CN108519485A - 一种A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法 - Google Patents

一种A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108519485A
CN108519485A CN201810316627.6A CN201810316627A CN108519485A CN 108519485 A CN108519485 A CN 108519485A CN 201810316627 A CN201810316627 A CN 201810316627A CN 108519485 A CN108519485 A CN 108519485A
Authority
CN
China
Prior art keywords
caseins
beta
mass spectrometry
acid sequence
amino acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201810316627.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108519485B (zh
Inventor
古淑青
邓晓军
赵超敏
方真
韩丽
王敏
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
TECHNICAL CENTER FOR ANIMAL PLANT AND FOOD INSPECTION AND QUARANTINE SHANGHAI ENTRY-EXIT INSPECTION AND QUARANTINE BUREAU
Original Assignee
TECHNICAL CENTER FOR ANIMAL PLANT AND FOOD INSPECTION AND QUARANTINE SHANGHAI ENTRY-EXIT INSPECTION AND QUARANTINE BUREAU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by TECHNICAL CENTER FOR ANIMAL PLANT AND FOOD INSPECTION AND QUARANTINE SHANGHAI ENTRY-EXIT INSPECTION AND QUARANTINE BUREAU filed Critical TECHNICAL CENTER FOR ANIMAL PLANT AND FOOD INSPECTION AND QUARANTINE SHANGHAI ENTRY-EXIT INSPECTION AND QUARANTINE BUREAU
Priority to CN201810316627.6A priority Critical patent/CN108519485B/zh
Publication of CN108519485A publication Critical patent/CN108519485A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108519485B publication Critical patent/CN108519485B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
    • G01N33/6848—Methods of protein analysis involving mass spectrometry
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

本发明公开了一种A1/A2β‑酪蛋白的质谱检测方法，包括如下步骤：a)获取A2β‑酪蛋白的氨基酸序列；b)将A2β‑酪蛋白的67位氨基酸脯氨酸修改为组氨酸，获得A1β‑酪蛋白的氨基酸序列；c)利用特异性的酶解方法将待检测蛋白质切成小分子量的多肽片段混合物，利用静电场轨道阱高分辨质谱全扫描模式检测混合物中各多肽的分子量和碎片信息，并与前面的氨基酸序列进行比对，定性判断是否存在A1或A2β‑酪蛋白的特征肽段；d)挑选定性为A1或A2β‑酪蛋白的特征肽段，合成其同位素内标肽段，利用串联四级杆质谱建立多反应监测方法进行定量分析。本发明能够同时实现A1、A2β‑酪蛋白的定性鉴定和定量研究，灵敏度高，准确度高，抗干扰能力强，可广泛应用于A2乳制品的确证和检测。

