CN110694053A - 治疗骨质疏松症的骨胶原蛋白多肽复方药物及制备方法 - Google Patents

治疗骨质疏松症的骨胶原蛋白多肽复方药物及制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种治疗骨质疏松症的骨胶原蛋白多肽复方药物及制备方法，其包括：骨胶原蛋白粉20‑30份、龟板粉5‑8份、骨碎补5‑8份、补骨脂5‑8份、续断3‑5份、淫羊藿4‑5份、大豆肽粉10‑15份、杜仲叶醇提取物3‑5份、葛根提取物3‑5份、黄瓜籽提取物20‑25份、鱼肝油1‑1.5份、硬脂酸镁1‑2份、赖氨酸0.5‑1份、精氨酸0.5‑1份、色氨酸0.5‑1份、维生素D 0.2‑0.4份。其使黄瓜籽、葛根、肉桂细胞内的Ca2+等微量元素以及营养成分的充分析出，进一步搭配维生素D、赖氨酸、精氨酸、色氨酸以及中药成分的使用，由此显著促进人体对钙的吸收，由此减缓骨骼组织细胞的老化，减少骨钙丢失，增加骨密度并防止骨质疏松症的产生。

Description

治疗骨质疏松症的骨胶原蛋白多肽复方药物及制备方法
技术领域
本发明涉及药品领域。更具体地说，本发明涉及一种治疗骨质疏松症的骨胶原蛋白多肽复方药物及制备方法。
背景技术
骨质疏松症是一种全身性的骨量减少及骨组织显微结构发生变化，骨的脆性增加，骨的强度降低，在无创伤或轻度创伤的情况下，可发生骨折的疾病。随着年龄的增长，由于机体对钙的吸收能力下降，骨吸收速度就会超过骨的形成速度，造成骨的丢失，进而发生骨质疏松。骨质疏松症不但会影响人们的正常工作与生活，还会引起诸多病发症，严重影响人们的生活质量。同时，绝经后的妇女人群由于雌激素缺乏导致的绝经后骨质疏松症也是一种常见病，主要发生在骨量减少及骨组织结构变化，使骨脆性增大易于骨折，以及由骨折引起的疼痛、骨骼变形、出现合并症，乃至死亡等问题，严重地影响老年人的身体健康及生活质量，甚至缩短寿命。
目前，预防和治疗骨质疏松的方法除了增强锻炼、加强饮食营养进行食补外，主要是补充适量钙剂。但是，补钙的药品或保健食品大多数只重视产品中钙的含量，而不注重人体对钙的吸收和利用程度，致使钙剂的供给量大而吸收利用量少，难以达到理想疗效；同时，患骨质疏松的中老年人经常伴有关节软骨退化引起的手、腕、踝、膝、髋、肩和脊椎关节等处的疼痛、炎症、僵硬、肿大、畸形及功能障碍，目前市售的各种补钙产品多以增加骨密度为主，使骨骼硬度增加，对骨关节炎、骨痛等症状作用有限。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种治疗骨质疏松症的骨胶原蛋白多肽复方药物及其制备方法，其通过特殊的制备工艺制备所述黄瓜籽提取物、葛根提取物以及肉桂提取物，使黄瓜籽、葛根、肉桂细胞内的Ca2+等微量元素以及营养成分的充分析出，进一步搭配维生素D、赖氨酸、精氨酸、色氨酸以及龟板粉、骨碎补、补骨脂、续断等中药成分的使用，由此显著促进人体对钙的吸收，由此减缓骨骼组织细胞的老化，减少骨钙丢失，增加骨密度并防止骨质疏松症的产生。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种治疗骨质疏松症的骨胶原蛋白多肽复方药物，其特征在于，按重量份计，其包括：骨胶原蛋白粉20-30份、龟板粉5-8份、骨碎补5-8份、补骨脂5-8份、续断3-5份、淫羊藿4-5份、大豆肽粉10-15份、杜仲叶醇提取物3-5份、葛根提取物3-5份、黄瓜籽提取物20-25份、鱼肝油1-1.5份、硬脂酸镁1-2份、赖氨酸0.5-1份、精氨酸0.5-1份、色氨酸0.5-1份、维生素D 0.2-0.4份。
优选的，所述黄瓜籽提取物的制备方法包括如下步骤：
S11、取新鲜黄瓜籽，在25℃下浸泡10-12h后取出，用去离子水冲洗2-3遍，烘干后磨碎，过100目筛，以获得黄瓜籽粉；
S12、取黄瓜籽粉，并在其中加入其重量5-10倍的去离子水，以获得酶解原料，并通过对所述酶解原料进行酶解获得酶解体系；其中，所述酶解过程包括：
第一次酶解：将所述酶解原料的pH值调节至8.0-9.0，按酶解原料重量的3-4％加入胰蛋白酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至40-45℃，保温35-40min后得到第一酶解体系；
第二次酶解：待第一次酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至3.5-4.5，按第一次酶解体系重量的3.5-4.5％加入果胶酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至45-50℃，保温30-35min后得到第二酶解体系；
第三次酶解：待第二次酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至4.0-5.5，按第二次酶解体系重量的2-4％加入纤维素酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-65℃，保温25-35min后得到第三酶解体系；
S13、待酶解完成后，对获得的第三酶解体系升温至85℃，维持10min，以完成灭酶活过程；
S14、在完成灭酶活过程后的第三酶解体系中加入脱钙液，且所述脱钙液由酸溶液、钙盐、螯合剂以及用于调节细胞膜和/或细胞壁通透性的透性调节液混合组成；按重量比计，按照第三酶解体系：透性调节液：酸溶液：钙盐：螯合剂＝1：(0.1-0.2)：(0.2-0.3)：(0.02-0.04)：(0.01-0.02)进行混合，以获得混合体系，记录混合体系总体积数值；再对混合体系进行温度处理，以获得浸提液；
所述温度处理过程包括：
升温至20-25℃，保温45-60min，再降温至15-20℃，保温25-35min，并记录此时混合体系整体的第一体积数值；按照(总体积-第一体积)*45％补入含有去离子水和脱钙液的第一混合液，且按照重量比计，去离子水：脱钙液＝5：1；补入第一混合液后，升温至35-50℃，保温75-85min，再降温至40-45℃，保温30-35min，并记录此时混合体系整体的第二体积数值；按照(总体积-第二体积)*55％补入含有去离子水和脱钙液的第二混合液，且按照重量比计，去离子水：脱钙液＝4：1；补入第二混合液后，升温至65-80℃，保温80-90min，再降温至55-70℃，保温40-45min；
