CN108384814B - 一种根皮素的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种根皮素的制备方法,属于植物提取技术领域,该方法具体为:(1)将根皮苷含量丰富的植物材料进行水煮,获取水煮液;(2)将绿色木霉孢子悬液接种于步骤(1)中的获得的水煮液中进行发酵,待发酵结束后,对发酵液进行过滤除去菌体,获得滤液,先对所述滤液进行冷藏,再从经冷藏后的滤液中获取沉淀,然后将所述沉淀纯化后制得根皮素固体。该方法操作简便且不需要大量的有机溶剂,具有成本低、绿色环保等优势,且最终制备的根皮素不但产量高且纯度高,适合根皮素的大规模生产。

Description

一种根皮素的制备方法
技术领域
本发明属于植物提取技术领域,具体涉及一种根皮素的制备方法。
背景技术
根皮素是一种二氢查耳酮化合物,具有抗氧化、抗炎、降血糖、祛斑及光滑肤质等作用,主要分布于苹果等的果皮及根皮中,其已被用于美容护肤产品中。目前,常见的根皮素制备方法有直接提取分离、化学合成及利用根皮苷进行化学及生物半制备等方法。其中,直接提取分离法虽然路线简单,但提取材料本身根皮素含量低,且分离过程中耗费大量的填料及化学溶剂;化学合成法产率不高于30%,且化学合成需要大量原料并存在副产物(IOD:10.1002/chin.200618063)。申请号为201310238175.1的中国发明专利公开了利用化学半合成法制备根皮素,其中需要购买根皮苷原料且需要酸碱及复杂的反应条件。《具有生物活性的天然产物根皮素的合成与纯化的相关研究》等通过柚皮苷半合成根皮素法需要大量柚皮苷等原料且需通过多步化学反应才能得到。申请号为200910228671.2的中国发明专利采用酶法发酵制备根皮素,但酶的本身成本高且不稳定,长期使用后酶活性会显著降低。《紫变青霉生物转化根皮苷制备根皮素的研究》利用微生物转化发酵根皮苷得到根皮素,此方法需要额外配置产酶培养基且需要购买根皮苷原料。上述方法不但成本高,且制备工艺复杂,因此,急需一种简单经济的根皮素制备方法。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提供一种根皮素的制备方法
为达到上述目的,本发明提供如下技术方案:
1、一种根皮素的制备方法,所述方法包括如下步骤:
(1)将根皮苷含量丰富的植物材料进行水煮,获取水煮液;
(2)将绿色木霉孢子悬液接种于步骤(1)中的获得的水煮液中进行发酵,待发酵结束后,对发酵液进行过滤除去菌体,获得滤液,先对所述滤液进行冷藏,再从经冷藏后的滤液中获取沉淀,然后将所述沉淀纯化后制得根皮素固体。
优选的,所述方法包括如下步骤:
(1)将根皮苷含量丰富的植物材料放入水中水煮10-20min,获得根皮苷浓度为4-10mg/mL的水煮液;
(2)按0.5-2%的接种量将孢子浓度为3-7×107CFU/mL的绿色木霉孢子悬液接种于步骤(1)中的获得的水煮液中,然后在28℃下发酵,待所述发酵结束后,对发酵液进行过滤去除菌体,获得滤液,然后先对所述滤液进行冷藏,再从经冷藏后的滤液中获取沉淀,然后将所述沉淀纯化后制得根皮素固体。
优选的,所述方法包括如下步骤:
(1)将根皮苷含量丰富的植物材料放入水中水煮15min,获得根皮苷浓度为6mg/mL的水煮液;
(2)按1%的接种量将孢子浓度为6×107CFU/mL的绿色木霉孢子悬液接种于步骤(1)中的获得的水煮液中,然后在28℃下发酵,待所述发酵结束后,对发酵液进行过滤去除菌体,获得滤液,然后先对所述滤液进行冷藏,再从经冷藏后的滤液中获取沉淀,然后将所述沉淀纯化后制得根皮素固体。
优选的,步骤(2)中,所述过滤为采用孔径为0.5-2mm的纱布进行过滤。
优选的,步骤(2)中,所述冷藏为在4℃下冷藏。
优选的,步骤(2)中,所述获取沉淀的方法为抽滤或低温离心后过滤。
优选的,步骤(2)中,所述纯化的方式为重结晶或硅胶色谱层析。
优选的,所述重结晶具体为将沉淀溶于乙酸乙酯或乙醇后重结晶。
优选的,步骤(1)中,所述根皮苷含量丰富的植物材料为巫山林檎叶、多穗甜茶叶片、湖北海棠叶片或垂丝海棠叶片中的一种。
本发明的有益效果在于:本发明提供了一种根皮素的制备方法,该方法以根皮苷含量丰富的植物为原料,通过水煮法提取原料中的有效成分,然后在不加入外界营养成分的情况下直接以水煮液作为发酵液,以绿色木霉进行发酵,通过合理绿色木霉孢子悬液的接种量及该悬液中绿色木霉孢子的浓度,最终制备出高纯度根皮素。该方法操作简便且不需要大量的有机溶剂,具有成本低、绿色环保等优势,且最终制备的根皮素不但产量高且纯度高,适合根皮素的大规模生产。
附图说明
为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚,本发明提供如下附图进行说明:
图1为实施例1中巫山林檎叶水煮液的高效液相色谱图;
图2为实施例1中经绿色木霉发酵5天后的巫山林檎叶水煮液的高效液相色谱图;
图3为实施例1中经绿色木霉发酵7天后的巫山林檎叶水煮液的高效液相色谱图。
具体实施方式
下面将对本发明的优选实施例进行详细的描述。
本发明实施例中使用的主要原料为:巫山林檎叶,来源于重庆市巫山县境内海拔1200-1600米的地区;绿色木霉(Trichoderma viride),CICC 13021。
实施例1
制备根皮素
(1)将巫山林檎叶放入水中水煮15min,获得根皮苷浓度为6mg/mL的水煮液,对该水煮液稀释30倍后进行高效液相色谱分析,结果如图1所示,由图1可知,该提取液中根皮苷含量丰富且杂质较少;
(2)按1%的接种量将孢子浓度为6×107CFU/mL的绿色木霉孢子悬液接种于步骤(1)中的获得的水煮液中,然后在28℃下发酵,发酵5天时,取适量发酵液稀释30倍后进行高效液相色谱分析,结果如图2所示,由图2可知,经5天发酵后,提取液中根皮苷已大部分转化为根皮素;然后发酵7天时,取适量发酵液稀释30倍后进行高效液相色谱分析,结果如图3所示,由图3可知,经7天发酵后,提取液中根皮苷已基本全部转化为根皮素,待所述发酵结束后,采用孔径为1mm的纱布进行过滤对发酵液进行过滤去除菌体,获得滤液,然后先将滤液在4℃下冷藏,再对经冷藏后的滤液进行抽滤,获取沉淀,将沉淀溶解于乙酸乙酯后重结晶,制得根皮素固体。经测试,该方法转化率达95%以上,最终根皮素纯度可达90%以上。
最后说明的是,以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述,但本领域技术人员应当理解,可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变,而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。