Description

一种A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法
技术领域
本发明涉及一种蛋白质质谱检测方法，尤其涉及一种A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法。
背景技术
酪蛋白是牛奶中含量最丰富的蛋白质，也是重要的生物活性肽的来源。β-酪蛋白约占牛奶中酪蛋白含量的40％左右，是氨基酸的重要来源，同时在体内传递重要的矿物质(如钙和磷等)，促进其消化吸收。β-酪蛋白由染色体6上的CSN2基因编码，这是一个具有高度多态性的基因，迄今为止，已有15种不同的Beta-酪蛋白基因变体被鉴定，其中A1和A2β-酪蛋白是牛β-酪蛋白是最常见的两种存在形态。A2β-酪蛋白被公认为是现代奶牛β-酪蛋白的天然原型。最初，所有家养的牛只含有A2β-酪蛋白，大约5000年前欧洲奶牛杂交导致牛奶蛋白质变异后出现了A1β-酪蛋白，即今天全球普遍存在的A1类牛奶β-酪蛋白。
A1和A2β酪蛋白的67位氨基酸不同，在A1上面是组氨酸(CAT)，A2则是脯氨酸(CCT)，这种差异导致了表达-酪蛋白的二级结构发生了关键的构象变化。A1β酪蛋白在消化过程中可生成β-酪啡肽-7(BCM-7)，而A2β-酪蛋白则不会生成BCM-7。BCM-7是一种外啡肽，可与机体多种系统相互作用。多项研究表明，A1或BCM-7与部分婴儿的1型糖尿病风险升高、免疫反应、消化功能紊乱,自闭症和呼吸功能障碍之间存在关联。A2β-酪蛋白与母乳中的β-酪蛋白相似，由于不会产生A1β-酪蛋白在消化过程中的代谢产物BCM-7，可以有效降低BCM-7干扰体内自然消化过程的机会，更有利于促进婴幼儿的生长发育。因此，市面上不断推出标注有“A2”字样的婴幼儿及成人配方奶粉和牛奶，价格较一般产品高出许多，声称只含有A2β-酪蛋白而不含有A1β-酪蛋白。
其实，A2β-酪蛋白的奶源非常稀有。不是所有的奶牛都能产出只含纯净A2β-酪蛋白而不含A1β-酪蛋白的牛奶。现今，西方的奶牛中只有约30％的奶牛是纯正的A2奶牛，由其所产的牛奶只含100％纯净A2β-酪蛋白，其余均是A1β-酪蛋白或A1和A2β-酪蛋白的混合体。但是由于其宣称的对消化系统及人体的多种有益性，许多消费者仍趋之若鹜。如何确保产品中的β-酪蛋白确实是只含有A2β-酪蛋白而没有A1β-酪蛋白呢？目前仅有少量文献报道，采用的检测方法主要包括液相色谱法检测和液相色谱-质谱联用法。质谱联用电喷雾电离(ESI)是迄今为止最可靠的多肽检测技术，但是目前基于质谱的检测技术主要集中在检测A1的酶解产物BCM-7上，无法同时对A2β-酪蛋白进行定性和定量检测。由于缺乏有效的检测手段，国内国际上也没有出台相关的检测标准，因而，消费者的利益无法得到保障。
因此针对目前A2乳制品市场逐渐扩大，而A2β-酪蛋白的定性和定量检测方法缺乏的问题，有必要一种新型的基于蛋白质组学的方法，确定A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白的特征肽段，建立多反应监测方法进行定量分析。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法，能够同时实现A1、A2β-酪蛋白的定性鉴定和定量研究，灵敏度高，准确度高，抗干扰能力强，可广泛应用于A2乳制品的确证和检测。
本发明为解决上述技术问题而采用的技术方案是提供一种A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法，包括如下步骤：a)获取A2β-酪蛋白的氨基酸序列并保存；b)将A2β-酪蛋白的67位氨基酸脯氨酸修改为组氨酸，继续获得A1β-酪蛋白的氨基酸序列；c)利用特异性的酶解方法将待检测蛋白质切成小分子量的多肽片段混合物，利用静电场轨道阱高分辨质谱全扫描模式检测混合物中各多肽的分子量和碎片信息，并与步骤a)和b)中的氨基酸序列进行比对，定性判断多肽片段混合物中是否存在A1β-酪蛋白或A2β-酪蛋白的特征肽段；d)挑选定性判断为A1β-酪蛋白或A2β-酪蛋白的特征肽段，合成其同位素内标肽段，建立多反应监测方法进行定量分析。
上述的A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法，其中，所述步骤a)从蛋白质数据库Uniport中下载获取A2β-酪蛋白的氨基酸序列，所述步骤c)通过质谱结果分析软件proteinpilot确定多肽片段混合物中是否存在A1β-酪蛋白或A2β-酪蛋白的特征肽段。
上述的A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法，其中，所述步骤c)利用胰蛋白酶进行酶解，酶解后的样品在HPLC-Q/Orbitrap上以数据依赖采集方式获得的全扫描质谱图进行蛋白质定性确证；所述步骤d)针对每个特征肽选择3个离子对进行多肽混合物的多反应监测，完成蛋白质定量检测。
