CN108347940A - 微生物农药组合物和其制备 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于收获针对各种植物病原体表现出抗真菌活性和抗细菌活性的细菌的生物质和/或细菌产生的脂蛋白的方法。

Description

微生物农药组合物和其制备
本发明涉及一种用于收获针对各种植物病原体表现出抗真菌活性和抗细菌活性的细菌菌株的生物质(包括芽孢、细菌细胞)的新型和改进的方法。在一个具体的实施方案中，本发明提供了一种用于从芽孢杆菌培养基中收获所述生物质的方法，所述方法涉及酸处理。通过所述新型方法获得的生物质由于脂肽的含量而表现出惊人高的抗真菌活性。
背景技术
在用于生物防治的微生物中，芽孢杆菌属菌种(Bacillus sp.)的细菌由于它们产生的抗生素化合物种类繁多、它们的保存期长、它们在培养物中的快速生长、以及它们能够定殖叶面的能力而已经受到许多关注[1,2,3,4]。具体来说，芽孢杆菌属的某些菌种，如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、蕈状芽孢杆菌(Bacillus mycoides)、环状芽孢杆菌(Bacillus circulans)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)、莫哈韦芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)、以及苏云金芽孢杆菌(Bacillusthurigiensis)显示出抗微生物活性。
这些细菌的抗微生物活性是因为它们能够产生脂肽，例如表面活性素、伊枯草菌素、以及丰原素家族的脂肽，它们在氨基酸序列和脂肪酸链的分支方面不同。表面活性素表现出高度的抗细菌活性，而伊枯草菌素和丰原素的抗真菌活性是公认的[4]。
现有技术描述了使用枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌来防治多种作物中的各种致病微生物，包括水果作物和蔬菜作物，如黑莓、葡萄、覆盆子、草莓、番茄、黄瓜、黑胡椒、橙子、甜瓜、苹果、桃、番荔枝、香蕉、番木瓜、芒果、以及猕猴桃。EP2311936公开了作为生物防治剂对抗蔓生作物中的几种植物病原微生物的枯草芽孢杆菌菌株KS1(NITE BP-569)。WO98/21968公开了有效对抗细菌感染和真菌感染的由枯草芽孢杆菌AQ153(ATCC 55614)产生的抗生素以及包括施用这些抗生素化合物的用于保护植物的方法。
WO9850422、WO9909819、以及WO0029426公开了由枯草芽孢杆菌菌株AQ713(等同于菌株QST713，作为NRRL B-21661被保藏)和它的突变体产生的抗生素化合物，其表现出杀虫、杀线虫、抗真菌、以及抗细菌活性。US2011/0318386描述了经由使用芽孢杆菌属的生物防治剂，特别是分离的莫哈韦芽孢杆菌203-7和分离的蕈状芽孢杆菌菌种的生物防治剂来诱导针对各种病原体的系统抗性的方法。进而，ES 2345969描述了用于向香蕉和大蕉假茎施用的植物强化剂，它包括枯草芽孢杆菌、绿色木霉(Trichoderma viride)、以及巨大芽孢杆菌解磷变种(B.megaterium var phosphaticum)。
WO14178032公开了一种用于增加芽孢杆菌属的微生物的生物质的产生的方法，包括枯草芽孢杆菌EA-CB0015和解淀粉芽孢杆菌EA-CB0959。可以使用离心或微滤的常规方法从培养基中分离通过所述方法获得的生物质，而可以通过用溶剂提取、沉淀、吸附或色谱法来获得活性代谢产物。在所述发明的一个优选的实施方案中，所获得的芽孢杆菌属菌种的微生物的生物质的量可以在3.0g/L至20.0g/L的范围内。
在从培养基中收获之后分离的生物质(细胞和芽孢)的杀真菌活性从商业角度来看不令人满意，并且因此，本发明的目的是提供一种用于收获生物质的改进的方法。本申请的发明人已经揭示，修改生物质收获期间的条件惊人地增加了所收获的生物质的杀真菌活性。
US5470827公开了伊枯草菌素A可以通过用溶剂提取来从培养基中收获，或可选择地，可以将培养基经由滤膜过滤等。如果需要的话，可以使培养基与活性炭、粉状纤维素、吸附树脂或类似载体接触，以使所产生的伊枯草菌素A吸附到所述载体上，并且之后，可以通过洗脱将产物从其解吸。
活性代谢产物的收率从商业角度来看不令人满意，并且因此，本发明的目的是提供一种用于收获代谢产物，特别是脂蛋白和/或糖脂的改进的方法。
发明内容
已经惊人地证实，可以通过一种新型方法从培养基中收获来获得改进的生物质，所述方法涉及酸处理。与在没有对培养基进行酸处理的情况下所获得的比较生物质相比，所述生物质具有出人意料的更高的抗真菌活性。
因此，本发明的一个方面涉及一种用于从细菌(例如芽孢杆菌)培养基(通过在生长培养基中培养细菌菌株所获得的用过的培养基)中收获生物质的方法，所述方法包括将所述培养基酸化，优选地在所述细菌培养物已经形成芽孢之后。
所收获的生物质富含生物表面活性剂，特别是丰原素，并且优选地含有大量的菌落形成单位(活细胞和/或芽孢)。在最优选的实施方案中，执行本发明的方法而不使用任何(有机)溶剂或油来提取生物表面活性剂。
如果需要的话，将所收获的生物质干燥和/或重悬在农业上可接受的液体中。
此外，本申请的发明人已经惊人地发现，可以通过吸附在例如硅藻土(也被称为硅藻土(kieselguhr))上来从培养基中收获代谢产物。据考虑，其它地质聚合物(天然存在或合成制备)或类似材料适用作吸附剂。术语地质聚合物在本发明的背景下应当被宽泛地理解，并且涵盖生物矿物和地质矿物等。
因此，本发明的一个方面涉及一种用于从细菌(例如芽孢杆菌)培养上清液或培养基(通过在生长培养基中培养/繁殖细菌菌株所获得，任选地，通过离心和/或过滤将所述上清液与所述生物质分离)中收获代谢产物(特别是脂肽或糖脂)的方法，所述方法包括添加地质聚合物，例如硅藻土，优选地以对应于负载能力的量。用过的培养基(或上清液)中脂肽/糖脂(例如表面活性素、伊枯草菌素以及丰原素家族的脂肽/糖脂)的浓度根据用于发酵的菌株而变化。本领域技术人员知道如何优化待添加的地质聚合物，例如硅藻土的量，例如可以借助于对培养基/上清液进行HPLC分析来计算待吸附的脂肽/糖脂的量。硅藻土的负载能力预期是每毫升培养基(或培养上清液)0.02g-0.3g硅藻土。
优选地将上清液或培养基与地质聚合物，例如硅藻土材料的混合物在室温下孵育，和/或孵育1/2h-3h(小时)和/或在25rpm下孵育和/或在pH 4-10范围的适当pH值下孵育。优选的是，在发酵结束之后调节pH值，但是也可以在发酵期间调节pH值。
在孵育结束之后，使用离心和/或过滤，如死端过滤来分离地质聚合物，例如硅藻土和任何剩余的生物质。
