CN101440388A

CN101440388A - 一种提取分离纯化龙眼肉多糖的方法

Info

Publication number: CN101440388A
Application number: CN 200810107434
Authority: CN
Inventors: 李雪华; 贾琦; 黄燕军; 龙盛京; 李福森; 肖庆
Original assignee: Guangxi Medical University
Current assignee: Guangxi Medical University
Priority date: 2008-12-30
Filing date: 2008-12-30
Publication date: 2009-05-27

Abstract

一种提取分离纯化龙眼肉多糖的方法。是将龙眼干燥果实去皮、核后的果肉采用超声浸提结合酶水解进行纯化。采用本发明所述方法，龙眼肉多糖提取率高，且不需高温、耗能低、提取时间短；脱蛋白效率高，多糖损失率低，且操作简单，减少使用化学试剂氯仿及正丁醇等有毒试剂，降低提取纯化多糖成本。龙眼肉多糖得率为7.0％，龙眼肉多糖含量高达64.4％，蛋白去除率达86.7％，多糖损失率仅为4.9％。

Description

一种提取分离纯化龙眼肉多糖的方法

技术领域

本发明涉及一种中药材的提取分离纯化方法包括超声波提取法和酶水解去蛋白纯化法，具体涉及龙眼肉多糖的提取分离纯化方法。

背景技术

传统多糖的提取方法是用热水浸提法进行提取。热水浸提要严格控制好温度，否则高温极易引起多糖结构的改变。而且耗时长、耗能高、提取率低。

黄寿祺等公开了一种龙眼多糖的提取工艺，包括脱脂、双酶水解、水浸提、酒精沉淀和干燥粉碎等步骤(专利申请号CN00107538.1)陈哲超等采用超滤膜分离提纯技术，使用1万分子量单位的膜分离器，小于此孔径的单糖、维生素、微量元素和无机盐等排入到饮料液中，获得一种透明的营养饮料；大于此孔径的大分子多糖就被分离出来，获得龙眼多糖(专利申请号CN200410077958.7)。赵兵等采用超声强化提取，提取液经液～固分离后，再经过浓缩、絮凝、过滤、冷冻干燥后得到龙眼粗多糖(专利申请号CN200610011689.3)。

常用的去除蛋白的纯化方法有：三氯醋酸法及sevag法。两法相比，三氯醋酸法有较好的脱蛋白效果，但多糖的损失率较高，因此sevag法是较常用的方法。但是该法需要大量氯仿，毒性大，环境污染大，且脱蛋白效率低。

如何经济、简便、低耗能地提高龙眼肉多糖的提取率，绿色环保地分离纯化龙眼肉多糖，以减少大分子蛋白质对多糖生物活性的影响，最大程度的降低成本、提高效益是人们一直想解决的问题。

发明内容

本发明的目的是一种提取分离纯化龙眼肉多糖的方法，它可以经济、简便、低耗能地提高龙眼肉粗多糖的提取率，绿色环保地分离纯化龙眼肉粗多糖，以减少大分子蛋白质对多糖生物活性的影响，并且能够实现工业化生产，最大程度的降低生产成本、提高效益。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种提取分离纯化龙眼肉多糖的方法，含有下列步骤：①将龙眼干果剥壳去核，得到龙眼果肉；②将龙眼果肉加入乙醇浸泡，过滤，阴干；③将阴干的龙眼果肉在水溶液中超声处理，该方法还包括以下步骤：

④超声处理后，过滤，液渣分离，滤渣重复提取，合并滤液，浓缩，得龙眼肉粗多糖；

⑤将所述龙眼肉粗多糖溶于水中，配制成龙眼肉粗多糖溶液，加入蛋白酶，调节pH值，置于水浴锅中酶解；

⑥酶解完毕后，离心，去除沉淀，合并上清液，减压浓缩，醇沉，得到的沉淀物即是去除了蛋白质的精制龙眼肉多糖。

所述龙眼果肉加入乙醇浸泡，是加入3.1～4倍量(体积/重量)的75％～无水(体积/体积)乙醇浸泡7～72小时后，再过滤，阴干。

所述龙眼果肉在水溶液中用超声处理，是以龙眼果肉与水之比为1：20～70(重量/体积)，除1：20～50(重量/体积)外，每次超声处理60～90分钟，重复2～5次。

所述配制成龙眼肉粗多糖溶液，是将龙眼肉粗多糖配制成浓度为1～10％(重量/体积)的溶液，进行酶水解法除蛋白。

所述酶解，是将蛋白酶配制成1～10％(重量/体积)，置于39℃～70℃的水浴锅中酶3～48小时，终止酶解反应。

所述终止酶反应是将酶解处理液加热至90℃～100℃3～10分钟。

所述蛋白酶为木瓜蛋白酶或胰蛋白酶。

所述调节pH值，是将龙眼肉多糖溶液调到pH值6～7。

本发明的有益效果是：

采用超声浸提法进行提取结合蛋白酶水解法纯化龙眼肉多糖，龙眼肉多糖提取率高，龙眼肉多糖含量高，且不需高温、耗能低、提取时间短；脱蛋白效率高，多糖损失率低。采用本发明提取分离纯化后的龙眼肉多糖的得率为7.0％，龙眼肉多糖含量为64.4％；蛋白去除率达86.7％，多糖损失率仅为4.9％。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进一步详细说明。

本发明所述一种提取分离纯化龙眼肉多糖的方法，包括以下步骤：

实施例1

1、提取分离

准确称取龙眼干燥果实去皮、核后的果肉15.00克，加60毫升75％乙醇密闭于室温下浸润7小时，过滤，滤渣阴干。准确称取滤渣10.00克，加入510毫升水，超声处理60分钟，过滤，液渣分离，滤渣重复提取2次。合并滤液，滤液经62℃减压浓缩，加入5毫升95％乙醇醇沉。采用真空抽滤的方法分离出龙眼肉多糖，并通过真空干燥得到龙眼肉多糖630毫克。龙眼肉多糖得率为6.3％，含量为62.1％。

2、纯化

准确称取干燥的龙眼肉多糖0.10克，将其溶于10毫升水中，配制成浓度为1％的龙眼肉多糖溶液，加入0.10克木瓜蛋白酶，调节pH值为6，置于39℃的水浴锅中酶解3小时。酶解完毕后，将处理液加热至90℃3分钟终止酶反应。于6000转/分钟离心15分钟，去除沉淀，合并上清液，62℃减压浓缩，加入6毫升95％乙醇醇沉，所得醇沉物即是去除了蛋白质的龙眼肉多糖。蛋白去除率达80.3％，多糖损失率为5.2％。

实施例2

1、提取分离

准确称取龙眼干燥果实去皮、核后的果肉20.00克，加62毫升无水乙醇密闭于室温下浸润72小时，过滤，滤渣阴干。准确称取滤渣10.00克，加入700毫升水，超声处理90分钟，过滤，液渣分离，滤渣重复提取5次。合并滤液，滤液经65℃减压浓缩，加入6毫升95％乙醇醇沉。采用真空抽滤的方法分离出龙眼肉多糖，并通过真空干燥得到龙眼肉多糖680毫克。龙眼肉多糖得率为6.8％，含量为64.0％。

2、纯化

准确称取干燥的龙眼肉多糖1.00克，将其溶于10毫升水中，配制成浓度为10％的龙眼肉多糖溶液，加入1.0克木瓜蛋白酶，调节pH值为7，置于70℃的水浴锅中酶解48小时。酶解完毕后，将处理液加热至100℃10分钟终止酶反应。于6000转/分钟离心10分钟，去除沉淀，合并上清液，62℃减压浓缩，加入15毫升95％乙醇醇沉，所得醇沉物即是去除了蛋白质的龙眼肉多糖。蛋白去除率达83.5％，多糖损失率为5.9％。

实施例3

1、提取分离

准确称取龙眼干燥果实去皮、核后的果肉18.00克，加63毫升95％乙醇密闭于室温下浸润48小时，过滤，滤渣阴干。准确称取滤渣10.00克，加入550毫升水，超声处理65分钟，过滤，液渣分离，滤渣重复提取3次。合并滤液，滤液经65℃减压浓缩，加入7毫升无水乙醇醇沉。采用真空抽滤的方法分离出龙眼肉多糖，并通过真空干燥得到龙眼肉多糖700毫克。龙眼肉多糖得率为7.0％，含量为64.4％。

2、纯化

准确称取干燥的龙眼肉多糖0.50克，将其溶于10毫升水中，配制成浓度为5％的龙眼肉多糖溶液，加入0.50克木瓜蛋白酶，调节pH值为6.8，置于60℃的水浴锅中酶解4小时。酶解完毕后，将处理液加热至95℃7分钟终止酶反应。于8000转/分钟离心15分钟，去除沉淀，合并上清液，62℃减压浓缩，加入10毫升95％乙醇醇沉，所得醇沉物即是去除了蛋白质的龙眼肉多糖。蛋白去除率达86.7％，多糖损失率为4.9％。

Claims

1、一种提取分离纯化龙眼肉多糖的方法，含有下列步骤：①将龙眼干果剥壳去核，得到龙眼果肉；②将龙眼果肉加入乙醇浸泡，过滤，阴干；③将阴干的龙眼果肉在水溶液中超声处理，

其特征在于，该方法还包括以下步骤：

2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述龙眼果肉加入乙醇浸泡，是加入3.1～4倍量(体积/重量)的75％～无水(体积/体积)乙醇浸泡7～72小时后，再过滤，阴干。

3、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述龙眼果肉在水溶液中用超声处理，是以龙眼果肉与水之比为1：20～70(重量/体积)，除1：20～50(重量/体积)外，每次超声处理60～90分钟，重复2～5次。

4、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述配制成龙眼肉粗多糖溶液，是将龙眼肉粗多糖配制成浓度为1～10％(重量/体积)的溶液，进行酶水解法除蛋白。

5、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述酶解，是将蛋白酶配制成1～10％(重量/体积)，置于39℃～70℃的水浴锅中酶3～48小时，终止酶解反应。

6、根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述终止酶反应是将酶解处理液加热至90℃～100℃ 3～10分钟。

7、根据权利要求1，4，5和6所述的方法，其特征在于，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶或胰蛋白酶。

8、根据权利要求1，4，5，6和7所述的方法，其特征在于，所述调节pH值，是将龙眼肉多糖溶液调到pH值6～7。