上述的A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法，其中，所述步骤c)包括：c1)称取固体试样2g或液体试样10g，加水溶解定容于1000毫升容量瓶中，漩涡振荡器上混合均匀；c2)准确移取200μL上述溶液于1.5mL低蛋白吸附的离心管中，加入200μL 500mmol/L碳酸氢铵溶液，10μL 100mmol/L二硫苏糖醇溶液，混匀后置70℃恒温水浴锅中孵育30min；c3)冷却至室温后，加入20μL 200mmol/L碘代乙酰胺溶液，避光反应30min；c4)加入20μL 50mmol/L氯化钙溶液和50μL 400μg/mL牛胰蛋白酶溶液，充分混匀后置于37℃恒温水浴中过夜酶解；c5)加入10μL甲酸混匀，终止反应。
上述的A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法，其中，所述步骤c)蛋白质定量检测包括：选取不同类型、柱长或内径的色谱柱，记录色谱分离的变化；调节流动相流速、梯度或时间参数，记录分离效率的变化；控制柱温和试液温度，针对A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白特征肽记录色谱保留时间的重现性；调节喷针位置、毛细管电压、锥孔电压、各路气体流量和温度以及碰撞能参数；采用全扫描方式观测蛋白酶解产物产生多电荷离子的排布与质量数范围。
上述的A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法，其中，还包括收集各种不同品牌的牛奶进行A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白的定性确证和定量检测，并按照线性范围、灵敏度、重现性、回收率指标收集获取不同来源样品的统计结果。
本发明对比现有技术有如下的有益效果：本发明提供的A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法，能够定性确定A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白的特征肽段，并建立了A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白同时定性鉴定和精确测量的MRM方法，灵敏度高，检测限为0.5ppm；准确度高，抗干扰能力强，可广泛应用于A2乳制品的确证和检测。
附图说明
图1为本发明A1/A2β-酪蛋白的质谱检测流程示意图；
图2为本发明A1β-酪蛋白定量离子对和定性离子对的色谱质谱图；
图3为本发明A2β-酪蛋白定量离子对和定性离子对的色谱质谱图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的描述。
图1为本发明A1/A2β-酪蛋白的质谱检测流程示意图。
请参见图1，本发明提供的A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法，包括如下步骤：
S1)获取A2β-酪蛋白的氨基酸序列并保存；
S2)将A2β-酪蛋白的67位氨基酸脯氨酸修改为组氨酸，继续获得A1β-酪蛋白的氨基酸序列；
S3)利用特异性的酶解方法将待检测蛋白质切成小分子量的多肽片段混合物，利用一级质谱或串联质谱检测混合物中各多肽的分子量和碎片信息，并与步骤S1)和S2)中的氨基酸序列进行比对，定性判断多肽片段混合物中是否存在A1β-酪蛋白或A2β-酪蛋白的特征肽段；
S4)挑选定性判断为A1β-酪蛋白或A2β-酪蛋白的特征肽段，建立多反应监测方法进行定量分析。
本发明首先用特异性的酶解或化学水解的方法将蛋白质切成小分子量的多肽片段混合物，利用静电场轨道阱高分辨质谱全扫描模式检测混合物中各多肽的分子量和碎片信息，将得到的一系列多肽分子量或碎片离子的数据输入数据库，搜索与之相对应的已知蛋白质，实现蛋白质的鉴定，即肽质量指纹图谱法(peptide mass fingerprint,PMF)或肽段碎片离子鉴定法(peptide fragments identification,PFI)。然后根据检测结果结合相关蛋白质组学软件挑选出符合要求的特征肽段，建立多反应监测(MRM)方法进行定量分析。A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白的氨基酸序列如下，
A1：RELEELNVPGEIVESLSSSEESITRINKKIEKFQSEEQQQTEDELQDKIHPFAQTQSLVYPFPGPIHNSLPQNIPPLTQTPVVVPPFLQPEVMGVSKVKEAMAPKHKEMPFPKYPVEPFTESQSLTLTDVENLHLPLPLLQSWMHQPHQPLPPTVMFPPQSVLSLSQSKVLPVPQKAVPYPQRDMPIQAFLLYQEPVLGPVRGPFPIIV
