CN115624180B - 一种包含骨桥蛋白的益生菌微胶囊及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种包含骨桥蛋白的益生菌微胶囊及其制备方法，包含壁材以及益生菌，所述壁材的制备原料包括骨桥蛋白；所述骨桥蛋白用于提高逆境环境中益生菌的存活率。本发明所提供的包含骨桥蛋白的益生菌微胶囊，壁材中添加了骨桥蛋白，能够提升微胶囊的物理性能，进而提高益生菌微胶囊在逆境环境中的存活率(包括冷冻环境、胃肠道消化环境和货架期内的存活率)。并且，微胶囊壁材中加入了骨桥蛋白，能够提高微胶囊的粒径分布均一性。
Description
技术领域
本发明涉及益生菌技术领域，尤其涉及骨桥蛋白在制备提高逆境环境中益生菌存活率的产品中的应用，具体涉及一种包含骨桥蛋白的益生菌微胶囊及其制备方法。
背景技术
肠道菌群与宿主的健康有着密不可分的联系，一旦发生肠道菌群紊乱，可能引发宿主众多的疾病。目前益生菌补充干预是调节肠道菌群最直接、有效的手段之一。但由于益生菌的高度敏感性，益生菌在加工、储藏、消化等胁迫条件下极易失活。因此如何有效提高益生菌的活性成为相关产品亟需解决的问题。
目前益生菌的递送方式以口服为主，其剂型主要包括粉剂、胶囊、片剂和液体（如油滴剂）等，也可以作为功能食品成分随进食摄入。为了减少在生产加工和货架储存期间以及经过胃肠道环境时，由温度、氧化、渗透压、胃酸、胆盐等不利环境因素造成的活菌损失，最大限度的提高抵达靶器官（如肠道）的益生菌存活率，封装方法和技术是益生菌产品研发和生产中必须重点考虑的因素。微囊化技术是目前改善益生菌胁迫耐受性的有效手段之一，其利用天然或合成的高分子成膜材料把少量的活性成分包覆形成微米大小的胶囊固体颗粒。
此外，由于益生菌的特殊性，当其添加在婴幼儿奶粉中时，一般是基于干法工序中的简单物理混合。同时，婴幼儿奶粉产品往往仅标注益生菌的添加量，但在消费者食用时以及到达结肠的益生菌的实际数量基本不得而知。对于整个货架期内和摄入后经过人体消化道益生菌活菌数的保持，仍然有待进一步的解决。
骨桥蛋白（OPN）作为存在于人乳中的一种高水平含量（138mg/L）功能性蛋白，近年来已有相关研究报道了其作为粘附蛋白有助于细胞附着的功能，同时可以提高细胞活力，在伤口愈合中也发挥着重要的作用。此外还有研究证明将其添加至配方奶粉中可以促进婴幼儿的免疫保护和肠道发育，减小配方奶粉喂养与母乳喂养的婴儿之间肠道菌群的差异。但是，将OPN用于益生菌微胶囊领域，以提高益生菌的抗逆境能力未见报道。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种包含骨桥蛋白的益生菌微胶囊，以提高益生菌的抗逆境耐受力。
本发明的目的之二在于提供一种包含骨桥蛋白的益生菌微胶囊的制备方法，工艺简单，易于操作和实现工业化。
本发明的目的之三在于提供骨桥蛋白在制备提高逆境环境中益生菌存活率的产品中的应用。
本发明的目的之一采用如下技术方案实现：
一种包含骨桥蛋白的益生菌微胶囊，包含壁材以及益生菌，所述壁材的制备原料包括骨桥蛋白；所述骨桥蛋白用于提高逆境环境中益生菌的存活率，所述逆境环境包括货架期、冷冻环境和胃肠道消化环境。
作为本发明的一个优选方案，所述冷冻环境为-30~-80℃，优选地为-35~-55℃。
作为本发明的一个优选方案，所述骨桥蛋白在所述壁材中的重量百分比为0.001-10%；优选地，所述骨桥蛋白在所述壁材中的重量百分比为0.1-10%；次优选地，为0.2-5%；更加优选地，为0.5-5%；具体地，可以为0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.7%、1.0%、2.0%、3.0%、4.0%、5.0%等。骨桥蛋白的实际添加量可以结合需要达到的益生菌存活率提升程度以及商业成本进行考虑，例如可以设置为2%。
作为本发明的一个优选方案，所述益生菌包括双歧杆菌。
作为本发明的一个优选方案，所述益生菌包括：长双歧杆菌婴儿亚种（Bifidobacterium longum subsp. infantis R0033）、两歧双歧杆菌（Bifidobacteriumbifidum R0071）、短双歧杆菌（Bifidobacterium breve M-16V）、动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp. lactis Bb-12）、动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp. lactis HN019）、动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp. lactis Bi-07）、瑞士乳杆菌（Lactobacillushelveticus R0052）、鼠李糖乳酪杆菌（Lactobacillus rhamnosus LGG）、鼠李糖乳酪杆菌（Lactobacillus rhamnosus HN001）、长双歧杆菌婴儿亚种（Bifidobacterium longumsubsp. infantis M63）和长双歧杆菌长亚种（Bifidobacterium longum subsp. longumBB536）中的一种或任意组合。
作为本发明的一个优选方案，所述益生菌选自：长双歧杆菌婴儿亚种（Bifidobacterium longum subsp. infantis R0033）、两歧双歧杆菌（Bifidobacteriumbifidum R0071）和短双歧杆菌（Bifidobacterium breve M-16V）中的一种或任意组合。
作为本发明的一个优选方案，所述壁材的制备原料包括骨桥蛋白，还包括果胶、海藻酸钠、明胶、阿拉伯胶、壳聚糖、蛋白类、淀粉中的一种或任意组合；
作为本发明的一个优选方案，所述蛋白类包括乳清蛋白、酪蛋白、植物蛋白中的一种或任意组合。
作为本发明的一个优选方案，所述包含骨桥蛋白的益生菌微胶囊包含壁材以及益生菌，所述壁材的制备原料包括骨桥蛋白，以及果胶和/或海藻酸钠，所述益生菌选自：长双歧杆菌婴儿亚种（Bifidobacterium longum subsp. infantis R0033）、两歧双歧杆菌（Bifidobacterium bifidum R0071）和短双歧杆菌（Bifidobacterium breve M-16V）中的一种或任意组合。
作为本发明的一个优选方案，所述骨桥蛋白用于提高所述益生菌微胶囊的粒径分布均一性。
本发明的目的之二采用如下技术方案实现：
一种包含骨桥蛋白的益生菌微胶囊的制备方法，包括以下步骤：
益生菌活化步骤：将冷冻保存的益生菌活化，获取活化的益生菌；
微胶囊制备步骤：取所述活化的益生菌以及壁材的制备原料，制备益生菌微胶囊，所述壁材的制备原料包括骨桥蛋白。
作为本发明的一个优选方案，制备方法还包括冷冻干燥步骤：将获取的所述益生菌微胶囊进行冷冻干燥。
作为本发明的一个优选方案，在所述微胶囊制备步骤中，通过内源乳化法或者外源乳化法制备所述益生菌微胶囊。
作为本发明的一个优选方案，所述的包含骨桥蛋白的益生菌微胶囊的制备方法，包括以下步骤：
益生菌活化步骤：将冷冻保存的益生菌粉在固体培养基中划线培养；接着挑取单菌落接种到液体培养基中培养，传代培养后，离心，洗涤，重悬，获取益生菌悬浮液；
微胶囊制备步骤：取所述益生菌悬浮液、骨桥蛋白、以及果胶和/或海藻酸钠溶液采用内源乳化法或者外源乳化法制备益生菌微胶囊；所述骨桥蛋白占所述果胶和/或海藻酸钠溶液重量百分比的0.001-10%；优选地，为0.1-10%；更加优选地，为0.5-5%；