如果需要的话，将由离心和/或过滤产生的产物(含有吸附有脂蛋白/糖脂的地质聚合物，例如硅藻土以及任选的生物质)重悬在农业上可接受的液体中。
或者，当使用过滤时，可以添加地质聚合物，例如硅藻土的全部或一部分作为助滤剂以使它可以在过滤步骤期间吸附代谢产物。
用于本发明的方法中的细菌菌株应当能够产生商业相关量的抗真菌代谢产物，合适的菌株的实例是：解淀粉芽孢杆菌菌株HSCC 124(FERM BP-4758)或IAM 1523(参见US5470827)；枯草芽孢杆菌菌株KS1(NITE BP-569)(参见EP2311936)以及枯草芽孢杆菌菌株AQ153(ATCC55614)(参见WO9821968)。其它相关菌株从文献中获知，例如本说明书中所提到的文献。
具体实施方式
在第一个方面，本发明涉及一种用于从培养基中收获生物质(细菌细胞和/或芽孢)的方法，所述方法涉及降低所述培养基的pH值，例如降低到低于6.0的pH值。
该第一个方面的目前优选的实施方案是：
实施方案A：一种用于收获具有杀真菌活性的生物质(细菌细胞和/或芽孢)的方法，所述方法是通过以下步骤实现的：
a)通过在生长培养基中在6.5至10.0范围的pH值下繁殖产生脂蛋白和/或糖脂的细菌菌株来获得培养基；
b)将所述培养基的pH值降低到低于6.5(如低于6.4、或在2.1至6.4的范围、在2.5至5.9的范围、在3.0至5.4的范围、在3.0至5.0的范围、在3.0至4.5的范围、或在3.5至4.5的范围)，例如通过添加酸来降低；
c)任选地在步骤b)之前、期间或之后，添加地质聚合物；以及
d)从所述培养基中分离所述生物质，例如通过离心或过滤。
实施方案B：一种用于收获具有杀真菌活性的生物质(细菌细胞和/或芽孢)的方法，所述方法是通过以下步骤实现的：
a)通过在生长培养基中在6.0至9.0范围的pH值下繁殖产生脂蛋白和/或糖脂的细菌菌株来获得培养基；
b)将所述培养基的pH值降低到低于6.0(如低于5.9、或在2.1至5.9的范围、在2.5至5.9的范围、在3.0至5.0的范围、在3.0至4.5的范围、或在3.5至4.5的范围)，例如通过添加酸来降低；
c)任选地在步骤b)之前、期间或之后，添加地质聚合物；以及
d)从所述培养基中分离所述生物质，例如通过离心或过滤。
实施方案C：一种用于收获具有杀真菌活性的生物质(细菌细胞和/或芽孢)的方法，所述方法是通过以下步骤实现的：
a)通过在生长培养基中在5.5至9.0范围的pH值下繁殖产生脂蛋白和/或糖脂的细菌菌株来获得培养基；
b)将所述培养基的pH值降低到低于5.5(如低于5.4、或在2.1至5.4的范围、在2.5至5.4的范围、在3.0至5.0的范围、在3.0至4.5的范围、或在3.5至4.5的范围)，例如通过添加酸来降低；
c)任选地在步骤b)之前、期间或之后，添加地质聚合物；以及
d)从所述培养基中分离所述生物质，例如通过离心或过滤。
实施方案D：一种用于收获具有杀真菌活性的生物质(细菌细胞和/或芽孢)的方法，所述方法是通过以下步骤实现的：
a)通过在生长培养基中在5.6至7.4范围的pH值下繁殖产生脂蛋白和/或糖脂的细菌菌株来获得培养基；
b)将所述培养基的pH值降低到低于5.5(如低于5.4、或在2.1至5.5的范围、在2.5至5.4的范围、在3.0至5.0的范围、在3.0至4.5的范围、或在3.5至4.5的范围)，例如通过添加酸来降低；
c)任选地在步骤b)之前、期间或之后，添加地质聚合物；以及
d)从所述培养基中分离所述生物质，例如通过离心或过滤。
实施方案E：一种用于收获具有杀真菌活性的生物质(细菌细胞和/或芽孢)的方法，所述方法是通过以下步骤实现的：
a)通过在生长培养基中在5.7至9.0范围的pH值下繁殖产生脂蛋白和/或糖脂的细菌菌株来获得培养基；
b)确保所述培养基的pH值在2.5至5.5的范围(如在3.0至5.0的范围、在3.0至4.5的范围、或在3.5至4.5的范围)，例如通过添加酸来实现；
c)任选地在步骤b)之前、期间或之后，添加地质聚合物；以及
d)从所述培养基中分离所述生物质，例如通过离心或过滤。
实施方案F：一种用于收获具有杀真菌活性的生物质(细菌细胞和/或芽孢)的方法，所述方法是通过以下步骤实现的：
a)通过在生长培养基中繁殖产生脂蛋白和/或糖脂的细菌菌株来获得培养基；
b)确保所述培养基的pH值在2.5至5.5的范围(如在3.0至5.0的范围、在3.0至4.7的范围、或在3.5至4.5的范围)，例如通过添加酸来实现(确保被理解成如果需要的话，将pH值降低到指定值)；
c)任选地在步骤b)之前、期间或之后添加地质聚合物；
d)从所述培养基中分离所述生物质，例如通过离心或过滤；
e)任选地将赋形剂(如载体或保护剂)添加到所述生物质中；和/或任选地将pH值调节到5.5至8.0范围的pH值；以及
f)任选地将所述生物质干燥，例如喷雾干燥、冷冻干燥或真空干燥。
实施方案G：一种用于收获具有杀真菌活性的生物质(细菌细胞和/或芽孢)的方法，所述方法是通过以下步骤实现的：
a)提供通过在生长培养基中繁殖产生脂蛋白和/或糖脂的细菌菌株所获得的培养基，所述培养基具有高于5.7的pH值；
b)将所述培养基的pH值降低到2.5至5.5范围(如3.0至5.0的范围、3.0至4.7的范围、或3.5至4.5的范围)的pH值，例如通过添加酸来降低；
c)任选地在步骤b)之前、期间或之后添加地质聚合物；
d)从所述培养基中分离所述生物质，例如通过离心或过滤；
e)任选地将赋形剂(如载体或保护剂)添加到所述生物质中；和/或任选地将pH值调节到5.5至8.0范围的pH值；以及
f)任选地将所述生物质干燥，例如喷雾干燥、冷冻干燥或真空干燥。
实施方案H：一种用于获得具有杀真菌活性的生物质(细菌细胞和/或芽孢)的方法，所述方法是通过以下步骤实现的：
a)提供通过在生长培养基中繁殖产生脂蛋白和/或糖脂的细菌菌株所获得的培养基，所述培养基具有2.5至6.5的范围(如4.0至6.0的范围、4.5至6.0的范围、3.0至5.0的范围、3.0至4.7的范围、或3.5至4.5的范围)的pH值；
b)任选地在步骤b)之前、期间或之后添加地质聚合物；
c)从所述培养基中分离所述生物质，例如通过离心或过滤；
d)任选地将赋形剂(如载体或保护剂)添加到所述生物质中；和/或任选地将pH值调节到5.5至8.0范围的pH值；以及
e)任选地将所述生物质干燥，例如喷雾干燥、冷冻干燥或真空干燥。
根据本发明的上述方法中的任一种(实施方案A至实施方案H)的更优选的实施方案是：
-这样的方法，其中a)中所述培养基的pH值高于5.7，如在5.7至9的范围、在6.0至9.0的范围、或在6.5至8的范围的方法。目前优选的是，所述pH值在所述指定范围内保持至少1小时，如至少2小时、至少4小时、至少10小时或至少24小时。
