CN108329367A

CN108329367A - 一种从女贞子中制备特女贞苷的方法

Info

Publication number: CN108329367A
Application number: CN201810364798.6A
Authority: CN
Inventors: 吴岩斌; 曾建伟; 吴锦忠; 马利; 沈燚; 吴建国
Original assignee: Fujian University of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: Fujian University of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2018-04-23
Filing date: 2018-04-23
Publication date: 2018-07-27

Abstract

本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种从女贞子中制备特女贞苷的方法。所述方法是以女贞子为原料，经含水乙醇回流提取，提取液过滤浓缩后用大孔树脂纯化2次后再经乙醇结晶，制得特女贞苷化合物，纯度达98.2%以上。该方法原料丰富易得，工艺简单易行，操作简便，高效环保，生产成本较低，适用于工业生产。

Description

一种从女贞子中制备特女贞苷的方法

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种从女贞子中制备特女贞苷的方法。

背景技术

女贞子为木犀科植物女贞LigubtrumlucidumAit.的干燥成熟的果实，具有滋补肝肾、明目乌发等功效。近年来研究表明，环烯醚萜苷类成分是女贞子的主要活性成分之一，其中特女贞苷是女贞子中含量较高的环烯醚萜苷类化合物，具有抗骨质疏松、抗氧化、保肝等药理作用。以往从女贞子中分离特女贞苷的主要步骤为：女贞子用70%乙醇回流提取，提取液回收乙醇后加水混悬，依次分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。正丁醇萃取部分采用硅胶柱色谱分离，以氯仿-甲醇-水（70：30：10）洗脱，洗脱物再经制备液相色谱分离得到特女贞苷（李阳，左燕，孙文基. 女贞子中2种主要裂环环醚萜苷成分的分离鉴定及其抗氧化活性研究. 中药材, 2007, 5(30): 543-546）；或者女贞子用乙醇室温浸提，提取液回收溶剂加水混悬，用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯萃取部分采用硅胶柱色谱分离，以氯仿-甲醇洗脱，洗脱物再经Sephadex LH-20柱色谱，以氯仿-甲醇（1：1）洗脱，洗脱物再经制备液相色谱分离得到特女贞苷（Liu X, Wang CY, Shao CL, et al. Chemical Constituentsfrom the Fruits of Ligustrum lucidum, Chemistry of Natural Compounds, 2010,46 (5) :701-703）。也有部分专利文献报道了特女贞苷的制备方法，如申请号为200910093290.8的专利申请公开了“一种女贞子专属性成分特女贞苷的分离纯化工艺”、申请号为201010186867.2的专利申请公开了“一种特女贞苷的制备方法”、申请号为201110337108.6的专利申请公开了“一种特女贞苷的制备方法”、申请号为201611192859.2的专利申请公开了“一种特女贞苷对照品的制备方法”。

上述的制备方法所用到的有机溶剂包括甲醇、石油醚、乙酸乙酯、氯仿、正丁醇，这些试剂毒性较大，成本较高、且易造成环境污染，而且产品易残留有机溶剂从而影响产品的安全性。此外，上述制备方法所用的反向硅胶、凝胶、中压制备成本较高，且步骤繁琐、操作费时。以上方法难以用于工业化生产。因此，急需一种简便、高效、低成本、安全的提取分离技术来解决现有技术中所存在的这一问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从女贞子中简单制备特女贞苷化合物的方法。本方法通过乙醇和水混合溶剂来进行提取，提取物经大孔树脂分离后再用乙醇结晶，保证产品的安全性，也简化了分离的流程，适用于工业化生产。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：以女贞子为原料，经含水乙醇回流提取，提取液过滤浓缩后过大孔吸附树脂，依次用水、体积浓度10%的乙醇溶液、体积浓度30%的乙醇溶液洗脱，30%乙醇洗脱部位再过大孔树脂，依次用水和体积浓度10%的乙醇溶液洗脱，收集10%乙醇溶液洗脱液，浓缩后再经乙醇结晶，制得一单体化合物。

