CN108517010A - 识别α-突触核蛋白的人源化抗体 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了人源化1H7抗体。该抗体结合到人类α突触核蛋白上，能够用于治疗和诊断路易体病。

Description

识别α-突触核蛋白的人源化抗体
分案申请说明
本申请为申请日：2013年01月25日，申请号：201380007018.8，发明名称：识别α-突触核蛋白的人源化抗体的发明专利申请的分案申请。
相关申请的交叉引用
本申请要求于2012年1月27日递交的美国临时专利申请No.61/591，835以及于2012年8月8日递交的美国临时专利申请No.61/711，207的优先权，出于所有目的，以上两个临时专利申请的全部内容以引用的方式并入本申请中。
背景技术
突触核蛋白病，包括路易体病(路易体病，LBDs)的特征是多巴胺能神经系统退化，行动改变，认知障碍以及路易小体(Lewy bodies，LBs)和/或路易神经突(Lewy neurites)形成(参考McKeith et al.，Neurology(1996)47:1113-24)。突触核蛋白病包括帕金森氏病(包括特发性帕金森氏病)，弥漫性路易体病(DLBD)也被称为路易体痴呆(DLB)、阿尔茨海默病路易体变异型、综合阿尔茨海默病和帕金森氏病、单纯性自主神经衰竭和多系统萎缩(multiple system atrophy，MSA，例如，橄榄桥脑小脑萎缩、纹状体黑质变性和Shy-Drager综合征)。在疾病的前驱阶段(例如，症状前阶段，亚临床阶段，临床前阶段或运动前期(premotor period))，一些非运动(nonmotor)信号和症状被认为是突触核蛋白病的预兆。这样的早期信号包括，例如，REM睡眠行为紊乱(RBD)，嗅觉丧失以及便秘(参考(Mahowaldet al.，Neurology(2010)75:488-489)。在老年群体中，路易体病仍然是运动障碍和认知退化的普遍原因。
α-突触核蛋白是包括β和γ-突触核蛋白和synoretin(突触核蛋白新家族成员)在内的大蛋白家族的一部分。α-突触核蛋白在与突触相关的正常状态下表达，被认为在神经可塑性、学习和记忆中起到关键作用。几项研究已经暗示α-突触核蛋白在帕金森氏病发病机理中起到中心作用。在发病条件下，该蛋白能够聚集，形成不可溶性的原纤维。例如，突触核蛋白在LBs中聚集(参考Spillantini et al.，Nature(1997)388:839-40；Takeda etal.，J.Pathol.(1998)152:367-72；Wakabayashi et al.，Neurosci.Lett.(1997)239:45-8)。α-突触核蛋白基因的突变与帕金森氏病罕见的家族形式共分离(co-segregate)(参见Kruger et al.，Nature Gen.(1998)18:106-8；Polymero poulos，et al.，Science(1997)276:2045-7)。α-突触核蛋白在转基因小鼠(Masliah et al.，Science(2000)287:1265-9)和果蝇(参见Feany et al.，Nature(2000)404:394-8)中的过度表达模拟了路易体病病理学的几个方面。此外，已有研究显示可溶性的突触核蛋白寡聚化可能毒害神经(参见Conwayet al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2000)97:571–576；Volles et al.，J.Biochemistry(2003)42:7871–7878)。在多个物种和动物模型(如人类、小鼠和果蝇)中具有相似形态和神经病变的α-突触核蛋白的聚集表明该分子在路易体病的发病中起了作用。
发明内容
本发明提供了包括成熟重链可变区域(所述成熟重链可变区域包括SEQ ID NO:44的三个Kabat CDR(Kabat互补决定区)，与SEQ ID NO:44具有至少90％的同一性)和轻链(所述轻链包括SEQ ID NO:45的三个Kabat CDR，与SEQ ID NO:45具有至少90％的同一性)的抗体。在一些抗体中，成熟重链可变区域与SEQ ID NO:44具有至少95％、96％、97％、98％或99％的同一性，成熟轻链可变区域与SEQ ID NO:45具有至少95％、96％、97％、98％或99％的同一性。在一些抗体中，第L46位(Kabat编号)可能被F占据，第L49位(Kabat编号)可能被C占据；第L83位(Kabat编号)可能被A占据；第H11位(Kabat编号)可能被L占据；第H28位(Kabat编号)可能被S占据；第H38位(Kabat编号)可能被K占据；第H48位(Kabat编号)可能被I占据；第H67位(Kabat编号)可能被A占据；第H69位(Kabat编号)可能被L占据；第H71位(Kabat编号)可能被A占据；和/或第H91位(Kabat编号)可能被F占据。在某些这样的抗体中，第H97位(Kabat编号)可能被S占据。在某些这样的抗体中，成熟重链可变区域的氨基酸序列是SEQ ID NO:44，成熟轻链可变区域的氨基酸序列是SEQ ID NO:45，但第L46位(Kabat编号)可能被L或F占据，和/或第L49位(Kabat编号)可能被Y或C占据，和/或第L83位(Kabat编号)可能被A或C占据，和/或第H11位(Kabat编号)可能被V或L占据，和/或第H28(Kabat编号)可能被T或S占据，和/或第H38(Kabat编号)可能被R或K占据，和/或第H48(Kabat编号)可能被M或I占据，和/或第H67(Kabat编号)可能被V或A占据，和/或第H69(Kabat编号)可能被M或L占据，和/或第H71(Kabat编号)可能被T或A占据，和/或第H91(Kabat编号)可能被Y或F占据，和/或第H97(Kabat编号)可能被C或S占据。在某些这样的抗体中，第H71位(Kabat编号)被A占据。在某些这样的抗体中，第H67位(Kabat编号)被A占据，第H71位(Kabat编号)被A占据。在某些这样的抗体中，第L46位(Kabat编号)被F占据。在某些这样的抗体中，第L46位(Kabat编号)被F占据，第L49位(Kabat编号)被C占据。在某些这样的抗体中，第L46位(Kabat编号)被F占据，第L49位(Kabat编号)被C占据。在某些这样的抗体中，第L46位(Kabat编号)被F占据，第L49位(Kabat编号)被Y占据。在某些这样的抗体中，第H67位(Kabat编号)被A占据，第H71位(Kabat编号)被A占据，第L46位(Kabat编号)被F占据，第L49位(Kabat编号)被C占据。在某些这样的抗体中，第H11位(Kabat编号)被L占据，第H38位(Kabat编号)被K占据。在某些这样的抗体中，第H11位(Kabat编号)被V占据，第H38位(Kabat编号)被R占据。在某些这样的抗体中，第H28位(Kabat编号)被S占据，第H48位(Kabat编号)被I占据，第H69位(Kabat编号)被L占据，第H91位(Kabat编号)被F占据。在某些这样的抗体中，第H28位(Kabat编号)被T占据，第H48位(Kabat编号)被M占据，第H69位(Kabat编号)被M占据，第H91位(Kabat编号)被Y占据。在某些这样的抗体中，第L83位(Kabat编号)被A占据。在某些这样的抗体中，第L83位(Kabat编号)被F占据。在某些这样的抗体中，第H97位(Kabat编号)被S占据。在某些这样的抗体中，第H97位(Kabat编号)被C占据。在某些这样的抗体中，第L46位(Kabat编号)被F占据，第L49位(Kabat编号)被C占据，第L83位(Kabat编号)被A占据。在某些这样的抗体中，第L46位(Kabat编号)被F占据，第L49位(Kabat编号)被Y占据，第L83位(Kabat编号)被A占据。在某些这样的抗体中，第L46位(Kabat编号)被F占据，第L49位(Kabat编号)被C占据，第L83位(Kabat编号)被F占据。在某些这样的抗体中，第L46位(Kabat编号)被F占据，第L49位(Kabat编号)被Y占据，第L83位(Kabat编号)被F占据。在某些这样的抗体中，第H11位(Kabat编号)被L占据，第H28位(Kabat编号)被S占据，第H38位(Kabat编号)被I占据，第H48位(Kabat编号)被I占据，第H67位(Kabat编号)被A占据，第H69位(Kabat编号)被L占据，第H71位(Kabat编号)被A占据，第H91位(Kabat编号)被F占据，第H97位(Kabat编号)被C占据。在某些这样的抗体中，第H11位(Kabat编号)被V占据，第H28位(Kabat编号)被S占据，第H38位(Kabat编号)被R占据，第H48位(Kabat编号)被I占据，第H67位(Kabat编号)被A占据，第H69位(Kabat编号)被L占据，第H71位(Kabat编号)被A占据，第H91位(Kabat编号)被F占据，第H97位(Kabat编号)被C占据。在某些这样的抗体中，第H11位(Kabat编号)被V占据，第H28位(Kabat编号)被T占据，第H38位(Kabat编号)被R占据，第H48位(Kabat编号)被M占据，第H67位(Kabat编号)被A占据，第H69位(Kabat编号)被M占据，第H71位(Kabat编号)被A占据，第H91位(Kabat编号)被Y占据，第H97位(Kabat编号)被C占据。在某些这样的抗体中，第H11位(Kabat编号)被V占据，第H28位(Kabat编号)被S占据，第H38位(Kabat编号)被R占据，第H48位(Kabat编号)被I占据，第H67位(Kabat编号)被A占据，第H69位(Kabat编号)被L占据，第H71位(Kabat编号)被A占据，第H91位(Kabat编号)被F占据，第H97位(Kabat编号)被S占据。在某些这样的抗体中，第H11位(Kabat编号)被V占据，第H28位(Kabat编号)被T占据，第H38位(Kabat编号)被R占据，第H48位(Kabat编号)被M占据，第H67位(Kabat编号)被A占据，第H69位(Kabat编号)被M占据，第H71位(Kabat编号)被A占据，第H91位(Kabat编号)被Y占据，第H97位(Kabat编号)被S占据。在某些这样的抗体中，成熟重链可变区域的氨基酸序列是SEQ ID NO:44，而成熟轻链可变区域的氨基酸序列是SEQ ID NO:45。
本发明进一步提供了一种包括人源化重链和人源化轻链的抗体，所述人源化重链含有SEQ ID NO:44的三个Kabat CDR，所述人源化轻链含有SEQ ID NO:45三个CDR，但是第L46位(Kabat编号)被F占据，和/或第L49位(Kabat编号)被C占据，和/或第L83位(Kabat编号)被F占据，和/或第H11位(Kabat编号)被V占据，和/或第H28和/或第H11位(Kabat编号)被V占据，位(Kabat编号)被T占据，和/或第H48位(Kabat编号)被M占据，和/或第H67位(Kabat编号)被A占据，和/或第H69位(Kabat编号)被M占据，和/或第H71位(Kabat编号)被A占据，和/或第H91位(Kabat编号)被Y占据，和/或第H97位(Kabat编号)被C占据。在某些这样的抗体中，第L46位(Kabat编号)被F占据，第L49位(Kabat编号)被C占据。在某些这样的抗体中，第H67位(Kabat编号)被A占据，第H71位(Kabat编号)被A占据。在某些这样的抗体中，第L46位(Kabat编号)被F占据，第H67位(Kabat编号)被A占据，第H71位(Kabat编号)被A占据，第L49位(Kabat编号)被C占据。在某些这样的抗体中，第H11位(Kabat编号)被V占据，第H38位(Kabat编号)被R占据。在某些这样的抗体中，第H28位(Kabat编号)被T占据，第H48位(Kabat编号)被M占据，第H69位(Kabat编号)被M占据，第H91位(Kabat编号)被Y占据。在某些这样的抗体中，第L49位(Kabat编号)被C占据，第L83位(Kabat编号)被F占据。在某些这样的抗体中，第H28位(Kabat编号)被T占据，第H48位(Kabat编号)被M占据，第H69位(Kabat编号)被M占据，第H91位(Kabat编号)被Y占据，第L49位(Kabat编号)被C占据，第L83位(Kabat编号)被F占据。在某些这样的抗体中，第H97位(Kabat编号)被C占据。在某些这样的抗体中，第L46位(Kabat编号)被F占据，第L49位(Kabat编号)被C占据，第L83位(Kabat编号)被F占据，第H11位(Kabat编号)被V占据，第H28位(Kabat编号)被T占据，第H38位(Kabat编号)被R占据，第H48位(Kabat编号)被M占据，第H67位(Kabat编号)被A占据，第H69位(Kabat编号)被M占据，第H71位(Kabat编号)被A占据，第H91位(Kabat编号)被Y占据，第H97位(Kabat编号)被C占据。
本发明进一步提供了一种包括成熟重链可变区域和成熟轻链可变区域的抗体，所述成熟重链可变区域的氨基酸序列与SEQ ID NO:23至少有90％的同一性，所述成熟轻链可变区域的氨基酸序列与SEQ ID NO:37至少有90％的同一性。在某些这样的抗体中，成熟重链可变区域含有SEQ ID NO:23的三个Kabat CDR，成熟轻链可变区域含有SEQ ID NO:37分绒三个Kabat CDR，且第H67位(Kabat编号)被A占据，第71位(Kabat编号)被A占据，第L46位(Kabat编号)被F占据，第L49位(Kabat编号)被C占据。在某些这样的抗体中，第L83位(Kabat编号)被F占据。在某些这样的抗体中，第H97位(Kabat编号)被C占据。在某些这样的抗体中，成熟重链可变区域与SEQ ID NO:23至少有95％的序列同一性，成熟轻链可变区域与SEQ IDNO:37至少有95％的序列同一性。在某些这样的抗体中，成熟重链可变区域和成熟轻链可变区域CDR与SEQ ID NOs.52和60中的所有差别分别位于第H60～H65位。在某些这样的抗体中，抗体对α-突触核蛋白KD值是小鼠抗体或嵌合1H7抗体对α-突触核蛋白KD值的0.5～2倍。在某些这样的抗体中，第L83位(Kabat编号)被F或A占据，第H11位(Kabat编号)被V占据，第H28位(Kabat编号)被T占据，第H38位(Kabat编号)被R占据，第H48位(Kabat编号)被M占据，第H67位(Kabat编号)被A占据，第H69位(Kabat编号)被M占据，第H71位(Kabat编号)被A占据，第H91位(Kabat编号)被Y占据，以及第H97位(Kabat编号)被C占据。在某些这样的抗体中，第L83位(Kabat编号)被F占据。在某些这样的抗体中，第H97位(Kabat编号)被C占据。在某些这样的抗体中，成熟重链可变区域的可变区域框和SEQ ID NO:23的所有差别是第H11位(Kabat编号)被F占据；第H28位(Kabat编号)被T占据；第H38位(Kabat编号)被R占据；第H48位(Kabat编号)被M占据；第H69位(Kabat编号)被M占据；第H91位(Kabat编号)被Y占据中的一个或多个。在某些这样的抗体中，成熟轻链可变区域的可变区域框和SEQ ID NO:37的所有差别是第L83位(Kabat编号)被A占据。在某些这样的抗体中，成熟重链可变区域具有如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列，成熟轻链可变区域具有如SEQ ID NO37所示的氨基酸序列。
在某些抗体中，成熟重链可变区域具有如SEQ ID NO:44所示的氨基酸序列，成熟轻链可变区域具有如SEQ ID NO:45、33、35、37或39所示的氨基酸序列。在某些抗体中，成熟重链可变区域具有如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列，成熟轻链可变区域具有如SEQ IDNO:45、33、35、37或39所示的氨基酸序列。在某些抗体中，成熟重链可变区域具有如SEQ IDNO:21所示的氨基酸序列，成熟轻链可变区域具有如SEQ ID NO:45、33、35、37或39所示的氨基酸序列。在某些抗体中，成熟重链可变区域具有如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列，成熟轻链可变区域具有如SEQ ID NO:45、33、35、37或39所示的氨基酸序列。在某些抗体中，成熟重链可变区域具有如SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列，成熟轻链可变区域具有如SEQ IDNO:45、33、35、37或39所示的氨基酸序列。在某些抗体中，成熟重链可变区域具有如SEQ IDNO:27所示的氨基酸序列，成熟轻链可变区域具有如SEQ ID NO:45、33、35、37或39所示的氨基酸序列。
在任一上述抗体中，成熟重链可变区域可以融合在重链恒定区域，成熟轻链恒定区域可以融合到轻链恒定区域。
在任一上述抗体中，重链恒定区域可以是天然人类恒定区域的突变形式，相对于所述天然人类恒定区域，其与Fcγ受体的结合能力下降。
在任一上述抗体中，重链恒定区域可以是人类IgG1同种型(isotype)的重链恒定区域。在某些抗体中，同种异型是G1m3。在某些抗体中，同种异型是G1m1。
在某些抗体中，重链恒定区域的氨基酸序列如SEQ ID NO:52所示，但其C末端赖氨酸残基可能被删除。在某些抗体中，轻链恒定区域的氨基酸序列如SEQ ID NO:49。在某些抗体中，成熟重链可变区域融合到氨基酸序列如SEQ ID NO:52所示的重链恒定区域，但重链恒定区域C末端赖氨酸残基可能被删除。成熟轻链恒定区域融合到氨基酸序列如SEQ IDNO:49所示的轻链恒定区域。在某些抗体中，成熟轻链含有SEQ ID NO:53，成熟重链含有SEQID NO:56。
本发明进一步提供了编码上述任一成熟重链可变区域和/或上述任一成熟轻链可变区域的核酸，例如，SEQ ID NOS:18、20、22、24、26、32、34、36或38。
本发明进一步提供了包括含有上述任一核酸的载体的宿主细胞。
本发明进一步提供了含有上述任一种的药物组合物。
本发明进一步提供了一种治疗患有路易体病或具有患路易体病的风险的患者的方法，包括给患者施用有效状态的上述任一种。在某些方法中，该疾病是帕金森氏病。在某些方法中，患者的认知功能的衰退被抑制。在某些方法中，神经炎和/或轴突α突触核蛋白的聚集被减弱。在某些方法中，患者的神经炎性营养不良(neuritic dystrophy)缓解。在某些方法中，突触和/或树突细胞密度被维持。在某些方法中，该方法维持了患者的突触小泡蛋白(synaptophysin)和/或MAP2。
本发明进一步提供了一种减少患有路易体病或具有患路易体病的风险的患者中的路易小体形成的方法，包括给患者施用有效剂量的上述任一种。在某些方法中，该疾病是帕金森氏病。在某些方法中，患者的认知功能的衰退被抑制。在某些方法中，神经炎和/或轴突α突触核蛋白的聚集被减弱。在某些方法中，患者的神经炎性营养不良(neuriticdystrophy)缓解。在某些方法中，突触和/或树突细胞密度被维持。在某些方法中，该方法维持了患者的突触小泡蛋白(synaptophysin)和/或MAP2。
本发明进一步提供了一种抑制患有路易体病或具有患路易体病的风险的患者中的突触核蛋白聚集或清除路易小体的方法，包括给患者施用有效剂量的上述任一种。在某些方法中，该疾病是帕金森氏病。在某些方法中，患者的认知功能的衰退被抑制。在某些方法中，神经炎和/或轴突α突触核蛋白的聚集被减弱。在某些方法中，患者的神经炎性营养不良(neuritic dystrophy)缓解。在某些方法中，突触和/或树突细胞密度被维持。在某些方法中，该方法维持了患者的突触小泡蛋白(synaptophysin)和/或MAP2。
本发明进一步提供了一种检测患有路易体病或具有患路易体病的风险的患者中的路易小体的方法，包括给患者施用有效剂量的上述任一种，其中所述抗体结合到路易小体上，结合后的抗体被检测。在某些方法中，该疾病是帕金森氏病。在某些方法中，所述抗体被标记。
本发明进一步提供了一种制备抗体的方法，包括培养转化了编码所述抗体的重链和轻链的核酸序列的细胞，从而使得所述细胞分泌所述抗体；从细胞培养基中纯化所述抗体；其中所述抗体是上述任一种。
本发明进一步提供了一种制备产生抗体的细胞系的方法，包括将编码抗体的重链和轻链以及选择标记的载体引入到细胞内；在一定条件下增殖所述细胞，选择所述载体复制数目增加的细胞；从所述选择的细胞中分离单细胞；存储基于抗体产量而选择的单细胞克隆的细胞；其中，所述抗体是上述任一种。某些这样的方法进一步包括在选择性条件下增殖所述细胞，筛选自然表达和分泌为至少100mg/L/106细胞/24h的细胞系。
附图说明
图1显示了m1H7与四个版本的人源化1H7重链成熟可变区的氨基酸序列的比对。BAC02037(SEQ ID NO：42)是人类受体的VH序列。根据Kabat定义的CDR区有下划线并为粗体。
图2显示了m1H7与四个版本的人源化1H7轻链成熟可变区的氨基酸序列的比对。AAY33358(SEQ ID NO：43)是人类受体的VL序列。根据Kabat定义的CDR区有下划线并为粗体。
图3A-C分别显示了鼠1H7(A)、嵌合1H7(B)和人源化1H7Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv3的共振结合动力学分析。
图4A-C显示了人源化1H7(Hu1H7VHv2-Hu1H7VLv4，Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv1，Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv2，Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv3，Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv4，Hu1H7VHv4-Hu1H7VLv1)和嵌合1H7的结合动力学参数(ForteBio)。
图5显示了在Morris水迷宫测试中，1H7对记忆功能的被动免疫治疗的结果。
图6显示了在圆光束测试(round beam test)中，1H7对速度和错误的被动免疫治疗的结果。
序列说明
SEQ ID NO：1是天然人类野生型α-突触核蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO：2是Jensen等人报道的α-突触核蛋白的非淀粉样成分(NAC)结构域。(参加Biochem.J.310(Pt 1):91-94,1995；GenBank登录号S56746)。