S15、在浸提液中按其重量的4％加入活性炭，搅拌均匀，在65℃下保温65-85min后离心，去沉渣后的液相再经硅藻土过滤，得到黄瓜籽粗提液，且过滤压力控制在0.25-0.35MPa；再在黄瓜籽粗提液中按其重量的3％加入活性炭，静置45-50min，然后离心，去沉渣，以获得黄瓜籽提取物清液；
S16、将所述黄瓜籽提取物清液经过微滤陶瓷膜进行过滤，操作温度控制在50-60℃，以获得微滤膜透过液；再将微滤膜透过液经过卷式超滤膜进行过滤，操作温度控制在55-65℃，以获得超滤膜透过液；再将超滤膜截留液经过卷式高压反渗透膜进行浓缩，操作温度控制在30-40℃，得到黄瓜籽浓缩液；该黄瓜籽浓缩液即为黄瓜籽提取物。
优选的，按重量百分比计，所述酸溶液由5％无机酸、5％有机酸以及90％去离子水配制而成。
优选的，所述钙盐包括氯化钙、硝酸钙、磷酸氢钙中一种或几种。
优选的，所述螯合剂为EDTA二钠。
优选的，按重量百分比计，所述透性调节液由20％甘油、2％溶菌酶以及78％去离子水配制而成。
优选的，步骤S14中，对混合液进行温度处理的同时进行超声处理，所述超声功率为200-400W，超声处理时间为10-15min。
还提供一种治疗骨质疏松症的骨胶原蛋白多肽复方药物的制备方法，其包括如下步骤：
S100、制备黄瓜籽提取物与葛根提取物；
S200、将上述重量份的骨碎补、补骨脂、续断充分混合，以获得原料混合物，再将所述原料混合物置于一级发酵罐中，加入所述原料混合物重量2-3倍的去离子水以及所述原料混合物重量0.3-0.5倍的纤维素酶，调节pH为6.8-7，且调节至25-35℃进行一级发酵，发酵36-48h后分离出液态的第一发酵液；分离出所述第一发酵液后，向一级发酵罐内的残留物中加入所述一级发酵罐内的残留物重量0.8-1倍的去离子水、所述一级发酵罐内的残留物重量0.2-0.3倍的果胶酶，调节pH为3.5-4.5，且调节至40-50℃再次进行一级发酵，发酵24-36h后分离出液态的第二发酵液；将第一发酵液以及第二发酵液合并，以获得合并发酵液，并对所述合并发酵液进行离心，去除沉淀后获得发酵清液；
S300、称取如权利要求1中所述重量份的骨胶原蛋白粉、维生素D、龟板粉、大豆肽粉、杜仲叶醇提取物、葛根提取物、黄瓜籽提取物、鱼肝油、硬脂酸镁、赖氨酸、精氨酸、色氨酸进行混合，以获得混合物，并于8-10℃温度条件下，在所述混合物中边搅拌边加入其重量2-3倍的去离子水、所述发酵清液以及其重量1-1.5倍的85％甲醇溶解，搅拌转速100-120rpm，得到原液，然后升温至60-75℃，维持15-30min；
S400、步骤S300中处理后的原液经截留分子量≥8000Da的超滤膜过滤，以获得超滤液；
S500、将所述超滤液依次过阳离子柱和阴离子柱，收集经阴离子柱排除的流出液，并将流出液转移至升膜蒸发器中，调节温度至35-40℃、真空度至-0.05－-0.08Mpa，所述超滤液体积缩小至原来的35-40％时停止蒸发，以获得一次浓缩液，再将一次浓缩液转移至刮板式浓缩器继续浓缩，调节温度至35-40℃、真空度至-0.05－-0.08Mpa，所述一次浓缩液体积缩小至原来的20-30％时停止蒸发，以获得二次浓缩液；
S600、将二次浓缩液转移至粗结晶罐内，于温度4℃下静置12-18h，中途每间隔2h以120-150转/min搅拌10min，以获得粗结晶原料；按质量百分比计，将粗结晶原料脱水至含水量≤20％，得粗结晶；再将所述粗结晶重新溶解，调节温度至30-35℃，并加入粗结晶重量1-2％的活性碳搅拌脱色，待脱色液透光度为100％时过滤去除活性碳；
S700、将脱色液转移至结晶锅，调节温度至32-35℃、真空度至-0.05－-0.08Mpa，所述脱色液体积缩小至原来的15-18％时停止蒸发，以获得脱色浓缩液；再将脱色浓缩液转移至育晶锅内，于温度4℃、150-200转/min条件下搅拌30分钟后静置18-24h，静置过程中每间隔2h以120-150转/min搅拌10min；按质量百分比计，再将育晶锅内结晶充分的原料脱水至含水量≤9％，于真空干燥机中烘干30-60min后即得到所述治疗骨质疏松症的骨胶原蛋白多肽复方药物。
优选的，所述葛根提取物的制备方法包括：
(1)清洗：称取原料，浸泡24-36h后，去离子水冲洗2-3遍，干燥粉碎，并过100目筛；
(2)浸提液制备：取过筛后的粉末、缓冲液以及去离子水，按重量比计，按照粉末：缓冲液：去离子水＝1:(3-4)：(10-15)进行混合，以获得混合液，记录混合液总体积数值，以及将pH值调节为6.8-7；再对混合液升温至50-60℃，保温60-75min，以获得浸提液；
(3)离心：将浸提液温度降至室温，转速3000-6000转/分下离心5分钟，以获得离心液；
(4)酶解：对所述离心液进行酶解，以获得酶解液；其中，所述酶解过程包括：
第一次酶解：将离心液的pH值调节至8.0-9.0，按离心液重量的4％加入胰蛋白酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-55℃，保温30-35min后得到第一酶解液；
第二次酶解：待第一次酶解液降至常温后，再调整其pH值至3.0-4.0，按第一次酶解液重量的5％加入果胶酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至40-45℃，保温30-35min后得到第二酶解液；
第三次酶解：待第二次酶解液降至常温后，再调整其pH值至4.5-5.0，按第二次酶解液重量的2％加入纤维素酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-65℃，保温20-30min后得到第三酶解液；
(5)去沉渣及酶解液过滤：在第三酶解液中按其重量的3％加入活性炭，搅拌均匀，在65℃下保温60-90min后离心，去沉渣，以获得清液；
(6)微滤、超滤及浓缩：将清液经过微滤陶瓷膜进行过滤，操作温度控制在55-65℃，以获得微滤膜透过液；将微滤膜透过液经过卷式超滤膜进行过滤，操作温度控制在
55-65℃，以获得超滤膜透过液；将超滤膜截留液经过卷式高压反渗透膜进行浓缩，控制操作温度在40℃以下，得到浓缩液；所述浓缩液即为葛根提取物。
本发明至少包括以下有益效果：
本发明通过反复酶解、阶段性升温的方式制备所述黄瓜籽提取物、葛根提取物以及肉桂提取物，使黄瓜籽、葛根、肉桂细胞内的Ca2+等微量元素以及营养成分的充分析出，进一步搭配维生素D、赖氨酸、精氨酸、色氨酸以及龟板粉、骨碎补、补骨脂、续断等中药成分的使用，由此显著促进人体对钙的吸收，由此减缓骨骼组织细胞的老化，减少骨钙丢失，增加骨密度并防止骨质疏松症的产生。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
图1为本发明中受试样品钙的吸收率柱状图。
具体实施方式
下面结合实例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
需要说明的是，下述实施方案中所述试验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
<实施例1>
按重量份计，本实施例中的治疗骨质疏松症的骨胶原蛋白多肽复方药物包括：骨胶原蛋白粉21份、龟板粉5份、骨碎补5份、补骨脂5份、续断3份、淫羊藿4份、大豆肽粉10份、杜仲叶醇提取物3份、葛根提取物3份、黄瓜籽提取物20份、鱼肝油1份、硬脂酸镁1份、赖氨酸0.5份、精氨酸0.5份、色氨酸0.5份、维生素D 0.2份。
进一步的，黄瓜籽具有补钙、接骨、壮骨、强身的作用，可有效防止骨质疏松和骨密度下降的症状，因此，本实施例还提供了一种黄瓜籽提取物的制备方法，其包括如下步骤：
S11、取新鲜黄瓜籽，在25℃下浸泡10-12h后取出，用去离子水冲洗2-3遍，烘干后磨碎，过100目筛，以获得黄瓜籽粉；
S12、取黄瓜籽粉，并在其中加入其重量5-10倍的去离子水，以获得酶解原料，并通过对所述酶解原料进行酶解获得酶解体系；其中，所述酶解过程包括：
第一次酶解：将所述酶解原料的pH值调节至8.0-9.0，按酶解原料重量的3-4％加入胰蛋白酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至40-45℃，保温35-40min后得到第一酶解体系；
第二次酶解：待第一次酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至3.5-4.5，按第一次酶解体系重量的3.5-4.5％(优选4％)加入果胶酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至45-50℃(优选48℃)，保温30-35min后得到第二酶解体系；
第三次酶解：待第二次酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至4.0-5.5，按第二次酶解体系重量的2-4％(优选3％)加入纤维素酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-65℃(优选60℃)，保温25-35min后得到第三酶解体系；
S13、待酶解完成后，对获得的第三酶解体系升温至85℃，维持10min，以完成灭酶活过程；
S14、在完成灭酶活过程后的第三酶解体系中加入脱钙液，且所述脱钙液由酸溶液、钙盐、螯合剂以及用于调节细胞膜和/或细胞壁通透性的透性调节液混合组成；按重量比计，按照第三酶解体系：透性调节液：酸溶液：钙盐：螯合剂＝1：(0.1-0.2)：(0.2-0.3)：(0.02-0.04)：(0.01-0.02)(优选1:0.15:0.25:0.03:0.015)进行混合，以获得混合体系，记录混合体系总体积数值；再对混合体系进行温度处理，以获得浸提液；其中，按重量百分比计，所述酸溶液由5％无机酸(如体积分数5％的盐酸)、5％有机酸(如柠檬酸)以及90％去离子水配制而成；所述钙盐包括氯化钙、硝酸钙、磷酸氢钙中一种或几种；所述螯合剂为EDTA二钠；按重量百分比计，所述透性调节液由20％甘油、2％溶菌酶以及78％去离子水配制而成；
所述温度处理过程包括：
升温至20-25℃，保温45-60min，再降温至15-20℃，保温25-35min，并记录此时混合体系的第一体积数值；按照(总体积-第一体积)*45％补入含有去离子水和脱钙液的第一混合液，且按照重量比计，去离子水：脱钙液＝5：1；补入第一混合液后，升温至35-50℃，保温75-85min，再降温至40-45℃，保温30-35min，并记录此时混合体系的第二体积数值；按照(总体积-第二体积)*55％补入含有去离子水和脱钙液的第二混合液，且按照重量比计，去离子水：脱钙液＝4：1；补入第二混合液后，升温至65-80℃，保温80-90min，再降温至55-70℃，保温40-45min；
为进一步增加提取效率，对上述混合体系进行温度处理的同时进行超声处理，所述超声功率为200-400W，超声处理时间为10-15min；
S15、在浸提液中按其重量的4％加入活性炭，搅拌均匀，在65℃下保温65-85min后离心，去沉渣后的液相再经硅藻土过滤，得到黄瓜籽粗提液，且过滤压力控制在
0.25-0.35MPa；再在黄瓜籽粗提液中按其重量的3％加入活性炭，静置45-50min，然后离心，去沉渣，以获得黄瓜籽提取物清液；
S16、将所述黄瓜籽提取物清液经过微滤陶瓷膜进行过滤，操作温度控制在50-60℃，以获得微滤膜透过液；再将微滤膜透过液经过卷式超滤膜进行过滤，操作温度控制在55-65℃，以获得超滤膜透过液；再将超滤膜截留液经过卷式高压反渗透膜进行浓缩，操作温度控制在30-40℃，得到黄瓜籽浓缩液；该黄瓜籽浓缩液即为黄瓜籽提取物。
同时，大豆多肽为小分子蛋白质，易被人体吸收，适合蛋白质消化吸收不佳的人群食用，此外，大豆多肽还具有提高免疫力、增强体力、缓解疲劳、降三高等功效。因此，本实施例还提供了一种大豆多肽粉的制备方法，其包括如下步骤：
S21、将黑曲霉菌种以及米曲霉菌种分别接种于独立的马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，再分别放入培养箱中，均于28-35℃(优选为32℃)条件下活化48-72h(优选60h)，以获得活化的黑曲霉菌种以及米曲霉菌种；
采用配制好的第一液体培养基培养活化的黑曲霉菌种，以获得液态黑曲霉种子液，以及采用配制好的第二液体培养基培养活化的米曲霉菌种，以获得液态米曲霉种子液；其中，按重量比计，所述第一液体培养基包括：茶多酚1％、蔗糖1.5％、葡萄糖2.5％、麦芽提取物5％、CoCl.6H2O 0.1％、CuSO4.5H2O 0.05％、FeNaEDTA 2％、H3BO0.25％、Na2MoO4.2H2O0.15％、ZnSO4.7H2O 0.1％、MgSO4 0.1％、KNO3 0.1％、KNO3 0.1％、MnSO4.H2O 0.2％、去离子水86.85％，所述第二液体培养基包括：豆芽汁8％、蔗糖1.5％、葡萄糖2.5％、蛋白胨2％、FeNaEDTA 2％、H3BO30.25％、Na2MoO4.2H2O 0.15％、MgSO4 0.1％、KNO3 0.1％、MnSO4.H2O0.2％、去离子水83.2％；
