CN108486089A

CN108486089A - 源于沙门氏菌噬菌体的宽谱裂解酶及其抗菌应用

Info

Publication number: CN108486089A
Application number: CN201810335187.9A
Authority: CN
Inventors: 江艳华; 王联珠; 许东勤; 姚琳; 李风铃; 张媛; 朱文嘉; 郭莹莹
Original assignee: Zhangzidao Group Co ltd; Yellow Sea Fisheries Research Institute Chinese Academy of Fishery Sciences
Current assignee: Zhangzidao Group Co ltd; Yellow Sea Fisheries Research Institute Chinese Academy of Fishery Sciences
Priority date: 2018-04-16
Filing date: 2018-04-16
Publication date: 2018-09-04
Anticipated expiration: 2038-04-16
Also published as: CN108486089B

Abstract

本发明涉及源于沙门氏菌噬菌体的宽谱裂解酶及其抗菌应用，属于生物技术领域，所述宽谱裂解酶为沙门氏菌噬菌体裂解酶LysSP1，其氨基酸序列为SEQ ID No.1。该蛋白经过原核表达和纯化后，获得重组裂解酶，该重组裂解酶可以裂解不同血清型沙门氏菌、某些其他革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌，具有较宽的裂解谱及较好的杀菌活性，可用于沙门氏菌及某些细菌的抗菌剂的制备。

Description

源于沙门氏菌噬菌体的宽谱裂解酶及其抗菌应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种来源于沙门氏菌噬菌体的宽谱裂解酶及其抗菌应用。

背景技术

沙门氏菌(Salmonella)是一类寄生于人类和动物肠道内、生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌，是一种重要的食源性致病菌。沙门氏菌主要通过家禽、肉类、奶类、蛋类、水产品等传播给人类，感染此菌会出现呕吐、腹泻、发热等症状，严重时昏迷甚至死亡。在全球范围内，每年由沙门氏菌感染导致的肠胃炎案例估计可达93,800,000例，死亡人数达155,000人之多，其中由食物传播引起的案例占85％左右。在我国，由沙门氏菌引起的微生物中毒事件位居第二，但导致的发病人数最多。因此，探寻与研究这些食源性致病菌的控制技术长期以来一直是世界各国关注的热点。传统的食源性致病菌控制技术主要建立在抗生素、化学保鲜剂等化学制剂的基础上，随着社会的发展,人们对食品安全越来越关注，化学制剂的安全性越来越引起人们的担忧，其应用越来越受到众多国家限制。因此，开发安全、高效的生物抗菌剂替代传统化学抗菌剂具有重要的现实意义。

噬菌体裂解酶(又叫内溶素，Endolysin或Lysin)是一类能够裂解细菌细胞壁的水解酶。噬菌体侵染宿主细菌后，利用细菌细胞内的营养物质大量合成子代噬菌体的DNA和蛋白质，最后组装成完整的噬菌体颗粒，之后，细胞会大量地合成裂解酶溶解细菌的细胞壁。第一个噬菌体裂解酶是在20世纪50年代发现的，但是该裂解酶对死细胞有作用，对活细胞无效果。此后，陆续发现了其他细菌的噬菌体裂解酶，并利用基因工程技术使其在大肠杆菌中表达并制备。裂解酶作为抗菌剂的优势主要体现在：裂解谱较宽、杀菌快速且效率高、细菌不产生抗性、不会产生有害物质，在食源性致病菌的控制方面具有良好应用前景。将噬菌体裂解酶用于致病菌的控制是比较新的领域，虽然国内外利用基因工程技术构建裂解酶生产菌株的工作已经有了一定的进展，但目前报道的噬菌体裂解酶在抗菌作用方面多应用于革兰氏阳性菌，例如肺炎链球菌噬菌体的、金黄色葡萄球菌、肠球菌、李斯特氏菌等。目前关于沙门氏菌噬菌体的裂解酶研究极其有限，研究报道沙门氏菌噬菌体STP4-a编码的裂解酶具有作为抑菌剂应用的潜力，在pH值5～10、温度30～50℃的条件下均保持较高的活性，在-80℃条件下6个月仍保持85％的酶活力，该裂解酶对沙门氏菌和大肠杆菌具有裂解作用。对鼠伤寒沙门氏菌噬菌体SPN1S中的裂解酶进行克隆表达及分离，发现该裂解酶在pH 7.0～10.5、温度25℃～45℃稳定，EDTA能够提高裂解酶的裂解活力，该酶能够杀灭大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、假单胞菌、阪崎克罗诺杆菌、创伤弧菌等革兰氏阴性菌，但不能杀灭革兰氏阳性菌。因此，针对沙门氏菌对人类健康造成的危害及相关生物抗菌剂缺乏的问题，本发明开发出能够高效裂解沙门氏菌及某些其他革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的宽谱裂解酶。

发明内容

本发明提供一种来源于沙门氏菌噬菌体的具有显著抗菌效果的宽谱裂解酶及其在制备抗菌剂中的应用。

本发明是通过如下技术方案来实现的：

一种沙门氏菌噬菌体裂解酶LysSP1，其氨基酸序列为SEQ ID No.1。

一种沙门氏菌噬菌体裂解酶的编码基因lysSP1，所述基因的核苷酸序列如SEQ IDNo.2所示。

本发明还提供含有所述的基因的表达载体、工程菌或细胞系。

所述原核细胞表达载体为pET-28a(+)。

所述工程菌为大肠杆菌BL21(DE3)。

一种沙门氏菌噬菌体裂解酶LysSP1的制备方法，具体步骤如下：提取沙门氏菌噬菌体SLMP1的基因组DNA，从沙门氏菌噬菌体SLMP1的基因组DNA中扩增裂解酶的基因lysSP1；构建表达沙门氏菌噬菌体裂解酶的重组表达载体；将重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞，筛选得到表达沙门氏菌噬菌体裂解酶的工程菌；异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导表达，获得重组基因表达产物；将重组基因表达产物，经镍柱亲和层析纯化分离，得到重组裂解酶LysSP1。

进一步，沙门氏菌噬菌体SLMP1，保存于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉、武汉大学，保藏编号：CCTCC M2016678，保藏日期为2016年11月25日，分类学命名：沙门氏菌噬菌体SLMP1(Salmonella bacteriophage SLMP1)。

本发明还提供含有所述裂解酶LysSP1的生物制剂。

本发明与现有技术相比的有益效果是：

本发明的裂解酶LysSP1经过原核表达及纯化后，体外对沙门氏菌及某些革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌表现出显著的杀菌效果，可用于细菌抗菌剂的制备。

附图说明

图1为裂解酶LysSP1的纯化图谱；

图2为裂解酶LysSP1对不同浓度沙门氏菌ATCC14028的作用；

图3为裂解酶LysSP1对其他沙门氏菌的作用；

图4为裂解酶LysSP1对其他种属细菌的作用。

沙门氏菌噬菌体SLMP1，保存于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉、武汉大学，保藏编号：CCTCC M2016678，保藏日期为2016年11月25日，分类学命名：沙门氏菌噬菌体SLMP1(Salmonella bacteriophage SLMP1)。

具体实施方式

下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。

本发明试验涉及的菌株：鼠伤寒沙门氏菌(ATCC14028、CICC10420和CMCC50115)、肠炎沙门氏菌(CICC10467和CICC21482)、甲型副伤寒沙门氏菌(CICC21501)、乙型伤寒沙门氏菌(CMCC50094)、痢疾志贺氏菌(CGMCC1.1869)、鲍氏志贺氏菌(CICC21680)、大肠埃希氏菌(ATCC25922)、大肠埃希氏菌O157:H7(CICC21530)、单核细胞增生李斯特氏菌(ATCC19116和CICC21634)、金黄色葡萄球菌(ATCC25923)，分别购于美国典型培养物保藏中心(ATCC)、中国普通微生物菌种保藏中心(CGMCC)、中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)、中国医学细菌保藏管理中心(CMCC)。

本发明涉及的沙门氏菌噬菌体SLMP1，保存于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉、武汉大学，保藏编号：CCTCC M2016678，保藏日期为2016年11月，分类学命名：沙门氏菌噬菌体SLMP1(Salmonella bacteriophage SLMP1)。