A2：RELEELNVPGEIVESLSSSEESITRINKKIEKFQSEEQQQTEDELQDKIHPFAQTQSLVYPFPGPIPNSLPQNIPPLTQTPVVVPPFLQPEVMGVSKVKEAMAPKHKEMPFPKYPVEPFTESQSLTLTDVENLHLPLPLLQSWMHQPHQPLPPTVMFPPQSVLSLSQSKVLPVPQKAVPYPQRDMPIQAFLLYQEPVLGPVRGPFPIIV
胰蛋白酶的酶切位点为K和R，将A1和A2β-酪蛋白用胰蛋白酶酶解后，将会得到IHPFAQTQSLVYPFPGPIHNSLPQNIPPLTQTPVVVPPFLQPEVMGVSK(A1)和IHPFAQTQSLVYPFPGPIPNSLPQNIPPLTQTPVVVPPFLQPEVMGVSK(A2)两个特征肽段，这两个特征肽段具有不同的分子量，因而可以通过质谱方法检测，可分别用于确定A1和A2β-酪蛋白。
本发明提供的A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法，2.结合高效液相色谱-串联四级杆质谱(QqQ)系统，及Skyline软件，建立MRM方法，可同时实现A1、A2β-酪蛋白的定性鉴定和定量研究。特征肽段的确定和MRM方法的具体建立过程如下：
(1)从Uniport数据库中下载β-酪蛋白的氨基酸序列，原始的β-酪蛋白为A2β-酪蛋白，将A2β-酪蛋白的67位氨基酸脯氨酸(P)修改为组氨酸(H)即为A1β-酪蛋白的氨基酸序列。对A1和A2β-酪蛋白酶解产生的多肽混合物进行扫描，利用Proteinpilot搜索软件进行蛋白质的确证，确定其产物碎片的氨基酸序列。
(2)利用Skyline软件结合质谱检测结果，根据特征肽的选择原则，确定A1和A2β-酪蛋白的特征肽段，针对每个特征肽选择3个离子对，用于建立多肽混合物的MRM方法，如下表所示(*代表定量离子)。
本发明提供的A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法，建立A1和A2β-酪蛋白同时检测的色谱质谱方法
(1)优化HPLC条件。考察色谱柱参数包括类型、柱长、内径等对色谱分离的影响；优化流动相流速、梯度、时间等参数对分离效率的影响；选择合适的柱温和试液温度；针对A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白特征肽考察其色谱保留时间的重现性。
(2)优化ESI-QqQ条件。优化喷针位置、毛细管电压，锥孔电压，各路气体流量和温度以及碰撞能参数；采用全扫描方式观测蛋白酶解产物产生多电荷离子的排布与质量数范围。
(3)收集各种不同品牌的牛奶，采用优化后的前处理和色谱质谱方法，进行A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白的定性确证和定量检测工作；并收集不同来源样品的定性定量数据，获得统计结果。考察方法的线性范围、灵敏度、重现性、回收率等指标。
本发明提供的A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法，具体酶解过程如下：
1)称取固体试样约2g或液体试样约10g，加水溶解定容于1000毫升容量瓶中，漩涡振荡器上混合均匀。
2)准确移取200μL上述溶液于1.5mL低蛋白吸附的离心管中，加入200μL 500mmol/L碳酸氢铵溶液，10μL 100mmol/L二硫苏糖醇(DTT)溶液，混匀后置70℃恒温水浴锅中孵育30min。
3)冷却至室温后，加入20μL 200mmol/L碘代乙酰胺(IAA)溶液，避光反应30min。
4)加入20μL 50mmol/L氯化钙溶液和50μL 400μg/mL牛胰蛋白酶溶液，充分混匀后置于37℃恒温水浴中过夜酶解。
5)加入10μL甲酸混匀，终止反应。
6)酶解后的样品在HPLC-Q/Orbitrap上以数据依赖采集(data-dependentacquisition，DDA)方式获得的全扫描质谱图进行蛋白质定性确证。
7)酶解后的样品在HPLC-QqQ上以MRM方式进行蛋白质定量检测。
综上所述，本发明提供的A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法，灵敏度高，检测限为0.5ppm；准确度高，抗干扰能力强，可广泛应用于A2乳制品的确证和检测；A1β-酪蛋白定量离子对和定性离子对的色谱质谱图如图2所示，A2β-酪蛋白定量离子对和定性离子对的色谱质谱图如图3所示。
虽然本发明已以较佳实施例揭示如上，然其并非用以限定本发明，任何本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，当可作些许的修改和完善，因此本发明的保护范围当以权利要求书所界定的为准。