再将所述液态黑曲霉种子液接种到发酵罐中的第一发酵培养基内进行扩大培养，扩大培养温度30-35℃(优选32℃)，扩大培养pH6.5-7.0，转速500-800rpm(优选650rpm)搅拌，培养时间为1-2d，以获得黑曲霉孢子悬浮液；以及将所述液态米曲霉种子液接种到发酵罐中的第二发酵培养基内进行扩大培养，扩大培养温度30-40℃(优选35℃)，扩大培养pH6.5-7.0，转速400-600rpm(优选500rpm)搅拌，培养时间为1-2d，以获得液态米曲霉孢子悬浮液；其中，按重量比计，所述第一发酵培养基包括：番茄汁10％、可溶性淀粉2％、蔗糖2％、葡萄糖2％、玉米粉2.5％、酵母粉0.5％、FeSO4.7H2O 0.1％、MgSO4 0.05％、KNO30.05％、CuCl2.2H2O 0.1％、(NH4)6Mo7O24.7H2O 0.15％、MnSO4.H2O 0.1％、去离子水80.45％，所述第二发酵培养基包括：麦芽糊精5％、玉米粉8％、木糖2％、酵母膏1.5％、MgSO4 0.05％、KNO3 0.1％、NH4NO3 0.15％、MnSO4.H2O 0.1％、去离子水83.1％；
优选的，为促进黑曲霉和/或米曲霉的生长和提高产酶效率，对液态黑曲霉种子液和/或液态米曲霉种子液进行扩大培养时，每天对接种有黑曲霉种子液或液态米曲霉种子液的对应发酵培养基进行超声处理，且超声处理频率为20-40Khz(优选30Khz)，处理时间为30min；
S22、按重量份计，在反应釜中加入大豆蛋白粉30-45份(优选35份)、去离子水250-350份(优选280份)、黑曲霉孢子悬浮液20-25份(优选22.5份)、米曲霉孢子悬浮液15-20份(优选10份)、La(NO3)3.6H2O 0.5-0.6份(优选0.55份)、NH4Cl 1.5-2.5份(优选2.0份)、KNO31-2份(优选1.5份)，以获得发酵体系，并调节所述发酵体系的pH至6.8-7.0；本步骤中，所述大豆蛋白粉由非转基因大豆制成，且其中分子量≥8000Da的多肽含量≥45％；
对所述发酵体系依次进行三阶段的发酵处理：
第一发酵阶段处理中，发酵温度为30-35℃(优选32℃)，并在转速300-400rpm(优选350rpm)条件下对发酵体系进行搅拌，同时对发酵体系进行第一光照处理和第一磁场处理，处理时间为1-2d；所述第一光照处理为：采用光强为25-30μmol.m-2.s-1(优选28μmol.m-2.s-1)的红光以及光强为30-35μmol.m-2.s-1(优选32μmol.m-2.s-1)的蓝光照射发酵体系，照射处理时间为45-60min(优选50min)；所述第一磁场处理为：采用50Hz、磁场强度为0.45-0.55mT(优选0.5mT)的交变磁场对发酵体系进行处理磁场处理，磁场处理时间为45-60min(优选50min)；
第二发酵阶段处理中，发酵温度为25-35℃(优选30℃)，并在转速500-600rpm(优选550rpm)条件下对发酵体系进行搅拌，同时对发酵体系进行第二光照处理和第二磁场处理，处理时间为1-2d；所述第二光照处理为：采用光强为20-24μmol.m-2.s-1(优选22μmol.m-2.s-1)的红光以及光强为24-28μmol.m-2.s-1(优选25μmol.m-2.s-1)的蓝光照射发酵体系，照射处理时间为35-45min(优选40min)；所述第二磁场处理为；采用50Hz、磁场强度为0.35-0.45mT(优选0.4mT)的交变磁场对发酵体系进行磁场处理，磁场处理时间为35-45min(优选40min)；
第三发酵阶段处理中，发酵温度为25-35℃(优选30℃)，并在转速300-400rpm优选350rpm)条件下对发酵体系进行搅拌，同时对发酵体系进行第三光照处理和第三磁场处理，处理时间为1-2d；所述第三光照处理为：采用光强为16-20μmol.m-2.s-1(优选18μmol.m-2.s-1)的红光以及光强为20-22μmol.m-2.s-1(优选21μmol.m-2.s-1)的蓝光照射发酵体系，照射处理时间为25-35min(优选30min)；所述第三磁场处理为：采用50Hz、磁场强度为0.2-0.3mT(优选0.25mT)的交变磁场对发酵体系进行处理磁场处理，磁场处理时间为25-35min(优选30min)；
S23、将经步骤S22中发酵处理的发酵体系升温至85℃，维持10min，以完成灭酶活过程，获得大豆肽酶解液；
S24、将所述大豆肽酶解液分散于其质量5-6倍的体积分数为95％的乙醇溶液中，且同时进行超声处理及搅拌，超声功率为600-800W(优选为750W)，超声处理时间为10-15min，搅拌转速为100-120转/min；
S25、对经步骤S24处理后的反应体系进行过滤，过滤压力控制在0.3-0.4MPa(优选为0.35Mpa)，过滤温度为50-60℃(优选55℃)，弃滤渣，以获得大豆肽清液；
S26、对大豆肽清液进行冷冻干燥，以获得所述大豆肽粉。
黑曲霉菌种和米曲霉菌种可产生β-葡萄糖苷酶、淀粉酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、糖化酶、纤维素酶等多种酶类，进一步可用于分解大豆蛋白粉中的纤维素、乳糖、大分子蛋白质、淀粉等原料，将其分解成更容易被胃肠吸收的小分子营养成分，改善胃肠免疫功能。因此本步骤中采用黑曲霉菌种以及米曲霉菌种作为发酵菌种，分别用特定的培养基活化、扩大培养后，再在含有La(NO3)3.6H2O的培养基中对含有大分子蛋白质的大豆蛋白粉进行酶解发酵，其中La3+对黑曲霉和米曲霉的生长代谢起到促进作用，提高两者的生长效率，并提高两者各种酶的产量和酶活力，由此可有效分解大豆蛋白粉中的纤维素、淀粉、蛋白等大分子物质。进一步的，三阶段发酵处理中，红光以及蓝光也能通过调节细胞质膜的通透性来促进其同化作用，并提高酶活，交变磁场则通过细胞膜上钙离子的释放来促进黑曲霉和米曲霉生物量的生长，进一步提高酶的产量。同时，为避免红光、蓝光以及交变磁场长期在恒定数值而对黑曲霉和米曲霉的生长产生不良影响，本步骤中采用三阶段发酵处理，且每一阶段红光、蓝光的光强、交变磁场的强度均逐步递减，由此保证黑曲霉和米曲霉始终处于较强的生长活力中，以此持续高效产生多种高活力酶类，进一步分解纤维素、淀粉、蛋白质等大分子，促进大豆蛋白粉中活性成分(如小分子多肽等)的释放。
<实施例2>
与实施例1相比，本实施例中的骨胶原蛋白多肽复方药物的不同之处仅在于，其由以下组分组成：骨胶原蛋白粉30份、龟板粉8份、骨碎补8份、补骨脂8份、续断5份、淫羊藿5份、大豆肽粉14份、杜仲叶醇提取物5份、葛根提取物5份、黄瓜籽提取物25份、鱼肝油1.5份、硬脂酸镁2份、赖氨酸1份、精氨酸1份、色氨酸1份、维生素D 0.4份、水52份。
<实施例3>
与实施例1相比，本实施例中的骨胶原蛋白多肽复方药物的不同之处仅在于，其由以下组分组成：骨胶原蛋白粉25份、龟板粉6份、骨碎补6份、补骨脂7份、续断4份、淫羊藿4.5份、大豆肽粉12份、杜仲叶醇提取物4份、葛根提取物4份、黄瓜籽提取物22份、鱼肝油1.2份、硬脂酸镁1.5份、赖氨酸0.7份、精氨酸0.6份、色氨酸0.8份、维生素D 0.3份、水55份。
<黄瓜籽提取物检测结果>
先选取黄瓜籽洗净；再在水中添加质量百分比为1.0％的柠檬酸以形成提取液，按照黄瓜籽的重量(g)：提取液的体积(mL)＝1:45在所述提取液中加入黄瓜籽，浸泡30min后磨浆机打浆；对浆液进行过滤，分离滤渣得到滤液；且浆液再用200目筛过滤，所得到的滤液即为作为对比例1的黄瓜籽提取物。将其与通过本发明实施例1-3中的制备方法制备获得的黄瓜籽提取物进行检测，以获得总钙含量、仿生提取溶出钙含量和钙溶出度，检测方法参见“几种常见菜籽中钙的含量及溶出度测定”(蔡广知等，《食品科学》，2010年第14期，第272-273页)，检测结果如表1所示。
表1黄瓜籽提取物总钙含量、仿生提取溶出钙含量和钙溶出度
实施例1 实施例2 实施例3 对比例1
总钙含量(mg/g) 10.45±1.33 11.32±0.72 10.49±1.21 7.31±0.12
仿生提取溶出钙含量(mg/g) 5.26±0.34 6.17±0.43 5.88±0.84 2.51±0.28
钙溶出度(％) 50.33 54.50 56.05 34.3
从表1中可以看出，本发明通过阶段性升温、反复酶解以及多重过滤的提取工艺，使得黄瓜籽粉的细胞壁结构被破坏，以此有利于细胞内Ca2+等微量元素以及营养成分的充分析出，特别是通过脱钙液中的酸溶液以及透性调节液改变细胞膜的透性，使得细胞内Ca2+更为充分的游离至细胞外，以此达到充分补钙，减少骨钙丢失，增加骨密度并防止骨质疏松症产生的功效。
<大豆肽分子量检测结果>
首先以申请号201310478523.2(“一种提高低分子量大豆肽产量的方法”)的发明专利申请中实施例1所述方案制备的大豆肽粉作为对比例2。将其与通过本发明实施例1-3中的制备方法制备获得的大豆肽粉进行检测，以获得大豆肽分子量大小及分布范围，以及不同分子量的大豆肽与钙离子的结合量(检测方法参照“促进钙吸收的大豆肽研究及其在饮料中的应用”吕莹等，《2007饮料·运动·健康世界论坛》论文集，2007年)，其结果如表2-3所示。
表2大豆肽分子量大小、分布范围
Figure BDA0002247272970000121
表3不同分子量范围的大豆肽与钙离子的平均钙结合量
Figure BDA0002247272970000122
从表2中可以看出，本发明的大豆多肽粉制备方法中，可通过接种黑曲霉菌种以及米曲霉菌种产生β-葡萄糖苷酶、淀粉酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、糖化酶、纤维素酶等多种酶类，进一步可用于分解大豆蛋白粉中的纤维素、乳糖、大分子蛋白质、淀粉等原料，将其分解成更容易被胃肠吸收的小分子营养成分(如小分子多肽等)，由此改善胃肠免疫功能，缓解各种胃肠不适症状。其中，本发明制备获得的大豆肽粉中，蛋白肽平均分子量约为500Da，其中1000Da以下的多肽占85％，500Da以下的多肽占37％，由此可便于人体胃肠快速、高效吸收，使其充分发挥其功效。进一步的，大豆肽中分解形成不同范围的肽段中，因为其羧基基团可以与钙结合形成稳定的复合物，由此可大幅促进机体对于钙的吸收，具体的，从表3中可以看出，实施例1-3中不同分子量范围内的肽段与与钙离子的平均钙结合量均显著大于对比例2，由此说明，本发明的大豆肽粉制备方法获得的大豆肽粉可将原料进行充分水解，使其形成可充分结合钙离子的不同肽段，极大提高钙离子的吸收效率。
<实施例4>
本实施例还提供了一种治疗骨质疏松症的骨胶原蛋白多肽复方药物的制备方法，其包括：
S100、按照实施例1-3任一项所述制备方法制备黄瓜籽提取物，以及制备葛根提取物；
S200、将实施例1-3任一项所述重量份的骨碎补、补骨脂、续断充分混合，以获得原料混合物，再将所述原料混合物置于一级发酵罐中，加入所述原料混合物重量2-3倍(优选2.5倍)的去离子水以及所述原料混合物重量0.3-0.5倍(优选0.4倍)的纤维素酶，调节pH为6.8-7，且调节至25-35℃(优选30℃)进行一级发酵，发酵36-48h后分离出液态的第一发酵液；分离出所述第一发酵液后，向一级发酵罐内的残留物中加入所述一级发酵罐内的残留物重量0.8-1倍的去离子水、所述一级发酵罐内的残留物重量0.2-0.3倍(优选0.25倍)的果胶酶，调节pH为3.5-4.5(优选4.0)，且调节至40-50℃(优选45℃)再次进行一级发酵，发酵24-36h后分离出液态的第二发酵液；将第一发酵液以及第二发酵液合并，以获得合并发酵液，并对所述合并发酵液进行离心，去除沉淀后获得发酵清液；
S300、称取实施例1-3任一项所述重量份的骨胶原蛋白粉、维生素D、龟板粉、大豆肽粉、杜仲叶醇提取物、葛根提取物、黄瓜籽提取物、鱼肝油、硬脂酸镁、赖氨酸、精氨酸、色氨酸进行混合，以获得混合物，并于8-10℃温度条件下，在所述混合物中边搅拌边加入其重量2-3倍的去离子水、所述发酵清液以及其重量1-1.5倍(优选1.2倍)的85％甲醇溶解，搅拌转速100-120rpm(优选110rpm)，得到原液，然后升温至60-75℃(优选70℃)，维持15-30min(优选25min)；
S400、步骤S300中处理后的原液经截留分子量≥8000Da的超滤膜过滤，以获得超滤液；
S500、将所述超滤液依次过阳离子柱和阴离子柱，收集经阴离子柱排除的流出液，并将流出液转移至升膜蒸发器中，调节温度至35-40℃(优选37℃)、真空度至-0.05－-0.08Mpa(优选-0.07Mpa)，所述超滤液体积缩小至原来的35-40％时停止蒸发，以获得一次浓缩液，再将一次浓缩液转移至刮板式浓缩器继续浓缩，调节温度至35-40℃(优选37℃)、真空度至-0.05－-0.08Mpa(优选-0.07Mpa)，所述一次浓缩液体积缩小至原来的20-30％(优选25％)时停止蒸发，以获得二次浓缩液；
S600、将二次浓缩液转移至粗结晶罐内，于温度4℃下静置12-18h(优选15h)，中途每间隔2h以120-150转/min(优选110转/min)搅拌10min，以获得粗结晶原料；按质量百分比计，将粗结晶原料脱水至含水量≤20％，得粗结晶；再将所述粗结晶重新溶解，调节温度至30-35℃(优选32℃)，并加入粗结晶重量1-2％的活性碳搅拌脱色，待脱色液透光度为100％时过滤去除活性碳；
S700、将脱色液转移至结晶锅，调节温度至32-35℃、真空度至-0.05－-0.08Mpa(优选-0.07Mpa)，所述脱色液体积缩小至原来的15-18％(优选15％)时停止蒸发，以获得脱色浓缩液；再将脱色浓缩液转移至育晶锅内，于温度4℃、150-200转/min条件下搅拌30分钟后静置18-24h，静置过程中每间隔2h以120-150转/min(优选130转/min)搅拌10min；按质量百分比计，再将育晶锅内结晶充分的原料脱水至含水量≤9％，于真空干燥机中烘干30-60min(优选45min)后即得到所述治疗骨质疏松症的骨胶原蛋白多肽复方药物。
进一步的，所述葛根提取物的制备方法相同，均包括：
(1)称取原料(即葛根)，浸泡24-36h后，去离子水冲洗2-3遍，干燥粉碎，并过100目筛，获得原料粉末；
(2)取原料粉末、缓冲液以及去离子水进行混合，按重量比计，原料粉末：缓冲液：去离子水＝1:(3-4)：(10-15)(优选为1:3.5:12)，以获得混合体系，记录混合体系总体积数值，以及将pH值调节为6.8-7；再对混合体系升温至50-60℃(优选为55℃)，保温60-75min(优选65min)，以获得浸提体系；
(3)对所述浸提体系进行酶解，以获得酶解体系；其中，所述酶解过程包括：
第一次酶解：将浸提体系的pH值调节至8.0-9.0(优选8.5)，按浸提体系重量的4％加入胰蛋白酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-55℃(优选52℃)，保温30-35min后得到第一酶解体系；
第二次酶解：待第一次酶解体系降温至20-25℃后，再调整其pH值至3.0-4.0(优选3.5)，按第一次酶解体系重量的5％加入果胶酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至40-45℃，保温30-35min后得到第二酶解体系；
第三次酶解：待第二次酶解体系降温至20-25℃后，再调整其pH值至4.5-5.0(优选4.7)，按第二次酶解体系重量的2％加入纤维素酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-65℃(优选60℃)，保温20-30min后得到第三酶解体系；
(4)在所述第三酶解体系中按其重量的3％加入活性炭，搅拌均匀，在65℃下保温60-90min后离心，去沉渣，以获得清液；
(5)将清液经过微滤陶瓷膜进行过滤，操作温度控制在55-65℃(优选60℃)，以获得微滤膜透过液；将微滤膜透过液经过卷式超滤膜进行过滤，操作温度控制在55-65℃(优选60℃)，以获得超滤膜透过液；将超滤膜截留液经过卷式高压反渗透膜进行浓缩，控制操作温度在30-40℃(优选35℃)，得到浓缩液；所述浓缩液即为葛根提取物。
通过检测获得如表4所示的葛根提取物的总钙含量、仿生提取溶出钙含量和钙溶出度，检测方法参见“几种常见菜籽中钙的含量及溶出度测定”(蔡广知等，《食品科学》，2010年第14期，第272-273页)。
表4葛根提取物的总钙含量、仿生提取溶出钙含量和钙溶出度
葛根提取物 肉桂提取物
总钙含量(mg/g) 12.33±1.03 11.26±0.56
仿生提取溶出钙含量(mg/g) 6.46±0.84 5.28±0.28
钙溶出度(％) 52.39 46.89
由此，可通过多阶段酶解使得葛根的细胞结构(如细胞壁等)组成在不同的温度变化环境下被反复冲击、破坏，更为充分的游离至细胞外，以此达到充分补钙，减少骨钙丢失，增加骨密度并防止骨质疏松症产生的功效至细胞外，以此达到充分补钙，减少骨钙丢失，增加骨密度并防止骨质疏松症产生的功效。
<钙吸收功效评价试验>
在稳定状态下测定大鼠摄入的钙量及粪便中排出的钙量，两者的差值即为表观吸收的钙。钙的表观吸收率(％)＝(摄入钙-粪钙)/摄入钙×100％。由于钙的吸收率受鼠龄、性别、饲料成分及钙摄入水平的影响较大，应在其他影响因素尽可能相同条件下，将受试样品与碳酸钙的吸收率进行比较，对受试样品钙的吸收率进行评价。
选取出生四周的断乳大鼠经适应期1周后，分笼饲养4周。每组至少有同性别动物8只。饮用去离子水以避免从饮水中获得钙。每周测量身长、体重一次。用调配的低钙饲料为基础饲料。试验设置对照组以及各实施例组。实验设三个实施例组，同时设一个空白对照组和与相应剂量受试物钙水平相同的碳酸钙对照组。
按照以下方式对各组大鼠进行处理：空白对照组：自由进食饮水；阳性对照组：碳酸钙药剂量为3.6mg/kg·d，进行灌胃给药；高剂量组：按给药剂量为2.7mg/kg·d准备本发明的骨胶原蛋白多肽复方药物(以下均为“骨胶原蛋白多肽复方药物”)，进行灌胃给药；中剂量组：按给药剂量为1.8mg/kg·d准备本发明的骨胶原蛋白多肽复方药物，进行灌胃给药；低剂量组：按给药剂量为0.9mg/kg·d准备本发明的骨胶原蛋白多肽复方药物，进行灌胃给药。
3周后进行3天钙代谢实验。记录3天进食量，收集72小时粪便，测定饲料及粪便中钙含量。用原子吸收分光光度法进行测定饲料及粪便中钙。摄入钙(mg/d)＝饲料中钙含量(mg/g)x饲料消耗量(g/d)；粪钙(mg/d)＝粪便中钙含量(mg/g)x粪便排出量(g/d)。结果如图1所示。
从图1中可看出，受试样品中实施例1、2、3钙的吸收率均显著高于相同水平的碳酸钙。因此说明本发明中的骨胶原蛋白多肽复方药物能促进钙的吸收。
<临床试验>
1.1研究对象
筛选骨质疏松的患者100例作为研究对象，所有患者均经过病史、血糖、生化全项等检查，排除1年内服用激素、维生素D、腰椎间盘突出、强直性脊柱炎、肿瘤、妊娠妇女等。根据随机分组，对照组50例，男性4例，女性6例，年龄61-79岁，平均年龄(64.9±5.2)岁；病程2-34年，平均病程(15.7±1.5)。观察组50例，男性9例，女性21例，年龄65-79岁，平均年龄(64.2±5.4)岁；病程2-33年，平均病程(16.2±1.4)年。其中女性绝经人数占女性案例90％对比两组患者年龄、性别、病程等一般资料，差异无统计学意义，有对比性。
1.2治疗方法
对照组：对照组患者给予碳酸钙D3片；规格：500mg/片，1片/次，2次/，自由饮食；
观察组：观察组患者给予本发明的骨胶原蛋白多肽复方药物药片；规格：500mg/片，1片/次，2次/，自由饮食。
1.3观察指标
6个月后，比较两组患者的疗效及期间不良反应情况。治疗前后，采用X线骨密度仪测定患者的腰椎、股骨颈；治疗前后检测患者骨标志物，包括血骨钙素(BGP)、骨特异性碱性磷酸酶(BALP)、1型胶原羧基端末态(CTX)的含量。
1.4评价指标
连续治疗6周后，对比两组患者临床疗效和并发症的发生率。有效：患者骨质疏松症状有改善，骨密度上升；无效：患者骨质疏松症状严重，骨密度无变化。
治疗前后骨密度及骨标志物含量变化如表5所示，临床疗效有效率如表6所示。
表5两组患者治疗前后骨密度及骨标志物含量变化
Figure BDA0002247272970000171
表6两组研究对象临床疗效比较
组别 不良反应(例) 有效例 无效例 有效率
对照组 5 41 4 82％
观察组 2 48 2 96％
表表5-6可以看出，观察组患者的总有效率为96％，对照组患者的总有效率82％，观察组总有效率显著高于对照组，且治疗后观察组腰椎、股骨颈的骨密度均显著高于对照组。表明本发明的骨胶原蛋白多肽复方药物治疗骨质疏松的效果优于碳酸钙D3，并促进钙的吸收，可有效补充钙质，从而快速提高骨密度。
需要说明的是，上述实施例1至4中的技术方案可进行任意组合，且组合后获得的技术方案均属于本发明的保护范围。
本发明通过反复酶解、阶段性升温的方式制备所述黄瓜籽提取物、葛根提取物以及肉桂提取物，使黄瓜籽、葛根、肉桂细胞内的Ca2+等微量元素以及营养成分的充分析出，进一步搭配维生素D、赖氨酸、精氨酸、色氨酸以及龟板粉、骨碎补、补骨脂、续断等中药成分的使用，由此显著促进人体对钙的吸收，由此减缓骨骼组织细胞的老化，减少骨钙丢失，增加骨密度并防止骨质疏松症的产生。
这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本发明的说明的。对本发明的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实例。

Claims (9)

1.治疗骨质疏松症的骨胶原蛋白多肽复方药物，其特征在于，按重量份计，其包括：骨胶原蛋白粉20-30份、龟板粉5-8份、骨碎补5-8份、补骨脂5-8份、续断3-5份、淫羊藿4-5份、大豆肽粉10-15份、杜仲叶醇提取物3-5份、葛根提取物3-5份、黄瓜籽提取物20-25份、鱼肝油1-1.5份、硬脂酸镁1-2份、赖氨酸0.5-1份、精氨酸0.5-1份、色氨酸0.5-1份、维生素D0.2-0.4份。
2.如权利要求1所述的骨胶原蛋白多肽复方药物，其特征在于，所述黄瓜籽提取物的制备方法包括如下步骤：
S11、取新鲜黄瓜籽，在25℃下浸泡10-12h后取出，用去离子水冲洗2-3遍，烘干后磨碎，过100目筛，以获得黄瓜籽粉；
S12、取黄瓜籽粉，并在其中加入其重量5-10倍的去离子水，以获得酶解原料，并通过对所述酶解原料进行酶解获得酶解体系；其中，所述酶解过程包括：
第一次酶解：将所述酶解原料的pH值调节至8.0-9.0，按酶解原料重量的3-4％加入胰蛋白酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至40-45℃，保温35-40min后得到第一酶解体系；
第二次酶解：待第一次酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至3.5-4.5，按第一次酶解体系重量的3.5-4.5％加入果胶酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至45-50℃，保温30-35min后得到第二酶解体系；
第三次酶解：待第二次酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至4.0-5.5，按第二次酶解体系重量的2-4％加入纤维素酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-65℃，保温25-35min后得到第三酶解体系；
S13、待酶解完成后，对获得的第三酶解体系升温至85℃，维持10min，以完成灭酶活过程；
S14、在完成灭酶活过程后的第三酶解体系中加入脱钙液，且所述脱钙液由酸溶液、钙盐、螯合剂以及用于调节细胞膜和/或细胞壁通透性的透性调节液混合组成；按重量比计，按照第三酶解体系：透性调节液：酸溶液：钙盐：螯合剂＝1：(0.1-0.2)：(0.2-0.3)：(0.02-0.04)：(0.01-0.02)进行混合，以获得混合体系，记录混合体系总体积数值；再对混合体系进行温度处理，以获得浸提液；
所述温度处理过程包括：
升温至20-25℃，保温45-60min，再降温至15-20℃，保温25-35min，并记录此时混合体系整体的第一体积数值；按照(总体积-第一体积)*45％补入含有去离子水和脱钙液的第一混合液，且按照重量比计，去离子水：脱钙液＝5：1；补入第一混合液后，升温至35-50℃，保温75-85min，再降温至40-45℃，保温30-35min，并记录此时混合体系整体的第二体积数值；按照(总体积-第二体积)*55％补入含有去离子水和脱钙液的第二混合液，且按照重量比计，去离子水：脱钙液＝4：1；补入第二混合液后，升温至65-80℃，保温80-90min，再降温至55-70℃，保温40-45min；
S15、在浸提液中按其重量的4％加入活性炭，搅拌均匀，在65℃下保温65-85min后离心，去沉渣后的液相再经硅藻土过滤，得到黄瓜籽粗提液，且过滤压力控制在0.25-0.35MPa；再在黄瓜籽粗提液中按其重量的3％加入活性炭，静置45-50min，然后离心，去沉渣，以获得黄瓜籽提取物清液；