当采用内源乳化法制备益生菌胶囊时，操作如下：将益生菌悬浮液、骨桥蛋白、果胶和/或海藻酸钠溶液、以及钙盐颗粒（例如不溶性钙盐）混合，接着分散在油相中形成油包水型乳液，再加入冰醋酸，搅拌，洗脱，离心收集，得到所述益生菌微胶囊；所述不溶性钙盐包括碳酸钙、柠檬酸钙和EDTA钙（乙二胺四乙酸二钠钙）；
当采用外源乳化法制备益生菌胶囊时，操作如下：将所述益生菌悬浮液、骨桥蛋白、果胶和/或海藻酸钠溶液、以及油相混合形成乳液，加入Ca2+溶液，搅拌，洗脱，离心收集，得到所述益生菌微胶囊；
冷冻干燥步骤：将获取的所述益生菌微胶囊进行冷冻干燥。
其中，在本发明中，所述果胶和/或海藻酸钠溶液可以包括：果胶溶液，海藻酸钠溶液，以及果胶和海藻酸钠的混合溶液。
本发明的目的之三采用如下技术方案实现：
本发明还提供了骨桥蛋白在制备提高逆境环境中益生菌存活率的产品中的应用。
作为本发明的一个优选方案，所述逆境环境包括货架期、冷冻环境和胃肠道消化环境。
作为本发明的一个优选方案，所述产品为药物。
作为本发明的一个优选方案，所述产品为口服制剂，所述口服制剂的剂型是口服液、片剂、粉剂、胶囊剂或颗粒剂。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：
（1）本发明所提供的包含骨桥蛋白的益生菌微胶囊，壁材中添加了骨桥蛋白（OPN），能够提升微胶囊的物理性能，进而提高微胶囊对益生菌在逆境环境中的存活率（包括抗冷冻、抗胃肠道消化、货架期内等方面的保护效果）。并且，壁材中加入了骨桥蛋白的益生菌微胶囊的粒径分布均一性能够得到提高。
（2）本发明所提高的包含骨桥蛋白的益生菌微胶囊的制备方法，工艺简单，易于操作和实现工业化。
附图说明
图1为本发明实施例所提供的三种双歧杆菌微胶囊在逆环境下益生菌的存活数量展示图；
图2为不同OPN添加量微胶囊在逆环境处理后益生菌减少数量的展示图；
图3为 R71微胶囊在不同贮藏温度下益生菌存活数量的变化展示图；
图4为本发明实施例所提供的R71微胶囊粒径分布图；
图5为本发明实施例所提供的微胶囊中OPN实际浓度展示图。
在图1和图2中，图中英文字母为：不同的英文字母之间表示在同一颜色标注的不同处理组之间存在显著性差异（P<0.05）。
具体实施方式
下面，结合附图以及具体实施方式，对本发明做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。在下述实施例中所采用的原材料、设备等除特殊限定外均可以通过购买方式获得。
实施例1
一种包含骨桥蛋白的益生菌微胶囊，采用以下方法制备而成：
益生菌活化：
分别将冷冻保存的三种商业双歧杆菌益生菌粉：长双歧杆菌婴儿亚种（Bifidobacterium longum subsp. infantis R0033）、两歧双歧杆菌（Bifidobacteriumbifidum R0071）和短双歧杆菌（Bifidobacterium breve M-16V）利用平板划线法分别在MRS固体培养基划线，后将固体培养基置于37 ℃厌氧条件下培养48 h。
接着挑取单菌落接种到MRS液体培养基中，在 37℃厌氧培养箱中培养 24 h，最后再以1%的接种量接种到液体培养基中，37℃传代培养48 h；重复传代两次。
在转速为5000rpm的条件下离心5min，用磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤两次，将益生菌重悬在PBS中，得到含有约10 log CFU*g−1的益生菌悬浮液，备用。此步骤能够获取三种益生菌悬浮液（游离益生菌）：R33悬浮液、R71悬浮液和M-16V悬浮液。
微胶囊制备过程：