-这样的方法，其中a)中的所述培养基包含每升培养基至少5g生物质，如至少7g/L或至少10g/L。
-这样的方法，其中a)中的所述培养基包含每升培养基至少200mg代谢产物，如至少400mg/L或至少600mg/L的方法。
-一种用于收获具有杀真菌活性的生物质(细菌细胞和/或芽孢)的方法，所述方法是通过以下步骤实现的：
a)获得培养基，所述培养基含有至少5g/L的芽孢杆菌属细菌的生物质、以及至少200mg/L的表面活性素、伊枯草菌素、制磷脂菌素(plipastatin)、节活性素(arthrofactin)、沙雷维婷(serrawettin)、或丰原素家族的代谢产物，优选地具有5.6至7.4范围的pH值；
b)将所述培养基的pH值降低(如果需要的话)到低于5.5(如低于5.4、或在2.1至5.5的范围、在2.5至5.4的范围、在3.0至5.0的范围、在3.0至4.5的范围、或在3.5至4.5的范围)，例如通过添加酸来降低；
c)任选地在步骤b)之前、期间或之后，添加地质聚合物；以及
d)从所述培养基中分离所述生物质，例如通过离心或过滤。
-这样的方法，其中步骤b)中的pH值低于5.7，如在2.0至5.6的范围、在3.0至5.5的范围、在3.5至5.5的范围、在4.0至5.3的范围、在4.0至5.0的范围、或在4.5至5.0的范围。目前优选的是，所述pH值在所述指定范围内保持至少10分钟，如至少20分钟、至少30分钟、或至少60分钟。
-这样的方法，其中步骤b)中的pH值在4.0至5.0的范围、或在4.5至5.0的范围。目前优选的是，所述pH值在所述指定范围内保持至少10分钟，如至少20分钟、至少30分钟、或至少60分钟。
-这样的方法，其中所述地质聚合物选自由以下各项组成的组：硅藻岩、硅藻土、高岭土、陶土、膨润土、滑石、火山灰、火山岩、粘土、木质素、钻井泥浆、硅藻土、合成二氧化硅、表面处理的硅藻土、以及金属硅酸盐。令人关注的地质聚合物是硅藻土或表面处理的硅藻土。优选的是，所述地质聚合物是以每毫升脂蛋白和/或糖脂的液体悬浮液或溶液0.02g至0.3g的量使用的。
-这样的方法，其中所述细菌菌株属于芽孢杆菌属菌种，如枯草芽孢杆菌或解淀粉芽孢杆菌，如选自由以下各项组成的组的菌株的方法：解淀粉芽孢杆菌菌株HSCC 124(FERMBP-4758)或IAM 1523、枯草芽孢杆菌菌株KS1(NITE BP-569)和AQ153(ATCC55614)。令人关注的细菌菌株是选自由以下各项组成的组的菌株：解淀粉芽孢杆菌菌株HSCC 124(FERMBP-4758)或IAM 1523、枯草芽孢杆菌菌株KS1(NITE BP-569)和AQ153(ATCC55614)。
-这样的方法，其中所述脂蛋白和/或所述糖脂选自由以下各项组成的组的方法：表面活性素、伊枯草菌素、制磷脂菌素、节活性素、沙雷维婷、以及丰原素或这些中的任一种的衍生物。
在第二个方面，本发明涉及一种用于从液体悬浮液或溶液(所述悬浮液或溶液含有脂蛋白或糖脂)中收获脂蛋白和/或糖脂的方法，所述方法是通过包括以下步骤的方法实现的：
a)使地质聚合物与所述液体悬浮液或溶液接触；以及
b)允许所述地质聚合物吸附(或结合)所述脂蛋白或糖脂；以及
c)将所述地质聚合物与所述液体分离；以及
d)任选地从所述地质聚合物中分离所述脂蛋白或糖脂，例如将所述脂蛋白和/或糖脂解吸。
第二个方面的一个实施方案涉及一种用于从液体(所述液体含有脂蛋白或糖脂)中收获脂蛋白和/或糖脂的方法，所述方法是通过包括以下步骤的方法实现的：
a)使地质聚合物与所述液体接触；以及
b)允许所述地质聚合物吸附(或结合)所述脂蛋白或糖脂；以及
c)将所述地质聚合物与所述液体分离；以及
d)任选地从所述地质聚合物中分离所述脂蛋白或糖脂，例如将所述脂蛋白和/或糖脂解吸。
在第二个方面的一个令人关注的实施方案中，涉及其中通过以下步骤获得所述液体悬浮液或溶液的方法：
i)将细菌菌株(其能够产生脂蛋白和/或糖脂)培养在合适的液体生长培养基中，从而获得脂蛋白和/或糖脂的液体悬浮液或溶液；以及
ii)任选地从所述悬浮液或溶液中去除细菌细胞；以及
iii)任选地破坏所述细菌细胞。
第二个方面的另一个令人关注的实施方案是一种用于制备包含脂蛋白和/或糖脂的干组合物的方法，所述方法是通过包括以下步骤的方法实现的：
i)将细菌菌株(其能够产生脂蛋白和/或糖脂)培养在合适的液体生长培养基中，从而获得脂蛋白和/或糖脂的液体悬浮液或溶液；以及
ii)任选地从所述悬浮液或溶液中去除细菌细胞；以及
ii)任选地破坏所述细菌细胞；以及
a)使地质聚合物与所述悬浮液或溶液接触；以及
b)允许所述地质聚合物吸附所述脂蛋白或糖脂；以及
c)将所述地质聚合物与所述液体悬浮液或溶液分离；以及
d)任选地从所述地质聚合物中分离所述脂蛋白和/或糖脂，例如将所述脂蛋白和/或糖脂解吸；以及
e)任选地将赋形剂(如载体或保护剂)添加到含有脂蛋白/糖脂的级分中；以及
f)将含有脂蛋白和/或糖脂的级分干燥，例如喷雾干燥、冷冻干燥或真空干燥。
作为吸附剂，目前优选的是地质聚合物，选自由以下各项组成的组：生物矿物、地质矿物、硅藻岩、硅藻土、高岭土、陶土、膨润土、滑石、火山灰、火山岩、粘土、木质素、钻井泥浆、硅藻土、表面处理的硅藻土、合成二氧化硅、以及金属硅酸盐。目前优选的吸附剂是生物矿物。目前最优选的地质聚合物是硅藻土(例如表面处理的或活化的，例如通过热处理)。
所述地质聚合物通常是以每毫升脂蛋白和/或糖脂的液体悬浮液或溶液0.02g至0.3g的量使用的，但是据考虑，可以使用其它量，例如0.005g/ml至0.02g/ml、或高于0.3g/ml，这取决于所述溶液或悬浮液中代谢产物的量以及所述地质聚合物。目前优选的是，使用生物矿物作为吸附剂，并且更优选地是硅藻土。如果使用生物矿物，那么目前优选的量是在0.02g/ml-0.2g/ml的范围，或更优选地，在0.04g/ml至0.1g/ml的范围。
方法步骤a、b、c以及d可以在0℃至50℃的范围的温度下进行，如5℃至30℃或15℃至25℃的范围，但是目前优选的是，所述方法在环境温度(约20℃)下进行。为了加速所述方法，允许所述地质聚合物吸附所述脂蛋白或糖脂的步骤(即孵育步骤)优选地包括搅拌所述液体，例如以25rpm或更快搅拌所述液体。pH值可以由本领域技术人员优化，目前优选的是，在与所述地质聚合物接触之前或期间调节所述液体的pH值，如达到4至10范围的pH值。
第二个方面的其它令人关注的实施方案是：
-其中所述吸附步骤b)是在3至10的范围，如3.5至7的范围，或优选地4至5.5的范围的pH值下进行的方法。
-其中吸附步骤b)是在0℃至50℃的范围，如5℃至40℃的范围或优选地10℃至30℃的范围的温度下进行的方法。
-其中吸附步骤b)进行0.1小时至24小时的范围的时间段，如0.5小时至10小时的范围，或优选地1小时至4小时的范围的时间段的方法。
-其中步骤d)(如果存在的话)在3至10的范围的pH值下进行，如3.5至7的范围，或优选地4至5.5的范围的pH值下进行的方法。
-其中步骤d)(如果存在的话)在0℃至50℃的范围，如5℃至40℃的范围或优选地10℃至30℃的范围的温度下进行的方法。
-其中步骤d)进行0.1小时至24小时的范围的时间段，如0.5小时至10小时的范围，或优选地1小时至4小时的范围的时间段的方法。
-其中所述地质聚合物是生物矿物，如硅藻土的方法。
-其中所述地质聚合物是地质矿物，如珍珠岩的方法。
-其中所述地质聚合物呈粉末形式的方法。
-其中所述脂蛋白和/或糖脂是脂肽的方法。
-其中所述脂蛋白和/或糖脂是表面活性素的方法。
-其中所述脂蛋白和/或糖脂是伊枯草菌素的方法。
-其中所述脂蛋白和/或糖脂是丰原素的方法。
-其中所述脂蛋白和/或糖脂是包含表面活性素、伊枯草菌素、以及丰原素家族的脂肽的混合物的方法。
所述方法可以用于从任何液体收获脂肽/糖脂，但是优选的是，液体是通过用微生物，如细菌的菌株使生长培养基发酵所获得的发酵液或上清液。目前优选的是，所述细菌菌株属于芽孢杆菌属菌种，如枯草芽孢杆菌或解淀粉芽孢杆菌。菌株的实例是选自由以下各项组成的组的菌株：解淀粉芽孢杆菌菌株HSCC 124(FERM BP-4758)或IAM 1523、或枯草芽孢杆菌菌株KS1(NITE BP-569)或AQ153(ATCC55614)。令人关注的菌株是QST713(NRRL B-21661)。
在所述方法的一个具体实施方案中，所述脂蛋白和/或所述糖脂选自由以下各项组成的组：表面活性素、伊枯草菌素、制磷脂菌素、节活性素、沙雷维婷、盖吉四烯菌素(gageotetrin)(A、B或C)、盖吉抑制素(gageostatin)(A、B或C)、以及丰原素或这些中的任一种的衍生物。目前最令人关注的脂蛋白是表面活性素、伊枯草菌素、以及丰原素家族的脂蛋白。如果所述脂蛋白和/或所述糖脂存在于细胞内，那么可以破坏所述细胞，例如机械、超声波、化学或酶促破坏。
第二个方面包括以下实施方案：
实施方案1：一种用于从液体悬浮液或溶液中收获表面活性素、伊枯草菌素、以及丰原素家族的脂肽的方法，所述方法是通过包括以下步骤的方法实现的：
a)使生物矿物(如硅藻土)与所述液体悬浮液或溶液，如芽孢杆菌培养基接触；以及
b)允许所述生物矿物吸附(或结合)所述脂肽；以及
c)将所述生物矿物与所述液体分离；以及
d)任选地从所述生物矿物中分离所述脂肽，例如将所述脂肽解吸。
在该方法中，吸附步骤b)优选地在3至10的范围的pH值下进行，如3.5至7的范围、4至9的范围、5至8的范围、或4至5.5的范围。目前最优选的是，在所述培养基的pH值下吸附，所述pH值通常在5.5至7的范围。
实施方案2：一种用于从液体悬浮液或溶液中收获表面活性素、伊枯草菌素、以及丰原素家族的脂肽的方法，所述方法是通过包括以下步骤的方法实现的：
a)使地质矿物(如珍珠岩)与所述液体悬浮液或溶液，如芽孢杆菌培养基接触；以及
b)允许所述地质矿物吸附(或结合)所述脂肽；以及
c)将所述地质矿物与所述液体分离；以及
d)任选地从所述地质矿物中分离所述脂肽，例如将所述脂肽解吸。
在该方法中，吸附步骤b)优选地在3至10的范围的pH值下进行，如3.5至7的范围、4至7的范围、5至7的范围、或4至5.5的范围。
目前最优选的是，在所述培养基的pH值下吸附，所述pH值通常在5.5至7的范围。
应当了解的是，本发明的第一个方面和第二个方面可以组合，例如第二个方面的方法可以对在第一个方面的方法期间产生的任何悬浮液或溶液，如在收获所述生物质/芽孢材料之后的上清液进行。
本发明的第三个方面涉及一种组合物，所述组合物能通过本发明的第二个方面的方法获得的。这样的组合物可能基本上由地质聚合物与脂蛋白和/或糖脂的组合组成。
一个令人关注的实施方案是一种组合物，所述组合物包含地质聚合物；以及脂蛋白和/或糖脂，其中所述脂蛋白和/或糖脂的至少10％，如至少30％或至少50％(w/w)被吸附(或结合)到所述地质聚合物的表面。
根据上述方面的特别令人关注的组合物是：
-其中所述地质聚合物是生物矿物，如硅藻土的组合物。
-其中所述地质聚合物是地质矿物，如珍珠岩的组合物。
-其中所述地质聚合物呈粉末形式的组合物。
-其中所述脂蛋白和/或糖脂是脂肽的组合物。
-其中所述脂蛋白和/或糖脂是表面活性素的组合物。
-其中所述脂蛋白和/或糖脂是伊枯草菌素的组合物。
-其中所述脂蛋白和/或糖脂是丰原素的组合物。
-其中所述脂蛋白和/或糖脂是包含表面活性素、伊枯草菌素、以及丰原素家族的脂肽的混合物的组合物。
如果根据本发明的方法指定pH值范围，那么目前优选的是，所述pH值在所述指定范围内保持至少10分钟，如至少20分钟、至少30分钟、或至少60分钟。
本发明的第四个方面涉及地质聚合物用作脂蛋白或糖脂的吸附剂的用途、或地质聚合物用于从培养基中收获脂蛋白或糖脂的用途。
本发明的第五个方面涉及地质聚合物作为用于收获生物质的助剂用于收获生物质的用途，例如在对培养基进行酸调节之后收获芽孢的方法中。
任何用途方面的令人关注的实施方案是：
-其中所述地质聚合物是生物矿物，如硅藻土的用途。
-其中所述地质聚合物是地质矿物，如珍珠岩的用途。
-其中所述地质聚合物呈粉末形式的用途。
-其中所述培养基含有脂蛋白和/或糖脂的用途。
-其中所述脂蛋白和/或糖脂是脂肽的用途。
-其中所述脂蛋白和/或糖脂是表面活性素的用途。
-其中所述脂蛋白和/或糖脂是伊枯草菌素的用途。
-其中所述脂蛋白和/或糖脂是丰原素的用途。
-其中所述脂蛋白和/或糖脂是包含表面活性素、伊枯草菌素、以及丰原素家族的脂肽的混合物的用途。
本发明的第六个方面涉及一种可通过本发明的第一个方面的方法获得的组合物，如包含枯草芽孢杆菌芽孢的组合物、包含解淀粉芽孢杆菌芽孢、和/或地质聚合物和芽孢杆菌芽孢的组合物。所述组合物可能作为液体悬浮液或作为粉剂施用于植物。本发明的组合物可能包含赋形剂，如地质聚合物。
定义
在本发明的背景下，术语地质聚合物包括地质矿物、生物矿物、地质来源或生物来源的矿物、沉积岩材料(例如粉末)以及硅基聚合物。地质聚合物的实例在WO2015024672A1中给出。目前优选的地质聚合物是硅藻土、硅藻岩、硅藻土、高岭土(陶土)、膨润土、滑石、火山灰、火山岩、粘土、珍珠岩、木质素、钻井泥浆、硅藻土(diatomic earth)、合成二氧化硅等，所述材料任选地被改性，例如经过化学品或热处理。所述术语涵盖干燥材料和湿材料这两者。所述地质聚合物优选地作为粉末使用。如果需要的话，可以将地质聚合物研磨以获得颗粒(或粉末)。地质聚合物颗粒的尺寸可以根据地质聚合物和/或所选择的用于将所述颗粒与用过的培养基或上清液分离的方法和/或所得产物的预期用途而变化。目前优选的是，粒度在3微米至大于1毫米的范围，更优选在10微米至200微米的范围。
