CN108410761A - 一株具有降亚硝酸盐、抗氧化的鼠李糖乳杆菌及筛选分离方法 - Google Patents

一株具有降亚硝酸盐、抗氧化的鼠李糖乳杆菌及筛选分离方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株具有降解亚硝酸盐及抗氧化能力的鼠李糖乳杆菌的筛选及获得，该具有降解亚硝酸盐及抗氧化能力的鼠李糖乳杆菌命名为鼠李糖乳杆菌BLCC2‑0077，已于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M2015132。本发明的鼠李糖乳杆菌为BLCC2‑0077具有较强的耐酸耐胆盐能力，降解高浓度亚硝酸盐及强抗氧化能力，能够在人体定植且发挥功能作用。可直接食用或添加到功能性食品及药物中。

Description

一株具有降亚硝酸盐、抗氧化的鼠李糖乳杆菌及筛选分离 方法
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一株具有降亚硝酸盐、抗氧化的鼠 李糖乳杆菌及筛选分离方法。
背景技术
在我们生存的环境中广泛存在着硝酸盐及亚硝酸盐，如海水、饮用水、蔬菜 水果等。世界健康组织统计日常饮食中硝酸盐每日摄入量大约为43～141mg， 每天摄入亚硝酸盐的含量为1.2-3.0mg；同时随着食品工业的发展，亚硝酸盐作 为着色剂和防腐剂广泛应用于肉及肉制品的加工生产中，腌制肉类中的亚硝酸盐 含量占总摄入量的4.8％。因此在我们的日常饮食中，亚硝酸盐的摄入已经是不 可避免的事实。同时，人体因为与外界的持续接触，包括呼吸(氧化反应)、外 界污染、放射线照射等因素不断的在人体体内产生自由基。研究表明，癌症、衰 老或其它疾病大都与过量自由基的产生有关联。
如何摆脱或降低亚硝酸盐及氧化损伤，成为近些年的研究热点。乳酸菌是天 然活性物质，具有无毒特点。随着微生态学相关科学技术的发展，消费者也越来 越意识到益生菌在促进人体健康和预防疾病中的重要性，益生菌的功能开发从最 开始的调节肠道菌群，到现在的降低胆固醇、预防过敏、降血糖等多方面。含益 生菌的功能性食品越来越受到人们的青睐。
发明内容
本发明目的在于提供一株鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077及其在降解亚硝酸盐 及抗氧化中应用，旨在提供一株可食用的安全菌株，降低亚硝酸盐及氧自由基对 人体造成的损伤。
为实现上述目的，本发明通过以下技术方案实现：
第一个方面，本发明提供一株鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077，所述鼠李糖乳杆 菌(Lactobacillus rhamnosus)BLCC2-0077，已于2015年3月18日保藏于中国 典型培养物保藏中心，地址：中国.武汉.武汉大学，其保藏编号为CCTCC NO:M2015132。
第二个方面，本发明提供所述的鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077在降解亚硝酸盐 和/或抗氧化中的应用。
第三个方面，提供一种微生物菌剂在降解亚硝酸盐中的应用，所述微生物菌 剂包括鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077或鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077的培养物。
第四个方面，提供一种组合物，所述组合物包含鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077 或鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077的培养物。
第五个方面，本发明提供所述的组合物在制备抗氧化药物或功能食品中的应 用。
第六个方面，本发明提供所述的组合物在制备降解亚硝酸盐产品中的应用。
第七个方面，本发明提供所述的鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077的驯化筛选方法， 包括以下步骤：
步骤一，斜面培养：将冻干乳杆菌粉接种于固体斜面培养基上，在37℃培 养24h；
步骤二，种子培养基的优化及高效活化：取培养好的斜面，在无菌条件下接 种于100mL优化种子液体培养基中，培养基装于100ml盐水瓶中；在37℃条件 下，静置培养24h，制得种子液；
步骤三，通过盐酸萘乙二胺法，DPPH清除率测定法，筛选具有降解亚硝酸 盐及抗氧化能力的菌株；
步骤四，高效降解亚硝酸盐菌株的驯化培养；
进一步，在步骤二中，改良种子液体培养基MRS成分为：酪蛋白胨10g， 牛肉浸粉10g，酵母粉5g，葡萄糖20g，低聚果糖0.5g，吐温-80 1g，纯净水1L， pH6.5，121℃，灭菌20min。
进一步，在步骤三中，盐酸萘乙二胺法的过程如下：向9mLMRS培养基中 加入过滤除菌的终浓度为500ug/mLNaNO2溶液，再加入1mL培养18h、细胞密 度约108cfu/mL的乳酸杆菌，37℃恒温培养72h，测定培养液中NaNO2的浓度， 以不接种的MRS作对照；菌株DPPH清除率测定：向1mL、0.2mmol/L DPPH 甲醇溶液中加入1mL乳酸杆菌菌液或乳酸杆菌提取液，室温下置黑暗环境中反 应30min，用三氯甲烷抽提后，于517nm测吸光度，以去离子水为空白。
进一步，在步骤四中，降解亚硝酸盐菌株驯化筛选方法如下：将5％体积含 量且无NaNO2添加的乳酸菌菌液接入NaNO2浓度为500ug/mL的MRS培养基中， 37℃恒温培养48h，将乳酸菌液体在含有500ug/mL NaNO2的MRS固体培养基 平板中划线培养，进一步稳定菌株，观察菌体形态无改变；挑取平板菌落重新接 入NaNO2浓度为500ug/mL的MRS培养基中，37℃恒温培养48h,观察菌体形态、 长势，检测对亚硝酸盐的降解率；重复上述步骤，完成在NaNO2浓度为1000ug/mL、 2500ug/m、5000ug/mL、10000ug/mL条件下乳酸菌的耐受性驯化，并将驯化后 的菌株进行斜面培养，置于4℃冰箱保存。
与现有技术相比，本发明筛选得到的鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077具有以下优 势：
(1)本发明鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077具有高效的降解亚硝酸盐能力，在 NaNO2浓度为1000ug/mL降解率高达95.15％，NaNO2浓度为2500ug/mL降解率 达到86.80％；
(2)本发明鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077具有高效的抗氧化能力，对羟自由 基(·OH)的清除率为47.45％，总抗氧化能力达2.59，能有效降低氧化损伤带 来的不利影响，提高机体的抗氧化能力。
附图说明
图1为本发明提供的鼠李糖乳杆菌种子液镜检图片。
图2为不同NaNO2浓度下鼠李糖乳杆菌的镜检图片。
图3为本发明提供的鼠李糖乳杆菌对高浓度亚硝酸盐的降解率。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对 本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释 本发明，并不用于限定本发明。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后， 本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请 所附权利要求书所限定的范围。
本发明实施例的一种具有降解亚硝酸盐及抗氧化能力的鼠李糖乳杆菌，该降 解亚硝酸盐及抗氧化能力的鼠李糖乳杆菌命名为鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077，已 于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M2015132。
请求保藏的培养物名称及注明的鉴别特征：鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077；该 菌株已于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心收到，并登记入册， 根据要求，由2015年3月18日起保存三十年，在期满前收到提供培养物样品的 请求后再延续保存五年，该培养物的存活性由保藏中心于2015年3月25日检测 完毕，结果为存活。
生物学特性如下：为短杆状或长杆状或弯曲状的多形性杆菌，长短不一，菌 两端略圆，排列方式多为短链或呈长链。革兰氏染色阳性，兼性厌氧菌，无质粒。 通常在37℃生长良好。
下面结合附图及具体实施例对本发明的筛选方法原理作进一步描述。
实施例1：初步筛选
1实验过程
1.1降解亚硝酸盐菌株初筛
向9mLMRS培养基中加入过滤除菌的NaNO2溶液(终浓度为1000ug/mL)， 再加入1mL培养18h、细胞密度约108cfu/mL的乳酸杆菌，37℃恒温培养72h， 测定培养液中NaNO2的浓度。以不接种的MRS作对照。
1.2抗氧化菌株初筛
菌株DPPH清除率测定：向1mLDPPH甲醇溶液(0.2mmol/L)中加入1mL 乳酸杆菌菌体或乳酸杆菌提取液，室温下置黑暗环境中反应30min，用三氯甲烷 抽提后，于517nm测吸光度。以去离子水为空白。
2实验结果
初筛结果如表1所示：
表1不同分离株的亚硝酸盐降解率和DPPH清除率
菌种名称 亚硝酸盐降解率％ DPPH清除率％
L5-001 73.91 28.13
L3-003 45.05 32.41
L1-006 48.22 18.29
L1-019 83.27 22.27
6253 74.19 32.01
31 80.57 26.59
L10-001 85.42 32.50
21 6.67 21.36
由表1可知，不同乳酸菌菌种之间，降解亚硝酸盐能力差距较大，DPPH清 除能力差距较小。主要以降解亚硝酸盐能力作为主要筛菌依据。选择降解亚硝酸 盐能力在50％以上的，DPPH清除率在20％以上的，综合评定L5-001、L1-019、 6253、31、L10-001菌株降解亚硝酸盐及DPPH清除能力表现更优，可以进行后 续开发。
