CN101701226A - 酶解法生产根皮素的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种酶解法生产根皮素的方法，包括如下步骤：将根皮苷质量含量为10％～80％的根皮苷原料溶于去离子水中；加入活化的sino-β水解酶，所述根皮苷原料与所述sino-β水解酶的质量比为1～50∶1，在20℃～90℃，在搅拌下，酶解反应5～72小时；迅速升温到60℃～100℃灭活15～35min；固液分离，固体经干燥，得根皮素。本方法以植物中根皮苷为生产原料，原料易得，价格低廉，生产工艺简单，容易控制。本发明的方法酶解得到的苷元构型不被破坏，生理活性更强；酶解的专一性强，得到的产物中杂质极少，由于本发明的方法获得的根皮素呈白色，从而拓宽了根皮素的应用领域。

Description

酶解法生产根皮素的方法
技术领域
本发明涉及一种根皮素的制备，特别是涉及一种酶解法生产根皮素的方法。
背景技术
根皮素是国外新近研究开发出来的一种新型天然皮肤美白剂，主要分布于苹果、梨等多汁水果的果皮及根皮。其保湿作用非常强，能吸收本身重量4～5倍的水。能促进配方中其它功能因子的吸收利用，使其发挥出更好的功效。抗氧化功能很强，能清除皮肤内的自由基，对油脂的抗氧化浓度在(10～30)×10-6之间。能阻止糖类成分进入表皮细胞，从而抑制皮腺的过度分泌，治疗分泌旺盛型粉刺；能抑制黑素细胞活性，对各种皮肤色斑有淡化作用等。根皮素可应用于多个领域，如医药、保健品、食品等，生产根皮素的传统方法是用有机化学方法合成，也可以通过天然的根皮苷进行酸解、碱解等方法获得。传统方法存在有机物残留或酸、碱残留的不足。如酸解工艺得到的根皮素为粉红色，要得到白色的根皮素还必须进行脱色这一步。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术存在的不足，提供一种酶解法生产根皮素的方法。
本发明的技术方案概述如下：
一种酶解法生产根皮素的方法，包括如下步骤：
(1)按质量比为1∶10～50的比例，将根皮苷质量含量为10％～80％的根皮苷原料溶于去离子水中；
(2)加入经过在pH＝4.0～5.0，温度20℃～60℃活化15～90min的sino-β水解酶，所述根皮苷原料与所述sino-β水解酶的质量比为1～50∶1，在20℃～90℃，在搅拌下，酶解反应5～72小时；
(3)迅速升温到60℃～100℃灭活15～35min；
(4)固液分离，固体经干燥，得根皮素。
所述根皮苷原料与去离子水的质量比最好是1∶35。
所述根皮苷质量含量为40％～80％。
所述sino-β水解酶的活化温度为40℃～45℃活化时间为20min。
所述步骤(2)中所述根皮苷原料与所述sino-β水解酶的质量比为4～20∶1。
所述步骤(2)中所述酶解的温度为40℃～60℃，酶解反应时间为10～48小时。
所述步骤(3)灭活温度为80℃～90℃灭活时间为20min。
本发明的方法生产得到的根皮素为白色，克服了传统的工艺如酸解工艺得到的根皮素为红棕色，若要获得白色的根皮素还必须进行脱色这一步骤。本发明的方法制备的根皮素醇溶性好。
本方法以植物中根皮苷为生产原料，原料容易解决，价格低廉，生产工艺简单，容易控制。最突出的优点是它不同于常规的糖苷的水解，酶解得到的苷元构型不被破坏，生理活性更强；酶解的专一性强，得到的产物中杂质极少，由于本发明的方法获得的根皮素呈白色，从而拓宽了根皮素的应用领域，对生物技术应用具有新的突破。
附图说明
图1为根皮苷酸解得到根皮素的照片。
图2为根皮苷酶解得到根皮素的照片。
图3为酸解的根皮素脱色后的照片。
图4为400mg酸解的根皮素溶于2ml无水乙醇的照片。
图5为400mg酶解的根皮素溶于2ml无水乙醇的照片。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
一种酶解法生产根皮素的方法，包括如下步骤：
(1)按质量比为1∶30的比例，将根皮苷质量含量为10％的根皮苷原料溶于去离子水中；
(2)加入经过在pH＝4.0，温度40℃活化15min的sino-β水解酶，所述根皮苷原料与所述sino-β水解酶的质量比为10∶1，在40℃，在搅拌下，酶解反应72小时；
(3)迅速升温到80℃灭活20min；
(4)固液分离，固体经干燥，得根皮素。根皮苷的酶解率可达到70％。
实施例2
一种酶解法生产根皮素的方法，包括如下步骤：
(1)按质量比为1∶10的比例，将根皮苷质量含量为50％的根皮苷原料溶于80℃去离子水中；
(2)加入经过在pH＝5.0，温度40℃活化15min的sino-β水解酶，所述根皮苷原料与所述sino-β水解酶的质量比为20∶1，在60℃，在搅拌下，酶解反应48小时；
(3)迅速升温到90℃灭活15min；
(4)固液分离，固体经干燥，得根皮素。根皮苷的酶解率可达到80％。
实施例3
一种酶解法生产根皮素的方法，包括如下步骤：
(1)按质量比为1∶50的比例，将根皮苷质量含量为80％的根皮苷原料溶于88℃去离子水中；
(2)加入经过在pH＝4.0，温度45℃活化15min的sino-β水解酶，所述根皮苷原料与所述sino-β水解酶的质量比为4∶1，在40℃，在搅拌下，酶解反应10小时；
(3)迅速升温到90℃灭活20min；
(4)固液分离，固体经干燥，得根皮素。根皮苷的酶解率可达到100％。
实施例4
一种酶解法生产根皮素的方法，包括如下步骤：
(1)按质量比为1∶35的比例，将根皮苷质量含量为40％的根皮苷原料溶于去离子水中；
(2)加入经过在pH＝4.0，温度20℃活化90min的sino-β水解酶，所述根皮苷原料与所述sino-β水解酶的质量比为1∶1，在90℃，在搅拌下，酶解反应5小时；
(3)迅速升温到100℃灭活15min；
(4)固液分离，固体经干燥，得根皮素。
实施例5
一种酶解法生产根皮素的方法，包括如下步骤：
(1)按质量比为1∶35的比例，将根皮苷质量含量为60％的根皮苷原料溶于去离子水中；
(2)加入经过在pH＝4.5，温度60℃活化40min的sino-β水解酶，所述根皮苷原料与所述sino-β水解酶的质量比为50∶1，在20℃，在搅拌下，酶解反应48小时；
(3)迅速升温到60℃灭活35min；
(4)固液分离，固体经干燥，得根皮素。
实施例6
将400mg酸解法获得的根皮素溶于2ml无水乙醇，震荡，溶液为红褐色、底部有不溶物；将400mg本发明的各实施例获得的根皮素溶于2ml无水乙醇，震荡，溶液澄清为淡黄色，(见图1、图2、图3、图4和图5)则说明了本发明的方法制备的根皮素颜色好，醇溶性好。
由于本发明的酶解反应的特殊性，使得酶解得到的苷元构型不被破坏，实验以中性红为电化学探针，采用循环伏安法考察了本发明的方法获得的根皮素与DNA的相互作用。在pH＝4.1的Briton-Robinson缓冲溶液中，中性红在玻碳电极上产生一对明显的氧化还原峰。随着DNA的加入，中性红(NR，分析纯，上海试剂三厂)的氧化还原峰电流ip明显下降，表明NR与DNA结合，溶液中游离的中性红减少。向体系中继续加入根皮素，中性红的氧化还原峰回升，体系中游离的中性红增多。由于药物与中性红在DNA上有共同的结合位点，药物与DNA结合会游离出中性红。吸收光谱法证实了竞争结合的机制。则说明了本发明的方法制备的根皮素的生理活性强。

