CN108299535A - 苦西瓜中葫芦素e及糖苷的制备方法 - Google Patents

苦西瓜中葫芦素e及糖苷的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108299535A
CN108299535A CN201810091353.5A CN201810091353A CN108299535A CN 108299535 A CN108299535 A CN 108299535A CN 201810091353 A CN201810091353 A CN 201810091353A CN 108299535 A CN108299535 A CN 108299535A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ethyl alcohol
ethanol
alcohol
colocynth
water
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810091353.5A
Other languages
English (en)
Inventor
黄三文
周渊
尚轶
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Agricultural Genomics Institute at Shenzhen of CAAS
Original Assignee
Agricultural Genomics Institute at Shenzhen of CAAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Agricultural Genomics Institute at Shenzhen of CAAS filed Critical Agricultural Genomics Institute at Shenzhen of CAAS
Priority to CN201810091353.5A priority Critical patent/CN108299535A/zh
Publication of CN108299535A publication Critical patent/CN108299535A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07JSTEROIDS
    • C07J9/00Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07HSUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C07H1/06Separation; Purification
    • C07H1/08Separation; Purification from natural products
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07HSUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20Carbocyclic rings
    • C07H15/24Condensed ring systems having three or more rings
    • C07H15/256Polyterpene radicals
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07JSTEROIDS
    • C07J17/00Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, having an oxygen-containing hetero ring not condensed with the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton
    • C07J17/005Glycosides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明提供一种苦西瓜中葫芦素E及糖苷的制备方法,用乙醇提取苦西瓜,然后除去乙醇,收集醇提物,再经过大孔树脂柱层析分离,半制备HPLC纯化,分别得到式(I)和式(II)所示的葫芦素E及单葡萄糖苷。本发明首次公开了从苦西瓜中提取纯化获得葫芦素E及其糖苷的方法,所得终产物的产率和纯度高,流程简单,易于工业化放大生产。

Description

苦西瓜中葫芦素E及糖苷的制备方法
技术领域
本发明属于天然药物化学领域,具体地说,涉及一种从苦西瓜中制备葫芦素E及糖苷的方法。
背景技术