Claims (6)

1.一种A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
a)获取A2β-酪蛋白的氨基酸序列并保存；
b)将A2β-酪蛋白的67位氨基酸脯氨酸修改为组氨酸，继续获得A1β-酪蛋白的氨基酸序列；
c)利用特异性的酶解方法将待检测蛋白质切成小分子量的多肽片段混合物，利用静电场轨道阱高分辨质谱全扫描模式检测混合物中各多肽的分子量和碎片信息，并与步骤a)和b)中的氨基酸序列进行比对，定性判断多肽片段混合物中是否存在A1β-酪蛋白或A2β-酪蛋白的特征肽段；
d)挑选定性判断为A1β-酪蛋白或A2β-酪蛋白的特征肽段，合成其同位素内标肽段，建立多反应监测方法进行定量分析。
2.如权利要求1所述的A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法，其特征在于，所述步骤a)从蛋白质数据库Uniport中下载获取A2β-酪蛋白的氨基酸序列，所述步骤c)通过质谱结果分析软件protein pilot确定多肽片段混合物中是否存在A1β-酪蛋白或A2β-酪蛋白的特征肽段。
3.如权利要求1所述的A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法，其特征在于，所述步骤c)利用胰蛋白酶进行酶解，酶解后的样品在HPLC-Q/Orbitrap上以数据依赖采集方式获得的全扫描质谱图进行蛋白质定性确证；所述步骤d)针对每个特征肽选择3个离子对进行多肽混合物的多反应监测，完成蛋白质定量检测。
4.如权利要求3所述的A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法，其特征在于，所述步骤c)包括：
c1)称取固体试样2g或液体试样10g，加水溶解定容于1000毫升容量瓶中，漩涡振荡器上混合均匀；
c2)准确移取200μL上述溶液于1.5mL低蛋白吸附的离心管中，加入200μL500mmol/L碳酸氢铵溶液，10μL 100mmol/L二硫苏糖醇溶液，混匀后置70℃恒温水浴锅中孵育30min；
c3)冷却至室温后，加入20μL 200mmol/L碘代乙酰胺溶液，避光反应30min；
c4)加入20μL 50mmol/L氯化钙溶液和50μL 400μg/mL牛胰蛋白酶溶液，充分混匀后置于37℃恒温水浴中过夜酶解；
c5)加入10μL甲酸混匀，终止反应。
5.如权利要求3所述的A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法，其特征在于，所述步骤c)蛋白质定量检测包括：
选取不同类型、柱长或内径的色谱柱，记录色谱分离的变化；
调节流动相流速、梯度或时间参数，记录分离效率的变化；
控制柱温和试液温度，针对A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白特征肽记录色谱保留时间的重现性；
调节喷针位置、毛细管电压、锥孔电压、各路气体流量和温度以及碰撞能参数；采用全扫描方式观测蛋白酶解产物产生多电荷离子的排布与质量数范围。
6.如权利要求3所述的A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法，其特征在于，还包括收集各种不同品牌的牛奶进行A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白的定性确证和定量检测，并按照线性范围、灵敏度、重现性、回收率指标收集获取不同来源样品的统计结果。
CN201810316627.6A 2018-04-10 2018-04-10 一种A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法 Active CN108519485B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810316627.6A CN108519485B (zh) 2018-04-10 2018-04-10 一种A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810316627.6A CN108519485B (zh) 2018-04-10 2018-04-10 一种A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108519485A true CN108519485A (zh) 2018-09-11
CN108519485B CN108519485B (zh) 2020-09-08

Family

ID=63431944

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810316627.6A Active CN108519485B (zh) 2018-04-10 2018-04-10 一种A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108519485B (zh)

Cited By (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108709939A (zh) * 2018-05-21 2018-10-26 杭州璞湃科技有限公司 一种用于检测牛乳品中A2β-酪蛋白含量的特征肽及方法
CN108956837A (zh) * 2018-05-21 2018-12-07 浙江清华长三角研究院 一种用于检测牛乳品中A1β-酪蛋白含量的特征肽及方法
CN109283239A (zh) * 2018-10-22 2019-01-29 山东省农业科学院奶牛研究中心 一种检测牛乳中不同β-酪蛋白变体型的方法
CN111077215A (zh) * 2019-12-31 2020-04-28 北京毅新博创生物科技有限公司 质谱检测乳样品A1和A2β酪蛋白的方法
CN111077214A (zh) * 2019-12-31 2020-04-28 北京毅新博创生物科技有限公司 质谱检测乳制品中A1、A2型β酪蛋白的质谱模型及其构建方法
CN111089892A (zh) * 2019-12-31 2020-05-01 北京毅新博创生物科技有限公司 质谱检测乳制品中A1、A2型β酪蛋白的检测产品
WO2020091608A1 (en) 2018-10-29 2020-05-07 The A2 Milk Company Limited Beta-casein analysis of milk and milk products
CN111796038A (zh) * 2020-09-09 2020-10-20 中国农业科学院蜜蜂研究所 一种液相色谱串联质谱法检测大蜜蜂mrjp1及其在鉴别大蜜蜂蜂蜜真实性方面的应用
CN111830113A (zh) * 2019-04-15 2020-10-27 布鲁克道尔顿有限公司 确定蛋白质和肽的异构氨基酸残基的方法
CN111896652A (zh) * 2020-07-30 2020-11-06 山东省食品药品检验研究院 一种蛇毒类凝血酶的定量检测方法
CN112557493A (zh) * 2019-12-31 2021-03-26 北京毅新博创生物科技有限公司 质谱检测乳制品中A1和A2型β-酪蛋白的标准特征多肽组
CN114414688A (zh) * 2022-01-13 2022-04-29 中国计量科学研究院 检测牛奶和乳制品中A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白含量的方法
WO2024016508A1 (zh) * 2022-07-22 2024-01-25 无锡市食品安全检验检测中心 质谱定量检测多肽产品中酪蛋白糖巨肽的标准特征多肽序列

