4中所述纯化EV。
在实验中，从B2M-/-小鼠的BM中分离BMDC，其缺乏呈递MHCI/抗原复合物的能力(Roller et al.,1990,Science,248(4960):1227-30)。然后用对照EVIR或EVIR-N转导MHCI缺陷型B2M-BMDC，并如示例5中所述在T细胞增殖测定中进行测定。
在特定的实验条件下，APC被遗传修饰而缺乏交叉呈递的能力，MHC复合物从癌细胞衍生的EV直接转移到表达EVIR的APC足以促进T细胞增殖(图11B)。MHCI缺陷型BMDC和OT-IT细胞与OVA+HER2+EV的共孵育导致在EVIR-N存在的情况下T细胞增殖增加(与对照EVIR相比)，这表明增强的MHCI交叉敷料(图11B，上板)。另一方面，使用上述LV(U6-sgRNA.TetO-CAS9.Pgk-PURO/2A/rtTA)破坏癌细胞中的B2M完全阻断了纯化EV的交叉敷料，这证明了这种现象的特异性(图11B，底板)。
这些结果支持MHC复合物从癌细胞衍生的EV直接转移至表达EVIR的APC可足以在APC中不存在内源性MHCI的情况下促进T细胞增殖。
示例9：EVIR工程化的APC抑制小鼠的肿瘤生长
使用基于EVIR-N DC的疫苗接种实验在体内测试EVIR的作用。
DC从同系小鼠的BM中获得，在携带小的、确定的肿瘤的小鼠中用LV转导，并在接种(两个连续DC剂量的107个细胞，间隔一周)之前用LPS(脂多糖，10ng/ml)激活(无DC中n＝4，CTRL-DC中n＝7，EVIR DC小鼠/组中n＝9)。
发现与对照EVIR转导的DC相比，EVIR-N转导的DC的皮下癌周部署抑制了MC38-HER2肿瘤的生长(图12)。尽管对照EVIR转导的DC也延迟了肿瘤生长，但EVIR-N转导的DC显着改善了肿瘤控制，这证明了EVIR工程化DC具有优异的抗肿瘤活性。
这些数据表明，EVIR工程化的APC可以增强体内肿瘤生长的抑制。
序列表
抗HER2 scFv CHA21的核酸序列
SEQ ID NO:1:
GGGGATATTGTCCTCACACAGACTCCCAGCTCCCTGCCTGTGTCCGTCGGAGAGAAAGTGACCATGACATGCAAGTCTAGTCAGACACTGCTCTACTCTAACAATCAGAAGAACTACCTCGCATGGTATCAGCAGAAACCAGGACAGAGCCCCAAGCTGCTCATCTCCTGGGCTTTCACCCGGAAATCCGGGGTGCCTGACCGCTTCACAGGTAGCGGCTCCGGAACTGATTTTACTCTGACCATTGGATCTGTGAAGGCAGAGGACCTCGCCGTCTACTATTGCCAGCAGTACAGTAATTATCCATGGACTTTTGGCGGAGGGACCAGGCTGGAAATCAAGAGAGGTGGAGGAGGGTCCGGTGGAGGAGGGTCTGGTGGAGGAGGGAGTGGTGGAGGAGGGTCAGAGGTGCAGCTGCAGCAGTCTGGCCCCGAAGTGGTCAAAACTGGAGCTTCAGTCAAAATCAGCTGTAAGGCATCTGGGTACAGCTTCACCGGCTACTTCATCAACTGGGTGAAGAAAAATTCAGGGAAGAGCCCTGAGTGGATCGGCCACATTTCAAGCTCCTACGCCACAAGCACTTACAACCAGAAGTTCAAAAATAAGGCCGCTTTTACCGTGGACACATCTAGTTCAACCGCCTTCATGCAGCTGAACTCCCTCACATCTGAAGATAGTGCTGTGTACTATTGTGTCAGGAGCGGCAACTACGAAGAATATGCTATGGATTACTGGGGGCAGGGGACCTCCGTGACTGTCTCAAGC
IgK结构域的核酸序列
SEQ ID NO:2:
ATGGATTTTCAGGTCCAGATTTTCTCCTTCCTCCTCATTTCAGCCAGCGTCATTATGTCTCGG
S5_BamHI_Kozak的核酸序列
SEQ ID NO:3:GGATCCGCCACC
S3_BamHI_Agel_Mlul_Sail_stop_Xhol的核酸序列
SEQ ID NO:4:ACCGGTACGCGTGTCGACTGACTCGAG
S5_FCgRIIIa_BamHI_Kozak.start_Agel的核酸序列
SEQ ID NO:5:GGATCCGCCACCATGACCGGT
S3_FCgRIIIa_MluI_SalI_stop_XhoI的核酸序列
SEQ ID NO:6:ACGCGTGTCGACTGACTCGAG
dLNGFR_Fw_Agel的核酸序列
SEQ ID NO:7:AAAAAACCGGTCTTCTGGGGGTGTCCCTTG
dLNGFR_Rv_MluI的核酸序列
SEQ ID NO:8:AAAAAACGCGTAGTTAGCCTCCCCCATCTCC
FLT3_Fw_Agel的核酸序列
SEQ ID NO:9:AAAAAACCGGTCCAGGCCCCTTCCCTTTCATC
FLT3_Rv_Xhol的核酸序列
SEQ ID NO:10:AAAAACTCGAGAGAGGCGAGGCTAATCTTGG
Tlr4_Fw_AgeI的核酸序列
SEQ ID NO:11:AAAAAACCGGTCAGCTGTATTCCCTCAGCACT
Tlr4_Rv_SalI的核酸序列
SEQ ID NO:12:AAAAAGTCGACTGGGTTTAGGCCCCAGAGTT
Ccr2_Fw_Agel的核酸序列
SEQ ID NO:13:AAAAAACCGGTATGGAAGACAATAATATGTTACCTC
Ccr2_Rv_Mlul的核酸序列
SEQ ID NO:14:AAAAAACGCGTATGTACAAACTGCTCCCTCC
Itgb2_Fw_Agel的核酸序列
SEQ ID NO:15:AAAAAACCGGTAATGCACGGCTGGTAGAGTG
Itgb2_Rv_Mlul的核酸序列
SEQ ID NO:16:AAAAAACGCGTGGGGGTCACATCTGCTTGAT
Csf2rb_Fw_Agel的核酸序列
SEQ ID NO:17:AAAAAACCGGTACTCAGAAGATGGCTTACTCATTCA
Csf2rb_Rv_Mlul的核酸序列
SEQ ID NO:18:AAAAAACGCGTTGGTGAGATTGGGAGGAGAC
Ccrl_Fw_Agel的核酸序列
SEQ ID NO:19:AAAAAACCGGTACTCCATGCCAAAAGACTGCT
Ccrl_Rv_Mlul的核酸序列
SEQ ID NO:20:AAAAAACGCGTACCTTCCTTGGTTGACACCTATG
Ccr5_Fw_Agel的核酸序列
SEQ ID NO:21:AAAAAACCGGTATGTCAGCACCCTGCCAAAAA
Ccr5_Rv_Mlul的核酸序列
SEQ ID NO:22:AAAAAACGCGTCATTCCTACTCCCAAGCTGCAT
Cxcr4_Fw_Xmal的核酸序列
SEQ ID NO:23:AAAAACCCGGGTTCCGGGATGAAAACGTCCA
Cxcr4_Rv_Mlul的核酸序列
SEQ ID NO:24:AAAAAACGCGTTGCATAAGTGTTAGCTGGAGTG
Selplg_Fw_Agel的核酸序列
SEQ ID NO:25:AAAAAACCGGTATTGCCACCACTGACCCTA
Selplg_Rv_Mlul的核酸序列
SEQ ID NO:26:AAAAAACGCGTGCAAAGGTCTCGCTTAGGTG
抗HER2 CHA21的氨基酸序列
SEQ ID NO:27:
DIVLTQTPSSLPVSVGEKVTMTCKSSQTLLYSNNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLISWAFTRKSGVPDRFTGSGSGTDFTLTIGSVKAEDLAVYYCQQYSNYPWTFGGGTRLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGPEVVKTGASVKISCKASGYSFTGYFINWVKKNSGKSPEWIGHISSSYATSTYNQKFKNKAAFTVDTSSSTAFMQLNSLTSEDSAVYYCVRSGNYEEYAMDYWGQGTSVTVSS
抗HER2曲妥珠单抗基scFv的氨基酸序列
SEQ ID NO:28:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTGSTSGSGKPGSGEGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDVWGQGTLVTVSSGTGTRX
抗HER2帕妥珠单抗基scFv的氨基酸序列
SEQ ID NO:29:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSG
TDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYW
抗HER2 FRP5基scFv的氨基酸序列
SEQ ID NO:30:
QVQLQQSGPELKKPGETVKISCKASGYPFTNYGMNWVKQAPGQGLKWMGWINTSTGESTFADDFKGRFDFSLETSANTAYLQINNLKSEDMATYFCARWEVYHGYVPYWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIQLTQSHKFLSTSVGDRVSITCKASQDVYNAVAWYQQKPGQSPKLLIYSASSRYTGVPSRFTGSGSGPDFTFTISSVQAEDLAVYFCQQHFRTPFTFGSGTKLEIKRX
来自dLNGFR的蛋白质结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:31:
LLGVSLGGAKEACPTGLYTHSGECCKACNLGEGVAQPCGANQTVCEPCLDSVTFSDVVSATEPCKPCTECVGLQSMSAPCVEADDAVCRCAYGYYQDETTGRCEACRVCEAGSGLVFSCQDKQNTVCEECPDGTYSDEANHVDPCLPCTVCEDTERQLRECTRWADAECEEIPGRWITRSTPPEGSDSTAPSTQEPEAPPEQDLIASTVAGWTTVMGSSQPVVTRGTTDNLIPVYCSILAAVWGLVAYIAFKRWNRGIL
来自FcyRIIIA的蛋白质结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:32:
HENSELLIPKATHNDSGSYFCRGLIGHNNKSSASFRISLGDPGSPSMFPPWHQITFCLLIGLLFAIDTVLYFSVRRGLQSPVADYEEPKIQWSKEPQDKTRVD
来自FLT3的蛋白质结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:33:
PGPFPFIQDNISFYATIGLCLPFIVVLIVLICHKYKKQFRYESQLQMIQVTGPLDNEYFYVDFRDYEYDLKWEFPRENLEFGKVLGSGAFGRVMNATAYGISKTGVSIQVAVKMLKEKADSCEKEALMSELKMMTHLGHHDNIVNLLGACTLSGPVYLIFEYCCYGDLLNYLRSKREKFHRTWTEIFKEHNFSFYPTFQAHSNSSMPGSREVQLHPPLDQLSGFNGNLIHSEDEIEYENQKRLAEEEEEDLNVLTFEDLLCFAYQVAKGMEFLEFKSCVHRDLAARNVLVTHGKVVKICDFGLARDILSDSSYWRGNARLPVKWMAPESLFEGIYTIKSDVWSYGILLWEIFSLGVNPYPGIPVDANFYKLIQSGFKMEQPFYATEGIYFVMQSCWAFDSRKRPSFPNLTSFLGCQLAEAEEAMYQNMGGNVPEHPSIYQNRRPLSREAGSEPPSPQAQVKIHGERS
来自TLR4的蛋白质结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:34:
QLYSLSTLDCSFNRIETSKGILQHFPKSLAFFNLTNNSVACICEHQKFLQWVKEQKQFLVNVEQMTCATPVEMNTSLVLDFNNSTCYMYKTIISVSVVSVIWSTVAFLIYHFYFHLILIAGCKKYSRGESIYDAFVIYSSQNEDWVRNELVKNLEEGVPRFHLCLHYRDFIPGVAIAANIIQEGFHKSRKVIWVSRHFIQSRWCIFEYEIAQTWQFLSSRSGIIFIVLEKVEKSLLRQQVELYRLLSRNTYLEWEDNPLGRHIFWRRLKNALLDGKASNPEQTAEEEQETATWT
来自CCR2的蛋白质结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:35:
MEDNNMLPQFIHGILSTSHSLFTRSIQELDEGATTPYDYDDGEPCHKTSVKQIGAWILPPLYSLVFIFGFVGNMLVIIILIGCKKLKSMTDIYLLNLAISDLLFLLTLPFWAHYAANEWVFGNIMCKVFTGLYHIGYFGGIFFIILLTIDRYLAIVHAVFALKARTVTFGVITSVVTWVVAVFASLPGIIFTKSKQDDHHYTCGPYFTQLWKNFQTIMRNILSLILPLLVMVICYSGILHTLFRCRNEKKRHRAVRLIFAIMIVYFLFWTPYNIVLFLTTFQESLGMSNCVIDKHLDQAMQVTETLGMTHCCINPVIYAFVGEKFRRYLSIFFRKHIAKRLCKQCPVFYRETADRVSSTFTPSTGEQEVSVGL
来自ITGB2的蛋白质结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:36:
NARLVECSGRGHCQCNRCICDEGYQPPMCEDCPSCGSHCRDNHTSCAECLKFDKGPFEKNCSVQCAGM
TLQTIPLKKKPCKERDSEGCWITYTLQQKDGRNIYNIHVEDSLECVKGPNVAAIVGGTVVGWLIGVLLLVIWKALTHLTDLREYRRFEKEKLKSQWNNDNPLFKSATTTVMNPKFAES
来自CSF2RB的蛋白质结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:37:
TQKMAYSFIEHTFQVQYKKKSDSWEDSKTENLDRAHSMDLSQLEPDTSYCARVRVKPISNYDGIWSKWSEEYTWKTDWVMPTLWIVLILVFLILTLLLILRFGCVSVYRTYRKWKEKIPNPSKSLLFQDGGKGLWPPGSMAAFATKNPALQGPQSRLLAEQQGESYAHLEDNNVSPLTIEDPNIIRVPPSGPDTTPAASSESTEQLPNVQVEGPTPNRPRKQLPSFDFNGPYLGPPQSHSLPDLPDQLGSPQVGGSLKPALPGSLEYMCLPPGGQAQLVPLSQVMGQGQAMDVQCGSSLETSGSPSVEPKENPPVELSMEEQEARDNPVTLPISSGGPEGSMMASDYVTPGDPVLTLPTGPLSTSLGPSLGLPSAQSPRLCLKLPRVPSGSPALGPPGFEDYVELPPSVSQAAKSPPGHPAPPVASSPTVIPGEPREEVGPASPHPEGLLVLQQVGDYCFLPGLGPGSLSPHSKPPSPSLCSETEDLVQDLSVKKFPYQPMPQAPAIQFFKSLKHQDYLSLPPWDNSQSGKVC
来自CCR1的蛋白质结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:38:
TPCQKTAVRAFGAGLLPPLYSLVFIIGWGNVLVILVLMQHRRLQSMTSIYLFNLAVSDLVFLFTLPFWIDYKLKDDWIFGDAMCKLLSGFYYLGLYSEIFFIILLTIDRYLAIVHAVFALRARTVTFGIITSIITWALAILASMPALYFFKAQWEFTHRTCSPHFPYKSLKQWKRFQALKLNLLGLILPLLVMIICYAGIIRILLRRPSEKKVKAVRLIFAITLLFFLLWTPYNLSVFVSAFQDVLFTNQCEQSKQLDLAMQVTEVIAYTHCCVNPIIYVFVGERFWKYLRQLFQRHVAIPLAKWLPFLSVDQLERTSSISPSTGEHELSAGF
来自CCR5的蛋白质结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:39:
MSAPCQKINVKQIAAQLLPPLYSLVFIFGFVGNMMVFLILISCKKLKSVTDIYLLNLAISDLLFLLTLPFWAHYAANEWVFGNIMCKVFTGLYHIGYFGGIFFIILLTIDRYLAIVHAVFALKVRTVNFGVITSWTWAVAVFASLPEIIFTRSQKEGFHYTCSPHFPHTQYHFWKSFQTLKMVILSLILPLLVMVICYSGILHTLFRCRNEKKRHRAVRLIFAIMIVYFLFWTPYNIVLLLTTFQEFFGLNNCSSSNRLDQAMQATETLGMTHCCLNPVIYAFVGEKFRSYLSVFFRKHIVKRFCKRCSIFQQDNPDRASSVYTRSTGEHEVSTGL
来自CXCR4的蛋白质结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:40:
FRDENVHFNRIFLPTIYFIIFLTGIVGNGLVILVMGYQKKLRSMTDKYRLHLSVADLLFVITLPFWAVDAMADWYFGKFLCKAVHIIYTVNLYSSVLILAFISLDRYLAIVHATNSQRPRKLLAEKAVYVGVWIPALLLTIPDFIFADVSQGDISQGDDRYICDRLYPDSLWMWFQFQHIMVGLVLPGIVILSCYCIIISKLSHSKGHQKRKALKTTVILILAFFACWLPYYVGISIDSFILLGVIKQGCDFESIVHKWISITEALAFFHCCLNPILYAFLGAKFKSSAQHALNSMSRGSSLKILSKGKRGGHSSVSTESESSSFHSS
来自SELPLG的蛋白质结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:41:
IATTDPTAPGTGGTAVGMLSTDSATQWSLTSVETVQPASTEVETSQPAPMEAETSQPAPMEAETSQPAPMEADTSKPAPTEAETSKPAPTEAETSQPAPNEAETSKPAPTEAETSKPAPTEAETTQLPRIQAVKTLFTTSAATEVPSTEPTTMETASTESNESTIFLGPSVTHLPDSGLKKGLIVTPGNSPAPTLPGSSDLIPVKQCLLIILILASLATIFLVCTWLAVRLSRKTHMYPVRNYSPTEMICISSLLPEGGDGAPVTANGGLPKVQDLKTEPSGDRDGDDLTLHSFLP
IgK结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:42:MDFQVQIFSFLLISASVIMSRG
来自dLNGFR的蛋白质结构域的核酸序列
SEQ ID NO:43:
CTTCTGGGGGTGTCCCTTGGAGGTGCCAAGGAGGCATGCCCCACAGGCCTGTACACACACAGCGGTGAGTGCTGCAAAGCCTGCAACCTGGGCGAGGGTGTGGCCCAGCCTTGTGGAGCCAACCAGACCGTGTGTGAGCCCTGCCTGGACAGCGTGACGTTCTCCGACGTGGTGAGCGCGACCGAGCCGTGCAAGCCGTGCACCGAGTGCGTGGGGCTCCAGAGCATGTCGGCGCCGTGCGTGGAGGCCGACGACGCCGTGTGCCGCTGCGCCTACGGCTACTACCAGGATGAGACGACTGGGCGCTGCGAGGCGTGCCGCGTGTGCGAGGCGGGCTCGGGCCTCGTGTTCTCCTGCCAGGACAAGCAGAACACCGTGTGCGAGGAGTGCCCCGACGGCACGTATTCCGACGAGGCCAACCACGTGGACCCGTGCCTGCCCTGCACCGTGTGCGAGGACACCGAGCGCCAGCTCCGCGAGTGCACACGCTGGGCCGACGCCGAGTGCGAGGAGATCCCTGGCCGTTGGATTACACGGTCCACACCCCCAGAGGGCTCGGACAGCACAGCCCCCAGCACCCAGGAGCCTGAGGCACCTCCAGAACAAGACCTCATAGCCAGCACGGTGGCAGGTGTGGTGACCACAGTGATGGGCAGCTCCCAGCCCGTGGTGACCCGAGGCACCACCGACAACCTCATCCCTGTCTATTGCTCCATCCTGGCTGCTGTGGTTGTGGGCCTTGTGGCCTACATAGCCTTCAAGAGGTGGAACAGGGGGATCCTCTAG
来自FcyRIIIA的蛋白质结构域的核酸序列
SEQ ID NO:44:
CACGAGAACTCCGAACTGCTGATTCCTAAGGCAACTCACAACGACTCCGGCTCCTATTTCTGTAGAGGGCTGATTGGACATAACAACAAGAGCTCCGCCTCATTCAGGATTAGCCTGGGCGACCCAGGGTCTCCCAGTATGTTCCCCCCTTGGCACCAGATCACCTTTTGCCTGCTGATTGGACTGCTGTTCGCTATCGATACAGTGCTGTACTTTTCTGTCCGGAGAGGCCTGCAGTCACCCGTGGCAGATTACGAAGAACCCAAGATTCAGTGGAGCAAGGAGCCCCAGGATAAGACGCGTGTCGACTGA
来自FLT3的蛋白质结构域的核酸序列
SEQ ID NO:45:
CCAGGCCCCTTCCCTTTCATCCAAGACAACATCTCCTTCTATGCGACCATTGGGCTCTGTCTCCCCTTCATTGTTGTTCTCATTGTGTTGATCTGCCACAAATACAAAAAGCAATTTAGGTACGAGAGTCAGCTGCAGATGATCCAGGTGACTGGCCCCCTGGATAACGAGTACTTCTACGTTGACTTCAGGGACTATGAATATGACCTTAAGTGGGAGTTCCCGAGAGAGAACTTAGAGTTTGGGAAGGTCCTGGGGTCTGGCGCTTTCGGGAGGGTGATGAACGCCACGGCCTATGGCATTAGTAAAACGGGAGTCTCAATTCAGGTGGCGGTGAAGATGCTAAAAGAGAAAGCTGACAGCTGTGAAAAAGAAGCTCTCATGTCGGAGCTCAAAATGATGACCCACCTGGGACACCATGACAACATCGTGAATCTGCTGGGGGCATGCACACTGTCAGGGCCAGTGTACTTGATTTTTGAATATTGTTGCTATGGTGACCTCCTCAACTACCTAAGAAGTAAAAGAGAGAAGTTTCACAGGACATGGACAGAGATTTTTAAGGAACATAATTTCAGTTTTTACCCTACTTTCCAGGCACATTCAAATTCCAGCATGCCTGGTTCACGAGAAGTTCAGTTACACCCGCCCTTGGATCAGCTCTCAGGGTTCAATGGGAATTTAATTCATTCTGAAGATGAGATTGAATATGAAAACCAGAAGAGGCTGGCAGAAGAAGAGGAGGAAGATTTGAACGTGCTGACGTTTGAAGACCTCCTTTGCTTTGCGTACCAAGTGGCCAAAGGCATGGAATTCCTGGAGTTCAAGTCGTGTGTCCACAGAGACCTGGCAGCCAGGAATGTGTTGGTCACCCACGGGAAGGTGGTGAAGATCTGTGACTTTGGACTGGCCCGAGACATCCTGAGCGACTCCAGCTACGTCGTCAGGGGCAACGCACGGCTGCCGGTGAAGTGGATGGCACCTGAGAGCTTATTTGAAGGGATCTACACAATCAAGAGTGACGTCTGGTCCTACGGCATCCTTCTCTGGGAGATATTTTCACTGGGTGTGAACCCTTACCCTGGCATTCCTGTCGACGCTAACTTCTATAAACTGATTCAGAGTGGATTTAAAATGGAGCAGCCATTCTATGCCACAGAAGGGATATACTTTGTAATGCAATCCTGCTGGGCTTTTGACTCAAGGAAGCGGCCATCCTTCCCCAACCTGACTTCATTTTTAGGATGTCAGCTGGCAGAGGCAGAAGAAGCGATGTATCAGAACATGGGTGGCAACGTCCCAGAACATCCATCCATCTACCAAAACAGGCGGCCCCTCAGCAGAGAGGCAGGCTCAGAGCCGCCATCGCCACAGGCCCAGGTGAAGATTCACGGAGAAAGAAGTTAG
来自TLR4的蛋白质结构域的核酸序列
SEQ ID NO:46:
CAGCTGTATTCCCTCAGCACTCTTGATTGCAGTTTCAATCGCATAGAGACATCTAAAGGAATACTGCAACATTTTCCAAAGAGTCTAGCCTTCTTCAATCTTACTAACAATTCTGTTGCTTGTATATGTGAACATCAGAAATTCCTGCAGTGGGTCAAGGAACAGAAGCAGTTCTTGGTGAATGTTGAACAAATGACATGTGCAACACCTGTAGAGATGAATACCTCCTTAGTGTTGGATTTTAATAATTCTACCTGTTATATGTACAAGACAATCATCAGTGTGTCAGTGGTCAGTGTGATTGTGGTATCCACTGTAGCATTTCTGATATACCACTTCTATTTTCACCTGATACTTATTGCTGGCTGTAAAAAGTACAGCAGAGGAGAAAGCATCTATGATGCATTTGTGATCTACTCGAGTCAGAATGAGGACTGGGTGAGAAATGAGCTGGTAAAGAATTTAGAAGAAGGAGTGCCCCGCTTTCACCTCTGCCTTCACTACAGAGACTTTATTCCTGGTGTAGCCATTGCTGCCAACATCATCCAGGAAGGCTTCCACAAGAGCCGGAAGGTTATTGTGGTAGTGTCTAGACACTTTATTCAGAGCCGTTGGTGTATCTTTGAATATGAGATTGCTCAAACATGGCAGTTTCTGAGCAGCCGCTCTGGCATCATCTTCATTGTCCTTGAGAAGGTTGAGAAGTCCCTGCTGAGGCAGCAGGTGGAATTGTATCGCCTTCTTAGCAGAAACACCTACCTGGAATGGGAGGACAATCCTCTGGGGAGGCACATCTTCTGGAGAAGACTTAAAAATGCCCTATTGGATGGAAAAGCCTCGAATCCTGAGCAAACAGCAGAGGAAGAACAAGAAACGGCAACTTG GACCTGA
来自CCR2的蛋白质结构域的核酸序列
SEQ ID NO:47:
ATGGAAGACAATAATATGTTACCTCAGTTCATCCATGGCATACTATCAACATCTCATTCTCTATTTACACGAAGTATCCAAGAGCTTGATGAAGGGGCCACCACACCGTATGACTACGATGATGGTGAGCCTTGTCATAAAACCAGTGTGAAGCAAATTGGAGCTTGGATCCTGCCTCCACTCTACTCCCTGGTATTCATCTTTGGTTTTGTGGGCAACATGTTGGTCATTATAATTCTGATAGGCTGTAAAAAGCTGAAGAGCATGACTGATATCTATCTGCTCAACCTGGCCATCTCTGACCTGCTCTTCCTGCTCACATTACCATTCTGGGCTCACTATGCTGCAAATGAGTGGGTCTTTGGGAATATAATGTGTAAAGTATTCACAGGGCTCTATCACATTGGTTATTTTGGTGGAATCTTTTTCATTATCCTCCTGACAATTGATAGGTACTTGGCTATTGTTCATGCTGTGTTTGCTTTAAAAGCCAGGACAGTTACCTTTGGGGTGATAACAAGTGTAGTCACTTGGGTGGTGGCTGTGTTTGCCTCTCTACCAGGAATCATATTTACTAAATCCAAACAAGATGATCACCATTACACCTGTGGCCCTTATTTTACACAACTATGGAAGAATTTCCAAACAATAATGAGAAATATCTTGAGCCTGATCCTGCCTCTACTTGTCATGGTCATCTGCTACTCAGGAATTCTCCACACCCTGTTTCGCTGTAGGAATGAGAAGAAGAGGCACAGGGCTGTGAGGCTCATCTTTGCCATCATGATTGTCTACTTTCTCTTCTGGACTCCATACAATATTGTTCTCTTCTTGACCACCTTCCAGGAATCCTTGGGAATGAGTAACTGTGTGATTGACAAGCACTTAGACCAGGCCATGCAGGTGACAGAGACTCTTGGAATGACACACTGCTGCATTAATCCTGTCATTTATGCCTTTGTTGGAGAGAAGTTCCGAAGGTATCTCTCCATATTTTTCAGAAAGCACATTGCTAAACGTCTCTGCAAACAGTGCCCAGTTTTCTATAGGGAGACAGCAGATCGAGTGAGCTCTACATTCACTCCTTCCACTGGGGAGCAAGAGGTCTCGGTTGGGTTGTAA
来自ITGB2的蛋白质结构域的核酸序列
SEQ ID NO:48:
AATGCACGGCTGGTAGAGTGCAGTGGCCGTGGCCACTGCCAATGCAACAGGTGCATATGTGACGAAGGCTACCAGCCACCGATGTGTGAGGATTGTCCCAGCTGTGGCTCGCACTGCAGGGACAACCACACCTCTTGTGCCGAGTGCCTGAAGTTTGATAAGGGCCCTTTTGAGAAGAACTGTAGTGTTCAGTGTGCTGGTATGACGCTGCAGACTATCCCTTTGAAGAAAAAGCCCTGCAAGGAGAGGGACTCGGAAGGCTGTTGGATAACTTACACTTTGCAGCAGAAGGACGGAAGGAACATTTACAACATCCATGTGGAGGACAGTCTAGAGTGTGTGAAGGGCCCCAATGTGGCTGCCATCGTAGGGGGCACCGTGGTAGGTGTCGTACTGATTGGTGTCCTCCTCCTGGTCATCTGGAAGGCCCTGACCCACCTGACTGACCTCAGGGAGTACAGGCGCTTTGAGAAGGAGAAACTCAAGTCCCAATGGAACAATGACAACCCCCTCTTCAAGAGTGCTACGACAACGGTCATGAACCCCAAGTTTGCTGAAAGCTAG
来自CSF2RB的蛋白质结构域的核酸序列
SEQ ID NO:49:
ACTCAGAAGATGGCTTACTCATTCATTGAGCACACATTCCAGGTCCAGTACAAGAAGAAATCGGACAGCTGGGAGGACAGCAAGACAGAGAACCTAGATCGAGCCCATAGCATGGACCTCTCCCAGCTGGAGCCAGACACCTCATACTGCGCCAGGGTGAGGGTCAAGCCCATCTCTAACTACGATGGGATCTGGAGCAAGTGGAGCGAAGAGTACACTTGGAAGACTGACTGGGTGATGCCCACGCTGTGGATAGTCCTCATCCTGGTCTTTCTCATCCTCACCTTGCTCCTGATCCTTCGCTTTGGCTGTGTCTCTGTATACAGGACGTACAGGAAGTGGAAGGAAAAGATCCCCAACCCCAGCAAGAGCCTCCTGTTCCAGGATGGAGGTAAAGGTCTCTGGCCTCCTGGCAGCATGGCAGCCTTCGCCACTAAGAACCCCGCTCTCCAGGGGCCACAGAGCAGGCTTCTTGCTGAGCAACAGGGGGAGTCATATGCACATTTGGAAGACAACAACGTGTCACCTCTCACTATAGAGGACCCTAATATAATTCGAGTTCCACCATCCGGGCCTGATACAACCCCAGCTGCCTCATCCGAATCCACAGAGCAACTTCCCAATGTTCAAGTAGAGGGACCAACTCCTAACAGACCTAGGAAGCAATTACCCAGCTTTGACTTCAATGGGCCCTACCTGGGGCCTCCCCAATCCCACTCTCTGCCTGATCTCCCAGACCAGCTGGGTTCCCCCCAGGTGGGTGGGAGCCTGAAGCCAGCACTGCCAGGCTCCTTGGAGTACATGTGTCTGCCCCCTGGAGGTCAAGCGCAACTGGTTCCATTGTCCCAGGTGATGGGGCAGGGCCAGGCTATGGATGTGCAGTGTGGGTCCAGCCTGGAGACCTCAGGGAGCCCTTCTGTGGAGCCAAAGGAGAACCCTCCAGTTGAGCTGAGCATGGAGGAACAGGAGGCACGGGACAACCCAGTGACTCTGCCCATAAGCTCTGGGGGCCCTGAGGGCAGTATGATGGCCTCTGATTATGTCACTCCTGGAGATCCGGTGCTCACTCTGCCCACAGGGCCCCTGTCTACCTCTCTGGGCCCCTCTCTAGGGTTGCCCTCAGCCCAAAGCCCCCGTCTCTGTCTTAAGCTGCCCAGGGTCCCCTCTGGAAGCCCAGCTCTAGGGCCACCAGGGTTTGAGGACTATGTGGAGCTGCCTCCAAGTGTGAGCCAGGCTGCCAAGTCCCCTCCAGGCCATCCTGCTCCTCCTGTGGCAAGCAGCCCCACAGTGATCCCAGGAGAGCCCAGGGAGGAAGTGGGCCCAGCATCCCCACATCCCGAAGGCCTCCTTGTTCTTCAGCAGGTTGGGGACTACTGCTTCCTCCCTGGCCTGGGACCTGGCTCCCTCTCACCACACAGTAAGCCACCCTCTCCAAGTCTGTGTTCTGAGACTGAGGACCTAGTCCAGGACTTGTCTGTCAAAAAGTTTCCCTATCAGCCCATGCCCCAGGCGCCAGCCATTCAGTTTTTCAAGTCCCTAAAGCATCAGGACTACCTGTCCCTGC
CCCCTTGGGACAATAGCCAGTCTGGGAAGGTGTGCTGA
来自CCR1的蛋白质结构域的核酸序列
SEQ ID NO:50:
ACTCCATGCCAAAAGACTGCTGTAAGAGCCTTTGGGGCTGGACTCCTGCCCCCCCTGTATTCTCTAGTGTTCATCATTGGAGTGGTGGGCAATGTCCTAGTGATTCTGGTGCTCATGCAGCATAGGAGGCTTCAAAGCATGACCAGCATCTACCTGTTCAACCTGGCTGTCTCTGATCTGGTCTTCCTTTTCACTTTACCTTTCTGGATTGACTACAAGTTGAAAGACGACTGGATTTTTGGTGATGCCATGTGCAAGCTTCTCTCTGGGTTTTATTACCTGGGTTTATACAGTGAGATCTTCTTTATCATCCTGTTGACGATTGACAGATACCTGGCCATTGTCCATGCTGTGTTTGCCCTGAGGGCCCGAACTGTTACTTTTGGCATCATCACCAGTATTATCACCTGGGCCCTAGCCATCTTAGCTTCCATGCCTGCCTTATACTTTTTTAAGGCCCAGTGGGAGTTCACTCACCGTACCTGTAGCCCTCATTTCCCCTACAAGAGCCTGAAGCAGTGGAAGAGGTTTCAAGCTCTAAAGCTAAACCTTCTTGGACTAATTTTGCCTCTGTTAGTCATGATAATCTGCTATGCAGGGATCATCAGAATTCTGCTCAGAAGACCCAGTGAGAAGAAGGTCAAAGCCGTGCGTCTGATATTTGCTATTACTCTTCTATTCTTCCTCCTCTGGACCCCCTACAATCTGAGTGTATTTGTTTCTGCTTTCCAAGATGTTCTATTCACCAATCAGTGTGAGCAGAGTAAGCAACTGGACCTGGCCATGCAGGTGACTGAGGTGATTGCCTACACCCACTGTTGTGTCAACCCAATCATTTATGTTTTTGTGGGTGAACGGTTCTGGAAGTACCTTCGGCAGCTGTTTCAAAGGCATGTGGCTATACCACTGGCAAAATGGCTGCCCTTCCTCTCTGTGGACCAACTAGAAAGGACCAGTTCTATATCTCCATCCACAGGAGAACATGAGCTCTCTGCTGGCTTCTGA
来自CCR5的蛋白质结构域的核酸序列
SEQ ID NO:51:
ATGTCAGCACCCTGCCAAAAAATCAATGTGAAACAAATTGCGGCTCAGCTCCTGCCCCCACTCTACTCCCTGGTATTCATCTTTGGTTTTGTGGGTAACATGATGGTCTTCCTCATCTTGATAAGCTGCAAAAAGCTGAAGAGCGTGACTGATATCTACCTGCTCAACCTGGCCATCTCTGACCTGCTCTTCCTGCTCACACTACCATTCTGGGCTCACTATGCTGCAAATGAGTGGGTCTTTGGGAACATAATGTGTAAAGTATTCACAGGGCTCTATCACATTGGTTATTTTGGTGGAATCTTCTTCATTATCCTCCTGACAATTGATAGGTACTTGGCTATTGTCCATGCTGTGTTTGCTTTAAAAGTCAGAACGGTCAACTTTGGGGTGATAACAAGTGTAGTCACTTGGGCGGTGGCTGTGTTTGCCTCTCTCCCAGAAATAATCTTTACCAGATCTCAGAAAGAAGGTTTTCATTATACATGCAGTCCTCATTTTCCACACACTCAGTATCATTTCTGGAAGAGTTTCCAAACATTAAAGATGGTCATCTTGAGCCTGATCCTGCCTCTACTTGTCATGGTCATCTGCTACTCAGGAATTCTCCACACCCTGTTTCGCTGTAGGAATGAGAAGAAGAGGCACAGGGCTGTGAGGCTCATCTTTGCCATCATGATTGTCTACTTTCTCTTCTGGACTCCCTACAACATTGTCCTCCTCCTGACCACCTTCCAGGAATTCTTTGGACTGAATAACTGCAGTAGTTCTAATAGACTAGACCAGGCCATGCAGGCAACAGAGACTCTTGGAATGACACACTGCTGCCTAAACCCTGTCATCTATGCCTTTGTTGGAGAGAAGTTCCGGAGTTATCTCTCAGTGTTCTTCCGAAAACACATTGTCAAACGCTTTTGCAAACGGTGTTCAATTTTCCAGCAAGACAATCCTGATCGTGCAAGCTCAGTCTATACCCGATCCACAGGAGAACATGAAGTTTCTACTGGTTTATGA
来自CXCR4的蛋白质结构域的核酸序列
SEQ ID NO:52:
TTCCGGGATGAAAACGTCCATTTCAATAGGATCTTCCTGCCCACCATCTACTTCATCATCTTCTTGACTGGCATAGTCGGCAATGGATTGGTGATCCTGGTCATGGGTTACCAGAAGAAGCTAAGGAGCATGACGGACAAGTACCGGCTGCACCTGTCAGTGGCTGACCTCCTCTTTGTCATCACACTCCCCTTCTGGGCAGTTGATGCCATGGCTGACTGGTACTTTGGGAAATTTTTGTGTAAGGCTGTCCATATCATCTACACTGTCAACCTCTACAGCAGCGTTCTCATCCTGGCCTTCATCAGCCTGGACCGGTACCTCGCTATTGTCCACGCCACCAACAGTCAGAGGCCAAGGAAACTGCTGGCTGAAAAGGCAGTCTATGTGGGCGTCTGGATCCCAGCCCTCCTCCTGACTATACCTGACTTCATCTTTGCCGACGTCAGCCAGGGGGACATCAGTCAGGGGGATGACAGGTACATCTGTGACCGCCTTTACCCCGATAGCCTGTGGATGGTGGTGTTTCAATTCCAGCATATAATGGTGGGTCTCGTCCTGCCCGGCATCGTCATCCTCTCCTGTTACTGCATCATCATCTCTAAGCTGTCACACTCCAAGGGCCACCAGAAGCGCAAGGCCCTCAAGACGACAGTCATCCTCATCCTAGCTTTCTTTGCCTGCTGGCTGCCATATTATGTGGGGATCAGCATCGACTCCTTCATCCTTTTGGGGGTCATCAAGCAAGGATGTGACTTCGAGAGCATCGTGCACAAGTGGATCTCCATCACAGAGGCCCTCGCCTTCTTCCACTGTTGCCTGAACCCCATCCTCTATGCCTTCCTCGGGGCCAAGTTCAAAAGCTCTGCCCAGCATGCACTCAACTCCATGAGCAGAGGCTCCAGCCTCAAGATCCTTTCCAAAGGAAAGCGGGGTGGACACTCTTCCGTCT
CCACGGAGTCAGAATCCTCCAGTTTTCACTCCAGCTAA
来自SELPLG的蛋白质结构域的核酸序列
SEQ ID NO:53:
ATTGCCACCACTGACCCTACTGCCCCAGGTACAGGAGGGACAGCTGTTGGGATGCTGAGCACAGACTCTGCCACACAGTGGAGTCTAACCTCAGTAGAGACCGTCCAACCAGCATCCACAGAGGTAGAGACCTCGCAGCCAGCACCCATGGAGGCAGAGACCTCGCAGCCAGCACCCATGGAGGCAGAGACCTCGCAGCCAGCACCCATGGAGGCAGACACCTCAAAGCCAGCACCCACGGAGGCAGAGACCTCAAAGCCAGCACCCACGGAGGCAGAGACCTCTCAGCCAGCACCCAACGAGGCAGAGACCTCAAAACCAGCACCCACGGAGGCAGAGACCTCAAAACCAGCACCCACGGAGGCAGAGACCACCCAGCTTCCCAGGATTCAGGCTGTAAAAACTCTGTTTACAACGTCTGCAGCCACCGAAGTCCCTTCCACAGAACCTACCACCATGGAGACGGCGTCCACAGAGTCTAACGAGTCTACCATCTTCCTTGGGCCATCCGTGACTCACTTACCTGACAGCGGCCTGAAGAAAGGGCTGATTGTGACCCCTGGGAATTCACCTGCCCCAACCCTGCCAGGGAGTTCAGATCTCATCCCGGTGAAGCAATGTCTGCTGATTATCCTCATCTTGGCTTCTCTGGCCACCATCTTCCTCGTGTGCACAGTGGTGCTGGCGGTCCGTCTGTCCCGTAAGACCCACATGTACCCAGTGCGGAACTACTCCCCCACGGAGATGATCTGCATCTCGTCCCTGCTACCTGAGGGGGGAGACGGGGCCCCTGTCACAGCCAATGGGGGCCTGCCCAAGGTCCAGGACCTGAAGACAGAGCCCAGTGGGGACCGGGATGGGGACGACCTCACCCTGCACAGCTTCCTCCCTTAG
EVIR-N的氨基酸序列
SEQ ID NO:54:
MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGDIVLTQTPSSLPVSVGEKVTMTCKSSQTLLYSNNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLISWAFTRKSGVPDRFTGSGSGTDFTLTIGSVKAEDLAVYYCQQYSNYPWTFGGGTRLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGPEVVKTGASVKISCKASGYSFTGYFINWVKKNSGKSPEWIGHISSSYATSTYNQKFKNKAAFTVDTSSSTAFMQLNSLTSEDSAVYYCVRSGNYEEYAMDYWGQGTSVTVSSTGLLGVSLGGAKEACPTGLYTHSGECCKACNLGEGVAQPCGANQTVCEPCLDSVTFSDVVSATEPCKPCTECVGLQSMSAPCVEADDAVCRCAYGYYQDETTGRCEACRVCEAGSGLVFSCQDKQNTVCEECPDGTYSDEANHVDPCLPCTVCEDTERQLRECTRWADAECEEIPGRWITRSTPPEGSDSTAPSTQEPEAPPEQDLIASTVAGWTTVMGSSQPVVTRGTTDNLIPVYCSILAAVWGLVAYIAFKRWNRGIL
EVIR-G的氨基酸序列
SEQ ID NO:55:
MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGDIVLTQTPSSLPVSVGEKVTMTCKSSQTLLYSNNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLISWAFTRKSGVPDRFTGSGSGTDFTLTIGSVKAEDLAVYYCQQYSNYPWTFGGGTRLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGPEVVKTGASVKISCKASGYSFTGYFINWVKKNSGKSPEWIGHISSSYATSTYNQKFKNKAAFTVDTSSSTAFMQLNSLTSEDSAVYYCVRSGNYEEYAMDYWGQGTSVTVSSTGHENSELLIPKATHNDSGSYFCRGLIGHNNKSSASFRISLGDPGSPSMFPPWHQITFCLLIGLLFAIDTVLYFSVRRGLQSPVADYEEPKIQWSKEPQDKTRVD
EVIR-F的氨基酸序列
SEQ ID NO:56:
MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGDIVLTQTPSSLPVSVGEKVTMTCKSSQTLLYSNNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLISWAFTRKSGVPDRFTGSGSGTDFTLTIGSVKAEDLAVYYCQQYSNYPWTFGGGTRLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGPEVVKTGASVKISCKASGYSFTGYFINWVKKNSGKSPEWIGHISSSYATSTYNQKFKNKAAFTVDTSSSTAFMQLNSLTSEDSAVYYCVRSGNYEEYAMDYWGQGTSVTVSSTGPGPFPFIQDNISFYATIGLCLPFIVVLIVLICHKYKKQFRYESQLQMIQVTGPLDNEYFYVD
FRDYEYDLKWEFPRENLEFGKVLGSGAFGRVMNATAYGISKTGVSIQVAVKMLKEKADSCEKEALMSE
LKMMTHLGHHDNIVNLLGACTLSGPVYLIFEYCCYGDLLNYLRSKREKFHRTWTEIFKEHNFSFYPTFQAHSNSSMPGSREVQLHPPLDQLSGFNGNLIHSEDEIEYENQKRLAEEEEEDLNVLTFEDLLCFAYQV
AKGMEFLEFKSCVHRDLAARNVLVTHGKVVKICDFGLARDILSDSSYWRGNARLPVKWMAPESLFEG
IYTIKSDVWSYGILLWEIFSLGVNPYPGIPVDANFYKLIQSGFKMEQPFYATEGIYFVMQSCWAFDSRKRPSFPNLTSFLGCQLAEAEEAMYQNMGGNVPEHPSIYQNRRPLSREAGSEPPSPQAQVKIHGERS
EVIR-T的氨基酸序列
SEQ ID NO:57:
MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGDIVLTQTPSSLPVSVGEKVTMTCKSSQTLLYSNNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLISWAFTRKSGVPDRFTGSGSGTDFTLTIGSVKAEDLAVYYCQQYSNYPWTFGGGTRLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGPEVVKTGASVKISCKASGYSFTGYFINWVKKNSGKSPEWIGHISSSYATSTYNQKFKNKAAFTVDTSSSTAFMQLNSLTSEDSAVYYCVRSGNYEEYAMDYWGQGTSVTVSSTGQLYSLSTLDCSFNRIETSKGILQHFPKSLAFFNLTNNSVACICEHQKFLQWVKEQKQFLVNVEQMTCATPVEMNTSLVLDFNNSTCYMYKTIISVSVVSVIWSTVAFLIYHFYFHLILIAGCKKYSRGESIYDAFVIYSSQNEDWVRNELVKNLEEGVPRFHLCLHYRDFIPGVAIAANIIQEGFHKSRKVIVWSRHFIQSRWCIFEYEIAQTWQFLSSRSGIIFIVLEKVEKSLLRQQVELYRLLSRNTYLEWEDNPLGRHIFWRRLKNALLDGKASNPEQTAEEEQETATWT
EVIR-C2的氨基酸序列
SEQ ID NO:58:
MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGDIVLTQTPSSLPVSVGEKVTMTCKSSQTLLYSNNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLISWAFTRKSGVPDRFTGSGSGTDFTLTIGSVKAEDLAVYYCQQYSNYPWTFGGGTRLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGPEVVKTGASVKISCKASGYSFTGYFINWVKKNSGKSPEWIGHISSSYATSTYNQKFKNKAAFTVDTSSSTAFMQLNSLTSEDSAVYYCVRSGNYEEYAMDYWGQGTSVTVSSTGMEDNNMLPQFIHGILSTSHSLFTRSIQELDEGATTPYDYDDGEPCHKTSVKQIGAWILPPLYSLVFIFGFVGNMLVIIILIGCKKLKSMTDIYLLNLAISDLLFLLTLPFWAHYAANEWVFGNIMCKVFTGLYHIGYFGGIFFIILLTIDRYLAIVHAVFALKARTVTFGVITSVVTWVVAVFASLPGIIFTKSKQDDHHYTCGPYFTQLWKNFQTIMRNILSLILPLLVMVICYSGILHTLFRCRNEKKRHRAVRLIFAIMIVYFLFWTPYNIVLFLTTFQESLGMSNCVIDKHLDQAMQVTETLGMTHCCINPVIYAFVGEKFRRYLSIFFRKHIAKRLCKQCPVFYRETADRVSSTFTPSTGEQEVSVGL
EVIR-I的氨基酸序列
SEQ ID NO:59:
MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGDIVLTQTPSSLPVSVGEKVTMTCKSSQTLLYSNNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLISWAFTRKSGVPDRFTGSGSGTDFTLTIGSVKAEDLAVYYCQQYSNYPWTFGGGTRLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGPEVVKTGASVKISCKASGYSFTGYFINWVKKNSGKSPEWIGHISSSYATSTYNQKFKNKAAFTVDTSSSTAFMQLNSLTSEDSAVYYCVRSGNYEEYAMDYWGQGTSVTVSSTGNARLVECSGRGHCQCNRCICDEGYQPPMCEDCPSCGSHCRDNHTSCAECLKFDKGPFEKNCSVQCAGMTLQTIPLKKKPCKERDSEGCWITYTLQQKDGRNIYNIHVEDSLECVKGPNVAAIVGGTWGVVLIGVLLLVIWKALTHLTDLREYRRFEKEKLKSQWNNDNPLFKSATTTVMNPKFAES
EVIR-C的氨基酸序列
SEQ ID NO:60:
MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGDIVLTQTPSSLPVSVGEKVTMTCKSSQTLLYSNNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLISWAFTRKSGVPDRFTGSGSGTDFTLTIGSVKAEDLAVYYCQQYSNYPWTFGGGTRLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGPEVVKTGASVKISCKASGYSFTGYFINWVKKNSGKSPEWIGHISSSYATSTYNQKFKNKAAFTVDTSSSTAFMQLNSLTSEDSAVYYCVRSGNYEEYAMDYWGQGTSVTVSSTGTQKMAYSFIEHTFQVQYKKKSDSWEDSKTENLDRAHSMDLSQLEPDTSYCARVRVKPISNYDGIWSKWSEEYTWKTDWVMPTLWIVLILVFLILTLLLILRFGCVSVYRTYRKWKEKIPNPSKSLLFQDGGKGLWPPGSMAAFATKNPALQGPQSRLLAEQQGESYAHLEDNNVSPLTIEDPNIIRVPPSGPDTTPAA
SSESTEQLPNVQVEGPTPNRPRKQLPSFDFNGPYLGPPQSHSLPDLPDQLGSPQVGGSLKPALPGSLEYMCLPPGGQAQLVPLSQVMGQGQAMDVQCGSSLETSGSPSVEPKENPPVELSMEEQEARDNPVTLPISSGGPEGSMMASDYVTPGDPVLTLPTGPLSTSLGPSLGLPSAQSPRLCLKLPRVPSGSPALGPPGFEDYVELPPSVSQAAKSPPGHPAPPVASSPTVIPGEPREEVGPASPHPEGLLVLQQVGDYCFLPGLGPGSLS
PHSKPPSPSLCSETEDLVQDLSVKKFPYQPMPQAPAIQFFKSLKHQDYLSLPPWDNSQSGKVC
EVIR-C1的氨基酸序列
SEQ ID NO:61:
MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGDIVLTQTPSSLPVSVGEKVTMTCKSSQTLLYSNNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLISWAFTRKSGVPDRFTGSGSGTDFTLTIGSVKAEDLAVYYCQQYSNYPWTFGGGTRLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGPEVVKTGASVKISCKASGYSFTGYFINWVKKNSGKSPEWIGHISSSYATSTYNQKFKNKAAFTVDTSSSTAFMQLNSLTSEDSAVYYCVRSGNYEEYAMDYWGQGTSVTVSSTGTPCQKTAVRAFGAGLLPPLYSLVFIIGWGNVLVILVLMQHRRLQSMTSIYLFNLAVSDLVFLFTLPFWIDYKLKDDWIFGDAMCKLLSGFYYLGLYSEIFFIILLTIDRYLAIVHAVFALRARTVTFGIITSIITWALAILASMPALYFFKAQWEFTHRTCSPHFPYKSLKQWKRFQALKLNLLGLILPLLVMIICYAGIIRILLRRPSEKKVKAVRLIFAITLLFFLLWTPYNLSVFVSAFQDVLFTNQCEQSKQLDLAMQVTEVIAYTHCCVNPIIYVFVGERFWKYLRQLFQRHVAIPLAKWLPFLSVDQLERTSSISPSTGEHELSAGF
