CN108289921B - 用于预防脱发或促进毛发生长的、含有人参衍生的外泌体样囊泡的组合物 - Google Patents

Abstract

本说明书公开了：用于预防脱发或促进毛发生长的、含有人参衍生的外泌体样囊泡的组合物，和制备该组合物的方法。所述人参衍生的外泌体样囊泡的直径可为20纳米至500纳米，并且可以从人参根分离。所述组合物含有作为活性成分的人参衍生的外泌体样囊泡，由此具有通过激活毛乳头细胞(DPCs)来诱导毛发生长的作用。

Description

用于预防脱发或促进毛发生长的、含有人参衍生的外泌体样 囊泡的组合物

技术领域

本说明书公开一种用于预防脱发或促进毛发生长的、含有人参衍生的外泌体样囊泡的组合物；以及一种用于制备所述组合物的方法。

背景技术

大多数动物细胞具有分泌尺寸和组分各异的胞内来源的胞外囊泡的能力。这些胞外囊泡存在于所有生物流体(包括血液、尿液、唾液和细胞培养液)中(Loyer X,Vion AC,Tedgui A,Boulanger CM.Microvesicles as cell-cell messengers in cardiovasculardiseases.Circ Res 2014；114:345-53)(Ohno S,Ishikawa A,Kuroda M.Roles ofexosomes and microvesicles in disease pathogenesis.Adv Drug Deliv Rev 2013；65:398-401)。

胞外囊泡是直径尺寸约20纳米至约5微米的膜结构囊泡。它们在尺寸和组分上是非均质，且包括若干不同的物种，比如外泌体(约30纳米至100纳米)、核外颗粒体、微囊泡(约100纳米至1000纳米)、微粒(microparticles)等。

根据其来源、直径、蔗糖密度、形状、沉降速度，脂质组成、蛋白质标志物、分泌方式(即，分泌方式是信号(诱导型)分泌还是自然(组成型)分泌)等来区分不同类型的胞外囊泡。例如，微囊泡被认为是这样的膜囊泡：具有约100纳米至1,000纳米的不规则形状；朝质膜外部出芽(起源于质膜)；具有整合素、选择素、标志物(包括CD40配体)和脂质(包括磷脂酰丝氨酸)。而且，外泌体被认为是最小膜囊泡，其为约30纳米至100纳米(＜200纳米)的杯状，从次级内体的内部出芽(起源于内体)，并且具有四次跨膜蛋白CD63和CD9、标志物(包括TSG101和ESCRT)、以及脂质(包括胆固醇、鞘磷脂、神经醯胺和磷脂酰丝氨酸)。

胞外囊泡反映分泌该胞外囊泡的来源细胞(供体细胞)的状态，根据分泌该胞外囊泡的细胞而表现出各种生物活性，并且通过在细胞之间转运遗传物质和蛋白质而在细胞间相互作用中发挥重要作用。

同样，在植物中，质膜和多泡体融合导致微囊泡释放至胞外空间中，并且在各种植物物种的各种植物细胞的胞外空间中观察到多泡体中的囊泡(Marchant R,Peat A,Banbury GH.The ultrastructural basis of hyphal growth.New Phytol.1967；66:623-629)(Halperin W,Jensen WA.Ultrastructural changes during growth andembryogenesis in carrot cell cultures.J Ultrastruct Res.1967；18:428-443)(Marchant R,Robards AW.Membrane systems associated with the plasmalemma ofplant cells.Ann Bot.1968；32:457-471)。此外，近来的研究已经报道了衍生自植物细胞的外泌体样纳米颗粒与衍生自哺乳动物细胞的外泌体在纳米级囊泡结构和纳米颗粒组成上相似(An,Q,Hückelhoven,R,Kogel,KH and van Bel,AJ(2006).Multivesicular bodiesparticipate in a cell wall-associated defence response in barley leavesattacked by the pathogenic powdery mildew fungus.Cell Microbiol 8:1009–1019)(Regente,M,Pinedo,M,Elizalde,M and de la Canal,L(2012).Apoplastic exosomelikevesicles:a new way of protein secretion in plants？Plant Signal Behav 7:544–546)。