质粒pET-28a(+)，Novagen公司；

大肠埃希氏菌BL21(DE3)，天根生化科技有限公司；

Ni-NTA Superflow Column，德国QIAGEN公司；

Zeba Desalting Spin Column，美国Thermo公司；

异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)，北京索莱宝科技有限公司。

LB液体培养基，英国OXOID公司；

实施例1：沙门氏菌噬菌体SLMP1基因组的提取

1、沙门氏菌噬菌体SLMP1颗粒的制备

从固体培养基上挑取沙门氏菌(ATCC14028)单个菌落，接种于15mL LB液体培养基中，36℃振荡培养6-8h。挑取单个沙门氏菌噬菌体SLMP1噬菌斑，接种于15mL对数生长期宿主菌培养液中，36℃振荡培养4-6h，而后将裂解液于8000rpm离心10min，上清液用0.22μm的滤膜过滤，即为噬菌体纯培养液。将过夜培养的沙门氏菌转接到400mL液体LB培养基中，接种量为1％，培养至对数生长期，加入10mL噬菌体纯培养液，振荡培养至宿主菌裂解变清。加DNase I和RNase A至终浓度为l mg/L，室温温育30min。按5.84g/100mL加入NaCl(终浓度为1mol/L)，搅拌使其溶解，冰浴1h。4℃，8000rpm离心15min去除残留的细菌碎片，收集上清，量取上清体积，加入聚乙二醇(PEG8000)至10％(w/v)，慢慢搅拌溶解，冰浴1h以上，使噬菌体沉淀。4℃、8000rpm离心30min，弃尽上清，水分晾干后将沉淀悬于5mL SM溶液中。加入等体积的氯仿抽提噬菌体悬浮液中的PEG8000和细胞碎片，温和振荡30sec，4℃，5000×g离心15min以分离有机相和亲水相，回收含噬菌体颗粒的亲水相。采用CsCl(0.75g/mL)平衡梯度等密度离心，80000rpm离心3h，收集纯化的噬菌体颗粒进行透析后备用。

2、噬菌体基因组DNA的提取

在纯化的噬菌体颗粒中加入DNase I至终浓度为10μg/mL，RNase A至终浓度为5μg/mL，37℃温育1h，以降解残留的宿主菌来源的DNA及RNA。加入EDTA(pH8.0)至终浓度20mmol/mL，灭活DNase I。加蛋白酶K至终浓度50μg/mL，SDS至终浓度0.5％，混匀，56℃温育1h，然后冷却至室温。用等量平衡酚抽提，离心收集水相，用等量平衡酚：氯仿：异戊醇(25:24:1)抽提一次，收集水相，再用氯仿：异戊醇(24:1)抽提一次，取上层水相用2倍体积的无水乙醇沉淀噬菌体核酸，再用70％乙醇洗涤沉淀两次。用TE溶解核酸沉淀，-20℃保存备用。

实施例2、裂解酶基因lysSP1的功能注释

将提取的噬菌体基因组DNA送至生物公司进行全基因组测序，通过RAST工具对基因组进行基因预测，将样本预测的ORF序列通过EMBOSS中的transeq程序转换为蛋白序列，后将蛋白序列与公共数据进行比较，通过同源性分析发现基因(SEQ ID No.2)编码的氨基酸序列(SEQ ID No.1)与多个沙门氏菌噬菌体的裂解酶相似度较高。目前没有这些相似度较高的裂解酶的研究与应用报道。

实施例3、重组质粒的构建

1、裂解酶基因lysSP1的扩增：根据lysSP1序列(SEQ ID No.2)设计引物，5'端增加双酶切位点BamH I、Hind III以及保护性碱基TTT，上游引物：5'-TTTGGATCCatgtcaaaccgaaacatcag-3'，下游引物：5'-TTTAAGCTTctttgccgcgcgccctac-3'。利用PCR进行lysSP1的扩增，在1.5％琼脂糖中电泳，鉴定扩增片段的大小。同时将扩增产物送生物公司进行测序，确定扩增片段为目的片段。

