CN108348598A - 人源化抗C1s抗体及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本公开提供了人源化抗C1s抗体。本公开提供了包含编码所述人源化抗C1s抗体的核苷酸序列的核酸；及包含所述核酸的宿主细胞。本公开提供了包含所述人源化抗C1s抗体的组合物。本公开提供了所述人源化抗C1s抗体的使用方法。

Description

人源化抗C1s抗体及其使用方法

交叉引用

本申请案要求2015年4月6日提交的美国临时专利申请第62/143,636号和2015年8月4日提交的美国临时专利申请第62/200,997号的权益，所述申请案以引用的方式整体并入本文。

介绍

补体系统是免疫应答公知的效应机制，不但针对病原体和其它有害药剂提供防护，而且提供损伤恢复。补体途径包括许多通常在体内呈非活性形式存在的蛋白质。经典补体途径通过补体第一组分的激活而触发，第一组分称为C1复合物，由C1q、C1r和C1s组成。C1与免疫复合物或其它活化剂结合后，C1s组分，即二异丙基氟磷酸(DFP)-敏感的丝氨酸蛋白酶，裂解补体组分C4和C2以引发经典补体途径的激活。经典补体途径似乎在许多疾病和病症中起作用。

概要

本公开提供了人源化抗C1s抗体。本公开提供了包含编码所述人源化抗C1s抗体的核苷酸序列的核酸；及包含所述核酸的宿主细胞。本公开提供了包含所述人源化抗C1s抗体的组合物。本公开提供了所述人源化抗C1s抗体的使用方法。

本公开提供了一种特异性结合补体组分C1s的人源化抗体，其中所述抗体包含：a)包含以下氨基酸序列的VH区：

(Q/E)VQL(V/Q)QSGAE(V/L)KKPGASVK(L/V)SC(T/A)ASGFNIKDDYIHWV(K/R)QAPGQGLEWIGRIDPADGHTKYAPKFQVK(V/A)TITADTST(S/N)TAY(L/M)(E/Q)LSSL(R/T)SEDTAVYYCARYGYGREVFDYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO：26)；和b)包含以下氨基酸序列的VL区：

DIVLTQSPDSLAVSLGERATISCKASQSVDYDGDSYMNWYQQK(T/P)GQPPK(I/L)LIYDASNLESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLE(E/P)EDFA(I/V)YYCQQSNEDPWTFGGGTKVEIK(SEQ IDNO：27)。在一些情况下，所述抗体包含：a)包含SEQ ID NO：10的VH区；和b)包含SEQ ID NO：20的VL区。在一些情况下，所述抗体包含：a)包含SEQ ID NO：10的VH区；和b)包含SEQ IDNO：22的VL区。在一些情况下，所述抗体包含：a)包含SEQ ID NO：10的VH区；和b)包含SEQ IDNO：24的VL区。在一些情况下，所述抗体包含：a)包含SEQ ID NO：12的VH区；和b)包含SEQ IDNO：20的VL区。在一些情况下，所述抗体包含：a)包含SEQ ID NO：12的VH区；和b)包含SEQ IDNO：22的VL区。在一些情况下，所述抗体包含：a)包含SEQ ID NO：12的VH区；和b)包含SEQ IDNO：24的VL区。在一些情况下，所述抗体包含：a)包含SEQ ID NO：14的VH区；和b)包含SEQ IDNO：20的VL区。在一些情况下，所述抗体包含：a)包含SEQ ID NO：14的VH区；和b)包含SEQ IDNO：22的VL区。在一些情况下，所述抗体包含：a)包含SEQ ID NO：14的VH区；和b)包含SEQ IDNO：24的VL区。在一些情况下，所述抗体包含：a)包含SEQ ID NO：16的VH区；和b)包含SEQ IDNO：20的VL区。在一些情况下，所述抗体包含：a)包含SEQ ID NO：16的VH区；和b)包含SEQ IDNO：22的VL区。在一些情况下，所述抗体包含：a)包含SEQ ID NO：16的VH区；和b)包含SEQ IDNO：24的VL区。在一些情况下，所述抗体包含：a)包含SEQ ID NO：18的VH区；和b)包含SEQ IDNO：20的VL区。在一些情况下，所述抗体包含：a)包含SEQ ID NO：18的VH区；和b)包含SEQ IDNO：22的VL区。在一些情况下，所述抗体包含：a)包含SEQ ID NO：18的VH区；和b)包含SEQ IDNO：24的VL区。在一些情况下，所述人源化抗体选自由Fab片段、F(ab’)₂片段、scFv和Fv组成的组。在一些情况下，所述人源化抗体包含同种型IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区。

本公开提供了一种组合物，其包含：a)如以上和下文所述的人源化抗体；和b)药学上可接受的赋形剂。在一些情况下，所述组合物包含张度剂、助悬剂、乳化剂、稳定剂、防腐剂、冻干保护剂、表面活性剂和糖中的一种或多种。本公开提供了一种容器，其包含本公开的组合物。在一些情况下，所述容器是无菌的。在一些情况下，所述容器为小瓶、瓶或注射器。

本公开提供了一种降低个体(例如，个体的流体、组织或器官)中补体组分裂解产物的水平的方法，所述方法包括按有效抑制C1s并降低所述裂解产物水平的量，向所述个体施用如以上或下文所述的本公开的人源化抗体，或如以上或下文所述的本公开的组合物。在一些情况下，所述补体组分裂解产物为C4裂解产物(例如，C4b)。在一些情况下，所述补体组分裂解产物为C2裂解产物(例如，C2a)。在一些情况下，所述补体组分裂解产物为C3裂解产物。在一些情况下，所述个体为人。在一些情况下，所述施用为静脉内。在一些情况下，所述施用为肌肉内。在一些情况下，所述施用为鞘内。在一些情况下，所述施用为皮下。在一些情况下，补体组分裂解产物水平的降低对治疗补体介导的病症有效。在一些情况下，所述补体介导的病症为同种免疫病症。在一些情况下，所述补体介导的病症为自身免疫病症。

本公开提供了一种抑制个体中C1s介导的补体组分裂解的方法，所述方法包括按有效抑制C1s介导的补体组分裂解的量，向所述个体施用如以上或下文所述的本公开的人源化抗体，或如以上或下文所述的本公开的组合物。在一些情况下，所述个体为人。在一些情况下，所述施用为静脉内。在一些情况下，所述施用为肌肉内。在一些情况下，所述施用为鞘内。在一些情况下，所述施用为皮下。在一些情况下，C1s介导的补体组分裂解的抑制对治疗补体介导的病症有效。在一些情况下，所述补体介导的病症为同种免疫病症。在一些情况下，所述补体介导的病症为自身免疫病症。

本公开提供了一种治疗个体中补体介导的疾病或病症的方法，所述方法包括按有效治疗所述补体介导的疾病或病症的量，向所述个体施用如以上或下文所述的本公开的人源化抗体，或如以上或下文所述的本公开的组合物。在一些情况下，所述补体组分裂解产物为C3裂解产物。在一些情况下，所述个体为人。在一些情况下，所述施用为静脉内。在一些情况下，所述施用为肌肉内。在一些情况下，所述施用为鞘内。在一些情况下，所述施用为皮下。在一些情况下，补体组分裂解产物水平的降低对治疗补体介导的病症有效。在一些情况下，所述补体介导的病症为同种免疫病症。在一些情况下，所述补体介导的病症为自身免疫病症。

附图简述

图1描绘人源化VH变体1的氨基酸序列(SEQ ID NO：10)和编码人源化VH变体1的核苷酸序列(SEQ ID NO：11)。

图2描绘人源化VH变体2的氨基酸序列(SEQ ID NO：12)和编码人源化VH变体2的核苷酸序列(SEQ ID NO：13)。

图3描绘人源化VH变体3的氨基酸序列(SEQ ID NO：14)和编码人源化VH变体3的核苷酸序列(SEQ ID NO：15)。

图4描绘人源化VH变体4的氨基酸序列(SEQ ID NO：16)和编码人源化VH变体4的核苷酸序列(SEQ ID NO：17)。

图5描绘人源化VH变体5的氨基酸序列(SEQ ID NO：18)和编码人源化VH变体5的核苷酸序列(SEQ ID NO：19)。

图6描绘人源化Vκ变体1的氨基酸序列(SEQ ID NO：20)和编码人源化Vκ变体1的核苷酸序列(SEQ ID NO：21)。

图7描绘人源化Vκ变体2的氨基酸序列(SEQ ID NO：22)和编码人源化Vκ变体2的核苷酸序列(SEQ ID NO：23)。

图8描绘人源化Vκ变体5的氨基酸序列(SEQ ID NO：24)和编码人源化Vκ变体5的核苷酸序列(SEQ ID NO：25)。

图9提供表2，该表显示亲本TNT005 VH和示例性人源化VH变体之间的氨基酸差异。

图10提供表3，该表显示亲本TNT005 VL和示例性人源化VL变体之间的氨基酸差异。

图11提供表4，该表显示TNT005的人源化变体的结合特性。显示了与活化C1s(“aC1s”)直接结合、与50pM生物素化TNT005(“Biot-005”)竞争结合及对经典补体途径的抑制的数据。

图12提供表5，该表显示TNT005的人源化变体的结合特性。提供了TNT005的人源化变体与人活性C1s结合的亲和数据。

图13提供人C1s的氨基酸序列。

图14描绘在1期(第1天-第43天)给药的食蟹猴中人源化TNT005变体的药代动力学(PK)特征。

图15描绘在1期(第32天-第43天)给药的食蟹猴中人源化TNT005变体的药代动力学特征。

图16描绘来自在1期(第1天-第43天)给药的食蟹猴的血清的经典途径活性。

图17描绘在2期给药(4mg/kg每天皮下施用，持续7天)的食蟹猴中人源化TNT005变体的PK和药效学(PD)特征。

定义

术语“抗体”和“免疫球蛋白”包括任何同种型的抗体或免疫球蛋白、保持与抗原特异性结合的抗体片段(包括但不限于Fab、Fv、scFv和Fd片段)、嵌合抗体、人源化抗体、单链抗体(scAb)、单域抗体(dAb)、单域重链抗体、单域轻链抗体、双特异性抗体、多特异性抗体和融合抗体(其包含抗体的抗原结合(本文也称为结合抗原的)部分和非抗体蛋白)。抗体可经(例如)放射性同位素、产生可检测产物的酶、荧光蛋白等可检测地标记。抗体可进一步与其它部分缀合，如特异性结合对的成员，例如生物素(生物素-抗生物素蛋白特异性结合对的成员)等。抗体也可与固体支持体结合，包括但不限于聚苯乙烯板或珠粒等。该术语还涵盖Fab’、Fv、F(ab’)₂和或保持与抗原特异性结合的其它抗体片段及单克隆抗体。如本文中所用，单克隆抗体是由一类相同细胞产生的抗体，全部细胞由单个细胞通过重复的细胞复制而生成。即，细胞的克隆物仅产生单一抗体种类。虽然可以使用杂交瘤生成技术生成单克隆抗体，但也可以使用本领域技术人员已知的其它生成方法(例如，源自抗体噬菌体展示库的抗体)。抗体可为单价或二价。抗体可为Ig单体，其是由四条多肽链组成的“Y形”分子：通过二硫键连接的两条重链和两条轻链。

如本文中所用的术语“人源化免疫球蛋白”或“人源化抗体”是指包含不同来源的免疫球蛋白部分的免疫球蛋白，其中至少一个部分包含人来源的氨基酸序列。例如，人源化抗体可包含源自具有必要特异性的非人来源如小鼠的免疫球蛋白和源自人来源的免疫球蛋白序列的部分(例如，嵌合免疫球蛋白)，通过常规技术(例如，合成)经化学方法连接在一起或使用基因工程技术制备成连续多肽(例如，编码嵌合抗体的蛋白质部分的DNA可以表达生成连续多肽链)。人源化免疫球蛋白的另一实例是含有一条或多条包含源自非人来源的抗体的CDR和源自人来源的轻链和/或重链的框架区的免疫球蛋白链的免疫球蛋白(例如，有或无框架变化的CDR移植抗体)。术语人源化免疫球蛋白也涵盖嵌合或CDR移植单链抗体。参见，例如，Cabilly等人，美国专利第4,816,567号；Cabilly等人，欧洲专利第0,125,023B1号；Boss等人，美国专利第4,816,397号；Boss等人，欧洲专利第0,120,694 B1号；Neuberger，M.S.等人，WO 86/01533；Neuberger，M.S.等人，欧洲专利第0,194,276 B1号；Winter，美国专利第5,225,539号；Winter，欧洲专利第0,239,400 B1号；Padlan，E.A.等人，欧洲专利申请第0,519,596 A1号。关于单链抗体，还参见，Ladner等人，美国专利第4,946,778号；Huston，美国专利第5,476,786号；及Bird，R.E.等人，Science，242：423-426(1988))。

例如，可以使用合成和/或重组核酸制备编码所需人源化链的基因(例如，cDNA)来生成人源化免疫球蛋白。例如，可以使用PCR诱变方法改变编码人或人源化链的DNA序列，如来自先前人源化可变区的DNA模板来构建编码人源化可变区的核酸(例如，DNA)序列(参见例如，Kamman，M.等人，Nucl.Acids Res.，17：5404(1989))；Sato，K.等人，CancerResearch，53：851-856(1993)；Daugherty，B.L.等人，Nucleic Acids Res.，19(9)：2471-2476(1991)；及Lewis，A.P.和J.S.Crowe，Gene，101：297-302(1991))。使用这些或其它合适的方法，也可容易地生成变体。例如，可以诱变克隆的可变区，并且可以选择编码具有所需特异性的变体的序列(例如，来自噬菌体文库；参见例如，Krebber等人，美国专利第5,514,548号；Hoogenboom等人，WO 93/06213，公布于1993年4月1日))。

“抗体片段”包含完整抗体的一部分，例如，完整抗体的抗原结合区或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab′、F(ab′)₂和Fv片段；双抗体；线性抗体(Zapata等人，ProteinEng.8(10)：1057-1062(1995))；结构域抗体(dAb；Holt等人(2003)Trends Biotechnol.21：484)；单链抗体分子；和由抗体片段形成的多特异性抗体。木瓜蛋白酶消化抗体产生两个称为“Fab”片段，各自具有单个抗原结合位点的相同抗原结合片段，及残留的“Fc”片段，名称反映了容易结晶的能力。木瓜蛋白酶处理产生具有两个抗原结合位点并且仍然能够交联抗原的F(ab′)₂片段。

“Fv”是含有完整的抗原识别和结合位点的最小抗体片段。该区域由紧密、非共价缔合的一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域的二聚体组成。在这种构型中每个可变结构域的三个CDR相互作用以限定V_H-V_L二聚体表面上的抗原结合位点。总的来说，六个CDR赋予抗体以抗原结合特异性。然而，虽然亲和力比整个结合位点低，但即使单个可变结构域(或仅包含三个对抗原有特异性的CDR的一半Fv)也能够识别并结合抗原。

“Fab”片段也含有轻链的恒定结构域和重链的第一恒定结构域(CH₁)。Fab片段与Fab′片段不同之处在于在重链CH₁结构域的羧基末端添加了几个残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab′-SH是本文对其中恒定结构域的半胱氨酸残基携带游离硫醇基团的Fab′的名称。F(ab′)₂抗体片段最初作为成对的Fab′片段生成，在它们之间具有铰链半胱氨酸。抗体片段的其它化学偶联也是已知的。

来自任何脊椎动物类的抗体(免疫球蛋白)的“轻链”可基于其恒定结构域的氨基酸序列分配为两个明显不同类型(称为κ和λ)之一。根据其重链的恒定结构域的氨基酸序列，可将免疫球蛋白分配为不同类别。存在五大类别的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些类别中的几个可进一步分为亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgA2。该亚类可进一步分为例如IgG2a和IgG2b的类型。

“单链Fv”或“sFv”或“scFv”抗体片段包含抗体的V_H和V_L结构域，其中这些结构域存在于单条多肽链中。在一些实施方案中，Fv多肽还包含介于V_H和V_L结构域之间的多肽接头，其使得sFv能够形成供抗原结合的所需结构。对于sFv的评论，参见Pluckthun in ThePharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg和Moore编辑，Springer-Verlag，New York，第269-315页(1994)。

术语“双抗体”是指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，该片段包含在同一多肽链(V_H-V_L)中与轻链可变结构域(V_L)连接的重链可变结构域(V_H)。通过使用太短而不能允许同一链上的两个结构域之间配对的接头，迫使该结构域与另一条链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点。在例如EP 404,097；WO 93/11161；及Hollinger等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448中更全面地描述了双抗体。

如本文中所用，术语“亲和力”是指两种药剂(例如抗体和抗原)可逆性结合的平衡常数并且表示为解离常数(K_D)。亲和力可以比抗体对无关氨基酸序列的亲和力高至少1倍、高至少2倍、高至少3倍、高至少4倍、高至少5倍、高至少6倍、高至少7倍、高至少8倍、高至少9倍、高至少10倍、高至少20倍、高至少30倍、高至少40倍、高至少50倍、高至少60倍、高至少70倍、高至少80倍、高至少90倍、高至少100倍或高至少1,000倍或更多倍。抗体对靶蛋白的亲和力可为，例如约100纳摩尔(nM)至约0.1nM、约100nM至约1皮摩尔(pM)或约100nM至约1飞摩尔(fM)或更多。如本文中所用，术语“亲合力”是指两种或更多种药剂的复合物在稀释后对解离的抗性。术语“免疫反应性”和“优先结合”就抗体和/或抗原结合片段而言在本文中可互换使用。

术语“结合”是指两个分子之间，由于例如共价、静电、疏水性和离子和/或氢键相互作用，包括诸如盐桥和水桥的相互作用而直接缔合。本公开的人源化抗C1s抗体与补体C1s蛋白内的表位特异性结合。“特异性结合”是指以至少约10^-7M或更高，例如5x 10^-7M、10^{- 8}M、5x10^-8M及更高的亲和力结合。“非特异性结合”是指以低于约10^-7M的亲和力结合，例如以10^-6M、10^-5M、10^-4M等的亲和力结合。

如本文中所用，术语“CDR”或“互补决定区”旨在意指在重链和轻链多肽两者的可变区内发现的非连续抗原结合位点。Kabat等人，CDR已经在Kabat等人，J.Biol.Chem.252：6609-6616(1977)；Kabat等人，U.S.Dept.of Health and Human Services，“Sequences ofproteins of immunological interest”(1991)(本文也称为Kabat 1991)；Chothia等人，J.Mol.Biol.196：901-917(1987)(本文也称为Chothia 1987)；及MacCallum等人，J.Mol.Biol.262：732-745(1996)中描述，其中在相互比较时该定义包括氨基酸残基的重叠或子集。然而，应用任一定义指抗体或移植抗体或其变体的CDR都旨在为本文定义和使用的术语范围之内。下面表1中列出了如以上引用的每个参考文献所定义的，涵盖CDR的氨基酸残基。图1-8中描绘的CDR根据Kabat 1991定义。

表1：CDR定义

	Kabat1	Chothia2	MacCallum3
				VHCDR-1	31-35	26-32	30-35
VHCDR-2	50-65	53-55	47-58
				VHCDR-3	95-102	96-101	93-101
VLCDR-1	24-34	26-32	30-36
				VLCDR-2	50-56	50-52	46-55
VLCDR-3	89-97	91-96	89-96

¹残基编号按照上文Kabat等人的命名法，如上

²残基编号按照上文Chothia等人的命名法，如上

³3残基编号按照上文MacCallum等人的命名法，如上

如本文中所用，术语“CDR-L1”、“CDR-L2”和“CDR-L3”分别是指轻链可变区内的第一、第二和第三CDR。如本文中所用，术语“CDR-H1”、“CDR-H2”和“CDR-H3”分别是指重链可变区内的第一、第二和第三CDR。如本文中所用，术语“CDR-1”、“CDR-2”和“CDR-3”分别是指任一条链的可变区的第一、第二和第三CDR。

如本文中所用，术语“框架”(“FR”)在提及抗体可变区使用时旨在意指在抗体可变区内CDR区外部的所有氨基酸残基。可变区框架通常是长度介于约100-120个氨基酸之间的不连续氨基酸序列，但旨在仅仅指在CDR外部的那些氨基酸。如本文中所用，术语“框架区”旨在意指框架被CDR隔开的每个结构域。轻链可变区(VL区)可具有四个框架区：FR1、FR2、FR3和FR4。类似地，重链可变区(VH)可具有四个框架区：FR1、FR2、FR3和FR4。

“分离的”抗体是已经鉴定并且从其自然环境的组分分开和/或回收的抗体。其自然环境的污染组分是会干扰抗体的诊断或治疗用途的物质，并且可包括酶、激素和其它蛋白质或非蛋白质溶质。在一些实施方案中，抗体将被纯化(1)正如通过Lowry法所测定的，按抗体重量计，达到高于90％、高于95％或高于98％，例如按重量计高于99％，(2)达到足以通过使用转杯式测序仪获得N端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度；或(3)通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)在还原或非还原条件下使用考马斯蓝(Coomassie blue)或银染色，达到均质。分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体，因为抗体自然环境的至少一种组分将不存在。在一些情况下，通过至少一个纯化步骤制备分离的抗体。

术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”，在本文中可互换使用，是指任何长度的氨基酸的聚合形式，其可包括遗传编码和非遗传编码的氨基酸、经化学或生物化学修饰或衍生化的氨基酸，及具有经修饰肽主链的多肽。该术语包括融合蛋白，包括但不限于具有异源氨基酸序列的融合蛋白；具有异源和同源前导序列、有或无N端甲硫氨酸残基的融合蛋白；免疫标记蛋白；等等。

如本文中所用，术语“治疗”等是指获得所需的药理和/或生理效应。该效应在完全或部分预防疾病或其症状的方面可以是预防性的和/或在部分或完全治愈疾病和/或可归因于该疾病的不利影响方面可以是治疗性的。如本文中所用的“治疗”覆盖对哺乳动物，尤其是人中的疾病的任何治疗，并且包括：(a)预防疾病在可易于患病但尚未诊断为患病的受试者中发生；(b)抑制疾病，即阻止其发展；及(c)缓解疾病，即引起疾病消退。

术语“个体”、“受试者”、“宿主”和“患者”，在本文中可互换使用，是指哺乳动物，包括但不限于鼠类(大鼠、小鼠)、非人灵长类、人、犬、猫、有蹄动物(例如，马、牛、绵羊、猪、山羊等)。这些术语还涵盖具有补体系统的任何动物，如哺乳动物、鱼类和一些无脊椎动物。同样这些术语包括含补体系统的哺乳动物、鱼类和无脊椎伴侣动物、农业动物、役用动物、动物园动物和实验室动物。

“治疗有效量”或“有效量”是指抗补体C1s抗体在施用给哺乳动物或其它受试者用于治疗疾病时，足以实现对该疾病的此类治疗的量。“治疗有效量”将根据抗补体C1s抗体、疾病及其严重程度和要治疗的受试者的年龄、体重等而变化。

“生物样品”涵盖从个体获得的多种样品类型并且可用于诊断或检测测定中。该定义涵盖生物来源的血液和其它液体样品、实体组织样品如活检样本或组织培养物或源自其中的细胞及其后代。该定义还包括在其取得之后，已经以任何方式例如通过用试剂处理、溶解或富集某些组分(例如多核苷酸)来操作的样品。术语“生物样品”涵盖临床样品，并且还包括培养物中的细胞、细胞上清液、细胞溶解产物、血清、血浆、生物流体和组织样品。术语“生物样品”包括尿液、唾液、脑脊髓液、间质液、眼内液、滑液、血液成分如血浆和血清，等等。术语“生物样品”还包括实体组织样品、组织培养样品和细胞样品。

在进一步描述本发明之前，应理解本发明不限于描述的特定实施方案，因而当然可以改变。还应理解本文所用术语仅仅是为了描述特定实施方案的目的，而非旨在为限制性，因为本发明的范围仅受所附权利要求的限制。

提供值的范围时，应理解除非上下文另外明确指出，否则介于该范围上下限之间的每个居中值，到下限单位的十分之一，及规定范围内的任何其它规定值或居中值，涵盖在本发明内。这些较小范围的上下限可独立地包括在较小范围中，并且也涵盖在本发明内，以规定范围内任何明确排除的限值为条件。当规定范围包括一个或两个限值时，排除了那些所包括的限值中的任一个或两个的范围也被包括在本发明中。

除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语均具有本发明所属领域中普通技术人员通常所理解的相同含义。虽然在本发明的实践或试验中也可使用与本文所述那些类似或等效的任何方法和材料，但现在描述的是优选方法和材料。本文提到的所有出版物以引用的方式并入本文以公开和描述连同出版物一起引用的方法和/或材料。

必须指出的是如本文和所附权利要求中所用，除非上下文另外明确指出，否则单数形式“一个”、“一种”和“所述(该)”包括复数指示物。因此，例如，提到“一种人源化抗C1s抗体”包括多种此类抗体并且提到“所述框架区”包括提到一个或多个框架区和本领域技术人员已知的其等效物，等等。还应指出的是，可起草权利要求以排除任何任选要素。因而，该陈述旨在用作将诸如“只”、“仅”等专用术语连同对权利要求要素的叙述一起使用，或使用“否定”限制的前置基础。

应当理解，为了清楚起见在单独实施方案的上下文中描述的本发明的某些特征也可在单个实施方案中呈组合提供。相反，为简洁起见在单个实施方案的上下文中描述的本发明的各种特征也可单独地或呈任何合适的子组合提供。与本发明有关的实施方案的所有组合均特别地被本发明所包括并且在本文中公开，仅如同单独且明确地公开了每个组合一样。另外，各个实施方案及其要素的所有子组合也特别地被本发明所包括并且在本文中公开，仅如同在本文中单独且明确地公开了每个子组合一样。

提供本文讨论的出版物仅仅是为了其在本发明的申请日期之前公开。不得将本文的任何内容解释为承认由于先前发明，本发明无权先于此类出版物。进一步地，提供的出版物的日期可不同于实际出版日期，实际出版日期可能需要单独确认。

详述

本公开提供了一种结合补体C1s蛋白的人源化抗体(即，人源化抗补体C1s抗体，本文也称为“人源化抗C1s抗体”、“人源化C1s抗体”和“主题抗体”)和包含编码此类抗体的核苷酸序列的核酸。本公开还提供了一种包含本公开的人源化抗C1s抗体的组合物。本公开提供了生成和使用本公开的抗体、核酸和组合物的方法。本公开提供了治疗补体介导的疾病或病症的方法，该方法涉及施用本公开的人源化抗C1s抗体。

抗补体C1s抗体

本公开提供了人源化抗补体C1s抗体和包含此类抗体的药物组合物。补体C1s是有吸引力的靶标，因为它在补体级联的上游并且具有狭窄范围的底物特异性。在一些情况下感兴趣的是特异性结合C1s活化形式的抗体，例如，其中该抗体基本上不结合非活性形式的C1s。

本公开的抗C1s抗体是人源化的，例如，重链可变区和/或轻链可变区的一个或多个框架区包括源自人免疫球蛋白框架的序列。

在一些情况下，本公开的抗C1s抗体抑制C1s介导的补体组分C4裂解，例如，通过抑制C1s的丝氨酸蛋白酶结构域的酶活性。在一些情况下，本公开的抗C1s抗体抑制C1s介导的补体组分C2裂解。在一些情况下，本公开的抗C1s抗体抑制C1s介导的C4和C2裂解。

框架区的人源化降低了抗体在人中引起人抗小鼠抗体(HAMA)应答的风险。可进行本领域公认的测定免疫应答的方法以监测特定患者中或临床试验期间的HAMA应答。在该疗法施用开始时或整个期间可对施用了人源化抗体的患者给予免疫原性评估。测量HAMA应答，例如，通过使用本领域人员已知的方法检测来自患者的血清样品中对人源化治疗试剂的抗体，所述方法包括表面等离子共振技术(BIACORE)和/或固相酶联免疫吸附测定(ELISA)分析。在许多情况下，主题人源化抗C1s抗体基本上不会在人受试者中引起HAMA应答。

基于其对CDR构象和/或结合抗原的可能影响，选择来自人可变区框架残基的某些氨基酸进行取代。鼠CDR区与人可变框架区的非天然并置可产生非天然构象限制，这除非通过取代某些氨基酸残基来校正，否则导致结合亲和力丧失。

对用于取代的氨基酸残基的选择可以部分地通过计算机建模来确定。本领域中已知用于产生免疫球蛋白分子的三维图像的某些硬件和软件。一般而言，对于免疫球蛋白链或其结构域而言从溶解结构开始产生分子模型。比较待建模的链与溶解三维结构的链或结构域的氨基酸序列相似性，并且选择显示出最大序列相似性的链或结构域作为构建分子模型的起点。选择共有至少50％序列同一性的链或结构域用于建模，例如，选择共有至少60％、至少70％、至少80％、至少90％序列同一性或更高序列同一性的链或结构域用于建模。修饰溶解的起始结构以允许建模的免疫球蛋白链或结构域中的实际氨基酸与起始结构中的那些之间存在差异。然后将修饰的结构组装成复杂的免疫球蛋白。最后，通过能量最小化并通过验证所有原子彼此在适当距离之内且键长和键角在化学可接受的极限内来精制模型。

CDR和框架区如Kabat，Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutes of Health，Bethesda，Md.，1987和1991)所定义。Chothia等人，J.Mol.Biol.196：901(1987)；Nature 342：878(1989)；及J.Mol.Biol.186：651(1989)(统称为“Chothia”)提出了替代性结构定义。当如上文Kabat所定义的框架残基构成如上文Chothia所定义的结构环残基时，可选择小鼠抗体中存在的氨基酸取代为人源化抗体。“与CDR区相邻”的残基包括在紧邻人源化免疫球蛋白链的一级序列中的一个或多个CDR的位置上，例如，在紧邻如Kabat所定义的CDR或如Chothia所定义的CDR的位置上的氨基酸残基(参见例如，Chothia和Lesk JMB 196：901(1987))。这些氨基酸特别有可能与CDR中的氨基酸相互作用并且，如果选自受体，则使供体CDR变形并降低亲和力。而且，相邻氨基酸可以直接与抗原相互作用(Amit等人，Science，233：747(1986))并且选择这些来自供体的氨基酸可以理想地保持在原始抗体中提供亲和力的所有抗原接触。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包括至少一个人源化V_H框架区。在一些情况下，本公开的抗C1s抗体包括至少一个人源化V_L框架区。在一些情况下，本公开的抗C1s抗体包括至少一个人源化V_H框架区和至少一个人源化V_L框架区。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包括以下氨基酸序列中存在的VL CDR：

DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCKASQSVDYDGDSYMNWYQQKTGQPPKILIYDASNLESGIPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAAIYYCQQSNEDPWTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO：7)。在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包括以下氨基酸序列中存在的VH CDR：

EVQLQQSGAELVRPGASVKLSCTASGFNIKDDYIHWVKQRPEQGLEWIGRIDPADGHTKYAPKFQVKATITADTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCARYGYGREVFDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO：8)。在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包括SEQ ID NO：7中存在的VL CDR和SEQ ID NO：8中存在的VH CDR。

VL CDR1(CDR-L1)：SEQ ID NO：1：KASQSVDYDGDSYMN

VL CDR2(CDR-L2)：SEQ ID NO：2：DASNLES

VL CDR3(CDR-L3)：SEQ ID NO：3：QQSNEDPWT

VH CDR1(CDR-H1)：SEQ ID NO：4：DDYIH

VH CDR2(CDR-H2)：SEQ ID NO：5：RIDPADGHTKYAPKFQV

VH CDR3(CDR-H3)：SEQ ID NO：6：YGYGREVFDY

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含含有CDR氨基酸序列SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3(分别为CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3)的轻链可变区。

在一些实施方案中，本公开的抗C1s抗体包含含有CDR氨基酸序列SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6(分别为CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)的重链可变区。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含含有以下序列的VH区：

(Q/E)VQL(V/Q)QSGAE(V/L)KKPGASVK(L/V)SC(T/A)ASGFNIKDDYIHWV(K/R)QAPGQGLEWIGRIDPADGHTKYAPKFQVK(V/A)TITADTST(S/N)TAY(L/M)(E/Q)LSSL(R/T)SEDTAVYYCARYGYGREVFDYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO：26)。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含VH区，其包含与图1中描绘和SEQID NO：10中列出的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸1为Glu，氨基酸5为Val，氨基酸11为Leu，氨基酸12为Lys，氨基酸13为Lys，氨基酸20为Leu，氨基酸23为Thr，氨基酸38为Lys，氨基酸40为Ala，氨基酸42为Gly，氨基酸67为Ala，氨基酸75为Thr，氨基酸76为Asn，氨基酸80为Leu，氨基酸81为Gln，氨基酸83为Thr且氨基酸109为Val，其中氨基酸的编号如图1所描绘。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含VH区，其包含图1中描绘和SEQ IDNO：10中列出的氨基酸序列。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含VH区，其包含与图2中描绘和SEQID NO：12中列出的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸1为Glu，氨基酸5为Val，氨基酸11为Val，氨基酸12为Lys，氨基酸13为Lys，氨基酸20为Leu，氨基酸23为Thr，氨基酸38为Lys，氨基酸40为Ala，氨基酸42为Gly，氨基酸67为Ala，氨基酸75为Thr，氨基酸76为Asn，氨基酸80为Leu，氨基酸81为Glu，氨基酸83为Arg且氨基酸109为Val，其中氨基酸的编号如图2所描绘。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含VH区，其包含图2中描绘和SEQ IDNO：12中列出的氨基酸序列。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含VH区，其包含与图3中描绘和SEQID NO：14中列出的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸1为Gln，氨基酸5为Val，氨基酸11为Val，氨基酸12为Lys，氨基酸13为Lys，氨基酸20为Leu，氨基酸23为Thr，氨基酸38为Lys，氨基酸40为Ala，氨基酸42为Gly，氨基酸67为Val，氨基酸75为Thr，氨基酸76为Ser，氨基酸80为Leu，氨基酸81为Glu，氨基酸83为Arg且氨基酸109为Val，其中氨基酸的编号如图3所描绘。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含VH区，其包含图3中描绘和SEQ IDNO：14中列出的氨基酸序列。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含VH区，其包含与图4中描绘和SEQID NO：16中列出的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸1为Gln，氨基酸5为Val，氨基酸11为Val，氨基酸12为Lys，氨基酸13为Lys，氨基酸20为Val，氨基酸23为Thr，氨基酸38为Arg，氨基酸40为Ala，氨基酸42为Gly，氨基酸67为Val，氨基酸75为Thr，氨基酸76为Ser，氨基酸80为Met，氨基酸81为Glu，氨基酸83为Arg且氨基酸109为Val，其中氨基酸的编号如图4所描绘。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含VH区，其包含图4中描绘和SEQ IDNO：16中列出的氨基酸序列。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含VH区，其包含与图5中描绘和SEQID NO：18中列出的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸1为Gln，氨基酸5为Val，氨基酸11为Val，氨基酸12为Lys，氨基酸13为Lys，氨基酸20为Val，氨基酸23为Ala，氨基酸38为Arg，氨基酸40为Ala，氨基酸42为Gly，氨基酸67为Val，氨基酸75为Thr，氨基酸76为Ser，氨基酸80为Met，氨基酸81为Glu，氨基酸83为Arg且氨基酸109为Val，其中氨基酸的编号如图5所描绘。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含VH区，其包含图5中描绘和SEQ IDNO：18中列出的氨基酸序列。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含含有以下序列的VL区：

DIVLTQSPDSLAVSLGERATISCKASQSVDYDGDSYMNWYQQK(T/P)GQPPK(I/L)LIYDASNLESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLE(E/P)EDFA(I/V)YYCQQSNEDPWTFGGGTKVEIK(SEQ IDNO：27)。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含VL区，其包含与图6中描绘和SEQID NO：20中列出的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸9为Asp，氨基酸17为Glu，氨基酸40为Thr，氨基酸46为Ile，氨基酸74为Thr，氨基酸76为Ser，氨基酸77为Ser，氨基酸78为Leu，氨基酸80为Glu，氨基酸83为Phe，氨基酸85为Ile且氨基酸104为Val，其中氨基酸的编号如图6所描绘。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含VL区，其包含图6中描绘和SEQ IDNO：20中列出的氨基酸序列。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含VL区，其包含与图7中描绘和SEQID NO：22中列出的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸9为Asp，氨基酸17为Glu，氨基酸40为Pro，氨基酸46为Ile，氨基酸74为Thr，氨基酸76为Ser，氨基酸77为Ser，氨基酸78为Leu，氨基酸80为Pro，氨基酸83为Phe，氨基酸85为Ile且氨基酸104为Val，其中氨基酸的编号如图7所描绘。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含VL区，其包含图7中描绘和SEQ IDNO：22中列出的氨基酸序列。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含VL区，其包含与图8中描绘和SEQID NO：24中列出的氨基酸序列具有至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，其中氨基酸9为Asp，氨基酸17为Glu，氨基酸40为Pro，氨基酸46为Leu，氨基酸74为Thr，氨基酸76为Ser，氨基酸77为Ser，氨基酸78为Leu，氨基酸80为Pro，氨基酸83为Phe，氨基酸85为Val且氨基酸104为Val，其中氨基酸的编号如图8所描绘。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含VL区，其包含图8中描绘和SEQ IDNO：24中列出的氨基酸序列。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含：a)图1中描绘和SEQ ID NO：10中列出的VH变体1氨基酸序列；和b)图6中描绘和SEQ ID NO：20中列出的VL变体1氨基酸序列。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含：a)图1中描绘和SEQ ID NO：10中列出的VH变体1氨基酸序列；和b)图7中描绘和SEQ ID NO：22中列出的VL变体2氨基酸序列。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含：a)图1中描绘和SEQ ID NO：10中列出的VH变体1氨基酸序列；和b)图8中描绘和SEQ ID NO：24中列出的VL变体5氨基酸序列。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含：a)图2中描绘和SEQ ID NO：12中列出的VH变体2氨基酸序列；和b)图6中描绘和SEQ ID NO：20中列出的VL变体1氨基酸序列。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含：a)图2中描绘和SEQ ID NO：12中列出的VH变体2氨基酸序列；和b)图7中描绘和SEQ ID NO：22中列出的VL变体2氨基酸序列。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含：a)图2中描绘和SEQ ID NO：12中列出的VH变体2氨基酸序列；和b)图8中描绘和SEQ ID NO：24中列出的VL变体5氨基酸序列。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含：a)图3中描绘和SEQ ID NO：14中列出的VH变体3氨基酸序列；和b)图6中描绘和SEQ ID NO：20中列出的VL变体1氨基酸序列。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含：a)图3中描绘和SEQ ID NO：14中列出的VH变体3氨基酸序列；和b)图7中描绘和SEQ ID NO：22中列出的VL变体2氨基酸序列。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含：a)图3中描绘和SEQ ID NO：14中列出的VH变体3氨基酸序列；和b)图8中描绘和SEQ ID NO：24中列出的VL变体5氨基酸序列。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含：a)图4中描绘和SEQ ID NO：16中列出的VH变体4氨基酸序列；和b)图6中描绘和SEQ ID NO：20中列出的VL变体1氨基酸序列。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含：a)图4中描绘和SEQ ID NO：16中列出的VH变体4氨基酸序列；和b)图7中描绘和SEQ ID NO：22中列出的VL变体2氨基酸序列。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含：a)图4中描绘和SEQ ID NO：16中列出的VH变体4氨基酸序列；和b)图8中描绘和SEQ ID NO：24中列出的VL变体5氨基酸序列。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含：a)图5中描绘和SEQ ID NO：18中列出的VH变体5氨基酸序列；和b)图6中描绘和SEQ ID NO：20中列出的VL变体1氨基酸序列。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含：a)图5中描绘和SEQ ID NO：18中列出的VH变体5氨基酸序列；和b)图7中描绘和SEQ ID NO：22中列出的VL变体2氨基酸序列。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体包含：a)图5中描绘和SEQ ID NO：18中列出的VH变体5氨基酸序列；和b)图8中描绘和SEQ ID NO：24中列出的VL变体5氨基酸序列。

在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体结合来自具有补体系统的个体的补体C1s蛋白。在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体结合来自具有补体系统的哺乳动物、鱼类或无脊椎动物的补体C1s蛋白。在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体结合哺乳动物补体C1s蛋白。在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体结合人补体C1s蛋白。在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体结合大鼠补体C1s蛋白。在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体结合具有图13中描绘的氨基酸序列(SEQ ID NO：9)的补体C1s蛋白。氨基酸序列SEQ ID NO：9表示智人(Homo sapiens)补体C1s蛋白，其具有图13所列的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体结合补体C1s蛋白，解离常数(K_D)不超过2.5nM。在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体结合补体C1s蛋白，K_D不超过2nM。在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体结合补体C1s蛋白，K_D不超过1nM。在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体结合补体C1s蛋白，K_D不超过0.9nM、不超过0.8nM、不超过0.7nM、不超过0.6nM、不超过0.5nM、不超过0.4nM、不超过0.3nM、不超过0.2nM、不超过0.1nM。在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体结合补体C1s蛋白，K_D不超过0.3nM。在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体结合补体C1s蛋白，K_D不超过0.2nM。在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体结合补体C1s蛋白，K_D不超过0.1nM。可由本领域的技术人员确定测量抗体与C1s蛋白的结合的方法。

在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体结合补体C1s蛋白，K_D不超过90pM、不超过80pM、不超过70pM、不超过60pM、不超过50pM、不超过40pM、不超过30pM、不超过20pM、不超过10pM、不超过9pM、不超过8pM、不超过7pM、不超过6pM、不超过5pM、不超过4pM、不超过3pM、不超过2pM、不超过1pM。

在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体结合人补体C1s蛋白，解离常数(K_D)不超过2.5nM。在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体结合人补体C1s蛋白，K_D不超过2nM。在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体结合人补体C1s蛋白，K_D不超过1nM。在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体结合人补体C1s蛋白，K_D不超过0.9nM、不超过0.8nM、不超过0.7nM、不超过0.6nM、不超过0.5nM、不超过0.4nM、不超过0.3nM、不超过0.2nM、不超过0.1nM。在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体结合人补体C1s蛋白，K_D不超过0.3nM。在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体结合人补体C1s蛋白，K_D不超过0.2nM。在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体结合人补体C1s蛋白，K_D不超过0.1nM。可由本领域的技术人员确定测量抗体与人C1s蛋白的结合的方法。在一些实施方案中，使用如实施例中所描述的结合测定法测定抗体和人C1s蛋白之间的K_D。

在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体结合人补体C1s蛋白，K_D不超过90pM、不超过80pM、不超过70pM、不超过60pM、不超过50pM、不超过40pM、不超过30pM、不超过20pM、不超过10pM、不超过9pM、不超过8pM、不超过7pM、不超过6pM、不超过5pM、不超过4pM、不超过3pM、不超过2pM、不超过1pM。

在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体抑制经典补体途径，半数最大抑制浓度(IC₅₀)为10^-8M或更低、5x10^-9M或更低或10^-9M或更低。

核酸、表达载体和宿主细胞

本公开提供了包含编码本公开的人源化抗C1s抗体的核苷酸序列的核酸。在一些情况下，本公开的核酸包含编码本公开的人源化抗C1s抗体的VH区的核苷酸序列。在一些情况下，本公开的核酸包含编码本公开的人源化抗C1s抗体的VL区的核苷酸序列。在一些情况下，本公开的核酸包含编码本公开的人源化抗C1s抗体的VH区和VL区的核苷酸序列。

编码本公开的人源化抗C1s抗体的核苷酸序列可与一个或多个调控元件，如启动子和增强子可操作地连接，调控元件允许该核苷酸序列在预期靶细胞(例如，经遗传修饰以合成所编码的抗体的细胞)中表达。因此，在一些情况下，本公开提供了包含编码本公开的人源化抗C1s抗体的核苷酸序列的核酸，其中该核苷酸序列与一个或多个调控元件，如启动子和/或增强子可操作地连接。

合适的启动子和增强子元件在本领域中已知。用于原核宿主细胞中的合适启动子包括但不限于噬菌体T7 RNA聚合酶启动子；T3启动子；T5启动子；λP启动子；trp启动子；lac操纵子启动子；杂合启动子，例如lac/tac杂合启动子、tac/trc杂合启动子、trp/lac启动子、T7/lac启动子；trc启动子；tac启动子等；gpt启动子；araBAD启动子；体内调控启动子，如ssaG启动子或相关启动子(参见例如，美国专利公布第20040131637号)、pagC启动子(Pulkkinen和Miller，J.Bacteriol.，1991：173(1)：86-93；Alpuche-Aranda等人，PNAS，1992；89(21)：10079-83)、nirB启动子(Harborne等人(1992)Mol.Micro.6：2805-2813)等(参见例如，Dunstan等人(1999)Infect.Immun.67：5133-5141；McKelvie等人(2004)Vaccine 22：3243-3255；及Chatfield等人，(1992)Biotechnol.10：888-892)；σ70启动子，例如共有σ70启动子(参见例如，基因库登记号AX798980、AX798961和AX798183)；固相启动子，例如dps启动子、spv启动子等；源自致病岛SPI-2的启动子(参见例如，WO96/17951)；actA启动子(参见例如，Shetron-Rama等人(2002)Infect.Immun.70：1087-1096)；rpsM启动子(参见例如，Valdivia和Falkow(1996).Mol.Microbiol.22：367)；tet启动子(参见例如，Hillen，W.和Wissmann，A.(1989)在Saenger，W.和Heinemann，U.(编辑)，Topics inMolecular and Structural Biology中，Protein-Nucleic AcidInteraction.Macmillan，London，UK，第10卷，地143-162页)；SP6启动子(参见例如，Melton等人(1984)Nucl.Acids Res.12：7035)等。用于原核生物如大肠杆菌(Escherichia coli)中的合适的强启动子包括但不限于Trc、Tac、T5、T7和P_λ。用于细菌宿主细胞中的操作子(operator)的非限制性实例包括乳糖启动子操作子(LacI阻遏蛋白与乳糖接触时改变构象，从而防止LacI阻遏蛋白结合操作子)、色氨酸启动子操作子(与色氨酸复合时，TrpR阻遏蛋白具有结合操作子的构象；在不存在色氨酸的情况下，TrpR阻遏蛋白具有不结合操作子的构象)和tac启动子操作子(参见例如，deBoer等人(1983)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.80：21-25)。

在一些实施方案中，例如，为了在酵母细胞中表达，合适的启动子为组成型启动子如ADH1启动子、PGK1启动子、ENO启动子、PYK1启动子等；或可调控启动子如GAL1启动子、GAL10启动子、ADH2启动子、PHO5启动子、CUP1启动子、GAL7启动子、MET25启动子、MET3启动子、CYC1启动子、HIS3启动子、ADH1启动子、PGK启动子、GAPDH启动子、ADC1启动子、TRP1启动子、URA3启动子、LEU2启动子、ENO启动子、TP1启动子和AOX1(例如，用于毕赤酵母属(Pichia)中)。

为了在真核细胞中表达，合适的启动子包括但不限于轻链和/或重链免疫球蛋白基因启动子和增强子元件；巨细胞病毒极早期启动子；单纯疱疹病毒胸苷激酶启动子；早期和晚期SV40启动子；存在于来自逆转录病毒的长末端重复序列中的启动子；小鼠金属硫蛋白-I启动子；和各种本领域已知的组织特异性启动子。

适当载体和启动子的选择完全在本领域普通技术水平范围内。

包含编码本公开的人源化抗C1s抗体的核苷酸序列的核酸可存在于表达载体和/或克隆载体中。本公开提供了包含核酸的重组载体，所述核酸包含编码本公开的人源化抗C1s抗体的核苷酸序列，其中所述重组载体为克隆载体。本公开提供了包含核酸的重组载体，所述核酸包含编码本公开的人源化抗C1s抗体的核苷酸序列，其中所述重组载体为表达载体，例如，其中所述核苷酸序列与表达载体中适当的调控序列可操作地连接以确保所编码的抗体的表达。主题抗体包含两个单独多肽时，编码两个多肽的核酸可以在相同或单独的载体中克隆以形成一个或多个重组载体。重组载体可包括选择标记、复制起点和提供重组载体(例如，重组表达载体)的复制和/或维持的其它特征件。

本领域的技术人员已知大量合适的载体和启动子；许多可商购获得用于产生主题重组载体。以举例的方式提供以下载体。细菌：pBs、phagescript、PsiX174、pBluescriptSK、pBs KS、pNH8a、pNH16a、pNH18a、pNH46a(Stratagene，La Jolla，Calif.，USA)；pTrc99A、pKK223-3、pKK233-3、pDR540和pRIT5(Pharmacia，Uppsala，Sweden)。真核生物：pWLneo、pSV2cat、pOG44、PXR1、pSG(Stratagene)pSVK3、pBPV、pMSG和pSVL(Pharmacia)。

表达载体通常具有位于启动子序列附近的合宜限制位点以提供编码异源蛋白的核酸序列的插入。可存在在表达宿主中有效的选择标记。合适的表达载体包括但不限于病毒载体。病毒载体的实例包括但不限于基于以下病毒的病毒载体：牛痘病毒；脊髓灰质炎病毒；腺病毒(参见例如，Li等人，Invest Opthalmol Vis Sci 35：2543 2549，1994；Borras等人，Gene Ther 6：515 524，1999；Li和Davidson，PNAS 92：7700 7704，1995；Sakamoto等人，H Gene Ther 5：1088 1097，1999；WO 94/12649；WO 93/03769；WO 93/19191；WO 94/28938；WO 95/11984和WO 95/00655)；腺相关病毒(参见例如，Ali等人，Hum Gene Ther 9：81 86，1998；Flannery等人，PNAS 94：6916 6921，1997；Bennett等人，Invest Opthalmol Vis Sci38：2857 2863，1997；Jomary等人，Gene Ther 4：683 690，1997；Rolling等人，Hum GeneTher 10：641 648，1999；Ali等人，Hum Mol Genet 5：591 594，1996；Srivastava在WO 93/09239中，Samulski等人，J.Vir.(1989)63：3822-3828；Mendelson等人，Virol.(1988)166：154-165；及Flotte等人，PNAS(1993)90：10613-10617)；SV40；单纯疱疹病毒；逆转录病毒载体(例如，鼠白血病病毒、脾坏死病毒，及源自逆转录病毒如劳氏肉瘤病毒(Rous SarcomaVirus)、哈维肉瘤病毒Harvey Sarcoma Virus)、禽白血病病毒、人免疫缺陷病毒(参见例如，Miyoshi等人，PNAS 94：10319 23，1997；Takahashi等人，J Virol 73：7812 7816，1999)、骨髓增生性肉瘤病毒和乳腺肿瘤病的载体)等。

宿主细胞

本公开提供了分离的遗传修饰宿主细胞(例如，体外细胞)，其用主题核酸遗传修饰。在一些实施方案中，主题分离的遗传修饰宿主细胞可产生主题抗体。此类细胞称为“重组细胞”或“遗传修饰宿主细胞”。本公开的遗传修饰宿主细胞包含核酸，所述核酸包含编码本公开的人源化抗C1s抗体的核苷酸序列。

合适的宿主细胞包括真核宿主细胞，如哺乳动物细胞、昆虫宿主细胞、酵母细胞；和原核细胞，如细菌细胞。主题核酸向宿主细胞的引入可以，例如，通过磷酸钙沉淀、DEAE葡聚糖介导的转染、脂质体介导的转染、电穿孔或其它已知方法来实现。

合适的哺乳动物细胞包括原代细胞和永生化细胞系。合适的哺乳动物细胞系包括人细胞系、非人灵长类细胞系、啮齿动物(例如，小鼠、大鼠)细胞系等。合适的哺乳动物细胞系包括但不限于HeLa细胞(例如，美国模式培养物保藏所(ATCC)编号CCL-2)、CHO细胞(例如，ATCC编号CRL9618、CCL61、CRL9096)、293细胞(例如，ATCC编号CRL-1573)、Vero细胞、NIH3T3细胞(例如，ATCC编号CRL-1658)、Huh-7细胞、BHK细胞(例如，ATCC编号CCL10)、PC12细胞(ATCC编号CRL1721)、COS细胞、COS-7细胞(ATCC编号CRL1651)、RAT1细胞、小鼠L细胞(ATCC编号CCLI.3)、人胚肾(HEK)细胞(ATCC编号CRL1573)、HLHepG2细胞等。在一些情况下，所述细胞为HEK细胞。在一些情况下，所述细胞为CHO细胞，例如CHO-K1细胞(ATCC编号CCL-61)、CHO-M细胞、CHO-DG44细胞(ATCC编号PTA-3356)等。在一些实施方案中，宿主细胞为COS细胞。在一些实施方案中，宿主细胞为293细胞。在一些实施方案中，宿主细胞为CHO细胞。

合适的酵母细胞包括但不限于巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、芬兰毕赤酵母(Pichia finlandica)、喜海藻糖毕赤酵母(Pichia trehalophila)、Pichia koclamae、膜醭毕赤酵母(Pichia membranaefaciens)、Pichia opuntiae、Pichia thermotolerans、柳毕赤酵母(Pichia salictaria)、Pichia guercuum、皮杰普毕赤酵母(Pichia pijperi)、树干毕赤酵母(Pichia stiptis)、甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)、毕赤酵母属(Pichia sp.)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、酵母属(Saccharomyces sp.)、多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces sp.)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、白假丝酵母(Candida albicans)、构巢曲霉(Aspergillusnidulans)、黑曲霉(Aspergillus niger)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、里氏木霉(Trichoderma reesei)、Chrysosporium lucknowense、镰刀菌属(Fusarium sp.)、禾谷镰孢菌(Fusarium gramineum)、金黄色镰孢菌(Fusarium venenatum)、粗糙链孢霉(Neurospora crassa)、莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)等。在一些实施方案中，宿主细胞为酵母属。在一些实施方案中，宿主细胞为毕赤酵母属。

合适的原核细胞包括但不限于大肠杆菌、芽孢杆菌属(例如，枯草芽孢杆菌(B.subtilis))、乳杆菌属(Lactobacillus)等的多种实验室菌株中的任一种。参见，例如，Carrier等人(1992)J.Immunol.148：1176-1181；美国专利第6,447,784号；及Sizemore等人(1995)Science 270：299-302。通常，实验室菌株是非病原性的菌株。在一些实施方案中，宿主细胞为大肠杆菌。在一些实施方案中，宿主细胞为枯草芽孢杆菌。

药物组合物

本公开提供了组合物，包括包含本公开的人源化抗C1s抗体的药物组合物。一般而言，药物组合物，本文也称为制剂，包含有效量的本公开的人源化抗C1s抗体。“有效量”意指足以产生所需结果的剂量，所需结果例如，与补体介导的疾病或病症相关的不良症状减轻，补体介导的疾病或病症的症状改善，补体介导的疾病或病症的进展减缓等。通常，所需结果至少是与对照相比，补体介导的疾病或病症的症状减轻。在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体经配制和/或修饰以使得抗体能够穿过血脑屏障。在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体以避开血脑屏障的这种方式递送。在一些实施方案中，用有利于穿过血脑屏障的药剂配制本公开的人源化抗C1s抗体。在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体直接或通过接头与促进穿过血脑屏障的化合物融合。

制剂

在主题方法中，可以使用能够产生所需治疗效果或诊断效果的任何便利方式向宿主施用本公开的人源化抗C1s抗体。因此，可将药剂掺入多种用于治疗施用的制剂中。更特别地，可以通过与适当的药学上可接受的载体、药学上可接受的稀释剂或药学上可接受的赋形剂组合将本公开的人源化抗C1s抗体配制成药物组合物并且可以配制成固体、半固体、液体或气体形式的制剂，如片剂、胶囊、粉剂、粒剂、软膏、溶液、栓剂、注射剂、吸入剂和气溶胶。在一些实施方案中，药物组合物包含本公开的人源化抗C1s抗体和药学上可接受的赋形剂。

在药物剂型中，本公开的人源化抗C1s抗体可以呈其药学上可接受的盐的形式施用，或者也可单独使用或与其它药物活性化合物适当联合以及组合使用。以下方法和赋形剂仅为示例性而决非限制性。

对于口服制剂，本公开的人源化抗C1s抗体可以单独使用或与其它适当添加剂组合使用以制备片剂、粉剂、粒剂或胶囊，例如与常规添加剂组合，如乳糖、甘露糖醇、玉米淀粉或马铃薯淀粉；与粘合剂组合，如结晶纤维素、纤维素衍生物、阿拉伯树胶、玉米淀粉或明胶；与崩解剂组合，如玉米淀粉、马铃薯淀粉或羧甲基纤维素钠；与润滑剂组合，如滑石或硬脂酸镁；并且若需要，与稀释剂、缓冲剂、湿润剂、防腐剂和调味剂组合。

可通过使抗体溶解、悬浮或乳化于水性或非水性溶剂，如植物或其它类似油、丙二醇、合成脂肪酸甘油酯、可注射的有机酯类(如，油酸乙酯)、高级脂肪酸或丙二醇的酯中，将本公开的人源化抗C1s抗体配制成供注射的制剂；并且若需要，具有常规添加剂如增溶剂、等渗剂、助悬剂、乳化剂、稳定剂和防腐剂。胃肠外媒介物包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖(Ringer′s dextrose)、葡萄糖和氯化钠、乳酸林格氏液或不挥发性油。静脉内媒介物包括流体和营养补充剂、电解质补充剂(如基于林格氏葡萄糖的补充剂)等。此外，根据药物组合物的预期用途，本公开的药物组合物可包含其它试剂，如多巴胺或精神药理学药物。

可通过将具有所需纯度的本公开的人源化抗C1s抗体与任选的生理上可接受的载体、其它赋形剂、稳定剂、表面活性剂、缓冲剂和/或张度剂混合来制备包含本公开的人源化抗C1s抗体的药物组合物。可接受的载体、其它赋形剂和/或稳定剂在采用的剂量和浓度下对受者无毒，并且包括缓冲剂如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸、谷胱甘肽、半胱氨酸、甲硫氨酸和柠檬酸；防腐剂(如乙醇、苯甲醇、苯酚、间甲酚、对氯间甲酚、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯、苯扎氯铵或其组合)；氨基酸如精氨酸、甘氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、脯氨酸及其组合；单糖、二糖和其它碳水化合物；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如明胶或血清白蛋白；螯合剂如EDTA；糖如海藻糖、蔗糖、乳糖、葡萄糖、甘露糖、麦芽糖、半乳糖、果糖、山梨糖、棉子糖、葡萄糖胺、N-甲基葡萄糖胺、半乳糖胺和神经氨酸；和/或非离子型表面活性剂如吐温(Tween)、Brij Pluronics、Triton-X或聚乙二醇(PEG)。

药物组合物可呈液体形式、冻干形式或由冻干形式复水的液体形式，其中冻干制剂在施用之前要用无菌溶液复水。使冻干组合物复水的标准程序是加回一定体积的纯净水(通常等于冻干期间去除的体积)；然而包含抗菌剂的溶液可用于生产供肠胃外施用的药物组合物；还参见Chen(1992)Drug Dev Ind Pharm 18，1311-54。

主题药物组合物中的示例性抗体浓度范围可为约1mg/mL至约200mg/mL或约50mg/mL至约200mg/mL，或约150mg/mL至约200mg/mL。

本公开的人源化抗C1s抗体的水性制剂可于pH缓冲溶液中制备，例如在范围约4.0至约7.0，或约5.0至约6.0，或可选地约5.5的pH下。适合该范围内的pH的缓冲液的实例包括磷酸盐、组氨酸、柠檬酸盐、琥珀酸盐、乙酸盐缓冲剂和其它有机酸缓冲剂。根据例如缓冲剂和制剂的所需张度，缓冲剂浓度可为约1mM至约100mM或约5mM至约50mM。

在抗体制剂中可包括张度剂以调节制剂的张度。示例性张度剂包括氯化钠、氯化钾、甘油和来自氨基酸类、糖类及其组合的任何组分。在一些实施方案中，水性制剂等渗，虽然高渗或低渗溶液也可能合适。术语“等渗”指溶液具有和与之比较的一些其它溶液如生理盐溶液或血清相同的张度。张度剂可按约5mM至约350mM的量，例如按100mM至350nM的量使用。

也可向抗体制剂中添加表面活性剂以减少配制的抗体的聚集和/或将制剂中微粒的形成减到最少和/或减少吸附。示例性表面活性剂包括聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯(吐温)、聚氧乙烯烷基醚(Brij)、烷基苯酚聚氧乙烯醚(Triton-X)、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(Poloxamer，Pluronic)和十二烷基硫酸钠(SDS)。合适的聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯的实例为聚山梨醇酯20(以商标Tween 20^TM销售)和聚山梨醇酯80(以商标Tween 80^TM销售)。合适的聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物的实例是以名称F68或Poloxamer 188^TM销售的那些。合适的聚氧乙烯烷基醚的实例是以商标Brij^TM销售的那些。表面活性剂的示例性浓度范围可为约0.001％至约1％w/v。

也可添加冻干保护剂以保护不稳定的活性成分(例如，蛋白质)在冻干过程中免受失稳条件。例如，已知的冻干保护剂包括糖(包括葡萄糖和蔗糖)；多元醇(包括甘露糖醇、山梨糖醇和丙三醇)；和氨基酸(包括丙氨酸、甘氨酸和谷氨酸)。可包括约10mM至500nM的量的冻干保护剂。

在一些实施方案中，主题制剂包括本公开的人源化抗C1s抗体，和一种或多种以上鉴定的药剂(例如，表面活性剂、缓冲剂、稳定剂、张度剂)并且基本上不合一种或多种防腐剂，如乙醇、苯甲醇、苯酚、间甲酚、对氯间甲酚、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯、苯扎氯铵或其组合。在其它实施方案中，在制剂中包括防腐剂，例如，浓度范围为约0.001至约2％(w/v)。

例如，主题制剂可以是适于肠胃外施用的液体或冻干制剂，并且可包含：约1mg/mL至约200mg/mL的本公开的人源化抗C1s抗体；约0.001％至约1％的至少一种表面活性剂；约1mM至约100mM的缓冲剂；任选地约10mM至约500mM的稳定剂；和约5mM至约305mM的张度剂；并且pH为约4.0至约7.0。

再如，主题肠胃外制剂为液体或冻干制剂，其包含：约1mg/mL至约200mg/mL的本公开的人源化抗C1s抗体；0.04％吐温20w/v；20mM L-组氨酸；和250mM蔗糖；并且pH为5.5。

再如，主题肠胃外制剂包含冻干制剂，其包含：1)15mg/mL的主题抗体；0.04％吐温20w/v；20mM L-组氨酸；和250mM蔗糖；并且pH为5.5；或2)75mg/mL的主题抗体；0.04％吐温20w/v；20mM L-组氨酸；和250mM蔗糖；并且pH为5.5；或3)75mg/mL的主题抗体；0.02％吐温20w/v；20mM L-组氨酸；和250mM蔗糖；并且pH为5.5；或4)75mg/mL的主题抗体；0.04％吐温20w/v；20mM L-组氨酸；和250mM海藻糖；并且pH为5.5；或5)75mg/mL的主题抗体；0.02％吐温20w/v；20mM L-组氨酸；和250mM海藻糖；并且pH为5.5。

再如，主题肠胃外制剂为液体制剂，其包含：1)7.5mg/mL的主题抗体；0.02％吐温20w/v；120mM L-组氨酸；和250 125mM蔗糖；并且pH为5.5；或2)37.5mg/mL的主题抗体；0.02％吐温20w/v；10mM L-组氨酸；和125mM蔗糖；并且pH为5.5；或3)37.5mg/mL的主题抗体；0.01％吐温20w/v；10mM L-组氨酸；和125mM蔗糖；并且pH为5.5；或4)37.5mg/mL的主题抗体；0.02％吐温20w/v；10mM L-组氨酸；和125mM海藻糖；并且pH为5.5；或5)37.5mg/mL的主题抗体；0.01％吐温20w/v；10mM L-组氨酸；和125mM海藻糖；并且pH为5.5；或6)5mg/mL的主题抗体；0.02％吐温20w/v；20mM L-组氨酸；和250mM海藻糖；并且pH为5.5；或7)75mg/mL的主题抗体；0.02％吐温20w/v；20mM L-组氨酸；和250mM甘露糖醇；并且pH为5.5；或8)75mg/mL的主题抗体；0.02％吐温20w/v；20mM L-组氨酸；和140mM氯化钠；并且pH为5.5；或9)150mg/mL的主题抗体；0.02％吐温20w/v；20mM L-组氨酸；和250mM海藻糖；并且pH为5.5；或10)150mg/mL的主题抗体；0.02％吐温20w/v；20mM L-组氨酸；和250mM甘露糖醇；并且pH为5.5；或11)150mg/mL的主题抗体；0.02％吐温20w/v；20mM L-组氨酸；和140mM氯化钠；并且pH为5.5；或12)10mg/mL的主题抗体；0.01％吐温20w/v；20mM L-组氨酸；和40mM氯化钠；并且pH为5.5。

主题抗体可用于要经由吸入施用的气溶胶制剂中。主题抗体可配制到加压可接受的推进剂中，如二氯二氟甲烷、丙烷、氮气等。气溶胶制剂如鼻喷雾制剂包括活性剂与防腐剂和等渗剂的纯化水溶液或其它溶液。将此类制剂调节至与鼻粘膜相容的pH和等渗状态。

可提供供口服施用的单位剂型，如糖浆、酏剂和混悬剂，其中每个剂量单位，例如一茶匙、一汤匙或一片，均含有预定量的组合物。类似地，供注射或静脉内施用的单位剂型在组合物中可包含主题抗体，呈于无菌水、生理盐水或其它药学上可接受的载体中的溶液。

如本文中所用，术语“单位剂型”是指适合作为人和动物受试者的单位剂量的物理离散单位，每个单位含预定量的本公开的人源化抗C1s抗体，按足以联合药学上可接受的稀释剂、载体或媒介物产生所需效果的量计算。主题抗体的规格可取决于采用的特定抗体和要达到的效果，及宿主中与每种抗体相关的药效。

其它施用模式也将与本公开的方法一起使用。例如，主题抗体可配制于栓剂中并且，在一些情况下，配制于气溶胶和鼻用组合物中。对于栓剂而言，媒介物组成将包括传统粘合剂和载体如聚亚烷基二醇或甘油三酯。此类栓剂可由含有在约0.5％至约10％(w/w)，例如约1％至约2％的范围内的活性成分的混合物形成。

鼻用制剂通常将包括既不会对鼻粘膜产生刺激也不会明显扰乱纤毛功能的媒介物。可采用稀释剂如水、盐水或其它已知物质。鼻用制剂还可含防腐剂，例如但不限于，氯丁醇和苯扎氯铵。可存在表面活性剂以增强鼻粘膜对主题抗体的吸收。

主题抗体可作为注射制剂施用。通常，将注射组合物制备成液体溶液或混悬液；也可以在注射之前制备适合在液体媒介物中呈溶液或混悬液的固体形式。制剂也可经乳化或使抗体封装在脂质体媒介物中。

合适的赋形剂媒介物为，例如水、盐水、葡萄糖、丙三醇、乙醇等及其组合。另外，若需要，该媒介物可含少量辅助物质如湿润剂或乳化剂或pH缓冲剂。制备此类剂型的实际方法是已知的，或将对本领域技术人员来说显而易见的。参见，例如，Remington′sPharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，Pennsylvania，第17版，1985。要施用的组合物或制剂无论如何将含有一定量的足以在受治受试者中达到所需状态的主题抗体。

药学上可接受的赋形剂，如媒介物、佐剂、载体或稀释剂，易于为公众所获得。而且，药学上可接受的辅助物质，如pH调节剂和缓冲剂、张度调节剂、稳定剂、湿润剂等，易于为公众所获得。

在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体配制于控释制剂中。可使用本领域公知的方法制备缓释制剂。缓释制剂的合适的实例包括含抗体的固体疏水性聚合物的半渗透基质，其中所述基质呈成型制品的形式，例如薄膜或微胶囊。缓释基质的实例包括聚酯、L-谷氨酸和L-谷氨酸乙酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、水凝胶、聚交酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。可以使用适当的添加剂，通过控制含水量和通过开发特定聚合物基质组合物来防止缓释制剂中所包含的抗体可能的生物活性丧失和可能的免疫原性变化。

在本公开的范围内的控释可以被认为是指许多延时释放剂型中的任何一种。为了本公开的目的，以下术语可被视为与控释基本等效：连续释放、控释、延迟释放、贮库、延时释放、逐步释放、立即释放、长期释放、程序性释放、延长释放、按比例释放、长时间释放、储存库、延迟、缓曼释放、间隔释放、缓释、时间包衣、定时释放、延迟作用、延长作用、分层时间作用、长效、长期作用、重复作用、缓慢作用、持续作用和缓释作用药物。这些术语的进一步讨论可以在Lesczek Krowczynski，Extended-Release Dosage Forms，1987(CRC Press，Inc.)中找到。

各种控释技术覆盖了非常广泛的药物剂型。控释技术包括但不限于物理系统和化学系统。

物理系统包括但不限于具有控速膜的储集系统，如微囊化(microencapsulation)、巨囊化(macroencapsulation)和膜系统；无控速膜的储集系统，如空心纤维、超微孔三乙酸纤维素和多孔聚合物基质和泡沫；整体系统，包括物理溶于无孔、聚合或弹性基质(例如，非侵蚀性、侵蚀性、环境因素进入和可降解的)中的那些系统，及物理溶于无孔、聚合或弹性基质(例如，非侵蚀性、侵蚀性、环境因素进入和可降解的)中的材料；层状结构，包括与外部控制层化学上相似或相异的储集层；和其它物理方法，如渗透泵，或吸附到离子交换树脂上。

化学系统包括但不限于聚合物基质的化学侵蚀(例如，不均匀或均匀侵蚀)，或聚合物基质的生物侵蚀(例如，不均匀或均匀)。对用于控释的系统类别的其它讨论可以在Agis F.Kydonieus，Controlled Release Technologies：Methods，Theory and Applications，1980(CRC Press，Inc.)中找到。

存在许多开发用于口服施用的控释药物制剂。这些包括但不限于渗透压控制的胃肠递送系统；流体动力压力控制的胃肠递送系统；膜渗透控制的胃肠递送系统，其包括微孔膜渗透控制的胃肠递送系统；抗胃液的肠道靶向控释胃肠递送系统；凝胶扩散控制的胃肠递送系统；和离子交换控制的胃肠递送系统，其包括阳离子和阴离子药物。关于控释药物递送系统的另外的信息可在Yie W.Chien，Novel Drug Delivery Systems，1992(MarcelDekker，Inc.)中找到。

剂量

可由主治医师或其它合格的医务人员，基于各种临床因素确定合适剂量。如医学领域中所公知的，任何一位患者的剂量都取决于许多因素，包括患者的尺寸、体表面积、年龄、要施用的特定化合物、患者性别、施用时间和途径、总体健康状况和同时施用的其它药物。可按每个剂量介于1ng/kg体重和20mg/kg体重之间，例如介于0.1mg/kg体重至10mg/kg体重之间，例如介于0.5mg/kg体重至5mg/kg体重之间的量施用主题抗体；然而，预想到了低于或高于该示例范围的剂量，尤其考虑到了前面提到的因素。如果该方案是持续输注，则可以在每分钟1μg至10mg/kg体重的范围内。

在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体的剂量在0.001μg至1000μg的范围内；然而，预想到了低于或高于该示例范围的剂量，尤其考虑到了前面提到的因素。在一些实施方案中，所述剂量范围可为，例如约0.0001至100mg/kg体重，或约0.01至5mg/kg体重(例如，0.02mg/kg、0.25mg/kg、0.5mg/kg、0.75mg/kg、1mg/kg、2mg/kg等)。例如剂量可为1mg/kg体重或10mg/kg体重或在1-10mg/kg范围内，或为至少1mg/kg。以上范围中间的剂量也预期在本发明的范围之内。

在一些实施方案中，按提供约1μg/ml至约1mg/ml，，例如约1μg/ml至约2.5μg/ml，约2.5μg/ml至约5μg/ml，约5μg/ml至约7.5μg/ml，约7.5μg/ml至约10μg/ml，约10μg/ml至约25μg/ml，约25μg/ml至约50μg/ml，约50μg/ml至约100μg/ml，约100μg/ml至约250μg/ml，约250μg/ml至约500μg/ml，约500μg/ml至约750μg/ml或约750μg/ml至约1000μg/ml的血清峰浓度的量，施用本公开的人源化抗C1s抗体。在一些实施方案中，按提供高于1mg/ml，例如约1mg/ml至约2mg/ml，约2mg/ml至约5mg/ml或约5mg/ml至约10mg/ml的血清峰浓度的量，施用主题抗C1s抗体。可根据任何时间表施用本公开的人源化抗体任意一段时间。

技术人员将易于认识到剂量水平和施用时间表可根据特定抗体、症状严重程度和受试者对副作用的易感性而变化。对于给定化合物的优选剂量和施用时间表易于由本领域的技术人员通过各种方式确定。

施用途径

使用任何可用方法和适于药物递送的途径，包括体内和体外方法，以及全身和局部化施用途径向个体施用主题抗体。

常规且药学上可接受的施用途径包括鼻内、肌肉内、气管内、鞘内、颅内、皮下、皮内、局部、静脉内、腹膜内、动脉内(例如，通过颈动脉)、脊髓或脑部递送、直肠、鼻部、口服和其它肠内和肠胃外施用途径。如需要，施用途径可组合，或根据抗体和/或所需效果来调整。主题抗体组合物可呈单剂量或多剂量施用。在一些实施方案中，口服施用主题抗体组合物。在一些实施方案中，经由吸入途径施用主题抗体组合物。在一些实施方案中，鼻内施用主题抗体组合物。在一些实施方案中，局部施用主题抗体组合物。在一些实施方案中，颅内施用主题抗体组合物。在一些实施方案中，静脉内施用主题抗体组合物。在一些实施方案中，经皮下施用主题抗体组合物。在一些实施方案中，肌肉内施用主题抗体组合物。在一些实施方案中，鞘内施用主题抗体组合物。

可使用适于常规药物递送的任何可用的常规方法和途径，包括全身或局部化途径向宿主施用本公开的抗体。一般而言，本发明所考虑到的施用途径包括但不一定限于肠内、肠胃外或吸入途径。

除吸入施用以外的肠胃外施用途径包括但不一定限于局部、经皮、皮下、肌肉内、眶内、囊内、脊柱内、胸骨内、鞘内和静脉内途径，即除了通过消化道以外的任何施用途径。可进行肠胃外施用以实现主题抗体的全身或局部递送。需要全身递送时，施用通常涉及药物制剂的侵入性或全身吸收的局部或粘膜施用。

也可通过肠内施用向受试者递送主题抗体。肠内施用途径包括但不一定限于口服和直肠(例如，使用栓剂)递送。

治疗意指至少与折磨宿主的病理状况相关的症状的改善，其中改善在广义上用于指至少与治疗的病理状况，例如补体介导的疾病或病症相关的参数(例如症状)的幅度降低。因而，治疗还包括下述情形，其中病理状况或至少与之相关的症状被完全抑制，例如防止其发生，或停止，例如终止，使得宿主不再遭受该病理状况，或至少不再遭受成为该病理状况特征的症状。

在一些实施方案中，通过注射和/或递送，例如，向脑动脉内的部位或直接向脑组织内施用本公开的人源化抗C1s抗体。主题人源化抗体也可直接施用到靶部位，例如通过基因枪递送至靶部位。

多种宿主(其中术语“宿主”与术语“受试者”、“个体”和“患者”在本文中可互换使用)可根据主题方法治疗。通常此类宿主为“哺乳动物”或“哺乳动物的”，其中这些术语广泛地用于描述属于哺乳纲的生物体，包括食肉动物目(例如，猫)、食草动物目(例如，牛、马和绵羊)、杂食动物目(例如，狗、山羊和猪)、啮齿目(例如，小鼠、豚鼠和大鼠)和灵长目(例如，人、黑猩猩和猴)。在一些实施方案中，宿主是具有补体系统的个体，如哺乳动物、鱼类或无脊椎动物。在一些实施方案中，宿主是含补体系统的哺乳动物、鱼类或无脊椎伴侣动物、农业动物、役用动物、动物园动物和实验室动物。在一些实施方案中，宿主为人。

实施方案包括包含容器的组合物，所述容器适于容纳用于向个体施用的包含主题抗C1s抗体的组合物。例如，主题抗体可置于适于容纳药物组合物的容器中。容器可以是，例如瓶(例如，具有闭合装置，如盖)、泡罩包装(例如，每个泡罩可以提供对一个或多个剂量的封闭)、小瓶、软包装(例如，密封的Mylar或塑料袋)、安瓿(对于呈溶液的单剂量而言)、滴管、注射器、薄膜、管子等。在一些实施方案中，容器，如无菌容器，包含主题药物组合物。在一些实施方案中容器为瓶或注射器。在一些实施方案中容器为瓶。在一些实施方案中容器为注射器。

提供了具有单位剂量的本公开的人源化抗C1s抗体(例如呈口服或注射剂量)的试剂盒。在此类试剂盒中，除容纳单位剂量的容器以外，将是描述在治疗所关注的病理状况中所述抗体的用途和附带益处的包装信息说明书。优选的化合物和单位剂量是上文描述的那些。

治疗补体介导的疾病或病症的方法

本公开提供了治疗补体介导的疾病或病症的方法。所述方法通常涉及向有需要的个体施用有效量的本公开的人源化抗C1s抗体或包含此类抗体的药物组合物。在一些情况下，主题抗C1s抗体的施用调节个体的细胞、组织、流体或器官中补体C1s的活性，并且治疗补体介导的疾病或病症。本公开提供了抑制个体中补体组分C4的活化的方法，所述方法包括向个体施用有效量的本公开的人源化抗C1s抗体或包含此类抗体的药物组合物。本公开提供了抑制个体中的补体C1s活性的方法，所述方法包括向个体施用有效量的本公开的人源化抗C1s抗体或包含此类抗体的药物组合物。本公开提供了降低个体中(例如，个体的流体、组织或器官中)的补体组分裂解产物的水平的方法，所述方法包括向个体施用有效量的本公开的人源化抗C1s抗体或包含此类抗体的药物组合物。

在一些情况下，本公开的治疗患有补体介导的疾病或病症的个体的方法包括向个体施用有效量的本公开的人源化抗C1s抗体或有效量的药物组合物，所述药物组合物包含：a)本公开的人源化抗C1s抗体；和适于向此类个体施用的药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，个体为哺乳动物。在一些实施方案中，个体为人。施用可以通过本领域技术人员已知的任何途径，包括本文公开的那些途径。在一些实施方案中，施用为静脉内。在一些实施方案中，施用为鞘内。在一些实施方案中，施用为皮下。在一些实施方案中，施用为肌肉内。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体的“有效量”或包含本公开的人源化抗C1s抗体的主题药物组合物的“有效量”，是以一个或多个剂量向有需要的个体施用时，降低个体中(例如，个体的流体、组织或器官中)的补体组分裂解产物的水平的量。在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体的“有效量”或包含本公开的人源化抗C1s抗体的主题药物组合物的“有效量”，是以一个或多个剂量向有需要的个体施用时，使个体中(例如，个体的流体、组织或器官中)的补体组分裂解产物的水平与没有用人源化抗C1s抗体治疗时，例如用人源化抗C1s抗体治疗之前流体、组织或器官中的补体组分裂解产物的水平相比降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的量。在一些实施方案中，个体为哺乳动物。在一些实施方案中，个体为人。施用可以通过本领域技术人员已知的任何途径，包括本文公开的那些途径。在一些实施方案中，施用为静脉内。在一些实施方案中，施用途径为鞘内。在一些实施方案中，施用途径为静脉内。在一些实施方案中，施用途径为皮下。在一些实施方案中，施用途径为肌肉内。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体的“有效量”或包含本公开的人源化抗C1s抗体的主题药物组合物的“有效量”，是以一个或多个剂量向有需要的个体施用时，降低个体中(例如，个体的流体、组织或器官中)的经典补体途径的活性的量。在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体的“有效量”或包含本公开的人源化抗C1s抗体的主题药物组合物的“有效量”，是以一个或多个剂量向有需要的个体施用时，在人源化抗C1s抗体施用约48小时内、约24小时内、约12小时内、约8小时内或约4小时内，使个体中(例如，个体的流体、组织或器官中)的经典补体途径的活性与没有用人源化抗C1s抗体治疗时，例如用人源化抗C1s抗体治疗之前流体、组织或器官中的经典补体途径的活性相比降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的量。在一些实施方案中，个体为哺乳动物。在一些实施方案中，个体为人。人源化抗C1s抗体的施用可以通过本领域技术人员已知的任何途径，包括本文公开的那些途径。在一些实施方案中，施用途径为鞘内。在一些实施方案中，施用途径为静脉内。在一些实施方案中，施用途径为皮下。在一些实施方案中，施用途径为肌肉内。可以使用多种方法中的任一种测定经典补体途径的活性水平。作为一个非限制性实例，可在活体外测定经典补体途径的活性，例如，通过测定从个体获得的血液、血清或血浆样品中的经典补体途径的活性水平。例如，血液、血清或血浆样品中的经典补体途径可在活体外激活，并且可以测定通过这样激活而产生的补体组分裂解产物(如C5b-9)的量。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体的“有效量”或包含本公开的人源化抗C1s抗体的主题药物组合物的“有效量”，是以一个或多个剂量向有需要的个体施用时，降低个体中(例如，个体的流体、组织或器官中)的经典补体途径的活性的量。在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体的“有效量”或包含本公开的人源化抗C1s抗体的主题药物组合物的“有效量”，是以一个或多个剂量向有需要的个体施用时，在人源化抗C1s抗体施用约48小时内、约24小时内、约12小时内、约8小时内或约4小时内，使个体中(例如，个体的流体、组织或器官中)的经典补体途径的活性水平与没有用人源化抗C1s抗体治疗时，例如用人源化抗C1s抗体治疗之前流体、组织或器官中的经典补体途径的活性水平相比降低至少50％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的量。在一些实施方案中，个体为哺乳动物。在一些实施方案中，个体为人。人源化抗C1s抗体的施用可以通过本领域技术人员已知的任何途径，包括本文公开的那些途径。在一些实施方案中，施用途径为鞘内。在一些实施方案中，施用途径为静脉内。在一些实施方案中，施用途径为皮下。在一些实施方案中，施用途径为肌肉内。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体的“有效量”或包含本公开的人源化抗C1s抗体的主题药物组合物的“有效量”，是以一个或多个剂量向有需要的个体施用时，降低个体中(例如，个体的流体、组织或器官中)的经典补体途径的活性的量。在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体的“有效量”或包含本公开的人源化抗C1s抗体的主题药物组合物的“有效量”，是以一个或多个剂量向有需要的个体施用时，保持个体中(例如，个体的流体、组织或器官中)的经典补体途径的活性水平与没有用人源化抗C1s抗体治疗时，例如用人源化抗C1s抗体治疗之前流体、组织或器官中的经典补体途径的活性水平相比降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的量，其中保持降低约4小时至约30天的一段时间(例如，4小时至8小时、8小时至24小时、2天至4天、4天至7天、7天至14天、14天至21天或21天至30天)。在一些实施方案中，个体为哺乳动物。在一些实施方案中，个体为人。人源化抗C1s抗体的施用可以通过本领域技术人员已知的任何途径，包括本文公开的那些途径。在一些实施方案中，施用途径为鞘内。在一些实施方案中，施用途径为静脉内。在一些实施方案中，施用途径为皮下。在一些实施方案中，施用途径为肌肉内。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体的“有效量”或包含本公开的人源化抗C1s抗体的主题药物组合物的“有效量”，是以一个或多个剂量向有需要的个体施用时，降低个体中(例如，个体的流体、组织或器官中)的经典补体途径的活性的量。在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体的“有效量”或包含本公开的人源化抗C1s抗体的主题药物组合物的“有效量”，是以一个或多个剂量向有需要的个体施用时，保持个体中(例如，个体的流体、组织或器官中)的经典补体途径的活性水平与没有用人源化抗C1s抗体治疗时，例如用人源化抗C1s抗体治疗之前流体、组织或器官中的经典补体途径的活性水平相比降低至少50％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的量，其中保持降低约4小时至约21天的一段时间(例如，4小时至8小时、8小时至24小时、2天至4天、4天至7天、7天至14天或14天至21天)。在一些实施方案中，个体为哺乳动物。在一些实施方案中，个体为人。人源化抗C1s抗体的施用可以通过本领域技术人员已知的任何途径，包括本文公开的那些途径。在一些实施方案中，施用途径为鞘内。在一些实施方案中，施用途径为静脉内。在一些实施方案中，施用途径为皮下。在一些实施方案中，施用途径为肌肉内。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体的“有效量”或包含本公开的人源化抗C1s抗体的主题药物组合物的“有效量”，是以一个或多个剂量向有需要的个体施用时，降低个体中(例如，个体的流体、组织或器官中)的补体组分裂解产物的水平的量。在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体的“有效量”或包含本公开的人源化抗C1s抗体的主题药物组合物的“有效量”，是以一个或多个剂量向有需要的个体施用时，在人源化抗C1s抗体施用约48小时内、约24小时内、约12小时内、约8小时内或约4小时内，使个体中(例如，个体的流体、组织或器官中)的补体组分裂解产物的水平与没有用人源化抗C1s抗体治疗时，例如用人源化抗C1s抗体治疗之前流体、组织或器官中的补体组分裂解产物的水平相比降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的量。在一些实施方案中，个体为哺乳动物。在一些实施方案中，个体为人。人源化抗C1s抗体的施用可以通过本领域技术人员已知的任何途径，包括本文公开的那些途径。在一些实施方案中，施用途径为鞘内。在一些实施方案中，施用途径为静脉内。在一些实施方案中，施用途径为皮下。在一些实施方案中，施用途径为肌肉内。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体的“有效量”或包含本公开的人源化抗C1s抗体的主题药物组合物的“有效量”，是以一个或多个剂量向有需要的个体施用时，降低个体中(例如，个体的流体、组织或器官中)的补体组分裂解产物的水平的量。在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体的“有效量”或包含本公开的人源化抗C1s抗体的主题药物组合物的“有效量”，是以一个或多个剂量向有需要的个体施用时，在人源化抗C1s抗体施用约48小时内、约24小时内、约12小时内、约8小时内或约4小时内，使个体中(例如，个体的流体、组织或器官中)的补体组分裂解产物的水平与没有用人源化抗C1s抗体治疗时，例如用人源化抗C1s抗体治疗之前流体、组织或器官中的补体组分裂解产物的水平相比降低至少50％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的量。在一些实施方案中，个体为哺乳动物。在一些实施方案中，个体为人。人源化抗C1s抗体的施用可以通过本领域技术人员已知的任何途径，包括本文公开的那些途径。在一些实施方案中，施用途径为鞘内。在一些实施方案中，施用途径为静脉内。在一些实施方案中，施用途径为皮下。在一些实施方案中，施用途径为肌肉内。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体的“有效量”或包含本公开的人源化抗C1s抗体的主题药物组合物的“有效量”，是以一个或多个剂量向有需要的个体施用时，降低个体中(例如，个体的流体、组织或器官中)的补体组分裂解产物的水平的量。在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体的“有效量”或包含本公开的人源化抗C1s抗体的主题药物组合物的“有效量”，是以一个或多个剂量向有需要的个体施用时，保持个体中(例如，个体的流体、组织或器官中)的经典补体途径的活性水平与没有用人源化抗C1s抗体治疗时，例如用人源化抗C1s抗体治疗之前流体、组织或器官中的补体组分裂解产物的水平相比降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的量，其中保持降低约4小时至约30天的一段时间(例如，4小时至8小时、8小时至24小时、2天至4天、4天至7天、7天至14天、14天至21天或21天至30天)。在一些实施方案中，个体为哺乳动物。在一些实施方案中，个体为人。人源化抗C1s抗体的施用可以通过本领域技术人员已知的任何途径，包括本文公开的那些途径。在一些实施方案中，施用途径为鞘内。在一些实施方案中，施用途径为静脉内。在一些实施方案中，施用途径为皮下。在一些实施方案中，施用途径为肌肉内。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体的“有效量”或包含本公开的人源化抗C1s抗体的主题药物组合物的“有效量”，是以一个或多个剂量向有需要的个体施用时，降低个体中(例如，个体的流体、组织或器官中)的补体组分裂解产物的水平的量。在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体的“有效量”或包含本公开的人源化抗C1s抗体的主题药物组合物的“有效量”，是以一个或多个剂量向有需要的个体施用时，保持个体中(例如，个体的流体、组织或器官中)的补体组分裂解产物的水平与没有用人源化抗C1s抗体治疗时，例如用人源化抗C1s抗体治疗之前流体、组织或器官中的补体组分裂解产物的水平相比降低至少50％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的量，其中保持降低约4小时至约21天的一段时间(例如，4小时至8小时、8小时至24小时、2天至4天、4天至7天、7天至14天或14天至21天)。在一些实施方案中，个体为哺乳动物。在一些实施方案中，个体为人。人源化抗C1s抗体的施用可以通过本领域技术人员已知的任何途径，包括本文公开的那些途径。在一些实施方案中，施用途径为鞘内。在一些实施方案中，施用途径为静脉内。在一些实施方案中，施用途径为皮下。在一些实施方案中，施用途径为肌肉内。

在一些情况下，本公开的人源化抗C1s抗体的“有效量”或包含本公开的人源化抗C1s抗体的主题药物组合物的“有效量”，是以一个或多个剂量向有需要的个体施用时，使个体中(例如，个体的流体、组织或器官中)的C4b2a(即，补体C4b和C2a复合物；也称为“C3转化酶”)的生成与没有用人源化抗C1s抗体治疗时，例如用人源化抗C1s抗体治疗之前个体中或流体、组织或器官中生成的C4b2a的量相比降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的量。在一些实施方案中，个体为哺乳动物。在一些实施方案中，个体为人。施用可以通过本领域技术人员已知的任何途径，包括本文公开的那些途径。在一些实施方案中，施用为静脉内。在一些实施方案中，施用途径为鞘内。在一些实施方案中，施用途径为静脉内。在一些实施方案中，施用途径为皮下。在一些实施方案中，施用途径为肌肉内。

本公开提供了调节补体活化的方法。在一些实施方案中所述方法抑制补体活化，例如减少C4b2a的生成。在一些实施方案中，本公开提供了调节患有补体介导的疾病或病症的个体中的补体活化的方法，所述方法包括向该个体施用本公开的人源化抗C1s抗体或本公开的药物组合物，其中所述药物组合物包含本公开的人源化抗C1s抗体。在一些实施方案中，此类方法抑制补体活化。在一些实施方案中，个体为哺乳动物。在一些实施方案中，个体为人。施用可以通过本领域技术人员已知的任何途径，包括本文公开的那些途径。在一些实施方案中，施用为静脉内。在一些实施方案中，施用为鞘内。在一些实施方案中，施用为皮下。在一些实施方案中，施用途径为肌肉内。

补体介导的疾病或病症是特征在于个体的细胞、组织、流体或器官中补体C1s的量异常或补体C1s蛋白水解活性的水平异常的病症。

在一些情况下，补体介导的疾病或病症特征在于在细胞、组织或流体中存在升高(高于正常)的C1s量或升高的补体C1s活性水平。例如，在一些情况下，补体介导的疾病或病症特征在于在脑组织和/或脑脊髓液中存在升高的C1s量和/或升高的C1s活性。细胞、组织或流体中“高于正常”的C1s量表明，细胞、组织或流体中C1s的量高于正常、对照水平，例如高于同龄组的个体或个体群的正常、对照水平。细胞、组织、器官或流体中“高于正常”的C1s活性水平表明，细胞、组织、器官或流体中由C1s实现的蛋白水解裂解高于正常、对照水平，例如高于同龄组的个体或个体群的正常、对照水平。在一些情况下，患有补体介导的疾病或病症的个体表现出此类疾病或病症的一种或多种附加症状。

在其它情况下，补体介导的疾病或病症特征在于在细胞、组织或流体中存在低于正常的C1s量或较低的补体C1s活性水平。例如，在一些情况下，补体介导的疾病或病症特征在于在脑组织和/或脑脊髓液中存在较低的C1s量和/或较低的C1s活性。细胞、组织或流体中“低于正常”的C1s量表明，细胞、组织或流体中C1s的量低于正常、对照水平，例如低于同龄组的个体或个体群的正常、对照水平。细胞、组织或流体中“低于正常”的C1s活性水平表明，细胞、组织或流体中由C1s实现的蛋白水解裂解低于正常、对照水平，例如低于同龄组的个体或个体群的正常、对照水平。在一些情况下，患有补体介导的疾病或病症的个体表现出此类疾病或病症的一种或多种附加症状。

补体介导的疾病或病症是其中补体C1s的量或活性达到在个体中引起疾病或病症的程度的疾病或病症。在一些实施方案中，补体介导的疾病或病症选自由以下组成的组：同种免疫疾病、自身免疫性疾病、癌症、血液病、感染性疾病、炎性疾病、局部缺血再灌注损伤、神经退行性疾病、神经退行性病症、眼病、肾病、移植排斥、血管疾病和血管炎疾病。在一些实施方案中，补体介导的疾病或病症为自身免疫性疾病。在一些实施方案中，补体介导的疾病或病症为同种免疫疾病。在一些实施方案中，补体介导的疾病或病症为癌症。在一些实施方案中，补体介导的疾病或病症为感染性疾病。在一些实施方案中，补体介导的疾病或病症为炎性疾病。在一些实施方案中，补体介导的疾病或病症为血液病。在一些实施方案中，补体介导的疾病或病症为局部缺血再灌注损伤。在一些实施方案中，补体介导的疾病或病症为眼病。在一些实施方案中，补体介导的疾病或病症为肾病。在一些实施方案中，补体介导的疾病或病症为移植排斥。在一些实施方案中，补体介导的疾病或病症为抗体介导的移植排斥。在一些实施方案中，补体介导的疾病或病症为血管疾病。在一些实施方案中，补体介导的疾病或病症为血管炎病症。在一些实施方案中，补体介导的疾病或病症为神经退行性疾病或病症。在一些实施方案中，补体介导的疾病或病症为神经退行性疾病。在一些实施方案中，补体介导的疾病或病症为神经退行性病症。