实施例2：降亚硝酸盐菌株驯化筛选
1实验过程
将5％体积含量且无NaNO2添加的实施例1初步筛选得到的乳酸菌菌液接入 NaNO2浓度为500ug/mL的MRS培养基中，37℃恒温培养48h，将乳酸菌液体 在含有500ug/mL NaNO2的MRS固体培养基平板中划线培养，进一步稳定菌株， 观察菌体形态无改变；挑取平板菌落重新接入NaNO2浓度为500ug/mL的MRS 培养基中，37℃恒温培养48h，观察不同NaNO2浓度下菌体形态、长势，检测 对亚硝酸盐的降解率；重复上述步骤，完成在NaNO2浓度为1000ug/mL、 2500ug/mL、5000ug/mL、10000ug/mL条件下乳酸菌的耐受性驯化，并将驯化后 的菌株进行斜面培养，置于4℃冰箱保存。
斜面接菌培养种子液，37℃，48h。向9mLMRS培养基中加入过滤除菌的 NaNO2溶液(终浓度为1000ug/mL，2500ug/mL，5000ug/mL)，再加入1mL培 养18h、细胞密度约108cfu/mL的乳酸杆菌，37℃恒温培养72h，测定培养液中 NaNO2的浓度。以不接种的MRS作对照。
2实验结果
驯化筛选结果如下表2所示：
表2不同分离株对不同浓度的亚硝酸盐降解率
菌种名称 1000ug/mL降解率％ 2500ug/mL降解率％ 5000ug/mL降解率％
L5-001 75.12 24.96％ 4.80％
L1-019 82.22 47.96％ 18.71％
6253 80.87 38.65％ 18.59％
31 83.32 32.67％ 2.36％
L10-001 95.15 86.80％ 11.02％
由表2可知，菌株通过驯化后，降解亚硝酸盐能力有了不同程度的提高。同 时随着亚硝酸盐浓度的不断增加，降解率逐渐下降。进一步证实了亚硝酸盐对于 乳酸菌具有一定的毒害作用。L10-001在NaNO2浓度为1000ug/mL降解率达到 95.15％，2500ug/mL降解率达到86.80％，表现最佳。筛选得到的L10-001即为 本发明鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077。
试验例1：抗氧化能力检测
对鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077抗氧化能力进行检测。
1实验过程
1.1菌株·OH清除率的测定：吸取0.5mL乳酸杆菌提取物和1mLO-菲罗啉， 加入1mLPBS，1mL2.5mmol/L FeSO4，1mL20mmol/LH2O2；37℃恒温水浴反应 1.5h后，在536nm处测定吸光度。
1.2菌株总抗氧化能力测定：参考南京建成总抗氧化能力测定试剂盒说明书。
2实验结果
结果如表3所示：
表3鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077抗氧化能力检测
抗氧化指标 DPPH清除率/％ ·OH清除率/％ 总抗氧化能力
抗氧化能力 32.50 47.45 2.590
鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077对羟自由基(·OH)的清除率为47.45％，总抗氧 化能力达2.59，表现出强的抗氧化能力，能有效降低氧化损伤带来的不利影响， 提高机体的抗氧化能力。
试验例2：耐酸耐胆盐实验
对鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077耐酸耐胆盐能力进行检测。
1实验过程
耐酸性实验：以pH3.0的PBS缓冲液为基础，按2％的接种量接入已活化2 代的L10-001(BLCC2-0077)液体培养物，37℃条件下分别于0min、60min和 120min取样测定活菌数；
耐胆盐实验：菌株活化2代后的液体培养物按2％接种量接入含0.2％胆盐浓 度的改良液体MRS培养基中，在37℃恒温培养箱中培养0min、30min、60min 和120min后取样测定活菌数。
2实验结果
实验结果如表4所示：
表4鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077耐酸耐胆能力检测
由表4可知，鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077具有较强的耐酸耐胆盐能力，在 pH3.0，培养120min后，存活率均在95％以上，在pH3.0，培养60min的情况下， 乳酸菌可进行正常的增殖生长。且在0.2％胆盐浓度下，培养培养120min后，存 活率在51％以上，培养60min，30min的条件下，耐酸耐胆盐的能力更强，分别 达到60％以上，65％以上。可很好的经过胃肠道在体肠道后段定植发挥作用。

Claims (10)

1.一株鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077，其特征在于，所述鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)BLCC2-0077，已于2015年3月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M2015132。
2.如权利要求1所述的鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077在降解亚硝酸盐和/或抗氧化中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，将鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077制备成体内定植菌剂在降解亚硝酸盐和/或抗氧化中的应用。
4.一种组合物，其特征在于，所述组合物包含鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077或鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077的培养物。
5.如权利要求4所述的组合物在制备抗氧化药物或功能食品中的应用。
6.如权利要求4所述的组合物在制备降解亚硝酸盐产品中的应用。
7.如权利要求1所述的鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077的驯化筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一，斜面培养：将冻干乳杆菌粉接种于固体斜面培养基上，在37℃培养24h；
步骤二，种子培养基的优化及高效活化：取培养好的斜面，在无菌条件下接种于100mL优化种子液体培养基中，培养基装于100ml盐水瓶中；在37℃条件下，静置培养24h，制得种子液；
步骤三，通过盐酸萘乙二胺法，DPPH清除率测定法，筛选具有降解亚硝酸盐及抗氧化能力的菌株；
步骤四，高效降解亚硝酸盐菌株的驯化培养，筛选降解亚硝酸能力最强的菌株。即得。
8.如权利要求7所述的鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077的驯化筛选方法，其特征在于，在步骤二中，改良种子液体培养基MRS成分为：酪蛋白胨10g，牛肉浸粉10g，酵母粉5g，葡萄糖20g，低聚果糖0.5g，吐温-80 1g，纯净水1L，pH6.5，121℃，灭菌20min。
9.如权利要求7所述的鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077的驯化筛选方法，其特征在于，在步骤三中，盐酸萘乙二胺法的过程如下：向9mLMRS培养基中加入过滤除菌的终浓度为500ug/mLNaNO2溶液，再加入1mL培养18h、细胞密度约108cfu/mL的乳酸杆菌，37℃恒温培养72h，测定培养液中NaNO2的浓度，以不接种的MRS作对照；菌株DPPH清除率测定：向1mL、0.2mmol/LDPPH甲醇溶液中加入1mL乳酸杆菌菌液或乳酸杆菌提取液，室温下置黑暗环境中反应30min，用三氯甲烷抽提后，于517nm测吸光度，以去离子水为空白。
10.如权利要求7所述的鼠李糖乳杆菌BLCC2-0077的驯化筛选方法，其特征在于，在步骤四中，降解亚硝酸盐菌株驯化筛选方法如下：将5％体积含量且无NaNO2添加的乳酸菌菌液接入NaNO2浓度为500ug/mL的MRS培养基中，37℃恒温培养48h，将乳酸菌液体在含有500ug/mL NaNO2的MRS固体培养基平板中划线培养，进一步稳定菌株，观察菌体形态无改变；挑取平板菌落重新接入NaNO2浓度为500ug/mL的MRS培养基中，37℃恒温培养48h,观察菌体形态、长势，检测对亚硝酸盐的降解率；重复上述步骤，完成在NaNO2浓度为1000ug/mL、2500ug/m、5000ug/mL、10000ug/mL条件下乳酸菌的耐受性驯化，并将驯化后的菌株进行斜面培养，置于4℃冰箱保存。
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Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109136130A (zh) * 2018-08-27 2019-01-04 南昌大学 一株鼠李糖乳杆菌ncu2217
CN113293118A (zh) * 2021-07-14 2021-08-24 山东凤凰生物有限公司 一种鼠李糖乳杆菌lr3001及其应用
CN114874951A (zh) * 2022-06-14 2022-08-09 内蒙古一康健康发展有限责任公司 一种新型鼠李糖乳杆菌菌株及其应用
CN114921383A (zh) * 2022-06-14 2022-08-19 内蒙古一康健康发展有限责任公司 一种具有清除胆固醇功能的益生菌制剂及其制备方法

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1982437A (zh) * 2005-12-16 2007-06-20 统一企业(中国)投资有限公司 一种新颖的耐酸耐胆盐、抗肠道致病菌和抗氧化能力鼠李糖乳杆菌株