SEQ ID NO：3是Ueda等人报道的α-突触核蛋白的非淀粉样成分(NAC)结构域。(参见Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:11282-6,1993)。
SEQ ID NO：4是鼠1H7抗体(m1H7)重链可变核酸序列。
SEQ ID NO：5是m1H7重链可变氨基酸序列。
SEQ ID NO：6是m1H7轻链可变核酸序列。
SEQ ID NO：7是m1H7轻链可变氨基酸序列。
SEQ ID NO：8是成熟m1H7重链可变核酸序列。
SEQ ID NO：9是成熟m1H7重链可变氨基酸序列。
SEQ ID NO：10是成熟m1H7轻链可变核酸序列。
SEQ ID NO：11是成熟m1H7轻链可变氨基酸序列。
SEQ ID NO：12是m1H7重链CDR1(Kabat定义)。
SEQ ID NO：13是m1H7重链CDR2(Kabat定义)。
SEQ ID NO：14是m1H7重链CDR3(Kabat定义)。
SEQ ID NO：15是m1H7轻链CDR1(Kabat定义)。
SEQ ID NO：16是m1H7轻链CDR2(Kabat定义)。
SEQ ID NO：17是m1H7轻链CDR3(Kabat定义)。
SEQ ID NO：18是Hu1H7VHv1的核酸序列。
SEQ ID NO：19是Hu1H7VHv1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：20是Hu1H7VHv2的核酸序列。
SEQ ID NO：21是Hu1H7VHv2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：22是Hu1H7VHv3的核酸序列。
SEQ ID NO：23是Hu1H7VHv3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：24是Hu1H7VHv4的核酸序列。
SEQ ID NO：25是Hu1H7VHv4的氨基酸序列。
SEQ ID NO：26是Hu1H7VHv5的核酸序列。
SEQ ID NO：27是Hu1H7VHv5的氨基酸序列。
SEQ ID NO：28是Hu1H7VH信号肽的核酸序列。
SEQ ID NO：29是Hu1H7VH信号肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO：30是Hu1H7VH信号肽的核酸序列。
SEQ ID NO：31是Hu1H7VH信号肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO：32是Hu1H7VLv1的核酸序列。
SEQ ID NO：33是Hu1H7VLv1的氨基酸序列。
SEQ ID NO：34是Hu1H7VLv2的核酸序列。
SEQ ID NO：35是Hu1H7VLv2的氨基酸序列。
SEQ ID NO：36是Hu1H7VLv3的核酸序列。
SEQ ID NO：37是Hu1H7VLv3的氨基酸序列。
SEQ ID NO：39是Hu1H7VLv4的氨基酸序列。
SEQ ID NO：40是Hu1H7VL信号肽的核酸序列。
SEQ ID NO：41是Hu1H7VL信号肽的氨基酸序列。
SEQ ID NO：42是用于重链框架氨基酸序列的BAC02037(GI-21670055)人类受体。
SEQ ID NO：43是用于轻链构架氨基酸序列的AAY33358(GI-63102905)人受体。
SEQ ID NO：44是不具有回复突变或CDR突变的Hu1H7VH。
SEQ ID NO：45是不具有回复突变或CDR突变的Hu1H7VL。
SEQ ID NO：46是Hu1H7VH替代物的序列。
SEQ ID NO：47是Hu1H7VL替代物的序列。
SEQ ID NO：48是Hu1H7VH CDR3替代物的序列。
SEQ ID NO：49是(含有精氨酸的)Hu1H7轻链恒定区(是V1-V4共同的)。
SEQ ID NO：50是Hu1H7重链恒定区(IgG1；是V1-V5共同的)。
SEQ ID NO：51是(不含精氨酸的)Hu1H7轻链恒定区(是V1-V4共同的)。
SEQ ID NO：52是Hu1H7重链恒定区(G1m3同种异型)。
SEQ ID NO：53是Hu1H7轻链第3版(可变区+含精氨酸的恒定区)。
SEQ ID NO：54是Hu1H7轻链第3版(可变区+不含精氨酸的恒定区)。
SEQ ID NO：54是Hu1H7重链第3版(可变区+恒定区)。
SEQ ID NO：56是Hu1H7重链第3版(可变区+恒定区；G1m3同种异型)。
SEQ ID NO：57是Hu1H7重链恒定区(IgG2)。
SEQ ID NO：58是Hu1H7重链恒定区(G1m1同种异型)。
定义
单克隆抗体通常以分离的形式提供。这意味着抗体通常是重量百分数至少为50％的纯蛋白质以及在其生产或纯化过程中产生的其他大分子，但并不排除该单克隆抗体与过量的药物上可接受的载体(S)或其他的媒介物结合以便于其使用的可能性。有时单克隆抗体是重量百分数至少为60％，70％，80％，90％，95％或99％的纯蛋白质以及在其生产或纯化过程中产生的其他大分子。
单克隆抗体与其靶抗原的特异性结合是指至少106，107，108，109，或1010M-1的亲和力。特异性结合在可检测的量级上是较高的，区别于与至少一个不相关的目标发生的非特异性结合。特异性结合可以是特定的官能团或特定空间拟合之间键形成的结果(例如，锁和钥匙的类型)，然而非特异性结合通常是范德华力的结果。但是特异性结合不一定意味着单克隆抗体结合一个靶标且只结合一个靶标。
基本抗体结构单元是亚基的四聚体。每个四聚体包括两对相同的多肽链，每一对具有一条“轻”链(约25kDa)和一条“重”链(约50-70kDa)。每条链的氨基末端部分包括大约100至110或更多个氨基酸的可变区，主要负责抗原识别。该可变区最初表达时，连接到可切割的信号肽。不含信号肽的可变区有时称作成熟可变区。因此，例如，轻链成熟可变区是指不含轻链信号肽的轻链可变区。每条链的羧基末端部分定义为恒定区，主要负责效应功能。
轻链分为κ或λ。重链分为γ，μ，α，δ或ε，并将抗体的亚型分别定义为IgG，IgM，IgA，IgD和IgE。在轻链和重链内部，可变区和恒定区通过大约12或更多个氨基酸的“J”区连接在一起，重链还包括大约10个或更多氨基酸的“D”区。(通常参见，Fundamental Immunology(Paul,W.,ed.,2nd ed.Raven Press,N.Y.,1989,Ch.7)，出于所有目的，其全文通过引用的方式并入本文中)。
每个轻/重链对的成熟可变区形成抗体结合位点。因此，完整的抗体有两个结合位点。除了在双功能抗体或双特异性抗体中外，这两个结合位点是相同的。这些链都表现出相同的一般结构，即被三个高变区连接的相对保守的框架区(FR)，高变区也称为互补决定区或CDR。每一对的两条链的CDR通过框架区匹配，使其能够结合到特定表位。从N末端到C末端，轻链和重链都包含FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3和FR4结构域。每个结构域中氨基酸的分配是按照Kabat(免疫学目标蛋白序列，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest(参考National Institutes of Health,Bethesda,MD,1987and 1991)，或Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987)；Chothia等,Nature 342:878-883(1989))定义的。Kabat还提供了一种广泛使用的编号规则(Kabat编号)，其中不同的重链之间或不同的轻链之间的对应残基被赋予相同的号码(例如，H83表示成熟重链可变区中由Kabat编号的第83号位置；同样L36位置表示成熟轻链可变区中由Kabat编号的第36号位置)。除非另有明确说明，在涉及抗体可变区的位置中全部使用Kabat编号。
术语“抗体”包括完整抗体和它们的结合片段。通常，片段与完整抗体竞争，片段从完整抗体衍生而来，特异性结合到靶标，它们包括单独的重链、轻链Fab、Fab'，F(ab')2、F(ab)C、双抗体(diabodies)、Dabs、纳米抗体(nanobodies)和Fv。片段可以通过DNA重组技术，或通过完整免疫球蛋白的酶或化学分解产生。术语“抗体”还包括双特异性抗体和/或人源化抗体。双特异性或双功能抗体是具有两个不同的重/轻链对和两个不同的结合位点的人工杂交抗体(参见，例如，Songsivilai and Lachmann,Clin.Exp.Immunol.,79:315-321(1990)；Kostelny et al.,J.Immunol.148:1547-53(1992))。在一些双特异性抗体中，这两个不同重/轻链对包括人源化的1H7重链/轻链对以及与被1H7结合的α-突触核蛋白具有不同特异表位的重链/轻链对。
在一些双特异性抗体中，一个重链轻链对是如下面进一步公开的人源化1H7抗体，并且所述重轻链对是来自于与表达在血脑屏障上的受体相结合的抗体，如胰岛素受体，胰岛素样生长因子(IGF)受体，瘦素受体，或脂蛋白受体，或转铁蛋白受体(Friden等，PNAS88:4771-4775，1991；Friden等，Science 259:373-377，1993)。可以通过由受体介导的胞转使这样的双特异性抗体转移越过血脑屏障。可以通过设计双特异性抗体进一步提高双特异性抗体的脑摄取，以降低其对血脑屏障受体的亲和力。降低对受体的亲和力导致了它在大脑中更广泛的分布(参见，例如，Atwal等.Sci.Trans.Med.3,84ra43,2011；Yu等.Sci.Trans.Med.3,84ra44,2011)。
示例性的双特异性抗体也可以是(1)双可变结构域抗体(DVD-Ig)，其中每个轻链和重链都含有两个通过短肽键串联的可变结构域(Wu等,Generation andCharacterization of a Dual Variable Domain Immunoglobulin(DVD-IgTM)Molecule,In:Antibody Engineering,Springer Berlin Heidelberg (2010))；(2)Tandab，它是两个单链双抗体融合产生的四价双特异性抗体，它对每个靶抗原都有两个结合位点；(3)flexibody，它是scFvs与双抗体结合产生的多价分子；(4)所谓的“对接和锁定”分子，它基于蛋白激酶A中的“二聚化和对接结构域”，其中，当它应用到Fabs时，可以产生由连接到不同Fab片段的两个相同Fab片段组成的三价双特异性结合蛋白；(5)所谓的蝎子分子(Scorpion molecule)，包括，例如，两个融合到人Fc区的两个末端的scFv。用于制备双特异性抗体的平台的例子包括但不限BiTE(MICROMET)，DART(MacroGenics)，Fcab和Mab2(F-star)，Fc-engineered IgGl(Xencor)或DuoBody(基于Fab臂交换，Genmab)。
术语“表位”指的是抗原上与抗体结合的位点。表位可由连续的氨基酸形成，或由一种或多种蛋白质三级折叠并列的非连续氨基酸形成。由连续氨基酸形成的表位暴露在变性溶剂中时，通常被保留，而由三级折叠形成的表位用变性溶剂处理时，通常会丢失。表位通常包括至少3个，更常见至少5或8-10个具有独特空间构象的氨基酸。确定表位的空间构象的方法包括，例如x-射线晶体学和2维核磁共振。参见，例如，Epitope MappingProtocols,in Methods in Molecular Biology,Vol.66,Glenn E.Morris,Ed.(1996)。
识别相同或重叠表位的抗体可以在简单免疫测定中鉴定，其显示一种抗体与另一种抗体竞争结合靶抗原的能力。也可以通过结合其抗原的抗体的X射线晶体结构来识别接触残基，确定抗体的表位。可选地，如果在抗原上所有减少或消除与一种抗体结合的氨基酸突变减少或消除与另一种抗体的结合，那么这两种抗体具有相同的抗原决定簇。如果某些减少或消除与一种抗体结合的氨基酸突变减少或消除与另一种抗体的结合，那么这两种抗体具有重叠的表位。
抗体间的竞争是通过分析来确定的，在该分析中，受测试的抗体抑制参考抗体与共同抗原的特异性结合(参见，例如，Junghans等,Cancer Res.50:1495,1990)。如果过量的测试抗体(例如，至少2倍，5倍，10倍，20倍或100倍)抑制参考抗体至少50％的结合，例如，如同在一个竞争性结合试验中所测量的75％，90％或99％，那么这种测试抗体与参考抗体竞争。由竞争试验确定的抗体(竞争性抗体)包括结合到与参考抗体相同的表位的抗体，以及由于空间位阻发生，结合到足够接近参考抗体的表位的相邻表位的抗体。
“患者”包括接受预防性或治疗性治疗的人或其他哺乳动物受试者。
为了将氨基酸替换归类为保守或非保守，氨基酸分组如下：第I组(疏水性侧链)：甲硫氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸；第II组(中性亲水侧链)：半胱氨酸，丝氨酸，苏氨酸；第III组(酸性侧链)：天冬氨酸，谷氨酸；第Ⅳ组(碱性侧链)：冬酰胺，谷氨酰胺，组氨酸，赖氨酸，精氨酸；第V组(影响链取向的残基)：甘氨酸，脯氨酸；和第VI组(芳香族侧链)：色氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸。保守替换包括同一类氨基酸之间的替换。非保守替换是把这些类中一个类的成员换成这些类中另一个类的成员。
序列同一性百分比是通过Kabat编号惯例最大限度匹配的抗体序列来确定的。比对后，如果受试抗体区(例如，重链或轻链的整个成熟可变区)与参考抗体的相同区域相比较，那么受试抗体和参考抗体区域之间的序列同一性百分比是受试抗体和参照抗体区域中相同氨基酸所占位置的数量除以这两个区域进行比对的位置的总数量，不计间隙，再乘以100来转换为百分比的。
“包括”一个或多个列举的元素的组合物或方法可能包括未具体列举的其他元素。例如，一种包含抗体的组合物，可以包含单独的抗体或抗体与其他成分的组合。
值的范围的指定包括在所述范围内或界定所述范围的所有整数，以及由范围内的整数界定的所有子范围。
除非上下文中另有说明，术语“约”包括在规定值的测量标准误差(SEM)内的值。
如果受试者有至少一种已知的风险因素(例如，遗传、生化、家族史、环境暴露)，这种风险因素使具有这种风险因素的个人比不具有这种风险因素的个体有统计学显著的更大的风险发展这种疾病，那么该个体患疾病的风险增加。
术语“症状(symptom)”指的是疾病的主观证据，如病人感知的步态改变。“信号象(sign)”是指由医生观察到疾病的客观证据。
统计学意义指P≤0.05。
“认知功能”是指心理过程，如注意力，记忆力，产生和理解语言，解决问题，对周围环境感兴趣和自我护理中的任一种或所有。
“增强的认知功能”或“改善的认知功能”指的是相对于基准线(例如，诊断或治疗开始)的改善。“认知功能下降”是指相对于这样的基准线，功能上的降低。
在动物模型系统(如大鼠或小鼠)中，认知功能可能通过方法测量，方法包括使用迷宫((例如，Morris水迷宫(Morris water maze)，巴恩斯(Barnes)圆形迷宫(circularmaze)，高架旋臂迷宫(elevated radial arm maze)，T迷宫或其他)，在这个迷宫中，受试者使用空间信息)，恐惧条件，主动回避，被照明的开放地，暗活度仪dark activity meter，高架十字迷宫，二室探索性测试或强迫的游泳实验。
人类的认知功能可以通过几个标准化的试验中的一个或多个测量。认知功能测试或分析的例子已被描述(参考Ruoppila,l.and Suutama,T.Scand.J.Soc.Med.Suppl.53,44-65,1997)，其中包括标准化的心理测验(参见Ruoppila,l.and Suutama,T.Scand.J.Soc.Med.Suppl.53,44-65,1997)，神经心理测验(如Luria-Nebraska)，元认知的自我评估(如元记忆问卷)，视觉空间筛查试验(如Poppelreuter图像,表盘认知,Honeycomb画图和划销)，认知筛查试验(如Folstein的简易精神状态测试)和反应时间的测试。认知能力的其他标准测试包括阿尔茨海默病评估量表认知分量表(ADAS-cog)；临床总体印象变化量表(CIBIC-plus scale)；阿尔茨海默氏病合作研究活动的日常生活能力量表(ADCS-ADL)；简易精神状态检查(MMSE)；神经精神量表(NPI)；临床痴呆评定量表(CDR)；剑桥神经心理测试自动平台(CANTAB)或山德士临床评估-老年病人(SCAG)，Stroop测验，注意测验(Trail Making)，韦氏数字广度，以及CogState计算机化的认知测试。此外，认知功能可使用成像技术来测量，例如正电子发射断层扫描(PET)，功能磁共振成像(fMRI)，单光子发射计算机体层摄影术(SPECT)或任何其他测量脑功能的成像技术。
具体实施方式
Ⅰ.概要
本发明提供了人源化1H7抗体(Hu 1H7抗体)。所述抗体有助于路易体病的治疗和诊断。
II.目标分子
天然人类野生型α-突触核蛋白是一种含有140个氨基酸的多肽，其氨基酸序列如下：MDVFMKGLSK AKEGVVAAAE KTKQGVAEAA GKTKE GVLYV GSKTKEGVVH GVATVAEKTKEQVTNVGGAV VTGVTAVAQK TVEGAGSIAA ATGFVKKDQL GKNEEGAPQE GILEDMPVDP DNEAYE MPSEEGYQDYEPEA(SEQ ID NO：1)(参考Uéda等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:11282-6,1993；GenBank登录号：P37840)。所述蛋白质具有三个识别域，覆盖氨基酸1-61的KTKE重复结构域，从约第60个氨基酸至第95个氨基酸的NAC(非淀粉样成分)域，和从约第98个氨基酸到第140个氨基酸的C-末端酸性结构域。Jensen等已经报道NAC具有以下氨基酸序列：EQVTNVGGAVVTGVTAVAQKTVEGAGSIAAATGFV(SEQ ID NO：2)(参见Jensen等，Biochem.J.310(Pt 1):91-94,1995；GenBank登录号S56746)。Uéda等已经报道NAC具有以下氨基酸序列：KEQVTNV GGAVVTGVTAVAQKTVEGAGS(SEQ ID NO：3)(Uéda等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:11282-6,1993)。
除非上下文另有说明，提到的α-突触核蛋白或其片段包括上文所述的天然人类野生型氨基酸序列和它的人类等位基因变体，特别是与路易体病相关的那些序列(例如，E46K、A30P和A53T，第一个字母表示SEQ ID NO：1中的氨基酸，数字表示在SEQ ID NO NO：1中的编码位置；而第二个字母表示等位变体中的氨基酸)。此类变体可选择性地单独存在或以任何组合形式存在。增加α突触核蛋白聚集的诱发突变E83Q、A90V和A76T也可以单独存在或与彼此和/或人类等位变体E46K，A30P和A53T组合存在。III.路易体病
路易体病(LBD)的特征在于多巴胺能系统退化，运动改变，认知障碍，路易体(LBs)形成(参考McKeith等，Neurology(1996)47:1113-24)。路易体是神经细胞中发现的球状蛋白质沉淀。其在大脑中的存在会扰乱大脑的正常功能，妨碍包括乙酰胆碱和多巴胺在内的化学信使的活动。路易体病包括帕金森氏病(包括特发性帕金森氏病)，弥漫性路易体病(DLBD)，也被称为路易体痴呆(DLB)，阿尔茨海默病的路易体变体(LBV)，结合的阿尔茨海默病和帕金森病以及多系统萎缩(MSA；例如，橄榄体脑桥小脑萎缩，纹状体黑质变性和Shy-Drager综合征)。DLBD具有阿尔茨海默氏症和帕金森氏病的症状。DLBD不同于帕金森氏症，主要表现在路易小体的位置。在DLBD中，路易小体主要在皮层中形成。在帕金森氏病中，路易小体主要在黑质中形成。其他路易体疾病包括纯自主神经衰竭，路易体吞咽困难，偶发性LBD，遗传性LBD(例如，α-突触核蛋白、PARK3和PARK4突变)。
IV.本发明抗体
A.结合特异性和功能性质
本发明的人源化抗体特异性结合人类α-突触核蛋白。某些人源化抗体的亲和力(即，Ka)可以是，例如，小鼠抗体(m1H7)的亲和力的5倍或2倍。在扫描电镜中，某些人源化抗体的亲和力与m1H7相同。有些人源化抗体的亲和力大于鼠1H7的亲和力。优选的人源化抗体结合到和/或竞争结合到人类α-突触核蛋白结合m1H7的相同表位。
B.人源化抗体
人源化抗体是一种遗传工程化抗体，其中来自非人类“供体(donor)”抗体的CDR被嫁接到人类“受体(acceptor)”抗体的序列上(参见，例如，Queen等，US 5,530,101和5,585,089；Winter等，US 5,225,539；Carter，US 6,407,213；Adair,US 5,859,205和6,881,557；以及Foote,US 6,881,557)。受体抗体的序列可以是，例如，成熟人类抗体的可变区序列，该序列的组合物，人类抗体可变区序列的共有序列(例如，参考light and heavy chainvariable region consensus sequences of Kabat，1991，supra)，或种系可变区序列。
重链受体序列的一个例子是NCBI登录号为BAC02037(GI：21670055)的人类成熟重链可变区。该受体序列包括2个CDR，其具有与小鼠1H7重链相同的标准形式，并且在重链可变区框架中具有65.8％的序列同一性。如果使用不同的受体序列，这样的受体可以是，例如，从VH1-18种系衍生的另一种成熟重链可变区序列，或结合了这些种系序列中的一个的成熟重链可变区。
轻链受体序列的一个例子是NCBI登录号为AAY33358(GI：63102905)的轻链成熟可变区。该受体序列包括2个CDR，其具有与小鼠1H7轻链相同的标准形式，并且在轻链可变区框架中具有65.4％的序列同一性。如果使用不同的受体，这种受体优选是从A30种系派生的另一种成熟轻链序列或结合了这些种系序列中的一个的轻链成熟可变区序列。