Claims (7)

1.一种根皮素的制备方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
(1)将根皮苷含量丰富的植物材料放入水中水煮10-20min,获得根皮苷浓度为4-10mg/mL的水煮液;
(2)按0.5-2%的接种量将孢子浓度为3-7×107CFU/mL的绿色木霉孢子悬液接种于步骤(1)中的获得的水煮液中,然后在28℃下发酵,待所述发酵结束后,对发酵液进行过滤去除菌体,获得滤液,然后先对所述滤液进行冷藏,再从经冷藏后的滤液中获取沉淀,然后将所述沉淀纯化后制得根皮素固体;
步骤(1)中,所述根皮苷含量丰富的植物材料为巫山林檎叶、多穗甜茶叶片、湖北海棠叶片或垂丝海棠叶片中的一种。
2.根据权利要求1所述的一种根皮素的制备方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
(1)将根皮苷含量丰富的植物材料放入水中水煮15min,获得根皮苷浓度为6mg/mL的水煮液;
(2)按1%的接种量将孢子浓度为6×107CFU/mL的绿色木霉孢子悬液接种于步骤(1)中的获得的水煮液中,然后在28℃下发酵,待所述发酵结束后,对发酵液进行过滤去除菌体,获得滤液,然后先对所述滤液进行冷藏,再从经冷藏后的滤液中获取沉淀,然后将所述沉淀纯化后制得根皮素固体。
3.根据权利要求1或2所述的一种根皮素的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,所述过滤为采用孔径为0.5-2mm的纱布进行过滤。
4.根据权利要求1或2所述的一种根皮素的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,所述冷藏为在4℃下冷藏。
5.根据权利要求1或2所述的一种根皮素的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,所述获取沉淀的方法为抽滤或低温离心后过滤。
6.根据权利要求1或2所述的一种根皮素的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,所述纯化的方式为重结晶或硅胶色谱层析。
7.根据权利要求6所述的一种根皮素的制备方法,其特征在于,所述重结晶具体为将沉淀溶于乙酸乙酯或乙醇后重结晶。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109400454B (zh) * 2018-09-13 2021-09-17 广西苷亮健生物科技有限公司 一种从木姜叶柯植物样品中提取根皮素的方法
CN109136320B (zh) * 2018-09-19 2021-07-02 湖南中茂生物科技有限公司 一种酶菌复合体系转化根皮苷制备根皮素的方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101701226A (zh) * 2009-11-23 2010-05-05 天津市尖峰天然产物研究开发有限公司 酶解法生产根皮素的方法
CN101811949A (zh) * 2010-05-14 2010-08-25 上海利盛生化有限公司 根皮素粉剂的提纯方法
CN103571892A (zh) * 2012-07-31 2014-02-12 西姆莱斯有限公司 二氢查耳酮的生物技术生产方法
CN105543108A (zh) * 2016-01-25 2016-05-04 浙江工业大学 紫变青霉ql-9204及在转化根皮苷制备根皮素中的应用
WO2016193504A1 (en) * 2015-06-05 2016-12-08 Evolva Sa Biosynthesis of phenylpropanoid and dihydrophenylpropanoid derivatives
CN107586795A (zh) * 2017-10-10 2018-01-16 嘉兴欣贝莱生物科技有限公司 一种酿酒酵母发酵生产根皮素的方法

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2006262910A (ja) * 2006-06-01 2006-10-05 Nikka Whisky Distilling Co Ltd フロレチン配糖体の製造方法
CN103230408B (zh) * 2013-04-27 2014-10-22 佛山市金骏康健康科技有限公司 一种根皮素的制备方法
CN104480080A (zh) * 2014-11-21 2015-04-01 西北农林科技大学 一种重组苹果根皮苷糖基转移酶及分离纯化方法
CN105838745A (zh) * 2016-04-17 2016-08-10 中国农业科学院郑州果树研究所 一种双酶法转化根皮苷制备黄色素的方法
CN107683929B (zh) * 2016-08-05 2021-04-09 四川师范大学 金花菌对栘*叶化学成分的微生物转化及应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101701226A (zh) * 2009-11-23 2010-05-05 天津市尖峰天然产物研究开发有限公司 酶解法生产根皮素的方法
CN101811949A (zh) * 2010-05-14 2010-08-25 上海利盛生化有限公司 根皮素粉剂的提纯方法
CN103571892A (zh) * 2012-07-31 2014-02-12 西姆莱斯有限公司 二氢查耳酮的生物技术生产方法
WO2016193504A1 (en) * 2015-06-05 2016-12-08 Evolva Sa Biosynthesis of phenylpropanoid and dihydrophenylpropanoid derivatives
CN105543108A (zh) * 2016-01-25 2016-05-04 浙江工业大学 紫变青霉ql-9204及在转化根皮苷制备根皮素中的应用
CN107586795A (zh) * 2017-10-10 2018-01-16 嘉兴欣贝莱生物科技有限公司 一种酿酒酵母发酵生产根皮素的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
《特异青霉菌株对根皮苷的微生物转化研究》;贺凌霜;《武警后勤学院学报》;20180831;第27卷(第8期);第647-650页 *
《紫变青霉生物转化根皮苷制备根皮素的研究》;梅建凤;《浙江工业大学学报》;20161231;第44卷(第6期);第661页右栏第1.3节,第661页左栏第1-2段,第664页"结论"部分 *
《绿色木霉产生的葡萄糖苷酶类》;高培基;《生物化学杂志》;19921231;第8卷(第6期);第735-740页 *

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