EVIR-C5的氨基酸序列
SEQ ID NO:62:
MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGDIVLTQTPSSLPVSVGEKVTMTCKSSQTLLYSNNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLISWAFTRKSGVPDRFTGSGSGTDFTLTIGSVKAEDLAVYYCQQYSNYPWTFGGGTRLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGPEVVKTGASVKISCKASGYSFTGYFINWVKKNSGKSPEWIGHISSSYATSTYNQKFKNKAAFTVDTSSSTAFMQLNSLTSEDSAVYYCVRSGNYEEYAMDYWGQGTSVTVSSTGMSAPCQKINVKQIAAQLLPPLYSLVFIFGFVGNMMVFLILISCKKLKSVTDIYLLNLAISDLLFLLTLPFWAHYAANEWVFGNIMCKVFTGLYHIGYFGGIFFIILLTIDRYLAIVHAVFALKVRTVNFGVITSVVTWAVAVFASLPEIIFTRSQKEGFHYTCSPHFPHTQYHFWKSFQTLKMVILSLILPLLVMVICYSGILHTLFRCRNEKKRHRAVRLIFAIMIVYFLFWTPYNIVLLLTTFQEFFGLNNCSSSNRLDQAMQATETLGMTHCCLNPVIYAFVGEKFRSYLSVFFRKHIVKRFCKRCSIFQQDNPDRASSVYTRSTGEHEVSTGL
EVIR-CX的氨基酸序列
SEQ ID NO:63:
MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGDIVLTQTPSSLPVSVGEKVTMTCKSSQTLLYSNNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLISWAFTRKSGVPDRFTGSGSGTDFTLTIGSVKAEDLAVYYCQQYSNYPWTFGGGTRLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGPEVVKTGASVKISCKASGYSFTGYFINWVKKNSGKSPEWIGHISSSYATSTYNQKFKNKAAFTVDTSSSTAFMQLNSLTSEDSAVYYCVRSGNYEEYAMDYWGQGTSVTVSSTGFRDENVHFNRIFLPTIYFIIFLTGIVGNGLVILVMGYQKKLRSMTDKYRLHLSVADLLFVITLPFWAVDAMADWYFGKFLCKAVHIIYTVNLYSSVLILAFISLDRYLAIVHATNSQRPRKLLAEKAVYVGVWIPALLLTIPDFIFADVSQGDISQGDDRYICDRLYPDSLWMWFQFQHIMVGLVLPGIVILSCYCIIISKLSHSKGHQKRKALKTTVILILAFFACWLPYYVGISIDSFILLGVIKQGCDFESIVHKWISITEALAFFHCCLNPILYAFLGAKFKSSAQHALNSMSRGSSLKILSKGKRGGHSSVSTESESSSFHSS
EVIR-S的氨基酸序列
SEQ ID NO:64:
MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGDIVLTQTPSSLPVSVGEKVTMTCKSSQTLLYSNNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLISWAFTRKSGVPDRFTGSGSGTDFTLTIGSVKAEDLAVYYCQQYSNYPWTFGGGTRLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGPEVVKTGASVKISCKASGYSFTGYFINWVKKNSGKSPEWIGHISSSYATSTYNQKFKNKAAFTVDTSSSTAFMQLNSLTSEDSAVYYCVRSGNYEEYAMDYWGQGTSVTVSSTGIATTDPTAPGTGGTAVGMLSTDSATQWSLTSVETVQPASTEVETSQPAPMEAETSQPAPMEAETSQPAPMEADTSKPAPTEAETSKPAPTEAETSQPAPNEAETSKPAPTEAETSKPAPTEAETTQLPRIQAVKTLFTTSAATEVPSTEPTTMETASTESNESTIFLGPSVTHLPDSGLKKGLIVTPGNSPAPTLPGSSDLIPVKQCLLIILILASLATIFLVCTWLAVRLSRKTHMYPVRNYSPTEMICISSLLPEGGDGAPVTANGGLPKVQDLKTEPSGDRDGDDLTLHSFLP
EVIR-N的核酸序列
SEQ ID NO:65:
ATGGATTTTCAGGTCCAGATTTTCTCCTTCCTCCTCATTTCAGCCAGCGTCATTATGTCTCGGGGGGATATTGTCCTCACACAGACTCCCAGCTCCCTGCCTGTGTCCGTCGGAGAGAAAGTGACCATGACATGCAAGTCTAGTCAGACACTGCTCTACTCTAACAATCAGAAGAACTACCTCGCATGGTATCAGCAGAAACCAGGACAGAGCCCCAAGCTGCTCATCTCCTGGGCTTTCACCCGGAAATCCGGGGTGCCTGACCGCTTCACAGGTAGCGGCTCCGGAACTGATTTTACTCTGACCATTGGATCTGTGAAGGCAGAGGACCTCGCCGTCTACTATTGCCAGCAGTACAGTAATTATCCATGGACTTTTGGCGGAGGGACCAGGCTGGAAATCAAGAGAGGTGGAGGAGGGTCCGGTGGAGGAGGGTCTGGTGGAGGAGGGAGTGGTGGAGGAGGGTCAGAGGTGCAGCTGCAGCAGTCTGGCCCCGAAGTGGTCAAAACTGGAGCTTCAGTCAAAATCAGCTGTAAGGCATCTGGGTACAGCTTCACCGGCTACTTCATCAACTGGGTGAAGAAAAATTCAGGGAAGAGCCCTGAGTGGATCGGCCACATTTCAAGCTCCTACGCCACAAGCACTTACAACCAGAAGTTCAAAAATAAGGCCGCTTTTACCGTGGACACATCTAGTTCAACCGCCTTCATGCAGCTGAACTCCCTCACATCTGAAGATAGTGCTGTGTACTATTGTGTCAGGAGCGGCAACTACGAAGAATATGCTATGGATTACTGGGGGCAGGGGACCTCCGTGACTGTCTCAAGCACCGGTCTTCTGGGGGTGTCCCTTGGAGGTGCCAAGGAGGCATGCCCCACAGGCCTGTACACACACAGCGGTGAGTGCTGCAAAGCCTGCAACCTGGGCGAGGGTGTGGCCCAGCCTTGTGGAGCCAACCAGACCGTGTGTGAGCCCTGCCTGGACAGCGTGACGTTCTCCGACGTGGTGAGCGCGACCGAGCCGTGCAAGCCGTGCACCGAGTGCGTGGGGCTCCAGAGCATGTCGGCGCCGTGCGTGGAGGCCGACGACGCCGTGTGCCGCTGCGCCTACGGCTACTACCAGGATGAGACGACTGGGCGCTGCGAGGCGTGCCGCGTGTGCGAGGCGGGCTCGGGCCTCGTGTTCTCCTGCCAGGACAAGCAGAACACCGTGTGCGAGGAGTGCCCCGACGGCACGTATTCCGACGAGGCCAACCACGTGGACCCGTGCCTGCCCTGCACCGTGTGCGAGGACACCGAGCGCCAGCTCCGCGAGTGCACACGCTGGGCCGACGCCGAGTGCGAGGAGATCCCTGGCCGTTGGATTACACGGTCCACACCCCCAGAGGGCTCGGACAGCACAGCCCCCAGCACCCAGGAGCCTGAGGCACCTCCAGAACAAGACCTCATAGCCAGCACGGTGGCAGGTGTGGTGACCACAGTGATGGGCAGCTCCCAGCCCGTGGTGACCCGAGGCACCACCGACAACCTCATCCCTGTCTATTGCTCCATCCTGGCTGCTGTGGTTGTGGGCCTTGTGGCCTACATAGCCTTCAAGAGGTGGAACAGGGGGATCCTCTAG
EVIR-G的核酸序列
SEQ ID NO:66:
ATGGATTTTCAGGTCCAGATTTTCTCCTTCCTCCTCATTTCAGCCAGCGTCATTATGTCTCGGGGGGATATTGTCCTCACACAGACTCCCAGCTCCCTGCCTGTGTCCGTCGGAGAGAAAGTGACCATGACATGCAAGTCTAGTCAGACACTGCTCTACTCTAACAATCAGAAGAACTACCTCGCATGGTATCAGCAGAAACCAGGACAGAGCCCCAAGCTGCTCATCTCCTGGGCTTTCACCCGGAAATCCGGGGTGCCTGACCGCTTCACAGGTAGCGGCTCCGGAACTGATTTTACTCTGACCATTGGATCTGTGAAGGCAGAGGACCTCGCCGTCTACTATTGCCAGCAGTACAGTAATTATCCATGGACTTTTGGCGGAGGGACCAGGCTGGAAATCAAGAGAGGTGGAGGAGGGTCCGGTGGAGGAGGGTCTGGTGGAGGAGGGAGTGGTGGAGGAGGGTCAGAGGTGCAGCTGCAGCAGTCTGGCCCCGAAGTGGTCAAAACTGGAGCTTCAGTCAAAATCAGCTGTAAGGCATCTGGGTACAGCTTCACCGGCTACTTCATCAACTGGGTGAAGAAAAATTCAGGGAAGAGCCCTGAGTGGATCGGCCACATTTCAAGCTCCTACGCCACAAGCACTTACAACCAGAAGTTCAAAAATAAGGCCGCTTTTACCGTGGACACATCTAGTTCAACCGCCTTCATGCAGCTGAACTCCCTCACATCTGAAGATAGTGCTGTGTACTATTGTGTCAGGAGCGGCAACTACGAAGAATATGCTATGGATTACTGGGGGCAGGGGACCTCCGTGACTGTCTCAAGCACCGGTCACGAGAACTCCGAACTGCTGATTCCTAAGGCAACTCACAACGACTCCGGCTCCTATTTCTGTAGAGGGCTGATTGGACATAACAACAAGAGCTCCGCCTCATTCAGGATTAGCCTGGGCGACCCAGGGTCTCCCAGTATGTTCCCCCCTTGGCACCAGATCACCTTTTGCCTGCTGATTGGACTGCTGTTCGCTATCGATACAGTGCTGTACTTTTCTGTCCGGAGAGGCCTGCAGTCACCCGTGGCAGATTACGAAGAACCCAAGATTCAGTGGAGCAAGGAGCCCCAGGATAAGACGCGTGTCGACTGA
EVIR-F的核酸序列
SEQ ID NO:67:
ATGGATTTTCAGGTCCAGATTTTCTCCTTCCTCCTCATTTCAGCCAGCGTCATTATGTCTCGGGGGGATATTGTCCTCACACAGACTCCCAGCTCCCTGCCTGTGTCCGTCGGAGAGAAAGTGACCATGACATGCAAGTCTAGTCAGACACTGCTCTACTCTAACAATCAGAAGAACTACCTCGCATGGTATCAGCAGAAACCAGGACAGAGCCCCAAGCTGCTCATCTCCTGGGCTTTCACCCGGAAATCCGGGGTGCCTGACCGCTTCACAGGTAGCGGCTCCGGAACTGATTTTACTCTGACCATTGGATCTGTGAAGGCAGAGGACCTCGCCGTCTACTATTGCCAGCAGTACAGTAATTATCCATGGACTTTTGGCGGAGGGACCAGGCTGGAAATCAAGAGAGGTGGAGGAGGGTCCGGTGGAGGAGGGTCTGGTGGAGGAGGGAGTGGTGGAGGAGGGTCAGAGGTGCAGCTGCAGCAGTCTGGCCCCGAAGTGGTCAAAACTGGAGCTTCAGTCAAAATCAGCTGTAAGGCATCTGGGTACAGCTTCACCGGCTACTTCATCAACTGGGTGAAGAAAAATTCAGGGAAGAGCCCTGAGTGGATCGGCCACATTTCAAGCTCCTACGCCACAAGCACTTACAACCAGAAGTTCAAAAATAAGGCCGCTTTTACCGTGGACACATCTAGTTCAACCGCCTTCATGCAGCTGAACTCCCTCACATCTGAAGATAGTGCTGTGTACTATTGTGTCAGGAGCGGCAACTACGAAGAATATGCTATGGATTACTGGGGGCAGGGGACCTCCGTGACTGTCTCAAGCACCGGTCCAGGCCCCTTCCCTTTCATCCAAGACAACATCTCCTTCTATGCGACCATTGGGCTCTGTCTCCCCTTCATTGTTGTTCTCATTGTGTTGATCTGCCACAAATACAAAAAGCAATTTAGGTACGAGAGTCAGCTGCAGATGATCCAGGTGACTGGCCCCCTGGATAACGAGTACTTCTACGTTGACTTCAGGGACTATGAATATGACCTTAAGTGGGAGTTCCCGAGAGAGAACTTAGAGTTTGGGAAGGTCCTGGGGTCTGGCGCTTTCGGGAGGGTGATGAACGCCACGGCCTATGGCATTAGTAAAACGGGAGTCTCAATTCAGGTGGCGGTGAAGATGCTAAAAGAGAAAGCTGACAGCTGTGAAAAAGAAGCTCTCATGTCGGAGCTCAAAATGATGACCCACCTGGGACACCATGACAACATCGTGAATCTGCTGGGGGCATGCACACTGTCAGGGCCAGTGTACTTGATTTTTGAATATTGTTGCTATGGTGACCTCCTCAACTACCTAAGAAGTAAAAGAGAGAAGTTTCACAGGACATGGACAGAGATTTTTAAGGAACATAATTTCAGTTTTTACCCTACTTTCCAGGCACATTCAAATTCCAGCATGCCTGGTTCACGAGAAGTTCAGTTACACCCGCCCTTGGATCAGCTCTCAGGGTTCAATGGGAATTTAATTCATTCTGAAGATGAGATTGAATATGAAAACCAGAAGAGGCTGGCAGAAGAAGAGGAGGAAGATTTGAACGTGCTGACGTTTGAAGACCTCCTTTGCTTTGCGTACCAAGTGGCCAAAGGCATGGAATTCCTGGAGTTCAAGTCGTGTGTCCACAGAGACCTGGCAGCCAGGAATGTGTTGGTCACCCACGGGAAGGTGGTGAAGATCTGTGACTTTGGACTGGCCCGAGACATCCTGAGCGACTCCAGCTACGTCGTCAGGGGCAACGCACGGCTGCCGGTGAAGTGGATGGCACCTGAGAGCTTATTTGAAGGGATCTACACAATCAAGAGTGACGTCTGGTCCTACGGCATCCTTCTCTGGGAGATATTTTCACTGGGTGTGAACCCTTACCCTGGCATTCCTGTCGACGCTAACTTCTATAAACTGATTCAGAGTGGATTTAAAATGGAGCAGCCATTCTATGCCACAGAAGGGATATACTTTGTAATGCAATCCTGCTGGGCTTTTGACTCAAGGAAGCGGCCATCCTTCCCCAACCTGACTTCATTTTTAGGATGTCAGCTGGCAGAGGCAGAAGAAGCGATGTATCAGAACATGGGTGGCAACGTCCCAGAACATCCATCCATCTACCAAAACAGGCGGCCCCTCAGCAGAGAGGCAGGCTCAGAGCCGCCATCGCCACAGGCCCAGGTGAAGATTCACGGAGAAAGAAGTTAG
EVIR-T的核酸序列
SEQ ID NO:68:
ATGGATTTTCAGGTCCAGATTTTCTCCTTCCTCCTCATTTCAGCCAGCGTCATTATGTCTCGGGGGGATATTGTCCTCACACAGACTCCCAGCTCCCTGCCTGTGTCCGTCGGAGAGAAAGTGACCATGACATGCAAGTCTAGTCAGACACTGCTCTACTCTAACAATCAGAAGAACTACCTCGCATGGTATCAGCAGAAACCAGGACAGAGCCCCAAGCTGCTCATCTCCTGGGCTTTCACCCGGAAATCCGGGGTGCCTGACCGCTTCACAGGTAGCGGCTCCGGAACTGATTTTACTCTGACCATTGGATCTGTGAAGGCAGAGGACCTCGCCGTCTACTATTGCCAGCAGTACAGTAATTATCCATGGACTTTTGGCGGAGGGACCAGGCTGGAAATCAAGAGAGGTGGAGGAGGGTCCGGTGGAGGAGGGTCTGGTGGAGGAGGGAGTGGTGGAGGAGGGTCAGAGGTGCAGCTGCAGCAGTCTGGCCCCGAAGTGGTCAAAACTGGAGCTTCAGTCAAAATCAGCTGTAAGGCATCTGGGTACAGCTTCACCGGCTACTTCATCAACTGGGTGAAGAAAAATTCAGGGAAGAGCCCTGAGTGGATCGGCCACATTTCAAGCTCCTACGCCACAAGCACTTACAACCAGAAGTTCAAAAATAAGGCCGCTTTTACCGTGGACACATCTAGTTCAACCGCCTTCATGCAGCTGAACTCCCTCACATCTGAAGATAGTGCTGTGTACTATTGTGTCAGGAGCGGCAACTACGAAGAATATGCTATGGATTACTGGGGGCAGGGGACCTCCGTGACTGTCTCAAGCACCGGTCAGCTGTATTCCCTCAGCACTCTTGATTGCAGTTTCAATCGCATAGAGACATCTAAAGGAATACTGCAACATTTTCCAAAGAGTCTAGCCTTCTTCAATCTTACTAACAATTCTGTTGCTTGTATATGTGAACATCAGAAATTCCTGCAGTGGGTCAAGGAACAGAAGCAGTTCTTGGTGAATGTTGAACAAATGACATGTGCAACACCTGTAGAGATGAATACCTCCTTAGTGTTGGATTTTAATAATTCTACCTGTTATATGTACAAGACAATCATCAGTGTGTCAGTGGTCAGTGTGATTGTGGTATCCACTGTAGCATTTCTGATATACCACTTCTATTTTCACCTGATACTTATTGCTGGCTGTAAAAAGTACAGCAGAGGAGAAAGCATCTATGATGCATTTGTGATCTACTCGAGTCAGAATGAGGACTGGGTGAGAAATGAGCTGGTAAAGAATTTAGAAGAAGGAGTGCCCCGCTTTCACCTCTGCCTTCACTACAGAGACTTTATTCCTGGTGTAGCCATTGCTGCCAACATCATCCAGGAAGGCTTCCACAAGAGCCGGAAGGTTATTGTGGTAGTGTCTAGACACTTTATTCAGAGCCGTTGGTGTATCTTTGAATATGAGATTGCTCAAACATGGCAGTTTCTGAGCAGCCGCTCTGGCATCATCTTCATTGTCCTTGAGAAGGTTGAGAAGTCCCTGCTGAGGCAGCAGGTGGAATTGTATCGCCTTCTTAGCAGAAACACCTACCTGGAATGGGAGGACAATCCTCTGGGGAGGCACATCTTCTGGAGAAGACTTAAAAATGCCCTATTGGATGGAAAAGCCTCGAATCCTGAGCAAACAGCAGAGGAAGAACAAGAAACGGCAACTTGGACCTGA
EVIR-C2的核酸序列
SEQ ID NO:69:
ATGGATTTTCAGGTCCAGATTTTCTCCTTCCTCCTCATTTCAGCCAGCGTCATTATGTCTCGGGGGGATATTGTCCTCACACAGACTCCCAGCTCCCTGCCTGTGTCCGTCGGAGAGAAAGTGACCATGACATGCAAGTCTAGTCAGACACTGCTCTACTCTAACAATCAGAAGAACTACCTCGCATGGTATCAGCAGAAACCAGGACAGAGCCCCAAGCTGCTCATCTCCTGGGCTTTCACCCGGAAATCCGGGGTGCCTGACCGCTTCACAGGTAGCGGCTCCGGAACTGATTTTACTCTGACCATTGGATCTGTGAAGGCAGAGGACCTCGCCGTCTACTATTGCCAGCAGTACAGTAATTATCCATGGACTTTTGGCGGAGGGACCAGGCTGGAAATCAAGAGAGGTGGAGGAGGGTCCGGTGGAGGAGGGTCTGGTGGAGGAGGGAGTGGTGGAGGAGGGTCAGAGGTGCAGCTGCAGCAGTCTGGCCCCGAAGTGGTCAAAACTGGAGCTTCAGTCAAAATCAGCTGTAAGGCATCTGGGTACAGCTTCACCGGCTACTTCATCAACTGGGTGAAGAAAAATTCAGGGAAGAGCCCTGAGTGGATCGGCCACATTTCAAGCTCCTACGCCACAAGCACTTACAACCAGAAGTTCAAAAATAAGGCCGCTTTTACCGTGGACACATCTAGTTCAACCGCCTTCATGCAGCTGAACTCCCTCACATCTGAAGATAGTGCTGTGTACTATTGTGTCAGGAGCGGCAACTACGAAGAATATGCTATGGATTACTGGGGGCAGGGGACCTCCGTGACTGTCTCAAGCACCGGTATGGAAGACAATAATATGTTACCTCAGTTCATCCATGGCATACTATCAACATCTCATTCTCTATTTACACGAAGTATCCAAGAGCTTGATGAAGGGGCCACCACACCGTATGACTACGATGATGGTGAGCCTTGTCATAAAACCAGTGTGAAGCAAATTGGAGCTTGGATCCTGCCTCCACTCTACTCCCTGGTATTCATCTTTGGTTTTGTGGGCAACATGTTGGTCATTATAATTCTGATAGGCTGTAAAAAGCTGAAGAGCATGACTGATATCTATCTGCTCAACCTGGCCATCTCTGACCTGCTCTTCCTGCTCACATTACCATTCTGGGCTCACTATGCTGCAAATGAGTGGGTCTTTGGGAATATAATGTGTAAAGTATTCACAGGGCTCTATCACATTGGTTATTTTGGTGGAATCTTTTTCATTATCCTCCTGACAATTGATAGGTACTTGGCTATTGTTCATGCTGTGTTTGCTTTAAAAGCCAGGACAGTTACCTTTGGGGTGATAACAAGTGTAGTCACTTGGGTGGTGGCTGTGTTTGCCTCTCTACCAGGAATCATATTTACTAAATCCAAACAAGATGATCACCATTACACCTGTGGCCCTTATTTTACACAACTATGGAAGAATTTCCAAACAATAATGAGAAATATCTTGAGCCTGATCCTGCCTCTACTTGTCATGGTCATCTGCTACTCAGGAATTCTCCACACCCTGTTTCGCTGTAGGAATGAGAAGAAGAGGCACAGGGCTGTGAGGCTCATCTTTGCCATCATGATTGTCTACTTTCTCTTCTGGACTCCATACAATATTGTTCTCTTCTTGACCACCTTCCAGGAATCCTTGGGAATGAGTAACTGTGTGATTGACAAGCACTTAGACCAGGCCATGCAGGTGACAGAGACTCTTGGAATGACACACTGCTGCATTAATCCTGTCATTTATGCCTTTGTTGGAGAGAAGTTCCGAAGGTATCTCTCCATATTTTTCAGAAAGCACATTGCTAAACGTCTCTGCAAACAGTGCCCAGTTTTCTATAGGGAGACAGCAGATCGAGTGAGCTCTACATTCACTCCTTCCACTGGGGAGCAAGAGGTCTCGGTTGGGTTGTAA
EVIR-I的核酸序列
SEQ ID NO:70:
ATGGATTTTCAGGTCCAGATTTTCTCCTTCCTCCTCATTTCAGCCAGCGTCATTATGTCTCGGGGGGATATTGTCCTCACACAGACTCCCAGCTCCCTGCCTGTGTCCGTCGGAGAGAAAGTGACCATGACATGCAAGTCTAGTCAGACACTGCTCTACTCTAACAATCAGAAGAACTACCTCGCATGGTATCAGCAGAAACCAGGACAGAGCCCCAAGCTGCTCATCTCCTGGGCTTTCACCCGGAAATCCGGGGTGCCTGACCGCTTCACAGGTAGCGGCTCCGGAACTGATTTTACTCTGACCATTGGATCTGTGAAGGCAGAGGACCTCGCCGTCTACTATTGCCAGCAGTACAGTAATTATCCATGGACTTTTGGCGGAGGGACCAGGCTGGAAATCAAGAGAGGTGGAGGAGGGTCCGGTGGAGGAGGGTCTGGTGGAGGAGGGAGTGGTGGAGGAGGGTCAGAGGTGCAGCTGCAGCAGTCTGGCCCCGAAGTGGTCAAAACTGGAGCTTCAGTCAAAATCAGCTGTAAGGCATCTGGGTACAGCTTCACCGGCTACTTCATCAACTGGGTGAAGAAAAATTCAGGGAAGAGCCCTGAGTGGATCGGCCACATTTCAAGCTCCTACGCCACAAGCACTTACAACCAGAAGTTCAAAAATAAGGCCGCTTTTACCGTGGACACATCTAGTTCAACCGCCTTCATGCAGCTGAACTCCCTCACATCTGAAGATAGTGCTGTGTACTATTGTGTCAGGAGCGGCAACTACGAAGAATATGCTATGGATTACTGGGGGCAGGGGACCTCCGTGACTGTCTCAAGCACCGGTAATGCACGGCTGGTAGAGTGCAGTGGCCGTGGCCACTGCCAATGCAACAGGTGCATATGTGACGAAGGCTACCAGCCACCGATGTGTGAGGATTGTCCCAGCTGTGGCTCGCACTGCAGGGACAACCACACCTCTTGTGCCGAGTGCCTGAAGTTTGATAAGGGCCCTTTTGAGAAGAACTGTAGTGTTCAGTGTGCTGGTATGACGCTGCAGACTATCCCTTTGAAGAAAAAGCCCTGCAAGGAGAGGGACTCGGAAGGCTGTTGGATAACTTACACTTTGCAGCAGAAGGACGGAAGGAACATTTACAACATCCATGTGGAGGACAGTCTAGAGTGTGTGAAGGGCCCCAATGTGGCTGCCATCGTAGGGGGCACCGTGGTAGGTGTCGTACTGATTGGTGTCCTCCTCCTGGTCATCTGGAAGGCCCTGACCCACCTGACTGACCTCAGGGAGTACAGGCGCTTTGAGAAGGAGAAACTCAAGTCCCAATGGAACAATGACAACCCCCTCTTCAAGAGTGCTACGACAACGGTCATGAACCCCAAGTTTGCTGAAAGCTAG
EVIR-C的核酸序列
SEQ ID NO:71:
ATGGATTTTCAGGTCCAGATTTTCTCCTTCCTCCTCATTTCAGCCAGCGTCATTATGTCTCGGGGGGATATTGTCCTCACACAGACTCCCAGCTCCCTGCCTGTGTCCGTCGGAGAGAAAGTGACCATGACATGCAAGTCTAGTCAGACACTGCTCTACTCTAACAATCAGAAGAACTACCTCGCATGGTATCAGCAGAAACCAGGACAGAGCCCCAAGCTGCTCATCTCCTGGGCTTTCACCCGGAAATCCGGGGTGCCTGACCGCTTCACAGGTAGCGGCTCCGGAACTGATTTTACTCTGACCATTGGATCTGTGAAGGCAGAGGACCTCGCCGTCTACTATTGCCAGCAGTACAGTAATTATCCATGGACTTTTGGCGGAGGGACCAGGCTGGAAATCAAGAGAGGTGGAGGAGGGTCCGGTGGAGGAGGGTCTGGTGGAGGAGGGAGTGGTGGAGGAGGGTCAGAGGTGCAGCTGCAGCAGTCTGGCCCCGAAGTGGTCAAAACTGGAGCTTCAGTCAAAATCAGCTGTAAGGCATCTGGGTACAGCTTCACCGGCTACTTCATCAACTGGGTGAAGAAAAATTCAGGGAAGAGCCCTGAGTGGATCGGCCACATTTCAAGCTCCTACGCCACAAGCACTTACAACCAGAAGTTCAAAAATAAGGCCGCTTTTACCGTGGACACATCTAGTTCAACCGCCTTCATGCAGCTGAACTCCCTCACATCTGAAGATAGTGCTGTGTACTATTGTGTCAGGAGCGGCAACTACGAAGAATATGCTATGGATTACTGGGGGCAGGGGACCTCCGTGACTGTCTCAAGCACCGGTACTCAGAAGATGGCTTACTCATTCATTGAGCACACATTCCAGGTCCAGTACAAGAAGAAATCGGACAGCTGGGAGGACAGCAAGACAGAGAACCTAGATCGAGCCCATAGCATGGACCTCTCCCAGCTGGAGCCAGACACCTCATACTGCGCCAGGGTGAGGGTCAAGCCCATCTCTAACTACGATGGGATCTGGAGCAAGTGGAGCGAAGAGTACACTTGGAAGACTGACTGGGTGATGCCCACGCTGTGGATAGTCCTCATCCTGGTCTTTCTCATCCTCACCTTGCTCCTGATCCTTCGCTTTGGCTGTGTCTCTGTATACAGGACGTACAGGAAGTGGAAGGAAAAGATCCCCAACCCCAGCAAGAGCCTCCTGTTCCAGGATGGAGGTAAAGGTCTCTGGCCTCCTGGCAGCATGGCAGCCTTCGCCACTAAGAACCCCGCTCTCCAGGGGCCACAGAGCAGGCTTCTTGCTGAGCAACAGGGGGAGTCATATGCACATTTGGAAGACAACAACGTGTCACCTCTCACTATAGAGGACCCTAATATAATTCGAGTTCCACCATCCGGGCCTGATACAACCCCAGCTGCCTCATCCGAATCCACAGAGCAACTTCCCAATGTTCAAGTAGAGGGACCAACTCCTAACAGACCTAGGAAGCAATTACCCAGCTTTGACTTCAATGGGCCCTACCTGGGGCCTCCCCAATCCCACTCTCTGCCTGATCTCCCAGACCAGCTGGGTTCCCCCCAGGTGGGTGGGAGCCTGAAGCCAGCACTGCCAGGCTCCTTGGAGTACATGTGTCTGCCCCCTGGAGGTCAAGCGCAACTGGTTCCATTGTCCCAGGTGATGGGGCAGGGCCAGGCTATGGATGTGCAGTGTGGGTCCAGCCTGGAGACCTCAGGGAGCCCTTCTGTGGAGCCAAAGGAGAACCCTCCAGTTGAGCTGAGCATGGAGGAACAGGAGGCACGGGACAACCCAGTGACTCTGCCCATAAGCTCTGGGGGCCCTGAGGGCAGTATGATGGCCTCTGATTATGTCACTCCTGGAGATCCGGTGCTCACTCTGCCCACAGGGCCCCTGTCTACCTCTCTGGGCCCCTCTCTAGGGTTGCCCTCAGCCCAAAGCCCCCGTCTCTGTCTTAAGCTGCCCAGGGTCCCCTCTGGAAGCCCAGCTCTAGGGCCACCAGGGTTTGAGGACTATGTGGAGCTGCCTCCAAGTGTGAGCCAGGCTGCCAAGTCCCCTCCAGGCCATCCTGCTCCTCCTGTGGCAAGCAGCCCCACAGTGATCCCAGGAGAGCCCAGGGAGGAAGTGGGCCCAGCATCCCCACATCCCGAAGGCCTCCTTGTTCTTCAGCAGGTTGGGGACTACTGCTTCCTCCCTGGCCTGGGACCTGGCTCCCTCTCACCACACAGTAAGCCACCCTCTCCAAGTCTGTGTTCTGAGACTGAGGACCTAGTCCAGGACTTGTCTGTCAAAAAGTTTCCCTATCAGCCCATGCCCCAGGCGCCAGCCATTCAGTTTTTCAAGTCCCTAAAGCATCAGGACTACCTGTCCCTGCCCCCTTGGGACAATAGCCAGTCTGGGAAGGTGTGCTGA
EVIR-C1的核酸序列
SEQ ID NO:72:
ATGGATTTTCAGGTCCAGATTTTCTCCTTCCTCCTCATTTCAGCCAGCGTCATTATGTCTCGGGGGGATATTGTCCTCACACAGACTCCCAGCTCCCTGCCTGTGTCCGTCGGAGAGAAAGTGACCATGACATGCAAGTCTAGTCAGACACTGCTCTACTCTAACAATCAGAAGAACTACCTCGCATGGTATCAGCAGAAACCAGGACAGAGCCCCAAGCTGCTCATCTCCTGGGCTTTCACCCGGAAATCCGGGGTGCCTGACCGCTTCACAGGTAGCGGCTCCGGAACTGATTTTACTCTGACCATTGGATCTGTGAAGGCAGAGGACCTCGCCGTCTACTATTGCCAGCAGTACAGTAATTATCCATGGACTTTTGGCGGAGGGACCAGGCTGGAAATCAAGAGAGGTGGAGGAGGGTCCGGTGGAGGAGGGTCTGGTGGAGGAGGGAGTGGTGGAGGAGGGTCAGAGGTGCAGCTGCAGCAGTCTGGCCCCGAAGTGGTCAAAACTGGAGCTTCAGTCAAAATCAGCTGTAAGGCATCTGGGTACAGCTTCACCGGCTACTTCATCAACTGGGTGAAGAAAAATTCAGGGAAGAGCCCTGAGTGGATCGGCCACATTTCAAGCTCCTACGCCACAAGCACTTACAACCAGAAGTTCAAAAATAAGGCCGCTTTTACCGTGGACACATCTAGTTCAACCGCCTTCATGCAGCTGAACTCCCTCACATCTGAAGATAGTGCTGTGTACTATTGTGTCAGGAGCGGCAACTACGAAGAATATGCTATGGATTACTGGGGGCAGGGGACCTCCGTGACTGTCTCAAGCACCGGTACTCCATGCCAAAAGACTGCTGTAAGAGCCTTTGGGGCTGGACTCCTGCCCCCCCTGTATTCTCTAGTGTTCATCATTGGAGTGGTGGGCAATGTCCTAGTGATTCTGGTGCTCATGCAGCATAGGAGGCTTCAAAGCATGACCAGCATCTACCTGTTCAACCTGGCTGTCTCTGATCTGGTCTTCCTTTTCACTTTACCTTTCTGGATTGACTACAAGTTGAAAGACGACTGGATTTTTGGTGATGCCATGTGCAAGCTTCTCTCTGGGTTTTATTACCTGGGTTTATACAGTGAGATCTTCTTTATCATCCTGTTGACGATTGACAGATACCTGGCCATTGTCCATGCTGTGTTTGCCCTGAGGGCCCGAACTGTTACTTTTGGCATCATCACCAGTATTATCACCTGGGCCCTAGCCATCTTAGCTTCCATGCCTGCCTTATACTTTTTTAAGGCCCAGTGGGAGTTCACTCACCGTACCTGTAGCCCTCATTTCCCCTACAAGAGCCTGAAGCAGTGGAAGAGGTTTCAAGCTCTAAAGCTAAACCTTCTTGGACTAATTTTGCCTCTGTTAGTCATGATAATCTGCTATGCAGGGATCATCAGAATTCTGCTCAGAAGACCCAGTGAGAAGAAGGTCAAAGCCGTGCGTCTGATATTTGCTATTACTCTTCTATTCTTCCTCCTCTGGACCCCCTACAATCTGAGTGTATTTGTTTCTGCTTTCCAAGATGTTCTATTCACCAATCAGTGTGAGCAGAGTAAGCAACTGGACCTGGCCATGCAGGTGACTGAGGTGATTGCCTACACCCACTGTTGTGTCAACCCAATCATTTATGTTTTTGTGGGTGAACGGTTCTGGAAGTACCTTCGGCAGCTGTTTCAAAGGCATGTGGCTATACCACTGGCAAAATGGCTGCCCTTCCTCTCTGTGGACCAACTAGAAAGGACCAGTTCTATATCTCCATCCACAGGAGAACATGAGCTCTCTGCTGGCTTCTGA
EVIR-C5的核酸序列
SEQ ID NO:73:
ATGGATTTTCAGGTCCAGATTTTCTCCTTCCTCCTCATTTCAGCCAGCGTCATTATGTCTCGGGGGGATATTGTCCTCACACAGACTCCCAGCTCCCTGCCTGTGTCCGTCGGAGAGAAAGTGACCATGACATGCAAGTCTAGTCAGACACTGCTCTACTCTAACAATCAGAAGAACTACCTCGCATGGTATCAGCAGAAACCAGGACAGAGCCCCAAGCTGCTCATCTCCTGGGCTTTCACCCGGAAATCCGGGGTGCCTGACCGCTTCACAGGTAGCGGCTCCGGAACTGATTTTACTCTGACCATTGGATCTGTGAAGGCAGAGGACCTCGCCGTCTACTATTGCCAGCAGTACAGTAATTATCCATGGACTTTTGGCGGAGGGACCAGGCTGGAAATCAAGAGAGGTGGAGGAGGGTCCGGTGGAGGAGGGTCTGGTGGAGGAGGGAGTGGTGGAGGAGGGTCAGAGGTGCAGCTGCAGCAGTCTGGCCCCGAAGTGGTCAAAACTGGAGCTTCAGTCAAAATCAGCTGTAAGGCATCTGGGTACAGCTTCACCGGCTACTTCATCAACTGGGTGAAGAAAAATTCAGGGAAGAGCCCTGAGTGGATCGGCCACATTTCAAGCTCCTACGCCACAAGCACTTACAACCAGAAGTTCAAAAATAAGGCCGCTTTTACCGTGGACACATCTAGTTCAACCGCCTTCATGCAGCTGAACTCCCTCACATCTGAAGATAGTGCTGTGTACTATTGTGTCAGGAGCGGCAACTACGAAGAATATGCTATGGATTACTGGGGGCAGGGGACCTCCGTGACTGTCTCAAGCACCGGTATGTCAGCACCCTGCCAAAAAATCAATGTGAAACAAATTGCGGCTCAGCTCCTGCCCCCACTCTACTCCCTGGTATTCATCTTTGGTTTTGTGGGTAACATGATGGTCTTCCTCATCTTGATAAGCTGCAAAAAGCTGAAGAGCGTGACTGATATCTACCTGCTCAACCTGGCCATCTCTGACCTGCTCTTCCTGCTCACACTACCATTCTGGGCTCACTATGCTGCAAATGAGTGGGTCTTTGGGAACATAATGTGTAAAGTATTCACAGGGCTCTATCACATTGGTTATTTTGGTGGAATCTTCTTCATTATCCTCCTGACAATTGATAGGTACTTGGCTATTGTCCATGCTGTGTTTGCTTTAAAAGTCAGAACGGTCAACTTTGGGGTGATAACAAGTGTAGTCACTTGGGCGGTGGCTGTGTTTGCCTCTCTCCCAGAAATAATCTTTACCAGATCTCAGAAAGAAGGTTTTCATTATACATGCAGTCCTCATTTTCCACACACTCAGTATCATTTCTGGAAGAGTTTCCAAACATTAAAGATGGTCATCTTGAGCCTGATCCTGCCTCTACTTGTCATGGTCATCTGCTACTCAGGAATTCTCCACACCCTGTTTCGCTGTAGGAATGAGAAGAAGAGGCACAGGGCTGTGAGGCTCATCTTTGCCATCATGATTGTCTACTTTCTCTTCTGGACTCCCTACAACATTGTCCTCCTCCTGACCACCTTCCAGGAATTCTTTGGACTGAATAACTGCAGTAGTTCTAATAGACTAGACCAGGCCATGCAGGCAACAGAGACTCTTGGAATGACACACTGCTGCCTAAACCCTGTCATCTATGCCTTTGTTGGAGAGAAGTTCCGGAGTTATCTCTCAGTGTTCTTCCGAAAACACATTGTCAAACGCTTTTGCAAACGGTGTTCAATTTTCCAGCAAGACAATCCTGATCGTGCAAGCTCAGTCTATACCCGATCCACAGGAGAACATGAAGTTTCTACTGGTTTATGA
EVIR-CX的核酸序列
SEQ ID NO:74:
ATGGATTTTCAGGTCCAGATTTTCTCCTTCCTCCTCATTTCAGCCAGCGTCATTATGTCTCGGGGGGATATTGTCCTCACACAGACTCCCAGCTCCCTGCCTGTGTCCGTCGGAGAGAAAGTGACCATGACATGCAAGTCTAGTCAGACACTGCTCTACTCTAACAATCAGAAGAACTACCTCGCATGGTATCAGCAGAAACCAGGACAGAGCCCCAAGCTGCTCATCTCCTGGGCTTTCACCCGGAAATCCGGGGTGCCTGACCGCTTCACAGGTAGCGGCTCCGGAACTGATTTTACTCTGACCATTGGATCTGTGAAGGCAGAGGACCTCGCCGTCTACTATTGCCAGCAGTACAGTAATTATCCATGGACTTTTGGCGGAGGGACCAGGCTGGAAATCAAGAGAGGTGGAGGAGGGTCCGGTGGAGGAGGGTCTGGTGGAGGAGGGAGTGGTGGAGGAGGGTCAGAGGTGCAGCTGCAGCAGTCTGGCCCCGAAGTGGTCAAAACTGGAGCTTCAGTCAAAATCAGCTGTAAGGCATCTGGGTACAGCTTCACCGGCTACTTCATCAACTGGGTGAAGAAAAATTCAGGGAAGAGCCCTGAGTGGATCGGCCACATTTCAAGCTCCTACGCCACAAGCACTTACAACCAGAAGTTCAAAAATAAGGCCGCTTTTACCGTGGACACATCTAGTTCAACCGCCTTCATGCAGCTGAACTCCCTCACATCTGAAGATAGTGCTGTGTACTATTGTGTCAGGAGCGGCAACTACGAAGAATATGCTATGGATTACTGGGGGCAGGGGACCTCCGTGACTGTCTCAAGCACCGGGTTCCGGGATGAAAACGTCCATTTCAATAGGATCTTCCTGCCCACCATCTACTTCATCATCTTCTTGACTGGCATAGTCGGCAATGGATTGGTGATCCTGGTCATGGGTTACCAGAAGAAGCTAAGGAGCATGACGGACAAGTACCGGCTGCACCTGTCAGTGGCTGACCTCCTCTTTGTCATCACACTCCCCTTCTGGGCAGTTGATGCCATGGCTGACTGGTACTTTGGGAAATTTTTGTGTAAGGCTGTCCATATCATCTACACTGTCAACCTCTACAGCAGCGTTCTCATCCTGGCCTTCATCAGCCTGGACCGGTACCTCGCTATTGTCCACGCCACCAACAGTCAGAGGCCAAGGAAACTGCTGGCTGAAAAGGCAGTCTATGTGGGCGTCTGGATCCCAGCCCTCCTCCTGACTATACCTGACTTCATCTTTGCCGACGTCAGCCAGGGGGACATCAGTCAGGGGGATGACAGGTACATCTGTGACCGCCTTTACCCCGATAGCCTGTGGATGGTGGTGTTTCAATTCCAGCATATAATGGTGGGTCTCGTCCTGCCCGGCATCGTCATCCTCTCCTGTTACTGCATCATCATCTCTAAGCTGTCACACTCCAAGGGCCACCAGAAGCGCAAGGCCCTCAAGACGACAGTCATCCTCATCCTAGCTTTCTTTGCCTGCTGGCTGCCATATTATGTGGGGATCAGCATCGACTCCTTCATCCTTTTGGGGGTCATCAAGCAAGGATGTGACTTCGAGAGCATCGTGCACAAGTGGATCTCCATCACAGAGGCCCTCGCCTTCTTCCACTGTTGCCTGAACCCCATCCTCTATGCCTTCCTCGGGGCCAAGTTCAAAAGCTCTGCCCAGCATGCACTCAACTCCATGAGCAGAGGCTCCAGCCTCAAGATCCTTTCCAAAGGAAAGCGGGGTGGACACTCTTCCGTCTCCACGGAGTCAGAATCCTCCAGTTTTCACTCCAGCTAA
EVIR-S的核酸序列
SEQ ID NO:75:
ATGGATTTTCAGGTCCAGATTTTCTCCTTCCTCCTCATTTCAGCCAGCGTCATTATGTCTCGGGGGGATATTGTCCTCACACAGACTCCCAGCTCCCTGCCTGTGTCCGTCGGAGAGAAAGTGACCATGACATGCAAGTCTAGTCAGACACTGCTCTACTCTAACAATCAGAAGAACTACCTCGCATGGTATCAGCAGAAACCAGGACAGAGCCCCAAGCTGCTCATCTCCTGGGCTTTCACCCGGAAATCCGGGGTGCCTGACCGCTTCACAGGTAGCGGCTCCGGAACTGATTTTACTCTGACCATTGGATCTGTGAAGGCAGAGGACCTCGCCGTCTACTATTGCCAGCAGTACAGTAATTATCCATGGACTTTTGGCGGAGGGACCAGGCTGGAAATCAAGAGAGGTGGAGGAGGGTCCGGTGGAGGAGGGTCTGGTGGAGGAGGGAGTGGTGGAGGAGGGTCAGAGGTGCAGCTGCAGCAGTCTGGCCCCGAAGTGGTCAAAACTGGAGCTTCAGTCAAAATCAGCTGTAAGGCATCTGGGTACAGCTTCACCGGCTACTTCATCAACTGGGTGAAGAAAAATTCAGGGAAGAGCCCTGAGTGGATCGGCCACATTTCAAGCTCCTACGCCACAAGCACTTACAACCAGAAGTTCAAAAATAAGGCCGCTTTTACCGTGGACACATCTAGTTCAACCGCCTTCATGCAGCTGAACTCCCTCACATCTGAAGATAGTGCTGTGTACTATTGTGTCAGGAGCGGCAACTACGAAGAATATGCTATGGATTACTGGGGGCAGGGGACCTCCGTGACTGTCTCAAGCACCGGTATTGCCACCACTGACCCTACTGCCCCAGGTACAGGAGGGACAGCTGTTGGGATGCTGAGCACAGACTCTGCCACACAGTGGAGTCTAACCTCAGTAGAGACCGTCCAACCAGCATCCACAGAGGTAGAGACCTCGCAGCCAGCACCCATGGAGGCAGAGACCTCGCAGCCAGCACCCATGGAGGCAGAGACCTCGCAGCCAGCACCCATGGAGGCAGACACCTCAAAGCCAGCACCCACGGAGGCAGAGACCTCAAAGCCAGCACCCACGGAGGCAGAGACCTCTCAGCCAGCACCCAACGAGGCAGAGACCTCAAAACCAGCACCCACGGAGGCAGAGACCTCAAAACCAGCACCCACGGAGGCAGAGACCACCCAGCTTCCCAGGATTCAGGCTGTAAAAACTCTGTTTACAACGTCTGCAGCCACCGAAGTCCCTTCCACAGAACCTACCACCATGGAGACGGCGTCCACAGAGTCTAACGAGTCTACCATCTTCCTTGGGCCATCCGTGACTCACTTACCTGACAGCGGCCTGAAGAAAGGGCTGATTGTGACCCCTGGGAATTCACCTGCCCCAACCCTGCCAGGGAGTTCAGATCTCATCCCGGTGAAGCAATGTCTGCTGATTATCCTCATCTTGGCTTCTCTGGCCACCATCTTCCTCGTGTGCACAGTGGTGCTGGCGGTCCGTCTGTCCCGTAAGACCCACATGTACCCAGTGCGGAACTACTCCCCCACGGAGATGATCTGCATCTCGTCCCTGCTACCTGAGGGGGGAGACGGGGCCCCTGTCACAGCCAATGGGGGCCTGCCCAAGGTCCAGGACCTGAAGACAGAGCCCAGTGGGGACCGGGATGGGGACGACCTCACCCTGCACAGCTTCCTCCCTTAG
抗HER2 scFv曲妥珠单抗的核酸序列
SEQ ID NO:76:
GATATTCAGATGACCCAGTCCCCCAGCTCCCTGTCAGCAAGCGTGGGCGACCGAGTCACTATCACCTGCCGAGCTAGCCAGGATGTGAACACCGCAGTCGCCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGGAAAGCACCCAAGCTGCTCATCTACTCCGCCTCTTTCCTGTATTCAGGAGTGCCAAGCAGGTTTAGTGGCTCAAGAAGCGGAACTGACTTCACACTGACTATCTCTAGTCTCCAGCCCGAGGATTTTGCAACCTACTATTGCCAGCAGCACTATACCACACCCCCTACCTTCGGTCAGGGCACAAAAGTGGAAATTAAGCGGACCGGCTCCACATCTGGAAGTGGGAAGCCCGGTTCCGGCGAGGGATCTGAAGTGCAGCTGGTCGAGTCCGGAGGAGGACTCGTGCAGCCTGGTGGCAGTCTGAGGCTCTCATGTGCCGCTAGCGGCTTCAACATCAAAGACACATACATTCATTGGGTGCGCCAGGCTCCTGGGAAGGGTCTGGAATGGGTCGCACGAATCTATCCAACTAATGGGTACACCCGATATGCTGACTCTGTGAAAGGCAGGTTCACAATTTCCGCCGATACATCTAAGAACACTGCTTACCTGCAGATGAATAGTCTCAGAGCTGAGGATACTGCAGTCTACTATTGTAGCCGGTGGGGAGGGGATGGCTTCTATGCTATGGATGTCTGGGGGCAGGGGACTCTGGTGACTGTCTCAAGTGGTACCGGTACGCGTG
抗HER2 scFv帕妥珠单抗的核酸序列
SEQ ID NO:77:
GATATTCAGATGACCCAGAGCCCAAGCTCCCTGTCAGCTAGCGTGGGCGACCGAGTCACCATCACATGCAAAGCCAGTCAGGATGTGTCAATTGGCGTCGCTTGGTACCAGCAGAAGCCCGGAAAAGCTCCTAAGCTGCTCATCTATTCCGCATCTTACAGGTACACAGGCGTGCCCTCTCGCTTCAGTGGTTCAGGCAGCGGAACTGACTTTACTCTGACCATTTCTAGTCTCCAGCCTGAGGATTTCGCAACCTACTATTGTCAGCAGTACTATATCTACCCATATACCTTTGGGCAGGGTACAAAAGTGGAAATTAAGAGAACAGTCGCAGCTCCAGGAGGAGGAGGTAGCGGAGGAGGGGGTTCCGGCGGAGGGGGTTCTGGCGGAGGGGGTAGTGAGGTGCAGCTGGTCGAAAGCGGAGGAGGACTCGTGCAGCCTGGTGGCAGCCTGAGACTCTCCTGCGCAGCCTCTGGCTTCACCTTCACCGACTACACCATGGATTGGGTGCGGCAGGCACCAGGAAAGGGACTGGAGTGGGTGGCAGACGTCAACCCCAATTCCGGAGGGTCTATCTACAACCAGAGGTTCAAAGGAAGGTTCACCCTGAGTGTGGATCGATCAAAGAACACCCTGTATCTCCAGATGAATTCCCTGAGGGCCGAAGATACAGCCGTCTATTATTGTGCAAGAAACCTGGGTCCATCATTTTATTTTGACTATTGG
抗HER2 scFv FRP5的核酸序列
SEQ ID NO:78:
CAGGTCCAGCTCCAGCAGTCAGGTCCAGAACTCAAGAAGCCAGGGGAAACAGTCAAAATCTCATGTAAAGCCTCAGGATACCCATTCACTAACTATGGGATGAATTGGGTGAAGCAGGCACCTGGCCAGGGACTGAAATGGATGGGTTGGATCAACACTAGCACCGGGGAGTCCACATTCGCCGACGATTTTAAGGGCCGGTTCGACTTTTCTCTCGAAACCAGTGCAAATACAGCCTATCTGCAGATTAACAATCTCAAATCCGAGGATATGGCCACCTACTTCTGCGCTCGCTGGGAAGTGTACCACGGATATGTCCCATACTGGGGGCAGGGTACCACAGTGACAGTCAGCTCCGGAGGAGGAGGTTCAGGAGGAGGAGGTAGCGGAGGAGGAGGTTCCGACATCCAGCTGACACAGTCTCATAAGTTTCTCTCCACTTCTGTGGGCGACAGGGTCTCTATTACCTGTAAAGCTAGTCAGGATGTGTATAACGCCGTCGCTTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGAGCCCTAAACTGCTCATCTATAGCGCCTCTAGTAGGTACACTGGAGTGCCAAGCAGATTCACCGGCAGTGGATCAGGGCCCGACTTCACCTTCACCATTTCAAGCGTGCAGGCTGAGGATCTGGCAGTCTACTTTTGCCAGCAGCATTTTCGCACCCCTTTCACCTTTGGAAGCGGGACTAAACTGGAGATTAAGAGGA
衍生自dLNGFR的铰链结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:79:
LLGVSLGGAKEACPTGLYTHSGECCKACNLGEGVAQPCGANQTVCEPCLDSVTFSDVVSATEPCKPCTECVGLQSMSAPCVEADDAVCRCAYGYYQDETTGRCEACRVCEAGSGLVFSCQDKQNTVCEECPDGTYSDEANHVDPCLPCTVCEDTERQLRECTRWADAECEEIPGRWITRSTPPEGSDSTAPSTQEPEAPPEQDLIASTVAGWTTVMGSSQPVVTRGTTDN
衍生自dLNGFR的跨膜结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:80:
LIPVYCSILAAWVGLVAYIAF
衍生自dLNGFR的胞内结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:81:
KRWNRGIL
衍生自FcyRIIIA的铰链结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:82:
HENSELLIPKATHNDSGSYFCRGLIGHNNKSSASFRISLGDPGSPSMFPP
衍生自FcyRIIIA的跨膜结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:83:
WHQITFCLLIGLLFAIDTVLYF