苦西瓜是指葫芦科西瓜属带有苦味的西瓜品种,如药西瓜(拉丁名Citrulluscolocynthis)、未经驯化的西瓜(拉丁名Citrullus lanatus(Thunb.)Matsum.et Nakai,英文名Water Melon)野生品种及人工培育的带苦味的西瓜等。其中,药西瓜又称“苦西瓜”、“苦苹果”或“苦黄瓜”,原产于地中海地区,在我国主要分布在新疆等地,是维吾尔族习用药材,收载于我国一九九八年卫生部颁药材标准(维吾尔分册)中。主要适用于由寒气所引起的各种疾病,缓解疼痛,通气,消肿止痛。主治便秘,瘫痪,开窍,牙疼,胸闷,风湿等。
苦西瓜果实和根中含有多种葫芦素成分,其中以葫芦素E及其单葡萄糖苷含量最高。现代药理研究表明,葫芦素类化合物具有很强的抗癌活性。据报道,葫芦素B、E、I,对乳腺癌、肺癌、肝癌等癌细胞的增殖具有很强的抑制作用。甜瓜中的葫芦素B、E已被开发成五类中药“葫芦素片”,主要应用于湿热毒盛所致迁延性肝炎、慢性肝炎及原发性肝癌的辅助治疗。
葫芦素E(Cucurbitacin E),异名α-西洋苦瓜素。分子式C32H44O8,分子量:556.695,CAS号:18444-66-1。葫芦素E最早分别于1909年和1910在喷瓜和药西瓜中被发现,此后,在甜瓜、西瓜、雪胆、栝楼、天花粉等葫芦科植物中发现有葫芦素E的存在,其中,以甜瓜蒂中的含量最高,但仍不足0.4%(干重)。目前市售的葫芦素E均从甜瓜蒂中提取纯化而来,但甜瓜蒂中主要为葫芦素B,而葫芦素E含量相对极低,且二者极性大小接近,这给葫芦素E的提纯带来很大的干扰,使得工艺流程复杂,成本难以得到有效的降低,售价高达四万元每克。
前期研究发现,药西瓜和西瓜野生品种中葫芦素E及其单葡萄糖苷的含量很高,其中,药西瓜中葫芦素E及其单葡萄糖苷合计达到6%(湿重)(图1),但目前尚未有苦西瓜中葫芦素E及其糖苷制备工艺的文献报道,本发明采用葫芦素E及其糖苷含量极高的苦西瓜为提取原材料,可极大地降低葫芦素E及其糖苷的生产成本。
发明内容
本发明的目的是提供一种从苦西瓜中提取葫芦素E及其糖苷的方法。
为了实现本发明目的,本发明提供的苦西瓜中葫芦素E及糖苷的制备方法,用乙醇提取苦西瓜,然后除去乙醇,收集醇提物,再经过大孔树脂柱层析分离,半制备HPLC纯化,分别得到式(I)和式(II)所示的葫芦素E及单葡萄糖苷。
本发明中醇提对象为苦西瓜鲜药材,或干药材粗粉。具体地,鲜药材用匀浆机打碎后,用乙醇提取;或者,将成熟的苦西瓜晒干、粉碎,过24目筛,得到干药材粗粉,然后用乙醇提取。
前述的方法,包括以下步骤:
1)用乙醇提取苦西瓜,然后除去乙醇,收集醇提物;
2)将所述醇提物溶解于乙醇中,使乙醇含量达20%,离心或抽滤收集上清液或滤液;
3)所述上清液或滤液进行大孔树脂柱层析分离,依次用水、30%乙醇、浓度不低于35%的乙醇、浓度不低于60%的乙醇梯度洗脱,分别收集浓度不低于35%和不低于60%的乙醇洗脱组分;
4)将收集得到的浓度不低于35%的乙醇洗脱组分用半制备HPLC进行分离纯化,得到式(II)所示化合物;
5)将收集得到的浓度不低于60%乙醇水洗脱组分用半制备HPLC进行分离纯化,得到式(I)化合物。
优选地,步骤1)中所述苦西瓜选自药西瓜或西瓜野生品种。
优选地,步骤1)中所述乙醇的浓度为40%~95%。
优选地,步骤1)提取方法选自渗漉提取、加热回流提取或浸渍提取中的任一种。
优选地,步骤3)中所用大孔树脂的型号选自D101、AB-8、HP-20、H-103、DA-201、DM-130、XAD-16或DS-401。
优选地,步骤3)中所述浓度不低于35%的乙醇,其浓度范围为35%~60%;所述浓度不低于60%的乙醇,其浓度范围为60%~95%。
优选地,步骤4)进行HPLC分离纯化时,所用反相色谱柱的填料为C8或C18,柱规格为20mm×250mm。
优选地,步骤4)进行HPLC分离纯化时,所用流动相为甲醇-水或乙腈-水,体积比10:90~70:30。
优选地,步骤5)进行HPLC分离纯化时,所用流动相为甲醇-水或乙腈-水,体积比30:70~80:20。
在本发明的一个具体实施方式中,苦西瓜中葫芦素E及糖苷的制备方法为:取1kg苦西瓜干药材粗粉,加入1倍重量的75%乙醇润湿浸泡6小时,然后将润湿好的药西瓜样品加入到渗漉筒中,用75%乙醇渗漉提取,收集8倍量的渗滤液,减压真空浓缩至无醇味(体积约剩0.5L);浓缩液中加入130mL 95%乙醇,使得浓缩液乙醇含量达到20%,离心过滤,得上清液;将上清液加样至D101大孔树脂进行分离,依次用水、30%乙醇、50%乙醇、80%乙醇梯度洗脱,分别收集50%和80%乙醇洗脱液,减压浓缩得浸膏。
50%乙醇洗脱所得浸膏用Agilent 1260半制备HPLC进行分离纯化,DAD检测器,采集波长为230nm,制备柱规格为反相C18色谱柱20mm×250mm,流动相为甲醇:水体积比45:55的混合液,流速为8ml/min,收集保留时间为16.5min的流出峰,得到9.3g式(II)所示化合物,纯度为98.5%。