迄今为止，外泌体主要用作生物标志物，利用外泌体自身的功效而将外泌体用于具体应用的技术尚待开发。尤其是人们对衍生自植物细胞的外泌体样膜结构囊泡的具体应用了解甚少，就人参来说，尽管已经报道了人参衍生的提取物或其单种组分的毛发生长效果，但尚未报导过作为从人参中提取的复杂的生理活性物质的、外泌体样膜结构囊泡的毛发生长效果。专利号为10-1530490的韩国专利公开了与用于预防脱发和促进毛发生长的组合物相关的先前技术。

发明内容

技术问题

一方面，本说明书的目的是提供用于预防脱发或促进毛发生长的组合物，该组合物含有作为活性成分的外泌体样囊泡，该外泌体样囊泡为衍生自人参的复杂的生理活性物质。

另一方面，本说明书的目的是提供一种用于制备该组合物的方法。

解决问题的方案

本说明书中公开的技术提供用于预防脱发或促进毛发生长的组合物，该组合物含有作为活性成分的、衍生自人参的外泌体样囊泡。

一方面，外泌体样囊泡可以从人参根中分离。

另一方面，外泌体样囊泡的直径尺寸可为20纳米至500纳米。

另一方面，可通过以100,000×g或更高对人参细胞外液进行超速离心而使外泌体样囊泡沉淀。

另一方面，外泌体样囊泡在碘克沙醇中的浮力密度可为1.00g/ml至1.20g/ml。

另一方面，该活性成分可激活毛乳头细胞(DPC)从而诱导毛发生长。

另外，本说明书中公开的技术提供一种用于制备所述组合物的方法，包括(1)通过挤压人参获得汁液；(2)将该汁液离心以去除残渣并获得上清液；和(3)将上清液超速离心，以获得外泌体样囊泡。

一方面，步骤(2)中的离心可以500×g至3,000×g进行10至30分钟。

另一方面，步骤(3)中的超速离心可用蔗糖垫密度梯度和碘克沙醇密度梯度来进行。

另一方面，步骤(3)中的超速离心可以100,000×g至200,000×g进行2至6小时。

另一方面，步骤(3)中的外泌体样囊泡可以通过将上清液超速离心，然后分离在碘克沙醇中浮力密度为1.00g/ml至1.20g/ml的部分而得到。

本发明的有益效果

一方面，本说明书中公开的技术具有以下作用：提供用于预防脱发或促进毛发生长的组合物，该组合物含有作为活性成分的外泌体样囊泡，外泌体样囊泡是从人参中提取的复杂的生理活性物质。

该组合物具有防止并预防毛发从头皮脱落的现象或毛发变稀或变细的现象。

该组合物不仅具有实现产生新发的毛发生长功能或促进毛发生长的功能，而且还具有在毛发生长周期中从生长期至退行期的延迟促进的功能，以及使现有毛发健康生长的功能。

另一方面，本说明书中公开的技术具有提供用于制备该组合物的方法的作用。

附图说明

图1展示了根据本说明书的实施例从人参根汁液分离外泌体样囊泡的分步过程。

图2展示了使用透射电子显微镜拍摄的根据本说明书的测试实施例的人参衍生的外泌体样囊泡的图像。

图3展示了在本说明书的测试实施例中，当使用低浓度范围(0.1μg/ml至20μg/ml)的人参衍生的外泌体样囊泡处理原代人毛乳头细胞时，毛囊细胞增殖的结果。

图4展示了在本说明书的测试实施例中，当使用高浓度范围(10μg/ml至100μg/ml)的人参衍生的外泌体样囊泡处理原代人毛乳头细胞时，毛囊细胞增殖的结果。

图5为展示当在本说明书的测试实施例中用人参衍生的外泌体样囊泡处理毛囊器官培养物时，毛干伸长效果的图。

图6为展示当在本说明书的测试实施例中用人参衍生的外泌体样囊泡处理毛囊器官培养物时，毛干伸长效果的照片。

具体实施方式

下面将详细描述本发明。

本说明书提供用于预防脱发或促进毛发生长的组合物，该组合物含有作为活性成分的、衍生自人参的外泌体样囊泡。本说明书提供用于预防脱发或促进毛发生长的组合物，该组合物含有衍生自人参的外泌体样囊泡而非衍生自人参的提取物，具体地衍生自人参细胞外液的外泌体样囊泡作为活性成分。

