CN108575759A - 一种利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法，所述白芨组培快繁过程中添加了碳纳米管；所述碳纳米管可以为单壁碳纳米管或多壁碳纳米管；所述碳纳米管的浓度为0.5mg/L～2.5mg/L。本发明还提供上述碳纳米管进行白芨组培快繁的方法，本发明利用碳纳米管的抗菌作用，在白芨的组培快繁进程中使用不同浓度的碳纳米管，降低污染率，提高繁殖效率；此外，本发明的方法还减少组培苗对植物生在调节剂的依赖，从而缩短组培苗移栽后的缓苗期，提高移栽的成活率，缩短白芨成苗的周期。

Description

一种利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法
技术领域
本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法。
背景技术
白芨[Bletilla striata(Thunb.)Reichb.f.]为兰科(Orchidaceae)白芨属(Bletilla)多年生草本植物，别名连及草、甘根、箬兰、朱兰、紫兰、紫蕙、百笠等，分布于东亚；在我国主产于南方。喜温暖、阴湿的环境。稍耐寒，耐阴性强。白芨用途广泛，在药物、食品、化妆品和观赏方面都有重要应用价值。目前，白芨的主要采购还是野生自然资源为主，由于市场需求不断扩展，需要量大大增加，大量开挖野生白芨，储存量急剧减少。而且白芨种子在自然环境播种很难发芽，繁殖率速度很慢，而且药用需求量较大。采用现代组织培养技术，可以快速繁殖大量的种苗，进行人工栽培，而且繁殖速度快、产量高，减少对大自然的破坏，可以最大化的满足市场需求。
目前，白芨快繁体系建立的方法是以种子为外植体，萌发后获得无菌苗；无菌幼苗经诱导增殖，获得丛生芽。但由于白芨共生的菌类种类较多，在芽增殖和生长的过程中由于共生菌污染导致死亡的现象频频发生；除此之外，芽诱导增殖过程中幼玻璃化的现象也较为严重，这极大的降低了白芨组培快繁的效率和繁殖系数。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法，其中，所述白芨组培快繁过程中添加了碳纳米管；
优选地,本发明的碳纳米管可以为单壁碳纳米管(或称单层碳纳米管，Single-walled Carbon nanotubes,SWCNTs)和多壁碳纳米管(或多层碳纳米管，Multi-walledCarbon nanotubes,MWCNTs)。
优选地，本发明所述的利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法中，所述碳纳米管的浓度为0.5mg/L～2.5mg/L。
本发明的另一方面为提供上述碳纳米管进行白芨组培快繁的方法，包括以下步骤：
1)外植体的准备：采收白芨蒴果；
2)外植体的灭菌：将所述白芨蒴果清洗消毒；
3)种子萌发：将所述已灭菌白芨蒴果纵剖在种子培养基培养萌发获得无菌苗；
4)壮苗培养：将所述种子萌发获得的无菌苗移栽到壮芽培养基上培养，获得白芨无菌小苗；
5)不定芽的诱导：将所述白芨无菌小苗继代至不定芽诱导培养基上进行从生芽的诱导、培养后，获得白芨丛生芽；
6)不定芽的增殖：将所述白芨丛生芽继代至不定芽增殖培养基上进行不定芽的增殖培养，获得大量增殖的不定芽；
7)壮芽培养：将所述白芨丛生芽继代到壮芽培养基上进行壮苗培养，获得白芨小苗。
8)壮芽培养和生根培养：将所述白芨小苗继代至壮芽和生根共培养的壮芽培养基上，进行壮芽和生根共培养，获得白芨苗；
9)炼苗和移栽：将所述白芨苗置于自然散射光下，进行炼苗，移栽至栽培基质之后，进行正常的水肥管理即得。
优选地，本发明所述的利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法中，所述种子培养基的的组分为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+1.4-1.8mg/L 6-BA+0.1-0.3mg/L NAA+0.5-2.5mg/L碳纳米管；所述种子萌发的培养条件为25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间12h。
优选地，本发明所述的利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法中，所述壮苗培养基的组分为：蔗糖40g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+0.8-1.2mg/L6-BA+0.1-0.3mg/L NAA+0.5-2.5mg/L碳纳米管；所述壮苗培养的培养条件为培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间12h。
优选地，本发明所述的利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法中，所述不定芽诱导培养基的组分为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+1.5-2.5mg/L6-BA+0.1-0.3mg/L NAA+05-2.0mg/L碳纳米管；所述不定芽诱导的培养条件为所述培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。
优选地，本发明所述的利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法中，所述不定芽增殖培养基的组分为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+1.5-2.5mg/L6-BA+0.4-0.6mg/L NAA+0.5-1.5mg/L碳纳米管；所述不定芽诱导的培养条件为所述培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。优选地，本发明所述的利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法中，所述壮芽培养基的组分为：蔗糖40g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+0.5-1.5mg/L碳纳米管；所述步骤6)中壮芽培养的条件为培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。