80%乙醇洗脱所得浸膏用Agilent 1260半制备HPLC进行分离纯化,DAD检测器,采集波长为230nm,制备柱规格为反相C18色谱柱20mm×250mm,流动相为甲醇:水体积比65:35的混合液,流速为8ml/min,收集保留时间为19min的流出峰,得到3.1g式(I)所示化合物,纯度为97.6%。
在本发明的另一个具体实施方式中,苦西瓜中葫芦素E及糖苷的制备方法为:
取1kg苦西瓜鲜药材,用匀浆机打碎,用75%乙醇回流提取3次,每次1h,提取溶剂量分别为6倍量、5倍量和5倍量;合并提取液,减压真空浓缩至无醇味(体积约剩0.8L);向浓缩液中加入200mL 95%乙醇,使得浓缩液乙醇含量达到20%,离心过滤,得上清液;将上清液加样至D101大孔树脂进行分离,依次用水、30%乙醇、50%乙醇、80%乙醇梯度洗脱,分别收集50%和80%乙醇洗脱液,减压浓缩回收溶剂得浸膏。
50%乙醇洗脱所得浸膏用Agilent 1260半制备HPLC进行分离纯化,DAD检测器,采集波长为230nm,制备柱规格为反相C18色谱柱20mm×250mm,流动相为甲醇:水体积比45:55混合液,流速为8ml/min,收集保留时间为16.5min的流出峰,得到5.8g式(II)所示化合物,纯度为98.3%。
80%乙醇洗脱所得浸膏用Agilent 1260半制备HPLC进行分离纯化,DAD检测器,采集波长为230nm,制备柱规格为反相C18色谱柱20mm×250mm,流动相为甲醇:水体积比65:35的混合液,流速为8ml/min,收集保留时间为19min的流出峰,得到2.2g式(I)所示化合物,纯度为98.0%。
葫芦素E,结构式如式(I)所示,为白色粉末。
结构确认:
HRESIMS m/z:579.2955[M+Na]+(calcd for C32H44O8Na:579.2928);
UV(MeOH)λmax:236nm;
1H-NMR(CDCl3,400MHz):δ7.06(1H,d,J=15.6Hz,H-24),6.47(1H,d,J=15.6Hz,H-23),5.95(1H,d,H-1),5.77(1H,m,H-6),4.36(1H,m,H-16),3.50(1H,brs,H-10),3.21(1H,d,J=14.6Hz,H-12a),2.71(1H,d,J=14.6Hz,H-12b),2.47(1H,d,J=8.0Hz,H-17),2.37(1H,m,H-7a),2.04(1H,m,H-8),1.88(1H,m,H-15a),2.00(3H,s,CH3CO),1.89(1H,m,H-7b),1.56(3H,s,H-27),1.54(3H,s,H-26),1.47(1H,m,H-15b),1.42(3H,s,H-21),1.38(3H,s,H-30),1.35(3H,s,H-28),1.25(3H,s,H-29),1.03(3H,s,H-19),0.99(3H,s,H-18)。
13C NMR(CDCl3,100MHz):δ212.3(C-11),202.6(C-22),199.0(C-3),170.3(CH3CO),151.8(C-24),144.5(C-2),136.7(C-5),120.8(C-6),120.5(C-23),114.8(C-1),79.3(C-25),78.3(C-20),71.5(C-16),58.5(C-17),50.7(C-13),48.9(C-9),48.7(C-12),48.3(C-14),47.5(C-4),45.5(C-15),41.6(C-8),35.1(C-10),25.9(C-27),26.3(C-26),27.9(C-28),24.1(C-21),23.8(C-7),22.0(CH3CO),20.4(C-29),20.1(C-19),18.4(C-30),19.7(C-18)。
葫芦素E单葡萄糖苷,结构式如式(II)所示,为白色粉末。
结构确认:
HRESIMS m/z:741.3481[M+Na]+(calcd for C38H54O13Na:741.3457);
UV(MeOH)λmax:236nm;
1H-NMR(DMSO-d6,400MHz):δ6.79(1H,d,J=15.6Hz,H-24),6.84(1H,d,J=15.6Hz,H-23),5.80(1H,d,H-1),5.71(1H,brs,H-6),4.49(1H,m,H-16),3.61(1H,brs,H-10),3.35(1H,d,J=14.7Hz,H-12a),2.45(1H,d,J=14.7Hz,H-12b),2.35(1H,d,J=8.0Hz,H-17),2.26(1H,m,H-7a),1.97(3H,s,CH3CO),1.93(1H,m,H-7b),1.91(1H,m,H-8),1.73(1H,m,H-15a),1.50(3H,s,H-27),1.50(3H,s,H-26),1.30(3H,s,H-30),1.28(1H,m,H-15b),1.27(3H,s,H-21),1.18(3H,s,H-28),1.18(3H,s,H-29),0.86(3H,s,H-19),0.76(3H,s,H-18);4.57(1H,d,J=7.7Hz,H-1'),3.72(1H,m,H-6'a),3.61(1H,m,H-6'b),3.27(1H,m,H-5'),3.20(1H,m,H-3'),3.13(1H,s,H-4'),3.09(1H,s,H-2')。
13C NMR(DMSO-d6,100MHz):δ214.3(C-11),204.6(C-22),196.0(C-3),169.3(CH3CO),148.8(C-24),145.3(C-2),136.4(C-5),121.8(C-23),120.7(C-6),120.6(C-1),79.5(C-25),78.8(C-20),69.4(C-16),59.3(C-17),50.2(C-13),49.0(C-12),48.8(C-4),48.3(C-9),47.5(C-14),45.8(C-15),41.2(C-8),34.4(C-10),27.2(C-29),26.3(C-27),26.3(C-26),25.6(C-21),20.5(C-28),21.9(CH3CO),20.1(C-18),19.8(C-19),17.7(C-30);98.8(C-1'),77.5(C-5'),76.9(C-3'),72.8(C-2'),69.0(C-4'),60.0(C-6')。
本发明的有益效果如下:
本发明首次公开了一种从苦西瓜中提取纯化获得葫芦素E及其糖苷的方法,该方法对苦西瓜中的目标成分提取率较高,可达20%,纯度高达98%以上。所用的苦西瓜葫芦素E及糖苷含量远高于目前常用的甜瓜蒂,既解决了甜瓜蒂药材来源困难的问题,又大大降低了成本,使得原来“万元”级别的葫芦素E原料有望降低到“千元”水平。生产工艺简单,所用溶剂仅为乙醇、甲醇、水等,对环境污染性较小。对设备要求不高,易于工业化放大生产。
附图说明
图1为药西瓜葫芦素E及其糖苷含量分析。其中,A:药西瓜横切面图,B:不同取样位置含量分析,C:分别为药西瓜中葫芦素E及其单糖苷的含量(湿重)。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。若未特别指明,实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段,所用原料均为市售商品。
实施例1药西瓜中葫芦素E及糖苷的制备方法
取1kg药西瓜粗粉,加入1倍重量的75%乙醇润湿浸泡6小时,然后将润湿好的药西瓜样品加入到渗漉筒中,用75%乙醇渗漉提取,收集8倍量的渗滤液,减压真空浓缩至无醇味(体积约剩0.5L)。浓缩液中加入130mL 95%乙醇,使得浓缩液醇含量达到20%,离心过滤,得上清液和残渣。上清液上D101大孔树脂进行分离,依次用水、30%乙醇、50%乙醇、80%乙醇梯度洗脱,分别收集50%和80%乙醇洗脱液,减压浓缩回收溶剂得浸膏。50%乙醇洗脱所得浸膏用Agilent 1260半制备HPLC进行分离纯化,DAD检测器,采集波长为230nm,制备柱规格为反相C18色谱柱(20×250mm),流动相为甲醇:水(体积比45:55),流速为8ml/min,收集保留时间为16.5min左右的流出峰,得9.3g式(II)化合物,纯度为98.5%。80%乙醇洗脱所得浸膏用Agilent 1260半制备HPLC进行分离纯化,DAD检测器,采集波长为230nm,制备柱规格为反相C18色谱柱(20×250mm),流动相为甲醇:水(体积比65:35),流速为8ml/min,收集保留时间为19min左右的流出峰,得3.1g式(I)化合物,纯度为97.6%,提取率为20.6%。
实施例2药西瓜中葫芦素E及糖苷的制备方法
取1kg的药西瓜粗粉,加入1倍重量的75%乙醇润湿浸泡6小时,然后将润湿好的药西瓜样品加入到渗漉筒中,用75%乙醇渗漉提取,收集8倍量的渗滤液,减压真空浓缩至无醇味(体积约剩0.5L)。浓缩液中加入130mL95%乙醇,使得浓缩液醇含量达到20%,离心过滤,得上清液和残渣。上清液上AB-8大孔树脂进行分离,依次用水、30%乙醇、50%乙醇、80%乙醇梯度洗脱,分别收集50%和80%乙醇洗脱液,减压浓缩回收溶剂得浸膏。50%乙醇洗脱所得浸膏用Agilent 1260半制备HPLC进行分离纯化,DAD检测器,采集波长为230nm,制备柱规格为反相C18色谱柱(20×250mm),流动相为甲醇:水(体积比45:55),流速为8ml/min,收集保留时间为16.5min左右的流出峰,得10.1g式(II)化合物,纯度为98.1%。80%乙醇洗脱所得浸膏用Agilent 1260半制备HPLC进行分离纯化,DAD检测器,采集波长为230nm,制备柱规格为反相C18色谱柱(20×250mm),流动相为甲醇:水(体积比65:35),流速为8ml/min,收集保留时间为19min左右的流出峰,得3.6g式(I)化合物,纯度为97.7%,提取率为22.8%。
实施例3药西瓜中葫芦素E及糖苷的制备方法
取1kg的药西瓜粗粉,用75%的乙醇回流提取3次,每次1h,提取溶剂量分别为6倍量,5倍量,5倍量。合并提取液,减压真空浓缩至无醇味(体积约剩0.8L)。浓缩液中加入200mL 95%乙醇,使得浓缩液醇含量达到20%,离心过滤,得上清液和残渣。上清液上D101大孔树脂进行分离,依次用水、30%乙醇、50%乙醇、80%乙醇梯度洗脱,分别收集50%和80%乙醇洗脱液,减压浓缩回收溶剂得浸膏。50%乙醇洗脱所得浸膏用Agilent 1260半制备HPLC进行分离纯化,DAD检测器,采集波长为230nm,制备柱规格为反相C18色谱柱(20×250mm),流动相为甲醇:水(体积比45:55),流速为8ml/min,收集保留时间为16.5min左右的流出峰,得8.7g式(II)化合物,纯度为98.3%。80%乙醇洗脱所得浸膏用Agilent 1260半制备HPLC进行分离纯化,DAD检测器,采集波长为230nm,制备柱规格为反相C18色谱柱(20×250mm),流动相为甲醇:水(体积比65:35),流速为8ml/min,收集保留时间为19min左右的流出峰,得3.2g式(I)化合物,纯度为98.0%,提取率为19.7%。
实施例4野生西瓜中葫芦素E及糖苷的制备方法
取1kg的野生西瓜粗粉,加入1倍重量的75%乙醇润湿浸泡6小时,然后将润湿好的野生西瓜样品加入到渗漉筒中,用75%乙醇渗漉提取,收集8倍量的渗滤液,减压真空浓缩至无醇味(体积约剩0.5L)。浓缩液中加入200mL 95%乙醇,使得浓缩液醇含量达到20%,离心过滤,得上清液和残渣。上清液加至D101大孔树脂进行分离,依次用水、30%乙醇、50%乙醇、80%乙醇梯度洗脱,分别收集50%和80%乙醇洗脱液,减压浓缩回收溶剂得浸膏。50%乙醇洗脱所得浸膏用Agilent 1260半制备HPLC进行分离纯化,DAD检测器,采集波长为230nm,制备柱规格为反相C18色谱柱(20×250mm),流动相为甲醇:水(体积比45:55),流速为8ml/min,收集保留时间为16.5min左右的流出峰,得6.4g式(II)化合物,纯度为98.3%。80%乙醇洗脱所得浸膏用Agilent 1260半制备HPLC进行分离纯化,DAD检测器,采集波长为230nm,制备柱规格为反相C18色谱柱(20×250mm),流动相为甲醇:水(体积比65:35),流速为8ml/min,收集保留时间为19min左右的流出峰,得2.1g式(I)化合物,纯度为98.0%,提取率为20.5%。
虽然,上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之做一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.苦西瓜中葫芦素E及糖苷的制备方法,其特征在于,用乙醇提取苦西瓜,然后除去乙醇,收集醇提物,再经过大孔树脂柱层析分离,半制备HPLC纯化,分别得到式(I)和式(II)所示的葫芦素E及单葡萄糖苷;
其中,所述苦西瓜是指鲜药材,或干药材粗粉。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)用乙醇提取苦西瓜,然后除去乙醇,收集醇提物;
2)将所述醇提物溶解于乙醇中,使乙醇含量达20%,离心或抽滤收集上清液或滤液;
3)所述上清液或滤液进行大孔树脂柱层析分离,依次用水、30%乙醇、浓度不低于35%的乙醇、浓度不低于60%的乙醇梯度洗脱,分别收集浓度不低于35%和不低于60%的乙醇洗脱组分;
4)将收集得到的浓度不低于35%的乙醇洗脱组分用半制备HPLC进行分离纯化,得到式(II)所示化合物;
5)将收集得到的浓度不低于60%乙醇水洗脱组分用半制备HPLC进行分离纯化,得到式(I)化合物。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤1)中所述乙醇的浓度为40%~95%,提取方法选自渗漉提取、加热回流提取或浸渍提取中的任一种。
4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤3)中所用大孔树脂的型号选自D101、AB-8、HP-20、H-103、DA-201、DM-130、XAD-16或DS-401。
5.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤3)中所述浓度不低于35%的乙醇,其浓度范围为35%~60%;所述浓度不低于60%的乙醇,其浓度范围为60%~95%。
6.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤4)进行HPLC分离纯化时,所用反相色谱柱的填料为C8或C18。
7.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤4)进行HPLC分离纯化时,所用流动相为甲醇-水或乙腈-水,体积比10:90~70:30。
8.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,步骤5)进行HPLC分离纯化时,所用流动相为甲醇-水或乙腈-水,体积比30:70~80:20。
9.根据权利要求1-8任一项所述的方法,其特征在于,所述方法具体为:取1kg苦西瓜干药材粗粉,加入1倍重量的75%乙醇润湿浸泡6小时,然后将润湿好的苦西瓜样品加入到渗漉筒中,用75%乙醇渗漉提取,收集8倍量的渗滤液,减压真空浓缩至无醇味;浓缩液中加入130mL 95%乙醇,使得浓缩液乙醇含量达到20%,离心过滤,得上清液;将上清液加样至D101大孔树脂进行分离,依次用水、30%乙醇、50%乙醇、80%乙醇梯度洗脱,分别收集50%和80%乙醇洗脱液,减压浓缩得浸膏;
50%乙醇洗脱所得浸膏用Agilent 1260半制备HPLC进行分离纯化,DAD检测器,采集波长为230nm,制备柱规格为反相C18色谱柱20mm×250mm,流动相为甲醇:水体积比45:55的混合液,流速为8ml/min,收集保留时间为16.5min的流出峰,得到式(II)所示化合物;
80%乙醇洗脱所得浸膏用Agilent 1260半制备HPLC进行分离纯化,DAD检测器,采集波长为230nm,制备柱规格为反相C18色谱柱20mm×250mm,流动相为甲醇:水体积比65:35的混合液,流速为8ml/min,收集保留时间为19min的流出峰,得到式(I)所示化合物。
10.根据权利要求1-8任一项所述的方法,其特征在于,所述方法具体为:
取1kg苦西瓜鲜药材,用匀浆机打碎,用75%乙醇回流提取3次,每次1h,提取溶剂量分别为6倍量、5倍量和5倍量;合并提取液,减压真空浓缩至无醇味;向浓缩液中加入200mL95%乙醇,使得浓缩液乙醇含量达到20%,离心过滤,得上清液;将上清液加样至D101大孔树脂进行分离,依次用水、30%乙醇、50%乙醇、80%乙醇梯度洗脱,分别收集50%和80%乙醇洗脱液,减压浓缩回收溶剂得浸膏;
50%乙醇洗脱所得浸膏用Agilent 1260半制备HPLC进行分离纯化,DAD检测器,采集波长为230nm,制备柱规格为反相C18色谱柱20mm×250mm,流动相为甲醇:水体积比45:55混合液,流速为8ml/min,收集保留时间为16.5min的流出峰,得到式(II)所示化合物;
80%乙醇洗脱所得浸膏用Agilent 1260半制备HPLC进行分离纯化,DAD检测器,采集波长为230nm,制备柱规格为反相C18色谱柱20mm×250mm,流动相为甲醇:水体积比65:35的混合液,流速为8ml/min,收集保留时间为19min的流出峰,得到式(I)所示化合物。
CN201810091353.5A 2018-01-30 2018-01-30 苦西瓜中葫芦素e及糖苷的制备方法 Pending CN108299535A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810091353.5A CN108299535A (zh) 2018-01-30 2018-01-30 苦西瓜中葫芦素e及糖苷的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810091353.5A CN108299535A (zh) 2018-01-30 2018-01-30 苦西瓜中葫芦素e及糖苷的制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108299535A true CN108299535A (zh) 2018-07-20

Family

ID=62867321

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810091353.5A Pending CN108299535A (zh) 2018-01-30 2018-01-30 苦西瓜中葫芦素e及糖苷的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108299535A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112760310A (zh) * 2020-12-25 2021-05-07 甄融生物科技(上海)有限公司 一种同时制备苦瓜α-MMC和MAP30的方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102138957A (zh) * 2011-03-31 2011-08-03 新疆维吾尔自治区药物研究所 药西瓜提取物及其生产方法和应用
CN104892713A (zh) * 2015-04-16 2015-09-09 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 葫芦素c及其类似物的制备方法与应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102138957A (zh) * 2011-03-31 2011-08-03 新疆维吾尔自治区药物研究所 药西瓜提取物及其生产方法和应用
CN104892713A (zh) * 2015-04-16 2015-09-09 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 葫芦素c及其类似物的制备方法与应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MASAYUKI YOSHIKAWA 等: "Bioactive Saponins and Glycosides. XXVII. Structures of New Cucurbitane-Type Triterpene Glycosides and Antiallergic Constituents from Citrullus colocynthis", 《CHEM. PHARM. BULL.》 *
利程 等: "药西瓜化学成分", 《中国实验方剂学杂志》 *
宋飞: "维药药西瓜化学成分及总三萜、总黄酮提取纯化工艺研究", 《石河子大学硕士学位论文》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112760310A (zh) * 2020-12-25 2021-05-07 甄融生物科技(上海)有限公司 一种同时制备苦瓜α-MMC和MAP30的方法
CN112760310B (zh) * 2020-12-25 2022-09-02 甄融生物科技(上海)有限公司 一种同时制备苦瓜α-MMC和MAP30的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101190258A (zh) 富含小白菊内酯的总倍半萜内酯提取物及其制备方法和应用
EP2329816A1 (en) An anti-cancer active substance from antrodia camphorata, method for preparing the same and use thereof
JP5208499B2 (ja) チモサポニンbiiの調製方法
CN105106556A (zh) 长柱重楼抗癌活性部位pfe-pt3的化学成分分离和鉴定方法
CN113105388B (zh) 一种千金二萜烷化合物及其提取方法和应用
CN103263462A (zh) 小槐花提取物及提取方法和提取物的新用途
CN102180938A (zh) 细梗香草皂苷的制备方法
CN101899082B (zh) 三萜皂苷类化合物、用途及制备方法
CN108164579A (zh) 一种从重楼的地上部分提取分离重楼皂苷h的方法
CN104892713B (zh) 葫芦素c及其类似物的制备方法与应用
CN111440157B (zh) 同时分离夏佛塔苷、维采宁-2和蜕皮激素的方法及应用
CN108299535A (zh) 苦西瓜中葫芦素e及糖苷的制备方法
CN101190259A (zh) 一种广玉兰总内酯提取物及其制备方法和应用
CN113214214B (zh) 关苍术中一种萜类化合物的制备方法和应用
CN106674239B (zh) 一种天目琼花枝叶木脂素及提取方法和用途
CN105820208A (zh) 一种新的睡加内酯类化合物及其制备方法和医药用途
CN103027932A (zh) 一种香加皮抗肿瘤有效组分提取物及其制法和用途
CN104857245A (zh) 紫萼玉簪花总皂苷的制备方法和应用
CN105198954B (zh) 通关藤中c21甾类化合物及其制备方法和应用
CN102764320A (zh) 山大颜提取物及其制备方法与抗肿瘤应用
CN102775461A (zh) 一种20(r)-人参皂苷的制备方法
CN102532243A (zh) 一种同时制备野蔷薇苷和蔷薇苷化合物的方法
CN105037470A (zh) 一种新的三萜类化合物及其制备方法和医药用途
KR101783295B1 (ko) 진세노사이드 Rg4 및 Rg6의 대량 제조방법
CN102188502B (zh) 一种具有抗肿瘤作用的黄三七总皂苷的提取方法及其组成

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20180720

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication