CN108477620B - 一种高溶解性大豆肽口服液及其制备工艺 - Google Patents
一种高溶解性大豆肽口服液及其制备工艺 Download PDFInfo
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Abstract
一种高溶解性大豆肽口服液及其制备工艺,涉及口服液领域。本发明实施例的高溶解性大豆肽口服液的原料按照质量百分数计包括:1%‑15%大豆肽粉;0.1%‑1%阿萨伊果;0.01%‑0.2%牛磺酸;0.1%‑2%瓜拿那提取物;5%‑20%果糖;10%‑30%异麦芽酮糖醇;余量为水,高溶解性大豆肽口服液的大豆多肽的含量高,具有显著的缓解疲劳的功效;高溶解性大豆肽口服液的制备工艺是先将固体原料干混后,加部分水,于60‑70℃搅拌15‑40min,再加剩余量的水,加热脱气,调节pH为4.0‑5.0,过滤,于117‑125℃灭菌10‑20min,热灌装,该工艺原料消耗少、工艺简单,适宜规模化大生产。
Description
技术领域
本发明涉及口服液领域,且特别涉及一种高溶解性大豆肽口服液及其制备工艺。
背景技术
常用口服液生产的大致工艺流程为:将物料混合得到料液,过滤、灌封、灯检、灭菌等步骤。蛋白类口服液产品在灌装完毕后都会经过灭菌过程,根据产品特性的不同,其灭菌方式不同,但灭菌温度均在80℃以上,同时为了延长口服液产品的货架期,其pH大部分为酸性。大豆肽在pH4.2-6的条件下,经过121℃30min灭菌处理后的溶解性直接决定了其在口服液中的添加量,但是通过添加普通大豆多肽得到的蛋白含量高的口服液产品在pH为酸性的环境下,经过80℃以上的灭菌处理后,易产生絮状沉淀,影响产品的感官性质,因此目前口服液的生产工艺在一定程度上限制了大豆多肽的添加。
目前公开文献已报道的有关大豆多肽口服液的生产工艺中大豆多肽的添加量在1.4%-12%,大部分口服液中大豆多肽的添加量集中在3%以内,其原因在于3%以内的大豆多肽添加量得到的产品在经过灭菌等处理后依然可保持澄清。另一方面,专利号201010270873.6的发明专利公开了一种含肽和低聚糖的氮源强化口服液及其制备方法,大豆肽粉的添加量在20%-30%,在制备过程中采用0.18um-0.22um的微孔滤膜进行过滤,最后经135-140℃高温瞬时灭菌处理,产品感官性质良好,透明无沉淀,但是这种工艺过程中采用微孔滤膜过滤对于原料的溶解性要求特别高,且原料消耗特别大、耗时长、价格昂贵,不适宜口服液的规模化大生产,而且并未明确指出大豆肽粉的添加量为20%-30%的口服液经过滤后滤液中大豆肽含量是否达到20%-30%,另外,微孔滤膜具有特别强的拦截性,可用于不能高温高压液体产品的除菌,因此微孔滤膜对于大豆多肽可能具有阻拦性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高溶解性大豆肽口服液,此口服液大豆多肽的含量高,具有显著的缓解疲劳的功效。
本发明的另一目的在于提供一种高溶解性大豆肽口服液的制备工艺,原料消耗少、工艺简单,适宜规模化大生产。
本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
本发明提出一种高溶解性大豆肽口服液,其是采用以下原料制备而成,按照质量百分数计,原料包括:
其中,大豆肽粉是将大豆分离蛋白和蒸馏水混合搅拌均匀,在自然pH条件下分别加入碱性蛋白酶和中性蛋白酶酶解,再调节pH并加入酸性蛋白酶酶解,灭酶活、浓缩、干燥得到。
进一步地,在本发明较佳实施例中,高溶解性大豆肽口服液的总氮含量为0.8%-12%,可溶性固形物含量为12.4%-61.4%。