衍生自FcyRIIIA的胞内结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:84:
SVRRGLQSPVADYEEPKIQWSKEPQDKTRVD
衍生自FLT3的铰链结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:85:
PGPFPFIQDN
衍生自FLT3的跨膜结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:86:
ISFYATIGLCLPFIVVLIVLIC
衍生自FLT3的胞内结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:87:
HKYKKQFRYESQLQMIQVTGPLDNEYFYVDFRDYEYDLKWEFPRENLEFGKVLGSGAFGRVMNATAYGISKTGVSIQVAVKMLKEKADSCEKEALMSELKMMTHLGHHDNIVNLLGACTLSGPVYLIFEYCCYGDLLNYLRSKREKFHRTWTEIFKEHNFSFYPTFQAHSNSSMPGSREVQLHPPLDQLSGFNGNLIHSEDEIEYENQKRLAEEEEEDLNVLTFEDLLCFAYQVAKGMEFLEFKSCVHRDLAARNVLVTHGKVVKICDFGLARDILSDSSYWRGNARLPVKWMAPESLFEGIYTIKSDVWSYGILLWEIFSLGVNPYPGIPVDANFYKLIQSGFKMEQPFYATEGIYFVMQSCWAFDSRKRPSFPNLTSFLGCQLAEAEEAMYQNMGGNVPEHPSIYQNRRPLSREAGSEPPSPQAQVKIHGERS
衍生自TLR4的铰链结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:88:
QLYSLSTLDCSFNRIETSKGILQHFPKSLAFFNLTNNSVACICEHQKFLQWVKEQKQFLVNVEQMTCATPVEMNTSLVLDFNNSTCYMYKTIISVSVVS
衍生自TLR4的跨膜结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:89:
VIVVSTVAFLIYHFYFHLILI
衍生自TLR4的胞内结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:90:
AGCKKYSRGESIYDAFVIYSSQNEDWVRNELVKNLEEGVPRFHLCLHYRDFIPGVAIAANIIQEGFHKSRKVIWVSRHFIQSRWCIFEYEIAQTWQFLSSRSGIIFIVLEKVEKSLLRQQVELYRLLSRNTYLEWEDNPLGRHIFWRRLKNALLDGKASNPEQTAEEEQETATWT
衍生自CCR2的铰链结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:91:
MEDNNMLPQFIHGILSTSHSLFTRSIQELDEGATTPYDYDDGEPCHKTSVKQIGA
衍生自ITGB2的铰链结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:92:
NARLVECSGRGHCQCNRCICDEGYQPPMCEDCPSCGSHCRDNHTSCAECLKFDKGPFEKNCSVQCAGMTLQTIPLKKKPCKERDSEGCWITYTLQQKDGRNIYNIHVEDSLECVKGPN
衍生自ITGB2的跨膜结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:93:
VAAIVGGTVVGWLIGVLLLVIW
衍生自ITGB2的胞内结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:94:
KALTHLTDLREYRRFEKEKLKSQWNNDNPLFKSATTTVMNPKFAES
衍生自CSF2RB的铰链结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:95:
TQKMAYSFIEHTFQVQYKKKSDSWEDSKTENLDRAHSMDLSQLEPDTSYCARVRVKPISNYDGIWSKWSEEYTWKTDW
衍生自CSF2RB的跨膜结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:96:
VMPTLWIVLILVFLILTLLLIL
衍生自CSF2RB的胞内结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:97:
RFGCVSVYRTYRKWKEKIPNPSKSLLFQDGGKGLWPPGSMAAFATKNPALQGPQSRLLAEQQGESYAHLEDNNVSPLTIEDPNIIRVPPSGPDTTPAASSESTEQLPNVQVEGPTPNRPRKQLPSFDFNGPYLGPPQSHSLPDLPDQLGSPQVGGSLKPALPGSLEYMCLPPGGQAQLVPLSQVMGQGQAMDVQCGSSLETSGSPSVEPKENPPVELSMEEQEARDNPVTLPISSGGPEGSMMASDYVTPGDPVLTLPTGPLSTSLGPSLGLPSAQSPRLCLKLPRVPSGSPALGPPGFEDYVELPPSVSQAAKSPPGHPAPPVASSPTVIPGEPREEVGPASPHPEGLLVLQQVGDYCFLPGLGPGSLSPHSKPPSPSLCSETEDLVQDLSVKKFPYQPMPQAPAIQFFKSLKHQDYLSLPPWDNSQSGKVC
衍生自CCR1的铰链结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:98:
TPCQKTAVRAFGA
衍生自CCR5的铰链结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:99:
MSAPCQKINVKQIAA
衍生自CXCR4的铰链结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:100:
FRDENVHFNR
衍生自SELPLG的铰链结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:101:
IATTDPTAPGTGGTAVGMLSTDSATQWSLTSVETVQPASTEVETSQPAPMEAETSQPAPMEAETSQPAPMEADTSKPAPTEAETSKPAPTEAETSQPAPNEAETSKPAPTEAETSKPAPTEAETTQLPRIQAVKTLFTTSAATEVPSTEPTTMETASTESNESTIFLGPSVTHLPDSGLKKGLIVTPGNSPAPTLPGSSDLIPVKQC
衍生自SELPLG的跨膜结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:102:
LL11LILAS LATIFLVC TVVL
衍生自SELPLG的胞内结构域的氨基酸序列
SEQ ID NO:103:
AVRLSRKTHMYPVRNYSPTEMICISSLLPEGGDGAPVTANGGLPKVQDLKTEPSGDRDGDDLTLHSFLP
促进DNA工程的肽的氨基酸序列
SEQ ID NO:10 4:
TG
IgK结构域的核酸序列(用于FRP5和曲妥珠单抗)
SEQ ID NO:105:
ATGGATTTTCAGGTGCAGATTTTCTCTTTCCTCCTCATTTCCGCCTCAGTGATTATGTCAAGGGGG
IgK结构域的核酸序列(用于帕妥珠单抗)
SEQ ID NO:106:
ATGGATTTTCAGGTGCAGATTTTCTCCTTTCTCCTCATTTCAGCCAGCGTGATTATGTCTCGGGGG
促进DNA工程的肽的核酸序列
SEQ ID NO:107:
ACCGGT
促进DNA工程的肽的核酸序列
SEQ ID NO:108:
ACCGGG
IgK结构域的核酸序列(用于EVIR-N1)
SEQ ID NO:109:
ATGGACTTCCAGGTGCAGATCTTCAGCTTCCTGCTGATCTCCGCCAGCGTGATCATGAGCAGAGGC
IgK结构域的核酸序列(用于EVIR-N2)
SEQ ID NO:110:
ATGGATTTTCAGGTGCAGATCTTCAGCTTCCTGCTGATCTCCGCCAGCGTGATCATGAGCAGAGGC
抗TYRPl scFv TA99的核酸序列
SEQ ID NO:111:
GACATCCAGATGAGCCAGAGCCCTGCCAGCCTGTCTGCCTCTGTGGGCGAGACAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGGCAACATCTACAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCAGGGCAAGAGCCCCCATCTGCTGGTGTACGACGCCAAGACACTGGCCGACGGCGTGCCCTCTAGATTCTCTGGCAGCGGCTCCGGCACCCAGTACAGCCTGAAGATCAGCTCCCTGCAGACCGAGGACTCCGGCAACTACTACTGCCAGCACTTCTGGTCCCTGCCCTTCACCTTCGGCAGCGGCACCAAGCTGGAAATCAAGAGAGGCGGCGGAGGCTCTGGCGGAGGCGGATCTGGGGGCGGAGGAAGTGGCGGGGGAGGATCTGAAGTGCAGCTGCAGCAGTCTGGCGCTGAGCTCGTGCGACCTGGCGCTCTCGTGAAGCTGAGCTGCAAGACCAGCGGCTTCAATATCAAGGACTACTTCCTGCACTGGGTGCGACAGAGGCCTGACCAGGGCCTGGAATGGATCGGCTGGATCAACCCCGACAACGGCAACACCGTGTACGACCCTAAGTTCCAGGGCACCGCCAGCCTGACAGCCGACACAAGCTCCAACACAGTGTACCTGCAGCTGAGCGGCCTGACCTCCGAGGATACCGCCGTGTACTTCTGCACCAGAAGAGACTACACCTACGAGAAGGCCGCCCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACAACCGTGACCGTGTCC
抗GD2scFv 14G2a的核酸序列
SEQ ID NO:112:
GAAGTTCAGCTGCTGCAGAGCGGACCCGAACTGGAAAAACCTGGCGCCTCCGTGATGATCAGCTGCAAGGCCTCTGGCAGCTCCTTCACCGGCTACAACATGAACTGGGTCCGACAGAACATCGGCAAGAGCCTGGAATGGATCGGCGCCATCGATCCTTACTACGGCGGCACCAGCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAGAGCCACACTGACCGTGGACAAGAGCAGCAGCACAGCCTACATGCATCTGAAGTCCCTGACCAGCGAGGACAGCGCCGTGTACTACTGTGTGTCCGGCATGGAATACTGGGGCCAGGGCACAAGCGTGACAGTCTCTTCTGGCGGCGGTGGATCTGGCGGAGGCGGAAGTGGTGGCGGCGGATCTGATGTGGTCATGACACAGACCCCTCTGAGCCTGCCTGTGTCTCTGGGAGATCAGGCCAGCATCAGCTGTAGAAGCAGCCAGAGCCTGGTGCACAGAAACGGCAACACCTACCTGCACTGGTATCTGCAGAAGCCCGGCCAGTCTCCTAAGCTGCTGATCCACAAGGTGTCCAACAGATTCAGCGGCGTGCCCGACAGATTCTCTGGCTCTGGAAGCGGCACCGACTTCACCCTGAAGATTAGCAGAGTGGAAGCCGAGGACCTGGGCGTGTACTTCTGTAGCCAGAGCACACACGTGCCACCTCTGACATTTGGCGCTGGCACCAAGCTGGAACTG
TA99基抗TYRP1scFv的氨基酸序列
SEQ ID NO:113:
DIQMSQSPASLSASVGETVTITCRASGNIYNYLAWYQQKQGKSPHLLVYDAKTLADGVPSRFSGSGSGTQYSLKISSLQTEDSGNYYCQHFWSLPFTFGSGTKLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGAELVRPGALVKLSCKTSGFNIKDYFLHWVRQRPDQGLEWIGWINPDNGNTVYDPKFQGTASLTADTSSNTVYLQLSGLTSEDTAVYFCTRRDYTYEKAALDYWGQGTTVTVS
14G2a基抗GD2scFv的氨基酸序列
SEQ ID NO:114:
EVQLLQSGPELEKPGASVMISCKASGSSFTGYNMNWVRQNIGKSLEWIGAIDPYYGGTSYNQKFKGRATLTVDKSSSTAYMHLKSLTSEDSAVYYCVSGMEYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDWMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHRNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIHKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPPLTFGAGTKLEL
Cxcl9Fw Xmal的核酸序列
SEQ ID NO:115:AAAAACCCGGGTCACTCCAACACAGTGACTC
Cxcl9Rv Sall/Nhel的核酸序列
SEQ ID NO:116:AAAAAGTCGACGCTAGCCAGGGTGCTTGTTGGTAAAGT
Cxcl9的核酸序列
SEQ ID NO:117:
tcactccaacacagtgactcaatagaactcagctctgccatgaagtccgctgttcttttcctcttgggcatcatcttcctggagcagtgtggagttcgaggaaccctagtgataaggaatgcacgatgctcctgcatcagcaccagccgaggcacgatccactacaaatccctcaaagacctcaaacagtttgccccaagccccaattgcaacaaaactgaaatcattgctacactgaagaacggagatcaaacctgcctagatccggactcggcaaatgtgaagaagctgatgaaagaatgggaaaagaagatcagccaaaagaaaaagcaaaagagggggaaaaaacatcaaaagaacatgaaaaacagaaaacccaaaacaccccaaagtcgtcgtcgttcaaggaagactacataagagaccattactttaccaacaagcaccctg
GM-CSF Fw Xmal的核酸序列
SEQ ID NO:118:AAAAACCCGGGCAGAGAGAAAGGCTAAGGTCC
GM-CSF_Rv_SalI/NheI的核酸序列
SEQ ID NO:119:AAAAAGTCGACGCTAGCAGTCTGAGAAGCTGGATT
GM-CSF的核酸序列
SEQ ID NO:120:
CAGAGAGAAAGGCTAAGGTCCTGAGGAGGATGTGGCTGCAGAATTTACTTTTCCTGGGCATTGTGGTCTACAGCCTCTCAGCACCCACCCGCTCACCCATCACTGTCACCCGGCCTTGGAAGCATGTAGAGGCCATCAAAGAAGCCCTGAACCTCCTGGATGACATGCCTGTCACGTTGAATGAAGAGGTAGAAGTCGTCTCTAACGAGTTCTCCTTCAAGAAGCTAACATGTGTGCAGACCCGCCTGAAGATATTCGAGCAGGGTCTACGGGGCAATTTCACCAAACTCAAGGGCGCCTTGAACATGACAGCCAGCTACTACCAGACATACTGCCCCCCAACTCCGGAAACGGACTGTGAAACACAAGTTACCACCTATGCGGATTTCATAGACAGCCTTAAAACCTTTCTGACTGATATCCCCTTTGAATGCAAAAAACCAGGCCAAAAATGAGGAAGCCCAGGCCAGCTCTGAATCCAGCTTCTCAGACT
IFNγFw Xmal的核酸序列
SEQ ID NO:121:AAAAACCCGGGAGTTCTGGGCTTCTCCTCCT
IFNγ_Rv_SalI/NheI的核酸序列
SEQ ID NO:122:AAAAAGTCGACGCTAGCGACAATCTCTTCCCCACCCC
IFNγ的核酸序列
SEQ ID NO:123:
AGTTCTGGGCTTCTCCTCCTGCGGCCTAGCTCTGAGACAATGAACGCTACACACTGCATCTTGGCTTTGCAGCTCTTCCTCATGGCTGTTTCTGGCTGTTACTGCCACGGCACAGTCATTGAAAGCCTAGAAAGTCTGAATAACTATTTTAACTCAAGTGGCATAGATGTGGAAGAAAAGAGTCTCTTCTTGGATATCTGGAGGAACTGGCAAAAGGATGGTGACATGAAAATCCTGCAGAGCCAGATTATCTCTTTCTACCTCAGACTCTTTGAAGTCTTGAAAGACAATCAGGCCATCAGCAACAACATAAGCGTCATTGAATCACACCTGATTACTACCTTCTTCAGCAACAGCAAGGCGAAAAAGGATGCATTCATGAGTATTGCCAAGTTTGAGGTCAACAACCCACAGGTCCAGCGCCAAGCATTCAATGAGCTCATCCGAGTGGTCCACCAGCTGTTGCCGGAATCCAGCCTCAGGAAGCGGAAAAGGAGTCGCTGCTGATTCGGGGTGGGGAAGAGATTGTC
LIN28_Fw BamHI的核酸序列
SEQ ID NO:124:AAAAAGGATCCCTTTGCCTCCGGACTTCTCTGG
LIN28_Rv_Sall的核酸序列
SEQ ID NO:125:AAAAAGTCGACAAAGACAGGGTGACACTGGGA
LIN28(PstI和Smal-小鼠滋养层细胞)的核酸序列
SEQ ID NO:126:
CTTTGCCTCCGGACTTCTCTGGGGCCAGCAGCCGCCCGACCTGGGGCCCGGGGCCACGGGCTCAGCAGACGACCATGGGCTCGGTGTCCAACCAGCAGTTTGCAGGTGGCTGCGCCAAGGCAGCGGAGAAGGCGCCAGAGGAGGCGCCGCCTGACGCGGCCCGAGCGGCAGACGAGCCGCAGCTGCTGCACGGGGCCGGCATCTGTAAGTGGTTCAACGTGCGCATGGGGTTCGGCTTCCTGTCTATGACCGCCCGCGCTGGGGTCGCGCTCGACCCCCCGGTGGACGTCTTTGTGCACCAGAGCAAGCTGCACATGGAAGGGTTCCGAAGCCTCAAGGAGGGTGAGGCGGTGGAGTTCACCTTTAAGAAGTCTGCCAAGGGTCTGGAATCCATCCGTGTCACTGGCCCTGGTGGTGTGTTCTGTATTGGAAGTGAGCGGCGGCCAAAGGGGAAGAACATGCAGAAGCGAAGATCCAAAGGAGACAGGTGCTACAACTGCGGTGGGCTAGACCATCATGCCAAGGAATGCAAGCTGCCACCCCAGCCCAAGAAGTGCCACTTTTGCCAAAGCATCAACCATATGGTGGCCTCGTGTCCACTGAAGGCCCAGCAGGGCCCCAGTTCTCAGGGAAAGCCTGCCTACTTCCGGGAGGAAGAGGAAGAGATCCACAGCCCTGCCCTGCTCCCAGAAGCCCAGAATTGAGGCCCAGGAGTCAGGGTTATTCTTTGGCTAATGGGGAGTTTAAGGAAAGAGGCATCAATCTGCAGAGTGGAGAAAGTGGGGGTAAGGGTGGGTTGCGTGGGTAGCTTGCACTGCCGTGTCTCAGGCCGGGGTTCCCAGTGTCACCCTGTCTTT
CD40的核酸序列(GeneArt CD40钝位点(Smal-Agel-blunted)在Afel/Nheh-blunted双向中)
SEQ ID NO:127:
GCCACCATGGTCTCTCTCCCTCGGCTGTGTGCTCTGTGGGGTTGTCTGCTCACCGCTGTGCATCTCGGCCAGTGTGTGACTTGTTCTGATAAACAGTACCTGCATGACGGGCAGTGCTGTGATCTGTGCCAGCCCGGTTCTAGGCTCACCAGTCATTGTACAGCCCTGGAGAAGACTCAGTGCCACCCTTGTGACTCAGGGGAGTTCAGCGCTCAGTGGAACCGAGAAATTAGGTGCCACCAGCATAGACACTGTGAGCCTAATCAGGGGCTGCGGGTGAAGAAAGAGGGTACCGCAGAAAGTGACACTGTCTGCACCTGTAAGGAGGGCCAGCATTGCACCTCAAAAGATTGCGAAGCTTGTGCACAGCACACACCTTGTATCCCAGGCTTCGGAGTGATGGAGATGGCTACTGAAACCACAGACACCGTGTGCCACCCATGTCCCGTCGGATTCTTTTCTAACCAGAGCTCCCTCTTTGAGAAGTGCTATCCATGGACAAGCTGTGAGGATAAGAACCTGGAAGTGCTCCAGAAAGGCACATCCCAGACTAATGTCATTTGCGGACTGAAATCTCGGATGCGCGCCCTGCTCGTGATCCCAGTGGTCATGGGCATCCTCATTACTATCTTCGGAGTGTTTCTGTACATTAAGAAAGTGGTCAAGAAACCCAAGGACAACGAGATCCTCCCACCTGCAGCTAGGAGACAGGACCCCCAGGAGATGGAAGATTATCCTGGACATAATACAGCAGCCCCAGTGCAGGAAACTCTGCACGGGTGTCAGCCCGTCACCCAGGAGGATGGCAAGGAAAGCAGAATCTCCGTCCAGGAAAGGCAGGTCACTGATAGCATCGCACTCCGCCCACTCGTCTGA
抗HER2 scFv CHA21(1)的核酸序列
SEQ ID NO:128:
GATATTGTCCTCACACAGACTCCCAGCTCCCTGCCTGTGTCCGTCGGAGAGAAAGTGACCATGACATGCAAGTCTAGTCAGACACTGCTCTACTCTAACAATCAGAAGAACTACCTCGCATGGTATCAGCAGAAACCAGGACAGAGCCCCAAGCTGCTCATCTCCTGGGCTTTCACCCGGAAATCCGGGGTGCCTGACCGCTTCACAGGTAGCGGCTCCGGAACTGATTTTACTCTGACCATTGGATCTGTGAAGGCAGAGGACCTCGCCGTCTACTATTGCCAGCAGTACAGTAATTATCCATGGACTTTTGGCGGAGGGACCAGGCTGGAAATCAAGAGAGGTGGAGGAGGGTCCGGTGGAGGAGGGTCTGGTGGAGGAGGGAGTGGTGGAGGAGGGTCAGAGGTGCAGCTGCAGCAGTCTGGCCCCGAAGTGGTCAAAACTGGAGCTTCAGTCAAAATCAGCTGTAAGGCATCTGGGTACAGCTTCACCGGCTACTTCATCAACTGGGTGAAGAAAAATTCAGGGAAGAGCCCTGAGTGGATCGGCCACATTTCAAGCTCCTACGCCACAAGCACTTACAACCAGAAGTTCAAAAATAAGGCCGCTTTTACCGTGGACACATCTAGTTCAACCGCCTTCATGCAGCTGAACTCCCTCACATCTGAAGATAGTGCTGTGTACTATTGTGTCAGGAGCGGCAACTACGAAGAATATGCTATGGATTACTGGGGGCAGGGGACCTCCGTGACTGTCTCAAGC
IgK结构域(1)的核酸序列
SEQ ID NO:129:
ATGGATTTTCAGGTCCAGATTTTCTCCTTCCTCCTCATTTCAGCCAGCGTCATTATGTCTCGGGGGEVIR-N1的核酸序列
SEQ ID NO:130:
ATGGACTTCCAGGTGCAGATCTTCAGCTTCCTGCTGATCTCCGCCAGCGTGATCATGAGCAGAGGCGACATCCAGATGAGCCAGAGCCCTGCCAGCCTGTCTGCCTCTGTGGGCGAGACAGTGACCATCACCTGTAGAGCCAGCGGCAACATCTACAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCAGGGCAAGAGCCCCCATCTGCTGGTGTACGACGCCAAGACACTGGCCGACGGCGTGCCCTCTAGATTCTCTGGCAGCGGCTCCGGCACCCAGTACAGCCTGAAGATCAGCTCCCTGCAGACCGAGGACTCCGGCAACTACTACTGCCAGCACTTCTGGTCCCTGCCCTTCACCTTCGGCAGCGGCACCAAGCTGGAAATCAAGAGAGGCGGCGGAGGCTCTGGCGGAGGCGGATCTGGGGGCGGAGGAAGTGGCGGGGGAGGATCTGAAGTGCAGCTGCAGCAGTCTGGCGCTGAGCTCGTGCGACCTGGCGCTCTCGTGAAGCTGAGCTGCAAGACCAGCGGCTTCAATATCAAGGACTACTTCCTGCACTGGGTGCGACAGAGGCCTGACCAGGGCCTGGAATGGATCGGCTGGATCAACCCCGACAACGGCAACACCGTGTACGACCCTAAGTTCCAGGGCACCGCCAGCCTGACAGCCGACACAAGCTCCAACACAGTGTACCTGCAGCTGAGCGGCCTGACCTCCGAGGATACCGCCGTGTACTTCTGCACCAGAAGAGACTACACCTACGAGAAGGCCGCCCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACAACCGTGACCGTGTCCACCGGTCTTCTGGGGGTGTCCCTTGGAGGTGCCAAGGAGGCATGCCCCACAGGCCTGTACACACACAGCGGTGAGTGCTGCAAAGCCTGCAACCTGGGCGAGGGTGTGGCCCAGCCTTGTGGAGCCAACCAGACCGTGTGTGAGCCCTGCCTGGACAGCGTGACGTTCTCCGACGTGGTGAGCGCGACCGAGCCGTGCAAGCCGTGCACCGAGTGCGTGGGGCTCCAGAGCATGTCGGCGCCGTGCGTGGAGGCCGACGACGCCGTGTGCCGCTGCGCCTACGGCTACTACCAGGATGAGACGACTGGGCGCTGCGAGGCGTGCCGCGTGTGCGAGGCGGGCTCGGGCCTCGTGTTCTCCTGCCAGGACAAGCAGAACACCGTGTGCGAGGAGTGCCCCGACGGCACGTATTCCGACGAGGCCAACCACGTGGACCCGTGCCTGCCCTGCACCGTGTGCGAGGACACCGAGCGCCAGCTCCGCGAGTGCACACGCTGGGCCGACGCCGAGTGCGAGGAGATCCCTGGCCGTTGGATTACACGGTCCACACCCCCAGAGGGCTCGGACAGCACAGCCCCCAGCACCCAGGAGCCTGAGGCACCTCCAGAACAAGACCTCATAGCCAGCACGGTGGCAGGTGTGGTGACCACAGTGATGGGCAGCTCCCAGCCCGTGGTGACCCGAGGCACCACCGACAACCTCATCCCTGTCTATTGCTCCATCCTGGCTGCTGTGGTTGTGGGCCTTGTGGCCTACATAGCCTTCAAGAGGTGGAACAGGGGGATCCTCTAG
EVIR-N2的核酸序列
SEQ ID NO:131:
ATGGATTTTCAGGTGCAGATCTTCAGCTTCCTGCTGATCTCCGCCAGCGTGATCATGAGCAGAGGCGAAGTTCAGCTGCTGCAGAGCGGACCCGAACTGGAAAAACCTGGCGCCTCCGTGATGATCAGCTGCAAGGCCTCTGGCAGCTCCTTCACCGGCTACAACATGAACTGGGTCCGACAGAACATCGGCAAGAGCCTGGAATGGATCGGCGCCATCGATCCTTACTACGGCGGCACCAGCTACAACCAGAAGTTCAAGGGCAGAGCCACACTGACCGTGGACAAGAGCAGCAGCACAGCCTACATGCATCTGAAGTCCCTGACCAGCGAGGACAGCGCCGTGTACTACTGTGTGTCCGGCATGGAATACTGGGGCCAGGGCACAAGCGTGACAGTCTCTTCTGGCGGCGGTGGATCTGGCGGAGGCGGAAGTGGTGGCGGCGGATCTGATGTGGTCATGACACAGACCCCTCTGAGCCTGCCTGTGTCTCTGGGAGATCAGGCCAGCATCAGCTGTAGAAGCAGCCAGAGCCTGGTGCACAGAAACGGCAACACCTACCTGCACTGGTATCTGCAGAAGCCCGGCCAGTCTCCTAAGCTGCTGATCCACAAGGTGTCCAACAGATTCAGCGGCGTGCCCGACAGATTCTCTGGCTCTGGAAGCGGCACCGACTTCACCCTGAAGATTAGCAGAGTGGAAGCCGAGGACCTGGGCGTGTACTTCTGTAGCCAGAGCACACACGTGCCACCTCTGACATTTGGCGCTGGCACCAAGCTGGAACTGACCGGTCTTCTGGGGGTGTCCCTTGGAGGTGCCAAGGAGGCATGCCCCACAGGCCTGTACACACACAGCGGTGAGTGCTGCAAAGCCTGCAACCTGGGCGAGGGTGTGGCCCAGCCTTGTGGAGCCAACCAGACCGTGTGTGAGCCCTGCCTGGACAGCGTGACGTTCTCCGACGTGGTGAGCGCGACCGAGCCGTGCAAGCCGTGCACCGAGTGCGTGGGGCTCCAGAGCATGTCGGCGCCGTGCGTGGAGGCCGACGACGCCGTGTGCCGCTGCGCCTACGGCTACTACCAGGATGAGACGACTGGGCGCTGCGAGGCGTGCCGCGTGTGCGAGGCGGGCTCGGGCCTCGTGTTCTCCTGCCAGGACAAGCAGAACACCGTGTGCGAGGAGTGCCCCGACGGCACGTATTCCGACGAGGCCAACCACGTGGACCCGTGCCTGCCCTGCACCGTGTGCGAGGACACCGAGCGCCAGCTCCGCGAGTGCACACGCTGGGCCGACGCCGAGTGCGAGGAGATCCCTGGCCGTTGGATTACACGGTCCACACCCCCAGAGGGCTCGGACAGCACAGCCCCCAGCACCCAGGAGCCTGAGGCACCTCCAGAACAAGACCTCATAGCCAGCACGGTGGCAGGTGTGGTGACCACAGTGATGGGCAGCTCCCAGCCCGTGGTGACCCGAGGCACCACCGACAACCTCATCCCTGTCTATTGCTCCATCCTGGCTGCTGTGGTTGTGGGCCTTGTGGCCTACATAGCCTTCAAGAGGTGGAACAGGGGGATCCTCTAG
EVIR-N1的氨基酸序列
SEQ ID NO:132:
MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGDIQMSQSPASLSASVGETVTITCRASGNIYNYLAWYQQKQGKSPHLLVYDAKTLADGVPSRFSGSGSGTQYSLKISSLQTEDSGNYYCQHFWSLPFTFGSGTKLEIKRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSEVQLQQSGAELVRPGALVKLSCKTSGFNIKDYFLHWVRQRPDQGLEWIGWINPDNGNTVYDPKFQGTASLTADTSSNTVYLQLSGLTSEDTAVYFCTRRDYTYEKAALDYWGQGTTVTVSTGLLGVSLGGAKEACPTGLYTHSGECCKACNLGEGVAQPCGANQTVCEPCLDSVTFSDVVSATEPCKPCTECVGLQSMSAPCVEADDAVCRCAYGYYQDETTGRCEACRVCEAGSGLVFSCQDKQNTVCEECPDGTYSDEANHVDPCLPCTVCEDTERQLRECTRWADAECEEIPGRWITRSTPPEGSDSTAPSTQEPEAPPEQDLIASTVAGWTTVMGSSQPVVTRGTTDNLIPVYCSILAAVWGLVAYIAFKRWNRGIL
EVIR-N2的氨基酸序列
SEQ ID NO:133:
MDFQVQIFSFLLISASVIMSRGEVQLLQSGPELEKPGASVMISCKASGSSFTGYNMNWVRQNIGKSLEWIGAIDPYYGGTSYNQKFKGRATLTVDKSSSTAYMHLKSLTSEDSAVYYCVSGMEYWGQGTSVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDWMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHRNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIHKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYFCSQSTHVPPLTFGAGTKLELTGLLGVSLGGAKEACPTGLYTHSGECCKACNLGEGVAQPCGANQTVCEPCLDSVTFSDVVSATEPCKPCTECVGLQSMSAPCVEADDAVCRCAYGYYQDETTGRCEACRVCEAGSGLVFSCQDKQNTVCEECPDGTYSDEANHVDPCLPCTVCEDTERQLRECTRWADAECEEIPGRWITRSTPPEGSDSTAPSTQEPEAPPEQDLIASTVAGVVTTVMGSSQPVVTRGTTDNLIPVYCSILAAVWGLVAYIAFKRWNRGIL
TYRP1Fw的核酸序列
SEQ ID NO:134:AAAAAAACCGGTGACCTGTGTTCTGAACTCTTGC
TYRP1Rv的核酸序列
SEQ ID NO:135:AAAAAAGTCGACACTGTCATCACTGGAGAGCA
抗-B2m gRNA的核酸序列
SEQ ID NO:136:
GGTCGTCAGCATGGCTCGCTGTTTTAGAGCTAGAAATAGCAAGTTAAAATAAGGCTAGTCCGTTATCAACTTGAAAAAGTGGCACCGAGTCGGTGCTTTTTTT
序列表
<110> 洛桑联邦理工学院（ECOLE POLYTECHNIQUE FEDERALE DE LAUSANNE (EPFL)）
<120> 工程化抗原呈递细胞及其用途
<130> P1995PC00
<150> EP16153966.3
<151> 2016-02-02
<160> 136
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 765
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗HER2 scFv CHA21的核酸序列
<400> 1
ggggatattg tcctcacaca gactcccagc tccctgcctg tgtccgtcgg agagaaagtg 60
accatgacat gcaagtctag tcagacactg ctctactcta acaatcagaa gaactacctc 120
gcatggtatc agcagaaacc aggacagagc cccaagctgc tcatctcctg ggctttcacc 180
cggaaatccg gggtgcctga ccgcttcaca ggtagcggct ccggaactga ttttactctg 240
accattggat ctgtgaaggc agaggacctc gccgtctact attgccagca gtacagtaat 300
tatccatgga cttttggcgg agggaccagg ctggaaatca agagaggtgg aggagggtcc 360
ggtggaggag ggtctggtgg aggagggagt ggtggaggag ggtcagaggt gcagctgcag 420
cagtctggcc ccgaagtggt caaaactgga gcttcagtca aaatcagctg taaggcatct 480
gggtacagct tcaccggcta cttcatcaac tgggtgaaga aaaattcagg gaagagccct 540
gagtggatcg gccacatttc aagctcctac gccacaagca cttacaacca gaagttcaaa 600
aataaggccg cttttaccgt ggacacatct agttcaaccg ccttcatgca gctgaactcc 660
ctcacatctg aagatagtgc tgtgtactat tgtgtcagga gcggcaacta cgaagaatat 720
gctatggatt actgggggca ggggacctcc gtgactgtct caagc 765
<210> 2
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> IgK结构域的核酸序列
<400> 2
atggattttc aggtccagat tttctccttc ctcctcattt cagccagcgt cattatgtct 60
cgg 63
<210> 3
<211> 12
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> S5_BamHI_Kozak的核酸序列
<400> 3
ggatccgcca cc 12
<210> 4
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> S3_BamHI_Agel_Mlul_Sail_stop_Xhol的核酸序列
<400> 4
accggtacgc gtgtcgactg actcgag 27
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> S5_FCgRIIIa_BamHI_Kozak.start_Agel的核酸序列
<400> 5
ggatccgcca ccatgaccgg t 21
<210> 6
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> S3_FCgRIIIa_MluI_SalI_stop_XhoI的核酸序列
<400> 6
acgcgtgtcg actgactcga g 21
<210> 7
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dLNGFR_Fw_Agel的核酸序列
<400> 7
aaaaaaccgg tcttctgggg gtgtcccttg 30
<210> 8
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> dLNGFR_Rv_MluI的核酸序列
<400> 8
aaaaaacgcg tagttagcct cccccatctc c 31
<210> 9
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLT3_Fw_Agel的核酸序列
<400> 9
aaaaaaccgg tccaggcccc ttccctttca tc 32
<210> 10
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> FLT3 _Rv_Xhol的核酸序列
<400> 10
aaaaactcga gagaggcgag gctaatcttg g 31
<210> 11
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Tlr4_Fw_AgeI的核酸序列
<400> 11
aaaaaaccgg tcagctgtat tccctcagca ct 32
<210> 12
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Tlr4_Rv_SalI的核酸序列
<400> 12
aaaaagtcga ctgggtttag gccccagagt t 31
<210> 13
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccr2_Fw_Agel的核酸序列
<400> 13
aaaaaaccgg tatggaagac aataatatgt tacctc 36
<210> 14
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccr2_Rv_Mlul的核酸序列
<400> 14
aaaaaacgcg tatgtacaaa ctgctccctc c 31
<210> 15
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Itgb2_Fw_Agel的核酸序列
<400> 15
aaaaaaccgg taatgcacgg ctggtagagt g 31
<210> 16
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Itgb2_Rv_Mlul的核酸序列
<400> 16
aaaaaacgcg tgggggtcac atctgcttga t 31
<210> 17
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Csf2rb_Fw_Agel的核酸序列
<400> 17
aaaaaaccgg tactcagaag atggcttact cattca 36
<210> 18
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Csf2rb_Rv_Mlul的核酸序列
<400> 18
aaaaaacgcg ttggtgagat tgggaggaga c 31
<210> 19
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccrl_Fw_Agel的核酸序列
<400> 19
aaaaaaccgg tactccatgc caaaagactg ct 32
<210> 20
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccrl_Rv_Mlul的核酸序列
<400> 20
aaaaaacgcg taccttcctt ggttgacacc tatg 34
<210> 21
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccr5_Fw_Agel的核酸序列
<400> 21
aaaaaaccgg tatgtcagca ccctgccaaa aa 32
<210> 22
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Ccr5_Rv_Mlul的核酸序列
<400> 22
aaaaaacgcg tcattcctac tcccaagctg cat 33
<210> 23
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Cxcr4_Fw_Xmal的核酸序列
<400> 23
aaaaacccgg gttccgggat gaaaacgtcc a 31
<210> 24
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Cxcr4_Rv_Mlul的核酸序列
<400> 24
aaaaaacgcg ttgcataagt gttagctgga gtg 33
<210> 25
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Selplg_Fw_Agel的核酸序列
<400> 25
aaaaaaccgg tattgccacc actgacccta 30
<210> 26
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Selplg_Rv_Mlul的核酸序列
<400> 26
aaaaaacgcg tgcaaaggtc tcgcttaggt g 31
<210> 27
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗HER2 CHA21的氨基酸序列
<400> 27
Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Pro Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser Gln Thr Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Asn Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Phe Thr Arg Lys Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Gly Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Ser Asn Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu
130 135 140
Val Val Lys Thr Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly
145 150 155 160
Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Phe Ile Asn Trp Val Lys Lys Asn Ser Gly
165 170 175
Lys Ser Pro Glu Trp Ile Gly His Ile Ser Ser Ser Tyr Ala Thr Ser
180 185 190
Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asn Lys Ala Ala Phe Thr Val Asp Thr
195 200 205
Ser Ser Ser Thr Ala Phe Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp
210 215 220
Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Ser Gly Asn Tyr Glu Glu Tyr Ala
225 230 235 240
Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 28
<211> 250
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗HER2曲妥珠单抗基scFv的氨基酸序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (250)..(250)
<223> Xaa 可以是任何天然氨基酸
<400> 28
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Gly Ser Thr
100 105 110
Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Glu Val Gln Leu
115 120 125
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
130 135 140
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp
145 150 155 160
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr
165 170 175
Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
180 185 190
Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn
195 200 205
Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly
210 215 220
Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225 230 235 240
Thr Val Ser Ser Gly Thr Gly Thr Arg Xaa
245 250
<210> 29
<211> 242
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗HER2帕妥珠单抗基scFv的氨基酸序列
<400> 29
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
130 135 140
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
145 150 155 160
Thr Phe Thr Asp Tyr Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
165 170 175
Gly Leu Glu Trp Val Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile
180 185 190
Tyr Asn Gln Arg Phe Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser
195 200 205
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
210 215 220
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp
225 230 235 240
Tyr Trp
<210> 30
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗HER2 FRP5基scFv的氨基酸序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (243)..(243)
<223> Xaa 可以是任何天然氨基酸
<400> 30
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Pro Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Ser Thr Gly Glu Ser Thr Phe Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Asp Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Ser Glu Asp Met Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Glu Val Tyr His Gly Tyr Val Pro Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser His Lys Phe
130 135 140
Leu Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser
145 150 155 160
Gln Asp Val Tyr Asn Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
165 170 175
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Ser Arg Tyr Thr Gly Val
180 185 190
Pro Ser Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Pro Asp Phe Thr Phe Thr
195 200 205
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln
210 215 220
His Phe Arg Thr Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
225 230 235 240
Lys Arg Xaa
<210> 31
<211> 261
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自dLNGFR的蛋白质结构域的氨基酸序列
<400> 31
Leu Leu Gly Val Ser Leu Gly Gly Ala Lys Glu Ala Cys Pro Thr Gly
1 5 10 15
Leu Tyr Thr His Ser Gly Glu Cys Cys Lys Ala Cys Asn Leu Gly Glu
20 25 30
Gly Val Ala Gln Pro Cys Gly Ala Asn Gln Thr Val Cys Glu Pro Cys
35 40 45
Leu Asp Ser Val Thr Phe Ser Asp Val Val Ser Ala Thr Glu Pro Cys
50 55 60
Lys Pro Cys Thr Glu Cys Val Gly Leu Gln Ser Met Ser Ala Pro Cys
65 70 75 80
Val Glu Ala Asp Asp Ala Val Cys Arg Cys Ala Tyr Gly Tyr Tyr Gln
85 90 95
Asp Glu Thr Thr Gly Arg Cys Glu Ala Cys Arg Val Cys Glu Ala Gly
100 105 110
Ser Gly Leu Val Phe Ser Cys Gln Asp Lys Gln Asn Thr Val Cys Glu
115 120 125
Glu Cys Pro Asp Gly Thr Tyr Ser Asp Glu Ala Asn His Val Asp Pro
130 135 140
Cys Leu Pro Cys Thr Val Cys Glu Asp Thr Glu Arg Gln Leu Arg Glu
145 150 155 160
Cys Thr Arg Trp Ala Asp Ala Glu Cys Glu Glu Ile Pro Gly Arg Trp
165 170 175
Ile Thr Arg Ser Thr Pro Pro Glu Gly Ser Asp Ser Thr Ala Pro Ser
180 185 190
Thr Gln Glu Pro Glu Ala Pro Pro Glu Gln Asp Leu Ile Ala Ser Thr
195 200 205
Val Ala Gly Val Val Thr Thr Val Met Gly Ser Ser Gln Pro Val Val
210 215 220
Thr Arg Gly Thr Thr Asp Asn Leu Ile Pro Val Tyr Cys Ser Ile Leu
225 230 235 240