本发明的人源化抗体是一种具有三条如Kabat定义的轻链CDR和三条如Kabat定义的重链CDR的抗体，完全或基本上来自供体鼠1H7抗体，以及如果成熟的可变区框序列和恒定区存在，其完全或基本上来自人类抗体序列。类似地，人源化重链是一种具有由Kabat定义的三个重链CDR的重链，完全或基本上来自小鼠1H7抗体的重链，如果成熟可变区框序列和重链恒定区序列存在，其完全或基本上来自人类抗体的重链序列。同样地，人源化轻链是一种具有如Kabat定义的三个轻链CDR的轻链，完全或基本上来自m1H7抗体的轻链，如果成熟的轻链可变序列和轻链恒定区序列存在，其完全或基本上来自人类抗体的轻链序列。如果有至少60％，70％，80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％，99％或100％的残基与m1H7相应CDR中的对应残基相同，那么该CDR基本上来自m1H7。当至少有85％，90％，95％，96％，97％，98％，99％或100％由Kabat定义的相应残基相同，那么抗体链的成熟可变区框序列或抗体链的恒定区序列分别是基本上来自人类成熟可变区框序列或人类恒定区序列。
基于它们对CDR构象和/或与抗原的结合的影响；介导重链和轻链之间相互作用；与恒定区相互作用；作为期望的或不期望的翻译后修饰的位点；在人类可变区域位点作为不寻常的残基，因此具有潜在的免疫原性；以及其他原因，人类成熟可变区框残基中的某些氨基酸可以被选择替换。基于实施例中进一步说明的这些原因中的一个或更多，以下11个可变区框架的位置被作为替换的候选(L46F，Y49C，F83A，V11L，T28S，R38K，M48I，V67A，M69L，T71A，Y91F)。
在这里与其它地方一样，第一个提及的残基是将Kabat CDR接枝(grafting)到人类受体框中而形成的人源化抗体的残基，第二个提及的残基被认为是取代这些残基的残基。因此，在可变区框内，第一个提到的残基是人类的，在CDR内，第一个提到的残基是老鼠的(例如，C97S)。
可以在CDR中进行氨基酸取代。一种可能的变异是使用来自人类CDR序列的相对应残基替代鼠1H7抗体CDR中某些残基，通常是来自在设计例举的人源化抗体中使用的人类受体序列CDR。在一些抗体中，仅部分CDR，称为结合所需的CDR残基的子集，定义为SDR，是必需的，以在人源化抗体中保留结合力。基于先前的研究，通过分子建模和/或根据经验，或如在Gonzales等,Mol.Immunol.41:863(2004)中描述的，没有接触抗原并且不在SDR中的CDR残基(例如在CDR H2中H60-H65残基通常不是必需的)能够被识别，来自位于Chothia高变环之外的Kabat CDR(Chothia,J.Mol.Biol.196:901,1987)。在这种人源化抗体中的缺少一个或多个供体CDR残基或删除整个供体CDR的位置处，占据该位置的氨基酸可以是占据受体抗体序列中相应位置(通过Kabat编号)的氨基酸。含有的用于CDR中供体氨基酸的受体的这样的取代的数目反映了竞争因素的平衡。这样的取代是潜在有利的，可以减少人源化抗体中鼠氨基酸的数目，从而减少潜在的免疫原性。然而，替换也可能导致亲和力的变化，最好避免显著地降低亲和力。也可根据经验选择CDR内替代的位点的和替代的氨基酸。
在CDR内进行替换的一个原因是鼠残基是翻译后修饰的位点，这种可能干扰抗体的表达或组装。在这里，在CDRH3内被鼠1H7的C占据的H97位置被鉴定为一个替换位点。
在许多置换中，可以将上面提到的11个可变区框回复突变和1个CDR替代引入到人源化1H7抗体中。这样的抗体的重链可变区可以由一个序列表示，该序列包含QVQLVQSGAE-X1-KKPGASVKVSCKASGY-X2-FTSY YIHWV-X3-QAPGQGLEW-X4-GWIYPGSGNTKYSEKFKGR-X5-T-X6-T-X7-DTSTSTAYMELRSLRSDDTAVY-X8-CARDG-X9-YGFAYWGQGTLVTVSS,其中，-X1-为V或L；-X2-是S或T；-X3-是R或K；-X4-是M或I；-X5-为V或A；-X6-是M或L；-X7-是T或A；-X8-是Y或F；-X9-为C，M，S或T(SEQ ID NO：46)。在一些重链可变区中，-X9-是C。一些轻链可变区可以由一个序列表示，该序列包含DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYDG DSYMNWYQQKPGKAPK-Z1-LI-Z2-AASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS SLQPED-Z3-ATYYCQQSNEDPFTFGQGTKLEIK，其中-Z1-是L或F；-Z2-为Y或C；-Z3-是F或A(SEQ ID NO：47)。在一些抗体中，重链可变区包含SEQ ID NO：46，轻链可变区包含SEQ ID NO：47。例如，SEQ ID NO：48中的X 1和X3残基分别为V和R。例如，SEQID NO：46中的X 5 -和X7残基都为A，SEQ ID NO：47中的Z1残基为F。例如，SEQ ID NO：46中的-X 4，X 6和X8残基分别为M，M和Y，SEQ ID NO：47中的Z2和Z3残基分别为C和F。例如，SEQ IDNO：48中的X 2和X9残基分别为T和C。
一些抗体包含两个重链替换和两个轻链替换。例如，第H67位由A占据，第H71由A占据，第L46位由F占据，和L49位置由C占用。在一些抗体中，重链成熟可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：23所示。在一些抗体中，轻链成熟可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：37所示。例如，在H3L3(Hu1H7VHv3(SEQ ID NO:23-Hu1H7VLv3(SEQ ID NO：37)))中，重链成熟可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：23所示，以及轻链成熟可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：37所示。
本发明提供了H3L3人源化抗体变体，其中人源化重链成熟可变区显示与SEQ IDNO：23至少90％，95％，96％，97％，98％或99％的同一性，人源化轻链成熟可变区显示与SEQID NO：37至少90％，95％，96％，97％，98％或99％的序列同一性。一些这样的人源化抗体包括与H3L3的CDR区完全或基本相同的三个重链CDR和三个轻链CDR，它们与鼠供体抗体的CDR是相同的。CDR区可以由任何常规定义(例如，Chothia)来定义，但优选由Kabat定义。
一些H3L3人源化抗体变体保留了H3L3中的回复突变的部分或全部。换言之，以下突变中的至少1种，2种，3种或优选地所有4种都存在：H67由A占据，H71由A占据，L46由F占据，和L49位置由C占据。
除了保留H3L3中的回复突变中的至少1种，2种，3种或优选地所有4种外，人源化1H7抗体还可包含可变区框的其他回复突变。这样的回复突变的例子包括被L占据的H11，被S占据的H28，被K占据的H38，被I占据的H48，被L占据的H69，被F占据的H91，和/或被A占据的L83。对于用于治疗或诊断产品的回复突变的选择，应该考虑它们一般不提高亲和力的程度，和引入更多的鼠残基可能导致免疫原性风险增加的程度。例如，H3L1包含SEQ ID NO：23的重链成熟可变区，和SEQ ID NO：33的轻链。例如，H4L1包含SEQ ID NO：25的重链成熟可变区，和SEQ ID NO：33的轻链。
另一种可能的变异是使用以上讨论的不同的人类受体序列。如上所述在CDR区中的替换是可能的，例如，在第H97位，但选择这类取代用于治疗或诊断产品之前，应考虑对亲和力和抗体表达的潜在影响。
如果在鼠CDRH3中第H97位不是半胱氨酸，它最好是由M，S或T占据。某些抗体包含含有SEQ ID NO：12中的Kabat CDR1：SYYIH；SEQ ID NO：13中的Kabat CDR2：WIYPGSGNTKYSEKFKG；SEQ ID NO：48中的Kabat CDR3：DG-X9-YGFAY的人源化重链，其中-X9-是C，M，S或T，更优选为C。某些抗体包含含有SEQ ID NO：15中的Kabat CDR1：KASQSVDYDGDSYMN；SEQ ID NO：16中的Kabat CDR2：AASNLES；SEQ ID NO：17中的KabatCDR3：QQSNEDPFT的人源化轻链。某些抗体包含含有SEQ ID NO：12，13，和48中的3个CDRKabat的人源化重链，和含有SEQ ID NO:15-17中的3个Kabat CDR的人源化轻链。在一些此类抗体中，人源化重链包含SEQ ID NO:12-14中的3个Kabat CDR，人源化轻链包含SEQ IDNO:15-17中的3个Kabat CDR。
本发明进一步提供人源化1H7抗体，其中人源化重链成熟可变区显示与SEQ IDNO：19，21，23，25和27至少90％，95％，96％，97％，98％或99％的同一性，或100％的同一性，以及人源化轻链成熟可变区显示与SEQ ID NO:33,35,37,和39的序列至少90％，95％，96％，97％，98％或99％的同一性，或100％同一性。
以上所述的11种可变区框回复突变和1种CDR突变的各种组合可并入人源化1H7抗体。在某些这样的抗体中，L46位置由L或F(优选F)占据和/或L49位置由Y或C(优选C)占据和/或L83位置由F或A占据，和/或H11位置由V或L占据，和/或H28位置由T或S占据，和/或H38位置由R或K占据，和/或H48位置由M或I占据，和/或H67位置由V或A(最好A)占据，和/或H69位置由M或L占据，和/或H71位置由T或A(最好是A)占据，和/或H91位置由Y或F占据，和/或H28位置由S或T占据，和/或H97位置由C或M或S或T(优选C)占据。
在某些这样的抗体中，Hu1H7VLv1-v4和Hu1H7VHv1-V5中的一些或全部回复突变被保留。优选地，第L46，H67和H71位的回复突变被保留。换句话说，L46位置由F占据，H67位置由A占据，H71位置由A占据。更优选地，保留在L46，L49，H67，和H71位置的回复突变。换句话说，L46位置由F占据，L49位置由C占据，H67位置由A占据，H71位置由A占据。在一些抗体中，重链H11，H28，H38，H48，H67，H69，H71和/或H91位置中的一些或全部分别由L，S，K，I，A，L，A和F占据。同样，在一些抗体中，轻链L46，L49和/或L83位置中的一些或全部分别由F，C和A占据。在一些抗体中，H11，H28，H38，H48，H67，H69，H71，H91，L46，L49和L83位置中的1，2，3，4，5，6，7，8，9或全部十个位置分别是由L，S，K，I，A，L，A，F，F，C和A占据。在一些抗体中，重链成熟可变区框中有0，1，2，3，4，5，6或7个位置相对于SEQ ID NO：44是改变的，轻链成熟可变区框中有0，1，2，或3个位置相对于SEQ ID NO：45是改变的。在某些这样的抗体中，H97位置由C占据。优选地，人源化抗体对α-突触核蛋白的K D值为鼠或嵌合1H7抗体对α-突触核蛋白的KD值的约0.5至2倍。
在一些抗体中，位置L46由F占据，位置H67由A占据，位置H71由A占用，位置H11由V占据，位置H38由R占据。在一些这样的抗体中，位置L49由Y占据。更优选地，在一些这样的抗体中，位置L49由C占据。在一些这样的抗体中，位置L83由F占据。在一些这样的抗体中，位置L83由A占据。在一些这样的抗体中，位置H97由C占据。在一些这样的抗体中，位置H28由T或S占据，位置H48由M占据，位置H69由M占据，以及位置H91由Y占据。在一些这样的抗体中，位置H28由T或S占据，位置H48由M占据，位置H69由M占据，以及位置H91由F占据。在一些这样的抗体中，位置H28由T或S占据，位置H48由M占据，位置H69由L占据以及位置H91由Y占据。在一些这样的抗体中，位置H28由T或S占据，位置H48由M占据，位置H69由L占据以及位置H91由F占据。在一些这样的抗体中，位置H28由T或S占据，位置H48由I占据，位置H69由M占据以及位置H91由Y占据。在一些这样的抗体中，位置H28由T或S占据，位置H48由I占据，位置H69由M占据以及位置H91由F占据。在一些这样的抗体中，位置H28由T或S占据，位置H48是由I占据，位置H69由L占据以及位置H91由Y占据。在一些这样的抗体中，位置H28由T或S占据，位置H48由I占据，位置H69由L占据以及位置H91由F占据。在一些这样的抗体中，位置H11由L占据，和/或位置H38由K占据，和/或位置H97由S占据。
在上述任何抗体中，其他的氨基酸取代可以在成熟可变区框架中进行，例如，在不与CDR接触的残基中。常常在变体人源化序列中所作的替换相对于替换的氨基酸是保守的。在一些抗体中，相对于Hu1H7VLv1-v4和Hu1H7VHv1-V5，涉Hu1H7VLv1-v4和Hu1H7VHv1-V5的替代(不论是否保守)对合成抗体的结合亲和力或效力(即，结合人类α突触核蛋白的能力)没有实质的影响。
变异体通常通过少数(例如，典型地，无论是在轻链或重链成熟可变区框中，还是在两者中，不超过1个、2个、3个、5个或10个)替换、缺失或插入区别于Hu1H7VLv1-v4和Hu1H7VHv1-V5的重链成熟可变区序列和轻链成熟可变区序列。
C.恒定区的选择
可以将人类恒定区的至少一部分连接到人源化抗体的重链可变区和轻链可变区。恒定区的选择部分取决于是否期望抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用、抗体依赖的细胞吞噬作用和/或补体依赖的细胞毒作用。例如，人类同种型IgG1和IgG3有补体依赖的细胞毒作用，而人类同种型IgG2和IgG4没有。人类IgG1和IgG3也比人类IgG2和IgG4诱导更强的细胞介导的效应功能。轻链恒定区可以是λ或κ。示例性的人类轻链κ恒定区的氨基酸序列如SEQID NO：49所示。SEQ ID NO：49的N-末端的精氨酸可以被删除，在这种情况下，轻链κ恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO：51所示。示例性的人类IgG1重链恒定区的氨基酸序列如SEQ IDNO：50所示。示例性的人类IgG2重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO：57所示。抗体可以表达为含有两条轻链和两条重链的四聚体，单独的重链，单独的轻链，Fab，Fab'，F(ab')2和Fv，或单链抗体，其中重链的成熟可变结构域和轻链的成熟可变结构域通过间隔区连接。
人类恒定区显示不同个体之间的同种异型变异和同族同种异型(isoallotypic)变异，即，在不同个体的恒定区中一个或多个多态性位点可以不同。同族同种异型不同于同种异型，在血清识别中，同族同种异型结合到一个或多个其它同型的非多态性区域。因此，例如，重链恒定区可以是IgG1G1m1或IgG1G1m3的同种异型，其氨基酸序列如SEQ ID NO：52或SEQ ID NO：5所示5。另一个重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO：52或SEQ ID NO：55所示，除了缺少C-末端赖氨酸。
轻链和/或重链的氨基或羧基末端的一个或几个氨基酸，如重链的C-末端赖氨酸，可能会丢失或在部分分子或全部分子中衍生化。替换可以在恒定区进行，以减少或增加效应子的功能，例如补体介导的细胞毒作用或ADCC(参见，例如，Winter等，US Patent No.5,624,821；Tso等，US Patent No.5834597；和Lazar等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 103:4005,2006)，或以延长在人体中的半衰期(见，例如，Hinton等,J.Biol.Chem.279:6213,2004)。示例性的替换包括第250位的Gln和/或第428位的Leu(在本段中的恒定区使用EU编号)，以增加抗体的半衰期。第234，235，236和/或237位中的任一或全部取代减少对Fcγ受体(尤其是FcγRI受体)的亲和力(参见，例如，US 6,624,821)。为了降低效应子的功能，某些抗体在人类IgG1中第234，235和237位进行丙氨酸替换。任选地，人类IgG2中第234，236和/或237位被置换为丙氨酸和第235位被置换为谷氨酰胺(参见，例如，US 5,624,821)。
在某些抗体中，轻链恒定区氨基酸序列如SEQ ID NO：49所示。在一些抗体中，重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID NO：52所示。示例性的Hu1H7轻链为SEQ ID NO：53或SEQ IDNO：54。示例性的Hu1H7重链的氨基酸序列为SEQ ID NO：55或SEQ ID NO：56。在一些抗体中，轻链为SEQ ID NO：53。在一些抗体中，重链为SEQ ID NO：56。
D.重组抗体的表达
抗体可通过重组表达来制备。编码抗体的核苷酸可进行密码子优化，以在所期望的细胞类型(如CHO或Sp2/0)中表达。重组核酸构建体通常包括表达调控序列，该表达调控序列可操作地连接在抗体链的编码序列上，包括天然相关的区域或异源启动子区域。表达调控序列可以是能够转化或转染真核宿主细胞的载体中的真核启动子系统。一旦载体整合到适当的宿主中后，宿主将被保持在适合核苷酸高水平表达和适合收集纯化交叉反应抗体的条件下。编码抗体链的载体还可以包含选择基因，如二氢叶酸还原酶基因，以允许编码抗体链的核酸的拷贝数扩增。
大肠杆菌是一种原核宿主，它在抗体、尤其是抗体片段的表达中极其有用。微生物，如酵母，对于表达也很重要。酵母属的酵母菌是酵母菌宿主的一个例子，它含有具有表达调控序列的合适载体、复制起点、终止序列等所需的物质。典型的启动子包括3-磷酸甘油酸激酶启动子和其他糖酵解酶启动子，诱导型酵母启动子包括但不限于醇脱氢酶启动子，异细胞色素C启动子和酵解麦芽糖和半乳糖的酶启动子。
哺乳动物的细胞可用于表达编码免疫球蛋白或其片段的核苷酸区段(可参考：Winnacker,From Genes to Clones,VCH Publishers,NY,1987)。许多能够分泌完整异源蛋白质的合适的宿主细胞系已被开发，包括CHO细胞系、各种COS细胞系、HeLa细胞、HEK293细胞、L细胞和不产生抗体的骨髓瘤细胞，骨髓瘤细胞，包括Sp2/0和NS0。使用非人类细胞是非常有利的。这些细胞的表达载体可以包括表达调控序列，如复制起点，启动子，增强子(可参见：Queen et al.,Immunol.Rev.89:49(1986))和必要的信息加工位点，如核糖体结合位点、RNA剪接位点、聚腺苷酸化位点和转录终止子序列。合适的表达调控序列是来自内源基因、巨细胞病毒、SV40、腺病毒、牛乳头瘤病毒等的启动子(可参见：Co et al.,J.Immunol.148:1149(1992))。
将编码抗体重链和轻链的载体导入细胞培养，在无血清培养基筛选细胞库，以保证生长率和产品质量。最佳产量的细胞库随后进行基于FACS(荧光激活细胞分离法)的单细胞克隆以产生单克隆系。每个细胞每天的具体产量在50pg或100pg以上是有优势的，对应大于7.5g/L培养物的产物滴度。单细胞克隆产生的抗体也可以进行浊度、过滤性质、PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)、IEF(等电聚焦)、UV扫描、HP-SEC(高效尺寸筛析色谱)、碳水化合物-寡糖映射、质谱和结合试验(如ELISA(酶联免疫吸附测定)或共振)等测试。选定的克隆体可随后存储在多个小瓶中，冷冻保存，以备后用。
一旦被表达，抗体能够根据本领域标准步骤进行纯化，包括蛋白A捕获、柱色谱法(如疏水作用或离子交换)、低PH值下进行病毒灭活等(通常可参见：Scopes,ProteinPurification(Springer-Verlag,NY,1982))。
抗体商业生产的方法包括密码子优化，启动子、转录元件和终止子的选择，无血清单细胞克隆，细胞库的建立，拷贝数扩增的选择性标记、CHO终止子、无血清单细胞克隆的使用，蛋白滴度改进(可参见：US 5,786,464,US 5,888,809,US 6,063,598,US 6,114,148,US7,569,339,WO2004/050884,WO2005/019442,WO2008/012142,WO2008/012142,WO2008/107388和WO2009/027471)。
E.核酸
本发明进一步提供了编码所述任意一种重链和轻链的核酸。通常，核酸也编码融合到成熟的重链或轻链中的信号肽(如，氨基酸序列为SEQ ID NOs:29,31和41的信号肽，其编码核苷酸序列为SEQ ID NOs:28,30和40)。核酸的编码序列可操作地与调控序列如启动子、增强子、核糖体结合位点、转录终止标记等连接，以保证编码序列的表达。编码重链和轻链的核酸可以分离的形式出现或被克隆到一个或多个载体中。核酸能够被合成，如通过固定合成或重叠的寡核苷酸的PCR扩增来合成。编码重链和轻链的核酸可以结合成为连续的核酸，如在一个表达载体中，或者可以是独立的，如每个被克隆到各自的表达载体中。
E.治疗应用
本发明为患有LBD(Lewy Body disease，路易体病)或具有患LBD风险的病人提供了几种治疗或有效预防此病的方法。适于治疗的患者包括具有LBD患病风险但未表现出症状的患者，和最近出现症状或出现突触核蛋白病的早期风险信号，如脑电图缓慢、神经精神症状(抑郁症、呆痴、幻觉，焦虑、情感淡漠、快感缺乏)、植物神经变化(体位性低血压、膀胱障碍、便秘、大便失禁、流涎、吞咽困难、性功能障碍、改变脑血流)、感官上的变化(嗅觉、疼痛、颜色辨别异常感觉)、睡眠障碍(REM睡眠行为障碍(RBD)、不宁腿综合征/周期性肢体运动，嗜睡，失眠)和其他杂项的标志和症状(疲劳，复视，视力模糊，皮脂溢出，减肥/增益)的患者。因此，本方法可以预防性地施用于具有已知的LBD遗传风险的个体。这样的个体包括具有经历过这种疾病的亲属的个体和通过遗传或生化指标的分析确定有患病风险的个体。具有PD(帕金森病)风险倾向的遗传标记包括突变的α-突触核蛋白或Parkin基因、UCHLI和CYP2D6基因，尤其是突变位置在第30位和第53位的α-突触核蛋白基因。目前，帕金森氏症患者可以从它的临床表现来辨别，临床表现包括静止性震颤，肌强直，运动迟缓和姿势不稳。
对于无症状的患者，治疗可以开始于任何年龄(例如10岁、20岁、30岁)。但是，通常在病人达到40岁、50岁、60岁或70岁之前是没有必要开始治疗的。治疗通常需要在一段时间内承受多种剂量。治疗可以通过检测抗体或者响应治疗剂的活化的T细胞或B细胞来监控，如果响应下降，则指示升高剂量。
通过给药，抗体可被用于治疗或有效预防病人的LBD，给药在患者体内产生有益的治疗反应(如神经炎和/或轴突α-突触核蛋白聚集减弱，减少神经炎性营养不良症，改善认知功能和/或逆转、治疗或预防认知功能下降)的条件下进行。在一些方法中，相比于对照人群，治疗患者在大脑皮质和/或基底神经节的神经毡的神经炎营养不良的区域可平均减少至少10％、20％、30％或40％。
认知障碍、认知功能逐渐衰退、脑形态改变以及脑血管功能改变通常可在患有LBD或者具有LBD患病风险的病人中观察到。施用本发明的抗体能抑制或延缓此类患者认知功能的下降。
本发明还提供了保持或增加突触密度和/或树突细胞密度的方法。突触或树突细胞密度改变的指标可通过突触形成(突触素)标记物和/或树突细胞(MAP2)标记物来测定。在一些方法中，突触或树突密度可以恢复到健康受试者的水平。在一些方法中，相对于未治疗的对照患者，治疗患者的突触或树突密度的平均水平可以提高5％、10％、15％、20％、25％、30％或更多。
VI.药物组合物和治疗方法
在预防性应用中，抗体或诱导抗体的试剂或药物组合物共同以一种治疗方案(剂量，频率和途径施用)施用于易感或有患病风险的患者，该治疗方案可有效降低风险、减轻严重性，或延迟至少一个该疾病的标志或症状的发作。在某些预防性应用中，该治疗方案可有效地抑制或延迟α-突触核蛋白和截短片段在脑中的积累，和/或抑制或延缓它的毒性作用和/或抑制/或延缓行为缺陷的发展。在治疗性应用中，抗体或诱导抗体的试剂以一种可有效地改善或至少抑制至少一个路易体病的标志或症状进一步恶化的治疗方案(剂量，频率和途径施用)施用于疑似患者或已经患有该病的患者。在一些治疗应用中，该治疗方案可有效地减少或至少抑制与毒性和/或行为缺陷相关的α-突触核蛋白和截短片段的水平的进一步增加。
如果个体治疗的患者达到的结果优于不通过本发明的方法治疗的群体对照患者的平均结果，或者在一个对照临床试验(例如，II期，II/III期或III期试验)，治疗的患者的结果相对于对照患者被证明更有利，在p<0.05或0.01，甚至0.001的水平，那么这种治疗方案被认为在治疗或预防上有效。
有效剂量随许多不同的因素而变化，这些因素包括给药途径、靶位点、患者的生理状态包括LBD疾病类型、患者是否为ApoE基因的载体、患者是人还是动物、施用的其他药物和治疗是预防性的还是治疗性的。
示例性的抗体的剂量范围为约0.01～5mg/kg，优选为0.1～3mg/kg或0.15～2mg/kg或0.15～1.5mg/kg，以患者的体重为基数。所述剂量的抗体可以每天、隔日、每周、每两周、每月服用或者遵从通过实证分析决定的其他用量安排。一个示例性的治疗是长期施用多种剂量，如至少六个月。另一个示例性的治疗方案是两周施药一次、或一月施药一次或3～6个月施药一次。
抗体可以经由外部途径给药(途径路径，即施用的或诱导的抗体穿过血脑屏障到达大脑中的预定的部位)。给药途径包括局部，静脉内，口服，皮下，动脉内，颅内，鞘内，腹膜内，鼻内或肌内。抗体施药的某些路径是在静脉内和皮下，这种注射方式最典型的是在手臂或腿部肌肉进行注射。在某些方法中，试剂直接注射到一个有沉淀物积累的特定组织，如颅内注射。
用于肠胃外给药的药物组合物可以是无菌、基本上等渗并在GMP(药品生产质量管理规范)条件下生产的。药物组合物可以单位剂量形式来提供(即剂量为单次给药)。药物组合物可以使用一种或多种生理上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或辅料进行配制。配制取决于选择的施药途径。对于注射剂，抗体可在水溶液中配制，优选生理相容的缓冲液如Hank氏溶液，林格氏溶液或生理盐水或乙酸盐缓冲液(以减少注射部位的不适感)。该溶液可以含有配制剂如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。备选抗体可以是冻干形式，以便在使用前与合适的赋形剂(如灭菌无热原水)组合。
本治疗方案可与另一种有效治疗或预防正在治疗的疾病的药剂组合施用。例如，就帕金森氏病来说，对α-突触核蛋白的免疫疗法(可参见WO/2008/103472)、左旋多巴、多巴胺激动剂、COMT抑制剂、MAO-B抑制剂、金刚烷胺、或抗胆碱能药可与本治疗方案组合使用。
VII.其他应用
以上所述的抗体可用于在临床诊断或治疗或研究的情况下检测α-突触核蛋白。该抗体也可作为研究试剂出售，用于实验室研究中检测含有α-突触核蛋白的细胞及其对各种刺激的响应。在所述应用中，单克隆抗体可以用荧光分子，自旋标记分子，酶或放射性同位素进行标记，也可以以试剂盒的形式提供测定α-突触核蛋白所有必要的试剂。该抗体也可用于纯化α-突触核蛋白，例如，通过亲和色谱法。
所述抗体可用于检测患者的LB(路易小体)。这些方法在诊断或确定PD(帕金森症)、或与LB在大脑中存在相关的其他疾病、或其敏感性的诊断上是有用的。例如，这些方法可用于出现痴呆症症状的患者。如果患者有LB，那么这个患者很有可能患上LBD，如帕金森症。这些方法也可以用于无症状的患者。路易体或其他异常的α-突触核蛋白沉淀的出现表明易感将来症状的疾病。该方法也可用于监测疾病进展和/或响应先前已诊断患有路易体病的患者的治疗。
该方法可通过施用抗体，然后检测结合的抗体来执行。如果需要，可以使用缺乏全长恒定区的抗体片段(如Fab)来避免清理反应。在一些方法中，同样的抗体可以同时作为治疗和诊断试剂。
诊断(例如体内成像)，抗体可通过静脉内注射进入患者体内，或通过颅内注射或在颅骨上钻一个洞使其直接进入大脑。试剂的用量应当与治疗方法所需剂量在相同的范围内。一般地，抗体需要标记。尽管在一些方法中，抗体未被标记，使用次级标记试剂与抗体结合。标记的选择取决于检测手段，例如，荧光标记物适于光学检测。顺磁性标签适用于无手术干预的断层探测。放射性标记物也可以通过PET或SPECT来检测。
诊断通过将标记位点的数目、大小和/或强度与相应的基线值进行比较来执行。基线值可以代表非患病群体的平均水平。基线值也可以代表同一患者以前的水平。例如，基线值可以在患者开始治疗前来确定，测量值随后与基线值进行比较。测定值相对于基线值下降标志着对治疗有积极效果。
该抗体可用于产生抗独特型抗体(可参见：Greenspan&Bona,FASEB J.7(5):437-444,1989；and Nissinoff,J.Immunol.147:2429-2438,1991)。这类抗独特型抗体可以用在药动学、药效学、生物分布研究以及临床上人抗人抗体(HAHA)在抗体治疗的患者体内的响应的研究。例如，抗独特型抗体特异性地结合人源化1H7抗体的可变区，因此可在药动学研究中利用它来检测人源化1H7抗体并帮助量化人抗人抗体(HAHA)在治疗患者体内的响应。
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同样，如果出版物、网站等在不同的时间出版的版本不同，则在本申请的有效申请日期最近出版的版本是有意义的，除非另有说明。本发明的任何特征、步骤、要素、实施方式或方面可以与任何其他组合来使用，除非特别注明。虽然本发明已经通过说明和举例的方式进行了相当详细的描述以实现清楚和便于理解的目的，但在所附权利要求的范围内实施的某些变化和修改将是显而易见的。
实施例
实施例1.人源化1H7抗体的设计
人源化供体抗体的起点是ATCC保藏号为No.PTA-8220的杂交瘤产生的鼠抗体1H7，其在专利申请号为11/710248、公开号为US2009/0208487的美国专利中有描述。m1H7的完整的重链可变区氨基酸和核酸序列分别如SEQ ID NO：4和5所示。m1H7的完整的轻链可变区氨基酸和核酸序列分别如SEQ ID NO：6和7所示。成熟的m1H7的重链可变区氨基酸和核酸序列分别如SEQ ID NO：8和9所示。成熟的m1H7的轻链可变区氨基酸和核酸序列分别如SEQ IDNOS:10和11所示。重链CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：12、13和14所示。轻链CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：15、16和17所示。在实施例中，始终采用Kabat编号。
m1H7的可变κ(variable kappa，Vk)属于鼠Kabat第3亚组(subgroup3)，鼠Kabat第3亚组对应于人类Kabat第1亚组。1H7的可变重链(Vh)属于鼠Kabat第5a亚组，鼠Kabat第5a亚组对应于人类Kabat第1亚组(可参见：Kabat et al.Sequences of Proteins ofImmunological Interest,Fifth Edition.NIH Publication No.91-3242,1991).在Vk中，15残基CDR-L1属于标准类别5(注意在这个类别中，处于第33位的蛋氨酸通常是亮氨酸)，7残基CDR-L2属于标准类别1，9残基CDR-L3属于标准类别1(可参见：Martin&Thornton,J MolBiol.263:800-15,1996)。5残基CDR-H1属于标准类别1，17残基CDR-H2属于标准类别2(可参见：Martin&Thornton,J Mol Biol.263:800-15,1996)。CDR-H3没有归于标准类别中，但是根据Shirai等人的规则(可参见：Shirai et al.,FEBS Lett.455:188-97(1999))，8残基环可能有一个扭曲底部(kinked base)。
在Vk和Vh结构域之间的界面上的残基是那些通常能发现的，除了κ链上的F46通常是亮氨酸。这使得这个位点成为回复突变的候选位点。Deshpande等对于PDB数据库中的蛋白序列进行了研究(可参见：Deshpande et al.,Nucleic Acids Res.33:D233-7,2005)，以寻找能够提供粗略的1H7结构模型的结构体。0.5B抗-HIV抗体具有良好的类似于1H7Vk的整体序列，保有形成环的相同的标准结构。0.5B抗-HIV抗体的NMR结构(可参见：pdb code1QNZ；Tugarinov et al.,Structure 8:385-95,2000)被用于对Vk结构的建模。抗-α-(2→8)-聚唾液酸抗体具有良好的类似于1H7Vh的整体序列。它也有与扭曲底部类似长度的CDR-H3。抗-α-(2→8)-聚唾液酸抗体的结构(可参见：1PLG；Evans et al.,Biochemistry 34:6737-44,1995)有合理的分辨率(2.8A)，被用于Vh结构的建模。此外，抗-α-(2→8)-聚唾液酸抗体的CDR-H1和H2与1H7Vh具有相同的标准结构。DeepView/Swiss-PdvViewer3.7(SP5)(可参见：Guex&Peitsch,Electrophoresis 18:2714-2723,1997)被用来1H7fv的粗略结构建模。
对于来自NCBI的非冗余蛋白质序列数据库的研究允许选择合适的在其中接枝鼠CDR的人类框架。对于VK，NCBI登录码为AAY33358的人类κ轻链(GI:63102905；SEQ ID NO:43)被选择作为合适的人类框架(可参见：Kramer et al.,Eur J Immunol.35:2131-45,2005)。CDR-L2和L3具有相同的标准分类，它们属于人类κ种系A30，A30是Kabat人类κ亚组1的成员。在轻链可变区框架的AAY33358与鼠1H7轻链具有65.4％的序列同一性。对于Vh，人类Ig重链BAC02037(GI：21670055；SEQ ID NO：42)被选择，它属于人类重种系VH1-18。它是Kabat人类重亚组1的成员。它具有1H7CDR-H1和H2的标准形式，H3是8个残基长度并且具有预测的扭曲底部。BAC02037在可变区框与鼠1H7的重链具有65.8％的序列同一性。没有回复突变或CDR突变的人源化1H7的重链和轻链可变序列如SEQ ID NOs:44-45所示。
四个人源化轻链可变区的变体和5个人源化重链可变区变体被构建，包含上述取代的不同排列(分别为，Hu1H7VLv1-v4；SEQ ID NOs:32-39和Hu1H7VHv1-v5；SEQ ID NOs:18-27)(如图1-2和表1所示)。SEQ ID NOs：19、21、23、25、27、33、35、37和39包括表1所示的回复突变。此外，还有两个人源化重链(SEQ ID NOs:25、27)，包括在重链CDR3(如图1、2和表1所示)的H97(Kabat编号)位点的C→S突变。Hu1H7VLv1-v4和Hu1H7VHv1-V5在L46，L49，L83，H11，H28，H38，H48，H67，H69，H71，H91和H97的氨基酸列于表2。
在扫描电镜中，H3L3的变体(hu1H7VHv3(SEQ ID NO：23)-Hu1H7VLv3(SEQ ID NO：37))被发现具有最低解离常数(最高缔合常数)，与小鼠1H7相同。
表1VH,VL回复突变和CDR突变
表1VH,VL回复突变和CDR突变
表2.在人源化抗体1H7中一些回复突变和CDR突变的框架残基的Kabat编号
选择上述位点作为替代候选的理由如下。
L46F(如同其他地方，在此处，框架回复突变时，第一个提及的残基是人类残基，第二个是鼠残基)：该位点是Vk/Vh的一个界面残基。
Y49C：不论是老鼠还是人类序列，这个位点的半胱氨酸是不常见的。占据着抗原结合位点中心的位置，该残基可与抗原结合，或保持环的构象。
F83A：在人类框架中，该位点被较大的氨基酸-苯丙氨酸所占据。因此，A83在人类框架中是不常见的。在人源化抗体中，恒定域将是人类的而非老鼠的，因此，人类F83是常见的。然而在Vk中，这个位点与恒定结构域靠的很近，可能对恒定区的包装产生干扰。所以，将F回复突变成A，看看是否有区别将是有趣的。
V11L：此位点与恒定结构域接触，可能因此改变结合位点的布局。
T28S：此位点有助于CDR-H1的构象，但也可以结合抗原。T→S突变是保守突变。
R38K：此位点在CDR-H2下面，在模型中与F63相互作用。R→K突变是保守突变。
M48I：在模型中，此位点在CDR-H2的F63下面。M→I突变是保守突变。
V67A：此位点在CDR-H2下面。V→A突变不是保守突变。
M69L:此位点在CDR-H2下面。M→L突变是保守突变。
T71A：此位点是CDR-H2的一个标准残基。T→A突变不是保守突变。
Y91F：此位点是轻链中与P44相互作用的界面残基。Y→F突变是保守突变。
C97S：该在CDRH3上的CDR突变避免了半胱氨酸的翻译后修饰。
>Hu1H7Vκ版本1
>Hu1H7Vκ版本2
>Hu1H7Vκ版本3
>Hu1H7Vκ版本4
>Hu1H7vh版本1
>Hu1H7vh版本2
>Hu1H7vh版本3
>Hu1H7vh版本4
>Hu1H7vh版本5
实施例2.鼠的、嵌合的和人源化1H7抗体的结合动力学分析
对人源化1H7抗体的结合动力学进行了表征，人源化1H7抗体包含从Hu1H7VHv1-5选定的重链和从Hu1H7VLv1-4中选择的轻链。
使用Biacore对抗体进行充分的Biacore结合动力学分析。对鼠1H7(如图3A所示)、嵌合1H7(如图3B所示)和人源化1H7(Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv3，Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv1，Hu1H7VHv4-Hu1H7VLv1)抗体(如图3C所示)的详细的结合动力学参数(结合速率常数Ka，解离速率常数Kd和亲和常数KD)进行了测定。人源化1H7尤其是Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv3的结合动力学参数与鼠1H7的结合动力学参数具有可比性。
表3.鼠1H7，嵌合1H7和人源化1H7的结合动力学参数(Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv3,Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv1,Hu1H7VHv4-Hu1H7VLv1)
抗体 ka(1/Ms) kd(1/s) KD(nM)
鼠1H7 1.0e6 9.6e-3 9.5
嵌合1H7 1.7e6 1.3e-2 7.4
人源化1H7 H3L3(Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv3) 1.3e6 1.1e-2 9.0
人源化1H7 H3L1(Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv1) 1.1e6 1.3e-2 12
人源化1H7 H4L1(Hu1H7VHv4-Hu1H7VLv1) 9.7e5 3.3e-2 33.9
人源化1H7 H5L1(Hu1H7VHv5-Hu1H7VLv1) 8.8e5 5.6e-2 64.0
人源化1H7 H4L4(Hu1H7VHv4-Hu1H7VLv4) N/A* N/A* N/A*
*当分析所用的浓度与其他人源化1H7抗体或鼠/嵌合1H7的浓度相当时，Hu1H7VHv4-Hu1H7VLv4的结合动力学参数是无法确定的。
人源化1H7抗体的结合动力学还通过生物薄膜干涉(BLI)进行了测定，BLI测定时使用了ForteBio Octet QK仪(购自加利福尼亚州，Menlo Park，ForteBio公司)。嵌合1H7和各种人源化1H7抗体(如表6-7，图4A-C所示)的详细的结合动力学参数(关联速率Ka，解离速率Kd和亲和常数KD)被确定。显示的Ka，Kd和KD是使用ForteBio分析形式获得的结合动力学参数。由于，例如，与ForteBio分析形式相关联的亲和力影响，这些参数与用Biocore分析测定的Ka，Kd和KD是不同的。
表4.嵌合1H7和人源化1H7的结合动力学参数(Hu1H7VHv1-Hu1H7VLv1,Hu1H7VHv1-Hu1H7VLv2,Hu1H7VHv1-Hu1H7VLv3,Hu1H7VHv1-Hu1H7VLv4,Hu1H7VHv2-Hu1H7VLv1,Hu1H7VHv2-Hu1H7VLv2)
表5.嵌合1H7和人源化1H7的结合动力学参数(Hu1H7VHv4-Hu1H7VLv2,Hu1H7VHv4-Hu1H7VLv3,Hu1H7VHv4-Hu1H7VLv4,Hu1H7VHv5-Hu1H7VLv2,Hu1H7VHv5-Hu1H7VLv3,Hu1H7VHv5-Hu1H7VLv4)
人源化1H7抗体，尤其是Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv3和Hu1H7VHv3-Hu1H7VLv1，显示出与鼠1H7相似的转基因或非转基因鼠大脑可变区(如纹状体、锥体细胞层、皮质、黑质)的染色类型。
实施例II.α-突触核蛋白抗体的被动免疫
这个实验的目的是确定α-突触核蛋白抗体在体外和体内研究以及行为测定中的有效性。我们使用了α-突触核蛋白转基因(第61行)、α-突触核蛋白敲除和野生型雌性小鼠，小鼠初始时3-4个月大并且n＝14/组。检测的抗体包括9E4(IgG1，抗原决定表位：α-突触核蛋白的第118-126位氨基酸)，5C1(IgG1，抗原决定表位：α-突触核蛋白的第118-126位氨基酸，C-连接体(linker))，5D12，IgG2(SN118-126)，1H7，IgG1(SN91-99)和IgG1对照抗体27-1。小鼠在5个月期间内接受10mg/kg的剂量，总共注射21次。此外，通过单侧向海马体引入人类α-突触核蛋白(重量)，动物被注射表达人类α-突触核蛋白的慢病毒载体(LV)。
读出的抗体包括那些来自Chemicon(抗原决定表位：全长α-突触核蛋白)，Millipore(抗原决定表位：全长α-突触核蛋白)和Neotope，ELADW105(抗原决定表位：全长α-突触核蛋白的第121-124位氨基酸)的抗体。
终点：抗体滴度在生长阶段被测定。行为分析包括Morris水迷宫测试(MWW)和横向光束测试。圆光束测试是使用两束不同直径的光束检测运动平衡、协调和步态。光束A的直径较大(更容易，看作训练光束)，光束D直径较小(更难，看作训练光束)。数据被表示为“错误”(每10cm打滑数目，number of slips/10cm)和“速度”(穿行10cm所用时间，10cm/sec)。在第10周时和终点时，进行水迷宫测试。接下来的神经病理学测量是：α-突触核蛋白聚集，突触素和MAP2(微管相关蛋白)。接下来的生物化学测量是：α-突触核蛋白，PSD95，突触素。利用突触、神经元和神经胶质标记来进行选择多标记和共聚焦标记。
结果表明，所有的抗体，除了5D12，在α-突触核蛋白聚集以及突触和树突密度维持上显著减少，如MWM试验中的阳性结果。9E4抗体在体外和体内研究以及行为测定上是有效的。读数表明抗体可减少神经炎/轴突α-突触核蛋白聚集。
行为结果：1H7抗体(以及9E4和5C1抗体)改进了α-突触核蛋白转基因小鼠的水迷宫表现，而5D12没有。9E4和1H7抗体改进了用速度和误差衡量的光束测试的表现，而5D12和5C1抗体没有(如图6所示)。
神经病理学结果：9E4、1H7和5C1抗体减少了ELADW-105阳性神经炎营养不良，而5D12抗体没有。在α-突触核蛋白转基因小鼠中，9E4抗体减少了神经毡的面积，与对照相比，大脑皮质的神经毡的面积减少了43％，基底节的神经毯的面积减少了40％。9E4抗体还维持了在大脑皮质和基底节中的突触素和微管相关蛋白(MAP2)。
保藏
根据布达佩斯条约，下列单克隆抗体的生产细胞系在指定的日期已保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC，邮政信箱1549，弗吉尼亚州马纳萨斯20108)：
对本领域的普通技术人员来说，在不脱离所附权利要求的精神或范围内，可以做出许多变化和修改。除非从上下文中另有规定，任何步骤、特征、实施方式、或特点可以与任何其他组合来使用。所有出版物和在本说明书中提到的专利申请在此通过引用的方式并入本文，即每个单独的出版物或专利申请被特异性地和单独地指示通过引用并入本文。
序列表
SEQ ID NO:1天然人类野生型α-突触核蛋白
MDVFMKGLSKAKEGVVAAAEKTKQGVAEAAGKTKEGVLYVGSKTKEGVVHGVATVAEKTKEQVTNVGGAVVTGVTAVAQKTVEGAGSIAAATGFVKKDQLGKNEEGAPQEGILEDMPVDPDNEAYEMPSEEGYQDYEPEA
SEQ ID NO:2Jensen等报告的α-突触核蛋白的NAC结构域
EQVTNVGGAVVTGVTAVAQKTVEGAGSIAAATGFV
SEQ ID NO:3Uéda等报告的α-突触核蛋白的NAC结构域
KEQVTNVGGAVVTGVTAVAQKTVEGAGS
SEQ ID NO:4m1H7抗体重链可变区核苷酸序列(信号肽以下划线表示；CDRs以粗体和下划线显示)。
SEQ ID NO:5m1H7抗体重链可变区序列(信号肽已下划线表示；CDRs以粗体和下划线显示)。
SEQ ID NO:6m1H7抗体轻链可变区核苷酸序列(信号肽以下划线表示；CDRs以粗体和下划线显示)。