在本发明的背景下，术语脂蛋白包括脂肽。所述术语可以与生物表面活性剂互换使用。脂肽可以源自于例如枯草芽孢杆菌或解淀粉芽孢杆菌的产生脂肽的菌株。它可以是伊枯草菌素型化合物、表面活性素型化合物、丰原素型化合物、或其组合。在一个实施方案中，所述脂肽是伊枯草菌素型化合物、表面活性素型化合物、以及丰原素型化合物的组合。在其它实施方案中，所述脂肽是伊枯草菌素型化合物和表面活性素型化合物的组合；伊枯草菌素型化合物和丰原素型化合物的组合；或表面活性素型化合物和丰原素型化合物的组合。在一些实施方案中，在例如枯草芽孢杆菌或解淀粉芽孢杆菌的菌株的生物质中上述脂肽的总浓度是至少1mg/g、至少2mg/g、至少3mg/g、至少4mg/g、至少5mg/g、至少6mg/g、至少7mg/g、至少8mg/g、至少9mg/g、至少10mg/g、至少11mg/g、至少12mg/g、至少13mg/g、至少14mg/g、或至少15mg/g。在一个实施方案中，所述脂肽是伊枯草菌素型化合物。所述伊枯草菌素型化合物可以是芽孢菌霉素D、芽孢菌霉素F、芽孢菌霉素L、芽孢菌霉素LC(芽孢菌肽素(bacillopeptin))、抗霉枯草菌素、伊枯草菌素A、伊枯草菌素AL、或伊枯草菌素C。在另一个实施方案中，所述脂肽是丰原素型化合物。所述丰原素型化合物可以是丰原素A、丰原素B、制磷脂菌素A、制磷脂菌素B、或阿瓜斯他汀(agrastatin)。在又另一个实施方案中，所述脂肽是表面活性素型化合物。所述表面活性素型化合物可以是埃斯波素(esperin)、地衣素(lichenysin)、帕米拉素(pumilacidin)、或表面活性素。
除非在本文中另外指明或与上下文明显矛盾，否则在描述本发明的上下文中(特别是在以下权利要求书的上下文中)术语“a/an(一)”和“所述”以及类似的指代对象的使用应当被理解为包括单数和复数这两种形式。除非另外指出，否则术语“包含”、“具有”、“包括”以及“含有”应当被理解为开放式术语(即，意指“包括但不限于”)。除非在本文中另外指明，否则在本文中对值的范围的叙述仅意图用作单独提及落入该范围内的每一个单独的值的简写方法，并且每一个单独的值被并入到本说明书中，如同它在本文中被单独叙述一般。除非本文另外指明或另外与上下文明显矛盾，否则本文所述的所有方法均可以按照任何合适的顺序进行。除非另外要求保护，否则本文提供的任何和所有实例或示例性语言(例如“如”)的使用仅意图更好地阐明本发明而不对本发明的范围构成限制。本说明书中的任何语言不应当被理解成将任何未要求保护的要素指示为对实施本发明来说是必要的。
实施例
实施例1：获得枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌的生物质
基本上如[6]中所公开来培养芽孢杆菌属菌株。更确切地说，将枯草芽孢杆菌菌株接种在典型的生长培养基(以w/v百分比计包含4％的葡萄糖、4％的酵母提取物、0.004％的硫酸锰、0.003％的氯化钙、0.1％的硫酸铵、0.4％的硫酸镁、0.05％的磷酸氢二钠以及0.05％的磷酸氢二钾)中。在轨道摇床中，在30℃的温度和200rpm下，在容纳100mL培养基的500mL烧瓶中进行发酵。将每一个锥形瓶用10mL细菌悬浮液接种。在pH 7.5使枯草芽孢杆菌培养物发酵。
实施例2：从芽孢杆菌属菌株中收获高活性生物质
在发酵结束之后，将在实施例1中所获得的培养基的pH值从pH 7.5调节到pH 5.5。在室温下将培养基平缓搅拌(约50rpm)1小时。在搅拌结束之后，通过过滤分离生物质。将分离的生物质收集在适当的烧杯中并且将pH值调节到pH 7.2。将pH值调节的生物质以50rpm平缓搅拌1小时，之后冷冻干燥。
实施例3：从芽孢杆菌属菌株中收获高活性生物质
在发酵结束之后，将在实施例1中所获得的培养基的pH值从pH 7.5调节到pH 4.5。在室温下将培养基平缓搅拌(约50rpm)1小时。在搅拌结束之后，通过过滤分离生物质。将分离的生物质收集在适当的烧杯中并且将pH值调节到7.2。将pH值调节的生物质以50rpm平缓搅拌1小时，之后冷冻干燥。
实施例4：从芽孢杆菌属菌株中收获高活性生物质
在发酵结束(EoF)之后，将在实施例1中所获得的培养基的pH值从pH 7.5调节到pH4.5。添加硅藻土。在室温下将培养基平缓搅拌1小时。在搅拌结束之后，通过过滤分离生物质。将分离的生物质收集在适当的烧杯中并且将pH值调节到7.2。将pH值调节的生物质以50rpm搅拌1小时并且冷冻干燥。
实施例5：从芽孢杆菌属菌株培养基中收获高活性生物质
将在实施例1中所获得的培养基的三个样品分别调节到以下pH值：6.0、5.0以及4.5。使用培养基的第四个样品(pH 7.5)作为对照。在室温下将样品平缓搅拌(约50rpm)。在搅拌结束之后，通过过滤分离样品的生物质。将分离的生物质收集在适当的烧杯中并且将pH值调节到7.2并且通过HPLC和MS测量抗真菌性代谢产物(丰原素、伊枯草菌素以及表面活性素)的含量。参见下表1。
实施例6：将丰原素、伊枯草菌素以及表面活性素吸附到地质矿物和生物矿物来源 的固体载体——收获芽孢杆菌属菌株的活性代谢产物。
在发酵结束之后，将根据实施例1获得的枯草芽孢杆菌培养基分成3个部分并且分别调节到pH 5、pH 7以及pH 8.7。将3.5g地质聚合物(地质矿物或生物矿物)与被调节到不同pH值的45ml培养基混合(每毫升用过的培养基0.08g地质矿物或生物矿物)。将含有地质矿物或生物矿物的培养基在室温下以25rpm孵育3小时。在孵育结束之后，通过离心将地质矿物或生物矿物溶液连同生物质一起分离。从孵育之前的pH值调节的培养基以及孵育之后使用离心分离的上清液获取用于脂肽分析的样品。由脂肽浓度的差值计算吸附到地质矿物/生物矿物的脂肽％。
所测试的地质矿物/生物矿物材料包括：
1.参照：仅芽孢(生物质)。
2.Harborlite 300(珍珠岩/火山岩)。
3.Harborlite 635(珍珠岩/火山岩)。
4.Harborlite 900(珍珠岩/火山岩)。
5.Europerl(珍珠岩/火山岩)。
6.Hyflo Supercel(硅藻土(Celite)/硅藻土(Diatomic Earth))。
7.Celite 545(赛力特硅藻土(Celite)/硅藻土(Diatomic Earth))。
8.Filtercel(硅藻土)。
9.高岭土Supreme(陶土)。
10.高岭土Optigloss(陶土)。
11.Sipernat 50S-二氧化硅(合成二氧化硅气凝胶/Evonike)。
12.Aerosil 380F-二氧化硅(合成二氧化硅气凝胶/Evonike)。
将收集的样品储存在-20℃/-50℃直到通过HPLC和MS进一步分析脂肽含量为止。代谢产物丰原素、伊枯草菌素以及表面活性素吸附到不同的地质矿物/生物矿物的结果汇总于下表2中：
