CN115197847B

CN115197847B - 一种益生菌冻干片及其制备方法

Info

Publication number: CN115197847B
Application number: CN202210950393.7A
Authority: CN
Inventors: 王冠; 张法权
Original assignee: Guangzhou Bafeiba Health Industry Co ltd
Current assignee: Bafeiba Food Technology Co ltd
Priority date: 2022-08-09
Filing date: 2022-08-09
Publication date: 2023-06-02
Anticipated expiration: 2042-08-09
Also published as: CN115197847A

Abstract

本发明属于微生物制备技术领域，具体涉及一种益生菌冻干片及其制备方法。本发明提供的益生菌冻干片包括如下组分及其重量份数：复合益生菌剂20~40份，低聚半乳糖10~20份，燕麦β‑葡聚糖8~12份、冻干保护剂10~20份，银杏提取物5~8份，怀山药提取物2~5份，维生素C 0.5~2份，维生素E 0.8~1.8份，甜菊糖苷1.2~2.5份。本发明提供的益生菌冻干片具有优异的抗冷冻性和贮藏稳定性，能更加有效抵御在冷冻干燥过程时由冻干工艺而引起的益生菌失活或死亡，有效提高冻干片的活菌存活率，同时还可以提高益生菌冻干片的耐胃酸性。

Description

一种益生菌冻干片及其制备方法

技术领域

本发明属于微生物制备技术领域，具体涉及一种益生菌冻干片及其制备方法。

背景技术

益生菌是一类通过促进宿主肠道内多种微生物菌群的生态平衡，对宿主健康或生理功能产生有益作用的活性微生物，能够有明确健康作用、改善维持微生态平衡和发挥益生功效。益生菌对人体具有多种健康保护及疾病防御的功能，其代谢产物可以通过调节机体的酸性环境抑制部分病原菌的生长繁殖，进而有益于身体的健康。其可以通过调节肠道的益生菌菌群，防止腹泻等疾病的发生；再有可以影响机体免疫系统、促进机体的免疫应答、降低胆固醇含量、减少机体肿瘤发生率、减缓乳糖不耐症等，因此，益生菌的功效在食品、药品及保健品领域已得到广泛认可，但是在实际应用中，益生菌还有不足之处，比如：益生菌进入人体消化道后容易受到胃酸、胃蛋白酶等的作用而失活，利用率会较低；在生产、加工、运输、保存过程中，会因为不利环境的影响而导致益生菌活性降低，这也是导致其无法在工业生产中广泛应用的主要原因。

为使益生菌能够长期保存,最好将其制成干燥状态。目前，常采用的制备菌粉干燥方法有气流干燥法、冷冻干燥法和喷雾干燥法。冷冻干燥是目前保护微生物发酵剂中活菌数和生物活性的较为常用的手段之一，具有适用范围广，对各种微生物都有很好的效果；发酵粉剂活菌成活率高，活性成分保藏时间长。但该工艺实施过程中，冷冻和干燥过程中会对益生菌细胞造成死亡并对细胞内部物质造成变性，造成过多的菌体失活。

中国专利申请CN112841657A公开了一种多菌种复合冻干粉及其制备工艺，多菌种复合冻干粉，包括纳豆菌、红曲菌、益生菌、山楂、蛋白质，制备工艺包括如下步骤：(1)纳豆菌制备；(2)固态培养基经灭菌处理后，接种红曲菌菌种进行发酵，二次发酵结束后再经干燥处理得到含有纳豆菌的红曲菌；(3)制作益生菌培养基，(4)分别将纳豆菌、红曲菌、益生菌、山楂、蛋白质分别进行筛选，并按重量份称量，取纳豆菌、红曲菌、益生菌、山楂、蛋白质原料组份进行打磨粉碎处理；(5)获得多菌种复合冻干粉。中国专利申请CN 101926428 A公开了一种益生菌银杏花粉冻干粉及其制备方法，该益生菌银杏花粉冻干粉是以当年破壁或不破壁银杏花粉为原料，配以一定比例的红糖，经鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌两种益生菌单株或混合发酵，然后再经冷冻干燥而成的活菌冻干粉。益生菌活菌数达10⁹cfu/g以上，并含有大量银杏花粉功能成分及益生菌发酵产物。虽然上述发明中均添加了益生菌，理论上可以起到在宿主体内产生抑菌素、调节肠道菌群、增强机体免疫的功效，但是添加的益生菌由于冻干过程将活细胞暴露在额外应激压力下，引起活性损失。并且形成胞内冰晶和再结晶均能引起细胞膜损伤，造成部分活细胞死亡，同时由于益生菌在人体酸性环境中的耐受性较差以及各种微生态制剂中益生菌的贮藏稳定性不佳，从而影响了益生菌的活性及其功能特性的发挥。

因此，有必要研发一种可以有效提高冻干后益生菌的存活率以及提高益生菌在胃酸等环境中的耐受性的益生菌冻干片。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种益生菌冻干片及其制备方法。本发明提供的益生菌冻干片，可以有效维持肠道内微生物菌群的平衡，促进人体对营养物质的吸收，对人体有一定的免疫调节作用，同时在制备过程中通过合理复配不同类型的冻干保护剂，制得的益生菌冻干片具有优异的抗冷冻性和贮藏稳定性，能更加有效抵御在冷冻干燥过程时由冻干工艺而引起的益生菌失活或死亡，有效提高冻干片的活菌存活率，同时还可以提高益生菌冻干片的耐胃酸性，使益生菌能够定植于肠道中，更好的发挥其保健作用。

本发明的技术方案是：

一种益生菌冻干片，包括如下组分及其重量份数：

复合益生菌剂20~40份，低聚半乳糖10~20份，燕麦β-葡聚糖8~12份，冻干保护剂10~20份，银杏提取物5~8份，怀山药提取物2~5份，维生素C 0.5~2份，维生素E 0.8~1.8份，甜菊糖苷1.2~2.5份。

本发明制得的益生菌冻干片中，添加的银杏提取物含有银杏总黄酮，银杏内酯等物质，具有扩张血管，保护血管内皮组织、调节血脂、保护低密度脂蛋白、抑制PAF（血小板激活因子），抑制血栓形成、清除自由基等作用；怀山药提取物含多糖、淀粉、蛋白质、游离氨种基酸和微量元素等多成分，具有免疫调节、抗氧化、降血糖、降血脂、抗肿瘤、调节脾胃功能、抗突变等功效。燕麦β-葡聚糖具有降低血脂和血清胆固醇的作用，对预防和治疗心脑血管疾病以及糖尿病有重要功效。低聚半乳糖是人体肠道中双歧杆菌、嗜酸乳酸杆菌等有益菌极好的营养源和有效的增殖因子，可以改善人体肠道的消化吸收功能。

本发明中通过复配复合益生菌剂、天然植物提取物（银杏提取物和怀山药提取物），以及燕麦β-葡聚糖，低聚半乳糖等主要物质，制得的益生菌冻干片能够增强益生菌在肠道微生物调节方面的作用，还能辅助降血糖，降血脂，具有很强的提高人体免疫力的作用。

进一步地，所述益生菌冻干片由如下组分及其重量份数组成：

复合益生菌剂30份，低聚半乳糖15份，燕麦β-葡聚糖10份，冻干保护剂15份，银杏提取物7份，怀山药提取物3份，维生素C 1.5份，维生素E 1.2份，甜菊糖苷2份。

进一步地，本发明制备的复合益生菌剂由鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、短双歧杆菌和戊糖乳杆菌按重量比5:3:1:1培养而得。

本发明中通过对现有技术中能够对肠道起到促进作用的菌株进行大量的筛选，发现将鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、短双歧杆菌和戊糖乳杆菌按重量比5:3:1:1组合使用时，能够通过抑制致病菌的生长繁殖、维持肠道内微生物菌群的平衡；促进人体对营养物质的吸收，对人体有一定的免疫调节作用；可降低人体内血清胆固醇的含量和预防心血管疾病等，同时，添加的不同种类的益生菌进行混合培养，可以充分发挥益生菌之间的协同作用，增加益生菌的活菌数，对于提高益生菌制剂在贮藏期内的稳定性以及更好的发挥对人体肠道的调节作用有着重要影响。

由现有技术可知，只有复合益生菌以活的状态和充足的数量定植于人体肠道中，才可以通过正常的生理代谢而产生对人体有益的营养物质。然而由于冻干过程将活细胞暴露在额外应激压力下，容易引起细胞活性损失，渗透休克、形成胞内冰晶和再结晶也均能引起细胞膜损伤，造成部分活细胞死亡。因此，需要在冻干过程中加入冻干保护剂，对细胞提供保护，避免细胞损伤，造成冻干粉中活菌存活率降低的现象。

本发明中添加的冻干保护剂包括如下组分及其重量份数：

辛烯基琥珀酸淀粉钠10~16份，普鲁兰多糖6~10份，低取代羟丙纤维素3~9份，6-羟基山奈酚5~8份，精氨酸1~5份，L-半胱氨酸1~3份，海藻酸丙二醇酯1~3份，碳酸钙1~3份，去离子水30~60份。

进一步地，所述冻干保护剂由如下组分及其重量份数组成：

辛烯基琥珀酸淀粉钠12份，普鲁兰多糖8份，低取代羟丙纤维素6份，6-羟基山奈酚6份，精氨酸3份，L-半胱氨酸2份，海藻酸丙二醇酯2份，碳酸钙1.5份，去离子水50份。

由于不同的保护剂对细胞保护的作用机制有所不同，本发明采用鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、短双歧杆菌和戊糖乳杆菌作为复合益生菌剂，为了提高该复合益生菌剂在冻干后的菌种活性，对冻干保护剂的组分进行了大量的筛选和研究，采用多种不同类型的保护剂复配使用，起到了协同增效的作用，根据实验结果显示，添加了本发明的冻干保护剂后，能够有效提高本发明所述复合益生菌剂在真空冷冻干燥后的菌种存活率，菌种的存活率均在92%以上；还可以有效提高本发明制得的益生菌冻干片的贮藏稳定性，有效解决了由于运输、贮藏过程中由于环境问题导致益生菌活菌数下降的问题；同时，还能够提高益生菌冻干片的耐胃酸性，保护其在胃消化过程活性不被损坏，从而使益生菌能够定植于肠道中，更好的发挥益生菌保健作用。

进一步地，所述冻干保护剂的制备方法如下：

将辛烯基琥珀酸淀粉钠，普鲁兰多糖，低取代羟丙纤维素，6-羟基山奈酚、精氨酸，L-半胱氨酸，海藻酸丙二醇酯，碳酸钙溶于去离子水中，搅拌均匀，即得。

本发明还提供了所述的益生菌冻干片的制备方法，包括如下步骤：

S1、将冷冻保存的菌种分别接种于MRS液体培养基中，传代培养1~3次，得到活化菌种；

S2、取步骤S1所得的活化菌种，按比例混合，接种于MRS液体培养基中进行培养，然后将培养好的培养液进行离心处理，除去上清液保留菌泥，用灭活生理盐水洗涤菌泥，即得复合益生菌剂；

S3、向步骤S2所得的复合益生菌剂中加入冻干保护剂，搅拌均匀，再加入低聚半乳糖，燕麦β-葡聚糖，银杏提取物，怀山药提取物，维生素C，维生素E，甜菊糖苷，搅拌均匀后，放入真空冷冻干燥机中冷冻干燥，然后进行压片处理，即得。

进一步地，所述步骤S1中培养温度为35~38℃，培养时间为20~28h。

进一步地，所述步骤S2中接种总量为1.5~2.5%，培养温度为37℃，培养时间为18~24h；

所述步骤S2中进行离心处理时的离心转速为4000~8000rpm，离心时间为10~15min；采用灭活生理盐水对菌泥的洗涤次数为1~2次。

进一步地，所述步骤S3中冷冻干燥的具体步骤为：将物料放入真空冷冻干燥机中于-80~-70℃预冻2~3h小时后，抽真空，真空度为10~20pa，升温至-50~-40℃，冻干24~28h。

与现有技术相比，本发明提供的益生菌冻干片及其制备方法具有以下优势：

（1）本发明通过筛选不同种类的益生菌进行混合培养，可以充分发挥益生菌之间的协同作用，制得的益生菌冻干片可以有效维持肠道内微生物菌群的平衡，促进人体对营养物质的吸收，对人体有一定的免疫调节作用。

（2）本发明提供的益生菌冻干片，通过合理复配不同类型的冻干保护剂，制得的益生菌冻干片具有优异抗冷冻干燥性和贮藏稳定性，能够更加有效抵御在冷冻干燥过程时由冻干工艺引起的益生菌的失活或死亡，提高制得的冻干片中的活菌存活率，同时还可以提高益生菌冻干片的耐胃酸性，使益生菌能够定植于肠道中，更好的发挥其保健作用。