补体介导的疾病或病症的实例包括但不限于老年性黄斑变性、阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease)、肌萎缩性侧索硬化、过敏反应、嗜银颗粒痴呆、关节炎(例如，类风湿性关节炎)、哮喘、动脉粥样硬化、非典型溶血性尿毒症综合征、自身免疫性疾病(包括，例如自身免疫性溶血性贫血(AIHA)；温抗体型AIHA；混合型AIHA；等)、巴-西二氏综合征(Barraquer-Simons syndrome)、贝赛特氏症(disease)、英国型淀粉样血管病、大疱性类天疱疮、柏格氏病(Buerger’s disease)、C1q肾病、癌症、恶性抗磷脂综合征、脑淀粉样血管病、冷凝集素病、皮质基底节变性、克雅二氏症(Creutzfeldt-Jakob disease)、克罗恩病(Crohn’s disease)、冷凝球蛋白性血管炎、拳击员痴呆、路易体痴呆(DLB)、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化症、盘状红斑狼疮、唐氏综合征(Down′s syndrome)、伊文氏综合征(Evan’s syndrome)、局灶性节段性肾小球硬化、形式思维障碍、额颞叶痴呆(FTD)、17位染色体相关的额颞叶痴呆伴帕金森综合征、额颞叶变性、杰茨曼-斯脱司勒-史茵克氏症(Gerstmann-Straussler-Scheinker disease)、格林-巴利综合征(Guillain-Barrésyndrome)、哈-斯二氏病(Hallervorden-Spatz disease)、溶血性尿毒症综合征、遗传性血管水肿、低磷酸酯酶症(hypophosphastasis)、特发性肺炎综合征、免疫复合物疾病、包涵体肌炎、感染性疾病(例如，由细菌(例如，脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitidis)或链球菌属(Streptococcus))、病毒(例如，人免疫缺陷病毒(HIV))或其它感染原造成的疾病)、炎性疾病、局部缺血/再灌注损伤、轻度认知损伤、免疫血小板减少性紫癜(ITP)、A型钼辅因子缺乏(MoCD)、I型膜增生性肾小球肾炎(MPGN)、II型膜增生性肾小球肾炎(MPGN)(致密物沉积病)、膜性肾炎、多发梗塞性痴呆、狼疮(例如，全身性红斑狼疮(SLE))、肾小球肾炎、川崎病(Kawasaki disease)、多灶性运动神经病、多发性硬化、多系统萎缩、重症肌无力、心肌梗塞、强直性肌营养不良、视神经脊髓炎、C型尼曼-皮克病(Niemann-Pick disease)、伴有神经纤维缠结的非Guamanian运动神经元疾病、帕金森氏病(Parkinson′s disease)、伴有痴呆的帕金森氏病、阵发性睡眠性血红蛋白尿症、寻常型天疱疮、皮克氏病(Pick′sdisease)、脑炎后帕金森症、多肌炎、朊病毒蛋白脑淀粉样血管病、进行性皮质下胶质增生、进行性核上性麻痹、牛皮癣、败血症、志贺毒素大肠杆菌(Shiga-toxin E coli，STEC)-HuS、脊髓性肌萎缩症、中风、亚急性硬化性全脑炎、仅缠结型痴呆、移植排斥、血管炎(例如，ANCA相关性血管炎)、韦格纳氏肉芽肿(Wegner′s granulomatosis)、镰状细胞病、冷球蛋白血症、混合性冷球蛋白血症、特发性混合性冷球蛋白血症、II型混合性冷球蛋白血症、III型混合性冷球蛋白血症、肾炎、药物诱发的血小板减少症、狼疮性肾炎、后天性大疱性表皮松解、延迟性溶血性输血反应、低补体血症荨麻疹性血管炎综合征、假晶体状大疱性角膜病变和血小板输注无效(platelet refractoriness)。

在一些实施方案中，补体介导的疾病或病症包括阿尔茨海默氏病。在一些实施方案中，补体介导的疾病或病症包括帕金森氏病。在一些实施方案中，补体介导的疾病或病症包括移植排斥。在一些实施方案中，补体介导的疾病或病症为抗体介导的移植排斥。

在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体防止或延迟个体中补体介导的疾病或病症的至少一种症状的发作。在一些实施方案中，本公开的抗C1s抗体减轻或消除个体中补体介导的疾病或病症的至少一种症状。症状的实例包括但不限于与自身免疫型疾病、癌症、血液病、感染性疾病、炎性疾病、局部缺血再灌注损伤、神经退行性疾病、神经退行性病症、肾病、移植排斥、眼病、血管疾病或血管炎病症相关的症状。症状可以是神经学症状，例如，认知功能受损、记忆损伤、运动功能丧失等。症状也可以是个体的细胞、组织或流体中的C1s蛋白活性。症状也可以是个体的细胞、组织或流体中的补体活化的程度。

在一些实施方案中，向个体施用本公开的人源化抗C1s抗体调节了个体的细胞、组织或流体中的补体活化。在一些实施方案中，向个体施用主题抗C1s抗体抑制个体的细胞、组织或流体中的补体活化。例如，在一些实施方案中，当主题人源化抗C1s抗体以一个或多个剂量作为单一疗法或以组合疗法施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用抗C1s抗体治疗前个体中的补体活化相比，抑制所述个体中的补体活化至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或大于90％。

在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体减少C3向红血细胞上的沉积；例如，在一些实施方案中，本公开的抗C1s抗体减少C3b、iC3b等向RBC上的沉积。在一些实施方案中，本公开的抗C1s抗体抑制补体介导的红血细胞溶解。

在一些实施方案中，本公开的人源化抗C1s抗体减少C3向血小板上的沉积；例如，在一些实施方案中，本公开的抗C1s抗体减少C3b、iC3b等向血小板上的沉积。

在一些实施方案中，施用本公开的人源化抗C1s抗体导致选自由以下组成的组的结果：(a)补体活化的降低；(b)认知功能的提高；(c)神经元损失的减少；(d)胶质细胞活化的降低；(e)淋巴细胞浸润的减少；(f)巨噬细胞浸润的减少；(g)抗体沉积的减少；(h)胶质细胞损失的减少；(i)少突胶质细胞损失的减少；(j)树突细胞浸润的减少；(k)嗜中性粒细胞浸润的减少；(l)红血细胞溶解的减少；(m)红血细胞吞噬作用的降低；(n)血小板吞噬作用的降低；(o)血小板溶解的减少；(p)移植物存活率的提高；(q)巨噬细胞介导的吞噬作用的降低；(r)视力的改善；(s)运动控制的改善；(t)血栓形成的改善；(u)凝血的改善；(v)肾功能的改善；(w)抗体介导的补体活化的减少；(x)自身抗体介导的补体活化的减少；(y)贫血的改善；(aa)脱髓鞘的减少；(ab)嗜酸粒细胞增多的降低；(ac)C3在红血细胞上的沉积的减少(例如，C3b、iC3b等向RBC上的沉积的减少)；和(ad)C3在血小板上的沉积的减少(例如，C3b、iC3b等向血小板上的沉积的减少)；和(ae)过敏毒素生成的减少；(af)自身抗体介导的水疱形成的减少；(ag)自身抗体诱发的瘙痒的减少；(ah)自身抗体诱发的红斑狼疮的减少；(ai)自身抗体介导的皮肤糜烂的减少；(aj)由于输液反应所致的红血细胞破坏的减少；(ak)由于同种抗体所致的红血细胞溶解的减少；(al)由于输液反应所致的溶血的减少；(am)同种抗体介导的血小板溶解的减少；(an)由于输液反应所致的血小板溶解的减少；(ao)肥大细胞活化的减少；(ap)肥大细胞组胺释放的减少；(aq)血管渗透性的降低；(ar)水肿的减少；(as)补体在移植物内皮上的沉积的减少；(at)在移植物内皮中的过敏毒素产生的减少；(au)真皮-表皮交界的分离的减少；(av)真皮-表皮交界中的过敏毒素产生的减少；(aw)在移植物内皮中同种抗体介导的补体活化的降低；(ax)抗体介导的神经肌肉接点的损失的减少；(ay)神经肌肉接点处补体活化的降低；(az)神经肌肉接点处过敏毒素产生的减少；(ba)神经肌肉接点处补体沉积的减少；(bb)麻痹减少；(bc)麻木减少；(bd)膀胱控制增强；(be)排便控制增强；(bf)与自身抗体相关的死亡率的降低；和(bg)与自身抗体相关的发病率的降低。

在一些实施方案中，当主题抗C1s抗体以一个或多个剂量作为单一疗法或以组合疗法施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用抗C1s抗体治疗前个体中的结果的水平或程度相比，能够实现以下结果中的一种或多种降低至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或大于90％：(a)补体活化；(b)认知功能下降；(c)神经元损失；(d)胶质细胞活化；(e)淋巴细胞浸润；(f)巨噬细胞浸润；(g)抗体沉积；(h)胶质细胞损失；(i)少突胶质细胞损失；(j)树突细胞浸润；(k)嗜中性粒细胞浸润；(l)红血细胞溶解；(m)红血细胞吞噬作用；(n)血小板吞噬作用；(o)血小板溶解；(p)移植物排斥；(q)巨噬细胞介导的吞噬作用；(r)视力损失；(s)抗体介导的补体活化；(t)自身抗体介导的补体活化；(u)脱髓鞘；(v)嗜酸粒细胞增多。

在一些实施方案中，当主题抗C1s抗体以一个或多个剂量作为单一疗法或以组合疗法施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用抗C1s抗体治疗前个体中的结果的水平或程度相比，能够实现以下结果中的一种或多种改善至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或大于90％：a)认知功能；b)移植物存活率；c)视力；d)运动控制；e)血栓形成；f)凝血；g)肾功能；和h)血细胞比容(红血细胞计数)。

在一些实施方案中，向个体施用本公开的人源化抗C1s抗体降低所述个体中的补体活化。例如，在一些实施方案中，当主题抗C1s抗体以一个或多个剂量作为单一疗法或以组合疗法施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用抗C1s抗体治疗前个体中的补体活化相比，使所述个体中的补体活化降低至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或大于90％。

在一些实施方案中，施用本公开的人源化抗C1s抗体提高所述个体的认知功能。例如，在一些实施方案中，当主题抗C1s抗体以一个或多个剂量作为单一疗法或以组合疗法施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用抗C1s抗体治疗前个体的认知功能相比，使所述个体的认知功能提高至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或大于90％。

在一些实施方案中，施用本公开的人源化抗C1s抗体降低了所述个体中的认知功能下降速率。例如，在一些实施方案中，当主题抗C1s抗体以一个或多个剂量作为单一疗法或以组合疗法施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用抗C1s抗体治疗前个体中的认知功能下降速率相比，使所述个体中的认知功能下降速率降低至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或大于90％。

在一些实施方案中，向个体施用本公开的人源化抗C1s抗体降低了所述个体中的神经元损失。例如，在一些实施方案中，当主题抗C1s抗体以一个或多个剂量作为单一疗法或以组合疗法施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用抗C1s抗体治疗前个体中的神经元损失相比，使所述个体中的神经元损失降低至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或大于90％。

在一些实施方案中，向个体施用本公开的人源化抗C1s抗体降低了所述个体中的胶质细胞活化。例如，在一些实施方案中，当主题抗C1s抗体以一个或多个剂量作为单一疗法或以组合疗法施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用抗C1s抗体治疗前个体中的胶质细胞活化相比，使所述个体中的胶质细胞活化降低至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或大于90％。在一些实施方案中，所述胶质细胞是星形细胞或小胶质细胞。

在一些实施方案中，向个体施用本公开的人源化抗C1s抗体减少了所述个体中的淋巴细胞浸润。例如，在一些实施方案中，当主题抗C1s抗体以一个或多个剂量作为单一疗法或以组合疗法施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用抗C1s抗体治疗前个体中的淋巴细胞浸润相比，使所述个体中的淋巴细胞浸润减少至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或大于90％。

在一些实施方案中，向个体施用本公开的人源化抗C1s抗体减少了所述个体中的巨噬细胞浸润。例如，在一些实施方案中，当本公开的人源化抗C1s抗体以一个或多个剂量作为单一疗法或以组合疗法施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用抗C1s抗体治疗前个体中的巨噬细胞浸润相比，使所述个体中的巨噬细胞浸润减少至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或大于90％。

在一些实施方案中，向个体施用本公开的人源化抗C1s抗体减少了所述个体中的抗体沉积。例如，在一些实施方案中，当本公开的人源化抗C1s抗体以一个或多个剂量作为单一疗法或以组合疗法施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用抗C1s抗体治疗前个体中的抗体沉积相比，使所述个体中的抗体沉积减少至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或大于90％。

在一些实施方案中，向个体施用本公开的抗C1s抗体减少了所述个体中的过敏毒素(例如，C3a、C4a、C5a)生成。例如，在一些实施方案中，当本公开的人源化抗C1s抗体以一个或多个剂量作为单一疗法或以组合疗法施用给患有补体介导的疾病或病症的个体时，与用抗C1s抗体治疗前个体中的过敏毒素生成的水平相比，使所述个体中的过敏毒素生成减少至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或大于90％。

本公开提供了本公开的人源化抗C1s抗体或包含本公开的人源化抗C1s抗体和药学上可接受的赋形剂的药物组合物治疗患有补体介导的疾病或病症的个体的用途。在一些实施方案中，本公开提供了本公开的人源化抗C1s抗体治疗患有补体介导的疾病或病症的个体的用途。在一些实施方案中，本公开提供了包含本公开的人源化抗C1s抗体和药学上可接受的赋形剂的药物组合物治疗患有补体介导的疾病或病症的个体的用途。

本公开提供了本公开的人源化抗C1s抗体在生产用于治疗患有补体介导的疾病或病症的个体的药剂中的用途。

本公开提供了本公开的人源化抗C1s抗体或包含本公开的人源化抗C1s抗体和药学上可接受的赋形剂的药物组合物抑制补体活化的用途。在一些实施方案中，本公开提供了本公开的人源化抗C1s抗体或包含本公开的人源化抗C1s抗体和药学上可接受的赋形剂的药物组合物抑制患有补体介导的疾病或病症的个体中的补体活化的用途。在一些实施方案中，本公开提供了本公开的人源化抗C1s抗体抑制患有补体介导的疾病或病症的个体中的补体活化的用途。在一些实施方案中，本公开提供包含本公开的人源化抗C1s抗体和药学上可接受的赋形剂的药物组合物抑制患有补体介导的疾病或病症的个体中的补体活化的用途。

本公开提供了本公开的人源化抗C1s抗体在生产用于调节补体活化的药剂中的用途。在一些实施方案中，所述药剂抑制补体活化。在一些实施方案中，所述药剂抑制患有补体介导的疾病或病症的个体中的补体活化。

本公开提供了用于医学治疗中的本公开的人源化抗C1s抗体或包含本公开的人源化抗C1s抗体和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在一些实施方案中，本公开提供了用于医学治疗中的本公开的人源化抗C1s抗体。在一些实施方案中，本公开提供了用于医学治疗中的包含本公开的人源化抗C1s抗体和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。

本公开提供了用于治疗患有补体介导的疾病或病症的个体的本公开的人源化抗C1s抗体或包含本公开的人源化抗C1s抗体和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在一些实施方案中，本公开提供了用于治疗患有补体介导的疾病或病症的个体的本公开的人源化抗C1s抗体。在一些实施方案中，本公开提供了用于治疗患有补体介导的疾病或病症的个体的包含本公开的人源化抗C1s抗体和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。

本公开提供了用于调节补体活化的本公开的人源化抗C1s抗体或包含本公开的人源化抗C1s抗体和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在一些实施方案中，本公开提供了用于调节补体活化的本公开的人源化抗C1s抗体。在一些实施方案中，本公开提供了用于调节补体活化的包含本公开的人源化抗C1s抗体和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在一些实施方案中，所述抗C1s抗体抑制补体活化。