用作用于分批吸附实验的起始材料的pH值调节的培养基由具有以下浓度的脂肽组成：丰原素：约421μg/ml(微克/毫升)；伊枯草菌素：357μg/ml；以及表面活性素：1141μg/ml。
代谢产物连同生物质一起的去除强烈地依赖于培养基的pH值。在低pH值(pH 5.0)大部分的代谢产物是与生物质缔合在一起的。当将pH值增加到所测量的pH 8.7时，代谢产物从生物质中游离出来，因此，上清液中代谢产物的浓度随pH值增加而增加。伊枯草菌素似乎是3种所研究的脂肽中最具pH值敏感性的。在pH 8.7，所提供的伊枯草菌素中只有60％与芽孢缔合在一起。其余的可以在上清液中找到。
结果还揭示，培养基中地质矿物/生物矿物(在此被分类为硅藻土、火山岩、高岭土或二氧化硅)的存在对于在pH值≥5捕捉脂肽是必要的。与参照相比，所有所测试的矿物均能够进一步减少上清液中脂肽的量。明显的是，在添加所测试的地质矿物/生物矿物之后，已经从培养基中去除了可获得的丰原素、伊枯草菌素以及表面活性素的≥95％。所测试的生物矿物和地质矿物的吸附特性还揭示，脂肽丰原素、伊枯草菌素以及表面活性素对所测试的矿物具有不同的亲和力。对于大部分所测试的矿物，脂肽的吸附曲线是恒定的并且因此独立于pH值，例如Hyflo Supercel和Celite 545。对于一些所测试的地质矿物/生物矿物，例如Harbolite 635和Filtercel，我们仍看到培养基中脂肽的更高去除百分比(与参照相比)，但是培养基中脂肽的去除在pH 5.0至pH 8.7的pH值范围随着pH值增加而略微减少。
实施例7：将丰原素、伊枯草菌素以及表面活性素吸附到地质聚合物来源的固体载 体——使用不同负载度的Hyflo Supercel收获芽孢杆菌属菌株的活性代谢产物。
在发酵结束之后将根据实施例1获得的枯草芽孢杆菌培养基(50L)分成5个10L部分。将4个部分调节到pH 5.0并且将最后一个部分维持在pH 7.5。
在室温下以25rpm将pH 7.5部分孵育2小时。在孵育结束之后，通过离心分离生物质悬浮液。在孵育之前和之后从培养基获取用于脂肽分析的样品。将生物质悬浮液中回收的脂肽％与起始材料中可获得的脂肽相比较。
对于其余4个pH值调节的部分，将对应于每毫升用过的培养基0g-0.06g HyfloSupercel的负载度的0kg、0.2kg、0.4kg以及0.6kg的HyfloSupercel添加到10L培养基中的每一个中。在室温下以25rpm将含有不同量的Hyflo Supercel的培养基孵育2小时。在孵育结束之后，通过离心分离Hyflo Supercel/生物质悬浮液。从孵育之前的pH值调节的培养基以及使用离心分离的Hyflo Supercel/生物质悬浮液获取用于脂肽分析的样品。将HyfloSupercel/生物质悬浮液中回收的脂肽％与起始材料中可获得的脂肽相比较。样品处理和脂肽分析如实施例6中所述。
用作用于负载实验的起始材料的pH值调节的培养基由具有以下浓度的脂肽组成：丰原素：约343μg/ml；伊枯草菌素：311μg/ml；以及表面活性素：1245μg/ml。
从图1(描绘了在使用不同负载度的Hyflo Supercel的情况下丰原素、伊枯草菌素以及表面活性素的回收率)中可以看出，从pH 7.5到pH 5.0的pH值调节对培养基中脂肽的去除有显著的作用。图1中的回收率结果还表明，培养基中Hyflo Supercel的存在对于捕捉培养基中剩余的脂肽是必要的。
脂肽的最大回收率(65％丰原素、92％伊枯草菌素以及66％表面活性素)似乎在每毫升培养基0.04g Hyflo Supercel的最小负载度下达到稳定。
实施例8：通过降低培养基的pH值从芽孢杆菌属菌株中收获高活性生物质。
在发酵结束之后将根据实施例1获得的4L枯草芽孢杆菌培养基分成4个1L部分。将4个部分分别调节到pH 4.5、5.0、6.0以及7.5。
用作用于分批吸附实验的起始材料的pH值调节的培养基由具有以下浓度的脂肽组成：丰原素：约200μg/ml；伊枯草菌素：150μg/ml；以及表面活性素：400μg/ml。
对于pH值调节的部分中的每一个，将0.5ml培养基转移到微量离心试管中并且在血液混合器上在室温下以35rpm孵育2小时。对于每一个所检查的pH值制备一式三份样品。
在孵育结束之后，通过离心10分钟分离生物质浓缩物(沉淀物)。将上清液取出并且转移到新的微量离心试管中。
通过从分离的沉淀物和上清液中获取样品来分别测量上清液和分离的沉淀物中脂肽的分布％。丰原素、伊枯草菌素以及表面活性素的分布百分比的结果汇总于表3中，该表3给出了上清液和沉淀物中脂肽的实际测量浓度(μg/ml)。
明显的是，将pH值从pH 7.5降低到pH 4.5对培养基中脂肽的去除有显著的作用。随着pH值降低，脂肽跟随分离的沉淀物。当培养基的pH值达到低于pH 5时，所述作用似乎达到稳定。在低于pH 5时，上清液(接近零)和沉淀物(接近100％)中所有脂肽浓度都达到恒定值。丰原素、伊枯草菌素以及表面活性素的计算总浓度如所预期差不多恒定。
实施例9：通过降低培养基的pH值结合使用絮凝剂来从芽孢杆菌属菌株中收获高 活性生物质。
在发酵结束之后将根据实施例1获得的3L枯草芽孢杆菌培养基分成3个1L部分。将3个部分分别调节到pH 4.5、5.0以及7.5。
将每一个pH值调节的部分分成4个250ml样品。使用5M CaCl2原液来将样品分别调节到0M、50mM、100mM以及200mM的CaCl2。在血液混合器上在室温以35rpm将CaCl2调节的部分中的每一个孵育1小时。将0.5ml溶液转移到微量离心试管中并且通过离心10分钟来分离生物质浓缩物(沉淀物)。通过从分离的沉淀物和上清液中取样来测量丰原素、伊枯草菌素以及表面活性素的浓度。下表给出了在不同的测试CaCl2浓度和pH值下上清液(表5)和沉淀物(表4)中脂肽的实际测量浓度(μg/ml)。
来自所述测试的结果揭示，所应用的CaCl2浓度和枯草芽孢杆菌培养基的pH值这两者都对脂肽丰原素、伊枯草菌素以及表面活性素的去除有影响。将pH值本身从pH 7.5降低到pH 4.5(CaCl2浓度等于0mM)对培养基中脂肽的去除有积极作用。随着pH值降低，脂肽跟随分离的沉淀物。当培养基的pH值达到pH 5时，所述作用似乎达到稳定。随后可以通过增加培养基中CaCl2的浓度来脱去留在培养基中的另外的脂肽。明显的是，随着CaCl2浓度增加，脂肽连同生物质一起分离并且同时上清液中脂肽的浓度降低。
在本文描述了本发明的优选的实施方案，包括本申请的发明人已知用于实施本发明的最佳方式。在阅读上述说明时，那些优选的实施方案的变化方案对于本领域的普通技术人员来说可以变得显而易见。本申请的发明人期望本领域技术人员在适当时利用这些变化方案，并且本申请的发明人意图以除本文具体描述的方式之外的方式来实施本发明。因此，本发明包括如由适用法律所允许的所附权利要求书中所叙述的主题的所有修改和等同方案。此外，除非本文另外指示或另外与上下文明显矛盾，否则其所有可能的变化方案中上述要素的任何组合由本发明所涵盖。