本发明提出一种上述的高溶解性大豆肽口服液的制备工艺,其包括以下步骤:
先将固体原料干混后,加部分水,于60-70℃搅拌15-40min,再加剩余量的水,加热脱气,调节pH为4.0-5.0,过滤,于117-125℃灭菌10-20min,热灌装。
进一步地,在本发明较佳实施例中,大豆肽粉是按照以下制备方法制得:
按照质量份数取1份大豆分离蛋白和10-20份蒸馏水,混合搅拌均匀,混合搅拌的转速为40-70r/min,制成大豆分离蛋白浆液;
将大豆分离蛋白浆液升温至50-55℃,在自然pH条件下加入0.002-0.03份碱性蛋白酶,进行第一次酶解0.3-1h,然后加入0.001-0.03份中性蛋白酶,进行第二次酶解1-5h,接着加入有机酸调节pH为5.4-6.2,加入0.001-0.005份酸性蛋白酶,进行第三次酶解0.5-2h,得到酶解液;
将酶解液升温至90-100℃并保持15-20min,灭酶活;
将灭酶活后的酶解液降温至60-70℃,进行物理去苦处理,再浓缩至波美度10°-20°进行喷雾干燥。
进一步地,在本发明较佳实施例中,有机酸选自柠檬酸、苹果酸、乙酸中的一种或多种复配。
进一步地,在本发明较佳实施例中,物理去苦处理的方法是:在酶解液中加入其质量2%-6%的活性炭,搅拌处理20-50min,过滤。
进一步地,在本发明较佳实施例中,喷雾干燥的条件为:进风温度为160-210℃,出风温度为70-120℃。
进一步地,在本发明较佳实施例中,碱性蛋白酶是按照以下制备方法制得:将Svf4-21-7菌种经种子逐级扩大培养,转入发酵罐发酵,得碱性蛋白酶发酵液;将碱性蛋白酶发酵液经硫酸铵盐析、透析脱盐、离子交换层析、聚乙二醇包埋浓缩、凝胶过滤层析后冷冻干燥,制得碱性蛋白酶固体粉末。
进一步地,在本发明较佳实施例中,中性蛋白酶是按照以下制备方法制得:将AS1.398菌种经种子逐级扩大培养,转入发酵罐发酵,得中性蛋白酶发酵液;在中性蛋白酶发酵液中添加絮凝剂,得中性蛋白酶滤液;将中性蛋白酶滤液离心、粗滤、精滤,添加海藻糖和β-环状糊精,搅拌,收集沉淀,真空干燥,制得中性蛋白酶固体粉末。
进一步地,在本发明较佳实施例中,酸性蛋白酶是按照以下制备方法制得:将宇佐美曲霉菌种经种子逐级扩大培养,转入发酵罐发酵,得酸性蛋白酶发酵液;将酸性蛋白酶发酵液经过过滤、浓缩、调配、精滤、真空干燥,得酸性蛋白酶固体粉末。
本发明实施例的高溶解性大豆肽口服液及其制备工艺的有益效果是:本发明实施例的高溶解性大豆肽口服液的原料按照质量百分数计包括:1%-15%大豆肽粉;0.1%-1%阿萨伊果;0.01%-0.2%牛磺酸;0.1%-2%瓜拿那提取物;5%-20%果糖;10%-30%异麦芽酮糖醇;余量为水,高溶解性大豆肽口服液的大豆多肽的含量高,具有显著的缓解疲劳的功效;高溶解性大豆肽口服液的制备工艺是先将固体原料干混后,加部分水,于60-70℃搅拌15-40min,再加剩余量的水,加热脱气,调节pH为4.0-5.0,过滤,于117-125℃灭菌10-20min,热灌装,该工艺原料消耗少、工艺简单,适宜规模化大生产。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的高溶解性大豆肽口服液及其制备工艺进行具体说明。
本发明实施例提供一种高溶解性大豆肽口服液,其是采用以下原料制备而成,按照质量百分数计,所述原料包括:1%-15%大豆肽粉;0.1%-1%阿萨伊果;0.01%-0.2%牛磺酸;0.1%-2%瓜拿那提取物;5%-20%果糖;10%-30%异麦芽酮糖醇;余量为水。其中,所述大豆肽粉是将大豆分离蛋白和蒸馏水混合搅拌均匀,在自然pH条件下分别加入碱性蛋白酶和中性蛋白酶酶解,再调节pH并加入酸性蛋白酶酶解,灭酶活、浓缩、干燥得到,该大豆肽粉的蛋白质含量≥90%,多肽含量≥80%,游离氨基酸≤6.0%,且该大豆肽粉在pH4.2-4.6,高温高压条件的溶解度高。该高溶解性大豆肽口服液的总氮含量为0.8%-12%,可溶性固形物含量为12.4%-61.4%。
本发明实施例的高溶解性大豆肽口服液主要是由大豆肽粉、阿萨伊果、瓜拿那提取物、牛磺酸、果糖、异麦芽酮糖醇配伍而成,其中的大豆肽粉溶解度高,形成的口服液中的大豆多肽含量高,具有显著的缓解疲劳的功效,同时避免使用蔗糖,更健康,适用人群更为广泛。
本发明实施例提供一种上述的高溶解性大豆肽口服液的制备工艺,其包括以下步骤:
按上述高溶解性大豆肽口服液的配方进行配料,先将固体原料(除水以外的其他原料)干混后,加部分水,于60-70℃搅拌15-40min,再加剩余量的水,加热脱气,调节pH为4.0-5.0,100目过滤,于117-125℃灭菌10-20min,热灌装,得到高溶解性大豆肽口服液,室温保藏。
本发明实施例的高溶解性大豆肽口服液的制备工艺采用高溶解性的大豆肽粉为原料,添加量最高可以达到15%,且在pH4.0-5.0的条件下,仅采用100目滤布进行过滤工艺,再经灭菌处理,避免微孔滤膜过滤工艺,得到的产品依旧澄清透明(无沉淀产生),原料消耗少、工艺简单,适宜规模化大生产。
其中,大豆肽粉是按照以下制备方法制得:
S1制浆:按照质量份数取1份大豆分离蛋白和10-20份蒸馏水,混合搅拌均匀,混合搅拌的转速为40-70r/min,制成大豆分离蛋白浆液。加水混合是为了将大豆分离蛋白中的有效成分溶解于水中,以便进行后续的酶解步骤。如果混合搅拌的转速太快,会导致起泡现象,进而影响后续的酶解效果,而如果混合搅拌的转速太慢,会导致分散程度低,影响酶切位点的暴露,这同样会影响后续的酶解效果,而酶解效果直接影响最后得到的大豆多肽品质及性质,进而影响大豆多肽的溶解性。
S2酶解:将大豆分离蛋白浆液升温至50-55℃,在自然pH条件下加入0.002-0.03份碱性蛋白酶(占大豆分离蛋白质量的0.2%-3%),进行第一次酶解0.3-1h。
然后加入0.001-0.03份中性蛋白酶(占大豆分离蛋白质量的0.1%-3%),进行第二次酶解1-5h。
接着加入有机酸调节pH为5.4-6.2,有机酸选自柠檬酸、苹果酸、乙酸等有机酸其中的一种或多种复配,加入0.001-0.005份酸性蛋白酶(占大豆分离蛋白质量的0.1%-0.5%),进行第三次酶解0.5-2h,得到酶解液。
S3灭酶活:将酶解液升温至90-100℃并保持15-20min。
S4去除苦味:将灭酶活后的酶解液降温至60-70℃,进行物理去苦处理,再浓缩至波美度10°-20°进行喷雾干燥,喷雾干燥的条件为:进风温度为160-210℃,出风温度为70-120℃,即得到大豆肽粉。以上制备工艺采用分步添加不同酶制剂的方法,而且前两步酶解无需调节pH,只在最终添加酸性蛋白酶之前是采用有机酸调节酶解液pH(酶解过程中不用持续调节pH),虽然酶解液初始pH不是碱性蛋白酶的最佳酶解条件,但结合后续的中性蛋白酶、酸性蛋白酶的酶解工艺,能保证酶解效果,同时节约人力成本,操作简便,更适合模化生产。制备的大豆肽产品的蛋白质含量≥90%,多肽含量≥80%,游离氨基酸≤6.0%。
本实施例中,物理去苦处理的方法是:在降温后的酶解液中加入其质量2%-6%的活性炭,搅拌处理20-50min,过滤。此方法简便,能有效去除大豆肽自身的苦味。
或者,将酶解液经过截留分子量为500-1000Da的卷式超滤膜纯化系统进行过滤,得到截留液;对应的浓缩方法是:将截留液经过截留分子量为100-150Da的卷式高压反渗透膜系统进行浓缩,除去水分及部分残留无机盐和小分子杂质,得到波美度为10°-20°的浓缩液。此方法对酶解液中的苦味分子或其他杂质的去除效果好,对苦味的去除彻底。
本实施例中,高活性的碱性蛋白酶是按照以下制备方法制得:
将碱性蛋白酶高产菌株Svf4-21-7(CGMCC No.6417)菌种经种子逐级扩大培养,转入发酵罐发酵,得碱性蛋白酶发酵液;将碱性蛋白酶发酵液经硫酸铵盐析、透析脱盐、离子交换层析、聚乙二醇包埋浓缩、凝胶过滤层析后冷冻干燥,制得碱性蛋白酶固体粉末。
本实施例中,高活性的中性蛋白酶是按照以下制备方法制得:
将枯草芽孢杆菌AS1.398菌种经种子逐级扩大培养,转入发酵罐发酵,得中性蛋白酶发酵液;在中性蛋白酶发酵液中添加絮凝剂,搅拌均匀,静置30分钟,使杂质与絮凝剂结合成团状,将絮凝反应完成后的中性蛋白酶发酵液进行板框过滤,得中性蛋白酶滤液;将中性蛋白酶滤液高速离心,转速为10000rpm,进料流速为80L/h,收集离心液;粗滤,采用聚偏氟乙烯滤膜进行过滤,聚偏氟乙烯滤膜的孔径为0.22um和0.1um,操作压力0.1MPa;精滤,采用聚砜超滤膜进行过滤浓缩,聚砜超滤膜的截留分子量为10K,操作压力0.1MPa,得中性蛋白酶浓缩液;添加酶活保护剂海藻糖和β-环状糊精,海藻糖的重量为中性蛋白酶浓缩液的重量的0.8%-1.2%,β-环状糊精的重量为中性蛋白酶浓缩液的重量的0.5%,搅拌均匀;添加食用乙醇,边添加边缓慢搅拌,使得中性蛋白酶分子结晶沉淀出来,收集絮状的中性蛋白酶沉淀,真空干燥,制得中性蛋白酶固体粉末。
本实施例中,高活性的酸性蛋白酶是按照以下制备方法制得:
将宇佐美曲霉(CCTCCNO:M2013601)菌种经种子逐级扩大培养,以5%接种量接入发酵罐培养基,培养温度31-32℃,搅拌速度200-400r/m,通风量1:1-2,培养时间10-12h,然后以1-2℃/h降温速率缓慢降温至26-30℃,搅拌速度400-600r/m,通风量1:1-3,恒温培养8-10h,继续以1-2℃/h降温速率缓慢降温至23-25℃,搅拌速度500-700r/m,通风量1:2-4,培养时间22-31h;以3%接种量追加接入发酵罐,以1-2℃/h升温速率缓慢升温至31-32℃,搅拌速度200-400r/m,通风量1:1-2,恒温培养10-12h,接着以1-2℃/h降温速率缓慢降温至23-25℃,搅拌速度500-700r/m,通风量1:2-4,恒温培养22-31h,得酸性蛋白酶发酵液;将酸性蛋白酶发酵液经过过滤、浓缩、调配、精滤、真空干燥,得酸性蛋白酶固体粉末。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供一种大豆肽粉,其是采用以下制备方法制得:
称取1kg大豆分离蛋白和15kg蒸馏水,混合搅拌均匀,混合搅拌的转速为60r/min,制成大豆分离蛋白浆液。
将大豆分离蛋白浆液升温至50℃,在自然pH条件下加入0.015kg碱性蛋白酶,进行第一次酶解2h;然后加入0.015kg中性蛋白酶,进行第二次酶解3h;接着加入柠檬酸调节pH为5.4-6.2,加入0.003kg酸性蛋白酶,进行第三次酶解1h,得到酶解液。
将酶解液升温至95℃并保持18min,灭酶活。
将灭酶活后的酶解液降温至65℃,加入其质量4%的活性炭,搅拌处理40min,过滤,再浓缩至波美度15°进行喷雾干燥,喷雾干燥的条件为:进风温度为180℃,出风温度为100℃,即得到大豆肽粉。
实施例2
本实施例提供一种大豆肽粉,其是采用以下制备方法制得:
称取1kg大豆分离蛋白和12kg蒸馏水,混合搅拌均匀,混合搅拌的转速为70r/min,制成大豆分离蛋白浆液。
将大豆分离蛋白浆液升温至55℃,在自然pH条件下加入0.03kg碱性蛋白酶,进行第一次酶解0.3h;然后加入0.03kg中性蛋白酶,进行第二次酶解2h;接着加入苹果酸调节pH为5.4-6.2,加入0.005kg酸性蛋白酶,进行第三次酶解0.5-2h,得到酶解液。
将酶解液升温至100℃并保持15min,灭酶活。
将灭酶活后的酶解液降温至70℃,将酶解液经过截留分子量为500-1000Da的卷式超滤膜纯化系统进行过滤,得到截留液,将截留液经过截留分子量为100-150Da的卷式高压反渗透膜系统进行浓缩,除去水分及部分残留无机盐和小分子杂质,得到波美度为20°的浓缩液;进行喷雾干燥,喷雾干燥的条件为:进风温度为210℃,出风温度为120℃,即得到大豆肽粉。
实施例3
本实施例提供一种大豆肽粉,其是采用以下制备方法制得:
称取1kg大豆分离蛋白和18kg蒸馏水,混合搅拌均匀,混合搅拌的转速为40r/min,制成大豆分离蛋白浆液。
将大豆分离蛋白浆液升温至50℃,在自然pH条件下加入0.008kg碱性蛋白酶,进行第一次酶解1h;然后加入0.008kg中性蛋白酶,进行第二次酶解5h;接着加入乙酸调节pH为5.4-6.2,加入0.001kg酸性蛋白酶,进行第三次酶解2h,得到酶解液。
将酶解液升温至90℃并保持20min,灭酶活;
将灭酶活后的酶解液降温至60℃,加入其质量6%的活性炭,搅拌处理25min,过滤;进行喷雾干燥,喷雾干燥的条件为:进风温度为160℃,出风温度为70℃,即得到大豆肽粉。
实施例4
本实施例提供一种高溶解性大豆肽口服液,其是采用以下制备方法制得:
先将10kg大豆肽粉;0.5kg阿萨伊果;0.01kg牛磺酸;1kg瓜拿那提取物;10kg果糖;10kg异麦芽酮糖醇干混后,加30kg水,于65℃搅拌20min,再加38.49kg水,加热脱气,调节pH为4.5,100目过滤,于121℃灭菌15min,热灌装,即得高溶解性大豆肽口服液。
实施例5
本实施例提供一种高溶解性大豆肽口服液,其是采用以下制备方法制得:
先将5kg大豆肽粉;0.8kg阿萨伊果;0.2kg牛磺酸;1.5kg瓜拿那提取物;20kg果糖;10kg异麦芽酮糖醇干混后,加30kg水,于60-70℃搅拌15-40min,再加32.5kg水,加热脱气,调节pH为4.0,100目过滤,于117℃灭菌20min,热灌装,即得高溶解性大豆肽口服液。
实施例6
本实施例提供一种高溶解性大豆肽口服液,其是采用以下制备方法制得:
先将15kg大豆肽粉;1kg阿萨伊果;0.2kg牛磺酸;2kg瓜拿那提取物;10kg果糖;30kg异麦芽酮糖醇干混后,加30kg水,于60-70℃搅拌15-40min,再加11.8kg水,加热脱气,调节pH为5.0,100目过滤,于125℃灭菌10min,热灌装,即得高溶解性大豆肽口服液。
对比例1
本对比例提供一种具有降脂作用的大豆多肽干粉,其是按照以下步骤制得:
取总氮含量大于或等于11%的大豆分离蛋白15公斤,加入蒸馏水50公斤,用胶体磨将其研磨成细腻均匀的大豆分离蛋白磨浆液。
再加入蒸馏水200公斤,投入到反应罐中,用重量含量为20%的氢氧化钠溶液调节其pH值至6.7,再在搅拌状态下加入标号为A.S1398的中性微生物蛋白酶600g,并加热至48℃进行水解,在水解过程中不断用20%的氢氧化钠溶液调整并保持其pH值在6.7~7.0的范围内,持续水解8个小时。
第一次水解完毕后,再用20%的氢氧化钠溶液调整且保持其pH值至7.5,保持其温度在48-52℃的范围内,在不断搅拌状态下加入胰酶520g,持续水解7个小时。
第二次水解完毕后,在每分钟30~60转的搅拌状态下,缓缓加入重量浓度为18%的盐酸溶液,将水解液的pH值中和至5.5,待搅拌均匀后,加热煮沸水解液15分钟使其中的酶灭活。
