CN108543021A - 红曲霉菌纯种发酵生产六神曲的方法及其降血脂用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种红曲霉菌纯种发酵生产六神曲的方法及其抗血脂用途；所述方法以红色红曲菌(M.ruber)、紫色红曲菌(M.purpureus)或丛毛红曲菌(M.pilosus)中的一种为单一发酵菌种，以青稞、青蒿、苍耳、辣廖、苦杏仁和赤小豆6种原料为培养基的基料，在合适的条件下发酵制成六神曲。该工艺制备的六神曲具有健脾和胃和活血化瘀的功效，可用于高血脂及其相关心血管疾病的防治。

Description

红曲霉菌纯种发酵生产六神曲的方法及其降血脂用途
技术领域
本发明涉及中药的生产和应用领域，特别涉及一种红曲霉菌纯种发酵生产六神曲的方法及其降血脂用途。
背景技术
六神曲的制法在《神农本草经疏》中记载为“用五月五日,或六月六日,以白面百斤，青蒿自然汁三升，以配白虎、青龙、朱雀、玄武、勾陈、腾蛇六神,用面和汁，豆、杏仁作饼，麻叶或褚叶包，如造黄酱法、待生黄衣、晒干收之”。但历代参考书目中记载的六神曲所依据的标准不尽相同，存在同名不同归类、同药方不同比例、同药名不同组方工艺等现状。即使是全国性药品标准的《中华人民共和国卫生部药品标准》和《全国中药炮制规范》，两者的六神曲制作工艺和质量评价也不尽相同。
六神曲制法的差异主要体现在组方中药物的比例和发酵工艺。组方中面粉和麦麸占比差异较大，麦麸的加入可解决单用面粉制曲时粘性大，混合不均匀的问题。另外，青蒿、辣蓼和苍耳3种药材有使用鲜品和干品的不同，鲜品榨汁拌入面粉，干品可煎煮后加入或直接粉碎后加入。发酵方法的不同体现在发酵终点和发酵菌种上的差异。总之，当前六神曲的标准不一，制法不同，应及早统一标准、规范生产，保障六神曲质量。
六神曲原有配方中面粉和麦麸比例在不同厂家生产方法中差异较大，产品质量的稳定也具有较大差异。在发酵方法上，也有人尝试应用纯种发酵，如专利CN105267249利用产黄青霉素进行纯种发酵生产六神曲，但现有的纯种发酵菌种大多的来源是六神曲自然发酵杂菌中分离而来，其发酵效果不一定能达到原来多种菌种共同发酵的效果。因此，需要寻找一种新的菌种，既可以达到控制产品安全性和质量稳定性的目的，又能保持六神曲原有功效。
红曲霉菌，属于真菌界，子囊菌门，子囊菌纲，散囊菌目，红曲科，由法国科学家VanTieghem于1884年分类并命名。本发明通过大量筛选各种霉菌发现，应用红曲霉菌可实现六神曲的稳定发酵，特别是在配方中用青稞替代面粉和麦麸，更适宜红曲霉菌的发酵条件，经红曲霉菌发酵制成的六神曲，不仅原有的健胃消食的功效得以保留，而且增加了活血化瘀的功效，开拓了六神曲用于降血脂的新用途。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种红曲霉菌纯种发酵生产六神曲的方法及其降血脂用途。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
第一方面，本发明涉及一种红曲霉菌纯种发酵生产六神曲的方法，以红曲霉菌为发酵菌种，发酵六神曲基质制成六神曲；所述六神曲基质的基料包括青稞、青蒿、辣廖、苍耳、赤小豆和苦杏仁。
优选的，所述红曲霉菌选自红色红曲菌(M.ruber)、紫色红曲菌(M.purpureus)、丛毛红曲菌(M.pilosus)中的一种。
优选的，所述六神曲基质还包括营养物质，所述营养物质包括葡萄糖、MgSO4或MgSO4.7H2O、KH2PO4和CaCO3。
优选的，所述六神曲基质的基料中按占基料总重计，青稞65～75wt％，辣蓼2～5wt％，苍耳2～5wt％，赤小豆2～5wt％，苦杏仁2～5wt％，青蒿5～15wt％。
优选的，所述方法包括如下步骤：
S1、原材料处理：青稞水洗3～5次，加入去离子水煮0.5～1.5h，至青稞粒捏开后无“白心”，过滤待用；苍耳，辣蓼，赤小豆，苦杏仁和青蒿，粉碎待用；
S2、配制六神曲培养基：按占六神曲基质基料的总重计，在耐高温发酵罐中放入处理后的青稞65～75wt％，辣蓼2～5wt％，苍耳2～5wt％，赤小豆2～5wt％，苦杏仁2～5wt％，青蒿5～15wt％，以及与六神曲基质基料总重的重量比依次为2～3:100、0.35～0.4:100、0.2～0.3:100、0.8～1.2:100的葡萄糖、MgSO4.7H2O、KH2PO4和CaCO3，混合均匀，在115～121℃高温灭菌15～40min冷却至20℃～28℃；
S3、菌种接种：在步骤S2制得的六神曲培养基中接入已活化的液体红曲霉菌菌种，在25℃～35℃恒温发酵箱培养5～15天。
第二方面，本发明涉及一种如本发明所述的红曲霉菌纯种发酵生产六神曲的方法制得的六神曲。
第三方面，本发明涉及一种如本发明所述的六神曲在制备预防或治疗高血脂的药物或保健品中的用途。
优选的，所述预防或治疗高血脂的药物中还包括洛伐他汀。
第四方面，本发明涉及一种如本发明所述的六神曲在制备预防或治疗动脉粥样硬化的药物或保健品中的用途。
优选的，所述预防或治疗动脉粥样硬化的药物中还包括洛伐他汀。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
1、通过本发明的红曲霉菌纯种发酵生产六神曲，可有效地解决当前六神曲杂菌自然发酵生产方式导致的质量不稳定，批次间差异大，易引入有害杂菌和有害物质的问题。
2、本发明选用整粒或粉碎后的青稞替代，保证了六神曲配方中淀粉和纤维数量比例的恒定，有利于产品质量的稳定；并且，配方中用青稞替代面粉和麦麸，更适宜红曲霉菌的发酵条件。
3、通过红曲霉菌等3种菌种发酵生产的六神曲，健脾和胃功效得以保留和强化，新增了类似红曲的活血化瘀功效，结合组方中青蒿、苍耳、辣廖、苦杏仁、赤小豆具备的清热解毒、利血除湿、润肠等功效，产生协同增效的降血脂功效，其降血脂功效针对临床上他汀不耐受的人群设计，特别是他汀肝毒性敏感人群和APOE基因多态性导致的他汀耐药性人群，符合当前精准医疗的需求。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干调整和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1
本实施例涉及一种红曲霉菌纯种发酵生产六神曲的方法。所述的纯种发酵所用菌种可以是：红色红曲菌(M.ruber)、紫色红曲菌(M.purpureus)或丛毛红曲菌(M.pilosus)中的一种；
六神曲的6种原料，优选为青稞、青蒿、辣廖、苍耳、赤小豆和苦杏仁；
六神曲纯种发酵制备流程如下：
(1)实验材料
菌株红曲霉菌Monascusruber-3.5834(购自中国科学院微生物研究所)，保存于PDA琼脂斜面培养基，青稞代替原组方中的面粉和麦麸，苍耳，辣蓼，赤小豆，苦杏仁，青蒿，葡萄糖，KH2PO4，MgSO4.7H2O，CaCO3，蛋白胨，酵母提取物，水。
(2)实验工艺流程
菌种活化：配置500ml的13号培养基：葡萄糖5g，蛋白胨5g，酵母提取物2.5g，水500mL，放入500ml的带盖玻璃瓶中。将培养液在121℃高温灭菌30min冷却至室温；
菌种接种：在无菌操作台，将培养液倒入100ml的锥形瓶中，倒入量为50mL，瓶数为4瓶，取3块25mm2的活化菌种红曲霉Monascusruber-3.5834接入各个锥形瓶中，用带孔塑料膜密封；菌种培养：在28℃，220转的摇床中培养5天；将4瓶100mL发酵的菌种在无菌操作台内混合在500mL的锥形瓶中，密封待用。
六神曲的制备：
六神曲固体培养基的制备:配方：青稞70％，辣蓼5％，苍耳5％，赤小豆5％，苦杏仁5％，青蒿10％，葡萄糖2.5％，KH2PO40.375％，MgSO4.7H2O 0.25％，CaCO31％；
原材料处理：青稞用自来水清洗3～5次，置于沸水锅中，加入去离子水煮1h左右，至青稞粒捏开后无“白心”，用筛子过滤待用；苍耳，辣蓼，赤小豆，苦杏仁，青蒿，用二两装高速万能粉碎机(电压：220V，50-60Hz,细度：30-300目，功率：650W，转速：28000r/min)将其粉碎，待用；
配置六神曲培养基：分别称取处理后的青稞70g，辣蓼：5g，苍耳5g，赤小豆5g，苦杏仁5g，青蒿：10g，葡萄糖2.5g，KH2PO40.375g，MgSO4.7H2O 0.25g,CaCO31g；放入200mL耐高温塑料发酵罐中，混合均匀，盖上盖子，每组实验配置3瓶六神曲培养基。将六神曲培养基发酵罐在121℃高温灭菌40min冷却至室温。
菌种接种：在无菌操作台，打开六神曲培养基的盖子，用接种棒在发酵罐培养基中间打一个小孔，用1mL移液枪取已活化的菌种红曲霉Monascusruber-3.5834液体菌种，注入小孔中，总共注入5mL液体菌种，盖好盖子。将六神曲发酵罐倒置放在28℃恒温发酵箱培养10天左右。
取出发酵好的六神曲，45℃烘干。
实施例2、效果验证
地鼠饲养条件：正压净化通风动物房内，室温24±2℃，湿度40～70％，人工照明模拟昼夜变化，自由进食与饮水。60只雄性金黄地鼠，随机分成5组，分别为：正常组，模型组，洛伐他汀对照组，红曲对照组，六神曲组。除正常组外，其余各组均给予高脂饲料，并按照设计剂量灌胃给药。实验周期2个月,实验结束后，眼眶取血，分离血清，测定总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量。由表1可知，六神曲的降脂效果优于洛伐他汀组和红曲组，特别是对甘油三酯的降低效果尤为显著。
表1、六神曲对高脂地鼠降血脂作用
附注：洛伐他汀组10mg/kg；红曲组200mg/kg，所含洛伐他汀的量为8mg/kg；六神曲200mg/kg，所含洛伐他汀的量为8mg/kg。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。

Claims (8)

1.一种红曲霉菌纯种发酵生产六神曲的方法，其特征在于，以红曲霉菌为发酵菌种，发酵六神曲基质制成六神曲；所述六神曲基质的基料包括青稞、青蒿、辣廖、苍耳、赤小豆和苦杏仁。
2.根据权利要求1所述的红曲霉菌纯种发酵生产六神曲的方法，其特征在于，所述红曲霉菌选自红色红曲菌、紫色红曲菌、丛毛红曲菌中的一种。
3.根据权利要求1所述的红曲霉菌纯种发酵生产六神曲的方法，其特征在于，所述六神曲基质还包括营养物质，所述营养物质包括葡萄糖、MgSO4或MgSO4.7H2O、KH2PO4和CaCO3。
4.根据权利要求1或3所述的红曲霉菌纯种发酵生产六神曲的方法，其特征在于，所述六神曲基质的基料中按占基料总重计，包括青稞65～75wt％，辣蓼2～5wt％，苍耳2～5wt％，赤小豆2～5wt％，苦杏仁2～5wt％，青蒿5～15wt％。
5.根据权利要求1所述的红曲霉菌纯种发酵生产六神曲的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
S1、原材料处理：青稞水洗3～5次，加入去离子水煮0.5～1.5h，至青稞粒捏开后无白心，过滤待用；苍耳，辣蓼，赤小豆，苦杏仁和青蒿，粉碎待用；
S2、配制六神曲培养基：按占六神曲基质基料的总重计，在耐高温发酵罐中放入处理后的青稞65～75wt％，辣蓼2～5wt％，苍耳2～5wt％，赤小豆2～5wt％，苦杏仁2～5wt％，青蒿5～15wt％，以及与六神曲基质基料总重的重量比依次为2～3:100、0.35～0.4:100、0.2～0.3:100、0.8～1.2:100的葡萄糖、MgSO4.7H2O、KH2PO4和CaCO3，混合均匀，在115～121℃高温灭菌15～40min冷却至20℃～28℃；
S3、菌种接种：在步骤S2制得的六神曲培养基中接入已活化的液体红曲霉菌菌种，在25℃～35℃恒温发酵箱培养5～15天。
6.一种如权利要求1所述的红曲霉菌纯种发酵生产六神曲的方法制得的六神曲。
7.一种如权利要求6所述的六神曲在制备预防或治疗高血脂的药物或保健品中的用途。
8.一种如权利要求6所述的六神曲在制备预防或治疗动脉粥样硬化的药物或保健品中的用途。
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