SEQ ID NO:7m1H7抗体轻链可变区序列(信号肽已下划线表示；CDRs以粗体和下划线显示)。
SEQ ID NO:8成熟的m1H7抗体重链可变区核苷酸序列(CDRs以粗体和下划线显示)
SEQ ID NO:9成熟的m1H7抗体重链可变区序列(CDRs以粗体和下划线显示)
SEQ ID NO:10成熟的m1H7抗体轻链可变区核苷酸序列(CDRs以粗体和下划线显示)
SEQ ID NO:11成熟的m1H7抗体轻链可变区序列(CDRs以粗体和下划线显示)
SEQ ID NO:12m1H7抗体重链CDR1(Kabat定义)
SEQ ID NO:13m1H7抗体重链CDR2(Kabat定义)
SEQ ID NO:14m1H7抗体重链CDR3(Kabat定义)
SEQ ID NO:15m1H7抗体轻链CDR1(Kabat定义)
SEQ ID NO:16m1H7抗体轻链CDR2(Kabat定义)
SEQ ID NO:17m1H7抗体轻链CDR3(Kabat定义)
SEQ ID NO:18Hu1H7VHv1(核苷酸序列)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGCGCCGAGCTGAAGAAGCCCGGCGCCTCCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACTCCTTCACCTCCTACTACATCCACTGGGTGAAGCAGGCCCCCGGCCAGGGCCTGGAGTGGATCGGCTGGATCTACCCCGGCTCCGGCAACACCAAGTACTCCGAGAAGTTCAAGGGCCGCGCCACCCTGACCGCCGACACCTCCACCTCCACCGCCTACATGGAGCTGCGCTCCCTGCGCTCCGACGACACCGCCGTGTACTTCTGCGCCCGCGACGGCTGCTACGGCTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCTCA
SEQ ID NO:19Hu1H7VHv1(氨基酸序列)(CDRs以粗体和下划线显示)
SEQ ID NO:20Hu1H7VHv2(核苷酸序列)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGCGCCGAGGTGAAGAAGCCCGGCGCCTCCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACTCCTTCACCTCCTACTACATCCACTGGGTGCGCCAGGCCCCCGGCCAGGGCCTGGAGTGGATCGGCTGGATCTACCCCGGCTCCGGCAACACCAAGTACTCCGAGAAGTTCAAGGGCCGCGCCACCCTGACCGCCGACACCTCCACCTCCACCGCCTACATGGAGCTGCGCTCCCTGCGCTCCGACGACACCGCCGTGTACTTCTGCGCCCGCGACGGCTGCTACGGCTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCTCA
SEQ ID NO:21Hu1H7VHv2(氨基酸序列)(CDRs以粗体和下划线显示)
SEQ ID NO:22Hu1H7VHv3(核苷酸序列)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGCGCCGAGGTGAAGAAGCCCGGCGCCTCCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACACCTTCACCTCCTACTACATCCACTGGGTGCGCCAGGCCCCCGGCCAGGGCCTGGAGTGGATGGGCTGGATCTACCCCGGCTCCGGCAACACCAAGTACTCCGAGAAGTTCAAGGGCCGCGCCACCATGACCGCCGACACCTCCACCTCCACCGCCTACATGGAGCTGCGCTCCCTGCGCTCCGACGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCCGCGACGGCTGCTACGGCTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCTCA
SEQ ID NO:23Hu1H7VHv3(氨基酸序列)(CDRs以粗体和下划线显示)
SEQ ID NO:24Hu1H7VHv4(核苷酸序列)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGCGCCGAGGTGAAGAAGCCCGGCGCCTCCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACTCCTTCACCTCCTACTACATCCACTGGGTGCGCCAGGCCCCCGGCCAGGGCCTGGAGTGGATCGGCTGGATCTACCCCGGCTCCGGCAACACCAAGTACTCCGAGAAGTTCAAGGGCCGCGCCACCCTGACCGCCGACACCTCCACCTCCACCGCCTACATGGAGCTGCGCTCCCTGCGCTCCGACGACACCGCCGTGTACTTCTGCGCCCGCGACGGCTcCTACGGCTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCTCA
SEQ ID NO:25Hu1H7VHv4(氨基酸序列)(CDRs以粗体和下划线显示)
SEQ ID NO:26Hu1H7VHv5(核苷酸序列)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGCGCCGAGGTGAAGAAGCCCGGCGCCTCCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACACCTTCACCTCCTACTACATCCACTGGGTGCGCCAGGCCCCCGGCCAGGGCCTGGAGTGGATGGGCTGGATCTACCCCGGCTCCGGCAACACCAAGTACTCCGAGAAGTTCAAGGGCCGCGCCACCATGACCGCCGACACCTCCACCTCCACCGCCTACATGGAGCTGCGCTCCCTGCGCTCCGACGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCCGCGACGGCTcCTACGGCTTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCTCA
SEQ ID NO:27Hu1H7VHv5(氨基酸序列)(CDRs以粗体和下划线显示)
SEQ ID NO:28Hu1H7VH signal peptide(核苷酸序列)
ATGGAGTTCGGCCTGTCCTGGCTGTTCCTGGTGGCCATCCTGAAGGGCGTGCAGTGC
SEQ ID NO:29Hu1H7VH signal peptide(氨基酸序列)
MEFGLSWLFLVAILKGVQC
SEQ ID NO:30Hu1H7VH signal peptide(核苷酸序列)
ATGGACTGGACCTGGAGCATCCTTTTCTTGGTGGCAGCAGCAACAGGTGCCCACTCC
SEQ ID NO:31Hu1H7VH signal peptide(氨基酸序列)
MDWTWSILFLVAAATGAHS
SEQ ID NO:32Hu1H7VLv1(核苷酸序列)
GACATCCAGCTGACCCAGTCCCCCTCCTCCCTGTCCGCCTCCGTGGGCGACCGCGTGACCATCACCTGCAAGGCCTCCCAGTCCGTGGACTACGACGGCGACTCCTACATGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGTTCCTGATCTGCGCCGCCTCCAACCTGGAGTCCGGCGTGCCCTCCCGCTTCTCCGGCTCCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCCTCCCTGCAGCCCGAGGACGCCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTCCAACGAGGACCCCTTCACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
SEQ ID NO:33Hu1H7VLv1(氨基酸序列)(CDRs以粗体和下划线显示)
SEQ ID NO:34Hu1H7VLv2(核苷酸序列)
GACATCCAGCTGACCCAGTCCCCCTCCTCCCTGTCCGCCTCCGTGGGCGACCGCGTGACCATCACCTGCAAGGCCTCCCAGTCCGTGGACTACGACGGCGACTCCTACATGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGTTCCTGATCTaCGCCGCCTCCAACCTGGAGTCCGGCGTGCCCTCCCGCTTCTCCGGCTCCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCCTCCCTGCAGCCCGAGGACGCCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTCCAACGAGGACCCCTTCACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
SEQ ID NO:35Hu1H7VLv2(氨基酸序列)(CDRs以粗体和下划线显示)
SEQ ID NO:36Hu1H7VLv3(核苷酸序列)
GACATCCAGCTGACCCAGTCCCCCTCCTCCCTGTCCGCCTCCGTGGGCGACCGCGTGACCATCACCTGCAAGGCCTCCCAGTCCGTGGACTACGACGGCGACTCCTACATGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGTTCCTGATCTGCGCCGCCTCCAACCTGGAGTCCGGCGTGCCCTCCCGCTTCTCCGGCTCCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCCTCCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTCCAACGAGGACCCCTTCACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
SEQ ID NO:37Hu1H7VLv3(氨基酸序列)(CDRs以粗体和下划线显示)
SEQ ID NO:38Hu1H7VLv4(核苷酸序列)
GACATCCAGCTGACCCAGTCCCCCTCCTCCCTGTCCGCCTCCGTGGGCGACCGCGTGACCATCACCTGCAAGGCCTCCCAGTCCGTGGACTACGACGGCGACTCCTACATGAACTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGTTCCTGATCTaCGCCGCCTCCAACCTGGAGTCCGGCGTGCCCTCCCGCTTCTCCGGCTCCGGCTCCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCCTCCCTGCAGCCCGAGGACttCGCCACCTACTACTGCCAGCAGTCCAACGAGGACCCCTTCACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAGATCAAG
SEQ ID NO:39Hu1H7VLv4(氨基酸序列)(CDRs以粗体和下划线显示)
SEQ ID NO:40Hu1H7VL signal peptide(核苷酸序列)
ATGGACATGCGCGTGCCCGCCCAGCTGCTGGGCCTGCTGATGCTGTGGGTGTCCGGCTCCTCCGGC
SEQ ID NO:41Hu1H7VL signal peptide(氨基酸序列)
MDMRVPAQLLGLLMLWVSGSSG
SEQ ID NO:42BAC02037(GI-21670055)用于重链框架的人受体氨基酸序列
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSFGISWVRQAPGQGLEWMGWISPYNGDTNYAQNLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDRGSMSDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:43AAY33358GI-63102905)用于轻链框架的人受体氨基酸序列
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQDYNYPPTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:44无回复突变或CDR突变的Hu1H7VH
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYSFTSYYIHWVRQAPGQGLEWMGWIYPGSGNTKYSEKFKGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDGCYGFAYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:45无回复突变或CDR突变的Hu1H7VL
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYDGDSYMNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNEDPFTFGQGTKLEIK
SEQ ID NO:46Hu1H7VH替代
QVQLVQSGAE-X1-KKPGASVKVSCKASGY-X2-FTSYYIHWV-X3-QAPGQGLEW-X4-GWIYPGSGNTKYSEKFKGR-X5-T-X6-T-X7-DTSTSTAYMELRSLRSDDTAVY-X8-CARDG-X9-YGFAYWGQGTLVTVSS
其中，-X1-是V或L；-X2-是S或T；-X3-是R或K；-X4-是M或I；-X5-是V或A；-X6-是M或L；-X7-是T或A；-X8-是Y或F；-X9-是C或S。
SEQ ID NO:47Hu1H7VL替代
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYDGDSYMNWYQQKPGKAPK-Z1-LI-Z2-AASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPED-Z3-ATYYCQQSNEDPFTFGQGTKLEIK
其中，-Z1-是L或F；-Z2-是Y或C；-Z3-是F或A。
SEQ ID NO:48Hu1H7VH CDR3替代
DG-X9-YGFAY
其中，-X9-是C或M或S或T，优选C。
SEQ ID NO:49人源化1H7轻链恒定区(带R)(通常对于v1-v4)
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:50人源化1H7重链恒定区(通常对于v1-v5)IgG1
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNVKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:51人源化1H7轻链恒定区(不带R)(通常对于v1-v4)
TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:52人源化1H7重链恒定区(G1m3异型)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:53人源化1H7轻链版本3(可变区+恒定区含精氨酸)
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYDGDSYMNWYQQKPGKAPKFLICAASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNEDPFTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:54人源化1H7轻链版本3(可变区+恒定区不含精氨酸)
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYDGDSYMNWYQQKPGKAPKFLICAASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNEDPFTFGQGTKLEIKTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:55人源化1H7重链版本3(可变区+恒定区)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWMGWIYPGSGNTKYSEKFKGRATMTADTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDGCYGFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNVKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:56人源化1H7重链版本3(可变区+恒定区G1m3异型)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWMGWIYPGSGNTKYSEKFKGRATMTADTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDGCYGFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:57人源化1H7重链恒定区(IgG2)
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:58人源化1H7重链恒定区(G1m1异型)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
序列表
<110> 普罗典娜生物科学有限公司
<120> 识别α-突触核蛋白的人源化抗体
<130> 057450/429375
<140> PCT/US2013/023307
<141> 2013-01-25
<150> 61/591,835
<151> 2012-01-27
<150> 61/711,207
<151> 2012-10-08
<160> 58
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 140
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 1
Met Asp Val Phe Met Lys Gly Leu Ser Lys Ala Lys Glu Gly Val Val
1 5 10 15
Ala Ala Ala Glu Lys Thr Lys Gln Gly Val Ala Glu Ala Ala Gly Lys
20 25 30
Thr Lys Glu Gly Val Leu Tyr Val Gly Ser Lys Thr Lys Glu Gly Val
35 40 45
Val His Gly Val Ala Thr Val Ala Glu Lys Thr Lys Glu Gln Val Thr
50 55 60
Asn Val Gly Gly Ala Val Val Thr Gly Val Thr Ala Val Ala Gln Lys
65 70 75 80
Thr Val Glu Gly Ala Gly Ser Ile Ala Ala Ala Thr Gly Phe Val Lys
85 90 95
Lys Asp Gln Leu Gly Lys Asn Glu Glu Gly Ala Pro Gln Glu Gly Ile
100 105 110
Leu Glu Asp Met Pro Val Asp Pro Asp Asn Glu Ala Tyr Glu Met Pro
115 120 125
Ser Glu Glu Gly Tyr Gln Asp Tyr Glu Pro Glu Ala
130 135 140
<210> 2
<211> 35
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 2
Glu Gln Val Thr Asn Val Gly Gly Ala Val Val Thr Gly Val Thr Ala
1 5 10 15
Val Ala Gln Lys Thr Val Glu Gly Ala Gly Ser Ile Ala Ala Ala Thr
20 25 30
Gly Phe Val
35
<210> 3
<211> 28
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 3
Lys Glu Gln Val Thr Asn Val Gly Gly Ala Val Val Thr Gly Val Thr
1 5 10 15
Ala Val Ala Gln Lys Thr Val Glu Gly Ala Gly Ser
20 25
<210> 4
<211> 405
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 4
atgggatgga gctgggtctt tatcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt ccattgccag 60
gtccagctgc agcagtctgg acctgagctg gtgaagcctg ggacttcagt gaagatatcc 120