然后开启反应罐外的冷却水,使酶灭活了的水解液冷却至75℃,再从反应罐内放出中和了的水解液至滤槽过滤,滤液经真空浓缩到18婆梅度,浓缩液再经喷雾干燥成100目的细粉,即可得具有降脂作用的大豆多肽干粉。
对比例2
本对比例提供一种无苦味的大豆多肽粉,其是按照以下步骤制得:
取总氮重量含量大于或等于11%的大豆分离蛋白20公斤,加入170公斤蒸馏水,搅拌均匀后通过胶体磨研磨成细腻的大豆分离蛋白浆液。
将大豆分离蛋白浆液倒入反应锅中,加热至52℃,用氨水调节其pH值至7.3,再向反应锅中加入1.2公斤标号为A.S1398的中性蛋白酶,均匀搅拌进行第一次酶解,在此过程中始终保持酶解液的温度为52℃,pH值为7.3,pH值发生变化时马上用氨水将其调正,持续4小时后得到第一次酶解液。
将反应锅中的第一次酶解液加热至90℃,维持18分钟,使中性蛋白酶灭活。
将酶灭活了的第一次酶解液降温至55℃,用重量含量为30%的氢氧化钙溶液调节其pH值至7.6,然后加入0.78公斤的胰酶,均匀搅拌进行第二次酶解,在此过程中同样应维持酶解液的温度为55℃,pH值为7.6,pH值发生变化时马上用氢氧化钙溶液将其调正,持续4小时后得到第二次酶解液。
用重量含量为18%的浓盐酸溶液将第二次酶解液的pH值调节至5.5,同时加热至微沸,保持20分钟,使胰酶灭活;
停止对酶灭活了的第二次酶解液进行加热,使其温度自然降至50℃以下,然后用帆布过滤,所得滤液中加入5公斤高岭土粉末,持续搅拌并重新加热至微沸,维持35分钟后停止搅拌和加热,将其静置1小时左右,静置后的上层清液用虹吸法吸出,约有140公斤。
在所得的上层清液中加入0.85公斤活性炭粉末,持续搅拌并再次加热至微沸,维持35分钟后,先用帆布过滤,再用板框过滤,得到已除去苦味成份的大豆多肽酶解滤液。
用重量含量为30%的氢氧化钙溶液调节上述大豆多肽酶解滤液的pH值至7.0,在65℃的温度下真空浓缩,当浓缩液只剩35公斤时,将其置于真空干燥箱中,在60℃的温度下干燥4.5小时左右,再将干燥物通过粉粹机粉粹,即可制得无苦味的大豆多肽粉。
对比例3
本对比例提供一种耐酸和无苦味的大豆寡肽,其是按照以下步骤制得:
用去离子水将大豆分离蛋白(山东禹王实业有限公司)配制成10%(w/w质量百分比,下同)的蛋白溶液,并采用3000转/分钟高速剪切,将大豆蛋白充分分散。
将分散后的大豆蛋白溶液在不断搅拌的条件下加热至52℃;接着将浓度为6mol·L-1的盐酸缓慢地加入到蛋白溶液中,将pH调节至4.5,蛋白聚集成较大的颗粒,此时需要不断的搅拌,防止蛋白沉淀在反应罐底部,15分钟后再次测定pH值,pH值没有变化。
接着将大豆蛋白溶液加热至85℃,保持25分钟,使大豆蛋白充分变性,接着将大豆蛋白溶液降温至52℃。
用水预先充分溶解Protex51F蛋白酶(杰能科公司食品级商品蛋白酶,是产自米曲霉菌株的多肽外切酶和内切酶的混合酶)后再加入变性处理后的大豆蛋白溶液中,使用的蛋白酶质量为大豆蛋白质量的0.5%;反应罐的温度保持在52℃,蛋白溶液的pH值保持在4.5,酶解5个小时;接着于90℃,保持10分钟,钝化蛋白酶的活性;
将上述大豆蛋白溶液以4000转/分钟速度离心3min,取上清液,通过1000Da的PS膜超滤器超滤,接着浓缩、干燥,得到耐酸和无苦味的大豆寡肽。
以下对实施例1-3的大豆肽粉,对比例1-3的大豆肽产品和实施例4-6的高溶解性大豆肽口服液进行检测。
一、采用高效液相色谱仪分析各大豆肽产品的结构,结果如下表所示:
表1各大豆肽产品的结构信息