2、裂解酶基因lysSP1的TA克隆：将PCR产物用胶回收试剂盒回收，并与pMD18-T克隆载体进行混合，转入100μL大肠杆菌DH5α感受态细胞中，混合物于冰上放置30min，42℃热激45s，再放置冰上1min，加入890μL LB液体培养基，37℃180rpm振荡培养60min，取200μL涂布在含有100μg/mL氨苄西林的LB固体培养基上，通过蓝白斑筛选法挑取白色菌落至含有100μg/mL氨苄青霉素的LB液体培养基中振荡培养过夜，采用质粒小提试剂盒提取质粒，采用质粒作为模板进行PCR扩增与测序鉴定，结果表明质粒中具有SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，同时利用BamH I、Hind III双酶切进行验证，大小与预期相符，表明构建正确。

3、重组表达质粒pET28a-lysSP1的构建：将上述TA克隆后含有裂解酶基因lysSP1的T载体质粒与pET28(+)载体质粒分别进行双酶切，酶切产物经过T4连接酶于16℃连接过夜，次日转入100μL大肠杆菌DH5α感受态细胞中，冰浴30min。取出后42℃水浴90s，迅速取出冰浴2min。然后加入500μL LB液体培养基，37℃180rpm振荡培养60min。将菌液涂布在含50μg/mL卡那霉素LB固体培养基平板上，37℃培养8-12h。在转化后的平板上随机挑取单菌落接种到5mL含50μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中，37℃180rpm振荡培养10-16h。用质粒提取试剂盒提取菌落质粒，采用质粒作为模板进行PCR扩增与测序鉴定，结果表明质粒中具有SEQ ID No.2所示的核苷酸序列，同时利用BamH I、Hind III双酶切进行验证，大小与预期相符，表明构建正确。将鉴定正确的重组质粒命名为pET28a-lysSP1。

实施例4、重组裂解酶的制备

1、重组表达菌的诱导表达：将2μL重组质粒pET28a-lysSP1转入100μL大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，冰浴30min。取出后42℃水浴热激90s，迅速取出冰浴2min。然后加入500μL LB液体培养基，37℃180rpm振荡培养1h。把菌液涂布在含50μg/mL卡那霉素的LB固体培养基上，37℃培养8-12h。在平板上随机挑取单菌落接种到5mL含50μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中，37℃150rpm振荡培养10-16h。然后取出约500μL菌液接种到50mL含50μg/mL卡那霉素的LB液体培养基的锥形瓶中，37℃180rpm振荡培养3h，加入IPTG(至终浓度1mmol/L)，37℃180rpm振荡培养4h。取1ml菌液12 000rpm离心2min，弃上清，通过SDS-PAGE电泳检测获得重组蛋白表达情况，获得可表达裂解酶的重组菌BL21-pET28a-lysSP1。该裂解酶为部分可溶性表达。将重组菌单菌落接种于10mL含50μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中，37℃150rpm振荡培养过夜，次日，按照1:100的比例将菌液加入到新鲜的990mL含50μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中，37℃培养3h，加入IPTG(至终浓度为1mmol/L)，在37℃条件下，180rpm振荡培养4h进行诱导表达。

2、重组裂解酶的纯化：将上述1L的诱导表达培养液于4℃下8 000rpm离心10min，获得的细胞沉淀用预冷的10mM PBS(pH7.2)重悬后离心，反复清洗3次。沉淀细胞加入l0mM的PBS缓冲液(pH 7.2)，涡旋使其完全混匀，在冰浴条件下进行超声波破碎，超声功率为400W，工作时间5s，间隔5s，280个循环，直至菌液变为清亮。将破碎后的细胞于4℃下12000rpm离心30min，将得到的上清液用0.22μm的滤膜过滤，即获得含有重组裂解酶的粗酶液。采用镍蛋白纯化柱(Ni-NTA Superflow Column)对粗酶液进行纯化，利用脱盐柱(ZebaDesalting Spin Column)进行脱盐，经过SDS-PAGE鉴定蛋白的纯度，即获得纯化的重组裂解酶LysSP1。结果如图1所示。采用考马斯亮蓝法测定裂解酶LysSP1的蛋白浓度。

实施例5：裂解酶LysSP1对沙门氏菌ATCC14028的抗菌效果

将培养至对数生长期的沙门氏菌ATCC14028于8 000rpm离心10min，用10mmol/LPBS(8.0)清洗2遍，用PBS调至麦氏浓度0.5，即约1×10⁸CFU/mL。依次逐倍稀释至1×10⁷、1×10⁶、1×10⁵、1×10⁴、1×10³CFU/mL，200μL反应体系中含有不同浓度的细菌悬液100μL，终浓度为5mmol/L的EDTA，以及10μg裂解酶，以PBS作为对照，在36℃反应2h后，用PBS做适当梯度稀释，涂布营养琼脂平板，计算沙门氏菌数量。

结果如图2所示，当沙门氏菌ATCC14028的浓度为10⁸CFU/mL时，在EDTA的协同作用下，10μg裂解酶能使沙门氏菌降低2.1log₁₀CFU/mL，当浓度为10⁷CFU/mL时，能降低6.4log₁₀CFU/mL，当沙门氏菌为10⁶CFU/mL或更低浓度时，裂解酶能完全杀灭沙门氏菌。表明裂解酶LysSP1对沙门氏菌的裂解能力完全满足杀灭实际样品中沙门氏菌的要求。

实施例6：裂解酶LysSP1对不同细菌的抗菌效果

将鼠伤寒沙门氏菌(CICC10420、CMCC50115)、肠炎沙门氏菌(CICC10467和CICC21482)、甲型副伤寒沙门氏菌(CICC21501)、乙型副伤寒沙门菌(CMCC50094)、鲍氏志贺氏菌(CICC21680)、痢疾志贺氏菌(CGMCC 1.1869)、大肠埃希氏菌(ATCC25922)、大肠埃希氏菌O157(CICC21530)、单核增生李斯特氏菌(ATCC19116和CICC21634)、金黄色葡萄球菌(ATCC25923)，将菌株培养至对数生长期，12 000rpm离心5min，用10mmol/L PBS(pH 8.0)清洗2遍，用PBS(pH 8.0)调至麦氏浓度0.5，即约1×10⁸CFU/mL。200μL反应体系中含有不同细菌的悬液100μL，终浓度为5mmol/L的EDTA，以及10μg裂解酶，以PBS、EDTA、LysSP1作为对照，放置在36℃反应2h后，用PBS稀释，涂布营养琼脂平板。

结果如图3所示，裂解酶LysSP1在EDTA的协同作用下，对不同血清型的沙门氏菌有一定的抗菌作用，10μg裂解酶能使10⁸CFU/mL的沙门氏菌减少1.0～1.7log₁₀CFU/mL。如图4所示，无论是否有EDTA的协同作用，裂解酶LysSP1对其他细菌，志贺氏菌、大肠埃希氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌均有较强的裂解作用。在EDTA协同作用下，10μg裂解酶能使10⁸CFU/mL的鲍氏志贺氏菌(CICC21680)、痢疾志贺氏菌(CGMCC 1.1869)、大肠埃希氏菌(ATCC25922)、大肠埃希氏菌O157(CICC21530)、单核增生李斯特氏菌(ATCC19116和CICC21634)分别降低4.3、2.6、1.4、1.4、2.2、7.4log₁₀CFU/mL。裂解酶单独使用时，10μg裂解酶能使10⁸CFU/mL的鲍氏志贺氏菌(CICC21680)、痢疾志贺氏菌(CGMCC 1.1869)、大肠埃希氏菌(ATCC25922)、大肠埃希氏菌O157(CICC21530)、单核增生李斯特氏菌(ATCC19116和CICC21634)分别降低1.7、2.3、0.9、1.3、3.9、5.1log₁₀CFU/mL。裂解酶LysSP1对金黄色葡萄球菌的裂解能力较弱，使其降低0.5log₁₀CFU/mL。

综上结果表明，裂解酶LysSP1不仅对沙门氏菌有抗菌作用，对其他细菌如志贺氏菌、大肠埃希氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌均具有抗菌作用，是一种宽谱裂解酶。

以上所述的实施例只是本发明的一种较优的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所述的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。

序列表

<110> 中国水产科学研究院黄海水产研究所獐子岛集团股份有限公司

獐子岛集团股份有限公司

<120> 源于沙门氏菌噬菌体的宽谱裂解酶及其抗菌应用

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 162

<212> PRT

<213> 裂解酶LysSP1(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)