tgcaaggctt ctggctacag cttcacaagc tactatatac actgggtgaa gcagagtcct 180
ggacagggac ttgagtggat tggatggatt tatcctggaa gtggtaatac taagtacagt 240
gagaagttca agggcaaggc cacactgact gcagacacat cctccagcac agcctacatg 300
cagctcagca gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt tctgtgcaag agatggttgc 360
tacgggtttg cttactgggg ccaagggact ctggtcactg tctct 405
<210> 5
<211> 135
<212> PRT
<213>人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 5
Met Gly Trp Ser Trp Val Phe Ile Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly
1 5 10 15
Val His Cys Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys
20 25 30
Pro Gly Thr Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe
35 40 45
Thr Ser Tyr Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ser Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Ser
65 70 75 80
Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val
100 105 110
Tyr Phe Cys Ala Arg Asp Gly Cys Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
115 120 125
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
130 135
<210> 6
<211> 393
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 6
atggagacag acacactcct gttatgggtg ctgctgctct gggttccagg ctccactggt 60
gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 120
atctcctgca aggccagcca aagtgttgat tatgatggtg atagttatat gaactggtac 180
caacagaaac caggacagcc acccaaattc ctcatctgtg ctgcatccaa tctagaatct 240
gggatcccag ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 300
cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc aaagtaatga ggatccattc 360
acgttcggct cggggacaaa gttggaaata aaa 393
<210> 7
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 7
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala
20 25 30
Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser
35 40 45
Val Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
50 55 60
Gly Gln Pro Pro Lys Phe Leu Ile Cys Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
65 70 75 80
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
100 105 110
Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu
115 120 125
Glu Ile Lys
130
<210> 8
<211> 345
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 8
gtccagctgc agcagtctgg acctgagctg gtgaagcctg ggacttcagt gaagatatcc 60
tgcaaggctt ctggctacag cttcacaagc tactatatac actgggtgaa gcagagtcct 120
ggacagggac ttgagtggat tggatggatt tatcctggaa gtggtaatac taagtacagt 180
gagaagttca agggcaaggc cacactgact gcagacacat cctccagcac agcctacatg 240
cagctcagca gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt tctgtgcaag agatggttgc 300
tacgggtttg cttactgggg ccaagggact ctggtcactg tctct 345
<210> 9
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 9
Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr Ser
1 5 10 15
Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Tyr
20 25 30
Ile His Trp Val Lys Gln Ser Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Ser Glu Lys Phe Lys
50 55 60
Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met
65 70 75 80
Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Gly Cys Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser
115
<210> 10
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 10
gacattgtgc tgacccaatc tccagcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 60
atctcctgca aggccagcca aagtgttgat tatgatggtg atagttatat gaactggtac 120
caacagaaac caggacagcc acccaaattc ctcatctgtg ctgcatccaa tctagaatct 180
gggatcccag ccaggtttag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240
cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc aaagtaatga ggatccattc 300
acgttcggct cggggacaaa gttggaaata aaa 333
<210> 11
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 11
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Phe Leu Ile Cys Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 12
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 12
Ser Tyr Tyr Ile His
1 5
<210> 13
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223>合成
<400> 13
Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Ser Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 14
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223>合成
<400> 14
Asp Gly Cys Tyr Gly Phe Ala Tyr
1 5
<210> 15
<211> 15
<212> PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成
<400> 15
Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Tyr Met Asn
1 5 10 15
<210> 16
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 16
Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 17
<211> 9
<212> PRT
<213>人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 17
Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Phe Thr
1 5
<210> 18
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 18
caggtgcagc tggtgcagtc cggcgccgag ctgaagaagc ccggcgcctc cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg cctccggcta ctccttcacc tcctactaca tccactgggt gaagcaggcc 120
cccggccagg gcctggagtg gatcggctgg atctaccccg gctccggcaa caccaagtac 180
tccgagaagt tcaagggccg cgccaccctg accgccgaca cctccacctc caccgcctac 240
atggagctgc gctccctgcg ctccgacgac accgccgtgt acttctgcgc ccgcgacggc 300
tgctacggct tcgcctactg gggccagggc accctggtga ccgtgtcctc a 351
<210> 19
<211> 117
<212> PRT
<213>人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 19
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Ser Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Cys Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 20
<211> 351
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 20
caggtgcagc tggtgcagtc cggcgccgag gtgaagaagc ccggcgcctc cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg cctccggcta ctccttcacc tcctactaca tccactgggt gcgccaggcc 120
cccggccagg gcctggagtg gatcggctgg atctaccccg gctccggcaa caccaagtac 180
tccgagaagt tcaagggccg cgccaccctg accgccgaca cctccacctc caccgcctac 240
atggagctgc gctccctgcg ctccgacgac accgccgtgt acttctgcgc ccgcgacggc 300
tgctacggct tcgcctactg gggccagggc accctggtga ccgtgtcctc a 351
<210> 21
<211> 117
<212> PRT
<213>人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 21
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Ser Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Cys Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 22
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 22
caggtgcagc tggtgcagtc cggcgccgag gtgaagaagc ccggcgcctc cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg cctccggcta caccttcacc tcctactaca tccactgggt gcgccaggcc 120
cccggccagg gcctggagtg gatgggctgg atctaccccg gctccggcaa caccaagtac 180
tccgagaagt tcaagggccg cgccaccatg accgccgaca cctccacctc caccgcctac 240
atggagctgc gctccctgcg ctccgacgac accgccgtgt actactgcgc ccgcgacggc 300
tgctacggct tcgcctactg gggccagggc accctggtga ccgtgtcctc a 351
<210> 23
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223>合成
<400> 23
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Ser Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Cys Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 24
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 24
caggtgcagc tggtgcagtc cggcgccgag gtgaagaagc ccggcgcctc cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg cctccggcta ctccttcacc tcctactaca tccactgggt gcgccaggcc 120
cccggccagg gcctggagtg gatcggctgg atctaccccg gctccggcaa caccaagtac 180
tccgagaagt tcaagggccg cgccaccctg accgccgaca cctccacctc caccgcctac 240
atggagctgc gctccctgcg ctccgacgac accgccgtgt acttctgcgc ccgcgacggc 300
tcctacggct tcgcctactg gggccagggc accctggtga ccgtgtcctc a 351
<210> 25
<211> 117
<212> PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成
<400> 25
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Ser Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Ser Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 26
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 26
caggtgcagc tggtgcagtc cggcgccgag gtgaagaagc ccggcgcctc cgtgaaggtg 60
tcctgcaagg cctccggcta caccttcacc tcctactaca tccactgggt gcgccaggcc 120
cccggccagg gcctggagtg gatgggctgg atctaccccg gctccggcaa caccaagtac 180
tccgagaagt tcaagggccg cgccaccatg accgccgaca cctccacctc caccgcctac 240
atggagctgc gctccctgcg ctccgacgac accgccgtgt actactgcgc ccgcgacggc 300
tcctacggct tcgcctactg gggccagggc accctggtga ccgtgtcctc a 351
<210> 27
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 27
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Ser Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Ser Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 28
<211> 57
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 28
atggagttcg gcctgtcctg gctgttcctg gtggccatcc tgaagggcgt gcagtgc 57
<210> 29
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 29
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Leu Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys
<210> 30
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 30
atggactgga cctggagcat ccttttcttg gtggcagcag caacaggtgc ccactcc 57
<210> 31
<211> 19
<212> PRT
<213>人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 31
Met Asp Trp Thr Trp Ser Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Ala His Ser
<210> 32
<211> 333
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 32
gacatccagc tgacccagtc cccctcctcc ctgtccgcct ccgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgca aggcctccca gtccgtggac tacgacggcg actcctacat gaactggtac 120
cagcagaagc ccggcaaggc ccccaagttc ctgatctgcg ccgcctccaa cctggagtcc 180
ggcgtgccct cccgcttctc cggctccggc tccggcaccg acttcaccct gaccatctcc 240
tccctgcagc ccgaggacgc cgccacctac tactgccagc agtccaacga ggaccccttc 300
accttcggcc agggcaccaa gctggagatc aag 333
<210> 33
<211> 111
<212> PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成
<400> 33
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Phe Leu Ile Cys Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 34
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 34
gacatccagc tgacccagtc cccctcctcc ctgtccgcct ccgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgca aggcctccca gtccgtggac tacgacggcg actcctacat gaactggtac 120