由于高品质大豆肽的游离氨基酸含量应尽量低,需稳定保持在10%以下,由上表可以看出,对比例1-2的游离氨基酸含量明显高于本实施例1-3高溶解性大豆多肽的游离氨基酸含量,而对比例3虽然在一定程度上解决了大豆肽在酸性条件下的溶解问题,但其产品的游离氨基酸含量依然高达10%-20%,而本实施例1-3的高溶解性大豆多肽的游离氨基酸含量稳定保持在6%以下,因此,本实施例的产品为高品质大豆肽。
二、对各大豆肽产品形成溶液的性状进行检测。
分别取实施例1-3和对比例1-3的大豆肽产品,配置质量分数为10%的大豆肽溶液。
1、经过训练过的感官评价人员通过品尝比较大豆肽溶液的苦味强度。
2、将配置的不同大豆肽溶液使用柠檬酸调到蛋白等电点pH4.2-4.6,放入高压灭菌锅中121℃处理30min,取出放置降温至室温,通过肉眼观察是否有沉淀,并使用紫外分光光度计进行检测不同大豆肽溶液在620nm的透光率,结果如下表所示:
表2不同大豆肽溶液的性能
苦味 | 沉淀 | T620 | |
实施例1 | 基本无苦味 | 无沉淀 | 92% |
实施例2 | 基本无苦味 | 无沉淀 | 90% |
实施例3 | 基本无苦味 | 无沉淀 | 91% |
对比例1 | 明显苦味 | 明显絮状沉淀 | 78%(滤液) |
对比例2 | 明显苦味 | 明显絮状沉淀 | 75%(滤液) |
对比例3 | 明显苦味 | 无沉淀 | 92%(滤液) |
由上表可以看出,实施例1-3的大豆肽溶液的口感和稳定性均明显优于对比例1-2的大豆肽溶液,因此,本实施例的高溶解性大豆多肽更适合制成口服液。
三、根据《保健食品稳定性试验指导原则》进行加速实验,验证本发明实施例的高溶解性大豆肽口服液稳定性,具体是选用实施例4的产品进行加速实验,结果如下表所示。
表3高溶解性大豆肽口服液的稳定性
项目 | 色泽 | 滋、气味 | 性状 | 杂质 |
初始 | 棕黄色 | 无异味 | 液体 | 无肉眼可见杂质 |
一个月 | 棕黄色 | 无异味 | 液体 | 无肉眼可见杂质 |
二个月 | 棕黄色 | 无异味 | 液体 | 无肉眼可见杂质 |
三个月 | 棕黄色 | 无异味 | 液体 | 无肉眼可见杂质 |
由表3可以看出,本发明实施例的产品固形物含量、总氮含量在三个月的加速实验中数据差异不明显;滋、气味、性状无明显改变,无肉眼可见杂质产生;同时重金属含量以及卫生学指标地均符合相关国家标准要求,产品性质稳定。
四、选用实施例4的产品进行缓解疲劳功能性试验。
以昆明小鼠为受试物,体重18±2g,雌雄各20只,按照雌雄、体重随机分为4个组,每组10只。适应性喂养3d后灌胃,空白对照组灌胃生理盐水,实验组分别将本专利口服液浓缩10倍、20倍、40倍进行灌胃处理,设定为低剂量、中剂量、高剂量组,灌胃量按照0.1ml/10g,连续灌胃25d,灌胃期间自由进食和饮水。末次灌胃30min后,将小鼠尾部负重体重5%,放入25±1℃水槽,水深50cm,记录小鼠从入水至发生运动疲劳时的游泳时间,小鼠沉入水面下10s中,不再上浮判定为疲劳。将运动疲劳小鼠即刻继续拧眼眶取血,离心,取上清液,测定血乳酸(BLA)、血尿素氮(BUN)含量,同时取运动疲劳小鼠肝脏,测定肝糖原(LG)。
表4高溶解性大豆肽口服液对小鼠负重游泳时间的影响
组别 | 负重游泳时间/min |
空白对照组 | 32.6±5.4 |
低剂量组 | 38.4±7.8<sup>*</sup> |
中剂量组 | 44.8±10.8<sup>**</sup> |
高剂量组 | 46.7±9.4<sup>**</sup> |
表5高溶解性大豆肽口服液对小鼠体内生化指标的影响