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103616454A (zh) * 2013-12-06 2014-03-05 浙江贝因美科工贸股份有限公司 一种定量检测人β-酪蛋白含量的方法以及试剂盒
CN106442683A (zh) * 2015-08-11 2017-02-22 中国人民解放军军事医学科学院生物医学分析中心 一种基于质谱检测的蛋白质消化稳定性分析方法及其应用
CN106645464A (zh) * 2015-12-17 2017-05-10 中国医科大学 可实现牛β‑酪蛋白鉴定及绝对定量的试剂盒及测定方法
WO2018009571A1 (en) * 2016-07-07 2018-01-11 Genysis Lab, Inc. Identification of the presence of specific polypeptides by liquid chromatography and mass spectrometry

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103616454A (zh) * 2013-12-06 2014-03-05 浙江贝因美科工贸股份有限公司 一种定量检测人β-酪蛋白含量的方法以及试剂盒
CN106442683A (zh) * 2015-08-11 2017-02-22 中国人民解放军军事医学科学院生物医学分析中心 一种基于质谱检测的蛋白质消化稳定性分析方法及其应用
CN106645464A (zh) * 2015-12-17 2017-05-10 中国医科大学 可实现牛β‑酪蛋白鉴定及绝对定量的试剂盒及测定方法
CN106770812A (zh) * 2015-12-17 2017-05-31 中国医科大学 可实现牛ɑs1‑酪蛋白鉴定及绝对定量的试剂盒及测定方法
WO2018009571A1 (en) * 2016-07-07 2018-01-11 Genysis Lab, Inc. Identification of the presence of specific polypeptides by liquid chromatography and mass spectrometry

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
QI CHEN ET AL: "Quantification of bovine β-casein allergen in baked foodstuffs based on ultra-performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry", 《FOOD ADDITIVES & CONTAMINANTS》 *

Cited By (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108956837A (zh) * 2018-05-21 2018-12-07 浙江清华长三角研究院 一种用于检测牛乳品中A1β-酪蛋白含量的特征肽及方法
CN108709939A (zh) * 2018-05-21 2018-10-26 杭州璞湃科技有限公司 一种用于检测牛乳品中A2β-酪蛋白含量的特征肽及方法
CN109283239A (zh) * 2018-10-22 2019-01-29 山东省农业科学院奶牛研究中心 一种检测牛乳中不同β-酪蛋白变体型的方法
JP7369198B2 (ja) 2018-10-29 2023-10-25 ズィ・エイツー・ミルク・カンパニー・リミテッド ミルクおよび乳製品のベータカゼイン分析
WO2020091608A1 (en) 2018-10-29 2020-05-07 The A2 Milk Company Limited Beta-casein analysis of milk and milk products
CN113366309A (zh) * 2018-10-29 2021-09-07 艾尔牛奶有限公司 乳和乳产品的β-酪蛋白分析
CN111830113A (zh) * 2019-04-15 2020-10-27 布鲁克道尔顿有限公司 确定蛋白质和肽的异构氨基酸残基的方法
CN111830113B (zh) * 2019-04-15 2023-09-22 布鲁克·道尔顿有限及两合公司 确定蛋白质和肽的异构氨基酸残基的方法
CN111077214A (zh) * 2019-12-31 2020-04-28 北京毅新博创生物科技有限公司 质谱检测乳制品中A1、A2型β酪蛋白的质谱模型及其构建方法
CN112557493A (zh) * 2019-12-31 2021-03-26 北京毅新博创生物科技有限公司 质谱检测乳制品中A1和A2型β-酪蛋白的标准特征多肽组
CN112557493B (zh) * 2019-12-31 2022-09-30 北京毅新博创生物科技有限公司 质谱检测乳制品中A1和A2型β-酪蛋白的标准特征多肽组
CN111089892A (zh) * 2019-12-31 2020-05-01 北京毅新博创生物科技有限公司 质谱检测乳制品中A1、A2型β酪蛋白的检测产品
CN111077215A (zh) * 2019-12-31 2020-04-28 北京毅新博创生物科技有限公司 质谱检测乳样品A1和A2β酪蛋白的方法
CN111896652A (zh) * 2020-07-30 2020-11-06 山东省食品药品检验研究院 一种蛇毒类凝血酶的定量检测方法
CN111796038A (zh) * 2020-09-09 2020-10-20 中国农业科学院蜜蜂研究所 一种液相色谱串联质谱法检测大蜜蜂mrjp1及其在鉴别大蜜蜂蜂蜜真实性方面的应用
CN114414688A (zh) * 2022-01-13 2022-04-29 中国计量科学研究院 检测牛奶和乳制品中A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白含量的方法
WO2024016508A1 (zh) * 2022-07-22 2024-01-25 无锡市食品安全检验检测中心 质谱定量检测多肽产品中酪蛋白糖巨肽的标准特征多肽序列

Also Published As

Publication number Publication date
CN108519485B (zh) 2020-09-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108519485A (zh) 一种A1/A2β-酪蛋白的质谱检测方法
CN105143872B (zh) 通过质谱分析用复用内标物对蛋白质和蛋白质修饰的绝对定量
CN104614479B (zh) 一种食品中维生素的检测方法
CN105209907B (zh) 用于生物治疗蛋白质产品中的宿主细胞蛋白质污染物的检测的swathtm数据独立性采集技术
CN104345107B (zh) 一种乳或乳制品中牛乳血清白蛋白定量检测试剂盒
CN106749598A (zh) 一种用于检测羊奶粉中牛奶粉掺假比例的特征肽组合及方法
Cuollo et al. Toward milk speciation through the monitoring of casein proteotypic peptides
Bergot et al. Identification of JH III as the princpal juvenile hormone in Locusta migratoria
CN110531019A (zh) 一种基于不同动物源性肉类特征多肽的肉样掺假定量检测方法
CN103616454A (zh) 一种定量检测人β-酪蛋白含量的方法以及试剂盒
CN108956837A (zh) 一种用于检测牛乳品中A1β-酪蛋白含量的特征肽及方法
CN108469495A (zh) 一种利用液相色谱串联质谱检测鱼类小清蛋白的方法
CN106749600B (zh) 一种酪蛋白磷酸肽的标签肽及其应用
CN111077215A (zh) 质谱检测乳样品A1和A2β酪蛋白的方法
CN101196526A (zh) 一种结核快速诊断的质谱分析试剂盒和方法
CN108693280A (zh) 通过uplc-ms/ms定量测定生物样品中德谷胰岛素含量的方法
CN108948176A (zh) 一种骨桥蛋白特征肽及其应用
CN105929044A (zh) 一种快速检测乳及乳制品中羟脯氨酸含量的方法
CN111077214A (zh) 质谱检测乳制品中A1、A2型β酪蛋白的质谱模型及其构建方法
CN115902048A (zh) 甲基衍生化-高效液相色谱串联质谱检测血清中水溶性维生素的方法
CN108181399B (zh) 一种乳制品中A2-β-酪蛋白含量的检测方法
CN106908532A (zh) 测定水产品中孔雀石绿、喹诺酮类、磺胺类药物的方法
CN110221006A (zh) 一种针对巯基多肽生物样本的前处理方法以及对该生物样本的检测方法
Calabrese et al. Quantitation of lysinoalanine in dairy products by liquid chromatography–mass spectrometry with selective ion monitoring
CN109709233A (zh) 一种检测血液、尿液中多种蘑菇毒素的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant