CN108424468A - 一种鲍鱼多糖的制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种鲍鱼多糖的制备工艺，包括脱脂、提取以及纯化。有益效果为：本发明所公布的制备工艺方法简单，鲍鱼多糖的纯度大，提取率高，所制备的第二级鲍鱼多糖具有优良的抗肿瘤活性；通过脱脂处理，避免了脂质对后续提取和纯化过程的影响，提高了所制备的鲍鱼多糖的纯度；通过酶解法提取鲍鱼多糖，能够有效破坏蛋白质与多糖之间的结合键，使鲍鱼多糖能够被充分提取，提高鲍鱼的资源利用率。
Description
技术领域
本发明涉及有效成分提取技术领域，尤其是涉及一种鲍鱼多糖的制备工艺。
背景技术
近几年来，随着分子生物学的发展，人们逐渐认识到多糖、蛋白质与核算一样是涉及生命活动本质的三类生物大分子之一。多糖是一类具有广泛生活活性的生物大分子，又称多聚糖。它不仅是人体生命必需的成分，而且也存在于一切细胞膜结构中，幷参与多种生命功能活动。
目前，国内外研究较多的是食用、药用菌多糖，随着对多糖研究的深入，人们逐渐把目光转向动物多糖，尤其是海洋动物多糖的研究，叶日益成为科研工作者研究的热点和焦点。
发明内容
本发明的目的是提供一种鲍鱼多糖的制备工艺，方法简单，鲍鱼多糖的纯度大，提取率高，提取时间短，所制备的第二级鲍鱼多糖具有优良的抗肿瘤活性。
为了达到上述目的本发明提供的技术方案为：一种鲍鱼多糖的制备工艺，包括以下步骤：
脱脂：对鲍鱼进行粉碎，加入石油醚，浸泡，除去石油醚，将所得鲍鱼置于40-45℃干燥，通过脱脂处理，避免了脂质对后续提取和纯化过程的影响，提高了所制备的鲍鱼多糖的纯度；
提取：取干燥的鲍鱼，加入蒸馏水，调pH为4-5，加入木瓜蛋白酶提取，然后升温至100℃灭酶活，抽滤，将所得滤液浓缩得鲍鱼多糖粗体物，通过酶解法提取鲍鱼多糖，能够有效破坏蛋白质与多糖之间的结合键，使鲍鱼多糖能够被充分提取，提高鲍鱼的资源利用率；
纯化：将所得鲍鱼多糖粗提物用Sevage法进行除蛋白，接着加入95％的乙醇醇沉24h，最后采用丙酮进行分级沉淀，该条件下，多糖的损失率低，对多糖活性的破坏小，且通过分级沉淀能够极大地提高鲍鱼多糖的利用价值。
作为优选，鲍鱼与石油醚的料液比为1g:3.5-4mL。该料液比提供了恰当的浓度梯度，增加了鲍鱼所含的脂质向石油醚中扩散的动力，从而提高了脂质的去除率，且该条件下石油醚消耗较少，节约了资源，具有良好的环境保护效益。
作为优选，浸泡时间为9-10h。该条件下，鲍鱼中所含的脂质可以被石油醚充分溶出，且所用的时间较短，缩短了制备工艺的周期，提高了工艺的经济价值。
作为优选，木瓜蛋白酶的加入量占鲍鱼质量的0.01％-0.02％，提取温度为45-55℃，提取时间为3-4h。该条件下，蛋白酶的活性高，酶解反应速度快，且木瓜蛋白酶与底物结合的机率高，使蛋白酶能够有效破坏鲍鱼多糖与蛋白质之间的氢键，使鲍鱼多糖能够被充分提取。
作为优选，分级沉淀过程为：将醇沉所得的鲍鱼多糖溶于蒸馏水，加入丙酮至出现沉淀，离心得到上清液和沉淀，所述沉淀为第一级鲍鱼多糖，接着向所得的上清液中加入丙酮至出现沉淀，所得沉淀为第二级鲍鱼多糖。通过分级沉淀，有利于鲍鱼多糖的精细化利用，所得到的第二级鲍鱼多糖具有优良的抗肿瘤活性。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明所公布的制备工艺方法简单，鲍鱼多糖的纯度大，提取率高，所制备的第二级鲍鱼多糖具有优良的抗肿瘤活性；通过脱脂处理，避免了脂质对后续提取和纯化过程的影响，提高了所制备的鲍鱼多糖的纯度；通过酶解法提取鲍鱼多糖，能够有效破坏蛋白质与多糖之间的结合键，使鲍鱼多糖能够被充分提取，提高鲍鱼的资源利用率。
具体实施方式
以下通过实施例进一步详细描述：
实施例1：一种鲍鱼多糖的制备工艺，包括以下步骤：
1)脱脂：对鲍鱼进行粉碎，按料液比1g:3.5mL加入石油醚，浸泡9h，除去石油醚，将所得鲍鱼置于40℃干燥，通过脱脂处理，避免了脂质对后续提取和纯化过程的影响，提高了所制备的鲍鱼多糖的纯度，且该料液比提供了恰当的浓度梯度，增加了鲍鱼所含的脂质向石油醚中扩散的动力，从而提高了脂质的去除率，且该条件下石油醚消耗较少，节约了资源，具有良好的环境保护效益；
2)提取：取干燥的鲍鱼，加入蒸馏水，调pH为4，加入占鲍鱼质量的0.01％木瓜蛋白酶，在温度为45℃提取3h，然后升温至100℃灭酶活，抽滤，将所得滤液浓缩得鲍鱼多糖粗体物，通过酶解法提取鲍鱼多糖，能够有效破坏蛋白质与多糖之间的结合键，使鲍鱼多糖能够被充分提取，提高鲍鱼的资源利用率，且该条件下蛋白酶的活性高，酶解反应速度快，且木瓜蛋白酶与底物结合的机率高，使蛋白酶能够有效破坏鲍鱼多糖与蛋白质之间的氢键，使鲍鱼多糖能够被充分提取；
3)纯化：将所得鲍鱼多糖粗提物用Sevage法进行除蛋白，接着加入95％的乙醇醇沉24h，最后采用丙酮进行分级沉淀，具体过程为：将醇沉所得的鲍鱼多糖溶于蒸馏水，加入丙酮至出现沉淀，离心得到上清液和沉淀，所述沉淀为第一级鲍鱼多糖，接着向所得的上清液中加入丙酮至出现沉淀，所得沉淀为第二级鲍鱼多糖。通过分级沉淀，有利于鲍鱼多糖的精细化利用，所得到的第二级鲍鱼多糖具有优良的抗肿瘤活性，该条件下，多糖的损失率低，对多糖活性的破坏小，且通过分级沉淀能够极大地提高鲍鱼多糖的利用价值，所得到的第二级鲍鱼多糖具有优良的抗肿瘤活性。
实施例2：一种鲍鱼多糖的制备工艺，包括以下步骤：
1)脱脂：对鲍鱼进行粉碎，按料液比1g:4mL加入石油醚，浸泡10h，除去石油醚，将所得鲍鱼置于45℃干燥，通过脱脂处理，避免了脂质对后续提取和纯化过程的影响，提高了所制备的鲍鱼多糖的纯度，且该料液比提供了恰当的浓度梯度，增加了鲍鱼所含的脂质向石油醚中扩散的动力，从而提高了脂质的去除率，且该条件下石油醚消耗较少，节约了资源，具有良好的环境保护效益；
2)提取：取干燥的鲍鱼，加入蒸馏水，调pH为5，加入占鲍鱼质量的0.02％木瓜蛋白酶，在温度为55℃提取4h，然后升温至100℃灭酶活，抽滤，将所得滤液浓缩得鲍鱼多糖粗体物，通过酶解法提取鲍鱼多糖，能够有效破坏蛋白质与多糖之间的结合键，使鲍鱼多糖能够被充分提取，提高鲍鱼的资源利用率，且该条件下蛋白酶的活性高，酶解反应速度快，且木瓜蛋白酶与底物结合的机率高，使蛋白酶能够有效破坏鲍鱼多糖与蛋白质之间的氢键，使鲍鱼多糖能够被充分提取；
3)纯化：将所得鲍鱼多糖粗提物用Sevage法进行除蛋白，接着加入95％的乙醇醇沉24h，最后采用丙酮进行分级沉淀，具体过程为：将醇沉所得的鲍鱼多糖溶于蒸馏水，加入丙酮至出现沉淀，离心得到上清液和沉淀，所述沉淀为第一级鲍鱼多糖，接着向所得的上清液中加入丙酮至出现沉淀，所得沉淀为第二级鲍鱼多糖。通过分级沉淀，有利于鲍鱼多糖的精细化利用，所得到的第二级鲍鱼多糖具有优良的抗肿瘤活性，该条件下，多糖的损失率低，对多糖活性的破坏小，且通过分级沉淀能够极大地提高鲍鱼多糖的利用价值，所得到的第二级鲍鱼多糖具有优良的抗肿瘤活性。
实施例3：一种鲍鱼多糖的制备工艺，包括以下步骤：
1)脱脂：对鲍鱼进行粉碎，按料液比1g:3.6mL加入石油醚，浸泡9h，除去石油醚，将所得鲍鱼置于42℃干燥，通过脱脂处理，避免了脂质对后续提取和纯化过程的影响，提高了所制备的鲍鱼多糖的纯度，且该料液比提供了恰当的浓度梯度，增加了鲍鱼所含的脂质向石油醚中扩散的动力，从而提高了脂质的去除率，且该条件下石油醚消耗较少，节约了资源，具有良好的环境保护效益；