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本专利文件中所引用的所有参考文献在此以引用的方式整体并入本文。

Claims (42)

1.一种用于收获具有杀真菌活性的生物质(细菌细胞和/或芽孢)的方法，所述方法是通过以下步骤实现的：
a)通过在生长培养基中繁殖产生脂蛋白和/或糖脂的细菌菌株来获得培养基；
b)确保所述培养基的pH值在2.5至5.5的范围(例如在3.0至5.0的范围、在3.0至4.7的范围、或在3.5至4.5的范围)，例如通过添加酸来实现；
c)在步骤b)之前、期间或之后，任选地添加地质聚合物；
d)从所述培养基中分离所述生物质，例如通过离心或过滤来分离；
e)任选地将赋形剂(例如载体或保护剂)添加到所述生物质中；和/或任选地将所述pH值调节到5.5至8.0范围的pH值；以及
f)任选地将所述生物质干燥，例如喷雾干燥、冷冻干燥或真空干燥。
2.一种用于从培养基中收获生物质(细菌细胞和/或芽孢)的方法，所述方法是通过以下步骤实现的：
a)通过在生长培养基中在5.7至9.0范围的pH值繁殖产生脂蛋白和/或糖脂的细菌菌株来获得培养基；
b)确保所述培养基的pH值在2.5至5.5的范围(例如在3.0至5.0的范围、在3.0至4.5的范围、或在3.5至4.5的范围)，例如通过添加酸来实现；
c)在步骤b)之前、期间或之后，任选地添加地质聚合物；以及
d)从所述培养基中分离所述生物质，例如通过离心或过滤来分离。
3.一种用于收获具有杀真菌活性的生物质(细菌细胞和/或芽孢)的方法，所述方法是通过以下步骤实现的：
a)提供通过在生长培养基中繁殖产生脂蛋白和/或糖脂的细菌菌株所获得的培养基，所述培养基具有高于5.7的pH值；
b)将所述培养基的pH值降低到2.5至5.5的范围(例如3.0至5.0的范围、3.0至4.7的范围、或3.5至4.5的范围)的pH值，例如通过添加酸来降低；
c)在步骤b)之前、期间或之后，任选地添加地质聚合物；
d)从所述培养基中分离所述生物质，例如通过离心或过滤来分离；
e)任选地将赋形剂(例如载体或保护剂)添加到所述生物质中；和/或任选地将所述pH值调节到5.5至8.0范围的pH值；以及
f)任选地将所述生物质干燥，例如喷雾干燥、冷冻干燥或真空干燥。
4.一种用于获得具有杀真菌活性的生物质(细菌细胞和/或芽孢)的方法，所述方法是通过以下步骤实现的：
a)提供通过在生长培养基中繁殖产生脂蛋白和/或糖脂的细菌菌株所获得的培养基，所述培养基具有2.5至6.5的范围(例如4.0至6.0的范围、4.5至6.0的范围、3.0至5.0的范围、3.0至4.7的范围、或3.5至4.5的范围)的pH值；
b)在步骤b)之前、期间或之后，任选地添加地质聚合物；
c)从所述培养基中分离所述生物质，例如通过离心或过滤；
d)任选地将赋形剂(例如载体或保护剂)添加到所述生物质中；和/或任选地将所述pH值调节到5.5至8.0范围的pH值；以及
e)任选地将所述生物质干燥，例如喷雾干燥、冷冻干燥或真空干燥。
5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中a)中所述培养基的pH值高于5.7，例如在5.7至9的范围、在6.0至9.0的范围、或在6.5至8的范围。
6.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述pH值在指定范围内被保持至少1小时，例如至少2小时、至少4小时、至少10小时或至少24小时。
7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在步骤b)中所述pH值低于5.7，例如在2.0至5.6的范围、在3.0至5.5的范围、在3.5至5.5的范围、在4.0至5.3的范围、在4.0至5.0的范围，或优选地在4.5至5.0的范围。
8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述pH值在指定范围内被保持至少10分钟，例如至少20分钟、至少30分钟、或至少60分钟。
9.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述地质聚合物选自由以下各项组成的组：硅藻岩、硅藻土、高岭土、陶土、膨润土、滑石、火山灰、火山岩、粘土、木质素、钻井泥浆、硅藻土、合成二氧化硅、表面处理的硅藻土、以及金属硅酸盐。
10.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述地质聚合物是硅藻土或表面处理的硅藻土。
11.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述地质聚合物是以每毫升脂蛋白和/或糖脂的液体悬浮液或溶液0.02g至0.3g的量使用的。
12.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细菌菌株属于芽孢杆菌属(Bacillus)物种，例如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)或解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)，例如选自由以下各项组成的组的菌株：解淀粉芽孢杆菌菌株HSCC124(FERM BP-4758)或IAM 1523、枯草芽孢杆菌菌株KS1(NITE BP-569)和AQ153(ATCC55614)。
13.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细菌菌株是选自由以下各项组成的组的菌株：解淀粉芽孢杆菌菌株HSCC 124(FERM BP-4758)或IAM 1523、枯草芽孢杆菌菌株KS1(NITE BP-569)和AQ153(ATCC55614)。
14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述脂蛋白和/或所述糖脂选自由以下各项组成的组：表面活性素、伊枯草菌素、制磷脂菌素、节活性素、沙雷维婷、以及丰原素或这些中的任一种的衍生物。
15.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在分离生物质之前，将絮凝剂(例如CaCl2)添加到所述培养基中。
16.如前述权利要求所述的方法，其中所述pH值在絮凝期间保持在4.5至7.5的范围，例如约pH 5。