Ala Ala Val Val Val Gly Leu Val Ala Tyr Ile Ala Phe Lys Arg Trp
245 250 255
Asn Arg Gly Ile Leu
260
<210> 32
<211> 103
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自FcyRIIIA的蛋白质结构域的氨基酸序列
<400> 32
His Glu Asn Ser Glu Leu Leu Ile Pro Lys Ala Thr His Asn Asp Ser
1 5 10 15
Gly Ser Tyr Phe Cys Arg Gly Leu Ile Gly His Asn Asn Lys Ser Ser
20 25 30
Ala Ser Phe Arg Ile Ser Leu Gly Asp Pro Gly Ser Pro Ser Met Phe
35 40 45
Pro Pro Trp His Gln Ile Thr Phe Cys Leu Leu Ile Gly Leu Leu Phe
50 55 60
Ala Ile Asp Thr Val Leu Tyr Phe Ser Val Arg Arg Gly Leu Gln Ser
65 70 75 80
Pro Val Ala Asp Tyr Glu Glu Pro Lys Ile Gln Trp Ser Lys Glu Pro
85 90 95
Gln Asp Lys Thr Arg Val Asp
100
<210> 33
<211> 468
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自FLT3的蛋白质结构域的氨基酸序列
<400> 33
Pro Gly Pro Phe Pro Phe Ile Gln Asp Asn Ile Ser Phe Tyr Ala Thr
1 5 10 15
Ile Gly Leu Cys Leu Pro Phe Ile Val Val Leu Ile Val Leu Ile Cys
20 25 30
His Lys Tyr Lys Lys Gln Phe Arg Tyr Glu Ser Gln Leu Gln Met Ile
35 40 45
Gln Val Thr Gly Pro Leu Asp Asn Glu Tyr Phe Tyr Val Asp Phe Arg
50 55 60
Asp Tyr Glu Tyr Asp Leu Lys Trp Glu Phe Pro Arg Glu Asn Leu Glu
65 70 75 80
Phe Gly Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Arg Val Met Asn Ala
85 90 95
Thr Ala Tyr Gly Ile Ser Lys Thr Gly Val Ser Ile Gln Val Ala Val
100 105 110
Lys Met Leu Lys Glu Lys Ala Asp Ser Cys Glu Lys Glu Ala Leu Met
115 120 125
Ser Glu Leu Lys Met Met Thr His Leu Gly His His Asp Asn Ile Val
130 135 140
Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr Leu Ser Gly Pro Val Tyr Leu Ile Phe
145 150 155 160
Glu Tyr Cys Cys Tyr Gly Asp Leu Leu Asn Tyr Leu Arg Ser Lys Arg
165 170 175
Glu Lys Phe His Arg Thr Trp Thr Glu Ile Phe Lys Glu His Asn Phe
180 185 190
Ser Phe Tyr Pro Thr Phe Gln Ala His Ser Asn Ser Ser Met Pro Gly
195 200 205
Ser Arg Glu Val Gln Leu His Pro Pro Leu Asp Gln Leu Ser Gly Phe
210 215 220
Asn Gly Asn Leu Ile His Ser Glu Asp Glu Ile Glu Tyr Glu Asn Gln
225 230 235 240
Lys Arg Leu Ala Glu Glu Glu Glu Glu Asp Leu Asn Val Leu Thr Phe
245 250 255
Glu Asp Leu Leu Cys Phe Ala Tyr Gln Val Ala Lys Gly Met Glu Phe
260 265 270
Leu Glu Phe Lys Ser Cys Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val
275 280 285
Leu Val Thr His Gly Lys Val Val Lys Ile Cys Asp Phe Gly Leu Ala
290 295 300
Arg Asp Ile Leu Ser Asp Ser Ser Tyr Val Val Arg Gly Asn Ala Arg
305 310 315 320
Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Pro Glu Ser Leu Phe Glu Gly Ile Tyr
325 330 335
Thr Ile Lys Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Ile Leu Leu Trp Glu Ile
340 345 350
Phe Ser Leu Gly Val Asn Pro Tyr Pro Gly Ile Pro Val Asp Ala Asn
355 360 365
Phe Tyr Lys Leu Ile Gln Ser Gly Phe Lys Met Glu Gln Pro Phe Tyr
370 375 380
Ala Thr Glu Gly Ile Tyr Phe Val Met Gln Ser Cys Trp Ala Phe Asp
385 390 395 400
Ser Arg Lys Arg Pro Ser Phe Pro Asn Leu Thr Ser Phe Leu Gly Cys
405 410 415
Gln Leu Ala Glu Ala Glu Glu Ala Met Tyr Gln Asn Met Gly Gly Asn
420 425 430
Val Pro Glu His Pro Ser Ile Tyr Gln Asn Arg Arg Pro Leu Ser Arg
435 440 445
Glu Ala Gly Ser Glu Pro Pro Ser Pro Gln Ala Gln Val Lys Ile His
450 455 460
Gly Glu Arg Ser
465
<210> 34
<211> 296
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自TLR4的蛋白质结构域的氨基酸序列
<400> 34
Gln Leu Tyr Ser Leu Ser Thr Leu Asp Cys Ser Phe Asn Arg Ile Glu
1 5 10 15
Thr Ser Lys Gly Ile Leu Gln His Phe Pro Lys Ser Leu Ala Phe Phe
20 25 30
Asn Leu Thr Asn Asn Ser Val Ala Cys Ile Cys Glu His Gln Lys Phe
35 40 45
Leu Gln Trp Val Lys Glu Gln Lys Gln Phe Leu Val Asn Val Glu Gln
50 55 60
Met Thr Cys Ala Thr Pro Val Glu Met Asn Thr Ser Leu Val Leu Asp
65 70 75 80
Phe Asn Asn Ser Thr Cys Tyr Met Tyr Lys Thr Ile Ile Ser Val Ser
85 90 95
Val Val Ser Val Ile Val Val Ser Thr Val Ala Phe Leu Ile Tyr His
100 105 110
Phe Tyr Phe His Leu Ile Leu Ile Ala Gly Cys Lys Lys Tyr Ser Arg
115 120 125
Gly Glu Ser Ile Tyr Asp Ala Phe Val Ile Tyr Ser Ser Gln Asn Glu
130 135 140
Asp Trp Val Arg Asn Glu Leu Val Lys Asn Leu Glu Glu Gly Val Pro
145 150 155 160
Arg Phe His Leu Cys Leu His Tyr Arg Asp Phe Ile Pro Gly Val Ala
165 170 175
Ile Ala Ala Asn Ile Ile Gln Glu Gly Phe His Lys Ser Arg Lys Val
180 185 190
Ile Val Val Val Ser Arg His Phe Ile Gln Ser Arg Trp Cys Ile Phe
195 200 205
Glu Tyr Glu Ile Ala Gln Thr Trp Gln Phe Leu Ser Ser Arg Ser Gly
210 215 220
Ile Ile Phe Ile Val Leu Glu Lys Val Glu Lys Ser Leu Leu Arg Gln
225 230 235 240
Gln Val Glu Leu Tyr Arg Leu Leu Ser Arg Asn Thr Tyr Leu Glu Trp
245 250 255
Glu Asp Asn Pro Leu Gly Arg His Ile Phe Trp Arg Arg Leu Lys Asn
260 265 270
Ala Leu Leu Asp Gly Lys Ala Ser Asn Pro Glu Gln Thr Ala Glu Glu
275 280 285
Glu Gln Glu Thr Ala Thr Trp Thr
290 295
<210> 35
<211> 373
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自CCR2的蛋白质结构域的氨基酸序列
<400> 35
Met Glu Asp Asn Asn Met Leu Pro Gln Phe Ile His Gly Ile Leu Ser
1 5 10 15
Thr Ser His Ser Leu Phe Thr Arg Ser Ile Gln Glu Leu Asp Glu Gly
20 25 30
Ala Thr Thr Pro Tyr Asp Tyr Asp Asp Gly Glu Pro Cys His Lys Thr
35 40 45
Ser Val Lys Gln Ile Gly Ala Trp Ile Leu Pro Pro Leu Tyr Ser Leu
50 55 60
Val Phe Ile Phe Gly Phe Val Gly Asn Met Leu Val Ile Ile Ile Leu
65 70 75 80
Ile Gly Cys Lys Lys Leu Lys Ser Met Thr Asp Ile Tyr Leu Leu Asn
85 90 95
Leu Ala Ile Ser Asp Leu Leu Phe Leu Leu Thr Leu Pro Phe Trp Ala
100 105 110
His Tyr Ala Ala Asn Glu Trp Val Phe Gly Asn Ile Met Cys Lys Val
115 120 125
Phe Thr Gly Leu Tyr His Ile Gly Tyr Phe Gly Gly Ile Phe Phe Ile
130 135 140
Ile Leu Leu Thr Ile Asp Arg Tyr Leu Ala Ile Val His Ala Val Phe
145 150 155 160
Ala Leu Lys Ala Arg Thr Val Thr Phe Gly Val Ile Thr Ser Val Val
165 170 175
Thr Trp Val Val Ala Val Phe Ala Ser Leu Pro Gly Ile Ile Phe Thr
180 185 190
Lys Ser Lys Gln Asp Asp His His Tyr Thr Cys Gly Pro Tyr Phe Thr
195 200 205
Gln Leu Trp Lys Asn Phe Gln Thr Ile Met Arg Asn Ile Leu Ser Leu
210 215 220
Ile Leu Pro Leu Leu Val Met Val Ile Cys Tyr Ser Gly Ile Leu His
225 230 235 240
Thr Leu Phe Arg Cys Arg Asn Glu Lys Lys Arg His Arg Ala Val Arg
245 250 255
Leu Ile Phe Ala Ile Met Ile Val Tyr Phe Leu Phe Trp Thr Pro Tyr
260 265 270
Asn Ile Val Leu Phe Leu Thr Thr Phe Gln Glu Ser Leu Gly Met Ser
275 280 285
Asn Cys Val Ile Asp Lys His Leu Asp Gln Ala Met Gln Val Thr Glu
290 295 300
Thr Leu Gly Met Thr His Cys Cys Ile Asn Pro Val Ile Tyr Ala Phe
305 310 315 320
Val Gly Glu Lys Phe Arg Arg Tyr Leu Ser Ile Phe Phe Arg Lys His
325 330 335
Ile Ala Lys Arg Leu Cys Lys Gln Cys Pro Val Phe Tyr Arg Glu Thr
340 345 350
Ala Asp Arg Val Ser Ser Thr Phe Thr Pro Ser Thr Gly Glu Gln Glu
355 360 365
Val Ser Val Gly Leu
370
<210> 36
<211> 187
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自ITGB2的蛋白质结构域的氨基酸序列
<400> 36
Asn Ala Arg Leu Val Glu Cys Ser Gly Arg Gly His Cys Gln Cys Asn
1 5 10 15
Arg Cys Ile Cys Asp Glu Gly Tyr Gln Pro Pro Met Cys Glu Asp Cys
20 25 30
Pro Ser Cys Gly Ser His Cys Arg Asp Asn His Thr Ser Cys Ala Glu
35 40 45
Cys Leu Lys Phe Asp Lys Gly Pro Phe Glu Lys Asn Cys Ser Val Gln
50 55 60
Cys Ala Gly Met Thr Leu Gln Thr Ile Pro Leu Lys Lys Lys Pro Cys
65 70 75 80
Lys Glu Arg Asp Ser Glu Gly Cys Trp Ile Thr Tyr Thr Leu Gln Gln
85 90 95
Lys Asp Gly Arg Asn Ile Tyr Asn Ile His Val Glu Asp Ser Leu Glu
100 105 110
Cys Val Lys Gly Pro Asn Val Ala Ala Ile Val Gly Gly Thr Val Val
115 120 125
Gly Val Val Leu Ile Gly Val Leu Leu Leu Val Ile Trp Lys Ala Leu
130 135 140
Thr His Leu Thr Asp Leu Arg Glu Tyr Arg Arg Phe Glu Lys Glu Lys
145 150 155 160
Leu Lys Ser Gln Trp Asn Asn Asp Asn Pro Leu Phe Lys Ser Ala Thr
165 170 175
Thr Thr Val Met Asn Pro Lys Phe Ala Glu Ser
180 185
<210> 37
<211> 533
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自CSF2RB的蛋白质结构域的氨基酸序列
<400> 37
Thr Gln Lys Met Ala Tyr Ser Phe Ile Glu His Thr Phe Gln Val Gln
1 5 10 15
Tyr Lys Lys Lys Ser Asp Ser Trp Glu Asp Ser Lys Thr Glu Asn Leu
20 25 30
Asp Arg Ala His Ser Met Asp Leu Ser Gln Leu Glu Pro Asp Thr Ser
35 40 45
Tyr Cys Ala Arg Val Arg Val Lys Pro Ile Ser Asn Tyr Asp Gly Ile
50 55 60
Trp Ser Lys Trp Ser Glu Glu Tyr Thr Trp Lys Thr Asp Trp Val Met
65 70 75 80
Pro Thr Leu Trp Ile Val Leu Ile Leu Val Phe Leu Ile Leu Thr Leu
85 90 95
Leu Leu Ile Leu Arg Phe Gly Cys Val Ser Val Tyr Arg Thr Tyr Arg
100 105 110
Lys Trp Lys Glu Lys Ile Pro Asn Pro Ser Lys Ser Leu Leu Phe Gln
115 120 125
Asp Gly Gly Lys Gly Leu Trp Pro Pro Gly Ser Met Ala Ala Phe Ala
130 135 140
Thr Lys Asn Pro Ala Leu Gln Gly Pro Gln Ser Arg Leu Leu Ala Glu
145 150 155 160
Gln Gln Gly Glu Ser Tyr Ala His Leu Glu Asp Asn Asn Val Ser Pro
165 170 175
Leu Thr Ile Glu Asp Pro Asn Ile Ile Arg Val Pro Pro Ser Gly Pro
180 185 190
Asp Thr Thr Pro Ala Ala Ser Ser Glu Ser Thr Glu Gln Leu Pro Asn
195 200 205
Val Gln Val Glu Gly Pro Thr Pro Asn Arg Pro Arg Lys Gln Leu Pro
210 215 220
Ser Phe Asp Phe Asn Gly Pro Tyr Leu Gly Pro Pro Gln Ser His Ser
225 230 235 240
Leu Pro Asp Leu Pro Asp Gln Leu Gly Ser Pro Gln Val Gly Gly Ser
245 250 255
Leu Lys Pro Ala Leu Pro Gly Ser Leu Glu Tyr Met Cys Leu Pro Pro
260 265 270
Gly Gly Gln Ala Gln Leu Val Pro Leu Ser Gln Val Met Gly Gln Gly
275 280 285
Gln Ala Met Asp Val Gln Cys Gly Ser Ser Leu Glu Thr Ser Gly Ser
290 295 300
Pro Ser Val Glu Pro Lys Glu Asn Pro Pro Val Glu Leu Ser Met Glu
305 310 315 320
Glu Gln Glu Ala Arg Asp Asn Pro Val Thr Leu Pro Ile Ser Ser Gly
325 330 335
Gly Pro Glu Gly Ser Met Met Ala Ser Asp Tyr Val Thr Pro Gly Asp
340 345 350
Pro Val Leu Thr Leu Pro Thr Gly Pro Leu Ser Thr Ser Leu Gly Pro
355 360 365
Ser Leu Gly Leu Pro Ser Ala Gln Ser Pro Arg Leu Cys Leu Lys Leu
370 375 380
Pro Arg Val Pro Ser Gly Ser Pro Ala Leu Gly Pro Pro Gly Phe Glu
385 390 395 400
Asp Tyr Val Glu Leu Pro Pro Ser Val Ser Gln Ala Ala Lys Ser Pro
405 410 415
Pro Gly His Pro Ala Pro Pro Val Ala Ser Ser Pro Thr Val Ile Pro
420 425 430
Gly Glu Pro Arg Glu Glu Val Gly Pro Ala Ser Pro His Pro Glu Gly
435 440 445
Leu Leu Val Leu Gln Gln Val Gly Asp Tyr Cys Phe Leu Pro Gly Leu
450 455 460
Gly Pro Gly Ser Leu Ser Pro His Ser Lys Pro Pro Ser Pro Ser Leu
465 470 475 480
Cys Ser Glu Thr Glu Asp Leu Val Gln Asp Leu Ser Val Lys Lys Phe
485 490 495
Pro Tyr Gln Pro Met Pro Gln Ala Pro Ala Ile Gln Phe Phe Lys Ser
500 505 510
Leu Lys His Gln Asp Tyr Leu Ser Leu Pro Pro Trp Asp Asn Ser Gln
515 520 525
Ser Gly Lys Val Cys
530
<210> 38
<211> 334
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自CCR1的蛋白质结构域的氨基酸序列
<400> 38
Thr Pro Cys Gln Lys Thr Ala Val Arg Ala Phe Gly Ala Gly Leu Leu
1 5 10 15
Pro Pro Leu Tyr Ser Leu Val Phe Ile Ile Gly Val Val Gly Asn Val
20 25 30
Leu Val Ile Leu Val Leu Met Gln His Arg Arg Leu Gln Ser Met Thr
35 40 45
Ser Ile Tyr Leu Phe Asn Leu Ala Val Ser Asp Leu Val Phe Leu Phe
50 55 60
Thr Leu Pro Phe Trp Ile Asp Tyr Lys Leu Lys Asp Asp Trp Ile Phe
65 70 75 80
Gly Asp Ala Met Cys Lys Leu Leu Ser Gly Phe Tyr Tyr Leu Gly Leu
85 90 95
Tyr Ser Glu Ile Phe Phe Ile Ile Leu Leu Thr Ile Asp Arg Tyr Leu
100 105 110
Ala Ile Val His Ala Val Phe Ala Leu Arg Ala Arg Thr Val Thr Phe
115 120 125
Gly Ile Ile Thr Ser Ile Ile Thr Trp Ala Leu Ala Ile Leu Ala Ser
130 135 140
Met Pro Ala Leu Tyr Phe Phe Lys Ala Gln Trp Glu Phe Thr His Arg
145 150 155 160
Thr Cys Ser Pro His Phe Pro Tyr Lys Ser Leu Lys Gln Trp Lys Arg
165 170 175
Phe Gln Ala Leu Lys Leu Asn Leu Leu Gly Leu Ile Leu Pro Leu Leu
180 185 190
Val Met Ile Ile Cys Tyr Ala Gly Ile Ile Arg Ile Leu Leu Arg Arg
195 200 205
Pro Ser Glu Lys Lys Val Lys Ala Val Arg Leu Ile Phe Ala Ile Thr
210 215 220
Leu Leu Phe Phe Leu Leu Trp Thr Pro Tyr Asn Leu Ser Val Phe Val
225 230 235 240
Ser Ala Phe Gln Asp Val Leu Phe Thr Asn Gln Cys Glu Gln Ser Lys
245 250 255
Gln Leu Asp Leu Ala Met Gln Val Thr Glu Val Ile Ala Tyr Thr His
260 265 270
Cys Cys Val Asn Pro Ile Ile Tyr Val Phe Val Gly Glu Arg Phe Trp
275 280 285
Lys Tyr Leu Arg Gln Leu Phe Gln Arg His Val Ala Ile Pro Leu Ala
290 295 300
Lys Trp Leu Pro Phe Leu Ser Val Asp Gln Leu Glu Arg Thr Ser Ser
305 310 315 320
Ile Ser Pro Ser Thr Gly Glu His Glu Leu Ser Ala Gly Phe
325 330
<210> 39
<211> 337
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自CCR5的蛋白质结构域的氨基酸序列
<400> 39
Met Ser Ala Pro Cys Gln Lys Ile Asn Val Lys Gln Ile Ala Ala Gln
1 5 10 15
Leu Leu Pro Pro Leu Tyr Ser Leu Val Phe Ile Phe Gly Phe Val Gly
20 25 30
Asn Met Met Val Phe Leu Ile Leu Ile Ser Cys Lys Lys Leu Lys Ser
35 40 45
Val Thr Asp Ile Tyr Leu Leu Asn Leu Ala Ile Ser Asp Leu Leu Phe
50 55 60
Leu Leu Thr Leu Pro Phe Trp Ala His Tyr Ala Ala Asn Glu Trp Val
65 70 75 80
Phe Gly Asn Ile Met Cys Lys Val Phe Thr Gly Leu Tyr His Ile Gly
85 90 95
Tyr Phe Gly Gly Ile Phe Phe Ile Ile Leu Leu Thr Ile Asp Arg Tyr
100 105 110
Leu Ala Ile Val His Ala Val Phe Ala Leu Lys Val Arg Thr Val Asn
115 120 125
Phe Gly Val Ile Thr Ser Val Val Thr Trp Ala Val Ala Val Phe Ala
130 135 140
Ser Leu Pro Glu Ile Ile Phe Thr Arg Ser Gln Lys Glu Gly Phe His
145 150 155 160
Tyr Thr Cys Ser Pro His Phe Pro His Thr Gln Tyr His Phe Trp Lys
165 170 175
Ser Phe Gln Thr Leu Lys Met Val Ile Leu Ser Leu Ile Leu Pro Leu
180 185 190
Leu Val Met Val Ile Cys Tyr Ser Gly Ile Leu His Thr Leu Phe Arg
195 200 205
Cys Arg Asn Glu Lys Lys Arg His Arg Ala Val Arg Leu Ile Phe Ala
210 215 220
Ile Met Ile Val Tyr Phe Leu Phe Trp Thr Pro Tyr Asn Ile Val Leu
225 230 235 240
Leu Leu Thr Thr Phe Gln Glu Phe Phe Gly Leu Asn Asn Cys Ser Ser
245 250 255
Ser Asn Arg Leu Asp Gln Ala Met Gln Ala Thr Glu Thr Leu Gly Met
260 265 270
Thr His Cys Cys Leu Asn Pro Val Ile Tyr Ala Phe Val Gly Glu Lys
275 280 285
Phe Arg Ser Tyr Leu Ser Val Phe Phe Arg Lys His Ile Val Lys Arg
290 295 300
Phe Cys Lys Arg Cys Ser Ile Phe Gln Gln Asp Asn Pro Asp Arg Ala
305 310 315 320
Ser Ser Val Tyr Thr Arg Ser Thr Gly Glu His Glu Val Ser Thr Gly
325 330 335
Leu
<210> 40
<211> 329
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自CXCR4的蛋白质结构域的氨基酸序列
<400> 40
Phe Arg Asp Glu Asn Val His Phe Asn Arg Ile Phe Leu Pro Thr Ile
1 5 10 15
Tyr Phe Ile Ile Phe Leu Thr Gly Ile Val Gly Asn Gly Leu Val Ile
20 25 30
Leu Val Met Gly Tyr Gln Lys Lys Leu Arg Ser Met Thr Asp Lys Tyr
35 40 45
Arg Leu His Leu Ser Val Ala Asp Leu Leu Phe Val Ile Thr Leu Pro
50 55 60
Phe Trp Ala Val Asp Ala Met Ala Asp Trp Tyr Phe Gly Lys Phe Leu
65 70 75 80
Cys Lys Ala Val His Ile Ile Tyr Thr Val Asn Leu Tyr Ser Ser Val
85 90 95
Leu Ile Leu Ala Phe Ile Ser Leu Asp Arg Tyr Leu Ala Ile Val His
100 105 110
Ala Thr Asn Ser Gln Arg Pro Arg Lys Leu Leu Ala Glu Lys Ala Val
115 120 125
Tyr Val Gly Val Trp Ile Pro Ala Leu Leu Leu Thr Ile Pro Asp Phe
130 135 140
Ile Phe Ala Asp Val Ser Gln Gly Asp Ile Ser Gln Gly Asp Asp Arg
145 150 155 160
Tyr Ile Cys Asp Arg Leu Tyr Pro Asp Ser Leu Trp Met Val Val Phe
165 170 175
Gln Phe Gln His Ile Met Val Gly Leu Val Leu Pro Gly Ile Val Ile
180 185 190
Leu Ser Cys Tyr Cys Ile Ile Ile Ser Lys Leu Ser His Ser Lys Gly
195 200 205
His Gln Lys Arg Lys Ala Leu Lys Thr Thr Val Ile Leu Ile Leu Ala
210 215 220
Phe Phe Ala Cys Trp Leu Pro Tyr Tyr Val Gly Ile Ser Ile Asp Ser
225 230 235 240
Phe Ile Leu Leu Gly Val Ile Lys Gln Gly Cys Asp Phe Glu Ser Ile
245 250 255
Val His Lys Trp Ile Ser Ile Thr Glu Ala Leu Ala Phe Phe His Cys
260 265 270
Cys Leu Asn Pro Ile Leu Tyr Ala Phe Leu Gly Ala Lys Phe Lys Ser
275 280 285
Ser Ala Gln His Ala Leu Asn Ser Met Ser Arg Gly Ser Ser Leu Lys
290 295 300
Ile Leu Ser Lys Gly Lys Arg Gly Gly His Ser Ser Val Ser Thr Glu
305 310 315 320
Ser Glu Ser Ser Ser Phe His Ser Ser
325
<210> 41
<211> 297
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自SELPLG的蛋白质结构域的氨基酸序列
<400> 41
Ile Ala Thr Thr Asp Pro Thr Ala Pro Gly Thr Gly Gly Thr Ala Val
1 5 10 15
Gly Met Leu Ser Thr Asp Ser Ala Thr Gln Trp Ser Leu Thr Ser Val
20 25 30
Glu Thr Val Gln Pro Ala Ser Thr Glu Val Glu Thr Ser Gln Pro Ala
35 40 45
Pro Met Glu Ala Glu Thr Ser Gln Pro Ala Pro Met Glu Ala Glu Thr
50 55 60
Ser Gln Pro Ala Pro Met Glu Ala Asp Thr Ser Lys Pro Ala Pro Thr
65 70 75 80
Glu Ala Glu Thr Ser Lys Pro Ala Pro Thr Glu Ala Glu Thr Ser Gln
85 90 95
Pro Ala Pro Asn Glu Ala Glu Thr Ser Lys Pro Ala Pro Thr Glu Ala
100 105 110
Glu Thr Ser Lys Pro Ala Pro Thr Glu Ala Glu Thr Thr Gln Leu Pro
115 120 125
Arg Ile Gln Ala Val Lys Thr Leu Phe Thr Thr Ser Ala Ala Thr Glu
130 135 140
Val Pro Ser Thr Glu Pro Thr Thr Met Glu Thr Ala Ser Thr Glu Ser
145 150 155 160
Asn Glu Ser Thr Ile Phe Leu Gly Pro Ser Val Thr His Leu Pro Asp
165 170 175
Ser Gly Leu Lys Lys Gly Leu Ile Val Thr Pro Gly Asn Ser Pro Ala
180 185 190
Pro Thr Leu Pro Gly Ser Ser Asp Leu Ile Pro Val Lys Gln Cys Leu
195 200 205
Leu Ile Ile Leu Ile Leu Ala Ser Leu Ala Thr Ile Phe Leu Val Cys
210 215 220
Thr Val Val Leu Ala Val Arg Leu Ser Arg Lys Thr His Met Tyr Pro
225 230 235 240
Val Arg Asn Tyr Ser Pro Thr Glu Met Ile Cys Ile Ser Ser Leu Leu
245 250 255
Pro Glu Gly Gly Asp Gly Ala Pro Val Thr Ala Asn Gly Gly Leu Pro
260 265 270
Lys Val Gln Asp Leu Lys Thr Glu Pro Ser Gly Asp Arg Asp Gly Asp
275 280 285
Asp Leu Thr Leu His Ser Phe Leu Pro
290 295
<210> 42
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IgK结构域的氨基酸序列
<400> 42
Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Ile Met Ser Arg Gly
20
<210> 43
<211> 786
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自dLNGFR的蛋白质结构域的核酸序列
<400> 43
cttctggggg tgtcccttgg aggtgccaag gaggcatgcc ccacaggcct gtacacacac 60
agcggtgagt gctgcaaagc ctgcaacctg ggcgagggtg tggcccagcc ttgtggagcc 120
aaccagaccg tgtgtgagcc ctgcctggac agcgtgacgt tctccgacgt ggtgagcgcg 180
accgagccgt gcaagccgtg caccgagtgc gtggggctcc agagcatgtc ggcgccgtgc 240
gtggaggccg acgacgccgt gtgccgctgc gcctacggct actaccagga tgagacgact 300
gggcgctgcg aggcgtgccg cgtgtgcgag gcgggctcgg gcctcgtgtt ctcctgccag 360
gacaagcaga acaccgtgtg cgaggagtgc cccgacggca cgtattccga cgaggccaac 420
cacgtggacc cgtgcctgcc ctgcaccgtg tgcgaggaca ccgagcgcca gctccgcgag 480
tgcacacgct gggccgacgc cgagtgcgag gagatccctg gccgttggat tacacggtcc 540
acacccccag agggctcgga cagcacagcc cccagcaccc aggagcctga ggcacctcca 600
gaacaagacc tcatagccag cacggtggca ggtgtggtga ccacagtgat gggcagctcc 660
cagcccgtgg tgacccgagg caccaccgac aacctcatcc ctgtctattg ctccatcctg 720
gctgctgtgg ttgtgggcct tgtggcctac atagccttca agaggtggaa cagggggatc 780
ctctag 786
<210> 44
<211> 312
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自FcyRIIIA的蛋白质结构域的核酸序列
<400> 44
cacgagaact ccgaactgct gattcctaag gcaactcaca acgactccgg ctcctatttc 60
tgtagagggc tgattggaca taacaacaag agctccgcct cattcaggat tagcctgggc 120
gacccagggt ctcccagtat gttcccccct tggcaccaga tcaccttttg cctgctgatt 180
ggactgctgt tcgctatcga tacagtgctg tacttttctg tccggagagg cctgcagtca 240
cccgtggcag attacgaaga acccaagatt cagtggagca aggagcccca ggataagacg 300
cgtgtcgact ga 312
<210> 45
<211> 1407
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自FLT3的蛋白质结构域的核酸序列
<400> 45
ccaggcccct tccctttcat ccaagacaac atctccttct atgcgaccat tgggctctgt 60
ctccccttca ttgttgttct cattgtgttg atctgccaca aatacaaaaa gcaatttagg 120
tacgagagtc agctgcagat gatccaggtg actggccccc tggataacga gtacttctac 180
gttgacttca gggactatga atatgacctt aagtgggagt tcccgagaga gaacttagag 240
tttgggaagg tcctggggtc tggcgctttc gggagggtga tgaacgccac ggcctatggc 300
attagtaaaa cgggagtctc aattcaggtg gcggtgaaga tgctaaaaga gaaagctgac 360
agctgtgaaa aagaagctct catgtcggag ctcaaaatga tgacccacct gggacaccat 420
gacaacatcg tgaatctgct gggggcatgc acactgtcag ggccagtgta cttgattttt 480
gaatattgtt gctatggtga cctcctcaac tacctaagaa gtaaaagaga gaagtttcac 540
aggacatgga cagagatttt taaggaacat aatttcagtt tttaccctac tttccaggca 600
cattcaaatt ccagcatgcc tggttcacga gaagttcagt tacacccgcc cttggatcag 660
ctctcagggt tcaatgggaa tttaattcat tctgaagatg agattgaata tgaaaaccag 720
aagaggctgg cagaagaaga ggaggaagat ttgaacgtgc tgacgtttga agacctcctt 780
tgctttgcgt accaagtggc caaaggcatg gaattcctgg agttcaagtc gtgtgtccac 840
agagacctgg cagccaggaa tgtgttggtc acccacggga aggtggtgaa gatctgtgac 900
tttggactgg cccgagacat cctgagcgac tccagctacg tcgtcagggg caacgcacgg 960
ctgccggtga agtggatggc acctgagagc ttatttgaag ggatctacac aatcaagagt 1020
gacgtctggt cctacggcat ccttctctgg gagatatttt cactgggtgt gaacccttac 1080
cctggcattc ctgtcgacgc taacttctat aaactgattc agagtggatt taaaatggag 1140
cagccattct atgccacaga agggatatac tttgtaatgc aatcctgctg ggcttttgac 1200
tcaaggaagc ggccatcctt ccccaacctg acttcatttt taggatgtca gctggcagag 1260
gcagaagaag cgatgtatca gaacatgggt ggcaacgtcc cagaacatcc atccatctac 1320
caaaacaggc ggcccctcag cagagaggca ggctcagagc cgccatcgcc acaggcccag 1380
gtgaagattc acggagaaag aagttag 1407
<210> 46
<211> 891
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自TLR4的蛋白质结构域的核酸序列
<400> 46
cagctgtatt ccctcagcac tcttgattgc agtttcaatc gcatagagac atctaaagga 60
atactgcaac attttccaaa gagtctagcc ttcttcaatc ttactaacaa ttctgttgct 120
tgtatatgtg aacatcagaa attcctgcag tgggtcaagg aacagaagca gttcttggtg 180
aatgttgaac aaatgacatg tgcaacacct gtagagatga atacctcctt agtgttggat 240
tttaataatt ctacctgtta tatgtacaag acaatcatca gtgtgtcagt ggtcagtgtg 300
attgtggtat ccactgtagc atttctgata taccacttct attttcacct gatacttatt 360
gctggctgta aaaagtacag cagaggagaa agcatctatg atgcatttgt gatctactcg 420
agtcagaatg aggactgggt gagaaatgag ctggtaaaga atttagaaga aggagtgccc 480
cgctttcacc tctgccttca ctacagagac tttattcctg gtgtagccat tgctgccaac 540
atcatccagg aaggcttcca caagagccgg aaggttattg tggtagtgtc tagacacttt 600
attcagagcc gttggtgtat ctttgaatat gagattgctc aaacatggca gtttctgagc 660
agccgctctg gcatcatctt cattgtcctt gagaaggttg agaagtccct gctgaggcag 720
caggtggaat tgtatcgcct tcttagcaga aacacctacc tggaatggga ggacaatcct 780
ctggggaggc acatcttctg gagaagactt aaaaatgccc tattggatgg aaaagcctcg 840
aatcctgagc aaacagcaga ggaagaacaa gaaacggcaa cttggacctg a 891
<210> 47
<211> 1122
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自CCR2的蛋白质结构域的核酸序列
<400> 47
atggaagaca ataatatgtt acctcagttc atccatggca tactatcaac atctcattct 60
ctatttacac gaagtatcca agagcttgat gaaggggcca ccacaccgta tgactacgat 120
gatggtgagc cttgtcataa aaccagtgtg aagcaaattg gagcttggat cctgcctcca 180
ctctactccc tggtattcat ctttggtttt gtgggcaaca tgttggtcat tataattctg 240
ataggctgta aaaagctgaa gagcatgact gatatctatc tgctcaacct ggccatctct 300
gacctgctct tcctgctcac attaccattc tgggctcact atgctgcaaa tgagtgggtc 360
tttgggaata taatgtgtaa agtattcaca gggctctatc acattggtta ttttggtgga 420
atctttttca ttatcctcct gacaattgat aggtacttgg ctattgttca tgctgtgttt 480
gctttaaaag ccaggacagt tacctttggg gtgataacaa gtgtagtcac ttgggtggtg 540
gctgtgtttg cctctctacc aggaatcata tttactaaat ccaaacaaga tgatcaccat 600
tacacctgtg gcccttattt tacacaacta tggaagaatt tccaaacaat aatgagaaat 660
atcttgagcc tgatcctgcc tctacttgtc atggtcatct gctactcagg aattctccac 720
accctgtttc gctgtaggaa tgagaagaag aggcacaggg ctgtgaggct catctttgcc 780
atcatgattg tctactttct cttctggact ccatacaata ttgttctctt cttgaccacc 840
ttccaggaat ccttgggaat gagtaactgt gtgattgaca agcacttaga ccaggccatg 900
caggtgacag agactcttgg aatgacacac tgctgcatta atcctgtcat ttatgccttt 960
gttggagaga agttccgaag gtatctctcc atatttttca gaaagcacat tgctaaacgt 1020
ctctgcaaac agtgcccagt tttctatagg gagacagcag atcgagtgag ctctacattc 1080
actccttcca ctggggagca agaggtctcg gttgggttgt aa 1122
<210> 48
<211> 564
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自ITGB2的蛋白质结构域的核酸序列
<400> 48
aatgcacggc tggtagagtg cagtggccgt ggccactgcc aatgcaacag gtgcatatgt 60
gacgaaggct accagccacc gatgtgtgag gattgtccca gctgtggctc gcactgcagg 120
gacaaccaca cctcttgtgc cgagtgcctg aagtttgata agggcccttt tgagaagaac 180
tgtagtgttc agtgtgctgg tatgacgctg cagactatcc ctttgaagaa aaagccctgc 240
aaggagaggg actcggaagg ctgttggata acttacactt tgcagcagaa ggacggaagg 300
aacatttaca acatccatgt ggaggacagt ctagagtgtg tgaagggccc caatgtggct 360
gccatcgtag ggggcaccgt ggtaggtgtc gtactgattg gtgtcctcct cctggtcatc 420
tggaaggccc tgacccacct gactgacctc agggagtaca ggcgctttga gaaggagaaa 480
ctcaagtccc aatggaacaa tgacaacccc ctcttcaaga gtgctacgac aacggtcatg 540
aaccccaagt ttgctgaaag ctag 564
<210> 49
<211> 1602
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自CSF2RB的蛋白质结构域的核酸序列
<400> 49
actcagaaga tggcttactc attcattgag cacacattcc aggtccagta caagaagaaa 60
tcggacagct gggaggacag caagacagag aacctagatc gagcccatag catggacctc 120
tcccagctgg agccagacac ctcatactgc gccagggtga gggtcaagcc catctctaac 180
tacgatggga tctggagcaa gtggagcgaa gagtacactt ggaagactga ctgggtgatg 240
cccacgctgt ggatagtcct catcctggtc tttctcatcc tcaccttgct cctgatcctt 300
cgctttggct gtgtctctgt atacaggacg tacaggaagt ggaaggaaaa gatccccaac 360
cccagcaaga gcctcctgtt ccaggatgga ggtaaaggtc tctggcctcc tggcagcatg 420
gcagccttcg ccactaagaa ccccgctctc caggggccac agagcaggct tcttgctgag 480
caacaggggg agtcatatgc acatttggaa gacaacaacg tgtcacctct cactatagag 540
gaccctaata taattcgagt tccaccatcc gggcctgata caaccccagc tgcctcatcc 600
gaatccacag agcaacttcc caatgttcaa gtagagggac caactcctaa cagacctagg 660
aagcaattac ccagctttga cttcaatggg ccctacctgg ggcctcccca atcccactct 720
ctgcctgatc tcccagacca gctgggttcc ccccaggtgg gtgggagcct gaagccagca 780
ctgccaggct ccttggagta catgtgtctg ccccctggag gtcaagcgca actggttcca 840
ttgtcccagg tgatggggca gggccaggct atggatgtgc agtgtgggtc cagcctggag 900
acctcaggga gcccttctgt ggagccaaag gagaaccctc cagttgagct gagcatggag 960
gaacaggagg cacgggacaa cccagtgact ctgcccataa gctctggggg ccctgagggc 1020
agtatgatgg cctctgatta tgtcactcct ggagatccgg tgctcactct gcccacaggg 1080
cccctgtcta cctctctggg cccctctcta gggttgccct cagcccaaag cccccgtctc 1140
tgtcttaagc tgcccagggt cccctctgga agcccagctc tagggccacc agggtttgag 1200
gactatgtgg agctgcctcc aagtgtgagc caggctgcca agtcccctcc aggccatcct 1260
gctcctcctg tggcaagcag ccccacagtg atcccaggag agcccaggga ggaagtgggc 1320
ccagcatccc cacatcccga aggcctcctt gttcttcagc aggttgggga ctactgcttc 1380
ctccctggcc tgggacctgg ctccctctca ccacacagta agccaccctc tccaagtctg 1440
tgttctgaga ctgaggacct agtccaggac ttgtctgtca aaaagtttcc ctatcagccc 1500
atgccccagg cgccagccat tcagtttttc aagtccctaa agcatcagga ctacctgtcc 1560
ctgccccctt gggacaatag ccagtctggg aaggtgtgct ga 1602
<210> 50
<211> 1005
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自CCR1的蛋白质结构域的核酸序列
<400> 50
actccatgcc aaaagactgc tgtaagagcc tttggggctg gactcctgcc ccccctgtat 60
tctctagtgt tcatcattgg agtggtgggc aatgtcctag tgattctggt gctcatgcag 120
cataggaggc ttcaaagcat gaccagcatc tacctgttca acctggctgt ctctgatctg 180
gtcttccttt tcactttacc tttctggatt gactacaagt tgaaagacga ctggattttt 240
ggtgatgcca tgtgcaagct tctctctggg ttttattacc tgggtttata cagtgagatc 300
ttctttatca tcctgttgac gattgacaga tacctggcca ttgtccatgc tgtgtttgcc 360
ctgagggccc gaactgttac ttttggcatc atcaccagta ttatcacctg ggccctagcc 420
atcttagctt ccatgcctgc cttatacttt tttaaggccc agtgggagtt cactcaccgt 480
acctgtagcc ctcatttccc ctacaagagc ctgaagcagt ggaagaggtt tcaagctcta 540
aagctaaacc ttcttggact aattttgcct ctgttagtca tgataatctg ctatgcaggg 600
atcatcagaa ttctgctcag aagacccagt gagaagaagg tcaaagccgt gcgtctgata 660
tttgctatta ctcttctatt cttcctcctc tggaccccct acaatctgag tgtatttgtt 720
tctgctttcc aagatgttct attcaccaat cagtgtgagc agagtaagca actggacctg 780
gccatgcagg tgactgaggt gattgcctac acccactgtt gtgtcaaccc aatcatttat 840
gtttttgtgg gtgaacggtt ctggaagtac cttcggcagc tgtttcaaag gcatgtggct 900
ataccactgg caaaatggct gcccttcctc tctgtggacc aactagaaag gaccagttct 960
atatctccat ccacaggaga acatgagctc tctgctggct tctga 1005
<210> 51
<211> 1014
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自CCR5的蛋白质结构域的核酸序列
<400> 51
atgtcagcac cctgccaaaa aatcaatgtg aaacaaattg cggctcagct cctgccccca 60
ctctactccc tggtattcat ctttggtttt gtgggtaaca tgatggtctt cctcatcttg 120
ataagctgca aaaagctgaa gagcgtgact gatatctacc tgctcaacct ggccatctct 180
gacctgctct tcctgctcac actaccattc tgggctcact atgctgcaaa tgagtgggtc 240
tttgggaaca taatgtgtaa agtattcaca gggctctatc acattggtta ttttggtgga 300
atcttcttca ttatcctcct gacaattgat aggtacttgg ctattgtcca tgctgtgttt 360
gctttaaaag tcagaacggt caactttggg gtgataacaa gtgtagtcac ttgggcggtg 420
gctgtgtttg cctctctccc agaaataatc tttaccagat ctcagaaaga aggttttcat 480
tatacatgca gtcctcattt tccacacact cagtatcatt tctggaagag tttccaaaca 540
ttaaagatgg tcatcttgag cctgatcctg cctctacttg tcatggtcat ctgctactca 600
ggaattctcc acaccctgtt tcgctgtagg aatgagaaga agaggcacag ggctgtgagg 660
ctcatctttg ccatcatgat tgtctacttt ctcttctgga ctccctacaa cattgtcctc 720
ctcctgacca ccttccagga attctttgga ctgaataact gcagtagttc taatagacta 780
gaccaggcca tgcaggcaac agagactctt ggaatgacac actgctgcct aaaccctgtc 840
atctatgcct ttgttggaga gaagttccgg agttatctct cagtgttctt ccgaaaacac 900
attgtcaaac gcttttgcaa acggtgttca attttccagc aagacaatcc tgatcgtgca 960
agctcagtct atacccgatc cacaggagaa catgaagttt ctactggttt atga 1014
<210> 52
<211> 990
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自CXCR4的蛋白质结构域的核酸序列
<400> 52
ttccgggatg aaaacgtcca tttcaatagg atcttcctgc ccaccatcta cttcatcatc 60
ttcttgactg gcatagtcgg caatggattg gtgatcctgg tcatgggtta ccagaagaag 120
ctaaggagca tgacggacaa gtaccggctg cacctgtcag tggctgacct cctctttgtc 180
atcacactcc ccttctgggc agttgatgcc atggctgact ggtactttgg gaaatttttg 240
tgtaaggctg tccatatcat ctacactgtc aacctctaca gcagcgttct catcctggcc 300
ttcatcagcc tggaccggta cctcgctatt gtccacgcca ccaacagtca gaggccaagg 360
aaactgctgg ctgaaaaggc agtctatgtg ggcgtctgga tcccagccct cctcctgact 420
atacctgact tcatctttgc cgacgtcagc cagggggaca tcagtcaggg ggatgacagg 480
tacatctgtg accgccttta ccccgatagc ctgtggatgg tggtgtttca attccagcat 540
ataatggtgg gtctcgtcct gcccggcatc gtcatcctct cctgttactg catcatcatc 600
tctaagctgt cacactccaa gggccaccag aagcgcaagg ccctcaagac gacagtcatc 660
ctcatcctag ctttctttgc ctgctggctg ccatattatg tggggatcag catcgactcc 720
ttcatccttt tgggggtcat caagcaagga tgtgacttcg agagcatcgt gcacaagtgg 780
atctccatca cagaggccct cgccttcttc cactgttgcc tgaaccccat cctctatgcc 840
ttcctcgggg ccaagttcaa aagctctgcc cagcatgcac tcaactccat gagcagaggc 900
tccagcctca agatcctttc caaaggaaag cggggtggac actcttccgt ctccacggag 960
tcagaatcct ccagttttca ctccagctaa 990
<210> 53
<211> 894
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自SELPLG的蛋白质结构域的核酸序列
<400> 53
attgccacca ctgaccctac tgccccaggt acaggaggga cagctgttgg gatgctgagc 60
acagactctg ccacacagtg gagtctaacc tcagtagaga ccgtccaacc agcatccaca 120
gaggtagaga cctcgcagcc agcacccatg gaggcagaga cctcgcagcc agcacccatg 180
gaggcagaga cctcgcagcc agcacccatg gaggcagaca cctcaaagcc agcacccacg 240
gaggcagaga cctcaaagcc agcacccacg gaggcagaga cctctcagcc agcacccaac 300
gaggcagaga cctcaaaacc agcacccacg gaggcagaga cctcaaaacc agcacccacg 360
gaggcagaga ccacccagct tcccaggatt caggctgtaa aaactctgtt tacaacgtct 420
gcagccaccg aagtcccttc cacagaacct accaccatgg agacggcgtc cacagagtct 480
aacgagtcta ccatcttcct tgggccatcc gtgactcact tacctgacag cggcctgaag 540
aaagggctga ttgtgacccc tgggaattca cctgccccaa ccctgccagg gagttcagat 600
ctcatcccgg tgaagcaatg tctgctgatt atcctcatct tggcttctct ggccaccatc 660
ttcctcgtgt gcacagtggt gctggcggtc cgtctgtccc gtaagaccca catgtaccca 720
gtgcggaact actcccccac ggagatgatc tgcatctcgt ccctgctacc tgagggggga 780
gacggggccc ctgtcacagc caatgggggc ctgcccaagg tccaggacct gaagacagag 840
cccagtgggg accgggatgg ggacgacctc accctgcaca gcttcctccc ttag 894
<210> 54
<211> 539
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-N的氨基酸序列
<400> 54
Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Ile Met Ser Arg Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser
20 25 30
Leu Pro Val Ser Val Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser
35 40 45
Gln Thr Leu Leu Tyr Ser Asn Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr
50 55 60
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Phe
65 70 75 80
Thr Arg Lys Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly
85 90 95
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Gly Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly
115 120 125
Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu
145 150 155 160
Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Thr Gly Ala Ser Val Lys Ile
165 170 175
Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Phe Ile Asn Trp
180 185 190
Val Lys Lys Asn Ser Gly Lys Ser Pro Glu Trp Ile Gly His Ile Ser
195 200 205
Ser Ser Tyr Ala Thr Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asn Lys Ala
210 215 220
Ala Phe Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Phe Met Gln Leu Asn
225 230 235 240
Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Ser Gly
245 250 255
Asn Tyr Glu Glu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
260 265 270
Thr Val Ser Ser Thr Gly Leu Leu Gly Val Ser Leu Gly Gly Ala Lys
275 280 285
Glu Ala Cys Pro Thr Gly Leu Tyr Thr His Ser Gly Glu Cys Cys Lys
290 295 300
Ala Cys Asn Leu Gly Glu Gly Val Ala Gln Pro Cys Gly Ala Asn Gln
305 310 315 320
Thr Val Cys Glu Pro Cys Leu Asp Ser Val Thr Phe Ser Asp Val Val
325 330 335
Ser Ala Thr Glu Pro Cys Lys Pro Cys Thr Glu Cys Val Gly Leu Gln
340 345 350
Ser Met Ser Ala Pro Cys Val Glu Ala Asp Asp Ala Val Cys Arg Cys
355 360 365
Ala Tyr Gly Tyr Tyr Gln Asp Glu Thr Thr Gly Arg Cys Glu Ala Cys
370 375 380
Arg Val Cys Glu Ala Gly Ser Gly Leu Val Phe Ser Cys Gln Asp Lys
385 390 395 400
Gln Asn Thr Val Cys Glu Glu Cys Pro Asp Gly Thr Tyr Ser Asp Glu
405 410 415
Ala Asn His Val Asp Pro Cys Leu Pro Cys Thr Val Cys Glu Asp Thr
420 425 430
Glu Arg Gln Leu Arg Glu Cys Thr Arg Trp Ala Asp Ala Glu Cys Glu
435 440 445
Glu Ile Pro Gly Arg Trp Ile Thr Arg Ser Thr Pro Pro Glu Gly Ser
450 455 460
Asp Ser Thr Ala Pro Ser Thr Gln Glu Pro Glu Ala Pro Pro Glu Gln
465 470 475 480
Asp Leu Ile Ala Ser Thr Val Ala Gly Val Val Thr Thr Val Met Gly
485 490 495
Ser Ser Gln Pro Val Val Thr Arg Gly Thr Thr Asp Asn Leu Ile Pro
500 505 510
Val Tyr Cys Ser Ile Leu Ala Ala Val Val Val Gly Leu Val Ala Tyr
515 520 525
Ile Ala Phe Lys Arg Trp Asn Arg Gly Ile Leu
530 535
<210> 55
<211> 381
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-G的氨基酸序列
<400> 55
Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Ile Met Ser Arg Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser
20 25 30
Leu Pro Val Ser Val Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser
35 40 45
Gln Thr Leu Leu Tyr Ser Asn Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr
50 55 60
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Phe
65 70 75 80
Thr Arg Lys Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly
85 90 95
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Gly Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly
115 120 125
Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu
145 150 155 160
Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Thr Gly Ala Ser Val Lys Ile
165 170 175
Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Phe Ile Asn Trp
180 185 190
Val Lys Lys Asn Ser Gly Lys Ser Pro Glu Trp Ile Gly His Ile Ser
195 200 205
Ser Ser Tyr Ala Thr Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asn Lys Ala
210 215 220
Ala Phe Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Phe Met Gln Leu Asn
225 230 235 240
Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Ser Gly
245 250 255
Asn Tyr Glu Glu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
260 265 270
Thr Val Ser Ser Thr Gly His Glu Asn Ser Glu Leu Leu Ile Pro Lys
275 280 285
Ala Thr His Asn Asp Ser Gly Ser Tyr Phe Cys Arg Gly Leu Ile Gly
290 295 300
His Asn Asn Lys Ser Ser Ala Ser Phe Arg Ile Ser Leu Gly Asp Pro
305 310 315 320
Gly Ser Pro Ser Met Phe Pro Pro Trp His Gln Ile Thr Phe Cys Leu
325 330 335
Leu Ile Gly Leu Leu Phe Ala Ile Asp Thr Val Leu Tyr Phe Ser Val
340 345 350
Arg Arg Gly Leu Gln Ser Pro Val Ala Asp Tyr Glu Glu Pro Lys Ile
355 360 365
Gln Trp Ser Lys Glu Pro Gln Asp Lys Thr Arg Val Asp
370 375 380
<210> 56
<211> 746
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-F的氨基酸序列
<400> 56
Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Ile Met Ser Arg Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser
20 25 30
Leu Pro Val Ser Val Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser
35 40 45
Gln Thr Leu Leu Tyr Ser Asn Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr
50 55 60
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Phe
65 70 75 80
Thr Arg Lys Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly
85 90 95
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Gly Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly
115 120 125
Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu
145 150 155 160
Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Thr Gly Ala Ser Val Lys Ile
165 170 175
Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Phe Ile Asn Trp
180 185 190
Val Lys Lys Asn Ser Gly Lys Ser Pro Glu Trp Ile Gly His Ile Ser
195 200 205
Ser Ser Tyr Ala Thr Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asn Lys Ala
210 215 220
Ala Phe Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Phe Met Gln Leu Asn
225 230 235 240
Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Ser Gly
245 250 255
Asn Tyr Glu Glu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
260 265 270
Thr Val Ser Ser Thr Gly Pro Gly Pro Phe Pro Phe Ile Gln Asp Asn
275 280 285
Ile Ser Phe Tyr Ala Thr Ile Gly Leu Cys Leu Pro Phe Ile Val Val
290 295 300
Leu Ile Val Leu Ile Cys His Lys Tyr Lys Lys Gln Phe Arg Tyr Glu
305 310 315 320
Ser Gln Leu Gln Met Ile Gln Val Thr Gly Pro Leu Asp Asn Glu Tyr
325 330 335
Phe Tyr Val Asp Phe Arg Asp Tyr Glu Tyr Asp Leu Lys Trp Glu Phe
340 345 350
Pro Arg Glu Asn Leu Glu Phe Gly Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe
355 360 365
Gly Arg Val Met Asn Ala Thr Ala Tyr Gly Ile Ser Lys Thr Gly Val
370 375 380
Ser Ile Gln Val Ala Val Lys Met Leu Lys Glu Lys Ala Asp Ser Cys
385 390 395 400
Glu Lys Glu Ala Leu Met Ser Glu Leu Lys Met Met Thr His Leu Gly
405 410 415
His His Asp Asn Ile Val Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr Leu Ser Gly
420 425 430
Pro Val Tyr Leu Ile Phe Glu Tyr Cys Cys Tyr Gly Asp Leu Leu Asn
435 440 445
Tyr Leu Arg Ser Lys Arg Glu Lys Phe His Arg Thr Trp Thr Glu Ile
450 455 460
Phe Lys Glu His Asn Phe Ser Phe Tyr Pro Thr Phe Gln Ala His Ser
465 470 475 480
Asn Ser Ser Met Pro Gly Ser Arg Glu Val Gln Leu His Pro Pro Leu
485 490 495
Asp Gln Leu Ser Gly Phe Asn Gly Asn Leu Ile His Ser Glu Asp Glu
500 505 510
Ile Glu Tyr Glu Asn Gln Lys Arg Leu Ala Glu Glu Glu Glu Glu Asp
515 520 525
Leu Asn Val Leu Thr Phe Glu Asp Leu Leu Cys Phe Ala Tyr Gln Val
530 535 540
Ala Lys Gly Met Glu Phe Leu Glu Phe Lys Ser Cys Val His Arg Asp
545 550 555 560
Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Thr His Gly Lys Val Val Lys Ile
565 570 575
Cys Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp Ile Leu Ser Asp Ser Ser Tyr Val
580 585 590
Val Arg Gly Asn Ala Arg Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Pro Glu Ser
595 600 605
Leu Phe Glu Gly Ile Tyr Thr Ile Lys Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly
610 615 620
Ile Leu Leu Trp Glu Ile Phe Ser Leu Gly Val Asn Pro Tyr Pro Gly
625 630 635 640
Ile Pro Val Asp Ala Asn Phe Tyr Lys Leu Ile Gln Ser Gly Phe Lys
645 650 655
Met Glu Gln Pro Phe Tyr Ala Thr Glu Gly Ile Tyr Phe Val Met Gln
660 665 670
Ser Cys Trp Ala Phe Asp Ser Arg Lys Arg Pro Ser Phe Pro Asn Leu
675 680 685
Thr Ser Phe Leu Gly Cys Gln Leu Ala Glu Ala Glu Glu Ala Met Tyr
690 695 700
Gln Asn Met Gly Gly Asn Val Pro Glu His Pro Ser Ile Tyr Gln Asn
705 710 715 720
Arg Arg Pro Leu Ser Arg Glu Ala Gly Ser Glu Pro Pro Ser Pro Gln
725 730 735
Ala Gln Val Lys Ile His Gly Glu Arg Ser
740 745
<210> 57
<211> 574
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-T的氨基酸序列
<400> 57
Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Ile Met Ser Arg Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser
20 25 30
Leu Pro Val Ser Val Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser
35 40 45
Gln Thr Leu Leu Tyr Ser Asn Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr
50 55 60
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Phe
65 70 75 80
Thr Arg Lys Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly
85 90 95
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Gly Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly
115 120 125
Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu
145 150 155 160
Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Thr Gly Ala Ser Val Lys Ile
165 170 175
Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Phe Ile Asn Trp
180 185 190
Val Lys Lys Asn Ser Gly Lys Ser Pro Glu Trp Ile Gly His Ile Ser
195 200 205
Ser Ser Tyr Ala Thr Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asn Lys Ala
210 215 220
Ala Phe Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Phe Met Gln Leu Asn
225 230 235 240
Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Ser Gly
245 250 255
Asn Tyr Glu Glu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
260 265 270
Thr Val Ser Ser Thr Gly Gln Leu Tyr Ser Leu Ser Thr Leu Asp Cys
275 280 285
Ser Phe Asn Arg Ile Glu Thr Ser Lys Gly Ile Leu Gln His Phe Pro
290 295 300
Lys Ser Leu Ala Phe Phe Asn Leu Thr Asn Asn Ser Val Ala Cys Ile
305 310 315 320
Cys Glu His Gln Lys Phe Leu Gln Trp Val Lys Glu Gln Lys Gln Phe
325 330 335
Leu Val Asn Val Glu Gln Met Thr Cys Ala Thr Pro Val Glu Met Asn
340 345 350
Thr Ser Leu Val Leu Asp Phe Asn Asn Ser Thr Cys Tyr Met Tyr Lys
355 360 365
Thr Ile Ile Ser Val Ser Val Val Ser Val Ile Val Val Ser Thr Val
370 375 380
Ala Phe Leu Ile Tyr His Phe Tyr Phe His Leu Ile Leu Ile Ala Gly
385 390 395 400
Cys Lys Lys Tyr Ser Arg Gly Glu Ser Ile Tyr Asp Ala Phe Val Ile
405 410 415
Tyr Ser Ser Gln Asn Glu Asp Trp Val Arg Asn Glu Leu Val Lys Asn
420 425 430
Leu Glu Glu Gly Val Pro Arg Phe His Leu Cys Leu His Tyr Arg Asp
435 440 445
Phe Ile Pro Gly Val Ala Ile Ala Ala Asn Ile Ile Gln Glu Gly Phe
450 455 460
His Lys Ser Arg Lys Val Ile Val Val Val Ser Arg His Phe Ile Gln
465 470 475 480
Ser Arg Trp Cys Ile Phe Glu Tyr Glu Ile Ala Gln Thr Trp Gln Phe
485 490 495
Leu Ser Ser Arg Ser Gly Ile Ile Phe Ile Val Leu Glu Lys Val Glu
500 505 510
Lys Ser Leu Leu Arg Gln Gln Val Glu Leu Tyr Arg Leu Leu Ser Arg
515 520 525
Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Glu Asp Asn Pro Leu Gly Arg His Ile Phe
530 535 540
Trp Arg Arg Leu Lys Asn Ala Leu Leu Asp Gly Lys Ala Ser Asn Pro
545 550 555 560
Glu Gln Thr Ala Glu Glu Glu Gln Glu Thr Ala Thr Trp Thr
565 570
<210> 58
<211> 651
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-C2的氨基酸序列
<400> 58
Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Ile Met Ser Arg Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser
20 25 30
Leu Pro Val Ser Val Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser
35 40 45
Gln Thr Leu Leu Tyr Ser Asn Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr
50 55 60
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Phe
65 70 75 80
Thr Arg Lys Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly
85 90 95
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Gly Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly
115 120 125
Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu
145 150 155 160
Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Thr Gly Ala Ser Val Lys Ile
165 170 175
Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Phe Ile Asn Trp
180 185 190
Val Lys Lys Asn Ser Gly Lys Ser Pro Glu Trp Ile Gly His Ile Ser
195 200 205
Ser Ser Tyr Ala Thr Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asn Lys Ala
210 215 220
Ala Phe Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Phe Met Gln Leu Asn
225 230 235 240
Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Ser Gly
245 250 255
Asn Tyr Glu Glu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
260 265 270
Thr Val Ser Ser Thr Gly Met Glu Asp Asn Asn Met Leu Pro Gln Phe
275 280 285
Ile His Gly Ile Leu Ser Thr Ser His Ser Leu Phe Thr Arg Ser Ile
290 295 300
Gln Glu Leu Asp Glu Gly Ala Thr Thr Pro Tyr Asp Tyr Asp Asp Gly
305 310 315 320
Glu Pro Cys His Lys Thr Ser Val Lys Gln Ile Gly Ala Trp Ile Leu
325 330 335
Pro Pro Leu Tyr Ser Leu Val Phe Ile Phe Gly Phe Val Gly Asn Met
340 345 350
Leu Val Ile Ile Ile Leu Ile Gly Cys Lys Lys Leu Lys Ser Met Thr
355 360 365
Asp Ile Tyr Leu Leu Asn Leu Ala Ile Ser Asp Leu Leu Phe Leu Leu
370 375 380
Thr Leu Pro Phe Trp Ala His Tyr Ala Ala Asn Glu Trp Val Phe Gly
385 390 395 400
Asn Ile Met Cys Lys Val Phe Thr Gly Leu Tyr His Ile Gly Tyr Phe
405 410 415
Gly Gly Ile Phe Phe Ile Ile Leu Leu Thr Ile Asp Arg Tyr Leu Ala
420 425 430
Ile Val His Ala Val Phe Ala Leu Lys Ala Arg Thr Val Thr Phe Gly
435 440 445
Val Ile Thr Ser Val Val Thr Trp Val Val Ala Val Phe Ala Ser Leu
450 455 460
Pro Gly Ile Ile Phe Thr Lys Ser Lys Gln Asp Asp His His Tyr Thr
465 470 475 480
Cys Gly Pro Tyr Phe Thr Gln Leu Trp Lys Asn Phe Gln Thr Ile Met
485 490 495
Arg Asn Ile Leu Ser Leu Ile Leu Pro Leu Leu Val Met Val Ile Cys
500 505 510
Tyr Ser Gly Ile Leu His Thr Leu Phe Arg Cys Arg Asn Glu Lys Lys
515 520 525
Arg His Arg Ala Val Arg Leu Ile Phe Ala Ile Met Ile Val Tyr Phe
530 535 540
Leu Phe Trp Thr Pro Tyr Asn Ile Val Leu Phe Leu Thr Thr Phe Gln
545 550 555 560
Glu Ser Leu Gly Met Ser Asn Cys Val Ile Asp Lys His Leu Asp Gln
565 570 575
Ala Met Gln Val Thr Glu Thr Leu Gly Met Thr His Cys Cys Ile Asn
580 585 590
Pro Val Ile Tyr Ala Phe Val Gly Glu Lys Phe Arg Arg Tyr Leu Ser
595 600 605
Ile Phe Phe Arg Lys His Ile Ala Lys Arg Leu Cys Lys Gln Cys Pro
610 615 620
Val Phe Tyr Arg Glu Thr Ala Asp Arg Val Ser Ser Thr Phe Thr Pro
625 630 635 640
Ser Thr Gly Glu Gln Glu Val Ser Val Gly Leu
645 650
<210> 59
<211> 465
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-I的氨基酸序列
<400> 59
Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Ile Met Ser Arg Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser
20 25 30
Leu Pro Val Ser Val Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser
35 40 45
Gln Thr Leu Leu Tyr Ser Asn Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr
50 55 60
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Phe
65 70 75 80
Thr Arg Lys Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly
85 90 95
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Gly Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly
115 120 125
Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu
145 150 155 160
Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Thr Gly Ala Ser Val Lys Ile
165 170 175
Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Phe Ile Asn Trp
180 185 190
Val Lys Lys Asn Ser Gly Lys Ser Pro Glu Trp Ile Gly His Ile Ser
195 200 205
Ser Ser Tyr Ala Thr Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asn Lys Ala
210 215 220
Ala Phe Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Phe Met Gln Leu Asn
225 230 235 240
Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Ser Gly
245 250 255
Asn Tyr Glu Glu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
260 265 270
Thr Val Ser Ser Thr Gly Asn Ala Arg Leu Val Glu Cys Ser Gly Arg
275 280 285
Gly His Cys Gln Cys Asn Arg Cys Ile Cys Asp Glu Gly Tyr Gln Pro
290 295 300
Pro Met Cys Glu Asp Cys Pro Ser Cys Gly Ser His Cys Arg Asp Asn
305 310 315 320
His Thr Ser Cys Ala Glu Cys Leu Lys Phe Asp Lys Gly Pro Phe Glu
325 330 335
Lys Asn Cys Ser Val Gln Cys Ala Gly Met Thr Leu Gln Thr Ile Pro
340 345 350
Leu Lys Lys Lys Pro Cys Lys Glu Arg Asp Ser Glu Gly Cys Trp Ile
355 360 365
Thr Tyr Thr Leu Gln Gln Lys Asp Gly Arg Asn Ile Tyr Asn Ile His
370 375 380
Val Glu Asp Ser Leu Glu Cys Val Lys Gly Pro Asn Val Ala Ala Ile
385 390 395 400
Val Gly Gly Thr Val Val Gly Val Val Leu Ile Gly Val Leu Leu Leu
405 410 415
Val Ile Trp Lys Ala Leu Thr His Leu Thr Asp Leu Arg Glu Tyr Arg
420 425 430
Arg Phe Glu Lys Glu Lys Leu Lys Ser Gln Trp Asn Asn Asp Asn Pro
435 440 445
Leu Phe Lys Ser Ala Thr Thr Thr Val Met Asn Pro Lys Phe Ala Glu
450 455 460
Ser
465
<210> 60
<211> 811
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-C的氨基酸序列
<400> 60
Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Ile Met Ser Arg Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser
20 25 30
Leu Pro Val Ser Val Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser
35 40 45
Gln Thr Leu Leu Tyr Ser Asn Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr
50 55 60
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Phe
65 70 75 80
Thr Arg Lys Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly
85 90 95
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Gly Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly
115 120 125
Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu
145 150 155 160
Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Thr Gly Ala Ser Val Lys Ile
165 170 175
Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Phe Ile Asn Trp
180 185 190
Val Lys Lys Asn Ser Gly Lys Ser Pro Glu Trp Ile Gly His Ile Ser
195 200 205
Ser Ser Tyr Ala Thr Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asn Lys Ala
210 215 220
Ala Phe Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Phe Met Gln Leu Asn
225 230 235 240
Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Ser Gly
245 250 255
Asn Tyr Glu Glu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
260 265 270
Thr Val Ser Ser Thr Gly Thr Gln Lys Met Ala Tyr Ser Phe Ile Glu
275 280 285
His Thr Phe Gln Val Gln Tyr Lys Lys Lys Ser Asp Ser Trp Glu Asp
290 295 300
Ser Lys Thr Glu Asn Leu Asp Arg Ala His Ser Met Asp Leu Ser Gln
305 310 315 320
Leu Glu Pro Asp Thr Ser Tyr Cys Ala Arg Val Arg Val Lys Pro Ile
325 330 335
Ser Asn Tyr Asp Gly Ile Trp Ser Lys Trp Ser Glu Glu Tyr Thr Trp
340 345 350
Lys Thr Asp Trp Val Met Pro Thr Leu Trp Ile Val Leu Ile Leu Val
355 360 365
Phe Leu Ile Leu Thr Leu Leu Leu Ile Leu Arg Phe Gly Cys Val Ser
370 375 380
Val Tyr Arg Thr Tyr Arg Lys Trp Lys Glu Lys Ile Pro Asn Pro Ser
385 390 395 400
Lys Ser Leu Leu Phe Gln Asp Gly Gly Lys Gly Leu Trp Pro Pro Gly
405 410 415
Ser Met Ala Ala Phe Ala Thr Lys Asn Pro Ala Leu Gln Gly Pro Gln
420 425 430
Ser Arg Leu Leu Ala Glu Gln Gln Gly Glu Ser Tyr Ala His Leu Glu
435 440 445
Asp Asn Asn Val Ser Pro Leu Thr Ile Glu Asp Pro Asn Ile Ile Arg
450 455 460
Val Pro Pro Ser Gly Pro Asp Thr Thr Pro Ala Ala Ser Ser Glu Ser
465 470 475 480
Thr Glu Gln Leu Pro Asn Val Gln Val Glu Gly Pro Thr Pro Asn Arg
485 490 495
Pro Arg Lys Gln Leu Pro Ser Phe Asp Phe Asn Gly Pro Tyr Leu Gly
500 505 510
Pro Pro Gln Ser His Ser Leu Pro Asp Leu Pro Asp Gln Leu Gly Ser
515 520 525
Pro Gln Val Gly Gly Ser Leu Lys Pro Ala Leu Pro Gly Ser Leu Glu
530 535 540
Tyr Met Cys Leu Pro Pro Gly Gly Gln Ala Gln Leu Val Pro Leu Ser
545 550 555 560
Gln Val Met Gly Gln Gly Gln Ala Met Asp Val Gln Cys Gly Ser Ser
565 570 575
Leu Glu Thr Ser Gly Ser Pro Ser Val Glu Pro Lys Glu Asn Pro Pro
580 585 590
Val Glu Leu Ser Met Glu Glu Gln Glu Ala Arg Asp Asn Pro Val Thr
595 600 605
Leu Pro Ile Ser Ser Gly Gly Pro Glu Gly Ser Met Met Ala Ser Asp
610 615 620
Tyr Val Thr Pro Gly Asp Pro Val Leu Thr Leu Pro Thr Gly Pro Leu
625 630 635 640
Ser Thr Ser Leu Gly Pro Ser Leu Gly Leu Pro Ser Ala Gln Ser Pro
645 650 655
Arg Leu Cys Leu Lys Leu Pro Arg Val Pro Ser Gly Ser Pro Ala Leu
660 665 670
Gly Pro Pro Gly Phe Glu Asp Tyr Val Glu Leu Pro Pro Ser Val Ser
675 680 685
Gln Ala Ala Lys Ser Pro Pro Gly His Pro Ala Pro Pro Val Ala Ser
690 695 700
Ser Pro Thr Val Ile Pro Gly Glu Pro Arg Glu Glu Val Gly Pro Ala
705 710 715 720
Ser Pro His Pro Glu Gly Leu Leu Val Leu Gln Gln Val Gly Asp Tyr
725 730 735
Cys Phe Leu Pro Gly Leu Gly Pro Gly Ser Leu Ser Pro His Ser Lys
740 745 750
Pro Pro Ser Pro Ser Leu Cys Ser Glu Thr Glu Asp Leu Val Gln Asp
755 760 765
Leu Ser Val Lys Lys Phe Pro Tyr Gln Pro Met Pro Gln Ala Pro Ala
770 775 780
Ile Gln Phe Phe Lys Ser Leu Lys His Gln Asp Tyr Leu Ser Leu Pro
785 790 795 800