优选地，本发明所述的利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法中，所述壮苗和生根共培养培养基的组分为：蔗糖40g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+NAA0.1-0.3mg/L+0.5-1.5mg/L碳纳米管；所述步骤6)中壮芽培养的条件为培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。优选地，本发明所述的利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法中，所述栽培基质的组分中苔藓:椰糠:珍珠岩＝1︰9︰12。
本发明通过在丛生芽诱导和壮芽的过程中，添加一定浓度的碳纳米管，有效的解决了幼苗污染和玻璃化的问题，大大的提高了白芨组培快繁的效率和速度。在获得丛生芽后的壮苗培养和生根培养中，降低植物生长调节剂的浓度，并添加不同浓度的碳纳米管，在组培苗的培养阶段降低小苗对植物生长调节剂的依赖，可大大的缩短移栽后的缓苗期，同时提高组培苗移栽的成活率。本发明与现有技术相比，本发明具有以下优点：
1)本发明利用碳纳米管的抗菌作用，在白芨的组培快繁进程中使用不同浓度的碳纳米管，降低污染率，提高繁殖效率。
2)利用碳纳米管对植物生长和生根的促进作用，在丛生芽诱导完成后，降低植物生长调节剂的使用浓度或不使用植物生长调节剂，添加一定浓度的碳纳米管，减少组培苗对植物生在调节剂的依赖，从而缩短组培苗移栽后的缓苗期，提高移栽的成活率，缩短白芨成苗的周期。
具体实施方式
在本发明的一个实施方案中，提供了一种利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法，其中，所述白芨组培快繁过程中添加了碳纳米管；优选地,本发明的碳纳米管可以为单壁碳纳米管(或称单层碳纳米管，Single-walled Carbon nanotubes,SWCNTs)和多壁碳纳米管(或多层碳纳米管，Multi-walled Carbon nanotubes,MWCNTs)。
优选地，在本发明的另一个实施方案中，所述碳纳米管的浓度为0.5mg/L～2.5mg/L。
在本发明的另一个实施方案中，提供上述碳纳米管进行白芨组培快繁的方法，包括以下步骤：
1)外植体的准备：采收白芨蒴果；
2)外植体的灭菌：将所述白芨蒴果清洗消毒；
3)种子萌发：将所述已灭菌白芨蒴果纵剖在种子培养基培养萌发获得无菌苗；
4)壮苗培养：将所述种子萌发获得的无菌苗移栽到壮芽培养基上培养，获得白芨无菌小苗；
5)不定芽的诱导：将所述白芨无菌小苗继代至不定芽诱导培养基上进行从生芽的诱导、培养后，获得白芨丛生芽；
不定芽的增殖：将所述白芨丛生芽继代至不定芽增殖培养基上进行不定芽的增殖培养，获得大量增殖的不定芽；所述不定芽增殖培养基的组分为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+1.5-2.5mg/L 6-BA+0.4-0.6mg/L NAA+0.5-1.5mg/L碳纳米管；所述不定芽诱导的培养条件为所述培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。
6)壮芽培养：将所述白芨丛生芽继代到壮芽培养基上进行壮苗培养，获得白芨小苗。
7)壮芽培养和生根培养：将所述白芨小苗继代至壮芽和生根共培养的壮芽培养基上，进行壮芽和生根共培养，获得白芨苗；
8)炼苗和移栽：将所述白芨苗置于自然散射光下，进行炼苗，移栽至栽培基质之后，进行正常的水肥管理即得。
在本发明的另一个实施方案中，所述种子培养基的的组分为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+1.6mg/L 6-BA+2.0mg/L NAA+5mg/L碳纳米管；所述种子萌发的培养条件为25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间12h。
在本发明的另一个实施方案中，所述壮苗培养基的组分为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+2.0mg/L碳纳米管；所述壮苗培养的培养条件为培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间12h。
在本发明的另一个实施方案中，所述不定芽诱导培养基的组分为蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+3.0mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA+1.5mg/L碳纳米管；所述不定芽诱导的培养条件为所述培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。
在本发明的另一个实施方案中，所述不定芽增殖培养基的组分为蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+1.5mg/L碳纳米管；所述不定芽诱导的培养条件为所述培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。
在本发明的另一个实施方案中，所述壮芽培养基的组分为蔗糖40g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+NAA0.1-0.3mg/L+1.5mg/L碳纳米管；所述步骤6)中壮芽培养的条件为培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。