CN102618456A (zh) * 2012-02-28 2012-08-01 江南大学 一种能够缓解慢性酒精性肝损伤的鼠李糖乳杆菌及其用途
CN102858948A (zh) * 2010-01-08 2013-01-02 热尔韦·达诺尼公司 具有抗氧化作用的乳酸杆菌
WO2013176320A1 (ko) * 2012-05-25 2013-11-28 강원대학교 산학협력단 인체에서 유래한 유산균 락토바실러스 람노서스 hk-9 및 그를 이용한 발효물과 화장료 조성물
KR20130131968A (ko) * 2012-05-25 2013-12-04 강원대학교산학협력단 인체에서 유래한 유산균 락토바실러스 람노서스 ｈｋ-9 및 그를 이용한 발효물과 화장료 조성물
CN104593290A (zh) * 2014-12-22 2015-05-06 江苏省农业科学院 一种具有抗氧化功能的泡菜复合发酵剂配方及其应用
CN105176892A (zh) * 2015-11-02 2015-12-23 天津科技大学 一株消化乳杆菌 w369及其功能应用
CN105497078A (zh) * 2014-08-22 2016-04-20 财团法人食品工业发展研究所 新颖的鼠李糖乳杆菌菌株及其用于抑制黄嘌呤氧化酶及治疗痛风的代谢产物

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1982437A (zh) * 2005-12-16 2007-06-20 统一企业(中国)投资有限公司 一种新颖的耐酸耐胆盐、抗肠道致病菌和抗氧化能力鼠李糖乳杆菌株
CN102858948A (zh) * 2010-01-08 2013-01-02 热尔韦·达诺尼公司 具有抗氧化作用的乳酸杆菌
CN102618456A (zh) * 2012-02-28 2012-08-01 江南大学 一种能够缓解慢性酒精性肝损伤的鼠李糖乳杆菌及其用途
WO2013176320A1 (ko) * 2012-05-25 2013-11-28 강원대학교 산학협력단 인체에서 유래한 유산균 락토바실러스 람노서스 hk-9 및 그를 이용한 발효물과 화장료 조성물
KR20130131968A (ko) * 2012-05-25 2013-12-04 강원대학교산학협력단 인체에서 유래한 유산균 락토바실러스 람노서스 ｈｋ-9 및 그를 이용한 발효물과 화장료 조성물
CN105497078A (zh) * 2014-08-22 2016-04-20 财团法人食品工业发展研究所 新颖的鼠李糖乳杆菌菌株及其用于抑制黄嘌呤氧化酶及治疗痛风的代谢产物
CN104593290A (zh) * 2014-12-22 2015-05-06 江苏省农业科学院 一种具有抗氧化功能的泡菜复合发酵剂配方及其应用
CN105176892A (zh) * 2015-11-02 2015-12-23 天津科技大学 一株消化乳杆菌 w369及其功能应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DONG-MEI LIU ET AL: "Characterization of Nitrite Degradation by Lactobacillus casei subsp. rhamnosus LCR 6013", 《PLOS ONE》 *
刘冬梅 等: "Lactobacillus casei subsp.rhamnosus 719对泡菜中亚硝酸盐的影响", 《华南理工大学学报(自然科学版）》 *
周鲜娇 等: "发酵酸菜中鼠李糖乳杆菌的分离及其生物活性", 《食品工业科技》 *
李春 等: "第31 摘要，第32页 左栏第2段，第32-34页 实验材料与方法，结果与分析", 《中国酿造》 *
杨婧 等: "一株降解亚硝酸盐乳酸菌的筛选及其在泡菜中的应用", 《中国调味品》 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109136130A (zh) * 2018-08-27 2019-01-04 南昌大学 一株鼠李糖乳杆菌ncu2217
CN113293118A (zh) * 2021-07-14 2021-08-24 山东凤凰生物有限公司 一种鼠李糖乳杆菌lr3001及其应用
CN114874951A (zh) * 2022-06-14 2022-08-09 内蒙古一康健康发展有限责任公司 一种新型鼠李糖乳杆菌菌株及其应用
CN114921383A (zh) * 2022-06-14 2022-08-19 内蒙古一康健康发展有限责任公司 一种具有清除胆固醇功能的益生菌制剂及其制备方法
CN114921383B (zh) * 2022-06-14 2024-01-26 内蒙古一康健康发展有限责任公司 一种具有清除胆固醇功能的益生菌制剂及其制备方法
CN114874951B (zh) * 2022-06-14 2024-01-26 内蒙古一康健康发展有限责任公司 一种新型鼠李糖乳杆菌菌株及其应用

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