CN116370605A - 一种提高免疫细胞增殖和吞噬能力的药物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种提高免疫细胞增殖和吞噬能力的药物，属于免疫学技术领域。本发明所提供的药物的核心有效成分为Plantaricin E多肽。本发明发现使用Plantaricin E多肽处理巨噬细胞后，能够有效的提高巨噬细胞的增殖和吞噬能力，并且可以提高巨噬细胞对于肺癌细胞的杀伤活性。同时，本发明发现将Plantaricin E和龙眼肉多糖联用可以对巨噬细胞的增殖产生协同的效果，从而可以更好的发挥免疫促进的效果。
Description
技术领域
本发明属于免疫学技术领域，尤其涉及一种提高免疫细胞增殖和吞噬能力的药物。
背景技术
人体免疫系统是一种复杂的防御系统，由多种不同类型的细胞、分子和组织构成。它的主要功能是保护人体免受病原体的侵害，包括细菌、病毒、真菌等。免疫系统可以识别和攻击入侵体内的病原体，产生免疫记忆，调节和协调免疫反应，清除异常细胞等。
巨噬细胞是免疫系统中的一种重要细胞类型，它们是先天性免疫系统的主要成分之一。巨噬细胞主要分布在组织中，如肝脏、脾脏、淋巴结、肺、肾等，它们的主要功能是吞噬和消化体内的病原体、细胞垃圾和其他异物，从而维护机体的健康。因此，调控巨噬细胞的功能对于维护机体免疫系统的健康和平衡非常重要。
Plantaricin E是一种由植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)产生的抗菌多肽。它是一种小分子肽，其氨基酸序列为FNRGGYNFGKSVRHVVDAIGSVAGIRGILKSIR，具有强烈的抗菌活性，特别是对革兰氏阳性菌具有很高的杀菌作用。由于它是一种天然产物，对人体无毒副作用，因此也可以用于医药领域的药物的研发。目前，还没有研究表明PlantaricinE多肽与人体免疫系统之间存在直接的关系。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提高免疫细胞增殖和吞噬能力的药物，来维护基体免疫系统的健康和平衡，并提供Plantaricin E多肽的新应用。
为现实上述目的，本发明提供了如下技术方案：
本发明提供了一种多肽在制备免疫增强药物中的应用，所述多肽为PlantaricinE多肽。
进一步地，所述药物通过提高免疫细胞的增殖能力和吞噬能力来实现免疫增强效果。
其次，本发明提供了一种多肽在制备肺癌抑制药物中的应用，所述多肽为Plantaricin E多肽。
进一步地，所述药物通过提高巨噬细胞对于肺癌细胞的杀伤活性来抑制肺癌。
其次，本发明提供了一种提高免疫细胞免疫效果的药物，所述药物的核心有效成分为Plantaricin E多肽。
进一步地，所述药物为液体药物，所述液体药物中Plantaricin E多肽的含量为大于等于30μg/mL。
进一步地，所述液体药物中Plantaricin E多肽的含量为30-480μg/mL。
其次，本发明一种提高免疫细胞增殖的组合物，所述组合物的组成成分为Plantaricin E多肽和龙眼肉多糖；所述组合物中Plantaricin E多肽和龙眼肉多糖的质量比为1:1。
其次，一种多肽在制备提高免疫细胞增殖和吞噬能力的药物中的应用。
本发明的有益效果：
本发明提供了Plantaricin E多肽在促进巨噬细胞增殖和吞噬能力的新功能，从而有助于维持免疫系统的平衡。
同时，本发明提供了Plantaricin E多肽促进巨噬细胞对于肺癌细胞杀伤活性的新功能；
同时，本发明将Plantaricin E多肽与龙眼肉多糖结合来协同的促进巨噬细胞的增殖。
附图说明
图1为Plantaricin E多肽对于巨噬细胞吞噬能力影响的结果图；
图2为Plantaricin E多肽对于巨噬细胞对于肺癌细胞杀伤活性影响的结果图。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。
实施例1
(1)将对数生长期的巨噬细胞RAW264.7制备成1×105个/mL的细胞悬液并接种在96孔细胞培养板中，每孔加入100μL细胞培养液；
(2)待细胞贴壁后，除了对照组，其余每孔中分别加入终浓度15,30,60,120,240,480μg/mL的100μL Plantaricin E多肽，对照组只加入细胞培养液，每个分组设置有3个重复孔；
(3)置于37℃，5％ CO2的细胞培养箱中培养24h；
(4)培养结束后，弃去培养基，每孔加入10μl CCK-8溶液，再次置于37℃，5％CO2的细胞培养箱中培养4h；
(5)置于酶标仪中，检测490nm处的吸光值，得到的结果如下表1所示。
表1Plantaricin E多肽对于巨噬细胞RAW264.7增殖的影响
| 分组 | OD490值 |
| 对照组 | 0.666±0.042 |
| 15μg/mL组 | 0.735±0.041 |
| 30μg/mL组 | 0.828±0.046* |
| 60μg/mL组 | 0.887±0.027** |
| 120μg/mL组 | 1.008±0.065** |
| 240μg/mL组 | 0.977±0.054** |
| 480μg/mL组 | 0.934±0.058** |
注释：*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。
从表1中，我们可以看出，使用Plantaricin E多肽处理巨噬细胞后可以提高巨噬细胞的增殖能力并具有一定的剂量依赖性，当Plantaricin E多肽的浓度为15μg/mL时，巨噬细胞的OD值高于对照组，但差异无统计学意义，因此本发明选择的Plantaricin E多肽对于巨噬细胞RAW264.7最小促进浓度为30μg/mL；
当Plantaricin E多肽的浓度为120μg/mL时，对于巨噬细胞RAW264.7的促进作用达到最大(提高51.35％)，因此120μg/mL是Plantaricin E多肽对于巨噬细胞增殖的最佳促进浓度。
实施例2
(1)将对数生长期的巨噬细胞RAW264.7制备成1×105个/mL的细胞悬液并接种在96孔细胞培养板中，每孔加入100μL细胞培养液；
(2)细胞完全贴壁后，使用终浓度为30,60,120μg/mL的Plantaricin E多肽，对照组只添加细胞培养液，每组设置3个复孔；
(3)置于37℃，5％ CO2的细胞培养箱中培养24h；
(4)每孔加入0.09％中性红溶液100μL，温育3h，吸去中性红溶液，使用预热的PBS清洗3次；
(5)加入细胞裂解液(醋酸：无水乙醇＝1:1)，4℃放置过夜后，测定540nm吸光度并计算中性红胞饮指数(实验组吸光度/对照组吸光度),结果如图1所示。
从图1中，我们可以看出，Plantaricin E多肽处理后的巨噬细胞的胞饮指数均显著高于对照组(最大提高95％)，且差异具有显著的统计学意义，因此，我们得出Plantaricin E多肽处理巨噬细胞能够有效的提高巨噬细胞的吞噬能力。
实施例3
(1)将使用终浓度120μg/mL的Plantaricin E多肽(处理组)和单纯细胞培养液(对照组)预处理24h的巨噬细胞RAW264.7制备成2×106/ml的细胞悬液，同时将肺癌细胞A549制备成2×105/ml的细胞悬液；
(2)分别取实验组和对照组的100μL细胞悬液，与100μL A549细胞悬液混合，同时，将100μL A549细胞悬液与0.1ml细胞培养液混合作为靶细胞自然释放组，将100μL A549细胞悬液与100μL 1％ NP40混合作为靶细胞最大释放组；
(3)将混合后的细胞接种在6孔细胞培养板中，每组设置3个复孔，放入细胞培养箱中培养4h；
(4)1000rpm离心10min后，收集上清，使用乳酸脱氢酶试剂盒检测各组的570nm下的吸光值，计算巨噬细胞的杀伤活性(杀伤活性＝实验组A值-自然释放组A值/最大释放组A值-自然释放组A值)。
从图2中，我们可以看出，使用Plantaricin E多肽预处理的巨噬细胞对于肺癌细胞的杀伤活性强于对照组的巨噬细胞(提高97.36)，说明Plantaricin E多肽能够提高巨噬细胞对于肺癌细胞的杀伤活性。
从实施例1-3的结果可以看出，Plantaricin E多肽对于提高巨噬细胞的吞噬能力和对肺癌细胞杀伤活性的效果十分优异，提高效果都接近一倍，但是对于促进增殖的效果一般，因此本发明尝试将其与龙眼肉多糖联用，探究是否可以实现更优的促进效果。
实施例4
(1)将对数生长期的巨噬细胞RAW264.7制备成1×105个/mL的细胞悬液，将细胞接种在96孔细胞培养板中，每孔加入100μL细胞培养液；
(2)待细胞贴壁后，对照组加入细胞培养液，Plantaricin E多肽组加入60μg/mLPlantaricin E多肽，龙眼肉多糖组加入60μg/mL龙眼肉多糖，联合组加入30μg/mLPlantaricin E多肽+30μg/mL龙眼肉多糖，每组设置3个复孔；
(3)置于37℃，5％ CO2的细胞培养箱中培养24h；
(4)培养结束后，弃去培养基，每孔加入10μL CCK-8溶液，再次置于37℃，5％CO2的细胞培养箱中培养4h；
(5)置于酶标仪中，检测490nm处的吸光值。
表2Plantaricin E多肽与龙眼肉多糖联用对于巨噬细胞RAW264.7增殖的影响
| 分组 | OD490值 |
| 对照组 | 0.644±0.038 |
| Plantaricin E多肽组 | 0.864±0.045** |
| 龙眼肉多糖组 | 0.799±0.048** |
| 联合组 | 0.974±0.054** |
注释：**表示P＜0.01。
从表2中，我们可以看出，相较于单独使用Plantaricin E多肽，将Plantaricin E多肽与龙眼肉多糖联用可以产生显著的协同效果来促进巨噬细胞RAW264.7的增殖。因此，我们可以将Plantaricin E多肽与龙眼肉多糖联合使用来更好的发挥促进免疫增强的效果。
以上的实施例是为了说明本发明公开的实施方案，并不能理解为对本发明的限制。此外，本文所列出的各种应用以及发明中方法、组合物的变化，在不脱离本发明的范围和精神的前提下对本领域内的技术人员来说是显而易见的。
Claims (9)
1.一种多肽在制备免疫增强药物中的应用，其特征在于，所述多肽为Plantaricin E多肽。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物通过提高免疫细胞的增殖能力和吞噬能力来实现免疫增强效果。
3.一种多肽在制备肺癌抑制药物中的应用，其特征在于，所述多肽为Plantaricin E多肽。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物通过提高巨噬细胞对于肺癌细胞的杀伤活性来抑制肺癌。
5.一种提高免疫细胞免疫效果的药物，其特征在于，所述药物的核心有效成分为Plantaricin E多肽。
6.根据权利要求5所述的药物，其特征在于，所述药物为液体药物，所述液体药物中Plantaricin E多肽的含量为大于等于30μg/mL。
7.根据权利要求6所述的药物，其特征在于，所述液体药物中Plantaricin E多肽的含量为30-480μg/mL。
8.一种提高免疫细胞增殖的组合物，其特征在于，所述组合物的组成成分为Plantaricin E多肽和龙眼肉多糖；所述组合物中Plantaricin E多肽和龙眼肉多糖的质量比为1:1。
9.一种多肽在制备提高免疫细胞增殖和吞噬能力的药物中的应用。
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