实施例

提出以下实施例以便向本领域普通技术人员提供关于如何做出和使用本发明的完全公开和描述，而所述实施例并非旨在限制被发明人视为其发明的范围，并且也并非旨在表示以下的实验是所进行的全部或唯一的实验。已作出努力来确保关于所用数字(例如，量、温度等)的精确性，但应考虑到一些实验误差和偏差。除非另外说明，否则份数是重量份数，分子量是重均分子量，温度是摄氏度，并且压力是大气压或接近大气压。可使用标准缩写，例如，bp，碱基对；kb，千碱基；pl，皮升；s或sec，秒；min，分钟；h或hr，小时；aa，氨基酸；kb，千碱基；bp，碱基对；nt，核苷酸；i.m.，肌肉内；i.p.，腹膜内；s.c.，皮下；等等。

实施例1：人源化TNT005变体

生成TNT005的人源化变体。还提供了人源化变体1-5的重链VH结构域的氨基酸序列；编码人源化变体的重链VH结构域的核苷酸序列。图6-8中示出了人源化变体1、2和5的轻链VL结构域的氨基酸序列，和编码人源化变体的轻链VL结构域的核苷酸序列。表2和3(分别为图9和10)中汇总了相对于TNT005的氨基酸序列(VL SEQ ID NO：7；VH SEQ ID NO：8)的氨基酸差异。

单字母氨基酸代码如下(括号中的是三字母氨基酸代码)：

G-甘氨酸(Gly)

P-脯氨酸(Pro)

A-丙氨酸(Ala)

V-缬氨酸(Val)

L-亮氨酸(Leu)

I-异亮氨酸(Ile)

M-甲硫氨酸(Met)

C-半胱氨酸(Cys)

F-苯丙氨酸(Phe)

Y-酪氨酸(Tyr)

W-色氨酸(Trp)

H-组氨酸(His)

K-赖氨酸(Lys)

R-精氨酸(Arg)

Q-谷氨酰胺(Gln)

N-天冬酰胺(Asn)

E-谷氨酸(Glu)

D-天冬氨酸(Asp)

S-丝氨酸(Ser)

T-苏氨酸(Thr)

实施例2：人源化TNT005变体的表征

表4和5(分别为图11和12)中提供了人源化TNT005变体的结合特征。表4(第一数据列)中提供了各种人源化TNT005变体对活化C1s的相对结合亲和力，其呈现于图11中。

产生全部15种组合(VH变体1+Vk变体1；VH变体1+Vk变体2；VH变体1+Vk变体5；VH变体2+Vk变体1；VH变体2+Vk变体2；VH变体2+Vk变体5；VH变体3+Vk变体1；VH变体3+Vk变体2；VH变体3+Vk变体5；VH变体4+Vk变体1；VH变体4+Vk变体2；VH变体4+Vk变体5；VH变体5+Vk变体1；VH变体5+Vk变体2；VH变体5+Vk变体5；)。测试每种人源化变体与生物素化TNT005竞争结合活性C1s的能力。数据示于图11第二数据列。

在测量补体经典途径(CP)活化的市售测定中测试每种人源化变体。结果示于图11第三数据列。数据显示，全部15种人源化变体以与TNT005类似的IC₅₀抑制CP活化。

对8种人源化TNT005变体进行结合亲和力的动力学表征。表5中描绘了数据，将其呈现于图12中。

实施例3：食蟹猴的体内研究

为评估人源化TNT005的药代动力学(PK)和药效学(PD)性质，在食蟹猴(食蟹猕猴(Macaca fascicularis))中进行人源化TNT005的单剂量和重复剂量研究。另外，为比较通过各种施用途径的人源化TNT005的生物利用率，通过血管内(IV)或皮下(SC)注射施用人源化TNT005变体。在人源化TNT005给药之后，在指定时间点取血浆和血清样品以测定人源化TNT005的循环浓度(PK)并评估人源化TNT005对经典补体途径(PD)的抑制。

所有研究动物均为雌性，体重介于2.4-3.9kg之间，并且介于3-5岁之间。另外，所有动物均未曾接受药物给药。

研究由两部分组成：

1)1期-单剂量研究，比较在通过静脉内(IV)施用的媒介物对照(未施用药物)、低剂量和高剂量组中与皮下(SC)施用的匹配高剂量人源化TNT005组中人源化TNT005的PK/PD；及

2)2期-多剂量(每天一次，持续7天)低剂量SC组。

1期研究设计由四组动物组成，其中三组用人源化TNT005给药(n＝4只动物/剂量组群)，而第四组用媒介物对照给药(磷酸盐缓冲盐水；n＝3只动物)。在外周静脉对IV给药的动物提供快速浓注，而在背部的肩胛间区施用SC注射。将第1组指定为对照组，并IV施用媒介物。第2组和第3组分别按10mg/kg和45mg/kg施用单个IV剂量的人源化TNT005。最后，第4组按45mg/kg施用单个SC剂量以直接与相应的IV组(第3组)比较SC生物利用率。表6汇总了1期研究设计。

表6

将全血分别收集在K₂EDTA管和血清分离管中用于血浆和血清处理，并立即储存在-15℃至-25℃。样品收集在根据表7描述的时间表用人源化TNT005或媒介物对照给药之前和之后进行。

表7

2期研究设计为评估SC施用的重复低剂量人源化TNT005的PK/PD关系。除1只动物来自低剂量IV组(第1组)外，2期动物挪用自1期对照组(n＝3)。2期的动物每天用4mg/kg人源化TNT005 SC给药，持续7天。在1期给药后57天对2期动物给药。表8汇总了2期研究设计。

表8

将全血分别收集在K₂EDTA管和血清分离管中用于血浆和血清处理，并立即储存在-15℃至-25℃。样品收集在根据表9描述的时间表用人源化TNT005给药之前和之后进行。

表9-2期全血收集时间表

结果

1期药代动力学和药效学

为评估1期中人源化TNT005的药代动力学特征，稀释在表7中指定时间点取得的血浆样品并进行ELISA以量化人源化TNT005血浆浓度。简言之，将稀释的血浆样品添加到预先涂有活化C1s的96孔板中。在血浆样品孵育和后续洗涤之后，添加对人IgG有特异性的辣根过氧化物酶缀合的检测抗体以检测C1s结合的人源化TNT005。最后，添加3，3′，5，5′-四甲基联苯胺(TMB)底物以引发比色反应，在分光光度计上对比色反应进行读数。通过从与血浆样品并行运行的人源化TNT005的标准曲线内插，为所有样品测定人源化TNT005血浆浓度。图14(第1-43天)和图15(第32-43天)中示出了研究1期的药代动力学分析结果。IV施用后，人源化TNT005的血浆PK特征展现出典型较高的Cmax，接着是剂量依赖性的清除。SC施用导致吸收期缓慢，导致与匹配的IV剂量组群相比总体较低的Cmax延迟。45mg/kg IV和SC剂量组中人源化TNT005的清除速率从72小时至研究结束相当。

图14描绘在1期(第1天-第43天)给药的食蟹猴中人源化TNT005的药代动力学(PK)特征。剂量组接受媒介物；10mg/kg(MPK)人源化TNT005 IV；45MPK人源化TNT005 IV；或45MPK人源化TNT005 SC。相对于给药后的时间标绘每个剂量组的平均人源化TNT005血浆浓度(n＝4只动物/人源化TNT005组群)。

图15描绘在1期(第32天-第43天)给药的食蟹猴中人源化TNT005的药代动力学特征。剂量组与图14相同。相对于给药后的时间标绘每个剂量组的平均人源化TNT005血浆浓度(n＝4只动物/人源化TNT005组群)。

使用经典补体途径试剂盒评估人源化TNT005的药效学效果。试剂盒可商购，并且涉及使用酶联免疫吸附测定(ELISA)，其设计用于通过在活体外激活样品的经典途径并测量该途径的最终分裂产物(C5b-9)的体外生成来估计血清样品中经典补体途径活性的强度。根据生产商的说明测定样品。简言之，稀释在表7所示时间点收集的来自猴子的血清样品并添加到提供的96孔板的孔中。孵育之后，添加对经典途径的最终分裂产物(C5b-9)有特异性的检测抗体并且在分光光度计上测量比色反应。比较单个猴子的所有样品并标准化为相同猴子给药前的样品(给药前＝100％活性)。图16示出了1期分组中药代动力学读数的结果。IV施用人源化TNT005导致两个剂量组在给药后经典途径立即受到近完全至完全抑制。经典途径活性的恢复是逐步的并且剂量依赖性的，45mg/kg剂量组群的动物比10mg/kg组群恢复更缓慢。按45mg/kg给药的IV和SC组对于途径活性而言显示出非常相似的恢复时间，与那些组的相似人源化TNT005药代动力学特征一致(图14)。

图16描绘来自在1期(第1天-第43天)给药的食蟹猴的血清样品的经典途径活性(PD读数)。剂量组接受媒介物；10mg/kg(MPK)人源化TNT005 IV；45MPK人源化TNT005 IV；或45MPK人源化TNT005 SC。相对于给药后的时间标绘每个剂量组的经典途径活性(标准化为给药前的活性；n＝4只动物/人源化TNT005组)。

2期药代动力学(PK)和药效学(PD)

以与1期描述的相同方式测定2期中的人源化TNT005药代动力学和药效学。图17示出了研究2期的药代动力学和药效学分析结果。SC施用低剂量人源化TNT005(4mg/kg)导致在给药的前24小时内的缓慢吸收期(图17，红色曲线，右侧y轴)。伴随血浆人源化TNT005浓度的升高，血清经典途径活性降低(图17，蓝色曲线，左侧y轴)。按4mg/kg每天重复给药导致血浆人源化TNT005逐渐增加并且到第7天使血清经典途径活性进一步降至给药前水平的10％(即-90％经典途径抑制)。

图17描绘在2期给药(4mg/kg每天SC施用，持续7天)的食蟹猴中人源化TNT005的PK/PD特征。对于2期(n＝4只动物)，相对于时间标绘平均人源化TNT005血浆浓度(右侧y轴)和平均血清经典途径活性(左侧y轴)。

虽然已参考本发明的特定实施方案对本发明进行了描述，但本领域技术人员应理解，在不背离本发明的真实精神和范围的情况下，可以作出各种改变并且可用等效物代替。另外，可作出许多修改以使特定情形、材料、物质组成、工艺、一个或多个步骤适于本发明的目的、精神和范围。所有这些修改旨在处于所附权利要求书的范围内。

Claims (37)

1.一种特异性结合补体组分C1s的人源化抗体，其中所述抗体包含：

a)包含以下氨基酸序列的VH区：

(Q/E)VQL(V/Q)QSGAE(V/L)KKPGASVK(L/V)SC(T/A)ASGFNIKDDYIHWV(K/R)QAPGQGLEWIGRIDPADGHTKYAPKFQVK(V/A)TITADTST(S/N)TAY(L/M)(E/Q)LSSL(R/T)SEDTAVYYCARYGYGREVFDYWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO：26)；和

b)包含以下氨基酸序列的VL区：

DIVLTQSPDSLAVSLGERATISCKASQSVDYDGDSYMNWYQQK(T/P)GQPPK(I/L)LIYDASNLESGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLE(E/P)EDFA(I/V)YYCQQSNEDPWTFGGGTKVEIK(SEQ IDNO：27)。

2.根据权利要求1所述的人源化抗体，其包含：

a)包含SEQ ID NO：10的VH区；和

b)包含SEQ ID NO：20的VL区。

3.根据权利要求1所述的人源化抗体，其包含：

a)包含SEQ ID NO：10的VH区；和

b)包含SEQ ID NO：22的VL区。

4.根据权利要求1所述的人源化抗体，其包含：

a)包含SEQ ID NO：10的VH区；和

b)包含SEQ ID NO：24的VL区。

5.根据权利要求1所述的人源化抗体，其包含：

a)包含SEQ ID NO：12的VH区；和

b)包含SEQ ID NO：20的VL区。

6.根据权利要求1所述的人源化抗体，其包含：

a)包含SEQ ID NO：12的VH区；和

b)包含SEQ ID NO：22的VL区。

7.根据权利要求1所述的人源化抗体，其包含：

a)包含SEQ ID NO：12的VH区；和

b)包含SEQ ID NO：24的VL区。

8.根据权利要求1所述的人源化抗体，其包含：

a)包含SEQ ID NO：14的VH区；和

b)包含SEQ ID NO：20的VL区。

9.根据权利要求1所述的人源化抗体，其包含：

a)包含SEQ ID NO：14的VH区；和

b)包含SEQ ID NO：22的VL区。

10.根据权利要求1所述的人源化抗体，其包含：

a)包含SEQ ID NO：14的VH区；和

b)包含SEQ ID NO：24的VL区。

11.根据权利要求1所述的人源化抗体，其包含：

a)包含SEQ ID NO：16的VH区；和

b)包含SEQ ID NO：20的VL区。

12.根据权利要求1所述的人源化抗体，其包含：

a)包含SEQ ID NO：16的VH区；和

b)包含SEQ ID NO：22的VL区。

13.根据权利要求1所述的人源化抗体，其包含：

a)包含SEQ ID NO：16的VH区；和

b)包含SEQ ID NO：24的VL区。

14.根据权利要求1所述的人源化抗体，其包含：

a)包含SEQ ID NO：18的VH区；和

b)包含SEQ ID NO：20的VL区。

15.根据权利要求1所述的人源化抗体，其包含：

a)包含SEQ ID NO：18的VH区；和

b)包含SEQ ID NO：22的VL区。

16.根据权利要求1所述的人源化抗体，其包含：

a)包含SEQ ID NO：18的VH区；和

b)包含SEQ ID NO：24的VL区。

17.根据权利要求1-16中任一项所述的人源化抗体，其中所述人源化抗体选自由Fab片段、F(ab’)2片段、scFv和Fv组成的组。

18.根据权利要求1-16中任一项所述的人源化抗体，其中所述人源化抗体包含同种型IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区。

19.一种组合物，其包含：

a)根据权利要求1-18中任一项所述的人源化抗体；和

b)药学上可接受的赋形剂。

20.根据权利要求19所述的组合物，其中所述组合物包含张度剂、助悬剂、乳化剂、稳定剂、防腐剂、冻干保护剂、表面活性剂和糖中的一种或多种。

21.一种容器，其包含根据权利要求19或权利要求20所述的组合物。

22.根据权利要求21所述的容器，其中所述容器是无菌的。

23.根据权利要求21或权利要求22所述的容器，其中所述容器为小瓶、瓶或注射器。

24.一种降低个体中补体组分裂解产物的水平的方法，所述方法包括按有效抑制C1s并降低所述裂解产物水平的量，向所述个体施用根据权利要求1-18中任一项所述的抗体，或根据权利要求19或20所述的组合物。

25.根据权利要求24所述的方法，其中所述补体组分裂解产物为C4裂解产物。

26.根据权利要求25所述的方法，其中所述补体组分裂解产物为C2裂解产物。

27.根据权利要求25所述的方法，其中所述补体组分裂解产物为C3裂解产物。

28.根据权利要求24-27中任一项所述的方法，其中所述个体为人。

29.根据权利要求24-28中任一项所述的方法，其中所述施用为静脉内。

30.根据权利要求24-28中任一项所述的方法，其中所述施用为肌肉内。

31.根据权利要求24-28中任一项所述的方法，其中所述施用为鞘内。

32.根据权利要求24-28中任一项所述的方法，其中所述施用为皮下。

33.根据权利要求24-28中任一项所述的方法，其中所述降低对治疗补体介导的病症有效。

34.根据权利要求33所述的方法，其中所述补体介导的病症为同种免疫病症。

35.根据权利要求33所述的方法，其中所述补体介导的病症为自身免疫病症。

36.一种抑制个体中C1s介导的补体组分裂解的方法，所述方法包括按有效抑制C1s介导的补体组分裂解的量，向所述个体施用根据权利要求1-18中任一项所述的抗体，或根据权利要求19或20所述的组合物。

37.一种治疗个体中补体介导的疾病或病症的方法，所述方法包括按有效治疗所述补体介导的疾病或病症的量，向所述个体施用根据权利要求1-18中任一项所述的抗体，或根据权利要求19或20所述的组合物。