具体实施方式

以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的保护范围之内。

以下实施例和对比例中，未作特别说明的试剂为常规试剂，均可在常规试剂生产销售公司购买，部分原料生产厂家等信息如下：

怀山药提取物购自南京道斯夫生物科技有限公司；

6-羟基山奈酚，CAS号：4324-55-4，购自上海源叶生物科技有限公司；

红花提取物，CAS号：36338-96-2；银杏提取物，CAS号：90045-36-6，购自陕西斯诺特生物技术有限公司。

实施例1一种益生菌冻干片及其制备方法

一种益生菌冻干片，由如下组分及其重量份数组成：

复合益生菌剂20份，低聚半乳糖10份，燕麦β-葡聚糖8份，冻干保护剂10份，银杏提取物5份，怀山药提取物2份，维生素C 0.5份，维生素E 0.8份，甜菊糖苷1.2份。

所述冻干保护剂由如下组分及其重量份数组成：

辛烯基琥珀酸淀粉钠10份，普鲁兰多糖6份，低取代羟丙纤维素3份，6-羟基山奈酚5份，精氨酸1份，L-半胱氨酸1份，海藻酸丙二醇酯1份，碳酸钙1份，去离子水30份。

所述冻干保护剂的制备方法如下：

将辛烯基琥珀酸淀粉钠，普鲁兰多糖，低取代羟丙纤维素，6-羟基山奈酚，精氨酸，L-半胱氨酸，海藻酸丙二醇酯，碳酸钙溶于去离子水中，搅拌均匀，即得。

所述的益生菌冻干片的制备方法，包括如下步骤：

S1、将冷冻保存的菌种（鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、短双歧杆菌和戊糖乳杆菌）分别接种于MRS液体培养基中，于35℃下培养28h，传代培养2次，得到活化菌种；

S2、取步骤S1所得的活化菌种，按照鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、短双歧杆菌和戊糖乳杆菌重量比为5:3:1:1的比例混合，接种于MRS液体培养基中，总接种量为1.5%，于37℃下培养18h后，将培养好的培养液进行离心处理，离心转速为4000rpm，离心时间为15min，然后除去上清液保留菌泥，用灭活生理盐水对菌泥洗涤1次，即得复合益生菌剂；

所述冷冻干燥的具体步骤为：将物料放入真空冷冻干燥机中于-80℃预冻2h小时后，抽真空，真空度为10pa，升温至-50℃，冻干24h，即得。

实施例2一种益生菌冻干片及其制备方法

一种益生菌冻干片，由如下组分及其重量份数组成：

所述冻干保护剂由如下组分及其重量份数组成：

所述冻干保护剂的制备方法如下：

将辛烯基琥珀酸淀粉钠，普鲁兰多糖，低取代羟丙纤维素，6-羟基山奈酚，精氨酸，L-半胱氨酸，海藻酸丙二醇酯，碳酸钙加入去离子水中，搅拌均匀，即得。

所述的益生菌冻干片的制备方法，包括如下步骤：

S1、将冷冻保存的菌种（鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、短双歧杆菌和戊糖乳杆菌）分别接种于MRS液体培养基中，于37℃下培养24h，传代培养2次，得到活化菌种；

S2、取步骤S1所得的活化菌种，按照鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、短双歧杆菌和戊糖乳杆菌重量比为5:3:1:1的比例混合，接种于MRS液体培养基中，总接种量为2.0%，于37℃下培养22h后，将培养好的培养液进行离心处理，离心转速为6000rpm，离心时间为12min，然后除去上清液保留菌泥，用灭活生理盐水对菌泥洗涤2次，即得复合益生菌剂；

所述冷冻干燥的具体步骤为：将物料放入真空冷冻干燥机中于-75℃预冻3h小时后，抽真空，真空度为15pa，升温至-45℃，冻干26h。

实施例3一种益生菌冻干片及其制备方法

一种益生菌冻干片，由如下组分及其重量份数组成：

复合益生菌剂40份，低聚半乳糖20份，燕麦β-葡聚糖12份，冻干保护剂20份，银杏提取物8份，怀山药提取物5份，维生素C 2份，维生素E 1.8份，甜菊糖苷2.5份。

所述冻干保护剂由如下组分及其重量份数组成：

辛烯基琥珀酸淀粉钠16份，普鲁兰多糖10份，低取代羟丙纤维素9份，6-羟基山奈酚8份，精氨酸5份，L-半胱氨酸3份，海藻酸丙二醇酯3份，碳酸钙3份，去离子水60份。

所述冻干保护剂的制备方法如下：

所述的益生菌冻干片的制备方法，包括如下步骤：

S1、将冷冻保存的菌种（鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、短双歧杆菌和戊糖乳杆菌）分别接种于MRS液体培养基中，于38℃下培养20h，传代培养3次，得到活化菌种；

S2、取步骤S1所得的活化菌种，按照鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、短双歧杆菌和戊糖乳杆菌重量比为5:3:1:1的比例混合，接种于MRS液体培养基中，总接种量为2.5%，于37℃下培养24h后，将培养好的培养液进行离心处理，离心转速为8000rpm，离心时间为10min，然后除去上清液保留菌泥，用灭活生理盐水对菌泥洗涤2次，即得复合益生菌剂；

所述冷冻干燥的具体步骤为：将物料放入真空冷冻干燥机中于-70℃预冻3h小时后，抽真空，真空度为20pa，升温至-40℃，冻干28h。

对比例1 一种益生菌冻干片及其制备方法

与实施例2的相比，对比例1的区别在于，将冻干保护剂中的辛烯基琥珀酸淀粉钠替换为阿拉伯胶，其他组分与制备步骤与实施例2相同。

对比例2 一种益生菌冻干片及其制备方法

与实施例2的相比，对比例2的区别在于，所述冻干保护剂中，不添加普鲁兰多糖，将辛烯基琥珀酸淀粉钠的用量增加到20份，其他组分与制备步骤与实施例2相同。

对比例3 一种益生菌冻干片及其制备方法

与实施例2的相比，对比例3的区别在于，将冻干保护剂中的6-羟基山奈酚替换为红花提取物，其他组分与制备步骤与实施例2相同。

对比例4 一种益生菌冻干片及其制备方法

与实施例2的相比，对比例4的区别在于，所述冻干保护剂中，不添加6-羟基山奈酚，将L-半胱氨酸的用量增加到8份，其他组分与制备步骤与实施例2相同。

试验例一、本发明益生菌冻干片存活率检测

1. 试验材料：本发明实施例1~3，对比例1~4制得的益生菌冻干片。

2. 试验方法：

（1）菌种存活率检测：分别测定本发明实施例1~3，对比例1~4冷冻前后的益生菌数量变化，采用平板计数法进行活菌计数，并计算其存活率，存活率为冷冻干燥后的细菌总数与冷冻干燥前的细菌总数的比值，其中：冷冻干燥前的细菌总数的检测方法为：在实施例1~3、对比例1~4的制备过程中，在步骤S2结束后进行检测，采用平板计数法进行活菌计数，结果即为冷冻干燥前的细菌总数，冷冻干燥后的细菌总数的检测方法为：在实施例1~3、对比例1~4的制备过程中，在步骤S3结束后进行检测，采用平板计数法进行活菌计数，结果即为冷冻干燥后的细菌总数。冷冻干燥后的菌种存活率结果见表1。

（2）益生菌冻干片贮藏稳定性检测：将本发明实施例1~3，对比例1~4制得的益生菌冻干片进行密封保存，置于温度为25℃±2℃、相对湿度40%±5%的条件下存放6个月，然后进行采用平板计数法进行活菌计数，此结果是存放6个月后的细菌总数，并计算其存活率，存活率为冷冻干燥存放6个月后的细菌总数与冷冻干燥前的细菌总数的比值。放置6个月后的菌种存活率结果见表1。

3. 试验结果：

本发明制得的益生菌冻干片的菌种存活率及贮藏稳定性检测结果如表1所示。

表1

由表1可知，本发明实施例1~3制得的益生菌冻干片在真空冷冻干燥后，菌种的存活率仍然在92%以上，并且在放置6个月后，菌种的存活率依旧可以到达83%以上，其中实施例2的效果最好，为本发明的最佳实施例。而对比例1~4中改变了冻干保护剂的组分时，其效果相对于实施例2存活率明显下降，这表明本发明提供的冻干保护剂各组分具有显著的协同效果，能有效避免细胞在真空冷冻干燥造成的细胞损伤，同时还提高了益生菌冻干片的贮藏稳定性，在本发明的益生菌冻干片放置6个月后，菌种存活率并未受到较大的影响。

试验例二、人工胃液耐受试验

2. 试验方法：首先，对本发明实施例1~3，对比例1~4制得的益生菌冻干片的活菌数进行检测（置于人工胃液之前），然后分别取本发明实施例1~3，对比例1~4制得的益生菌冻干片1g置于50mL已经预热好的人工胃液（pH1.2）的三角烧瓶中，混合均匀，然后在恒温床中震荡（180 r/min，37±1℃），分别在第30、60、90min时取样，采用平板计数法测定活菌数，每组平行三次试验取平均值，从而确定此时菌体的存活率。所述益生菌存活率为分别在30、60、90min取样时的活菌数与置于人工胃液之前的益生菌活菌数的比值。

所述人工胃液的制备方法：称取10 g胃蛋白酶，量筒量取16.4 mL盐酸（0.1 mol/L），将二者在烧杯中加水搅拌均匀，过滤后定容至1000 mL容量瓶中，用pH计将人工胃液的pH调节至1.2，0.2μm无菌微孔滤膜过滤除菌备用。

3.试验结果

本发明制得的益生菌冻干片在人工胃液中的耐受试验结果如表2所示。

表2

由表2可知，在模拟胃酸的情况下，本发明实施例1~3制得的益生菌冻干片在模拟胃液中90min后，益生菌的存活率仍然可以达到82.9%以上，表现出良好的胃环境耐受能力，而当对比例1~4中当改变了冻干保护剂的组分时，得到的冻干片中的益生菌在模拟胃液中的存活率都有了不同程度的下降。说明在本发明采用真空冷冻干燥时添加了本发明提供的冻干保护剂后，可以有效提高益生菌在胃液中的耐酸性，保护其在胃消化过程活性不被损坏。

上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims

1.一种益生菌冻干片，其特征在于，由如下组分及其重量份数组成：

复合益生菌剂20~40份，低聚半乳糖10~20份，燕麦β-葡聚糖8~12份，冻干保护剂10~20份，银杏提取物5~8份，怀山药提取物2~5份，维生素C 0.5 ~ 2份，维生素E 0.8~1.8份，甜菊糖苷1.2~2.5份；所述复合益生菌剂由鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、短双歧杆菌和戊糖乳杆菌按5:3:1:1的重量比接种混合后培养而得；所述冻干保护剂由如下组分及其重量份数组成：辛烯基琥珀酸淀粉钠10~16份，普鲁兰多糖6~10份，低取代羟丙纤维素3~9份，6-羟基山奈酚5~8份，精氨酸1~5份，L-半胱氨酸1~3份，海藻酸丙二醇酯1~3份，碳酸钙1~3份，去离子水30~60份。

2. 如权利要求1所述的益生菌冻干片，其特征在于，由如下组分及其重量份数组成：复合益生菌剂30份，低聚半乳糖15份，燕麦β-葡聚糖10份，冻干保护剂15份，银杏提取物7份，怀山药提取物3份，维生素C 1.5份，维生素E1.2份，甜菊糖苷2份。

3.如权利要求1所述益生菌冻干片，其特征在于，所述冻干保护剂由如下组分及其重量份数组成：辛烯基琥珀酸淀粉钠12份，普鲁兰多糖8份，低取代羟丙纤维素6份，6-羟基山奈酚6份，精氨酸3份，L-半胱氨酸2份，海藻酸丙二醇酯2份，碳酸钙1.5份，去离子水50份。

4.如权利要求1所述益生菌冻干片，其特征在于，所述冻干保护剂的制备方法如下：将辛烯基琥珀酸淀粉钠，普鲁兰多糖，低取代羟丙纤维素，6-羟基山奈酚，精氨酸，L-半胱氨酸，海藻酸丙二醇酯，碳酸钙溶于去离子水中，搅拌均匀，即得。

5.一种如权利要求1~4任一项所述的益生菌冻干片的制备方法，其特征在于，包括如下制备步骤：

6.如权利要求5所述益生菌冻干片的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中培养温度为35~38℃，培养时间为20~28h。

7. 如权利要求5所述益生菌冻干片的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中接种总量为1.5 ~ 2.5%，培养温度为37℃，培养时间为18~24h；进行离心处理时的离心转速为4000~8000rpm，离心时间为10~15min；采用灭活生理盐水对菌泥的洗涤次数为1~2次。

8. 如权利要求5所述益生菌冻干片的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中冷冻干燥的具体步骤为：将物料放入真空冷冻干燥机中于-80 ~ -70℃预冻2 ~ 3h后，抽真空，真空度为10~20pa，升温至-50 ~ -40℃，冻干24~28h。