由表4可知:口服液受试组与空白对照组相比较负重游泳时间明显延长,差异具有显著性,且延长时间与灌胃剂量呈正比;同时中剂量及高剂量组的血清尿素氮含量以及血乳酸含量明显低于空白对照组,肝糖原含量明显高于空白对照组,且差异呈现显著性。因此,本发明实施例的高溶解性大豆肽口服液具有显著的缓解疲劳的功效。
综上所述,本发明实施例的高溶解性大豆肽口服液的大豆多肽的含量高,具有显著的缓解疲劳的功效;该高溶解性大豆肽口服液的制备工艺,原料消耗少、工艺简单,适宜规模化大生产。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围,而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
Claims (9)
1.一种高溶解性大豆肽口服液,其特征在于,其是采用以下原料制备而成,按照质量百分数计,所述原料包括:
其中,所述大豆肽粉是按照以下制备方法制得:
按照质量份数取1份大豆分离蛋白和10-20份蒸馏水,混合搅拌均匀,所述混合搅拌的转速为40-70r/min,制成大豆分离蛋白浆液;
将所述大豆分离蛋白浆液升温至50-55℃,在自然pH条件下加入0.002-0.03份碱性蛋白酶,进行第一次酶解0.3-1h,然后加入0.001-0.03份中性蛋白酶,进行第二次酶解1-5h,接着加入有机酸调节pH为5.4-6.2,加入0.001-0.005份酸性蛋白酶,进行第三次酶解0.5-2h,得到酶解液;
将所述酶解液升温至90-100℃并保持15-20min,灭酶活;
将灭酶活后的酶解液降温至60-70℃,进行物理去苦处理,再浓缩至波美度10°-20°进行喷雾干燥。
2.根据权利要求1所述的高溶解性大豆肽口服液,其特征在于,所述高溶解性大豆肽口服液的总氮含量为0.8%-12%,可溶性固形物含量为12.4%-61.4%。
3.根据权利要求1所述的高溶解性大豆肽口服液,其特征在于,所述有机酸选自柠檬酸、苹果酸、乙酸中的一种或多种复配。
4.根据权利要求1所述的高溶解性大豆肽口服液,其特征在于,所述物理去苦处理的方法是:在酶解液中加入其质量2%-6%的活性炭,搅拌处理20-50min,过滤。
5.根据权利要求1所述的高溶解性大豆肽口服液,其特征在于,所述喷雾干燥的条件为:进风温度为160-210℃,出风温度为70-120℃。
6.根据权利要求1所述的高溶解性大豆肽口服液,其特征在于,所述碱性蛋白酶是按照以下制备方法制得:将Svf4-21-7菌种经种子逐级扩大培养,转入发酵罐发酵,得碱性蛋白酶发酵液;将碱性蛋白酶发酵液经硫酸铵盐析、透析脱盐、离子交换层析、聚乙二醇包埋浓缩、凝胶过滤层析后冷冻干燥,制得碱性蛋白酶固体粉末。
7.根据权利要求1所述的高溶解性大豆肽口服液,其特征在于,所述中性蛋白酶是按照以下制备方法制得:将AS1.398菌种经种子逐级扩大培养,转入发酵罐发酵,得中性蛋白酶发酵液;在所述中性蛋白酶发酵液中添加絮凝剂,得中性蛋白酶滤液;将中性蛋白酶滤液离心、粗滤、精滤,添加海藻糖和β-环状糊精,搅拌,收集沉淀,真空干燥,制得中性蛋白酶固体粉末。
8.根据权利要求1所述的高溶解性大豆肽口服液,其特征在于,所述酸性蛋白酶是按照以下制备方法制得:将宇佐美曲霉菌种经种子逐级扩大培养,转入发酵罐发酵,得酸性蛋白酶发酵液;将酸性蛋白酶发酵液经过过滤、浓缩、调配、精滤、真空干燥,得酸性蛋白酶固体粉末。
9.一种如权利要求1所述的高溶解性大豆肽口服液的制备工艺,其特征在于,其包括以下步骤:
先将固体原料干混后,加部分水,于60-70℃搅拌15-40min,再加剩余量的水,加热脱气,调节pH为4.0-5.0,过滤,于117-125℃灭菌10-20min,热灌装。
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