CN108559780A - 用于肿瘤融合基因ews-fli1检测的引物对、探针、试剂盒及其两步检测法 - Google Patents

用于肿瘤融合基因ews-fli1检测的引物对、探针、试剂盒及其两步检测法 Download PDF

Info

Publication number
CN108559780A
CN108559780A CN201810699379.8A CN201810699379A CN108559780A CN 108559780 A CN108559780 A CN 108559780A CN 201810699379 A CN201810699379 A CN 201810699379A CN 108559780 A CN108559780 A CN 108559780A
Authority
CN
China
Prior art keywords
fli1
ews
fusion
primer
types
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810699379.8A
Other languages
English (en)
Inventor
姚斐
宫小明
孔彩霞
华萌萌
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Qingdao Pu Maddie Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Qingdao Pu Maddie Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Qingdao Pu Maddie Biotechnology Co Ltd filed Critical Qingdao Pu Maddie Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201810699379.8A priority Critical patent/CN108559780A/zh
Publication of CN108559780A publication Critical patent/CN108559780A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6851—Quantitative amplification

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提出一种用于肿瘤融合基因EWS‑FLI1检测的引物对、探针、试剂盒及其两步检测法，属于基因工程技术领域，能够解决现有的对于融合基因EWS‑FLI1的检测操作繁琐、结果判读耗时且存在主观误差等技术问题。该用于肿瘤融合基因EWS‑FLI1检测的引物对包括：用于融合基因EWS‑FLI1 I型融合的如SEQ No.1序列所示的正向引物EWS_F、如SEQ No.2序列所示的反向引物FLI1_Exon 7&8 R；和用于融合基因EWS‑FLI1 II型融合的如SEQ No.1序列所示的正向引物EWS_F、如SEQ No.4序列所示的反向引物FLI1_Exon 6&7R。本发明能够应用于EWS‑FLI1融合基因的定量检测中，进而有效用于尤文肉瘤家族肿瘤的检测中。

Description

用于肿瘤融合基因EWS-FLI1检测的引物对、探针、试剂盒及其 两步检测法
技术领域
本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种用于肿瘤融合基因 EWS-FLI1检测的引物对、探针、试剂盒及其两步检测法。
背景技术
尤文肉瘤家族肿瘤(Ewingsarcomafamilyoftumors，ESFT)是一组低分化且高度恶性的小圆细胞肿瘤，包括尤文肉瘤(Ewingsarcoma，ES)、Askin 瘤和原始神经外胚层肿瘤(primitiveneurotodermaltumour，PNET)。患者中位年龄为15岁，超过半数患者为青少年。每年15岁以下儿童的ESFT发病率为3人/百万人，且诊断时发现已伴有肺、骨等其他部位转移的患者约占30％。
目前，在ESFT患者中发现了7种染色体易位现象，而t(11；22)(q24；q12) 易位，即位于11号染色体q24上的FLI1基因与22号染色体上的EWS基因发生融合,产生的融合蛋白EWS-FLI1约占ESFT染色体易位的85％。染色体断裂位点不同可以产生不同的融合亚型，通常单个ESFT患者中只表达一种亚型。目前已经发现EWS-FLI1有12种不同的融合亚型，其中最常见的2种亚型是 EWS基因的7号外显子分别与FLI1基因的7号外显子(Ⅰ型融合)和6号外显子(Ⅱ型融合)(根据人类基因组参考hg38)组成，各占整个EWS-FLI1融合基因比例的60％和25％。
EWS基因位于22号染色体上，由17个外显子组成，编码一种多功能蛋白。EWS蛋白的5’氨基末端是转录引导区域，3’羧基末端是RNA结合区，在基因表达、细胞信号调节以及RNA的加工处理和运输等方面发挥重要作用。 FLI1基因位于11号染色体上，由9个外显子组成，编码一种转录因子。FLI1 蛋白5’氨基末端是转录活性区域，3’羧基末端是DNA结合区，主要功能是在促进细胞增殖和肿瘤发生等方面。融合蛋白EWS-FLI1是EWS的5’端与FLI1 的3’端发生融合，形成了由EWS转录活性区与FLI1的DNA结合区反常连接的融合蛋白。融合蛋白EWS-FLI1没有稳定的结构，5’端相对有序，主要由螺旋-转角-螺旋构成；而3’端含有多个芳香族氨基酸残基的重复多肽，构成了EWS-FLI1的无序区域，这种无序结构有利于与其他转录因子的结合和分离。
目前在临床上,对EWS-FLI1融合基因的检测主要是运用探针荧光原位杂交技术(FISH)，特异性的检测出尤文氏肉瘤相关基因EWSR1基因的断裂分离情况，从而为尤文氏肉瘤的临床诊断提供辅助判断依据。但是FISH检测耗时长、探针成本较为昂贵且需要经过专业培训的技术人员进行较为繁琐的操作、结果判读耗时且存在主观误差等。
发明内容
本发明提出一种用于肿瘤融合基因EWS-FLI1检测的引物对、探针、试剂盒及其两步检测法，利用该试剂盒可实现对融合基因EWS-FLI1的检测，操作方法较为简便，且检测结果客观准确。
为了达到上述目的，本发明提供了一种用于肿瘤融合基因EWS-FLI1检测的引物对，包括：
用于融合基因EWS-FLI1 I型融合的如SEQ No.1序列所示的正向引物 EWS_F、如SEQ No.2序列所示的反向引物FLI1_Exon 7&8R；和
用于融合基因EWS-FLI1 II型融合的如SEQ No.1序列所示的正向引物 EWS_F、如SEQ No.4序列所示的反向引物FLI1_Exon 6&7R。
本发明还提供了一种用于肿瘤融合基因EWS-FLI1检测的探针，包括：用于融合基因EWS-FLI1 I型融合的如SEQ No.3序列所示的探针PRFAM 7&7R以及用于融合基因EWS-FLI1 II型融合的如SEQ No.5序列所示的探针PRCy 7&6，其中所述探针带有发光基团，所述发光基团为FAM或Cy。
本发明提供了一种用于肿瘤融合基因EWS-FLI1检测的试剂盒，包括如上述技术方案所述的引物对和如上述技术方案所述的探针。
本发明还提供了一种利用如上述任一项技术方案所述的试剂盒对肿瘤融合基因EWS-FLI1进行的两步检测法，包括以下步骤：
从肿瘤组织中提取Total RNA,对其进行反转录，得到反转录产物cDNA；
利用试剂盒中对应的正向引物、反向引物和探针分别制备反转录产物的 EWS-FLI1 I型融合的PCR反应液和EWS-FLI1 II型融合的PCR反应液，同时制备各自的阴性对照的PCR反应液；
对上述三种PCR反应液分别进行TaqMan探针定量PCR反应，得到反转录产物中EWS-FLI1 I型融合和EWS-FLI1 II型融合的循环交叉点。
作为优选，对样品进行反转录包括以下步骤：
利用所述样品配制RNA-Primer Mix，混匀后进行短暂离心，于65℃将 RNA变性5min后立即放置冰上；
利用RNA变性后的RNA-Primer Mix配制反转录反应液，混匀后短暂离心，于50℃孵育1h；
待孵育结束后，70℃灭活处理15min，最后-20℃保存反转录产物。
作为优选，利用所述样品配制RNA-Primer Mix包括在预冷的RNase free 的反应管内加入以下试剂至总体积13μl，具体为：
作为优选，利用RNA变性后的RNA-Primer Mix配制反转录反应液包括在 RNA-Primer Mix反应管内加入以下试剂至总体积20μl，具体为：
作为优选，反转录产物的EWS-FLI1 I型融合的PCR反应液具体配制如下：
作为优选，反转录产物的EWS-FLI1 II型融合的PCR反应液具体配制如下：
作为优选，PCR反应具体如下：
95℃预变性10min；然后40个循环,95℃变性10sec，60℃退火 30sec后，72℃延伸1sec；最后再40℃冷却10sec。
与现有技术相比，本发明的优点和积极效果在于：
本发明提供了一种用于肿瘤融合基因EWS-FLI1检测的试剂盒，该试剂盒中包含有分别用于检测EWS-FLI1 I型融合和II型融合的正向引物、反向引物和探针，其可有针对性的对其进行检测。结合两步法RT-qPCR可实现对融合基因EWS-FLI1的定量检测，操作方法较为简便，且检测结果客观准确。
附图说明
图1为本发明实施例所提供的A673cDNA和Z63cDNA的含量检测图；
图2为本发明实施例所提供的Z63肿瘤Total RNA QC结果图。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
材料说明：
模板cDNA:本实施例提供的样本为从肿瘤组织或细胞中提取的Total RNA 反转录而成的cDNA，但由于尤文肉瘤的发病率很低,极难得到样品,因此，本实施例中使用尤文肉瘤细胞系A673（CRL-1598)的cDNA作为I型融合的阳性对照、尤文肉瘤病患Z63的肿瘤cDNA作为II型融合的阳性对照进行说明。
1、样品反转录
反转录采用Thermo Fisher SuperScript III Reverse Transcriptase 试剂盒，具体步骤包括：
1)融解反应所需的试剂，上下轻微颠倒混匀，进行短暂离心后放置冰上待用；
2)在冰上配制RNA-Primer Mix：在预冷的RNase free的反应管内加入以下试剂至总体积13μl：
3)RNA变性：混匀RNA-Primer Mix后短暂离心，于65℃孵育5分钟立即放置于冰上；
4)在冰上配制反转录反应液：在RNA-Primer Mix反应管内加入以下试剂至总体积20μl：
5)反转录反应：混匀反转录反应液后短暂离心，于50℃孵育1h；
6)灭活并保存反转录产物：反应结束后，70℃灭活处理15min，最后 -20℃保存反转录产物。
2、反转录产物TaqMan探针定量PCR实验(480Probes Master)
1)PCR反应用试剂前处理
将480Probes Master在室温下融解，轻柔得上下颠倒混匀并进行短暂离心，同时在使用过程中始终保持避光；
2)配制反转录产物PCR反应液
在冰上分别配制EWS-FLI1 I型融合的PCR反应液和EWS-FLI1 II型融合的PCR反应液，具体如下：
EWS-FLI1 I型融合PCR反应液总体积10μl：
EWS-FLI1 II型融合PCR反应液总体积10μl：
同时，设计了NTC(No Template Control)作为阴性对照，即在反应中用水来代替模板cDNA，其它试剂不变，从而质控体系是否有污染。
其中，正向引物、反向引物和探针的序列具体如下：
正向引物EWS_F：5’-ATCCTACAGCCAAGCTCCAA-3’
用于EWS-FLI1I型融合的反向引物FLI1_Exon 7&8R:
5’-CCAAGGGGAGGACTTTTGTT-3’
用于EWS-FLI1I型融合的探针PRFAM 7&7R:
5’-ATAAGAAGGGTTCTGCTGCCCGT-3’
用于EWS-FLI1II型融合的反向引物FLI1_Exon 6&7R:
5’-GAAGGGTCTTCTTTGACACTC-3’
用于EWS-FLI1II型融合的探针PRCy 7&6:
5’-GCAGCAGAGTTCACTGCTGGCC-3’
上述探针均带有FAM或Cy的发光基团。
迅速将上述PCR反应液混匀，并加入96或者说384孔的反应平板中。
3)将上述反应平板进行短暂离心，确保所有反应液在反应孔底部；
4)PCR反应：95℃预变性10min；然后40个循环,95℃变性10sec， 60℃退火30sec后，72℃延伸1sec；最后再40℃冷却10sec。
3、试验结果及分析
如图1所示，当我们使用十倍稀释的从1μg Total RNA反转录得到的 cDNA作为模板,采用两步法RT-qPCR可准确测得作为EWS-FLI1 I型融合的阳性对照A673(CRL-1598),以及作为EWS-FLI1 II型融合的阳性对照Z63 的cDNA中的融合基因，其循环交叉点(CP)分别是23.6和28.4,而阴性对照 NTC则为0。由此可见，在质控体系无污染的情况，可准确检测到A673和Z63 cDNA中的融合基因。Z63的循环交叉点(CP)比A673高是因为通常从肿瘤组织中提取的Total RNA质量要比从细胞系中提取的低所导致的。如图2所示, Z63TotalRNA的RIN值只有7.7,而从细胞系中提取的Total RNA的RIN值通常有9或10,RIN值越高,说明Total RNA的质量越好。
序列表
<110> 青岛普泽麦迪生物技术有限公司
<120> 用于肿瘤融合基因EWS-FLI1检测的引物对、探针、试剂盒及其两步检测法
<160> 5
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atcctacagc caagctccaa 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ccaaggggag gacttttgtt 20
<210> 3
<211> 23
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ataagaaggg ttctgctgcc cgt 23
<210> 4
<211> 21
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
gaagggtctt ctttgacact c 21
<210> 5
<211> 22
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
gcagcagagt tcactgctgg cc 22

Claims (10)

1.一种用于肿瘤融合基因EWS-FLI1检测的引物对，其特征在于，包括：
用于融合基因EWS-FLI1 I型融合的如SEQ No.1序列所示的正向引物EWS_F、如SEQNo.2序列所示的反向引物FLI1_Exon 7&8 R；和
用于融合基因EWS-FLI1 II型融合的如SEQ No.1序列所示的正向引物EWS_F、如SEQNo.4序列所示的反向引物FLI1_Exon 6&7 R。
2.一种用于肿瘤融合基因EWS-FLI1检测的探针，其特征在于，包括：用于融合基因EWS-FLI1 I型融合的如SEQ No.3序列所示的探针PRFAM 7&7 R以及用于融合基因EWS-FLI1 II型融合的如SEQ No.5序列所示的探针PRCy 7&6，其中所述探针带有发光基团，所述发光基团为FAM或Cy。
3.一种用于肿瘤融合基因EWS-FLI1检测的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的引物对和如权利要求2所述的探针。
4.一种利用如权利要求3所述的试剂盒对肿瘤融合基因EWS-FLI1进行的两步检测法，其特征在于，包括以下步骤：
从肿瘤组织中提取Total RNA,对其进行反转录，得到反转录产物cDNA；
利用试剂盒中对应的正向引物、反向引物和探针分别配制反转录产物的EWS-FLI1 I型融合的PCR反应液和EWS-FLI1 II型融合的PCR反应液，同时配制各自的阴性对照的PCR反应液；
对上述三种PCR反应液分别进行TaqMan探针定量PCR反应，得到反转录产物中EWS-FLI1I型融合和EWS-FLI1 II型融合的循环交叉点。
5.根据权利要求4所述的两步检测法，其特征在于，对样品进行反转录,包括以下步骤：
利用所述样品配制RNA-Primer Mix，混匀后进行短暂离心，于65℃孵育5min后立即放置冰上；
利用RNA变性后的RNA-Primer Mix配制反转录反应液，混匀后短暂离心，于50℃孵育1h；
待孵育结束后，70℃灭活处理15min，最后-20℃保存反转录产物。
6.根据权利要求5所述的两步检测法，其特征在于，利用所述样品配制RNA-Primer Mix包括在预冷的RNase free的反应管内加入以下试剂至总体积13μl，具体为：
7.根据权利要求5所述的两步检测法，其特征在于，利用RNA变性后的RNA-Primer Mix配制反转录反应液包括在RNA-Primer Mix反应管内加入以下试剂至总体积20μl，具体为：
8.根据权利要求4所述的两步检测法，其特征在于，反转录产物的EWS-FLI1 I型融合的PCR反应液具体配制如下：
9.根据权利要求4所述的两步检测法，其特征在于，反转录产物的EWS-FLI1 II型融合的PCR反应液具体配制如下：
10.根据权利要求4所述的两步检测法，其特征在于，PCR反应具体如下：
95℃预变性10min；然后40个循环95℃变性10sec；60℃退火30sec后，72℃延伸1sec；最后再40℃冷却10sec。
CN201810699379.8A 2018-06-29 2018-06-29 用于肿瘤融合基因ews-fli1检测的引物对、探针、试剂盒及其两步检测法 Pending CN108559780A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810699379.8A CN108559780A (zh) 2018-06-29 2018-06-29 用于肿瘤融合基因ews-fli1检测的引物对、探针、试剂盒及其两步检测法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810699379.8A CN108559780A (zh) 2018-06-29 2018-06-29 用于肿瘤融合基因ews-fli1检测的引物对、探针、试剂盒及其两步检测法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108559780A true CN108559780A (zh) 2018-09-21

Family

ID=63555409

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810699379.8A Pending CN108559780A (zh) 2018-06-29 2018-06-29 用于肿瘤融合基因ews-fli1检测的引物对、探针、试剂盒及其两步检测法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108559780A (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107226862A (zh) * 2017-05-27 2017-10-03 南京川博生物技术有限公司 特异性人ews‑fli1融合蛋白抗体的制备方法及在制备尤文肉瘤诊断抗体试剂的应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107226862A (zh) * 2017-05-27 2017-10-03 南京川博生物技术有限公司 特异性人ews‑fli1融合蛋白抗体的制备方法及在制备尤文肉瘤诊断抗体试剂的应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ENRIQUE DE ALAVA等: "EWS-FLI1 fusion transcript structure is an independent determinant of prognosis in Ewing"s sarcoma", 《J CLIN ONCOL》 *
MARTINE PETER等: "A multiplex real-time PCR assay for the detection of gene fusions observed in solid tumors", 《LABORATORY INVESTIGATION》 *
TRACEY B LEWIS等: "Differentiating Ewing’s sarcoma from other round blue cell tumors using a RT-PCR translocation panel on formalin-fixed paraffin-embedded tissues", 《MODERN PATHOLOGY》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106591438B (zh) 一种用于检测Her2基因的核酸组合、试剂盒及应用
CN103923974B (zh) 一种检测egfr基因外显子20 t790m点突变的试剂盒和方法
CN104745679A (zh) 一种无创检测egfr基因突变的方法及试剂盒
CN103923975A (zh) 一种检测egfr基因外显子19缺失突变的试剂盒和方法
KR20170037095A (ko) 현미부수체 불안정성의 진단을 위한 pna 프로브를 이용한 융해곡선 분석방법, 및 이를 이용한 현미부수체 불안정성의 진단방법 및 현미부수체 불안정성의 진단용 키트
WO2017114007A1 (zh) Pml基因和rara基因检测探针及其制备方法和试剂盒
CN108796085A (zh) 用于肿瘤融合基因ews-fli1检测的引物对、探针、试剂盒及其一步检测法
CN103952485A (zh) Runx1基因断裂及拷贝数增加检测试剂盒及其制备方法
CN103740843A (zh) 一种检测egfr基因外显子21l858r点突变的试剂盒和方法
CN103773890B (zh) 鉴别棉花A genome和A sub-genome全套染色体的方法
CN109251964A (zh) 循环microRNAs检测试剂盒和特异性检测循环microRNAs的方法及应用
CN103103259A (zh) 确定核酸样本的两个预定位点是否具有已知突变的方法、试剂盒以及引物
CN110241212B (zh) 一种用于brca1和brca2基因扩增子测序检测的引物组及其应用
CN107164473A (zh) 一种检测calr基因1型突变的引物组合物及试剂盒
CN107937524A (zh) 人类kras基因突变检测试剂盒及检测方法
CN108913774B (zh) 一种c-KIT体细胞突变基因检测试剂盒及其检测方法
CN108559780A (zh) 用于肿瘤融合基因ews-fli1检测的引物对、探针、试剂盒及其两步检测法
CN108796077B (zh) 在cfDNA中检测胞嘧啶脱氨酶及相关分子基因修饰差异的引物对组及试剂盒
CN110172511A (zh) 用于检测her-2基因扩增水平的探针组、试剂盒及其应用
CN111020710A (zh) 造血及淋巴组织肿瘤的ctDNA高通量检测
CN112029860B (zh) 与直肠癌预后相关的标志分子以及检测试剂盒
CN114196740A (zh) 用于同时识别多种基因类型的数字扩增检测方法、检测产品和检测试剂盒
CN108165633B (zh) 一种特异性阻抑引物体系及肿瘤ct-DNA突变检测的方法
CN103725787B (zh) 一种白血病融合基因荧光pcr检测试剂盒
Gabrovska et al. Investigation of two Wnt signalling pathway single nucleotide polymorphisms in a breast cancer-affected Australian population

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20180921