Pro Trp Asp Asn Ser Gln Ser Gly Lys Val Cys
805 810
<210> 61
<211> 612
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-C1的氨基酸序列
<400> 61
Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Ile Met Ser Arg Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser
20 25 30
Leu Pro Val Ser Val Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser
35 40 45
Gln Thr Leu Leu Tyr Ser Asn Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr
50 55 60
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Phe
65 70 75 80
Thr Arg Lys Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly
85 90 95
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Gly Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly
115 120 125
Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu
145 150 155 160
Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Thr Gly Ala Ser Val Lys Ile
165 170 175
Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Phe Ile Asn Trp
180 185 190
Val Lys Lys Asn Ser Gly Lys Ser Pro Glu Trp Ile Gly His Ile Ser
195 200 205
Ser Ser Tyr Ala Thr Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asn Lys Ala
210 215 220
Ala Phe Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Phe Met Gln Leu Asn
225 230 235 240
Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Ser Gly
245 250 255
Asn Tyr Glu Glu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
260 265 270
Thr Val Ser Ser Thr Gly Thr Pro Cys Gln Lys Thr Ala Val Arg Ala
275 280 285
Phe Gly Ala Gly Leu Leu Pro Pro Leu Tyr Ser Leu Val Phe Ile Ile
290 295 300
Gly Val Val Gly Asn Val Leu Val Ile Leu Val Leu Met Gln His Arg
305 310 315 320
Arg Leu Gln Ser Met Thr Ser Ile Tyr Leu Phe Asn Leu Ala Val Ser
325 330 335
Asp Leu Val Phe Leu Phe Thr Leu Pro Phe Trp Ile Asp Tyr Lys Leu
340 345 350
Lys Asp Asp Trp Ile Phe Gly Asp Ala Met Cys Lys Leu Leu Ser Gly
355 360 365
Phe Tyr Tyr Leu Gly Leu Tyr Ser Glu Ile Phe Phe Ile Ile Leu Leu
370 375 380
Thr Ile Asp Arg Tyr Leu Ala Ile Val His Ala Val Phe Ala Leu Arg
385 390 395 400
Ala Arg Thr Val Thr Phe Gly Ile Ile Thr Ser Ile Ile Thr Trp Ala
405 410 415
Leu Ala Ile Leu Ala Ser Met Pro Ala Leu Tyr Phe Phe Lys Ala Gln
420 425 430
Trp Glu Phe Thr His Arg Thr Cys Ser Pro His Phe Pro Tyr Lys Ser
435 440 445
Leu Lys Gln Trp Lys Arg Phe Gln Ala Leu Lys Leu Asn Leu Leu Gly
450 455 460
Leu Ile Leu Pro Leu Leu Val Met Ile Ile Cys Tyr Ala Gly Ile Ile
465 470 475 480
Arg Ile Leu Leu Arg Arg Pro Ser Glu Lys Lys Val Lys Ala Val Arg
485 490 495
Leu Ile Phe Ala Ile Thr Leu Leu Phe Phe Leu Leu Trp Thr Pro Tyr
500 505 510
Asn Leu Ser Val Phe Val Ser Ala Phe Gln Asp Val Leu Phe Thr Asn
515 520 525
Gln Cys Glu Gln Ser Lys Gln Leu Asp Leu Ala Met Gln Val Thr Glu
530 535 540
Val Ile Ala Tyr Thr His Cys Cys Val Asn Pro Ile Ile Tyr Val Phe
545 550 555 560
Val Gly Glu Arg Phe Trp Lys Tyr Leu Arg Gln Leu Phe Gln Arg His
565 570 575
Val Ala Ile Pro Leu Ala Lys Trp Leu Pro Phe Leu Ser Val Asp Gln
580 585 590
Leu Glu Arg Thr Ser Ser Ile Ser Pro Ser Thr Gly Glu His Glu Leu
595 600 605
Ser Ala Gly Phe
610
<210> 62
<211> 615
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-C5的氨基酸序列
<400> 62
Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Ile Met Ser Arg Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser
20 25 30
Leu Pro Val Ser Val Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser
35 40 45
Gln Thr Leu Leu Tyr Ser Asn Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr
50 55 60
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Phe
65 70 75 80
Thr Arg Lys Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly
85 90 95
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Gly Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly
115 120 125
Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu
145 150 155 160
Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Thr Gly Ala Ser Val Lys Ile
165 170 175
Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Phe Ile Asn Trp
180 185 190
Val Lys Lys Asn Ser Gly Lys Ser Pro Glu Trp Ile Gly His Ile Ser
195 200 205
Ser Ser Tyr Ala Thr Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asn Lys Ala
210 215 220
Ala Phe Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Phe Met Gln Leu Asn
225 230 235 240
Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Ser Gly
245 250 255
Asn Tyr Glu Glu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
260 265 270
Thr Val Ser Ser Thr Gly Met Ser Ala Pro Cys Gln Lys Ile Asn Val
275 280 285
Lys Gln Ile Ala Ala Gln Leu Leu Pro Pro Leu Tyr Ser Leu Val Phe
290 295 300
Ile Phe Gly Phe Val Gly Asn Met Met Val Phe Leu Ile Leu Ile Ser
305 310 315 320
Cys Lys Lys Leu Lys Ser Val Thr Asp Ile Tyr Leu Leu Asn Leu Ala
325 330 335
Ile Ser Asp Leu Leu Phe Leu Leu Thr Leu Pro Phe Trp Ala His Tyr
340 345 350
Ala Ala Asn Glu Trp Val Phe Gly Asn Ile Met Cys Lys Val Phe Thr
355 360 365
Gly Leu Tyr His Ile Gly Tyr Phe Gly Gly Ile Phe Phe Ile Ile Leu
370 375 380
Leu Thr Ile Asp Arg Tyr Leu Ala Ile Val His Ala Val Phe Ala Leu
385 390 395 400
Lys Val Arg Thr Val Asn Phe Gly Val Ile Thr Ser Val Val Thr Trp
405 410 415
Ala Val Ala Val Phe Ala Ser Leu Pro Glu Ile Ile Phe Thr Arg Ser
420 425 430
Gln Lys Glu Gly Phe His Tyr Thr Cys Ser Pro His Phe Pro His Thr
435 440 445
Gln Tyr His Phe Trp Lys Ser Phe Gln Thr Leu Lys Met Val Ile Leu
450 455 460
Ser Leu Ile Leu Pro Leu Leu Val Met Val Ile Cys Tyr Ser Gly Ile
465 470 475 480
Leu His Thr Leu Phe Arg Cys Arg Asn Glu Lys Lys Arg His Arg Ala
485 490 495
Val Arg Leu Ile Phe Ala Ile Met Ile Val Tyr Phe Leu Phe Trp Thr
500 505 510
Pro Tyr Asn Ile Val Leu Leu Leu Thr Thr Phe Gln Glu Phe Phe Gly
515 520 525
Leu Asn Asn Cys Ser Ser Ser Asn Arg Leu Asp Gln Ala Met Gln Ala
530 535 540
Thr Glu Thr Leu Gly Met Thr His Cys Cys Leu Asn Pro Val Ile Tyr
545 550 555 560
Ala Phe Val Gly Glu Lys Phe Arg Ser Tyr Leu Ser Val Phe Phe Arg
565 570 575
Lys His Ile Val Lys Arg Phe Cys Lys Arg Cys Ser Ile Phe Gln Gln
580 585 590
Asp Asn Pro Asp Arg Ala Ser Ser Val Tyr Thr Arg Ser Thr Gly Glu
595 600 605
His Glu Val Ser Thr Gly Leu
610 615
<210> 63
<211> 607
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-CX的氨基酸序列
<400> 63
Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Ile Met Ser Arg Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser
20 25 30
Leu Pro Val Ser Val Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser
35 40 45
Gln Thr Leu Leu Tyr Ser Asn Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr
50 55 60
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Phe
65 70 75 80
Thr Arg Lys Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly
85 90 95
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Gly Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly
115 120 125
Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu
145 150 155 160
Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Thr Gly Ala Ser Val Lys Ile
165 170 175
Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Phe Ile Asn Trp
180 185 190
Val Lys Lys Asn Ser Gly Lys Ser Pro Glu Trp Ile Gly His Ile Ser
195 200 205
Ser Ser Tyr Ala Thr Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asn Lys Ala
210 215 220
Ala Phe Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Phe Met Gln Leu Asn
225 230 235 240
Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Ser Gly
245 250 255
Asn Tyr Glu Glu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
260 265 270
Thr Val Ser Ser Thr Gly Phe Arg Asp Glu Asn Val His Phe Asn Arg
275 280 285
Ile Phe Leu Pro Thr Ile Tyr Phe Ile Ile Phe Leu Thr Gly Ile Val
290 295 300
Gly Asn Gly Leu Val Ile Leu Val Met Gly Tyr Gln Lys Lys Leu Arg
305 310 315 320
Ser Met Thr Asp Lys Tyr Arg Leu His Leu Ser Val Ala Asp Leu Leu
325 330 335
Phe Val Ile Thr Leu Pro Phe Trp Ala Val Asp Ala Met Ala Asp Trp
340 345 350
Tyr Phe Gly Lys Phe Leu Cys Lys Ala Val His Ile Ile Tyr Thr Val
355 360 365
Asn Leu Tyr Ser Ser Val Leu Ile Leu Ala Phe Ile Ser Leu Asp Arg
370 375 380
Tyr Leu Ala Ile Val His Ala Thr Asn Ser Gln Arg Pro Arg Lys Leu
385 390 395 400
Leu Ala Glu Lys Ala Val Tyr Val Gly Val Trp Ile Pro Ala Leu Leu
405 410 415
Leu Thr Ile Pro Asp Phe Ile Phe Ala Asp Val Ser Gln Gly Asp Ile
420 425 430
Ser Gln Gly Asp Asp Arg Tyr Ile Cys Asp Arg Leu Tyr Pro Asp Ser
435 440 445
Leu Trp Met Val Val Phe Gln Phe Gln His Ile Met Val Gly Leu Val
450 455 460
Leu Pro Gly Ile Val Ile Leu Ser Cys Tyr Cys Ile Ile Ile Ser Lys
465 470 475 480
Leu Ser His Ser Lys Gly His Gln Lys Arg Lys Ala Leu Lys Thr Thr
485 490 495
Val Ile Leu Ile Leu Ala Phe Phe Ala Cys Trp Leu Pro Tyr Tyr Val
500 505 510
Gly Ile Ser Ile Asp Ser Phe Ile Leu Leu Gly Val Ile Lys Gln Gly
515 520 525
Cys Asp Phe Glu Ser Ile Val His Lys Trp Ile Ser Ile Thr Glu Ala
530 535 540
Leu Ala Phe Phe His Cys Cys Leu Asn Pro Ile Leu Tyr Ala Phe Leu
545 550 555 560
Gly Ala Lys Phe Lys Ser Ser Ala Gln His Ala Leu Asn Ser Met Ser
565 570 575
Arg Gly Ser Ser Leu Lys Ile Leu Ser Lys Gly Lys Arg Gly Gly His
580 585 590
Ser Ser Val Ser Thr Glu Ser Glu Ser Ser Ser Phe His Ser Ser
595 600 605
<210> 64
<211> 575
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-S的氨基酸序列
<400> 64
Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Ile Met Ser Arg Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser
20 25 30
Leu Pro Val Ser Val Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser
35 40 45
Gln Thr Leu Leu Tyr Ser Asn Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr
50 55 60
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Phe
65 70 75 80
Thr Arg Lys Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly
85 90 95
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Gly Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Asn Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gly
115 120 125
Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu
145 150 155 160
Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Lys Thr Gly Ala Ser Val Lys Ile
165 170 175
Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Phe Ile Asn Trp
180 185 190
Val Lys Lys Asn Ser Gly Lys Ser Pro Glu Trp Ile Gly His Ile Ser
195 200 205
Ser Ser Tyr Ala Thr Ser Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asn Lys Ala
210 215 220
Ala Phe Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Phe Met Gln Leu Asn
225 230 235 240
Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Val Arg Ser Gly
245 250 255
Asn Tyr Glu Glu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
260 265 270
Thr Val Ser Ser Thr Gly Ile Ala Thr Thr Asp Pro Thr Ala Pro Gly
275 280 285
Thr Gly Gly Thr Ala Val Gly Met Leu Ser Thr Asp Ser Ala Thr Gln
290 295 300
Trp Ser Leu Thr Ser Val Glu Thr Val Gln Pro Ala Ser Thr Glu Val
305 310 315 320
Glu Thr Ser Gln Pro Ala Pro Met Glu Ala Glu Thr Ser Gln Pro Ala
325 330 335
Pro Met Glu Ala Glu Thr Ser Gln Pro Ala Pro Met Glu Ala Asp Thr
340 345 350
Ser Lys Pro Ala Pro Thr Glu Ala Glu Thr Ser Lys Pro Ala Pro Thr
355 360 365
Glu Ala Glu Thr Ser Gln Pro Ala Pro Asn Glu Ala Glu Thr Ser Lys
370 375 380
Pro Ala Pro Thr Glu Ala Glu Thr Ser Lys Pro Ala Pro Thr Glu Ala
385 390 395 400
Glu Thr Thr Gln Leu Pro Arg Ile Gln Ala Val Lys Thr Leu Phe Thr
405 410 415
Thr Ser Ala Ala Thr Glu Val Pro Ser Thr Glu Pro Thr Thr Met Glu
420 425 430
Thr Ala Ser Thr Glu Ser Asn Glu Ser Thr Ile Phe Leu Gly Pro Ser
435 440 445
Val Thr His Leu Pro Asp Ser Gly Leu Lys Lys Gly Leu Ile Val Thr
450 455 460
Pro Gly Asn Ser Pro Ala Pro Thr Leu Pro Gly Ser Ser Asp Leu Ile
465 470 475 480
Pro Val Lys Gln Cys Leu Leu Ile Ile Leu Ile Leu Ala Ser Leu Ala
485 490 495
Thr Ile Phe Leu Val Cys Thr Val Val Leu Ala Val Arg Leu Ser Arg
500 505 510
Lys Thr His Met Tyr Pro Val Arg Asn Tyr Ser Pro Thr Glu Met Ile
515 520 525
Cys Ile Ser Ser Leu Leu Pro Glu Gly Gly Asp Gly Ala Pro Val Thr
530 535 540
Ala Asn Gly Gly Leu Pro Lys Val Gln Asp Leu Lys Thr Glu Pro Ser
545 550 555 560
Gly Asp Arg Asp Gly Asp Asp Leu Thr Leu His Ser Phe Leu Pro
565 570 575
<210> 65
<211> 1620
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-N的核酸序列
<400> 65
atggattttc aggtccagat tttctccttc ctcctcattt cagccagcgt cattatgtct 60
cggggggata ttgtcctcac acagactccc agctccctgc ctgtgtccgt cggagagaaa 120
gtgaccatga catgcaagtc tagtcagaca ctgctctact ctaacaatca gaagaactac 180
ctcgcatggt atcagcagaa accaggacag agccccaagc tgctcatctc ctgggctttc 240
acccggaaat ccggggtgcc tgaccgcttc acaggtagcg gctccggaac tgattttact 300
ctgaccattg gatctgtgaa ggcagaggac ctcgccgtct actattgcca gcagtacagt 360
aattatccat ggacttttgg cggagggacc aggctggaaa tcaagagagg tggaggaggg 420
tccggtggag gagggtctgg tggaggaggg agtggtggag gagggtcaga ggtgcagctg 480
cagcagtctg gccccgaagt ggtcaaaact ggagcttcag tcaaaatcag ctgtaaggca 540
tctgggtaca gcttcaccgg ctacttcatc aactgggtga agaaaaattc agggaagagc 600
cctgagtgga tcggccacat ttcaagctcc tacgccacaa gcacttacaa ccagaagttc 660
aaaaataagg ccgcttttac cgtggacaca tctagttcaa ccgccttcat gcagctgaac 720
tccctcacat ctgaagatag tgctgtgtac tattgtgtca ggagcggcaa ctacgaagaa 780
tatgctatgg attactgggg gcaggggacc tccgtgactg tctcaagcac cggtcttctg 840
ggggtgtccc ttggaggtgc caaggaggca tgccccacag gcctgtacac acacagcggt 900
gagtgctgca aagcctgcaa cctgggcgag ggtgtggccc agccttgtgg agccaaccag 960
accgtgtgtg agccctgcct ggacagcgtg acgttctccg acgtggtgag cgcgaccgag 1020
ccgtgcaagc cgtgcaccga gtgcgtgggg ctccagagca tgtcggcgcc gtgcgtggag 1080
gccgacgacg ccgtgtgccg ctgcgcctac ggctactacc aggatgagac gactgggcgc 1140
tgcgaggcgt gccgcgtgtg cgaggcgggc tcgggcctcg tgttctcctg ccaggacaag 1200
cagaacaccg tgtgcgagga gtgccccgac ggcacgtatt ccgacgaggc caaccacgtg 1260
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cgctgggccg acgccgagtg cgaggagatc cctggccgtt ggattacacg gtccacaccc 1380
ccagagggct cggacagcac agcccccagc acccaggagc ctgaggcacc tccagaacaa 1440
gacctcatag ccagcacggt ggcaggtgtg gtgaccacag tgatgggcag ctcccagccc 1500
gtggtgaccc gaggcaccac cgacaacctc atccctgtct attgctccat cctggctgct 1560
gtggttgtgg gccttgtggc ctacatagcc ttcaagaggt ggaacagggg gatcctctag 1620
<210> 66
<211> 1146
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-G的核酸序列
<400> 66
atggattttc aggtccagat tttctccttc ctcctcattt cagccagcgt cattatgtct 60
cggggggata ttgtcctcac acagactccc agctccctgc ctgtgtccgt cggagagaaa 120
gtgaccatga catgcaagtc tagtcagaca ctgctctact ctaacaatca gaagaactac 180
ctcgcatggt atcagcagaa accaggacag agccccaagc tgctcatctc ctgggctttc 240
acccggaaat ccggggtgcc tgaccgcttc acaggtagcg gctccggaac tgattttact 300
ctgaccattg gatctgtgaa ggcagaggac ctcgccgtct actattgcca gcagtacagt 360
aattatccat ggacttttgg cggagggacc aggctggaaa tcaagagagg tggaggaggg 420
tccggtggag gagggtctgg tggaggaggg agtggtggag gagggtcaga ggtgcagctg 480
cagcagtctg gccccgaagt ggtcaaaact ggagcttcag tcaaaatcag ctgtaaggca 540
tctgggtaca gcttcaccgg ctacttcatc aactgggtga agaaaaattc agggaagagc 600
cctgagtgga tcggccacat ttcaagctcc tacgccacaa gcacttacaa ccagaagttc 660
aaaaataagg ccgcttttac cgtggacaca tctagttcaa ccgccttcat gcagctgaac 720
tccctcacat ctgaagatag tgctgtgtac tattgtgtca ggagcggcaa ctacgaagaa 780
tatgctatgg attactgggg gcaggggacc tccgtgactg tctcaagcac cggtcacgag 840
aactccgaac tgctgattcc taaggcaact cacaacgact ccggctccta tttctgtaga 900
gggctgattg gacataacaa caagagctcc gcctcattca ggattagcct gggcgaccca 960
gggtctccca gtatgttccc cccttggcac cagatcacct tttgcctgct gattggactg 1020
ctgttcgcta tcgatacagt gctgtacttt tctgtccgga gaggcctgca gtcacccgtg 1080
gcagattacg aagaacccaa gattcagtgg agcaaggagc cccaggataa gacgcgtgtc 1140
gactga 1146
<210> 67
<211> 2241
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-F的核酸序列
<400> 67
atggattttc aggtccagat tttctccttc ctcctcattt cagccagcgt cattatgtct 60
cggggggata ttgtcctcac acagactccc agctccctgc ctgtgtccgt cggagagaaa 120
gtgaccatga catgcaagtc tagtcagaca ctgctctact ctaacaatca gaagaactac 180
ctcgcatggt atcagcagaa accaggacag agccccaagc tgctcatctc ctgggctttc 240
acccggaaat ccggggtgcc tgaccgcttc acaggtagcg gctccggaac tgattttact 300
ctgaccattg gatctgtgaa ggcagaggac ctcgccgtct actattgcca gcagtacagt 360
aattatccat ggacttttgg cggagggacc aggctggaaa tcaagagagg tggaggaggg 420
tccggtggag gagggtctgg tggaggaggg agtggtggag gagggtcaga ggtgcagctg 480
cagcagtctg gccccgaagt ggtcaaaact ggagcttcag tcaaaatcag ctgtaaggca 540
tctgggtaca gcttcaccgg ctacttcatc aactgggtga agaaaaattc agggaagagc 600
cctgagtgga tcggccacat ttcaagctcc tacgccacaa gcacttacaa ccagaagttc 660
aaaaataagg ccgcttttac cgtggacaca tctagttcaa ccgccttcat gcagctgaac 720
tccctcacat ctgaagatag tgctgtgtac tattgtgtca ggagcggcaa ctacgaagaa 780
tatgctatgg attactgggg gcaggggacc tccgtgactg tctcaagcac cggtccaggc 840
cccttccctt tcatccaaga caacatctcc ttctatgcga ccattgggct ctgtctcccc 900
ttcattgttg ttctcattgt gttgatctgc cacaaataca aaaagcaatt taggtacgag 960
agtcagctgc agatgatcca ggtgactggc cccctggata acgagtactt ctacgttgac 1020
ttcagggact atgaatatga ccttaagtgg gagttcccga gagagaactt agagtttggg 1080
aaggtcctgg ggtctggcgc tttcgggagg gtgatgaacg ccacggccta tggcattagt 1140
aaaacgggag tctcaattca ggtggcggtg aagatgctaa aagagaaagc tgacagctgt 1200
gaaaaagaag ctctcatgtc ggagctcaaa atgatgaccc acctgggaca ccatgacaac 1260
atcgtgaatc tgctgggggc atgcacactg tcagggccag tgtacttgat ttttgaatat 1320
tgttgctatg gtgacctcct caactaccta agaagtaaaa gagagaagtt tcacaggaca 1380
tggacagaga tttttaagga acataatttc agtttttacc ctactttcca ggcacattca 1440
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gggttcaatg ggaatttaat tcattctgaa gatgagattg aatatgaaaa ccagaagagg 1560
ctggcagaag aagaggagga agatttgaac gtgctgacgt ttgaagacct cctttgcttt 1620
gcgtaccaag tggccaaagg catggaattc ctggagttca agtcgtgtgt ccacagagac 1680
ctggcagcca ggaatgtgtt ggtcacccac gggaaggtgg tgaagatctg tgactttgga 1740
ctggcccgag acatcctgag cgactccagc tacgtcgtca ggggcaacgc acggctgccg 1800
gtgaagtgga tggcacctga gagcttattt gaagggatct acacaatcaa gagtgacgtc 1860
tggtcctacg gcatccttct ctgggagata ttttcactgg gtgtgaaccc ttaccctggc 1920
attcctgtcg acgctaactt ctataaactg attcagagtg gatttaaaat ggagcagcca 1980
ttctatgcca cagaagggat atactttgta atgcaatcct gctgggcttt tgactcaagg 2040
aagcggccat ccttccccaa cctgacttca tttttaggat gtcagctggc agaggcagaa 2100
gaagcgatgt atcagaacat gggtggcaac gtcccagaac atccatccat ctaccaaaac 2160
aggcggcccc tcagcagaga ggcaggctca gagccgccat cgccacaggc ccaggtgaag 2220
attcacggag aaagaagtta g 2241
<210> 68
<211> 1725
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-T的核酸序列
<400> 68
atggattttc aggtccagat tttctccttc ctcctcattt cagccagcgt cattatgtct 60
cggggggata ttgtcctcac acagactccc agctccctgc ctgtgtccgt cggagagaaa 120
gtgaccatga catgcaagtc tagtcagaca ctgctctact ctaacaatca gaagaactac 180
ctcgcatggt atcagcagaa accaggacag agccccaagc tgctcatctc ctgggctttc 240
acccggaaat ccggggtgcc tgaccgcttc acaggtagcg gctccggaac tgattttact 300
ctgaccattg gatctgtgaa ggcagaggac ctcgccgtct actattgcca gcagtacagt 360
aattatccat ggacttttgg cggagggacc aggctggaaa tcaagagagg tggaggaggg 420
tccggtggag gagggtctgg tggaggaggg agtggtggag gagggtcaga ggtgcagctg 480
cagcagtctg gccccgaagt ggtcaaaact ggagcttcag tcaaaatcag ctgtaaggca 540
tctgggtaca gcttcaccgg ctacttcatc aactgggtga agaaaaattc agggaagagc 600
cctgagtgga tcggccacat ttcaagctcc tacgccacaa gcacttacaa ccagaagttc 660
aaaaataagg ccgcttttac cgtggacaca tctagttcaa ccgccttcat gcagctgaac 720
tccctcacat ctgaagatag tgctgtgtac tattgtgtca ggagcggcaa ctacgaagaa 780
tatgctatgg attactgggg gcaggggacc tccgtgactg tctcaagcac cggtcagctg 840
tattccctca gcactcttga ttgcagtttc aatcgcatag agacatctaa aggaatactg 900
caacattttc caaagagtct agccttcttc aatcttacta acaattctgt tgcttgtata 960
tgtgaacatc agaaattcct gcagtgggtc aaggaacaga agcagttctt ggtgaatgtt 1020
gaacaaatga catgtgcaac acctgtagag atgaatacct ccttagtgtt ggattttaat 1080
aattctacct gttatatgta caagacaatc atcagtgtgt cagtggtcag tgtgattgtg 1140
gtatccactg tagcatttct gatataccac ttctattttc acctgatact tattgctggc 1200
tgtaaaaagt acagcagagg agaaagcatc tatgatgcat ttgtgatcta ctcgagtcag 1260
aatgaggact gggtgagaaa tgagctggta aagaatttag aagaaggagt gccccgcttt 1320
cacctctgcc ttcactacag agactttatt cctggtgtag ccattgctgc caacatcatc 1380
caggaaggct tccacaagag ccggaaggtt attgtggtag tgtctagaca ctttattcag 1440
agccgttggt gtatctttga atatgagatt gctcaaacat ggcagtttct gagcagccgc 1500
tctggcatca tcttcattgt ccttgagaag gttgagaagt ccctgctgag gcagcaggtg 1560
gaattgtatc gccttcttag cagaaacacc tacctggaat gggaggacaa tcctctgggg 1620
aggcacatct tctggagaag acttaaaaat gccctattgg atggaaaagc ctcgaatcct 1680
gagcaaacag cagaggaaga acaagaaacg gcaacttgga cctga 1725
<210> 69
<211> 1956
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-C2的核酸序列
<400> 69
atggattttc aggtccagat tttctccttc ctcctcattt cagccagcgt cattatgtct 60
cggggggata ttgtcctcac acagactccc agctccctgc ctgtgtccgt cggagagaaa 120
gtgaccatga catgcaagtc tagtcagaca ctgctctact ctaacaatca gaagaactac 180
ctcgcatggt atcagcagaa accaggacag agccccaagc tgctcatctc ctgggctttc 240
acccggaaat ccggggtgcc tgaccgcttc acaggtagcg gctccggaac tgattttact 300
ctgaccattg gatctgtgaa ggcagaggac ctcgccgtct actattgcca gcagtacagt 360
aattatccat ggacttttgg cggagggacc aggctggaaa tcaagagagg tggaggaggg 420
tccggtggag gagggtctgg tggaggaggg agtggtggag gagggtcaga ggtgcagctg 480
cagcagtctg gccccgaagt ggtcaaaact ggagcttcag tcaaaatcag ctgtaaggca 540
tctgggtaca gcttcaccgg ctacttcatc aactgggtga agaaaaattc agggaagagc 600
cctgagtgga tcggccacat ttcaagctcc tacgccacaa gcacttacaa ccagaagttc 660
aaaaataagg ccgcttttac cgtggacaca tctagttcaa ccgccttcat gcagctgaac 720
tccctcacat ctgaagatag tgctgtgtac tattgtgtca ggagcggcaa ctacgaagaa 780
tatgctatgg attactgggg gcaggggacc tccgtgactg tctcaagcac cggtatggaa 840
gacaataata tgttacctca gttcatccat ggcatactat caacatctca ttctctattt 900
acacgaagta tccaagagct tgatgaaggg gccaccacac cgtatgacta cgatgatggt 960
gagccttgtc ataaaaccag tgtgaagcaa attggagctt ggatcctgcc tccactctac 1020
tccctggtat tcatctttgg ttttgtgggc aacatgttgg tcattataat tctgataggc 1080
tgtaaaaagc tgaagagcat gactgatatc tatctgctca acctggccat ctctgacctg 1140
ctcttcctgc tcacattacc attctgggct cactatgctg caaatgagtg ggtctttggg 1200
aatataatgt gtaaagtatt cacagggctc tatcacattg gttattttgg tggaatcttt 1260
ttcattatcc tcctgacaat tgataggtac ttggctattg ttcatgctgt gtttgcttta 1320
aaagccagga cagttacctt tggggtgata acaagtgtag tcacttgggt ggtggctgtg 1380
tttgcctctc taccaggaat catatttact aaatccaaac aagatgatca ccattacacc 1440
tgtggccctt attttacaca actatggaag aatttccaaa caataatgag aaatatcttg 1500
agcctgatcc tgcctctact tgtcatggtc atctgctact caggaattct ccacaccctg 1560
tttcgctgta ggaatgagaa gaagaggcac agggctgtga ggctcatctt tgccatcatg 1620
attgtctact ttctcttctg gactccatac aatattgttc tcttcttgac caccttccag 1680
gaatccttgg gaatgagtaa ctgtgtgatt gacaagcact tagaccaggc catgcaggtg 1740
acagagactc ttggaatgac acactgctgc attaatcctg tcatttatgc ctttgttgga 1800
gagaagttcc gaaggtatct ctccatattt ttcagaaagc acattgctaa acgtctctgc 1860
aaacagtgcc cagttttcta tagggagaca gcagatcgag tgagctctac attcactcct 1920
tccactgggg agcaagaggt ctcggttggg ttgtaa 1956
<210> 70
<211> 1398
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-I的核酸序列
<400> 70
atggattttc aggtccagat tttctccttc ctcctcattt cagccagcgt cattatgtct 60
cggggggata ttgtcctcac acagactccc agctccctgc ctgtgtccgt cggagagaaa 120
gtgaccatga catgcaagtc tagtcagaca ctgctctact ctaacaatca gaagaactac 180
ctcgcatggt atcagcagaa accaggacag agccccaagc tgctcatctc ctgggctttc 240
acccggaaat ccggggtgcc tgaccgcttc acaggtagcg gctccggaac tgattttact 300
ctgaccattg gatctgtgaa ggcagaggac ctcgccgtct actattgcca gcagtacagt 360
aattatccat ggacttttgg cggagggacc aggctggaaa tcaagagagg tggaggaggg 420
tccggtggag gagggtctgg tggaggaggg agtggtggag gagggtcaga ggtgcagctg 480
cagcagtctg gccccgaagt ggtcaaaact ggagcttcag tcaaaatcag ctgtaaggca 540
tctgggtaca gcttcaccgg ctacttcatc aactgggtga agaaaaattc agggaagagc 600
cctgagtgga tcggccacat ttcaagctcc tacgccacaa gcacttacaa ccagaagttc 660
aaaaataagg ccgcttttac cgtggacaca tctagttcaa ccgccttcat gcagctgaac 720
tccctcacat ctgaagatag tgctgtgtac tattgtgtca ggagcggcaa ctacgaagaa 780
tatgctatgg attactgggg gcaggggacc tccgtgactg tctcaagcac cggtaatgca 840
cggctggtag agtgcagtgg ccgtggccac tgccaatgca acaggtgcat atgtgacgaa 900
ggctaccagc caccgatgtg tgaggattgt cccagctgtg gctcgcactg cagggacaac 960
cacacctctt gtgccgagtg cctgaagttt gataagggcc cttttgagaa gaactgtagt 1020
gttcagtgtg ctggtatgac gctgcagact atccctttga agaaaaagcc ctgcaaggag 1080
agggactcgg aaggctgttg gataacttac actttgcagc agaaggacgg aaggaacatt 1140
tacaacatcc atgtggagga cagtctagag tgtgtgaagg gccccaatgt ggctgccatc 1200
gtagggggca ccgtggtagg tgtcgtactg attggtgtcc tcctcctggt catctggaag 1260
gccctgaccc acctgactga cctcagggag tacaggcgct ttgagaagga gaaactcaag 1320
tcccaatgga acaatgacaa ccccctcttc aagagtgcta cgacaacggt catgaacccc 1380
aagtttgctg aaagctag 1398
<210> 71
<211> 2436
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-C的核酸序列
<400> 71
atggattttc aggtccagat tttctccttc ctcctcattt cagccagcgt cattatgtct 60
cggggggata ttgtcctcac acagactccc agctccctgc ctgtgtccgt cggagagaaa 120
gtgaccatga catgcaagtc tagtcagaca ctgctctact ctaacaatca gaagaactac 180
ctcgcatggt atcagcagaa accaggacag agccccaagc tgctcatctc ctgggctttc 240
acccggaaat ccggggtgcc tgaccgcttc acaggtagcg gctccggaac tgattttact 300
ctgaccattg gatctgtgaa ggcagaggac ctcgccgtct actattgcca gcagtacagt 360
aattatccat ggacttttgg cggagggacc aggctggaaa tcaagagagg tggaggaggg 420
tccggtggag gagggtctgg tggaggaggg agtggtggag gagggtcaga ggtgcagctg 480
cagcagtctg gccccgaagt ggtcaaaact ggagcttcag tcaaaatcag ctgtaaggca 540
tctgggtaca gcttcaccgg ctacttcatc aactgggtga agaaaaattc agggaagagc 600
cctgagtgga tcggccacat ttcaagctcc tacgccacaa gcacttacaa ccagaagttc 660
aaaaataagg ccgcttttac cgtggacaca tctagttcaa ccgccttcat gcagctgaac 720
tccctcacat ctgaagatag tgctgtgtac tattgtgtca ggagcggcaa ctacgaagaa 780
tatgctatgg attactgggg gcaggggacc tccgtgactg tctcaagcac cggtactcag 840
aagatggctt actcattcat tgagcacaca ttccaggtcc agtacaagaa gaaatcggac 900