优选地，本发明所述的利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法中，所述壮苗和生根共培养培养基的组分为：蔗糖40g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+NAA0.1-0.3mg/L+0.5-1.5mg/L碳纳米管；所述步骤6)中壮芽培养的条件为培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。
在本发明的另一个实施方案中，所述栽培基质的组分中苔藓:椰糠:珍珠岩＝1︰9︰12。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
在本发明的实施例中，基本培养基为1/2MS，均添加蔗糖30g·L-1和琼脂粉6g·L-1(除特殊说明外)。培养基按实验设计在灭菌前加入不同生物添加剂(土豆提取液，椰汁)，以及不同浓度的植物激素(NAA，6-BA)，并设置为5×5完全随机区组。培养基高温灭菌前调pH至5.6，121℃下灭菌30min，每个处理接种5瓶，每瓶约300～400粒种子。暗培养以在黑暗条件下培养30d后置光下，其余处理为12h/12h光照培养，光强2000～2500lx，培养温度均为25±1℃。综合评价白芨种子萌发过程，在12h/12h光周期下，考虑以1/2MS+1.0mg·L-1NAA+1.6mg·L-16-BA为萌发培养基培养获得组培苗；以1/2MS+20％椰汁为培养基获得白芨原球茎。
在本发明的实施例中，种子萌发培养基的组分为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+1.6mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA+2.5mg/L碳纳米管；壮苗培养基的组分为：蔗糖40g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+0.8-1.2mg/L6-BA+0.1-0.3mg/L NAA+2.5mg/L碳纳米管；不定芽诱导培养基的组分为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+1.5-2.5mg/L 6-BA+0.1-0.3mg/L NAA+1.5mg/L碳纳米管；不定芽增殖培养基的组分为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+1.5-2.5mg/L 6-BA+0.4-0.6mg/L NAA+1.5mg/L碳纳米管；丛生芽的壮芽培养培养基配方为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+1.5mg/L碳纳米管；壮芽和生根共培养培养基配方：蔗糖40g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+1.0mg/L碳纳米管。
实施例1利用多壁碳纳米管进行白芨组培快繁
(1)外植体的准备(果实的采收)白芨种子构造简单，成熟时为原胚阶段，非常细小且无胚乳。江苏省白芨种子成熟期在9月份。田间观察到果荚由绿变黄，形状饱满，手捏发硬时，即可采收。采收后于4℃冰箱中冷藏。冷藏时间不宜超过2个月，否则发芽率会下降。
(2)外植体的灭菌白芨蒴果采集后，先用洗涤剂将蒴果表面漂洗干净，再用流水冲洗30min。在超净工作台上用75％酒精浸没60s，无菌水冲洗3-4遍后经5％NaClO溶液消毒15min，期间不停摇动，之后用无菌水冲洗3～4遍，无菌滤纸吸干表面水分。
(3)种子萌发将已灭菌白芨蒴果纵剖，将种子均匀抖落在培养基表面。培养基的组分为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+1.6mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA+2.5mg/L多壁碳纳米管。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间12h。约经过25d的培养后，种子萌发。与不添加多壁碳纳米管的对照相比，白芨种子萌发的时间缩短了4-8天。所用多壁碳纳米管直径10-20nm，长度3-15μm。
(4)壮苗培养将种子萌发获得的无菌苗移栽到壮芽培养基上。培养基的组分为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+2.0mg/L多壁碳纳米管。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间12h。经过30d的培养后，获得白芨无菌小苗。经过两次继代培养后，添加多壁碳纳米管培养基生长的小苗，原球茎更大，苗高比对照高出0.5-0.7cm，污染率则降低了30-40％。
(5)不定芽的诱导将获得的无菌小苗继代至不定芽诱导培养基上进行从生芽的诱导。培养基配方为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+1.5mg/L多壁碳纳米管。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。经过30d的培养后，获得白芨丛生芽。添加多壁碳纳米管培养基的对照相比，丛生芽的诱导率提高了10-15％。
(6)不定芽的增殖：不定芽的增殖：将所述白芨丛生芽继代至不定芽增殖培养基上进行不定芽的增殖培养，获得大量增殖的不定芽；所述不定芽增殖培养基的组分为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+1.8mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+1.2mg/L多壁碳纳米管；所述不定芽诱导的培养条件为所述培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。与不加多壁碳纳米管的对照相比，不定芽的增殖率提高了15-20％。