17.一种用于从液体悬浮液或溶液中收获脂蛋白和/或糖脂的方法，所述方法是通过包括以下步骤的方法实现的：
a)使地质聚合物与所述液体悬浮液或溶液接触；以及
b)允许所述地质聚合物吸附(或结合)所述脂蛋白或糖脂；以及
c)将所述地质聚合物与所述液体分离；以及
d)任选地从所述地质聚合物分离所述脂蛋白或糖脂，例如将所述脂蛋白和/或糖脂解吸。
18.如前述权利要求所述的方法，其中所述液体悬浮液或溶液是在前述权利要求中任一项中所获得的所述培养基，优选地不含生物质。
19.如前述权利要求所述的方法，其中所述液体悬浮液或溶液是在前述权利要求中任一项中所获得的不含生物质的所述培养基。
20.如前述权利要求所述的方法，其中所述液体悬浮液或溶液是通过以下步骤获得的：
i)将细菌菌株(其能够产生所述脂蛋白和/或所述糖脂)培养在合适的液体生长培养基中，从而获得所述脂蛋白和/或所述糖脂的液体悬浮液或溶液；以及
ii)任选地破坏所述细菌细胞；和/或
iii)任选地从所述悬浮液或溶液中去除细菌细胞(生物质)。
21.一种用于制备包含脂蛋白和/或糖脂的干组合物的方法，所述方法是通过包括以下步骤的方法实现的：
i)将细菌菌株(其能够产生所述脂蛋白和/或所述糖脂)培养在合适的液体生长培养基中，从而获得所述脂蛋白和/或所述糖脂的液体悬浮液或溶液；以及
ii)任选地破坏所述细菌细胞；和/或
iii)任选地从所述悬浮液或溶液中去除细菌细胞；以及
a)使地质聚合物与所述悬浮液或溶液接触；以及
b)允许所述地质聚合物吸附所述脂蛋白或糖脂；以及
c)将所述地质聚合物与所述液体悬浮液或溶液分离；以及
d)任选地从所述地质聚合物分离所述脂蛋白和/或糖脂，例如将所述脂蛋白和/或糖脂解吸；以及
e)任选地将赋形剂(例如载体或保护剂)添加到含有脂蛋白/糖脂的级分中；以及
f)将含有脂蛋白和/或糖脂的所述级分干燥，例如喷雾干燥、冷冻干燥或真空干燥。
22.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述地质聚合物选自由以下各项组成的组：生物矿物、地质矿物、高岭土、陶土、膨润土、滑石、火山灰、火山岩、粘土、木质素、钻井泥浆、硅藻土(包括表面处理的硅藻土)、合成二氧化硅、以及金属硅酸盐。
23.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述地质聚合物是硅藻土或表面处理的硅藻土。
24.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述地质聚合物是以每毫升脂蛋白和/或糖脂的液体悬浮液或溶液0.02g至0.3g的量使用的。
25.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细菌菌株属于芽孢杆菌属物种，例如枯草芽孢杆菌或解淀粉芽孢杆菌，例如选自由以下各项组成的组的菌株：解淀粉芽孢杆菌菌株HSCC 124(FERM BP-4758)或IAM 1523、枯草芽孢杆菌菌株KS1(NITE BP-569)、QST713(NRRL B-21661)以及AQ153(ATCC55614)、或这些中的任一种的突变体或变体。
26.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述脂蛋白和/或所述糖脂选自由以下各项组成的组：表面活性素、伊枯草菌素、制磷脂菌素、节活性素、沙雷维婷、盖吉四烯菌素(A、B或C)、盖吉抑制素(A、B或C)、以及丰原素、以及这些中的任一种的衍生物。
27.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述吸附步骤b)在3至10的范围的pH值，例如在3.5至7的范围、或在4至5.5的范围的pH值下进行。
28.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中吸附步骤b)在0℃至50℃的范围，例如在5℃至40℃的范围或在10℃至30℃的范围的温度下进行。
29.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中吸附步骤b)进行0.1小时至24小时的范围，例如0.5小时至10小时的范围或1小时至4小时的范围的时间段。
30.如前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法是在基本上不使用有机溶剂，优选地不使用有机溶剂的情况下进行的。
31.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在分离地质矿物之前将絮凝剂(例如CaCl2)添加到所述培养基中。
32.一种用于从液体悬浮液或溶液中收获脂蛋白和/或糖脂的方法，所述方法是通过包括以下步骤的方法实现的：
a)使絮凝剂与所述液体悬浮液或溶液接触；以及
b)从所述液体中分离所述脂蛋白和/或糖脂。
33.如前述权利要求所述的方法，其中所述pH值在絮凝期间保持在4.5至7.5的范围，例如约pH 5。
34.一种能通过如前述权利要求中任一项所述的方法获得的组合物，这样的组合物包含地质聚合物；以及脂蛋白和/或糖脂，其中所述脂蛋白和/或糖脂的至少10％，如至少30％或至少50％(w/w)吸附(或结合)到所述地质聚合物的表面；或包含地质聚合物和芽孢的组合物。
35.如前述权利要求中任一项所述的组合物，所述组合物包含地质聚合物以及脂蛋白和/或糖脂，其中所述脂蛋白和/或糖脂的至少10％，例如至少30％或至少50％(w/w)吸附(或结合)到所述地质聚合物的表面。
36.如前述权利要求中任一项所述的组合物，所述组合物包含地质聚合物和细菌芽孢。
37.如前述权利要求中任一项所述的组合物，所述组合物进一步包含载体和/或赋形剂。
38.如前述权利要求中任一项所述的组合物，所述组合物悬浮在农业上可接受的液体中。
39.如前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述液体的pH值高于7，例如高于8、高于8.5、高于8.7、高于9.0或高于9.2。
40.地质聚合物，例如硅藻土作为用于收获生物质的助剂的用途，例如在用于从具有低于6.0的pH值的芽孢杆菌培养基中收获芽孢的方法中；或作为用于脂蛋白或糖脂的吸附剂的用途，例如在用于从培养基中收获脂蛋白或糖脂的方法中。
41.如前述权利要求中任一项所述的地质聚合物作为用于收获生物质的助剂的用途，例如在用于从具有低于6.0的pH值的芽孢杆菌培养基中收获芽孢的方法中。
42.如前述权利要求中任一项所述的地质聚合物作为用于脂蛋白或糖脂的吸附剂的用途，例如在用于从培养基中收获脂蛋白或糖脂的方法中。
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