cagcagaagc ccggcaaggc ccccaagttc ctgatctacg ccgcctccaa cctggagtcc 180
ggcgtgccct cccgcttctc cggctccggc tccggcaccg acttcaccct gaccatctcc 240
tccctgcagc ccgaggacgc cgccacctac tactgccagc agtccaacga ggaccccttc 300
accttcggcc agggcaccaa gctggagatc aag 333
<210> 35
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 35
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Phe Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 36
<211> 333
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 36
gacatccagc tgacccagtc cccctcctcc ctgtccgcct ccgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgca aggcctccca gtccgtggac tacgacggcg actcctacat gaactggtac 120
cagcagaagc ccggcaaggc ccccaagttc ctgatctgcg ccgcctccaa cctggagtcc 180
ggcgtgccct cccgcttctc cggctccggc tccggcaccg acttcaccct gaccatctcc 240
tccctgcagc ccgaggactt cgccacctac tactgccagc agtccaacga ggaccccttc 300
accttcggcc agggcaccaa gctggagatc aag 333
<210> 37
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 37
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Phe Leu Ile Cys Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 38
<211> 333
<212> DNA
<213>人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 38
gacatccagc tgacccagtc cccctcctcc ctgtccgcct ccgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgca aggcctccca gtccgtggac tacgacggcg actcctacat gaactggtac 120
cagcagaagc ccggcaaggc ccccaagttc ctgatctacg ccgcctccaa cctggagtcc 180
ggcgtgccct cccgcttctc cggctccggc tccggcaccg acttcaccct gaccatctcc 240
tccctgcagc ccgaggactt cgccacctac tactgccagc agtccaacga ggaccccttc 300
accttcggcc agggcaccaa gctggagatc aag 333
<210> 39
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 39
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Phe Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 40
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 40
atggacatgc gcgtgcccgc ccagctgctg ggcctgctga tgctgtgggt gtccggctcc 60
tccggc 66
<210> 41
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 41
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp
1 5 10 15
Val Ser Gly Ser Ser Gly
20
<210> 42
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 42
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Phe
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Pro Tyr Asn Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Gln Asn Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Arg Gly Ser Met Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 43
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 43
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Asp Tyr Asn Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 44
<211> 117
<212> PRT
<213>人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 44
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Ser Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Cys Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 45
<211> 111
<212> PRT
<213>人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 45
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 46
<211> 117
<212> PRT
<213>人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 变种
<222> 11
<223> Xaa 是 Val 或 Leu
<220>
<221> 变种
<222> 28
<223> Xaa 是 Ser 或 Thr
<220>
<221> 变种
<222> 38
<223> Xaa 是 Arg 或 Lys
<220>
<221> 变种
<222> 48
<223> Xaa 是 Met 或 Ile
<220>
<221> 变种
<222> 68
<223> Xaa 是 Val 或 Ala
<220>
<221> 变种
<222> 70
<223> Xaa 是 Met 或 Leu
<220>
<221> 变种
<222> 72
<223> Xaa 是 Thr 或 Ala
<220>
<221> 变种
<222> 95
<223> Xaa 是 Tyr 或 Phe
<220>
<221> 变种
<222> 101
<223> Xaa 是 Cys 或 Ser
<400> 46
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Xaa Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Xaa Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Xaa Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Xaa
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Ser Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Xaa Thr Xaa Thr Xaa Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Xaa Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Xaa Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 47
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 变种
<222> 50
<223> Xaa 是 Leu 或 Phe
<220>
<221> 变种
<222> 53
<223> Xaa 是 Tyr 或 Cys
<220>
<221> 变种
<222> 87
<223> Xaa 是 Phe 或 Ala
<400> 47
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Xaa Leu Ile Xaa Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Xaa Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 48
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 变种
<222> 3
<223> Xaa 是 Cys 或 Met 或 Ser 或 Thr
<400> 48
Asp Gly Xaa Tyr Gly Phe Ala Tyr
1 5
<210> 49
<211> 107
<212> PRT
<213>人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 49
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 50
<211> 330
<212> PRT
<213>人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 50
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Val Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 51
<211> 106
<212> PRT
<213>人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 51
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
1 5 10 15
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
20 25 30
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
35 40 45
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
50 55 60
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
65 70 75 80
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
85 90 95
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 52
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 52
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 53
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 53
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Phe Leu Ile Cys Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 54
<211> 217
<212> PRT
<213>人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 54
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Phe Leu Ile Cys Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 55
<211> 447
<212> PRT
<213>人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 55
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Ser Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Cys Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Val Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 56
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 56
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Asn Thr Lys Tyr Ser Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Cys Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 57
<211> 326
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 57
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 58
<211> 330
<212> PRT
<213>人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 58
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330

Claims (12)

1.一种包括成熟重链可变区域和成熟轻链可变区域的抗体，所述成熟重链可变区域和成熟轻链可变区域选自以下组合：SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:33；SEQ ID NO:21和SEQ IDNO:33；SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:35以及SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:39。
2.如权利要求1所述的抗体，其中，所述成熟重链可变区域被融合到重链恒定区域，所述成熟轻链可变区域被融合到轻链恒定区域。
3.如权利要求2所述的抗体，其中，所述重链恒定区域的氨基酸序列如SEQ ID NO:52所示，其中，其C末端的赖氨酸残基能被删除。
4.如权利要求2所述的抗体，其中，所述轻链恒定区域的氨基酸序列如SEQ ID NO:49所示。
5.如权利要求1所述的抗体，其中，所述成熟重链可变区域被融合到氨基酸序列如SEQID NO:52所示的重链恒定区域，其中，所述SEQ ID NO:52的C末端的赖氨酸残基能被删除；所述成熟轻链可变区域被融合到氨基酸序列如SEQ ID NO:49所示的轻链恒定区域。
6.如权利要求1～5中任一项所述的抗体，其中，所述成熟重链恒定区域是天然人类恒定区域的突变形式，相对于所述天然人类恒定区域，其与Fcγ受体的结合能力下降。
7.如权利要求1～6中任一项所述的抗体，其中，所述重链恒定区域是人类IgG1同种型的重链恒定区域。
8.一种编码权利要求1～7中任一项所述的成熟重链可变区域和/或成熟轻链可变区域的核酸。
9.如权利要求8所述的核酸，其序列包括SEQ ID NO:20、22、24、26、32、34或38中的任一种。
10.一种宿主细胞，包括含有如权利要求8或9所述的核酸的载体。
11.一种药物组合物，包括如权利要求1～7中任一项所述的抗体。
12.如权利要求1～7中任一项所述的抗体在制备治疗路易体病的药物中的应用。
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WO (1) WO2013112945A1 (zh)
ZA (1) ZA201406227B (zh)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5775974B2 (ja) 2011-10-28 2015-09-09 プロセナ バイオサイエンシーズ リミテッド アルファシヌクレインを認識するヒト化抗体
ES2749457T3 (es) 2012-01-27 2020-03-20 Prothena Biosciences Ltd Anticuerpos humanizados que reconocen la alfa-sinucleína
UA118441C2 (uk) 2012-10-08 2019-01-25 Протена Біосаєнсиз Лімітед Антитіло, що розпізнає альфа-синуклеїн
US10513555B2 (en) 2013-07-04 2019-12-24 Prothena Biosciences Limited Antibody formulations and methods
BR122023002590B1 (pt) * 2013-07-05 2023-12-05 Genmab A/S Anticorpo humanizado ou quimérico de ligação ao cd3 humano, anticorpo biespecífico, microrganismo, composição, composição farmacêutica, uso dos mesmos, método para produzir um anticorpo, composição de diagnóstico, método in vitro para detectar a presença de antígeno cd3, ou uma célula expressando cd3, em uma amostra, kit para detectar a presença de antígeno cd3, ou uma célula que expressa cd3, em uma amostra e anticorpo anti-idiotípico
PT3071597T (pt) * 2013-11-21 2020-10-08 Hoffmann La Roche Anticorpos anti-alfa-sinucleína e métodos de utilização
JP6744856B2 (ja) 2014-04-08 2020-08-19 プロセナ・バイオサイエンシズ・リミテッド α−シヌクレインを認識する抗体を含む血液脳関門シャトル
CN107074938A (zh) 2014-10-16 2017-08-18 豪夫迈·罗氏有限公司 抗‑α‑突触核蛋白抗体和使用方法
CN106568969B (zh) * 2016-10-19 2017-09-26 首都医科大学 一种丝氨酸129位磷酸化alpha‑突触核蛋白聚集体的ELISA检测方法
JP2020501132A (ja) * 2016-12-02 2020-01-16 プロセナ バイオサイエンシーズ リミテッド α−シヌクレインの二次構造プロファイルを検出する赤外線アッセイ
BR112019016374A2 (pt) * 2017-02-17 2020-04-07 Bristol-Myers Squibb Company anticorpos para alfa-sinucleína e usos dos mesmos
EP3406632A1 (en) 2017-05-23 2018-11-28 S.I.S.S.A. Scuola Internazionale Superiore di Studi Avanzati Ligands binding to prion protein for use in the treatment of synucleinopathies
EP3725806A4 (en) * 2017-12-14 2022-03-30 ABL Bio Inc. BISPECIFIC ANTIBODIES AGAINST A-SYN/IGF1R AND ASSOCIATED USE
GB201720975D0 (en) 2017-12-15 2018-01-31 Ucb Biopharma Sprl Anti-alpha synuclein antibodies
GB201720970D0 (en) 2017-12-15 2018-01-31 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
WO2019195770A1 (en) 2018-04-06 2019-10-10 Atyr Pharma, Inc. Compositions and methods comprising anti-nrp2 antibodies