<400> 1

Met Ser Asn Arg Asn Ile Ser Asp Asn Gly Leu His Phe Thr Ala Ala

1 5 10 15

Phe Glu Gly Phe Arg Gly Thr Ala Tyr Lys Ala Thr Lys Asn Glu Lys

20 25 30

Tyr Leu Thr Ile Gly Tyr Gly Ser Tyr Gly Pro His Val Lys Glu Gly

35 40 45

Gln Lys Ile Thr Glu Gly Gln Gly Leu Leu Leu Leu His Lys Asp Met

50 55 60

Ala Lys Ala Val Ala Ala Val Asp Ala Ala Ala His Pro Ser Leu Asn

65 70 75 80

Gln Ser Gln Phe Asp Ala Val Cys Asp Leu Val Tyr Asn Ala Gly Ala

85 90 95

Gly Val Ile Ala Ala Ser Thr Gly Thr Gly Gln Ala Leu Arg Lys Gly

100 105 110

Asp Ala Ser Thr Leu Arg Asn Lys Leu Thr Gln Phe His Tyr Gln Asn

115 120 125

Gly Lys Ser Leu Leu Gly Leu Arg Arg Arg Ala Ala Gly Arg Val Ala

130 135 140

Leu Phe Asp Gly Met Leu Trp Gln Gln Ala Glu Ala Val Gly Arg Ala

145 150 155 160

Ala Lys

<210> 2

<211> 489

<212> DNA

<213> 裂解酶(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)

<400> 2

atgtcaaacc gaaacatcag tgataacgga ttacacttca ccgccgcgtt cgaggggttc 60

cggggaaccg cgtacaaggc aacgaagaac gagaagtacc ttactatagg ctacggaagc 120

tatggccccc atgtgaaaga aggccagaag attaccgaag gccagggcct cctgcttctg 180

cataaagata tggctaaggc cgtagctgcg gttgatgccg ctgcacaccc gtctctaaat 240

cagtcacagt tcgatgctgt gtgtgatctg gtgtataacg ctggcgccgg tgtaattgcc 300

gcgtctaccg gaacaggaca ggccctgcga aaaggcgatg catctacact gcgtaataag 360

ttaactcagt tccattatca gaacggcaaa tcactcctcg gattgcggcg ccgagctgct 420

ggtcgtgttg cactgttcga cggtatgttg tggcaacagg cggaagctgt agggcgcgcg 480

gcaaagtag 489

Claims

1.一种沙门氏菌噬菌体裂解酶LysSP1，其特征在于它的氨基酸序列为SEQ ID No.1。

2.根据权利要求1所述的一种沙门氏菌噬菌体裂解酶LysSP1的编码基因lysSP1，其特征在于所述基因lysSP1的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

3.根据权利要求2所述的一种沙门氏菌噬菌体裂解酶LysSP1的编码基因lysSP1，其特征在于所述基因lysSP1的表达载体、工程菌或细胞系。

4.根据权利要求2所述的一种沙门氏菌噬菌体裂解酶LysSP1的编码基因lysSP1，其特征在于所述表达载体为pET-28a(+)。

5.根据权利要求2所述的一种沙门氏菌噬菌体裂解酶LysSP1的编码基因lysSP1，其特征在于所述工程菌为大肠杆菌BL21(DE3)。

6.权利要求1所述的沙门氏菌噬菌体裂解酶LysSP1的制备方法，具体步骤如下：提取沙门氏菌噬菌体SLMP1的基因组DNA，从沙门氏菌噬菌体SLMP1的基因组DNA中扩增裂解酶的基因lysSP1；构建表达沙门氏菌噬菌体裂解酶的重组表达载体；将重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞，筛选得到表达沙门氏菌噬菌体裂解酶的工程菌；异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导表达，获得重组基因表达产物；将重组基因表达产物，经镍柱亲和层析纯化分离，得到重组裂解酶LysSP1。

7.根据权利要求6所述的沙门氏菌噬菌体裂解酶LysSP1的制备方法，其特征在于所述沙门氏菌噬菌体SLMP1，保存于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉、武汉大学，保藏编号：CCTCC M2016678，保藏日期为2016年11月25日，分类学命名：沙门氏菌噬菌体SLMP1，拉丁文名称为Salmonella bacteriophage SLMP1。

8.含有权利要求1所述沙门氏菌噬菌体裂解酶LysSP1的生物制剂。