S16、将所述黄瓜籽提取物清液经过微滤陶瓷膜进行过滤，操作温度控制在50-60℃，以获得微滤膜透过液；再将微滤膜透过液经过卷式超滤膜进行过滤，操作温度控制在55-65℃，以获得超滤膜透过液；再将超滤膜截留液经过卷式高压反渗透膜进行浓缩，操作温度控制在30-40℃，得到黄瓜籽浓缩液；该黄瓜籽浓缩液即为黄瓜籽提取物。
3.如权利要求2所述的骨胶原蛋白多肽复方药物，其特征在于，按重量百分比计，所述酸溶液由5％无机酸、5％有机酸以及90％去离子水配制而成。
4.如权利要求2所述的骨胶原蛋白多肽复方药物，其特征在于，所述钙盐包括氯化钙、硝酸钙、磷酸氢钙中一种或几种。
5.如权利要求2所述的骨胶原蛋白多肽复方药物，其特征在于，所述螯合剂为EDTA二钠。
6.如权利要求2所述的骨胶原蛋白多肽复方药物，其特征在于，按重量百分比计，所述透性调节液由20％甘油、2％溶菌酶以及78％去离子水配制而成。
7.如权利要求2所述的骨胶原蛋白多肽复方药物，其特征在于，步骤S14中，对混合液进行温度处理的同时进行超声处理，所述超声功率为200-400W，超声处理时间为10-15min。
8.一种治疗骨质疏松症的骨胶原蛋白多肽复方药物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S100、制备黄瓜籽提取物与葛根提取物；
S200、将如权利要求1所述重量份的骨碎补、补骨脂、续断充分混合，以获得原料混合物，再将所述原料混合物置于一级发酵罐中，加入所述原料混合物重量2-3倍的去离子水以及所述原料混合物重量0.3-0.5倍的纤维素酶，调节pH为6.8-7，且调节至25-35℃进行一级发酵，发酵36-48h后分离出液态的第一发酵液；分离出所述第一发酵液后，向一级发酵罐内的残留物中加入所述一级发酵罐内的残留物重量0.8-1倍的去离子水、所述一级发酵罐内的残留物重量0.2-0.3倍的果胶酶，调节pH为3.5-4.5，且调节至40-50℃再次进行一级发酵，发酵24-36h后分离出液态的第二发酵液；将第一发酵液以及第二发酵液合并，以获得合并发酵液，并对所述合并发酵液进行离心，去除沉淀后获得发酵清液；
S300、称取如权利要求1中所述重量份的骨胶原蛋白粉、维生素D、龟板粉、大豆肽粉、杜仲叶醇提取物、葛根提取物、黄瓜籽提取物、鱼肝油、硬脂酸镁、赖氨酸、精氨酸、色氨酸进行混合，以获得混合物，并于8-10℃温度条件下，在所述混合物中边搅拌边加入其重量2-3倍的去离子水、所述发酵清液以及其重量1-1.5倍的85％甲醇溶解，搅拌转速100-120rpm，得到原液，然后升温至60-75℃，维持15-30min；
S400、步骤S300中处理后的原液经截留分子量≥8000Da的超滤膜过滤，以获得超滤液；
S500、将所述超滤液依次过阳离子柱和阴离子柱，收集经阴离子柱排除的流出液，并将流出液转移至升膜蒸发器中，调节温度至35-40℃、真空度至-0.05－-0.08Mpa，所述超滤液体积缩小至原来的35-40％时停止蒸发，以获得一次浓缩液，再将一次浓缩液转移至刮板式浓缩器继续浓缩，调节温度至35-40℃、真空度至-0.05－-0.08Mpa，所述一次浓缩液体积缩小至原来的20-30％时停止蒸发，以获得二次浓缩液；
S600、将二次浓缩液转移至粗结晶罐内，于温度4℃下静置12-18h，中途每间隔2h以120-150转/min搅拌10min，以获得粗结晶原料；按质量百分比计，将粗结晶原料脱水至含水量≤20％，得粗结晶；再将所述粗结晶重新溶解，调节温度至30-35℃，并加入粗结晶重量1-2％的活性碳搅拌脱色，待脱色液透光度为100％时过滤去除活性碳；
S700、将脱色液转移至结晶锅，调节温度至32-35℃、真空度至-0.05－-0.08Mpa，所述脱色液体积缩小至原来的15-18％时停止蒸发，以获得脱色浓缩液；再将脱色浓缩液转移至育晶锅内，于温度4℃、150-200转/min条件下搅拌30分钟后静置18-24h，静置过程中每间隔2h以120-150转/min搅拌10min；按质量百分比计，再将育晶锅内结晶充分的原料脱水至含水量≤9％，于真空干燥机中烘干30-60min后即得到所述治疗骨质疏松症的骨胶原蛋白多肽复方药物。
9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述葛根提取物的制备方法包括：
(1)清洗：称取原料，浸泡24-36h后，去离子水冲洗2-3遍，干燥粉碎，并过100目筛；
(2)浸提液制备：取过筛后的粉末、缓冲液以及去离子水，按重量比计，按照粉末：缓冲液：去离子水＝1:(3-4)：(10-15)进行混合，以获得混合液，记录混合液总体积数值，以及将pH值调节为6.8-7；再对混合液升温至50-60℃，保温60-75min，以获得浸提液；
(3)离心：将浸提液温度降至室温，转速3000-6000转/分下离心5分钟，以获得离心液；
(4)酶解：对所述离心液进行酶解，以获得酶解液；其中，所述酶解过程包括：
第一次酶解：将离心液的pH值调节至8.0-9.0，按离心液重量的4％加入胰蛋白酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-55℃，保温30-35min后得到第一酶解液；
第二次酶解：待第一次酶解液降至常温后，再调整其pH值至3.0-4.0，按第一次酶解液重量的5％加入果胶酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至40-45℃，保温30-35min后得到第二酶解液；
第三次酶解：待第二次酶解液降至常温后，再调整其pH值至4.5-5.0，按第二次酶解液重量的2％加入纤维素酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-65℃，保温20-30min后得到第三酶解液；
(5)去沉渣及酶解液过滤：在第三酶解液中按其重量的3％加入活性炭，搅拌均匀，在65℃下保温60-90min后离心，去沉渣，以获得清液；
(6)微滤、超滤及浓缩：将清液经过微滤陶瓷膜进行过滤，操作温度控制在55-65℃，以获得微滤膜透过液；将微滤膜透过液经过卷式超滤膜进行过滤，操作温度控制在55-65℃，以获得超滤膜透过液；将超滤膜截留液经过卷式高压反渗透膜进行浓缩，控制操作温度在40℃以下，得到浓缩液；所述浓缩液即为葛根提取物。
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