(7)壮芽培养：将获得的丛生芽继代到壮芽培养基上进行壮苗培养。培养基配方为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+1.2mg/L多壁碳纳米管。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。经过30d的培养后，获得白芨小苗。经过2-3次继代培养后，添加多壁碳纳米管培养基生长的小苗，原球茎更大，苗高比对照高出0.8-1.0cm。
(8)壮苗培养和生根培养将获得的白芨小苗继代至壮芽和生根共培养的培养基上，进行壮芽和生根共培养。培养基配方：蔗糖40g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+0.8mg/L多壁碳纳米管，每30d继代一次，共培养60-90d，直至丛生芽长成原球茎3-5mm，假根3-5条的小苗。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。添加多壁碳纳米管后，可使壮芽和生根同时进行，从而使白芨的快繁周期至少缩短30d，假根的萌发量比对照多2-3条。
(9)炼苗和移栽炼苗在室内进行。将组培瓶开盖，置于自然散射光下，放置2-3d。炼苗完成后，用镊子将试管苗取出，洗去根部的培养基，移栽到10×10的穴盘中。栽培基质为苔藓:椰糠:珍珠岩＝1︰9︰12，栽培基质须经800-1000倍多菌灵消毒处理。之后进行正常的水肥管理。与对照相比，添加多壁碳纳米的培养基培育的白芨组培苗，缓苗期缩短了30-40d，成活率提高了10-15％，小苗原球茎较大，苗更壮，适应性更强。
实施例2利用单壁碳纳米管进行白芨组培快繁
(1)外植体的准备(果实的采收)白芨种子构造简单，成熟时为原胚阶段，非常细小且无胚乳。江苏省白芨种子成熟期在9月份。田间观察到果荚由绿变黄，形状饱满，手捏发硬时，即可采收。采收后于4℃冰箱中冷藏。冷藏时间不宜超过2个月，否则发芽率会下降。
(2)外植体的灭菌白芨蒴果采集后，先用洗涤剂将蒴果表面漂洗干净，再用流水冲洗30min。在超净工作台上用75％酒精浸没60s，无菌水冲洗3-4遍后经5％NaClO溶液消毒15min，期间不停摇动，之后用无菌水冲洗3～4遍，无菌滤纸吸干表面水分。
(3)种子萌发将已灭菌白芨蒴果纵剖，将种子均匀抖落在培养基表面。培养基的组分为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+1.6mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA+2.0mg/L单壁碳纳米管。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间12h。约经过25d的培养后，种子萌发。与不添加单壁碳纳米管的对照相比，白芨种子萌发的时间缩短了3-5d。所用单壁碳纳米管直径1-2nm，长度5-30μm。
(4)壮苗培养将种子萌发获得的无菌苗移栽到壮芽培养基上。培养基的组分为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+1.8mg/L单壁碳纳米管。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间12h。经过30d的培养后，获得白芨无菌小苗。经过两次继代培养后，添加单壁碳纳米管培养基生长的小苗，原球茎更大，苗高比对照高出0.5-0.6cm，污染率则降低了30-35％。
(5)不定芽的诱导将获得的无菌小苗继代至不定芽诱导培养基上进行从生芽的诱导。培养基配方为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+1.3mg/L单壁碳纳米管。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。经过30d的培养后，获得白芨丛生芽。添加单壁碳纳米管培养基的对照相比，丛生芽的诱导率提高了10-13％。
(6)不定芽的增殖：不定芽的增殖：将所述白芨丛生芽继代至不定芽增殖培养基上进行不定芽的增殖培养，获得大量增殖的不定芽；所述不定芽增殖培养基的组分为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+1.8mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+1.0mg/L单壁碳纳米管；所述不定芽诱导的培养条件为所述培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。与不加单壁碳纳米管的对照相比，不定芽的增殖率提高了18-20％。
(7)壮芽培养：将获得的丛生芽继代到壮芽培养基上进行壮苗培养。培养基配方为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+1.0mg/L单壁碳纳米管。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。经过30d的培养后，获得白芨小苗。经过2-3次继代培养后，添加单壁碳纳米管培养基生长的小苗，原球茎更大，苗高比对照高出0.5-0.8cm。
(8)壮苗培养和生根培养将获得的白芨小苗继代至壮芽和生根共培养的培养基上，进行壮芽和生根共培养。培养基配方：蔗糖40g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+0.5mg/L单壁碳纳米管，每30d继代一次，共培养60-90d，直至丛生芽长成原球茎3-5mm，假根3-5条的小苗。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。添加单壁碳纳米管后，可使壮芽和生根同时进行，从而使白芨的快繁周期缩短30-35d，假根的萌发量比对照多2-3条。
(9)炼苗和移栽炼苗在室内进行。将组培瓶开盖，置于自然散射光下，放置2-3d。炼苗完成后，用镊子将试管苗取出，洗去根部的培养基，移栽到10×10的穴盘中。栽培基质为苔藓:椰糠:珍珠岩＝1︰9︰12，栽培基质须经800-1000倍多菌灵消毒处理。与对照相比，添加单壁碳纳米的培养基培育的白芨组培苗，缓苗期缩短了35-40d，成活率提高了10-15％，小苗原球茎较大，苗更壮，适应性更强。
全程添加碳纳米管进行白芨的组培快繁，可显著降低种子发芽后壮苗期间的污染率，提高不定芽的增殖率和增殖系数，缩短快繁周期；在添加碳纳米管的培养基培育的白芨组培苗，原球茎更大，苗更壮，适应性更好。在生根和壮苗过程中，以碳纳米管代替植物生长调节剂，减少白芨对植物生长调节剂的依赖，缩短了缓苗期，从而显著的提高白芨快繁的繁殖系数。
上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法，其特征在于，所述白芨组培快繁过程中添加了碳纳米管；
优选地,所述碳纳米管为单壁碳纳米管或多壁碳纳米管。
2.根据权利要求1所述的利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法，其特征在于，所述碳纳米管的浓度为0.5mg/L～2.5mg/L。
3.根据权利要求1或2所述的利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)外植体的准备：采收白芨蒴果；
2)外植体的灭菌：将所述白芨蒴果清洗消毒；
3)种子萌发：将所述已灭菌白芨蒴果纵剖在种子培养基表面培养萌发获得无菌苗；
4)壮苗培养：将所述种子萌发获得的无菌苗移栽到壮芽培养基上培养，获得白芨无菌小苗；
5)不定芽的诱导：将所述白芨无菌小苗继代至不定芽诱导培养基上进行从生芽的诱导、培养后，获得白芨丛生芽；
6)不定芽的增殖：将所述白芨丛生芽继代至不定芽增殖培养基上进行不定芽的增殖培养，获得大量增殖的不定芽；
7)壮芽培养：将所述白芨丛生芽继代到壮芽培养基上进行壮苗培养，获得白芨小苗。
8)壮苗培养和生根培养：将所述白芨小苗继代至壮芽和生根共培养的壮芽培养基上，进行壮和生根共培养，获得白芨苗；
9)炼苗和移栽：将所述白芨苗置于自然散射光下，进行炼苗，移栽至栽培基质之后，进行正常的水肥管理即得。
4.根据权利要求3所述的利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法，其特征在于，所述种子培养基的的组分为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+1.4-1.8mg/L 6-BA+0.1-0.3mg/LNAA+0.5-2.5mg/L碳纳米管；所述种子萌发的培养条件为25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间12h。
5.根据权利要求3所述的利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法，其特征在于，所述壮苗培养基的组分为：蔗糖40g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+0.8-1.2mg/L6-BA+0.1-0.3mg/L NAA+0.5-2.5mg/L碳纳米管；所述壮苗培养的培养条件为培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间12h。
6.根据权利要求3所述的利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法，其特征在于，所述不定芽诱导培养基的组分为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+1.5-2.5mg/L 6-BA+0.1-0.3mg/L NAA+0.5-2.0mg/L碳纳米管；所述不定芽诱导的培养条件为所述培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。
7.根据权利要求3所述的利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法，其特征在于，所述不定芽增殖培养基的组分为：蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+1.5-2.5mg/L 6-BA+0.4-0.6mg/L NAA+0.5-1.5mg/L碳纳米管；所述不定芽诱导的培养条件为所述培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。
8.根据权利要求3所述的利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法，其特征在于，所述壮芽培养基的组分为：蔗糖40g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+NAA0.1-0.3mg/L+0.5-1.5mg/L碳纳米管；所述步骤6)中壮芽培养的条件为培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。
9.根据权利要求3所述的利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法，其特征在于，所述壮苗和生根共培养培养基的组分为：蔗糖40g/L+琼脂7.5g/L+1/2MS+0.5-1.0mg/L碳纳米管；所述壮苗和生根共培养的培养条件为所述培养温度25±1℃，光照强度100～300μmol·m-2·s-1，光照时间16h。
10.根据权利要求3所述的利用碳纳米管进行白芨组培快繁的方法，其特征在于，所述栽培基质的组分中苔藓:椰糠:珍珠岩＝1︰9︰12。
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