2)提取：取干燥的鲍鱼，加入蒸馏水，调pH为4，加入占鲍鱼质量的0.015％木瓜蛋白酶，再加入占木瓜蛋白酶质量0.02％的3，5-二氯苯甲酸和占木瓜蛋白酶质量0.023％的3,5-二羟基苯乙酮，在温度为47℃提取4h，然后升温至100℃灭酶活，抽滤，将所得滤液浓缩得鲍鱼多糖粗体物，通过酶解法提取鲍鱼多糖，能够有效破坏蛋白质与多糖之间的结合键，使鲍鱼多糖能够被充分提取，提高鲍鱼的资源利用率，且该条件下蛋白酶的活性高，酶解反应速度快，且木瓜蛋白酶与底物结合的机率高，使蛋白酶能够有效破坏鲍鱼多糖与蛋白质之间的氢键，使鲍鱼多糖能够被充分提取，所加入的3,5-二羟基苯乙酮、3,5-二氯苯甲酸与木瓜蛋白酶肽链中的Asn-158具有协同作用，能够促进His-159的咪唑环的摆放，使得Cys-25的去质子化过程更加顺畅，提高了Cys-25与羰基碳之间的亲核反应速率，从而提高了蛋白酶的酶解速率，缩短了鲍鱼多糖的提取时间；
3)纯化：将所得鲍鱼多糖粗提物用Sevage法进行除蛋白，接着加入95％的乙醇醇沉24h，最后采用丙酮进行分级沉淀，具体过程为：将醇沉所得的鲍鱼多糖溶于蒸馏水，加入丙酮至出现沉淀，离心得到上清液和沉淀，所述沉淀为第一级鲍鱼多糖，接着向所得的上清液中加入丙酮至出现沉淀，所得沉淀为第二级鲍鱼多糖。通过分级沉淀，有利于鲍鱼多糖的精细化利用，所得到的第二级鲍鱼多糖具有优良的抗肿瘤活性，该条件下，多糖的损失率低，对多糖活性的破坏小，且通过分级沉淀能够极大地提高鲍鱼多糖的利用价值，所得到的第二级鲍鱼多糖具有优良的抗肿瘤活性。
以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。
Claims (6)
1.一种鲍鱼多糖的制备工艺，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：
1)脱脂：对鲍鱼进行粉碎，加入石油醚，浸泡，除去石油醚，将所得鲍鱼置于40-45℃干燥；
2)提取：取干燥的鲍鱼，加入蒸馏水，调pH为4-5，加入木瓜蛋白酶提取，然后升温至100℃灭酶活，抽滤，将所得滤液浓缩得鲍鱼多糖粗体物；
3)纯化：将所得鲍鱼多糖粗提物用Sevage试剂进行除蛋白，接着加入95％的乙醇醇沉24h，最后采用丙酮进行分级沉淀。
2.根据权利要求1所述的一种鲍鱼多糖的制备工艺，其特征在于：所述步骤1)中鲍鱼与石油醚的料液比为1g:3.5-4mL。
3.根据权利要求1所述的一种鲍鱼多糖的制备工艺，其特征在于：所述步骤1)中浸泡时间为9-10h。
4.根据权利要求1所述的一种鲍鱼多糖的制备工艺，其特征在于：所述步骤2)中提取温度为45-55℃，提取时间为3-4h。
5.根据权利要求1所述的一种鲍鱼多糖的制备工艺，其特征在于：所述步骤2)中木瓜蛋白酶的加入量占鲍鱼质量的0.01％-0.02％。
6.根据权利要求1所述的一种鲍鱼多糖的制备工艺，其特征在于：所述步骤2)中分级沉淀过程为：将醇沉所得的鲍鱼多糖溶于蒸馏水，加入丙酮至出现沉淀，离心得到上清液和沉淀，所述沉淀为第一级鲍鱼多糖，接着向所得的上清液中加入丙酮至出现沉淀，所得沉淀为第二级鲍鱼多糖。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113150178A (zh) * | 2021-04-14 | 2021-07-23 | 大连工业大学 | 一种硫酸化鲍鱼多糖及其在抑制新冠病毒中的应用 |
| CN114805623A (zh) * | 2022-04-22 | 2022-07-29 | 福建大众健康生物科技有限公司 | 一种鲍鱼多糖的超低温冻融加压提取工艺 |
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| CN104356250A (zh) * | 2014-11-27 | 2015-02-18 | 秦富英 | 一种提取大蒜粗多糖的方法 |
| CN104403026A (zh) * | 2014-12-24 | 2015-03-11 | 山东辰中生物制药有限公司 | 从动物肺脏中分离硫酸乙酰肝素的方法 |
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