Claims (7)

1.一种酶解法生产根皮素的方法，其特征包括如下步骤：
(1)按质量比为1∶10～50的比例，将根皮苷质量含量为10％～80％的根皮苷原料溶于去离子水中；
(2)加入经过在pH＝4.0～5.0，温度20℃～60℃活化15～90min的sino-β水解酶，所述根皮苷原料与所述sino-β水解酶的质量比为1～50∶1，在20℃～90℃，在搅拌下，酶解反应5～72小时；
(3)迅速升温到60℃～100℃灭活15～35min；
(4)固液分离，固体经干燥，得根皮素。
2.根据权利要求1所述的一种酶解法生产根皮素的方法，其特征是所述根皮苷原料与去离子水的质量比为1∶35。
3.根据权利要求1所述的一种酶解法生产根皮素的方法，其特征是所述根皮苷质量含量为40％～80％。
4.根据权利要求1所述的一种酶解法生产根皮素的方法，其特征是所述sino-β水解酶的活化温度为40℃～45℃活化时间为20min。
5.根据权利要求1所述的一种酶解法生产根皮素的方法，其特征是所述步骤(2)中所述根皮苷原料与所述sino-β水解酶的质量比为4～20∶1。
6.根据权利要求1所述的一种酶解法生产根皮素的方法，其特征是所述步骤(2)中所述酶解的温度为40℃～60℃，酶解反应时间为10～48小时。
7.根据权利要求1所述的一种酶解法生产根皮素的方法，其特征是所述步骤(3)灭活温度为80℃～90℃灭活时间为20min。
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