采用内源乳化法制备益生菌微胶囊。
将10 mL海藻酸钠溶液(1 g/100 mL)、1mL益生菌悬浊液、1 mL CaCO3悬浮液（500mM Ca2+）、以及骨桥蛋白混合，骨桥蛋白的添加量占海藻酸钠溶液重量的2%；
用磁力转子将上述混合溶液分散在含有1%吐温80的40 mL大豆油中，使体系成为油包水乳液，其中转子转速为400 rpm，搅拌时间为15分钟；
将含有100μL冰醋酸的10mL的大豆油加入乳液中，搅拌5分钟，反应生成益生菌微胶囊；
搅拌停止，添加50mL 0.05M CaCl2水溶液将，微胶囊从油相洗脱到水相中，直到油相和水相完全分离，过程大约5分钟；
通过离心收集得到水相中的益生菌微胶囊。此步骤能够获取三种湿态益生菌微胶囊：R33湿态益生菌微胶囊、R71湿态益生菌微胶囊和M-16V湿态益生菌微胶囊。
3.微胶囊冻干：
于当天将制备好的微胶囊在无菌培养皿中预冻(−37 ℃±2) 20min，每个培养皿中含有约30 g样品。将冷冻后的微胶囊(−37℃)放入真空冷冻干燥机中冷冻干燥，冻干(真空度: 0.200-0.300 μHg，冷凝器温度:−50 ℃±2) 24 h后从冷冻干燥机中取出，真空保存至使用。
步骤能够获取三种冻干益生菌微胶囊：R33冻干益生菌微胶囊、R71冻干益生菌微胶囊和M-16V冻干益生菌微胶囊。
实施例2
实施例2与实施例1的不同之处在于：在微胶囊制备过程中，将海藻酸钠溶液替换为果胶溶液，其余与实施例1相同。
效果验证
一、模拟消化和冷冻干燥实验
本发明实施例采用内源乳化法制备益生菌微胶囊，且在制备过程中加入骨桥蛋白OPN，所制备出的微胶囊性能有着大幅度的提升，能够提高益生菌的抗逆境能力，具体表现为：提高益生菌了抗胃肠道消化能力，提供了益生菌的抗冷冻干燥能力。并且，所获取的益生菌微胶囊其粒径分布均一性得到了较大的提高。
本发明实施例为验证益生菌微胶囊保护效果的提升是由于OPN的加入所贡献的，且具有普适性，对实施例1和实施例2获取的样品：三种双歧杆菌益生菌（R33, R71, M16V）和两种壁材组合（海藻酸钠-碳酸钙，果胶-碳酸钙）分别进行了模拟消化和冷冻干燥的实验。具体操作如下。
微胶囊体外模拟胃肠道消化
模拟的胃液包括不同的电解质(K+，94mM；Cl- 13mM)和胃蛋白酶(269 U / mL)，而模拟的肠液包括不同的电解质(K+，10mM；Na+，249 mM;Cl- 10mM；HCO3 -,85 mM)，胆盐(3.3mM)，胰酶(16U / mL)。本试验涉及先后在模拟的胃液和肠液中进行的1h的消化。具体过程为，1克微胶囊样品与20mL的模拟胃液混合(pH = 3.3)混合。胃消化在37°C中进行，在300rpm中进行1 h。随后，得到的胃混合物与12.258 mL的模拟肠道汁混合，调整消化体系的最终pH值为6.6。在与胃消化相同的条件下，对微胶囊进行1h肠道消化。游离1 mL益生菌被设置为空白。在胃和肠道消化的末端，取1 mL消化液添加柠檬酸钠溶液对微胶囊进行裂解，释放出微胶囊中的益生菌,并通过连续梯度稀释法计数确定益生菌的细胞活力。结果见下表1-3和图1。
表1 R71在胃肠道消化测试中的结果记录表
表2 R33在胃肠道消化测试中的结果记录表
表3 M16V在胃肠道消化测试中的结果记录表
在图1中，Free culture表示游离的益生菌； SGJ 表示湿态微胶囊经过模拟胃消化；SIJ表示湿态微胶囊经过模拟肠消化；FD表示湿态微胶囊经过冷冻干燥； FD-SGJ 表示冻干后微胶囊经过模拟胃消化； FD-SIJ 表示冻干后微胶囊经过模拟肠消化。
从图1和表1-3中可得，相比于游离的益生菌（图中Free culture），R71/R33/M16V-NaAlg湿态微胶囊对益生菌经过胃肠道模拟消化后（图中 SGJ 和 SIJ分别表示湿态微胶囊经过模拟胃消化和肠消化）均表现出不同程度的保护效果，对益生菌的保护效果提高了约1.4-1.7个对数值不等。而加入OPN后，对三种益生菌的保护效果有更加显著提升，经过消化，分别仅有0.649、0.700和1.369个对数值的益生菌丧失活性，与相应的NaAlg基微胶囊相比，提升效果均在1个对数值左右（分别为0.891，1.01，0.874个对数值）。
使用果胶作为壁材的三种菌的保护效果趋势表现一致，且均比海藻酸钠表现优异。与游离菌相比，果胶基微胶囊对R71、R33、M16V三种双歧杆菌的模拟消化保护分别提高了2.187、2.061和2.090个对数值。而OPN的添加，果胶基的微胶囊对菌的保护效果同样有所提升，但是其提升效果不如海藻酸钠基微胶囊显著，提升效果仅在0.3-0.5不等（分别为0.502，0.390， 0.412个对数值）。
湿态微胶囊在经过冻干工艺后（图中FD），添加OPN的微胶囊系列（R71/R33/M16V-NaAlg/Pec-OPN）相比于未添加的微胶囊系列（R71/R33/M16V-NaAlg/Pec ），除了R71-Pec-OPN微胶囊对益生菌在冷冻干燥工艺中的保护效果不明显，没有显著性差异外，其余的微胶囊对不同益生菌的抗冷冻保护效果提高了0.178-0.527个对数值不等。
与湿态微胶囊相比，经过冻干工艺后，相应微胶囊对益生菌的抗消化保护效果均有不同程度的下降（图中FD-SGJ和FD-SIJ分别表示冻干后微胶囊分别经过模拟胃消化和肠消化），但相比于游离的益生菌，均仍有显著的保护效果。
而加入OPN后的冻干微胶囊，相比于未添加的微胶囊系列，同样对益生菌抵抗模拟消均有保护提升的效果。对三种双歧杆菌的系列微胶囊提升值在0.478-1.309个对数值不等。
综上所述，本发明实施例利用内源乳化法制备微胶囊时，通过添加OPN来提高微胶囊对双歧杆菌在模拟胃肠液消化、冷冻干燥等环境下的保护效果。
浓度实验
本发明实施例还探究了OPN添加量对益生菌微胶囊抗逆境能力的影响。在此部分实验中，按照实施例1的制备方法获取实验样品，微胶囊的壁材为果胶，选取的益生菌为R71,实验选取的OPN添加浓度为0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.7%、1.0%、2.0%、5.0%。结果如图2和表4所示。
表4 浓度测试实验结果记录表
| OPN添加浓度（%） | FD (CFU·g-1) | FD-SGJ(CFU·g-1) | FD-SIJ(CFU·g-1) |
| 0 | 1.298±0.042 | 1.268±0.044 | 2.114±0.038 |
| 0.1 | 1.453±0.046 | 1.212±0.012 | 1.914±0.056 |
| 0.2 | 2.006±0.048 | 0.996±0.102 | 1.742±0.102 |
| 0.3 | 1.973±0.014 | 0.807±0.056 | 1.683±0.102 |
| 0.4 | 1.132±0.039 | 0.566±0.029 | 1.556±0.016 |
| 0.5 | 1.311±0.137 | 0.489±0.016 | 1.502±0.071 |
| 0.7 | 1.065±0.063 | 0.583±0.016 | 1.421±0.027 |
| 1.0 | 0.961±0.029 | 0.475±0.030 | 1.196±0.050 |
| 2.0 | 0.528±0.022 | 0.376±0.162 | 0.840±0.017 |
| 5.0 | 0.341±0.043 | 0.344±0.012 | 0.787±0.027 |
从表4和图2中的记录可得，当OPN的添加量为0-5%时，对于益生菌微胶囊的抗逆境性能有显著提升（抗冷冻能力和抗胃肠道消化能力），随着OPN添加浓度的的升高，微胶囊对益生菌在诸多逆环境下的保护效果逐渐提升。
具体地，将不同微胶囊进行模拟体外消化实验，实验结果发现随着OPN添加浓度的上升，益生菌在模拟消化过程中后死亡的数量逐渐减少。当OPN添加量≥2%时，益生菌在经过冷冻干燥和胃阶段消化后，均只减少不到0.5个对数值，经过肠阶段消化后减少值小于1个对数值。
而在冷冻干燥实验中，在添加量大于0.2%时，随着OPN添加浓度的增加，益生菌的死亡数量逐渐减少。当OPN添加浓度较低时，出现冻干的保护效果不如未添加的空白对照组，推测的原因是OPN本身含有一定的钙离子，钙离子浓度是造成冻干过程中益生菌死亡的重要因素。OPN含量过低可能对益生菌保护的提升不如引入的钙离子对益生菌造成的损伤大。
货架期试验
实验方法：按照实施例1和实施例2的制备方法获取益生菌微胶囊后，取冷冻干燥后的R71微胶囊系列（即R71-Pec微胶囊、R7-Pec-OPN微胶囊、R71-NaAlg微胶囊和R71-NaAlg-OPN微胶囊）分别在25℃、4℃和-20℃下避光密封贮存63d，每隔7d取样，测定R71的活茵数。结果如图3所示。
实验结果：从图3中可得，利用内源乳化法制备益生菌微胶囊时，添加OPN后能够在一定程度上提高益生菌微胶囊的贮藏时间，这有利于延长益生菌微胶囊的货架期。
游离益生菌在25℃贮藏4周后，已经检测不到存活的益生菌了。NaAlg微胶囊和Pec微胶囊在25℃下放置9周后，其益生菌存活数量分别减少4.588和3.86个对数值，而NaAlg-OPN微胶囊和Pec-OPN微胶囊，存活的益生菌仅分别减少了3.188和2.702个对数值。相比于游离的益生菌，保护效果分别提升了4.501和4.987个对数值。R7-Pec-OPN与未添加OPN的相应微胶囊比，提升了1.161个对数值；R71-NaAlg-OPN与未添加OPN的相应微胶囊比，提升了1.400个对数值。
当样品在4℃条件下贮藏9周后，NaAlg-OPN微胶囊和Pec-OPN微胶囊中益生菌分别减少了1.727和1.304个对数值。相比于NaAlg微胶囊和Pec微胶囊，保护效果分别提高了0.536和0.646个对数值。
当样品在-20℃贮藏9周后，NaAlg-OPN微胶囊和Pec-OPN微胶囊中益生菌的减少数量均低于1个对数值。与未添加OPN的微胶囊相比，保护效果分别提高了0.228和0.213个对数值。
从上述结果中可以看出，在制备益生菌微胶囊时加入OPN，在不同的贮藏温度下均能提高益生菌的存活率，并且贮藏温度越高，OPN对益生菌微胶囊中益生菌的存活效果提升越好。
三、粒径分布实验
微胶囊粒径分布测定：粒径分布和跨度系数是通过激光粒度分析仪（Marstersizer 3000）来测定。用超纯水做分散剂，折光率为1.33，样品折射率选定为1.52，吸收率选定为0.1。Span factor=[D(v, 90) − D(v, 10)]/D(v, 50)，其中D(v, 90)、D(v,10)和D(v, 50)分别代表累积体积在90%、10%和50%处微胶囊的直径。
在此部分实验中，按照实施例1和实施例2的制备方法获取实验样品，选取的益生菌为R71,实验选取的OPN添加浓度为0.5%。结果如图4所示。
如图4所示，果胶基微胶囊有着比海藻酸基微胶囊更小的平均粒径，且粒径分布更加均一。当OPN加入时，两种壁材微胶囊的平均粒径均会增大。并且OPN能够提高海藻酸基微胶囊粒径分布的均一性。
如图5所示，本发明实施例还测定了微胶囊中OPN添加量与OPN实际量的关系（果胶微胶囊，益生菌为R71)，从图中可以看出，OPN添加量为5%时，微胶囊中的实际OPN含量仍未有明显的饱和现象。在本发明中，当OPN的添加量为10%时，依然能够制备出微胶囊。
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。
Claims (7)
1.一种包含骨桥蛋白的益生菌微胶囊，其特征在于，包含壁材以及益生菌，所述壁材的制备原料包括骨桥蛋白，还包括果胶或海藻酸钠；所述骨桥蛋白在所述壁材中的重量百分比为0.2-5%；
所述骨桥蛋白用于提高逆境环境中益生菌的存活率，所述逆境环境包括货架期、冷冻环境和胃肠道消化环境；
所述骨桥蛋白用于提高所述益生菌微胶囊的粒径分布均一性；
所述包含骨桥蛋白的益生菌微胶囊的制备方法包括以下步骤：
益生菌活化步骤：将冷冻保存的益生菌粉在固体培养基中划线培养；接着挑取单菌落接种到液体培养基中培养，传代培养后，离心，洗涤，重悬，获取益生菌悬浮液；
微胶囊制备步骤：取所述益生菌悬浮液，骨桥蛋白，以及果胶溶液或海藻酸钠溶液，采用内源乳化法或者外源乳化法制备益生菌微胶囊；
当采用内源乳化法制备益生菌胶囊时，操作如下：将益生菌悬浮液、骨桥蛋白、果胶溶液或海藻酸钠溶液、以及不溶性钙盐颗粒混合，接着分散在油相中形成油包水型乳液，再加入冰醋酸，搅拌，洗脱，离心收集，得到所述益生菌微胶囊；所述不溶性钙盐包括碳酸钙、柠檬酸钙和EDTA钙；
当采用外源乳化法制备益生菌胶囊时，操作如下：将所述益生菌悬浮液、骨桥蛋白、果胶溶液或海藻酸钠溶液、以及油相混合形成乳液，加入Ca2+溶液，搅拌，洗脱，离心收集，得到所述益生菌微胶囊；
冷冻干燥步骤：将获取的所述益生菌微胶囊进行冷冻干燥。
2.如权利要求1所述的包含骨桥蛋白的益生菌微胶囊，其特征在于，所述骨桥蛋白在所述壁材中的重量百分比为0.5-5%。
3.如权利要求1所述的包含骨桥蛋白的益生菌微胶囊，其特征在于，所述益生菌包括双歧杆菌。
4.如权利要求1所述的包含骨桥蛋白的益生菌微胶囊，其特征在于，所述益生菌包括：长双歧杆菌婴儿亚种（Bifidobacterium longum subsp. infantis R0033）、两歧双歧杆菌（Bifidobacterium bifidum R0071）、短双歧杆菌（Bifidobacterium breve M-16V）、动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp. lactis Bb-12）、动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp. lactis HN019）、动物双歧杆菌乳亚种（Bifidobacterium animalis subsp. lactis Bi-07）、瑞士乳杆菌（Lactobacillushelveticus R0052）、鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus LGG）、鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus HN001）、长双歧杆菌婴儿亚种（Bifidobacterium longumsubsp. infantis M63）和长双歧杆菌长亚种（Bifidobacterium longum subsp. longumBB536）中的一种或任意组合。
5.骨桥蛋白在制备提高逆境环境中益生菌存活率的益生菌微胶囊产品中的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述逆境环境包括货架期、冷冻环境和胃肠道消化环境。
7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述产品为药物。
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