agctgggagg acagcaagac agagaaccta gatcgagccc atagcatgga cctctcccag 960
ctggagccag acacctcata ctgcgccagg gtgagggtca agcccatctc taactacgat 1020
gggatctgga gcaagtggag cgaagagtac acttggaaga ctgactgggt gatgcccacg 1080
ctgtggatag tcctcatcct ggtctttctc atcctcacct tgctcctgat ccttcgcttt 1140
ggctgtgtct ctgtatacag gacgtacagg aagtggaagg aaaagatccc caaccccagc 1200
aagagcctcc tgttccagga tggaggtaaa ggtctctggc ctcctggcag catggcagcc 1260
ttcgccacta agaaccccgc tctccagggg ccacagagca ggcttcttgc tgagcaacag 1320
ggggagtcat atgcacattt ggaagacaac aacgtgtcac ctctcactat agaggaccct 1380
aatataattc gagttccacc atccgggcct gatacaaccc cagctgcctc atccgaatcc 1440
acagagcaac ttcccaatgt tcaagtagag ggaccaactc ctaacagacc taggaagcaa 1500
ttacccagct ttgacttcaa tgggccctac ctggggcctc cccaatccca ctctctgcct 1560
gatctcccag accagctggg ttccccccag gtgggtggga gcctgaagcc agcactgcca 1620
ggctccttgg agtacatgtg tctgccccct ggaggtcaag cgcaactggt tccattgtcc 1680
caggtgatgg ggcagggcca ggctatggat gtgcagtgtg ggtccagcct ggagacctca 1740
gggagccctt ctgtggagcc aaaggagaac cctccagttg agctgagcat ggaggaacag 1800
gaggcacggg acaacccagt gactctgccc ataagctctg ggggccctga gggcagtatg 1860
atggcctctg attatgtcac tcctggagat ccggtgctca ctctgcccac agggcccctg 1920
tctacctctc tgggcccctc tctagggttg ccctcagccc aaagcccccg tctctgtctt 1980
aagctgccca gggtcccctc tggaagccca gctctagggc caccagggtt tgaggactat 2040
gtggagctgc ctccaagtgt gagccaggct gccaagtccc ctccaggcca tcctgctcct 2100
cctgtggcaa gcagccccac agtgatccca ggagagccca gggaggaagt gggcccagca 2160
tccccacatc ccgaaggcct ccttgttctt cagcaggttg gggactactg cttcctccct 2220
ggcctgggac ctggctccct ctcaccacac agtaagccac cctctccaag tctgtgttct 2280
gagactgagg acctagtcca ggacttgtct gtcaaaaagt ttccctatca gcccatgccc 2340
caggcgccag ccattcagtt tttcaagtcc ctaaagcatc aggactacct gtccctgccc 2400
ccttgggaca atagccagtc tgggaaggtg tgctga 2436
<210> 72
<211> 1839
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-C1的核酸序列
<400> 72
atggattttc aggtccagat tttctccttc ctcctcattt cagccagcgt cattatgtct 60
cggggggata ttgtcctcac acagactccc agctccctgc ctgtgtccgt cggagagaaa 120
gtgaccatga catgcaagtc tagtcagaca ctgctctact ctaacaatca gaagaactac 180
ctcgcatggt atcagcagaa accaggacag agccccaagc tgctcatctc ctgggctttc 240
acccggaaat ccggggtgcc tgaccgcttc acaggtagcg gctccggaac tgattttact 300
ctgaccattg gatctgtgaa ggcagaggac ctcgccgtct actattgcca gcagtacagt 360
aattatccat ggacttttgg cggagggacc aggctggaaa tcaagagagg tggaggaggg 420
tccggtggag gagggtctgg tggaggaggg agtggtggag gagggtcaga ggtgcagctg 480
cagcagtctg gccccgaagt ggtcaaaact ggagcttcag tcaaaatcag ctgtaaggca 540
tctgggtaca gcttcaccgg ctacttcatc aactgggtga agaaaaattc agggaagagc 600
cctgagtgga tcggccacat ttcaagctcc tacgccacaa gcacttacaa ccagaagttc 660
aaaaataagg ccgcttttac cgtggacaca tctagttcaa ccgccttcat gcagctgaac 720
tccctcacat ctgaagatag tgctgtgtac tattgtgtca ggagcggcaa ctacgaagaa 780
tatgctatgg attactgggg gcaggggacc tccgtgactg tctcaagcac cggtactcca 840
tgccaaaaga ctgctgtaag agcctttggg gctggactcc tgccccccct gtattctcta 900
gtgttcatca ttggagtggt gggcaatgtc ctagtgattc tggtgctcat gcagcatagg 960
aggcttcaaa gcatgaccag catctacctg ttcaacctgg ctgtctctga tctggtcttc 1020
cttttcactt tacctttctg gattgactac aagttgaaag acgactggat ttttggtgat 1080
gccatgtgca agcttctctc tgggttttat tacctgggtt tatacagtga gatcttcttt 1140
atcatcctgt tgacgattga cagatacctg gccattgtcc atgctgtgtt tgccctgagg 1200
gcccgaactg ttacttttgg catcatcacc agtattatca cctgggccct agccatctta 1260
gcttccatgc ctgccttata cttttttaag gcccagtggg agttcactca ccgtacctgt 1320
agccctcatt tcccctacaa gagcctgaag cagtggaaga ggtttcaagc tctaaagcta 1380
aaccttcttg gactaatttt gcctctgtta gtcatgataa tctgctatgc agggatcatc 1440
agaattctgc tcagaagacc cagtgagaag aaggtcaaag ccgtgcgtct gatatttgct 1500
attactcttc tattcttcct cctctggacc ccctacaatc tgagtgtatt tgtttctgct 1560
ttccaagatg ttctattcac caatcagtgt gagcagagta agcaactgga cctggccatg 1620
caggtgactg aggtgattgc ctacacccac tgttgtgtca acccaatcat ttatgttttt 1680
gtgggtgaac ggttctggaa gtaccttcgg cagctgtttc aaaggcatgt ggctatacca 1740
ctggcaaaat ggctgccctt cctctctgtg gaccaactag aaaggaccag ttctatatct 1800
ccatccacag gagaacatga gctctctgct ggcttctga 1839
<210> 73
<211> 1848
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-C5的核酸序列
<400> 73
atggattttc aggtccagat tttctccttc ctcctcattt cagccagcgt cattatgtct 60
cggggggata ttgtcctcac acagactccc agctccctgc ctgtgtccgt cggagagaaa 120
gtgaccatga catgcaagtc tagtcagaca ctgctctact ctaacaatca gaagaactac 180
ctcgcatggt atcagcagaa accaggacag agccccaagc tgctcatctc ctgggctttc 240
acccggaaat ccggggtgcc tgaccgcttc acaggtagcg gctccggaac tgattttact 300
ctgaccattg gatctgtgaa ggcagaggac ctcgccgtct actattgcca gcagtacagt 360
aattatccat ggacttttgg cggagggacc aggctggaaa tcaagagagg tggaggaggg 420
tccggtggag gagggtctgg tggaggaggg agtggtggag gagggtcaga ggtgcagctg 480
cagcagtctg gccccgaagt ggtcaaaact ggagcttcag tcaaaatcag ctgtaaggca 540
tctgggtaca gcttcaccgg ctacttcatc aactgggtga agaaaaattc agggaagagc 600
cctgagtgga tcggccacat ttcaagctcc tacgccacaa gcacttacaa ccagaagttc 660
aaaaataagg ccgcttttac cgtggacaca tctagttcaa ccgccttcat gcagctgaac 720
tccctcacat ctgaagatag tgctgtgtac tattgtgtca ggagcggcaa ctacgaagaa 780
tatgctatgg attactgggg gcaggggacc tccgtgactg tctcaagcac cggtatgtca 840
gcaccctgcc aaaaaatcaa tgtgaaacaa attgcggctc agctcctgcc cccactctac 900
tccctggtat tcatctttgg ttttgtgggt aacatgatgg tcttcctcat cttgataagc 960
tgcaaaaagc tgaagagcgt gactgatatc tacctgctca acctggccat ctctgacctg 1020
ctcttcctgc tcacactacc attctgggct cactatgctg caaatgagtg ggtctttggg 1080
aacataatgt gtaaagtatt cacagggctc tatcacattg gttattttgg tggaatcttc 1140
ttcattatcc tcctgacaat tgataggtac ttggctattg tccatgctgt gtttgcttta 1200
aaagtcagaa cggtcaactt tggggtgata acaagtgtag tcacttgggc ggtggctgtg 1260
tttgcctctc tcccagaaat aatctttacc agatctcaga aagaaggttt tcattataca 1320
tgcagtcctc attttccaca cactcagtat catttctgga agagtttcca aacattaaag 1380
atggtcatct tgagcctgat cctgcctcta cttgtcatgg tcatctgcta ctcaggaatt 1440
ctccacaccc tgtttcgctg taggaatgag aagaagaggc acagggctgt gaggctcatc 1500
tttgccatca tgattgtcta ctttctcttc tggactccct acaacattgt cctcctcctg 1560
accaccttcc aggaattctt tggactgaat aactgcagta gttctaatag actagaccag 1620
gccatgcagg caacagagac tcttggaatg acacactgct gcctaaaccc tgtcatctat 1680
gcctttgttg gagagaagtt ccggagttat ctctcagtgt tcttccgaaa acacattgtc 1740
aaacgctttt gcaaacggtg ttcaattttc cagcaagaca atcctgatcg tgcaagctca 1800
gtctataccc gatccacagg agaacatgaa gtttctactg gtttatga 1848
<210> 74
<211> 1824
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-CX的核酸序列
<400> 74
atggattttc aggtccagat tttctccttc ctcctcattt cagccagcgt cattatgtct 60
cggggggata ttgtcctcac acagactccc agctccctgc ctgtgtccgt cggagagaaa 120
gtgaccatga catgcaagtc tagtcagaca ctgctctact ctaacaatca gaagaactac 180
ctcgcatggt atcagcagaa accaggacag agccccaagc tgctcatctc ctgggctttc 240
acccggaaat ccggggtgcc tgaccgcttc acaggtagcg gctccggaac tgattttact 300
ctgaccattg gatctgtgaa ggcagaggac ctcgccgtct actattgcca gcagtacagt 360
aattatccat ggacttttgg cggagggacc aggctggaaa tcaagagagg tggaggaggg 420
tccggtggag gagggtctgg tggaggaggg agtggtggag gagggtcaga ggtgcagctg 480
cagcagtctg gccccgaagt ggtcaaaact ggagcttcag tcaaaatcag ctgtaaggca 540
tctgggtaca gcttcaccgg ctacttcatc aactgggtga agaaaaattc agggaagagc 600
cctgagtgga tcggccacat ttcaagctcc tacgccacaa gcacttacaa ccagaagttc 660
aaaaataagg ccgcttttac cgtggacaca tctagttcaa ccgccttcat gcagctgaac 720
tccctcacat ctgaagatag tgctgtgtac tattgtgtca ggagcggcaa ctacgaagaa 780
tatgctatgg attactgggg gcaggggacc tccgtgactg tctcaagcac cgggttccgg 840
gatgaaaacg tccatttcaa taggatcttc ctgcccacca tctacttcat catcttcttg 900
actggcatag tcggcaatgg attggtgatc ctggtcatgg gttaccagaa gaagctaagg 960
agcatgacgg acaagtaccg gctgcacctg tcagtggctg acctcctctt tgtcatcaca 1020
ctccccttct gggcagttga tgccatggct gactggtact ttgggaaatt tttgtgtaag 1080
gctgtccata tcatctacac tgtcaacctc tacagcagcg ttctcatcct ggccttcatc 1140
agcctggacc ggtacctcgc tattgtccac gccaccaaca gtcagaggcc aaggaaactg 1200
ctggctgaaa aggcagtcta tgtgggcgtc tggatcccag ccctcctcct gactatacct 1260
gacttcatct ttgccgacgt cagccagggg gacatcagtc agggggatga caggtacatc 1320
tgtgaccgcc tttaccccga tagcctgtgg atggtggtgt ttcaattcca gcatataatg 1380
gtgggtctcg tcctgcccgg catcgtcatc ctctcctgtt actgcatcat catctctaag 1440
ctgtcacact ccaagggcca ccagaagcgc aaggccctca agacgacagt catcctcatc 1500
ctagctttct ttgcctgctg gctgccatat tatgtgggga tcagcatcga ctccttcatc 1560
cttttggggg tcatcaagca aggatgtgac ttcgagagca tcgtgcacaa gtggatctcc 1620
atcacagagg ccctcgcctt cttccactgt tgcctgaacc ccatcctcta tgccttcctc 1680
ggggccaagt tcaaaagctc tgcccagcat gcactcaact ccatgagcag aggctccagc 1740
ctcaagatcc tttccaaagg aaagcggggt ggacactctt ccgtctccac ggagtcagaa 1800
tcctccagtt ttcactccag ctaa 1824
<210> 75
<211> 1728
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-S的核酸序列
<400> 75
atggattttc aggtccagat tttctccttc ctcctcattt cagccagcgt cattatgtct 60
cggggggata ttgtcctcac acagactccc agctccctgc ctgtgtccgt cggagagaaa 120
gtgaccatga catgcaagtc tagtcagaca ctgctctact ctaacaatca gaagaactac 180
ctcgcatggt atcagcagaa accaggacag agccccaagc tgctcatctc ctgggctttc 240
acccggaaat ccggggtgcc tgaccgcttc acaggtagcg gctccggaac tgattttact 300
ctgaccattg gatctgtgaa ggcagaggac ctcgccgtct actattgcca gcagtacagt 360
aattatccat ggacttttgg cggagggacc aggctggaaa tcaagagagg tggaggaggg 420
tccggtggag gagggtctgg tggaggaggg agtggtggag gagggtcaga ggtgcagctg 480
cagcagtctg gccccgaagt ggtcaaaact ggagcttcag tcaaaatcag ctgtaaggca 540
tctgggtaca gcttcaccgg ctacttcatc aactgggtga agaaaaattc agggaagagc 600
cctgagtgga tcggccacat ttcaagctcc tacgccacaa gcacttacaa ccagaagttc 660
aaaaataagg ccgcttttac cgtggacaca tctagttcaa ccgccttcat gcagctgaac 720
tccctcacat ctgaagatag tgctgtgtac tattgtgtca ggagcggcaa ctacgaagaa 780
tatgctatgg attactgggg gcaggggacc tccgtgactg tctcaagcac cggtattgcc 840
accactgacc ctactgcccc aggtacagga gggacagctg ttgggatgct gagcacagac 900
tctgccacac agtggagtct aacctcagta gagaccgtcc aaccagcatc cacagaggta 960
gagacctcgc agccagcacc catggaggca gagacctcgc agccagcacc catggaggca 1020
gagacctcgc agccagcacc catggaggca gacacctcaa agccagcacc cacggaggca 1080
gagacctcaa agccagcacc cacggaggca gagacctctc agccagcacc caacgaggca 1140
gagacctcaa aaccagcacc cacggaggca gagacctcaa aaccagcacc cacggaggca 1200
gagaccaccc agcttcccag gattcaggct gtaaaaactc tgtttacaac gtctgcagcc 1260
accgaagtcc cttccacaga acctaccacc atggagacgg cgtccacaga gtctaacgag 1320
tctaccatct tccttgggcc atccgtgact cacttacctg acagcggcct gaagaaaggg 1380
ctgattgtga cccctgggaa ttcacctgcc ccaaccctgc cagggagttc agatctcatc 1440
ccggtgaagc aatgtctgct gattatcctc atcttggctt ctctggccac catcttcctc 1500
gtgtgcacag tggtgctggc ggtccgtctg tcccgtaaga cccacatgta cccagtgcgg 1560
aactactccc ccacggagat gatctgcatc tcgtccctgc tacctgaggg gggagacggg 1620
gcccctgtca cagccaatgg gggcctgccc aaggtccagg acctgaagac agagcccagt 1680
ggggaccggg atggggacga cctcaccctg cacagcttcc tcccttag 1728
<210> 76
<211> 748
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗HER2 scFv曲妥珠单抗的核酸序列
<400> 76
gatattcaga tgacccagtc ccccagctcc ctgtcagcaa gcgtgggcga ccgagtcact 60
atcacctgcc gagctagcca ggatgtgaac accgcagtcg cctggtacca gcagaagcca 120
gggaaagcac ccaagctgct catctactcc gcctctttcc tgtattcagg agtgccaagc 180
aggtttagtg gctcaagaag cggaactgac ttcacactga ctatctctag tctccagccc 240
gaggattttg caacctacta ttgccagcag cactatacca caccccctac cttcggtcag 300
ggcacaaaag tggaaattaa gcggaccggc tccacatctg gaagtgggaa gcccggttcc 360
ggcgagggat ctgaagtgca gctggtcgag tccggaggag gactcgtgca gcctggtggc 420
agtctgaggc tctcatgtgc cgctagcggc ttcaacatca aagacacata cattcattgg 480
gtgcgccagg ctcctgggaa gggtctggaa tgggtcgcac gaatctatcc aactaatggg 540
tacacccgat atgctgactc tgtgaaaggc aggttcacaa tttccgccga tacatctaag 600
aacactgctt acctgcagat gaatagtctc agagctgagg atactgcagt ctactattgt 660
agccggtggg gaggggatgg cttctatgct atggatgtct gggggcaggg gactctggtg 720
actgtctcaa gtggtaccgg tacgcgtg 748
<210> 77
<211> 726
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗HER2 scFv帕妥珠单抗的核酸序列
<400> 77
gatattcaga tgacccagag cccaagctcc ctgtcagcta gcgtgggcga ccgagtcacc 60
atcacatgca aagccagtca ggatgtgtca attggcgtcg cttggtacca gcagaagccc 120
ggaaaagctc ctaagctgct catctattcc gcatcttaca ggtacacagg cgtgccctct 180
cgcttcagtg gttcaggcag cggaactgac tttactctga ccatttctag tctccagcct 240
gaggatttcg caacctacta ttgtcagcag tactatatct acccatatac ctttgggcag 300
ggtacaaaag tggaaattaa gagaacagtc gcagctccag gaggaggagg tagcggagga 360
gggggttccg gcggaggggg ttctggcgga gggggtagtg aggtgcagct ggtcgaaagc 420
ggaggaggac tcgtgcagcc tggtggcagc ctgagactct cctgcgcagc ctctggcttc 480
accttcaccg actacaccat ggattgggtg cggcaggcac caggaaaggg actggagtgg 540
gtggcagacg tcaaccccaa ttccggaggg tctatctaca accagaggtt caaaggaagg 600
ttcaccctga gtgtggatcg atcaaagaac accctgtatc tccagatgaa ttccctgagg 660
gccgaagata cagccgtcta ttattgtgca agaaacctgg gtccatcatt ttattttgac 720
tattgg 726
<210> 78
<211> 727
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗HER2 scFv FRP5的核酸序列
<400> 78
caggtccagc tccagcagtc aggtccagaa ctcaagaagc caggggaaac agtcaaaatc 60
tcatgtaaag cctcaggata cccattcact aactatggga tgaattgggt gaagcaggca 120
cctggccagg gactgaaatg gatgggttgg atcaacacta gcaccgggga gtccacattc 180
gccgacgatt ttaagggccg gttcgacttt tctctcgaaa ccagtgcaaa tacagcctat 240
ctgcagatta acaatctcaa atccgaggat atggccacct acttctgcgc tcgctgggaa 300
gtgtaccacg gatatgtccc atactggggg cagggtacca cagtgacagt cagctccgga 360
ggaggaggtt caggaggagg aggtagcgga ggaggaggtt ccgacatcca gctgacacag 420
tctcataagt ttctctccac ttctgtgggc gacagggtct ctattacctg taaagctagt 480
caggatgtgt ataacgccgt cgcttggtac cagcagaagc ccggccagag ccctaaactg 540
ctcatctata gcgcctctag taggtacact ggagtgccaa gcagattcac cggcagtgga 600
tcagggcccg acttcacctt caccatttca agcgtgcagg ctgaggatct ggcagtctac 660
ttttgccagc agcattttcg cacccctttc acctttggaa gcgggactaa actggagatt 720
aagagga 727
<210> 79
<211> 231
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自dLNGFR的铰链结构域的氨基酸序列
<400> 79
Leu Leu Gly Val Ser Leu Gly Gly Ala Lys Glu Ala Cys Pro Thr Gly
1 5 10 15
Leu Tyr Thr His Ser Gly Glu Cys Cys Lys Ala Cys Asn Leu Gly Glu
20 25 30
Gly Val Ala Gln Pro Cys Gly Ala Asn Gln Thr Val Cys Glu Pro Cys
35 40 45
Leu Asp Ser Val Thr Phe Ser Asp Val Val Ser Ala Thr Glu Pro Cys
50 55 60
Lys Pro Cys Thr Glu Cys Val Gly Leu Gln Ser Met Ser Ala Pro Cys
65 70 75 80
Val Glu Ala Asp Asp Ala Val Cys Arg Cys Ala Tyr Gly Tyr Tyr Gln
85 90 95
Asp Glu Thr Thr Gly Arg Cys Glu Ala Cys Arg Val Cys Glu Ala Gly
100 105 110
Ser Gly Leu Val Phe Ser Cys Gln Asp Lys Gln Asn Thr Val Cys Glu
115 120 125
Glu Cys Pro Asp Gly Thr Tyr Ser Asp Glu Ala Asn His Val Asp Pro
130 135 140
Cys Leu Pro Cys Thr Val Cys Glu Asp Thr Glu Arg Gln Leu Arg Glu
145 150 155 160
Cys Thr Arg Trp Ala Asp Ala Glu Cys Glu Glu Ile Pro Gly Arg Trp
165 170 175
Ile Thr Arg Ser Thr Pro Pro Glu Gly Ser Asp Ser Thr Ala Pro Ser
180 185 190
Thr Gln Glu Pro Glu Ala Pro Pro Glu Gln Asp Leu Ile Ala Ser Thr
195 200 205
Val Ala Gly Val Val Thr Thr Val Met Gly Ser Ser Gln Pro Val Val
210 215 220
Thr Arg Gly Thr Thr Asp Asn
225 230
<210> 80
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自dLNGFR的跨膜结构域的氨基酸序列
<400> 80
Leu Ile Pro Val Tyr Cys Ser Ile Leu Ala Ala Val Val Val Gly Leu
1 5 10 15
Val Ala Tyr Ile Ala Phe
20
<210> 81
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自dLNGFR的胞内结构域的氨基酸序列
<400> 81
Lys Arg Trp Asn Arg Gly Ile Leu
1 5
<210> 82
<211> 50
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自FcyRIIIA的铰链结构域的氨基酸序列
<400> 82
His Glu Asn Ser Glu Leu Leu Ile Pro Lys Ala Thr His Asn Asp Ser
1 5 10 15
Gly Ser Tyr Phe Cys Arg Gly Leu Ile Gly His Asn Asn Lys Ser Ser
20 25 30
Ala Ser Phe Arg Ile Ser Leu Gly Asp Pro Gly Ser Pro Ser Met Phe
35 40 45
Pro Pro
50
<210> 83
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自FcyRIIIA的跨膜结构域的氨基酸序列
<400> 83
Trp His Gln Ile Thr Phe Cys Leu Leu Ile Gly Leu Leu Phe Ala Ile
1 5 10 15
Asp Thr Val Leu Tyr Phe
20
<210> 84
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自FcyRIIIA的胞内结构域的氨基酸序列
<400> 84
Ser Val Arg Arg Gly Leu Gln Ser Pro Val Ala Asp Tyr Glu Glu Pro
1 5 10 15
Lys Ile Gln Trp Ser Lys Glu Pro Gln Asp Lys Thr Arg Val Asp
20 25 30
<210> 85
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自FLT3的铰链结构域的氨基酸序列
<400> 85
Pro Gly Pro Phe Pro Phe Ile Gln Asp Asn
1 5 10
<210> 86
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自FLT3的跨膜结构域的氨基酸序列
<400> 86
Ile Ser Phe Tyr Ala Thr Ile Gly Leu Cys Leu Pro Phe Ile Val Val
1 5 10 15
Leu Ile Val Leu Ile Cys
20
<210> 87
<211> 436
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自FLT3的胞内结构域的氨基酸序列
<400> 87
His Lys Tyr Lys Lys Gln Phe Arg Tyr Glu Ser Gln Leu Gln Met Ile
1 5 10 15
Gln Val Thr Gly Pro Leu Asp Asn Glu Tyr Phe Tyr Val Asp Phe Arg
20 25 30
Asp Tyr Glu Tyr Asp Leu Lys Trp Glu Phe Pro Arg Glu Asn Leu Glu
35 40 45
Phe Gly Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Arg Val Met Asn Ala
50 55 60
Thr Ala Tyr Gly Ile Ser Lys Thr Gly Val Ser Ile Gln Val Ala Val
65 70 75 80
Lys Met Leu Lys Glu Lys Ala Asp Ser Cys Glu Lys Glu Ala Leu Met
85 90 95
Ser Glu Leu Lys Met Met Thr His Leu Gly His His Asp Asn Ile Val
100 105 110
Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr Leu Ser Gly Pro Val Tyr Leu Ile Phe
115 120 125
Glu Tyr Cys Cys Tyr Gly Asp Leu Leu Asn Tyr Leu Arg Ser Lys Arg
130 135 140
Glu Lys Phe His Arg Thr Trp Thr Glu Ile Phe Lys Glu His Asn Phe
145 150 155 160
Ser Phe Tyr Pro Thr Phe Gln Ala His Ser Asn Ser Ser Met Pro Gly
165 170 175
Ser Arg Glu Val Gln Leu His Pro Pro Leu Asp Gln Leu Ser Gly Phe
180 185 190
Asn Gly Asn Leu Ile His Ser Glu Asp Glu Ile Glu Tyr Glu Asn Gln
195 200 205
Lys Arg Leu Ala Glu Glu Glu Glu Glu Asp Leu Asn Val Leu Thr Phe
210 215 220
Glu Asp Leu Leu Cys Phe Ala Tyr Gln Val Ala Lys Gly Met Glu Phe
225 230 235 240
Leu Glu Phe Lys Ser Cys Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val
245 250 255
Leu Val Thr His Gly Lys Val Val Lys Ile Cys Asp Phe Gly Leu Ala
260 265 270
Arg Asp Ile Leu Ser Asp Ser Ser Tyr Val Val Arg Gly Asn Ala Arg
275 280 285
Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Pro Glu Ser Leu Phe Glu Gly Ile Tyr
290 295 300
Thr Ile Lys Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Ile Leu Leu Trp Glu Ile
305 310 315 320
Phe Ser Leu Gly Val Asn Pro Tyr Pro Gly Ile Pro Val Asp Ala Asn
325 330 335
Phe Tyr Lys Leu Ile Gln Ser Gly Phe Lys Met Glu Gln Pro Phe Tyr
340 345 350
Ala Thr Glu Gly Ile Tyr Phe Val Met Gln Ser Cys Trp Ala Phe Asp
355 360 365
Ser Arg Lys Arg Pro Ser Phe Pro Asn Leu Thr Ser Phe Leu Gly Cys
370 375 380
Gln Leu Ala Glu Ala Glu Glu Ala Met Tyr Gln Asn Met Gly Gly Asn
385 390 395 400
Val Pro Glu His Pro Ser Ile Tyr Gln Asn Arg Arg Pro Leu Ser Arg
405 410 415
Glu Ala Gly Ser Glu Pro Pro Ser Pro Gln Ala Gln Val Lys Ile His
420 425 430
Gly Glu Arg Ser
435
<210> 88
<211> 99
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自TLR4的铰链结构域的氨基酸序列
<400> 88
Gln Leu Tyr Ser Leu Ser Thr Leu Asp Cys Ser Phe Asn Arg Ile Glu
1 5 10 15
Thr Ser Lys Gly Ile Leu Gln His Phe Pro Lys Ser Leu Ala Phe Phe
20 25 30
Asn Leu Thr Asn Asn Ser Val Ala Cys Ile Cys Glu His Gln Lys Phe
35 40 45
Leu Gln Trp Val Lys Glu Gln Lys Gln Phe Leu Val Asn Val Glu Gln
50 55 60
Met Thr Cys Ala Thr Pro Val Glu Met Asn Thr Ser Leu Val Leu Asp
65 70 75 80
Phe Asn Asn Ser Thr Cys Tyr Met Tyr Lys Thr Ile Ile Ser Val Ser
85 90 95
Val Val Ser
<210> 89
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自TLR4的跨膜结构域的氨基酸序列
<400> 89
Val Ile Val Val Ser Thr Val Ala Phe Leu Ile Tyr His Phe Tyr Phe
1 5 10 15
His Leu Ile Leu Ile
20
<210> 90
<211> 176
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自TLR4的胞内结构域的氨基酸序列
<400> 90
Ala Gly Cys Lys Lys Tyr Ser Arg Gly Glu Ser Ile Tyr Asp Ala Phe
1 5 10 15
Val Ile Tyr Ser Ser Gln Asn Glu Asp Trp Val Arg Asn Glu Leu Val
20 25 30
Lys Asn Leu Glu Glu Gly Val Pro Arg Phe His Leu Cys Leu His Tyr
35 40 45
Arg Asp Phe Ile Pro Gly Val Ala Ile Ala Ala Asn Ile Ile Gln Glu
50 55 60
Gly Phe His Lys Ser Arg Lys Val Ile Val Val Val Ser Arg His Phe
65 70 75 80
Ile Gln Ser Arg Trp Cys Ile Phe Glu Tyr Glu Ile Ala Gln Thr Trp
85 90 95
Gln Phe Leu Ser Ser Arg Ser Gly Ile Ile Phe Ile Val Leu Glu Lys
100 105 110
Val Glu Lys Ser Leu Leu Arg Gln Gln Val Glu Leu Tyr Arg Leu Leu
115 120 125
Ser Arg Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Glu Asp Asn Pro Leu Gly Arg His
130 135 140
Ile Phe Trp Arg Arg Leu Lys Asn Ala Leu Leu Asp Gly Lys Ala Ser
145 150 155 160
Asn Pro Glu Gln Thr Ala Glu Glu Glu Gln Glu Thr Ala Thr Trp Thr
165 170 175
<210> 91
<211> 55
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自CCR2的铰链结构域的氨基酸序列
<400> 91
Met Glu Asp Asn Asn Met Leu Pro Gln Phe Ile His Gly Ile Leu Ser
1 5 10 15
Thr Ser His Ser Leu Phe Thr Arg Ser Ile Gln Glu Leu Asp Glu Gly
20 25 30
Ala Thr Thr Pro Tyr Asp Tyr Asp Asp Gly Glu Pro Cys His Lys Thr
35 40 45
Ser Val Lys Gln Ile Gly Ala
50 55
<210> 92
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自ITGB2的铰链结构域的氨基酸序列
<400> 92
Asn Ala Arg Leu Val Glu Cys Ser Gly Arg Gly His Cys Gln Cys Asn
1 5 10 15
Arg Cys Ile Cys Asp Glu Gly Tyr Gln Pro Pro Met Cys Glu Asp Cys
20 25 30
Pro Ser Cys Gly Ser His Cys Arg Asp Asn His Thr Ser Cys Ala Glu
35 40 45
Cys Leu Lys Phe Asp Lys Gly Pro Phe Glu Lys Asn Cys Ser Val Gln
50 55 60
Cys Ala Gly Met Thr Leu Gln Thr Ile Pro Leu Lys Lys Lys Pro Cys
65 70 75 80
Lys Glu Arg Asp Ser Glu Gly Cys Trp Ile Thr Tyr Thr Leu Gln Gln
85 90 95
Lys Asp Gly Arg Asn Ile Tyr Asn Ile His Val Glu Asp Ser Leu Glu
100 105 110
Cys Val Lys Gly Pro Asn
115
<210> 93
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自ITGB2的跨膜结构域的氨基酸序列
<400> 93
Val Ala Ala Ile Val Gly Gly Thr Val Val Gly Val Val Leu Ile Gly
1 5 10 15
Val Leu Leu Leu Val Ile Trp
20
<210> 94
<211> 46
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自ITGB2的胞内结构域的氨基酸序列
<400> 94
Lys Ala Leu Thr His Leu Thr Asp Leu Arg Glu Tyr Arg Arg Phe Glu
1 5 10 15
Lys Glu Lys Leu Lys Ser Gln Trp Asn Asn Asp Asn Pro Leu Phe Lys
20 25 30
Ser Ala Thr Thr Thr Val Met Asn Pro Lys Phe Ala Glu Ser
35 40 45
<210> 95
<211> 78
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自CSF2RB的铰链结构域的氨基酸序列
<400> 95
Thr Gln Lys Met Ala Tyr Ser Phe Ile Glu His Thr Phe Gln Val Gln
1 5 10 15
Tyr Lys Lys Lys Ser Asp Ser Trp Glu Asp Ser Lys Thr Glu Asn Leu
20 25 30
Asp Arg Ala His Ser Met Asp Leu Ser Gln Leu Glu Pro Asp Thr Ser
35 40 45
Tyr Cys Ala Arg Val Arg Val Lys Pro Ile Ser Asn Tyr Asp Gly Ile
50 55 60
Trp Ser Lys Trp Ser Glu Glu Tyr Thr Trp Lys Thr Asp Trp
65 70 75
<210> 96
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自CSF2RB的跨膜结构域的氨基酸序列
<400> 96
Val Met Pro Thr Leu Trp Ile Val Leu Ile Leu Val Phe Leu Ile Leu
1 5 10 15
Thr Leu Leu Leu Ile Leu
20
<210> 97
<211> 433
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自CSF2RB的胞内结构域的氨基酸序列
<400> 97
Arg Phe Gly Cys Val Ser Val Tyr Arg Thr Tyr Arg Lys Trp Lys Glu
1 5 10 15
Lys Ile Pro Asn Pro Ser Lys Ser Leu Leu Phe Gln Asp Gly Gly Lys
20 25 30
Gly Leu Trp Pro Pro Gly Ser Met Ala Ala Phe Ala Thr Lys Asn Pro
35 40 45
Ala Leu Gln Gly Pro Gln Ser Arg Leu Leu Ala Glu Gln Gln Gly Glu
50 55 60
Ser Tyr Ala His Leu Glu Asp Asn Asn Val Ser Pro Leu Thr Ile Glu
65 70 75 80
Asp Pro Asn Ile Ile Arg Val Pro Pro Ser Gly Pro Asp Thr Thr Pro
85 90 95
Ala Ala Ser Ser Glu Ser Thr Glu Gln Leu Pro Asn Val Gln Val Glu
100 105 110
Gly Pro Thr Pro Asn Arg Pro Arg Lys Gln Leu Pro Ser Phe Asp Phe
115 120 125
Asn Gly Pro Tyr Leu Gly Pro Pro Gln Ser His Ser Leu Pro Asp Leu
130 135 140
Pro Asp Gln Leu Gly Ser Pro Gln Val Gly Gly Ser Leu Lys Pro Ala
145 150 155 160
Leu Pro Gly Ser Leu Glu Tyr Met Cys Leu Pro Pro Gly Gly Gln Ala
165 170 175
Gln Leu Val Pro Leu Ser Gln Val Met Gly Gln Gly Gln Ala Met Asp
180 185 190
Val Gln Cys Gly Ser Ser Leu Glu Thr Ser Gly Ser Pro Ser Val Glu
195 200 205
Pro Lys Glu Asn Pro Pro Val Glu Leu Ser Met Glu Glu Gln Glu Ala
210 215 220
Arg Asp Asn Pro Val Thr Leu Pro Ile Ser Ser Gly Gly Pro Glu Gly
225 230 235 240
Ser Met Met Ala Ser Asp Tyr Val Thr Pro Gly Asp Pro Val Leu Thr
245 250 255
Leu Pro Thr Gly Pro Leu Ser Thr Ser Leu Gly Pro Ser Leu Gly Leu
260 265 270
Pro Ser Ala Gln Ser Pro Arg Leu Cys Leu Lys Leu Pro Arg Val Pro
275 280 285
Ser Gly Ser Pro Ala Leu Gly Pro Pro Gly Phe Glu Asp Tyr Val Glu
290 295 300
Leu Pro Pro Ser Val Ser Gln Ala Ala Lys Ser Pro Pro Gly His Pro
305 310 315 320
Ala Pro Pro Val Ala Ser Ser Pro Thr Val Ile Pro Gly Glu Pro Arg
325 330 335
Glu Glu Val Gly Pro Ala Ser Pro His Pro Glu Gly Leu Leu Val Leu
340 345 350
Gln Gln Val Gly Asp Tyr Cys Phe Leu Pro Gly Leu Gly Pro Gly Ser
355 360 365
Leu Ser Pro His Ser Lys Pro Pro Ser Pro Ser Leu Cys Ser Glu Thr
370 375 380
Glu Asp Leu Val Gln Asp Leu Ser Val Lys Lys Phe Pro Tyr Gln Pro
385 390 395 400
Met Pro Gln Ala Pro Ala Ile Gln Phe Phe Lys Ser Leu Lys His Gln
405 410 415
Asp Tyr Leu Ser Leu Pro Pro Trp Asp Asn Ser Gln Ser Gly Lys Val
420 425 430
Cys
<210> 98
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自CCR1的铰链结构域的氨基酸序列
<400> 98
Thr Pro Cys Gln Lys Thr Ala Val Arg Ala Phe Gly Ala
1 5 10
<210> 99
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自CCR5的铰链结构域的氨基酸序列
<400> 99
Met Ser Ala Pro Cys Gln Lys Ile Asn Val Lys Gln Ile Ala Ala
1 5 10 15
<210> 100
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自CXCR4的铰链结构域的氨基酸序列
<400> 100
Phe Arg Asp Glu Asn Val His Phe Asn Arg
1 5 10
<210> 101
<211> 207
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自SELPLG的铰链结构域的氨基酸序列
<400> 101
Ile Ala Thr Thr Asp Pro Thr Ala Pro Gly Thr Gly Gly Thr Ala Val
1 5 10 15
Gly Met Leu Ser Thr Asp Ser Ala Thr Gln Trp Ser Leu Thr Ser Val
20 25 30
Glu Thr Val Gln Pro Ala Ser Thr Glu Val Glu Thr Ser Gln Pro Ala
35 40 45
Pro Met Glu Ala Glu Thr Ser Gln Pro Ala Pro Met Glu Ala Glu Thr
50 55 60
Ser Gln Pro Ala Pro Met Glu Ala Asp Thr Ser Lys Pro Ala Pro Thr
65 70 75 80
Glu Ala Glu Thr Ser Lys Pro Ala Pro Thr Glu Ala Glu Thr Ser Gln
85 90 95
Pro Ala Pro Asn Glu Ala Glu Thr Ser Lys Pro Ala Pro Thr Glu Ala
100 105 110
Glu Thr Ser Lys Pro Ala Pro Thr Glu Ala Glu Thr Thr Gln Leu Pro
115 120 125
Arg Ile Gln Ala Val Lys Thr Leu Phe Thr Thr Ser Ala Ala Thr Glu
130 135 140
Val Pro Ser Thr Glu Pro Thr Thr Met Glu Thr Ala Ser Thr Glu Ser
145 150 155 160
Asn Glu Ser Thr Ile Phe Leu Gly Pro Ser Val Thr His Leu Pro Asp
165 170 175
Ser Gly Leu Lys Lys Gly Leu Ile Val Thr Pro Gly Asn Ser Pro Ala
180 185 190
Pro Thr Leu Pro Gly Ser Ser Asp Leu Ile Pro Val Lys Gln Cys
195 200 205
<210> 102
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自SELPLG的跨膜结构域的氨基酸序列
<400> 102
Leu Leu Ile Ile Leu Ile Leu Ala Ser Leu Ala Thr Ile Phe Leu Val
1 5 10 15
Cys Thr Val Val Leu
20
<210> 103
<211> 69
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 衍生自SELPLG的胞内结构域的氨基酸序列
<400> 103
Ala Val Arg Leu Ser Arg Lys Thr His Met Tyr Pro Val Arg Asn Tyr
1 5 10 15
Ser Pro Thr Glu Met Ile Cys Ile Ser Ser Leu Leu Pro Glu Gly Gly
20 25 30
Asp Gly Ala Pro Val Thr Ala Asn Gly Gly Leu Pro Lys Val Gln Asp
35 40 45
Leu Lys Thr Glu Pro Ser Gly Asp Arg Asp Gly Asp Asp Leu Thr Leu
50 55 60
His Ser Phe Leu Pro
65
<210> 104
<211> 2
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 促进DNA工程的肽的氨基酸序列
<400> 104
Thr Gly
1
<210> 105
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> IgK结构域的核酸序列（用于FRP5和曲妥珠单抗）
<400> 105
atggattttc aggtgcagat tttctctttc ctcctcattt ccgcctcagt gattatgtca 60
aggggg 66
<210> 106
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> IgK结构域的核酸序列（用于帕妥珠单抗）
<400> 106
atggattttc aggtgcagat tttctccttt ctcctcattt cagccagcgt gattatgtct 60
cggggg 66
<210> 107
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 促进DNA工程的肽的核酸序列
<400> 107
accggt 6
<210> 108
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 促进DNA工程的肽的核酸序列
<400> 108
accggg 6
<210> 109
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> IgK结构域的核酸序列（用于EVIR-N1）
<400> 109
atggacttcc aggtgcagat cttcagcttc ctgctgatct ccgccagcgt gatcatgagc 60
agaggc 66
<210> 110
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> IgK结构域的核酸序列（用于EVIR-N2）
<400> 110
atggattttc aggtgcagat cttcagcttc ctgctgatct ccgccagcgt gatcatgagc 60
agaggc 66
<210> 111
<211> 744
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗TYRPl scFv TA99的核酸序列
<400> 111
gacatccaga tgagccagag ccctgccagc ctgtctgcct ctgtgggcga gacagtgacc 60
atcacctgta gagccagcgg caacatctac aactacctgg cctggtatca gcagaagcag 120
ggcaagagcc cccatctgct ggtgtacgac gccaagacac tggccgacgg cgtgccctct 180
agattctctg gcagcggctc cggcacccag tacagcctga agatcagctc cctgcagacc 240
gaggactccg gcaactacta ctgccagcac ttctggtccc tgcccttcac cttcggcagc 300
ggcaccaagc tggaaatcaa gagaggcggc ggaggctctg gcggaggcgg atctgggggc 360
ggaggaagtg gcgggggagg atctgaagtg cagctgcagc agtctggcgc tgagctcgtg 420
cgacctggcg ctctcgtgaa gctgagctgc aagaccagcg gcttcaatat caaggactac 480
ttcctgcact gggtgcgaca gaggcctgac cagggcctgg aatggatcgg ctggatcaac 540
cccgacaacg gcaacaccgt gtacgaccct aagttccagg gcaccgccag cctgacagcc 600
gacacaagct ccaacacagt gtacctgcag ctgagcggcc tgacctccga ggataccgcc 660
gtgtacttct gcaccagaag agactacacc tacgagaagg ccgccctgga ctactggggc 720
cagggaacaa ccgtgaccgt gtcc 744
<210> 112
<211> 720
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗GD2 scFv 14G2a的核酸序列
<400> 112
gaagttcagc tgctgcagag cggacccgaa ctggaaaaac ctggcgcctc cgtgatgatc 60
agctgcaagg cctctggcag ctccttcacc ggctacaaca tgaactgggt ccgacagaac 120
atcggcaaga gcctggaatg gatcggcgcc atcgatcctt actacggcgg caccagctac 180
aaccagaagt tcaagggcag agccacactg accgtggaca agagcagcag cacagcctac 240
atgcatctga agtccctgac cagcgaggac agcgccgtgt actactgtgt gtccggcatg 300
gaatactggg gccagggcac aagcgtgaca gtctcttctg gcggcggtgg atctggcgga 360
ggcggaagtg gtggcggcgg atctgatgtg gtcatgacac agacccctct gagcctgcct 420
gtgtctctgg gagatcaggc cagcatcagc tgtagaagca gccagagcct ggtgcacaga 480
aacggcaaca cctacctgca ctggtatctg cagaagcccg gccagtctcc taagctgctg 540
atccacaagg tgtccaacag attcagcggc gtgcccgaca gattctctgg ctctggaagc 600
ggcaccgact tcaccctgaa gattagcaga gtggaagccg aggacctggg cgtgtacttc 660
tgtagccaga gcacacacgt gccacctctg acatttggcg ctggcaccaa gctggaactg 720
<210> 113
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TA99基抗TYRP1 scFv的氨基酸序列
<400> 113
Asp Ile Gln Met Ser Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro His Leu Leu Val
35 40 45
Tyr Asp Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Ser Ser Leu Gln Thr
65 70 75 80
Glu Asp Ser Gly Asn Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Leu Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
130 135 140
Leu Val Lys Leu Ser Cys Lys Thr Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Leu His Trp Val Arg Gln Arg Pro Asp Gln Gly Leu Glu Trp Ile
165 170 175
Gly Trp Ile Asn Pro Asp Asn Gly Asn Thr Val Tyr Asp Pro Lys Phe
180 185 190
Gln Gly Thr Ala Ser Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Val Tyr
195 200 205
Leu Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
210 215 220
Thr Arg Arg Asp Tyr Thr Tyr Glu Lys Ala Ala Leu Asp Tyr Trp Gly
225 230 235 240
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
245
<210> 114
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 14G2a基抗GD2 scFv的氨基酸序列
<400> 114
Glu Val Gln Leu Leu Gln Ser Gly Pro Glu Leu Glu Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Met Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Ser Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Asn Ile Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met His Leu Lys Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Ser Gly Met Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
130 135 140
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg
145 150 155 160
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
165 170 175
Pro Lys Leu Leu Ile His Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
180 185 190
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
195 200 205
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
210 215 220
Thr His Val Pro Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
225 230 235 240
<210> 115
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Cxcl9 Fw Xmal的核酸序列
<400> 115
aaaaacccgg gtcactccaa cacagtgact c 31
<210> 116
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Cxcl9 Rv Sall / Nhel的核酸序列
<400> 116
aaaaagtcga cgctagccag ggtgcttgtt ggtaaagt 38
<210> 117
<211> 450
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Cxcl9的核酸序列
<400> 117
tcactccaac acagtgactc aatagaactc agctctgcca tgaagtccgc tgttcttttc 60
ctcttgggca tcatcttcct ggagcagtgt ggagttcgag gaaccctagt gataaggaat 120
gcacgatgct cctgcatcag caccagccga ggcacgatcc actacaaatc cctcaaagac 180
ctcaaacagt ttgccccaag ccccaattgc aacaaaactg aaatcattgc tacactgaag 240
aacggagatc aaacctgcct agatccggac tcggcaaatg tgaagaagct gatgaaagaa 300
tgggaaaaga agatcagcca aaagaaaaag caaaagaggg ggaaaaaaca tcaaaagaac 360
atgaaaaaca gaaaacccaa aacaccccaa agtcgtcgtc gttcaaggaa gactacataa 420
gagaccatta ctttaccaac aagcaccctg 450
<210> 118
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> GM-CSF Fw Xmal的核酸序列
<400> 118
aaaaacccgg gcagagagaa aggctaaggt cc 32
<210> 119
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> GM-CSF_Rv_SalI/NheI的核酸序列
<400> 119
aaaaagtcga cgctagcagt ctgagaagct ggatt 35
<210> 120
<211> 493
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> GM-CSF的核酸序列
<400> 120
cagagagaaa ggctaaggtc ctgaggagga tgtggctgca gaatttactt ttcctgggca 60
ttgtggtcta cagcctctca gcacccaccc gctcacccat cactgtcacc cggccttgga 120
agcatgtaga ggccatcaaa gaagccctga acctcctgga tgacatgcct gtcacgttga 180
atgaagaggt agaagtcgtc tctaacgagt tctccttcaa gaagctaaca tgtgtgcaga 240
cccgcctgaa gatattcgag cagggtctac ggggcaattt caccaaactc aagggcgcct 300
tgaacatgac agccagctac taccagacat actgcccccc aactccggaa acggactgtg 360
aaacacaagt taccacctat gcggatttca tagacagcct taaaaccttt ctgactgata 420
tcccctttga atgcaaaaaa ccaggccaaa aatgaggaag cccaggccag ctctgaatcc 480
agcttctcag act 493
<210> 121
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> IFNγ Fw Xmal的核酸序列
<400> 121
aaaaacccgg gagttctggg cttctcctcc t 31
<210> 122
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> IFNγ_Rv_SalI/NheI的核酸序列
<400> 122
aaaaagtcga cgctagcgac aatctcttcc ccacccc 37
<210> 123
<211> 530
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> IFNγ的核酸序列
<400> 123
agttctgggc ttctcctcct gcggcctagc tctgagacaa tgaacgctac acactgcatc 60
ttggctttgc agctcttcct catggctgtt tctggctgtt actgccacgg cacagtcatt 120
gaaagcctag aaagtctgaa taactatttt aactcaagtg gcatagatgt ggaagaaaag 180
agtctcttct tggatatctg gaggaactgg caaaaggatg gtgacatgaa aatcctgcag 240
agccagatta tctctttcta cctcagactc tttgaagtct tgaaagacaa tcaggccatc 300
agcaacaaca taagcgtcat tgaatcacac ctgattacta ccttcttcag caacagcaag 360
gcgaaaaagg atgcattcat gagtattgcc aagtttgagg tcaacaaccc acaggtccag 420
cgccaagcat tcaatgagct catccgagtg gtccaccagc tgttgccgga atccagcctc 480
aggaagcgga aaaggagtcg ctgctgattc ggggtgggga agagattgtc 530
<210> 124
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> LIN28_Fw BamHI的核酸序列
<400> 124
aaaaaggatc cctttgcctc cggacttctc tgg 33
<210> 125
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> LIN28_Rv_Sall的核酸序列
<400> 125
aaaaagtcga caaagacagg gtgacactgg ga 32
<210> 126
<211> 857
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> LIN28（PstI和Smal-小鼠滋养层细胞）的核酸序列
<400> 126
ctttgcctcc ggacttctct ggggccagca gccgcccgac ctggggcccg gggccacggg 60
ctcagcagac gaccatgggc tcggtgtcca accagcagtt tgcaggtggc tgcgccaagg 120
cagcggagaa ggcgccagag gaggcgccgc ctgacgcggc ccgagcggca gacgagccgc 180
agctgctgca cggggccggc atctgtaagt ggttcaacgt gcgcatgggg ttcggcttcc 240
tgtctatgac cgcccgcgct ggggtcgcgc tcgacccccc ggtggacgtc tttgtgcacc 300
agagcaagct gcacatggaa gggttccgaa gcctcaagga gggtgaggcg gtggagttca 360
cctttaagaa gtctgccaag ggtctggaat ccatccgtgt cactggccct ggtggtgtgt 420
tctgtattgg aagtgagcgg cggccaaagg ggaagaacat gcagaagcga agatccaaag 480
gagacaggtg ctacaactgc ggtgggctag accatcatgc caaggaatgc aagctgccac 540
cccagcccaa gaagtgccac ttttgccaaa gcatcaacca tatggtggcc tcgtgtccac 600
tgaaggccca gcagggcccc agttctcagg gaaagcctgc ctacttccgg gaggaagagg 660
aagagatcca cagccctgcc ctgctcccag aagcccagaa ttgaggccca ggagtcaggg 720
ttattctttg gctaatgggg agtttaagga aagaggcatc aatctgcaga gtggagaaag 780
tgggggtaag ggtgggttgc gtgggtagct tgcactgccg tgtctcaggc cggggttccc 840
agtgtcaccc tgtcttt 857
<210> 127
<211> 876
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CD40的核酸序列（GeneArt CD40钝位点（Smal-Agel-blunted）在Afel / Nheh-blunted双向中）
<400> 127
gccaccatgg tctctctccc tcggctgtgt gctctgtggg gttgtctgct caccgctgtg 60
catctcggcc agtgtgtgac ttgttctgat aaacagtacc tgcatgacgg gcagtgctgt 120
gatctgtgcc agcccggttc taggctcacc agtcattgta cagccctgga gaagactcag 180
tgccaccctt gtgactcagg ggagttcagc gctcagtgga accgagaaat taggtgccac 240
cagcatagac actgtgagcc taatcagggg ctgcgggtga agaaagaggg taccgcagaa 300
agtgacactg tctgcacctg taaggagggc cagcattgca cctcaaaaga ttgcgaagct 360
tgtgcacagc acacaccttg tatcccaggc ttcggagtga tggagatggc tactgaaacc 420
acagacaccg tgtgccaccc atgtcccgtc ggattctttt ctaaccagag ctccctcttt 480
gagaagtgct atccatggac aagctgtgag gataagaacc tggaagtgct ccagaaaggc 540
acatcccaga ctaatgtcat ttgcggactg aaatctcgga tgcgcgccct gctcgtgatc 600
ccagtggtca tgggcatcct cattactatc ttcggagtgt ttctgtacat taagaaagtg 660
gtcaagaaac ccaaggacaa cgagatcctc ccacctgcag ctaggagaca ggacccccag 720
gagatggaag attatcctgg acataataca gcagccccag tgcaggaaac tctgcacggg 780
tgtcagcccg tcacccagga ggatggcaag gaaagcagaa tctccgtcca ggaaaggcag 840
gtcactgata gcatcgcact ccgcccactc gtctga 876
<210> 128
<211> 762
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗HER2 scFv CHA21 (1)的核酸序列
<400> 128
gatattgtcc tcacacagac tcccagctcc ctgcctgtgt ccgtcggaga gaaagtgacc 60
atgacatgca agtctagtca gacactgctc tactctaaca atcagaagaa ctacctcgca 120
tggtatcagc agaaaccagg acagagcccc aagctgctca tctcctgggc tttcacccgg 180
aaatccgggg tgcctgaccg cttcacaggt agcggctccg gaactgattt tactctgacc 240
attggatctg tgaaggcaga ggacctcgcc gtctactatt gccagcagta cagtaattat 300
ccatggactt ttggcggagg gaccaggctg gaaatcaaga gaggtggagg agggtccggt 360
ggaggagggt ctggtggagg agggagtggt ggaggagggt cagaggtgca gctgcagcag 420
tctggccccg aagtggtcaa aactggagct tcagtcaaaa tcagctgtaa ggcatctggg 480
tacagcttca ccggctactt catcaactgg gtgaagaaaa attcagggaa gagccctgag 540
tggatcggcc acatttcaag ctcctacgcc acaagcactt acaaccagaa gttcaaaaat 600
aaggccgctt ttaccgtgga cacatctagt tcaaccgcct tcatgcagct gaactccctc 660
acatctgaag atagtgctgt gtactattgt gtcaggagcg gcaactacga agaatatgct 720
atggattact gggggcaggg gacctccgtg actgtctcaa gc 762
<210> 129
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> IgK结构域(1)的核酸序列
<400> 129
atggattttc aggtccagat tttctccttc ctcctcattt cagccagcgt cattatgtct 60
cggggg 66
<210> 130
<211> 1602
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-N1的核酸序列
<400> 130
atggacttcc aggtgcagat cttcagcttc ctgctgatct ccgccagcgt gatcatgagc 60
agaggcgaca tccagatgag ccagagccct gccagcctgt ctgcctctgt gggcgagaca 120
gtgaccatca cctgtagagc cagcggcaac atctacaact acctggcctg gtatcagcag 180
aagcagggca agagccccca tctgctggtg tacgacgcca agacactggc cgacggcgtg 240
ccctctagat tctctggcag cggctccggc acccagtaca gcctgaagat cagctccctg 300
cagaccgagg actccggcaa ctactactgc cagcacttct ggtccctgcc cttcaccttc 360
ggcagcggca ccaagctgga aatcaagaga ggcggcggag gctctggcgg aggcggatct 420
gggggcggag gaagtggcgg gggaggatct gaagtgcagc tgcagcagtc tggcgctgag 480
ctcgtgcgac ctggcgctct cgtgaagctg agctgcaaga ccagcggctt caatatcaag 540
gactacttcc tgcactgggt gcgacagagg cctgaccagg gcctggaatg gatcggctgg 600
atcaaccccg acaacggcaa caccgtgtac gaccctaagt tccagggcac cgccagcctg 660
acagccgaca caagctccaa cacagtgtac ctgcagctga gcggcctgac ctccgaggat 720
accgccgtgt acttctgcac cagaagagac tacacctacg agaaggccgc cctggactac 780
tggggccagg gaacaaccgt gaccgtgtcc accggtcttc tgggggtgtc ccttggaggt 840
gccaaggagg catgccccac aggcctgtac acacacagcg gtgagtgctg caaagcctgc 900
aacctgggcg agggtgtggc ccagccttgt ggagccaacc agaccgtgtg tgagccctgc 960
ctggacagcg tgacgttctc cgacgtggtg agcgcgaccg agccgtgcaa gccgtgcacc 1020
gagtgcgtgg ggctccagag catgtcggcg ccgtgcgtgg aggccgacga cgccgtgtgc 1080
cgctgcgcct acggctacta ccaggatgag acgactgggc gctgcgaggc gtgccgcgtg 1140
tgcgaggcgg gctcgggcct cgtgttctcc tgccaggaca agcagaacac cgtgtgcgag 1200
gagtgccccg acggcacgta ttccgacgag gccaaccacg tggacccgtg cctgccctgc 1260
accgtgtgcg aggacaccga gcgccagctc cgcgagtgca cacgctgggc cgacgccgag 1320
tgcgaggaga tccctggccg ttggattaca cggtccacac ccccagaggg ctcggacagc 1380
acagccccca gcacccagga gcctgaggca cctccagaac aagacctcat agccagcacg 1440
gtggcaggtg tggtgaccac agtgatgggc agctcccagc ccgtggtgac ccgaggcacc 1500
accgacaacc tcatccctgt ctattgctcc atcctggctg ctgtggttgt gggccttgtg 1560
gcctacatag ccttcaagag gtggaacagg gggatcctct ag 1602
<210> 131
<211> 1578
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-N2的核酸序列
<400> 131
atggattttc aggtgcagat cttcagcttc ctgctgatct ccgccagcgt gatcatgagc 60
agaggcgaag ttcagctgct gcagagcgga cccgaactgg aaaaacctgg cgcctccgtg 120
atgatcagct gcaaggcctc tggcagctcc ttcaccggct acaacatgaa ctgggtccga 180
cagaacatcg gcaagagcct ggaatggatc ggcgccatcg atccttacta cggcggcacc 240
agctacaacc agaagttcaa gggcagagcc acactgaccg tggacaagag cagcagcaca 300
gcctacatgc atctgaagtc cctgaccagc gaggacagcg ccgtgtacta ctgtgtgtcc 360
ggcatggaat actggggcca gggcacaagc gtgacagtct cttctggcgg cggtggatct 420
ggcggaggcg gaagtggtgg cggcggatct gatgtggtca tgacacagac ccctctgagc 480
ctgcctgtgt ctctgggaga tcaggccagc atcagctgta gaagcagcca gagcctggtg 540
cacagaaacg gcaacaccta cctgcactgg tatctgcaga agcccggcca gtctcctaag 600
ctgctgatcc acaaggtgtc caacagattc agcggcgtgc ccgacagatt ctctggctct 660
ggaagcggca ccgacttcac cctgaagatt agcagagtgg aagccgagga cctgggcgtg 720
tacttctgta gccagagcac acacgtgcca cctctgacat ttggcgctgg caccaagctg 780
gaactgaccg gtcttctggg ggtgtccctt ggaggtgcca aggaggcatg ccccacaggc 840
ctgtacacac acagcggtga gtgctgcaaa gcctgcaacc tgggcgaggg tgtggcccag 900
ccttgtggag ccaaccagac cgtgtgtgag ccctgcctgg acagcgtgac gttctccgac 960
gtggtgagcg cgaccgagcc gtgcaagccg tgcaccgagt gcgtggggct ccagagcatg 1020
tcggcgccgt gcgtggaggc cgacgacgcc gtgtgccgct gcgcctacgg ctactaccag 1080
gatgagacga ctgggcgctg cgaggcgtgc cgcgtgtgcg aggcgggctc gggcctcgtg 1140
ttctcctgcc aggacaagca gaacaccgtg tgcgaggagt gccccgacgg cacgtattcc 1200
gacgaggcca accacgtgga cccgtgcctg ccctgcaccg tgtgcgagga caccgagcgc 1260
cagctccgcg agtgcacacg ctgggccgac gccgagtgcg aggagatccc tggccgttgg 1320
attacacggt ccacaccccc agagggctcg gacagcacag cccccagcac ccaggagcct 1380
gaggcacctc cagaacaaga cctcatagcc agcacggtgg caggtgtggt gaccacagtg 1440
atgggcagct cccagcccgt ggtgacccga ggcaccaccg acaacctcat ccctgtctat 1500
tgctccatcc tggctgctgt ggttgtgggc cttgtggcct acatagcctt caagaggtgg 1560
aacaggggga tcctctag 1578
<210> 132
<211> 533
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-N1的氨基酸序列
<400> 132
Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Ile Met Ser Arg Gly Asp Ile Gln Met Ser Gln Ser Pro Ala Ser
20 25 30
Leu Ser Ala Ser Val Gly Glu Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser
35 40 45
Gly Asn Ile Tyr Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys
50 55 60
Ser Pro His Leu Leu Val Tyr Asp Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val
65 70 75 80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys
85 90 95
Ile Ser Ser Leu Gln Thr Glu Asp Ser Gly Asn Tyr Tyr Cys Gln His
100 105 110
Phe Trp Ser Leu Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile
115 120 125
Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
130 135 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu
145 150 155 160
Leu Val Arg Pro Gly Ala Leu Val Lys Leu Ser Cys Lys Thr Ser Gly
165 170 175
Phe Asn Ile Lys Asp Tyr Phe Leu His Trp Val Arg Gln Arg Pro Asp
180 185 190
Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Trp Ile Asn Pro Asp Asn Gly Asn Thr
195 200 205
Val Tyr Asp Pro Lys Phe Gln Gly Thr Ala Ser Leu Thr Ala Asp Thr
210 215 220
Ser Ser Asn Thr Val Tyr Leu Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp
225 230 235 240
Thr Ala Val Tyr Phe Cys Thr Arg Arg Asp Tyr Thr Tyr Glu Lys Ala
245 250 255
Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Thr Gly
260 265 270
Leu Leu Gly Val Ser Leu Gly Gly Ala Lys Glu Ala Cys Pro Thr Gly
275 280 285
Leu Tyr Thr His Ser Gly Glu Cys Cys Lys Ala Cys Asn Leu Gly Glu
290 295 300
Gly Val Ala Gln Pro Cys Gly Ala Asn Gln Thr Val Cys Glu Pro Cys
305 310 315 320
Leu Asp Ser Val Thr Phe Ser Asp Val Val Ser Ala Thr Glu Pro Cys
325 330 335
Lys Pro Cys Thr Glu Cys Val Gly Leu Gln Ser Met Ser Ala Pro Cys
340 345 350
Val Glu Ala Asp Asp Ala Val Cys Arg Cys Ala Tyr Gly Tyr Tyr Gln
355 360 365
Asp Glu Thr Thr Gly Arg Cys Glu Ala Cys Arg Val Cys Glu Ala Gly
370 375 380
Ser Gly Leu Val Phe Ser Cys Gln Asp Lys Gln Asn Thr Val Cys Glu
385 390 395 400
Glu Cys Pro Asp Gly Thr Tyr Ser Asp Glu Ala Asn His Val Asp Pro
405 410 415
Cys Leu Pro Cys Thr Val Cys Glu Asp Thr Glu Arg Gln Leu Arg Glu
420 425 430
Cys Thr Arg Trp Ala Asp Ala Glu Cys Glu Glu Ile Pro Gly Arg Trp
435 440 445
Ile Thr Arg Ser Thr Pro Pro Glu Gly Ser Asp Ser Thr Ala Pro Ser
450 455 460
Thr Gln Glu Pro Glu Ala Pro Pro Glu Gln Asp Leu Ile Ala Ser Thr
465 470 475 480
Val Ala Gly Val Val Thr Thr Val Met Gly Ser Ser Gln Pro Val Val
485 490 495
Thr Arg Gly Thr Thr Asp Asn Leu Ile Pro Val Tyr Cys Ser Ile Leu
500 505 510
Ala Ala Val Val Val Gly Leu Val Ala Tyr Ile Ala Phe Lys Arg Trp
515 520 525
Asn Arg Gly Ile Leu
530
<210> 133
<211> 525
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EVIR-N2的氨基酸序列
<400> 133
Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Ile Met Ser Arg Gly Glu Val Gln Leu Leu Gln Ser Gly Pro Glu
20 25 30
Leu Glu Lys Pro Gly Ala Ser Val Met Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly
35 40 45
Ser Ser Phe Thr Gly Tyr Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Asn Ile Gly
50 55 60
Lys Ser Leu Glu Trp Ile Gly Ala Ile Asp Pro Tyr Tyr Gly Gly Thr
65 70 75 80
Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys
85 90 95
Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met His Leu Lys Ser Leu Thr Ser Glu Asp
100 105 110
Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Val Ser Gly Met Glu Tyr Trp Gly Gln Gly
115 120 125
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
130 135 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser
145 150 155 160
Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser
165 170 175
Gln Ser Leu Val His Arg Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu
180 185 190
Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile His Lys Val Ser Asn
195 200 205
Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
210 215 220
Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val
225 230 235 240
Tyr Phe Cys Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Leu Thr Phe Gly Ala
245 250 255
Gly Thr Lys Leu Glu Leu Thr Gly Leu Leu Gly Val Ser Leu Gly Gly
260 265 270
Ala Lys Glu Ala Cys Pro Thr Gly Leu Tyr Thr His Ser Gly Glu Cys
275 280 285
Cys Lys Ala Cys Asn Leu Gly Glu Gly Val Ala Gln Pro Cys Gly Ala
290 295 300
Asn Gln Thr Val Cys Glu Pro Cys Leu Asp Ser Val Thr Phe Ser Asp
305 310 315 320
Val Val Ser Ala Thr Glu Pro Cys Lys Pro Cys Thr Glu Cys Val Gly
325 330 335
Leu Gln Ser Met Ser Ala Pro Cys Val Glu Ala Asp Asp Ala Val Cys
340 345 350
Arg Cys Ala Tyr Gly Tyr Tyr Gln Asp Glu Thr Thr Gly Arg Cys Glu
355 360 365
Ala Cys Arg Val Cys Glu Ala Gly Ser Gly Leu Val Phe Ser Cys Gln
370 375 380
Asp Lys Gln Asn Thr Val Cys Glu Glu Cys Pro Asp Gly Thr Tyr Ser
385 390 395 400
Asp Glu Ala Asn His Val Asp Pro Cys Leu Pro Cys Thr Val Cys Glu
405 410 415
Asp Thr Glu Arg Gln Leu Arg Glu Cys Thr Arg Trp Ala Asp Ala Glu
420 425 430
Cys Glu Glu Ile Pro Gly Arg Trp Ile Thr Arg Ser Thr Pro Pro Glu
435 440 445
Gly Ser Asp Ser Thr Ala Pro Ser Thr Gln Glu Pro Glu Ala Pro Pro
450 455 460
Glu Gln Asp Leu Ile Ala Ser Thr Val Ala Gly Val Val Thr Thr Val
465 470 475 480
Met Gly Ser Ser Gln Pro Val Val Thr Arg Gly Thr Thr Asp Asn Leu
485 490 495
Ile Pro Val Tyr Cys Ser Ile Leu Ala Ala Val Val Val Gly Leu Val
500 505 510
Ala Tyr Ile Ala Phe Lys Arg Trp Asn Arg Gly Ile Leu
515 520 525
<210> 134
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TYRP1 Fw的核酸序列
<400> 134
aaaaaaaccg gtgacctgtg ttctgaactc ttgc 34
<210> 135
<211> 32
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> TYRP1 Rv的核酸序列
<400> 135
aaaaaagtcg acactgtcat cactggagag ca 32
<210> 136
<211> 103
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗-B2m gRNA的核酸序列
<400> 136
ggtcgtcagc atggctcgct gttttagagc tagaaatagc aagttaaaat aaggctagtc 60
cgttatcaac ttgaaaaagt ggcaccgagt cggtgctttt ttt 103

Claims (27)

1.一种重组胞外囊泡内化受体(EVIR)，包括：
(i)胞外抗体结构域，所述胞外抗体结构域对癌细胞的膜分子特异；
(ii)蛋白质结构域，所述蛋白质结构域包括至少一个跨膜结构域和至少一个胞内结构域；以及
(iii)可选地，细胞膜输出结构域，当在所述细胞中表达时，所述细胞膜输出结构域增加EVIR向抗原呈递细胞的细胞膜的输出。
2.根据权利要求1所述的EVIR，其中，所述胞外抗体结构域是scFv。
3.根据权利要求1或2所述的EVIR，其中，所述胞外抗体结构域包括对人表皮生长因子受体2(HER2)特异的抗体或其片段的序列。
4.根据权利要求1或2所述的EVIR，其中，所述胞外抗体结构域包括对酪氨酸酶相关蛋白-1(TYRP1)、癌胚抗原(CEA)、间皮素、PMEL(gp100)、神经节苷脂(GD2、GD3)或粘蛋白特异的抗体或其片段的序列。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的EVIR，其中，所述胞外抗体结构域包括选自以下的序列或其变体：SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29及SEQ ID NO：30。
6.根据权利要求4所述的EVIR，其中，所述胞外抗体结构域包括对酪氨酸酶相关蛋白-1(TYRP1)或神经节苷脂(GD2)特异的抗体或其片段的序列。
7.根据权利要求6所述的EVIR，其中，所述胞外抗体结构域包括选自以下的序列：SEQID NO：113和SEQ ID NO：114。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的EVIR，其中，所述蛋白质结构域包括选自以下的序列或其变体：SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40及SEQ IDNO：41。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的EVIR，包括细胞膜输出结构域，所述细胞膜输出结构域包括IgK结构域。
10.根据权利要求9所述的EVIR，包括细胞膜输出结构域，所述细胞膜输出结构域包括SEQ ID NO 42的IgK结构域或其衍生物。
11.根据权利要求1至3、5、8或9至10中任一项所述的EVIR，包括选自以下的氨基酸序列或其变体：SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：58、SEQID NO：59、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：63和SEQ ID NO：64。
12.根据权利要求1至2、4、6、8或9至10中任一项所述的EVIR，包括选自以下的氨基酸序列或其变体：SEQ ID NO：132及SEQ ID NO：133。
13.一种分离的核酸序列，所述分离的核酸序列编码权利要求1至12中任一项所述的EVIR。
14.根据权利要求13所述的分离的核酸，包括选自以下的序列或其变体：SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：70、SEQ IDNO：71、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：74和SEQ ID NO：75。
15.根据权利要求13所述的分离的核酸，包括选自以下的序列或其变体：SEQ ID NO：130和SEQ ID NO：131。
16.一种载体，所述载体包括至少一种权利要求13至15中任一项所述的核酸序列。
17.根据权利要求16所述的载体，还包括至少一种编码功能蛋白或蛋白质的核酸，所述功能蛋白促进存活、分化、增殖、激活、成熟、吞噬、内吞、抗原加工和呈递、单核细胞、巨噬细胞和/或树突细胞中的T细胞浸润，所述蛋白质能够诱导抗原呈递细胞(APC)分化、存活、激活和/或交叉呈递或吸引和/或激活T细胞。
18.在抗原呈递细胞(APC)或其干/祖细胞中离体诱导至少一种根据权利要求1至12中任一项所述的EVIR的表达的方法，包括以下步骤：
(i)用编码至少一种根据权利要求1至12中任一项所述的EVIR的载体离体转导所述细胞；以及
(ii)任选地诱导细胞分化、成熟或激活。
19.根据权利要求18所述的方法，其中，所述载体包括权利要求13至15中任一项所述的核酸序列或是权利要求16或17所述的载体。
20.分离的抗原呈递细胞(APC)或其干细胞或祖细胞，表达至少一种根据权利要求1至12中任一项所述的EVIR。
21.一种制备表达EVIR的TAA呈递细胞的离体方法，包括以下步骤：
(i)提供从癌症受试者获得的至少一种癌细胞或至少一种癌细胞衍生的EV；
(ii)提供根据权利要求20所述的EVIR表达细胞；
(iii)使根据(ii)提供的EVIR表达细胞与根据(i)提供的所述至少一种癌细胞或EV离体接触；
(iv)收集步骤(iii)中获得的细胞；
其中，一旦给药给所述受试者，根据(iv)所获细胞与不表达EVIR并且如(iii)中所述进行处理的细胞相比，具有增强的能力，以呈递来自所述癌症受试者的TAA。
22.一种药物组合物，所述药物组合物包括至少一种载体；或根据权利要求20所述的细胞；或可从根据权利要求18或21所述的方法获得的细胞；和其至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，所述载体编码至少一种根据权利要求1至12中任一项所述的EVIR。
23.根据权利要求22所述的药物组合物，其中，所述组合物是疫苗组合物。
24.根据权利要求22或23所述的药物组合物，用于预防和/或治疗癌症。
25.一种试剂盒，所述试剂盒包括至少一种根据权利要求1至12中任一项所述的EVIR，或至少一种根据权利要求16或17所述的重组表达载体，或至少一种根据权利要求20所述的EVIR表达细胞。
26.一种预防和/或治疗癌症的方法，包括在有此需要的受试者中给药有效量的权利要求20所述的EVIR表达细胞或至少一种根据权利要求16或17所述的重组载体。
27.一种体内诱导至少一种根据权利要求1至12中任一项所述的EVIR在有此需要的受试者中在APC或其干/祖细胞中表达的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)在合适的条件下向所述受试者给药编码根据权利要求16或17所述的EVIR的载体，用于在体内用所述载体诱导所述受试者的APC或其干/祖细胞的转导；以及
(ii)可选地体内诱导APC分化、成熟或激活。
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