CN107182791A - 一种白芨组培快繁方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种白芨组培快繁方法，涉及花卉组培繁育领域，包括以下步骤：1)外植体消毒：选取健康无病的白芨种子作为外植体进行消毒处理；2)接种诱导：将外植体接种于固体培养基上进行愈伤诱导，促使发芽成苗；3)增值继代培养：切取幼苗茎段转入到继代固体培养基中，直至茎段增殖，得丛生芽；4)生根培养。该种组培繁育方法简单易行，能提高种子萌发率、缩短培养时间、提高获得的组培苗球茎大小、提高生根率及移栽成活率，以便快速繁殖白芨组培苗，满足市场需要，适宜推广应用。

Description

一种白芨组培快繁方法
技术领域
本发明涉及花卉组培繁育领域，具体涉及一种白芨组培快繁方法。
背景技术
白芨又名连及草、甘根、白给、箬兰、朱兰、紫兰、紫蕙、百笠，为兰科白芨属多年生草本植物，广泛分布于我国长江流域各省，主产于贵州、四川、湖南、湖北、安徽、河南、浙江、陕西等地。白芨不仅具有较高的观赏价值，也是我国重要的中药材之一，以块茎入药，能收敛止血、消肿生肌，广泛应用于治疗肺结核及支气管扩张咳血、胃溃疡出血等症。
长期以来，白芨市场主要依靠野生资源，随着需求量的增加以及价格的高涨，导致野生资源日渐枯竭。因此，解决白芨种苗快速繁殖技术是缓解市场供需矛盾的关键。现有的白芨种苗组培快繁多采用种子播种到固体培养基，然后经继代及生根最终生产出组培苗。然而，现有白芨组培快繁技术在种子萌发率、移栽成活率、组培苗生根及球茎大小等方面还有待进一步改进。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种白芨组培快繁方法，该种组培繁育方法简单易行，能提高种子萌发率、缩短培养时间、提高获得的组培苗球茎大小、提高生根率及移栽成活率，以便快速繁殖白芨组培苗，满足市场需要，适宜推广应用。
为了达到上述目的，本发明通过以下技术方案来实现的：
一种白芨组培快繁方法，按照以下步骤进行：
(1)外植体消毒：选取健康无病的白芨种子作为外植体，用清水洗去种子表面的毛和异物，然后转移至超净工作台，先用无菌水洗涤2-4次，放入浓度为75％的酒精中浸泡30-40s，再用无菌水洗涤2-4次，后置于浓度为0.1～0.3％的升汞溶液中消毒5～15min，期间不停的摇动，使其消毒彻底，消毒结束后无菌水洗涤4-6次，最后用无菌滤纸吸干表面水分待用；
(2)接种诱导：将步骤(1)消毒后的外植体接种于固体培养基上进行愈伤诱导，促使发芽成苗，且接种诱导培养的环境条件为：室内温度为17±2℃，室内相对湿度78％-82％，室内光照强度为1000-1200lx，光照时间设定为12±1h/d；
(3)增值继代培养：切取步骤(2)中形成的幼苗茎段2.0-4.0cm，转入到继代培养基中，直至茎段增殖，得丛生芽，且增值继代培养的环境条件为：室内温度为18±2℃，室内相对湿度76％-80％，室内光照强度为1000-1200lx，光照时间设定为12±1h/d；
(4)生根培养：待所述丛生芽的单芽长至2.0-6.0cm时，将郁金香组培苗移植至生根培养基中，且生根培养的环境条件为：室内温度为18±2℃，室内相对湿度76％-80％，室内光照强度为1000-1200lx，光照时间设定为12±1h/d。
优选地，在步骤(2)中，所述固体培养基是由LS培养基和WPM培养基两种基本培养基组成的。
进一步地，所述LS培养基和WPM培养基两种基本培养基的成分占比为(2-4):1。
进一步地，在步骤(2)中，在所述的固体培养基中还添加4-8g/L蛋白胨、1-3g/L琼脂、10-20g/L蔗糖以及0.1-0.3mg/L IBA。
优选地，在步骤(3)中，所述继代培养基是以1/2MS为基本培养基。
进一步地，在所述的继代培养基中还添加0.2-0.4mg/L IBA、0.4-0.6mg/L NAA、20-30g/L甘露醇、15-25g/L蔗糖以及3.0-5.0g/L琼脂。
优选地，在步骤(4)中，所述生根培养基是以B5为基本培养基。
进一步地，在所述的生根培养基中还添加0.2-0.4mg/L IBA、0.4-0.6mg/L NAA、6-10g/L蛋白胨、20-30g/L蔗糖以及3.0-5.0g/L琼脂。
本发明具有如下的有益效果：
(1)本发明的白芨组培快繁方法出芽速度快，增殖率高，可在45-55天内获得成品生根苗，且在人为控制条件下进行，不受季节、气候条件与土壤等因素的制约，可排除病虫害的侵袭和农药残留的影响，严格控制、保证了白芨组培苗的质量；
(2)本发明的白芨组培快繁方法采用多种不同基本培养基以及营养液对白芨外植体进行栽培，为白芨组培苗提供了充足的营养成分，促使白芨组培苗快速生长，获得根系发达、球茎大、植株健壮，移栽成活率高的优良组培苗；
(3)本发明的白芨组培快繁方法简单易行，育苗成本大大降低，能大大提高了白芨的种子萌发率，使其萌发率达到98％以上。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步描述，以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。
实施例1
一种白芨组培快繁方法，按照以下步骤进行：
(1)外植体消毒：选取健康无病的白芨种子作为外植体，用清水洗去种子表面的毛和异物，然后转移至超净工作台，先用无菌水洗涤2次，放入浓度为75％的酒精中浸泡30s，再用无菌水洗涤2次，后置于浓度为0.1％的升汞溶液中消毒5min，期间不停的摇动，使其消毒彻底，消毒结束后无菌水洗涤4次，最后用无菌滤纸吸干表面水分待用；
(2)接种诱导：将步骤(1)消毒后的外植体接种于固体培养基上进行愈伤诱导，促使发芽成苗，所述固体培养基是由LS培养基和WPM培养基两种基本培养基按2:1的成分比组成的；
另外，在所述的固体培养基中还添加4g/L蛋白胨、1g/L琼脂、10g/L蔗糖以及0.1mg/L IBA；
且接种诱导培养的环境条件为：室内温度为15℃，室内相对湿度78％，室内光照强度为1000lx，光照时间设定为11h/d；
(3)增值继代培养：切取步骤(2)中形成的幼苗茎段2.0cm，转入到继代培养基中，直至茎段增殖，得丛生芽，所述继代培养基是以1/2MS为基本培养基；
另外，在所述的继代培养基中还添加0.2mg/L IBA、0.4mg/L NAA、20g/L甘露醇、15g/L蔗糖以及3.0g/L琼脂；
且增值继代培养的环境条件为：室内温度为16℃，室内相对湿度76％，室内光照强度为1000lx，光照时间设定为11h/d；
(4)生根培养：待所述丛生芽的单芽长至2.0cm时，将郁金香组培苗移植至生根培养基中，所述生根培养基是以B5为基本培养基；
另外，在所述的生根培养基中还添加0.2mg/L IBA、0.4mg/L NAA、6g/L蛋白胨、20g/L蔗糖以及3.0g/L琼脂；
且生根培养的环境条件为：室内温度为16℃，室内相对湿度76％，室内光照强度为1000lx，光照时间设定为11h/d。
(5)上述步骤完成后便得到了成品的白芨组培苗，就可以进行之后的移栽炼苗处理。
实施例2
一种白芨组培快繁方法，按照以下步骤进行：
(1)外植体消毒：选取健康无病的白芨种子作为外植体，用清水洗去种子表面的毛和异物，然后转移至超净工作台，先用无菌水洗涤3次，放入浓度为75％的酒精中浸泡35s，再用无菌水洗涤3次，后置于浓度为0.2％的升汞溶液中消毒10min，期间不停的摇动，使其消毒彻底，消毒结束后无菌水洗涤5次，最后用无菌滤纸吸干表面水分待用；
(2)接种诱导：将步骤(1)消毒后的外植体接种于固体培养基上进行愈伤诱导，促使发芽成苗，所述固体培养基是由LS培养基和WPM培养基两种基本培养基按3:1的成分比组成的；
另外，在所述的固体培养基中还添加6g/L蛋白胨、2g/L琼脂、15g/L蔗糖以及0.2mg/L IBA；
且接种诱导培养的环境条件为：室内温度为17℃，室内相对湿度80％，室内光照强度为1100lx，光照时间设定为12h/d；
(3)增值继代培养：切取步骤(2)中形成的幼苗茎段3.0cm，转入到继代培养基中，直至茎段增殖，得丛生芽，所述继代培养基是以1/2MS为基本培养基；
另外，在所述的继代培养基中还添加0.3mg/L IBA、0.5mg/L NAA、25g/L甘露醇、20g/L蔗糖以及4.0g/L琼脂；
且增值继代培养的环境条件为：室内温度为18℃，室内相对湿度78％，室内光照强度为1100lx，光照时间设定为12h/d；
(4)生根培养：待所述丛生芽的单芽长至4.0cm时，将郁金香组培苗移植至生根培养基中，所述生根培养基是以B5为基本培养基；
另外，在所述的生根培养基中还添加0.3mg/L IBA、0.5mg/L NAA、8g/L蛋白胨、25g/L蔗糖以及4.0g/L琼脂；
且生根培养的环境条件为：室内温度为18℃，室内相对湿度78％，室内光照强度为1100lx，光照时间设定为12h/d。
(5)上述步骤完成后便得到了成品的白芨组培苗，就可以进行之后的移栽炼苗处理。
实施例3
一种白芨组培快繁方法，按照以下步骤进行：
(1)外植体消毒：选取健康无病的白芨种子作为外植体，用清水洗去种子表面的毛和异物，然后转移至超净工作台，先用无菌水洗涤4次，放入浓度为75％的酒精中浸泡40s，再用无菌水洗涤4次，后置于浓度为0.3％的升汞溶液中消毒15min，期间不停的摇动，使其消毒彻底，消毒结束后无菌水洗涤6次，最后用无菌滤纸吸干表面水分待用；
(2)接种诱导：将步骤(1)消毒后的外植体接种于固体培养基上进行愈伤诱导，促使发芽成苗，所述固体培养基是由LS培养基和WPM培养基两种基本培养基按4:1的成分比组成的；
另外，在所述的固体培养基中还添加8g/L蛋白胨、3g/L琼脂、20g/L蔗糖以及0.3mg/L IBA；
且接种诱导培养的环境条件为：室内温度为19℃，室内相对湿度82％，室内光照强度为1200lx，光照时间设定为13h/d；
(3)增值继代培养：切取步骤(2)中形成的幼苗茎段4.0cm，转入到继代培养基中，直至茎段增殖，得丛生芽，所述继代培养基是以1/2MS为基本培养基；
另外，在所述的继代培养基中还添加0.4mg/L IBA、0.6mg/L NAA、30g/L甘露醇、25g/L蔗糖以及5.0g/L琼脂；
且增值继代培养的环境条件为：室内温度为20℃，室内相对湿度80％，室内光照强度为1200lx，光照时间设定为13h/d；
(4)生根培养：待所述丛生芽的单芽长至6.0cm时，将郁金香组培苗移植至生根培养基中，所述生根培养基是以B5为基本培养基；
另外，在所述的生根培养基中还添加0.4mg/L IBA、0.6mg/L NAA、10g/L蛋白胨、30g/L蔗糖以及5.0g/L琼脂；
且生根培养的环境条件为：室内温度为20℃，室内相对湿度80％，室内光照强度为1200lx，光照时间设定为13h/d。
(5)上述步骤完成后便得到了成品的白芨组培苗，就可以进行之后的移栽炼苗处理。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种白芨组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)外植体消毒：选取健康无病的白芨种子作为外植体，用清水洗去种子表面的毛和异物，然后转移至超净工作台，先用无菌水洗涤2-4次，放入浓度为75％的酒精中浸泡30-40s，再用无菌水洗涤2-4次，后置于浓度为0.1～0.3％的升汞溶液中消毒5～15min，期间不停的摇动，使其消毒彻底，消毒结束后无菌水洗涤4-6次，最后用无菌滤纸吸干表面水分待用；
(2)接种诱导：将步骤(1)消毒后的外植体接种于固体培养基上进行愈伤诱导，促使发芽成苗，且接种诱导培养的环境条件为：室内温度为17±2℃，室内相对湿度78％-82％，室内光照强度为1000-1200lx，光照时间设定为12±1h/d；
(3)增值继代培养：切取步骤(2)中形成的幼苗茎段2.0-4.0cm，转入到继代培养基中，直至茎段增殖，得丛生芽，且增值继代培养的环境条件为：室内温度为18±2℃，室内相对湿度76％-80％，室内光照强度为1000-1200lx，光照时间设定为12±1h/d；
(4)生根培养：待所述丛生芽的单芽长至2.0-6.0cm时，将郁金香组培苗移植至生根培养基中，且生根培养的环境条件为：室内温度为18±2℃，室内相对湿度76％-80％，室内光照强度为1000-1200lx，光照时间设定为12±1h/d。
2.根据权利要求1所述的一种白芨组培快繁方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述固体培养基是由LS培养基和WPM培养基两种基本培养基组成的。
3.根据权利要求2所述的一种白芨组培快繁方法，其特征在于，所述LS培养基和WPM培养基两种基本培养基的成分占比为(2-4):1。
4.根据权利要求1所述的一种白芨组培快繁方法，其特征在于，在步骤(2)中，在所述的固体培养基中还添加4-8g/L蛋白胨、1-3g/L琼脂、10-20g/L蔗糖以及0.1-0.3mg/L IBA。
5.根据权利要求1所述的一种白芨组培快繁方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述继代培养基是以1/2MS为基本培养基。
6.根据权利要求5所述的一种白芨组培快繁方法，其特征在于，在所述的继代培养基中还添加0.2-0.4mg/L IBA、0.4-0.6mg/L NAA、20-30g/L甘露醇、15-25g/L蔗糖以及3.0-5.0g/L琼脂。
7.根据权利要求1所述的一种白芨组培快繁方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述生根培养基是以B5为基本培养基。
8.根据权利要求7所述的一种白芨组培快繁方法，其特征在于，在所述的生根培养基中还添加0.2-0.4mg/L IBA、0.4-0.6mg/L NAA、6-10g/L蛋白胨、20-30g/L蔗糖以及3.0-5.0g/L琼脂。
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