JP2021534381A (ja) 2018-08-09 2021-12-09 エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft パーキンソン病の判定
EP3867270A1 (en) * 2018-10-19 2021-08-25 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Anti-synuclein antibodies
US11807687B2 (en) 2019-10-03 2023-11-07 Atyr Pharma, Inc. Therapeutic compositions comprising anti-NRP2 antibodies
CA3178472A1 (en) 2020-04-24 2021-10-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Enzyme and pathway modulation with sulfhydryl compounds and their derivatives
JP2023535024A (ja) * 2020-07-23 2023-08-15 オター プロシーナ リミテッド 抗ａベータ抗体
CN113912714B (zh) * 2021-12-15 2022-02-22 北京凯祥弘康生物科技有限公司 特异性结合α-突触核蛋白的抗体及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100203631A1 (en) * 2003-11-08 2010-08-12 Elan Pharmaceuticals, Inc. Antibodies to alpha-synuclein
CN101969989A (zh) * 2008-02-22 2011-02-09 阿费里斯股份公司 用于治疗神经退行性变疾病的α-突出核蛋白和其疫苗的模拟表位

Family Cites Families (67)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
IE64738B1 (en) 1990-03-20 1995-09-06 Akzo Nv Stabilized gonadotropin containing preparations
ATE255131T1 (de) 1991-06-14 2003-12-15 Genentech Inc Humanisierter heregulin antikörper
US5786464C1 (en) 1994-09-19 2012-04-24 Gen Hospital Corp Overexpression of mammalian and viral proteins
JP2000510813A (ja) 1995-02-06 2000-08-22 ジェネテイックス・インスティテュート・インコーポレイテッド Ｉｌ−１２用処方
DE19539493A1 (de) 1995-10-24 1997-04-30 Thomae Gmbh Dr K Starker homologer Promotor aus Hamster
US5834597A (en) 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
US6114148C1 (en) 1996-09-20 2012-05-01 Gen Hospital Corp High level expression of proteins
US5888809A (en) 1997-05-01 1999-03-30 Icos Corporation Hamster EF-1α transcriptional regulatory DNA
KR100452064B1 (ko) 1999-02-05 2004-10-08 삼성전자주식회사 디지털 영상 처리 장치
WO2004006955A1 (en) 2001-07-12 2004-01-22 Jefferson Foote Super humanized antibodies
JP2005532825A (ja) * 2002-05-13 2005-11-04 アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド ベネズエラウマ脳炎ウイルスに対するヒト化抗体
US8506959B2 (en) 2002-11-01 2013-08-13 Neotope Biosciences Limited Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease
US20080014194A1 (en) 2003-10-31 2008-01-17 Elan Pharmaceuticals, Inc. Prevention and Treatment of Synucleinopathic and Amyloidogenic Disease
TW200509968A (en) 2002-11-01 2005-03-16 Elan Pharm Inc Prevention and treatment of synucleinopathic disease
US9034337B2 (en) * 2003-10-31 2015-05-19 Prothena Biosciences Limited Treatment and delay of outset of synucleinopathic and amyloidogenic disease
WO2004050884A2 (de) 2002-11-29 2004-06-17 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Neue neomycin-phosphotransferase-gene und verfahren zur selektion von hochproduzierenden rekombinanten zellen
KR101208291B1 (ko) 2003-04-04 2012-12-05 노파르티스 아게 고농도 항체 및 단백질 제형
US7358331B2 (en) 2003-05-19 2008-04-15 Elan Pharmaceuticals, Inc. Truncated fragments of alpha-synuclein in Lewy body disease
DE10338531A1 (de) 2003-08-19 2005-04-07 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Verfahren zur Reklonierung von Produktionszellen
AU2004297616B2 (en) * 2003-12-04 2008-12-18 Xencor, Inc. Methods of generating variant proteins with increased host string content and compositions thereof
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
JP4620739B2 (ja) 2004-11-10 2011-01-26 ベーリンガー インゲルハイム ファルマ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング ウント コンパニー コマンディトゲゼルシャフト Ｃｈｏ細胞に対する細胞保存戦略を最適化するためのフローサイトメトリ分析の使用
US7930064B2 (en) * 2004-11-19 2011-04-19 Parata Systems, Llc Automated drug discrimination during dispensing
CA2657953A1 (en) 2005-07-19 2007-01-25 University Of Rochester Alpha-synuclein antibodies and methods related thereto
CL2007002070A1 (es) 2006-07-14 2008-02-08 Ac Immune S A Genentech Inc Anticuerpo quimerico o humanizado, o fragmentos de ellos, que se adhieren especificamente a por lo menos un epitopo en la proteina beta-amiloide; molecula de acido nucleico que lo codifica; composicion que lo comprende; su uso para tratar enfermedade
US20080124760A1 (en) 2006-07-26 2008-05-29 Barbara Enenkel Regulatory Nucleic Acid Elements
KR20090114388A (ko) * 2007-01-05 2009-11-03 유니버시티 오브 취리히 질환 특이적 결합 분자 및 표적을 제공하는 방법
DK3067066T3 (da) 2007-02-23 2019-05-20 Prothena Biosciences Ltd Forebyggelse og behandling af synukleinopatisk og amyloidogenisk sygdom
US8147833B2 (en) 2007-02-23 2012-04-03 Neotope Biosciences Limited Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease
JP2010518858A (ja) 2007-02-23 2010-06-03 シェーリング コーポレイション 操作された抗−ｉｌ−２３ｐ１９抗体
NZ580043A (en) 2007-03-02 2012-04-27 Boehringer Ingelheim Pharma Improvement of protein production through increased expression of mutated start domain protein cert
RS53402B (en) 2007-03-22 2014-10-31 Genentech, Inc. APPLICATION OF APOPTOTIC ANTI-IGE ANTIBODIES FOR MEMBRANE IGE
KR20090113340A (ko) 2007-03-22 2009-10-29 임클론 엘엘씨 안정한 항체 제제
EP2031064A1 (de) 2007-08-29 2009-03-04 Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG Verfahren zur Steigerung von Proteintitern
EP2234600B1 (en) 2007-12-21 2014-08-20 F. Hoffmann-La Roche AG Antibody formulation
DK2237803T3 (en) 2007-12-28 2015-10-05 Prothena Biosciences Ltd Treatment and prophylaxis of amyloidosis
JP5747414B2 (ja) 2008-04-29 2015-07-15 バイオアークティック ニューロサイエンス アーベー α−シヌクレイン関連疾患についての治療および診断方法における使用のための抗体およびワクチン
WO2009141239A1 (en) 2008-05-20 2009-11-26 F. Hoffmann-La Roche Ag A pharmaceutical formulation comprising an antibody against ox40l, uses thereof
US20120276019A1 (en) 2008-07-25 2012-11-01 Diamedica Inc. Tissue kallikrein for the treatment of parkinson's disease
DE102008048129A1 (de) 2008-09-20 2010-04-22 Lfk-Lenkflugkörpersysteme Gmbh Flugkörper mit zumindest einem Bremsfallschirm sowie Befestigungsvorrichtung zur Befestigung eines Bremsfallschirms an einem Flugkörper
SI2370466T1 (sl) 2008-12-19 2015-11-30 Biogen International Neuroscience Gmbh Človeška avtoprotitelesa proti alfa-sinukleinu
NZ713967A (en) 2009-07-28 2017-01-27 Shire Human Genetic Therapies Compositions and methods for treating gaucher disease
AR078161A1 (es) 2009-09-11 2011-10-19 Hoffmann La Roche Formulaciones farmaceuticas muy concentradas de un anticuerpo anti cd20. uso de la formulacion. metodo de tratamiento.
EP2519537A4 (en) 2009-12-29 2013-07-10 Reddys Lab Ltd Dr CLEANING PROTEINS
EP2366714A1 (en) 2010-03-03 2011-09-21 Dr. Rentschler Holding GmbH & Co. KG Naturally occuring autoantibodies against alpha-synuclein that inhibit the aggregation and cytotoxicity of alpha-synuclein
TW201134488A (en) 2010-03-11 2011-10-16 Ucb Pharma Sa PD-1 antibodies
WO2011127324A2 (en) * 2010-04-08 2011-10-13 JN Biosciences, LLC Antibodies to cd122
CN114246952A (zh) * 2010-06-08 2022-03-29 基因泰克公司 半胱氨酸改造的抗体和偶联物
CA2814155C (en) * 2010-06-11 2019-10-22 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Anti-tim-3 antibody
CN107090039A (zh) * 2010-07-15 2017-08-25 亚德赫伦医疗公司 靶向于钙粘着蛋白‑11的ec1结构域的人源化抗体及相关组合物和方法
CN103379949B (zh) 2010-10-11 2016-09-14 艾伯维巴哈马有限公司 蛋白纯化方法
US8741298B2 (en) 2011-02-07 2014-06-03 Neotope Biosciences Limited APOE immunotherapy
WO2012160536A1 (en) 2011-05-26 2012-11-29 Dr Reddy's Laboratories Limited Antibody purification
CN103764166B (zh) 2011-06-22 2017-10-24 通用医疗公司 蛋白质病的治疗
WO2013003680A1 (en) 2011-06-30 2013-01-03 Genentech, Inc. Anti-c-met antibody formulations
JP5775974B2 (ja) 2011-10-28 2015-09-09 プロセナ バイオサイエンシーズ リミテッド アルファシヌクレインを認識するヒト化抗体
RS63948B1 (sr) 2011-10-31 2023-02-28 Hoffmann La Roche Formulacije anti-il13 antitela
ES2749457T3 (es) 2012-01-27 2020-03-20 Prothena Biosciences Ltd Anticuerpos humanizados que reconocen la alfa-sinucleína
CA2879496C (en) 2012-08-29 2024-01-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Blood brain barrier shuttle
UA118441C2 (uk) 2012-10-08 2019-01-25 Протена Біосаєнсиз Лімітед Антитіло, що розпізнає альфа-синуклеїн
US10513555B2 (en) 2013-07-04 2019-12-24 Prothena Biosciences Limited Antibody formulations and methods
JP6744856B2 (ja) 2014-04-08 2020-08-19 プロセナ・バイオサイエンシズ・リミテッド α−シヌクレインを認識する抗体を含む血液脳関門シャトル
US10084674B2 (en) 2015-09-09 2018-09-25 International Business Machines Corporation Virtual desktop operation and data continuity preservation

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100203631A1 (en) * 2003-11-08 2010-08-12 Elan Pharmaceuticals, Inc. Antibodies to alpha-synuclein
CN101969989A (zh) * 2008-02-22 2011-02-09 阿费里斯股份公司 用于治疗神经退行性变疾病的α-突出核蛋白和其疫苗的模拟表位

Also Published As

Publication number Publication date
US10597441B2 (en) 2020-03-24
CN104619724A (zh) 2015-05-13
US9217030B2 (en) 2015-12-22
US20150056187A1 (en) 2015-02-26
PH12014501685A1 (en) 2014-11-10
US10118960B2 (en) 2018-11-06
MX360778B (es) 2018-11-16
US9234031B2 (en) 2016-01-12
RU2642262C2 (ru) 2018-01-24
CL2014001984A1 (es) 2014-12-19
HK1204791A1 (zh) 2015-12-04
IN2014DN07149A (zh) 2015-04-24
US20150024433A1 (en) 2015-01-22
DK2807188T3 (da) 2019-10-07
AU2013211874A1 (en) 2014-09-18
WO2013112945A1 (en) 2013-08-01
US10875909B2 (en) 2020-12-29
JP2018148911A (ja) 2018-09-27
IL281731A (en) 2021-05-31
KR102246217B1 (ko) 2021-04-29
US20200277362A1 (en) 2020-09-03
MX2018014044A (es) 2021-12-08
NZ629296A (en) 2016-06-24
BR112014018561A8 (pt) 2017-07-11
JP6342333B2 (ja) 2018-06-13
US20190153080A1 (en) 2019-05-23
KR20200027570A (ko) 2020-03-12
IL233829B (en) 2021-04-29
US20130266517A1 (en) 2013-10-10
US20160251416A1 (en) 2016-09-01
SG11201404321YA (en) 2014-08-28
KR102086061B1 (ko) 2020-03-11
EP2807188B1 (en) 2019-09-11
ES2749457T3 (es) 2020-03-20
KR20140125409A (ko) 2014-10-28
CA2863953A1 (en) 2013-08-01
JP6807893B2 (ja) 2021-01-06
EP2807188A1 (en) 2014-12-03
EP2807188A4 (en) 2015-07-01
UA115439C2 (uk) 2017-11-10
JP2015508062A (ja) 2015-03-16
AU2013211874B2 (en) 2017-11-02
IL233829A0 (en) 2014-09-30
CN104619724B (zh) 2018-05-04
BR112014018561A2 (zh) 2017-06-20
ZA201406227B (en) 2016-02-24
US20180016329A1 (en) 2018-01-18
US9670273B2 (en) 2017-06-06
MX2014008952A (es) 2015-02-20
US8790644B2 (en) 2014-07-29
RU2014134747A (ru) 2016-03-20
MY171140A (en) 2019-09-27

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