本发明制得的单体化合物经核磁共振波谱鉴定结果和已有文献研究谱图数据，确定该化合物为特女贞苷。

结构鉴定如下：

特女贞苷：白色粉末, 分子式C₃₁H₄₂O₁₇。¹³C-NMR(150MHz，CD₃OD)：δ： 95.2 (C-1)，155.2 (C-3)，130.9 (C-4)，31.8 (C-5)，41.3 (C-6)，173.0 (C-7)，124.9 (C-8)，109.5(C-9)，13.7 (C-10)，168.7 (C-11)，72.2 (α-CH₂-)，36.4 (β-CH₂-)，51.9 (-OCH₃)，100.9(C-1')，75.0 (C-2')，75.2 (C-3')，71.6 (C-4')，78.44 (C-5')，62.7 (C-6')，104.5 (C-1'')，75.2 (C-2'')，78.4 (C-3'')，72.2 (C-4'')，78.4 (C-5'')，65.0 (C-6'')，130.6(C-1''')，116.2 (C-2''')，130.9 (C-3''')，156.8 (C-4''')，130.7 (C-5''')，116.2(C-6''')。以上数据与文献（李阳，左燕，孙文基. 女贞子中2种主要裂环环醚萜苷成分的分离鉴定及其抗氧化活性研究. 中药材, 2007, 5(30): 543-546）报道一致，确定其为特女贞苷。

本发明提供的制备特女贞苷的方法包括以下步骤：

a：将干燥后的女贞子粉碎，用体积浓度50%-95%的乙醇溶液回流提取2-3次，提取液减压浓缩，得到初提取物。

b：步骤a中所得的初提取物加水溶解，静置12 h，过滤，滤液过D101、AB-8、HPD722等大孔树脂，先用10-20 BV水洗脱，接着用2BV体积浓度10%的乙醇溶液洗脱，再用5BV体积浓度30%的乙醇溶液洗脱，收集30%乙醇溶液洗脱液，减压回收溶剂，用水溶解后再过D101、AB-8、HPD722等大孔树脂，依次用5BV水洗脱和20-30BV体积浓度10%的乙醇溶液洗脱，收集10%乙醇溶液洗脱液，减压回收溶剂，得到含特女贞苷的粗提取物。

c：将步骤b中所得的含特女贞苷的粗提取物用乙醇溶液溶解，放置4℃冰箱中冷藏结晶，待结晶析出后，过滤固体结晶物，用乙醇洗涤结晶2-3遍，滤液浓缩后继续冷藏结晶，结晶固体物干燥后得到纯度为98.2%以上的特女贞苷化合物。

所述步骤a中的女贞子药材和提取溶液的料液比为1:10-20。

所述步骤a中的提取方法为回流提取、超声提取、浸渍提取中的任意一种。

所述步骤b中的大孔树脂优选中极性或弱极性大孔树脂。

本发明的主要优点：

1、工艺步骤少，操作简单，适用于工业化生产；

2、提取分离所用溶剂为含水乙醇，可回收使用，经济、绿色环保；

3、分离纯化所用的大孔树脂材料已在食品、医药等领域得到了广泛的应用，也重复使用；

4、产品收率较高，其生产成本也较低，参照目前实验室购进各试剂和材料的价格计算特女贞苷的生产成本约为 50元/g。

附图说明

图1是根据本发明的一个实施例1制备的特女贞苷的高效液相色谱（HPLC）图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，所述的是对本发明的解释而不是限定。

实施例1

女贞子药材3 kg，用药材量14倍体积的体积浓度为95%的乙醇溶液回流提取2次，提取液过滤，滤液合并减压浓缩，得到提取物，提取物加水溶解，静置12 h后过滤，滤液过D101大孔树脂，依次用16 BV水洗脱，接着用2 BV体积浓度10%的乙醇溶液洗脱，再用5 BV体积浓度30%的乙醇溶液洗脱，收集30%乙醇溶液洗脱液，减压浓缩后用水溶解，再过D101大孔树脂，依次用5 BV水洗脱和20 BV体积浓度10%的乙醇溶液洗脱，收集10%乙醇溶液洗脱液，减压回收溶剂，得到含特女贞苷的粗提取物。将含特女贞苷的粗提取物用乙醇溶液溶解，放置4℃冰箱中冷藏结晶，待结晶析出后，过滤固体结晶物，用乙醇洗涤结晶2遍，滤液浓缩后继续冷藏结晶，将结晶固体物干燥后得到34.3g的特女贞苷，经 HPLC 法检测，纯度为99.2%。

实施例2

女贞子药材3 kg，用药材量14倍体积的体积浓度为95%的乙醇溶液回流提取2次，提取液过滤，滤液合并减压浓缩，得到提取物，提取物加水溶解，静置12 h后过滤，滤液过HPD-722大孔树脂，依次用16 BV水洗脱，接着用2 BV体积浓度10%的乙醇溶液洗脱，再用5 BV体积浓度30%的乙醇溶液洗脱，收集30%乙醇溶液洗脱液，减压浓缩后用水溶解，再过HPD-722大孔树脂，依次用5 BV水洗脱和20 BV体积浓度10%的乙醇溶液洗脱，收集10%乙醇溶液洗脱液，减压回收溶剂，得到含特女贞苷的粗提取物。将含特女贞苷的粗提取物用乙醇溶液溶解，放置4℃冰箱中冷藏结晶，待结晶析出后，过滤固体结晶物，用乙醇洗涤结晶2遍，滤液浓缩后继续冷藏结晶，将结晶固体物干燥后得到30.3g的特女贞苷，经 HPLC 法检测，纯度为98.2%。

实施例3

女贞子药材3 kg，用药材量14倍体积的体积浓度为95%的乙醇溶液回流提取2次，提取液过滤，滤液合并减压浓缩，得到提取物，提取物加水溶解，静置12 h后过滤，滤液过AB-8大孔树脂，依次用16 BV水洗脱，接着用2 BV体积浓度10%的乙醇溶液洗脱，再用5 BV体积浓度30%的乙醇溶液洗脱，收集30%乙醇溶液洗脱液，减压浓缩后用水溶解，再过AB-8大孔树脂，依次用5 BV水洗脱和20 BV体积浓度10%的乙醇溶液洗脱，收集10%乙醇溶液洗脱液，减压回收溶剂，得到含特女贞苷的粗提取物。将含特女贞苷的粗提取物用乙醇溶液溶解，放置4℃冰箱中冷藏结晶，待结晶析出后，过滤固体结晶物，用乙醇洗涤结晶2遍，滤液浓缩后继续冷藏结晶，将结晶固体物干燥后得到27.5g的特女贞苷，经 HPLC 法检测，纯度为98.5%。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims

1.一种从女贞子中制备特女贞苷的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：

a：将干燥后的女贞子粉碎，用体积浓度50%-95%的乙醇溶液回流提取2-3次，提取液减压浓缩，得到初提取物；

b：步骤a中所得的初提取物加水溶解，静置12 h，过滤，滤液过D101、AB-8、HPD722等大孔树脂，先用10-20 BV水洗脱，接着用2 BV体积浓度10%的乙醇溶液洗脱，再用5 BV体积浓度30%的乙醇溶液洗脱，收集30%乙醇溶液洗脱液，减压回收溶剂，用水溶解后再过D101、AB-8、HPD722等大孔树脂，依次用5BV水洗脱和20-30BV体积浓度10%的乙醇溶液洗脱，收集10%乙醇溶液洗脱液，减压回收溶剂，得到含特女贞苷的粗提取物；

c：将步骤b中所得的含特女贞苷的粗提取物用乙醇溶液溶解，放置于4℃冰箱中冷藏结晶，待结晶析出后，过滤固体结晶物，用乙醇洗涤结晶2-3遍，滤液浓缩后继续冷藏结晶，结晶固体物干燥后得到纯度为98.2%以上的特女贞苷化合物。

2.根据权利要求1所述的从女贞子中制备特女贞苷的方法，其特征在于：所述步骤a中的女贞子药材和提取溶液的料液比为1:10-20。

3.根据权利要求1所述的从女贞子中制备特女贞苷的方法，其特征在于：所述步骤a中的提取方法为回流提取、超声提取、浸渍提取中的任意一种。

4.根据权利要求1所述的从女贞子中制备特女贞苷的方法，其特征在于：所述步骤b中的大孔树脂优选中极性或弱极性大孔树脂。