毛发生长周期可以分为三个主要时期，即生长期、退行期和休止期。在生长期，毛发生长随着毛囊深入皮肤生长并且细胞迅速增殖而发生。下一个现象是细胞分裂的分解明显的过渡阶段的退行期，在这个过程中，毛囊逐渐退化并且毛发生长停止。在该下一个现象的休止期中，退化的毛囊包括具有密集堆积的毛乳头细胞的毛芽。毛芽中细胞迅速增殖、真皮乳头肿胀和基底膜成分合成诱导从休止期开始的新生长期。一般而言，“毛发生长”发生在生长期，且休止期向生长期的诱导以及生长期向退行期的延迟促进了“毛发生长”。

在本说明书中，术语“脱发”是指毛发从头皮脱落的现象或毛发变稀或变细的现象，术语“预防脱发”是指预防和抑制如上所述的脱发现象，并且术语“促进毛发生长”不仅指产生新毛发的毛发生长功能或促进毛发生长的功能，而且还指促进从生长期向退行期的延迟的功能以及使现有毛发健康生长的功能。

在示例性实施例中，人参可以是选自人参属植物的种子、根、茎、叶和果实中的一种或多种，具体的人参属植物包括高丽参(Panax ginseng)、西洋参(Panaxquinquefolium)、三七(Panax notoginseng)、竹节参(Panax japonicum)、三叶参(Panaxtrifolium)、假人参(Panax pseudoginseng)或越南人参(Panax vietnamensis)，可以使用根据加工条件和生长环境分类而未限制品种或种类的红参、新鲜人参、白参、栽培人参、栽培的野生人参、或野生人参(包括野生的栽培人参和野生人参培养副产物)。

在本说明书中，术语“外泌体样囊泡”是指从细胞分泌并释放至胞外空间中的纳米级胞外囊泡，即胞外囊泡，并且该囊泡包括外泌体并以最广泛的概念使用，包括与外泌体在纳米级囊泡结构和组成上相似的囊泡。

外泌体样囊泡为膜结构囊泡，其内部和外部彼此不同，并且外泌体样囊泡具有细胞膜脂质、膜蛋白、遗传物质和细胞的细胞质组分，从而允许间接地了解细胞的性质和状态。另外，外泌体样囊泡与其他细胞和组织结合以转运膜成分、mRNAs、miRNAs、蛋白质(生长激素、细胞因子等)，并作为胞外转运蛋白，通过将这些递质物质转运至受体细胞来介导细胞间相互作用。

在本说明书中，术语“衍生自人参的外泌体样囊泡”是指人参细胞分泌的纳米级外泌体样囊泡。可以从人参细胞外液中分离外泌体样囊泡，并且分离的外泌体样囊泡可以以整体或部分与原本存在的组织或细胞物理分离。

在示例性实施例中，可以从人参根分离外泌体样囊泡。

一方面，外泌体样囊泡可以是直径为20纳米至500纳米的胞外囊泡。另一方面，外泌体样囊泡可以是直径为20纳米或更大、30纳米或更大、40纳米或更大、50纳米或更大、60纳米或更大、70纳米或更大、80纳米或更大、90纳米或更大、100纳米或更大和500纳米或更小、450纳米或更小、400纳米或更小、350纳米或更小、300纳米或更小、250纳米或更小、200纳米或更小、150纳米或100纳米或更小的胞外囊泡。

另一方面，可通过以100,000×g或更高，特别是100,000×g至200,000μg×g，或以100,000μg×g将人参细胞外液超速离心，而使该外泌体样囊泡沉淀。

另一方面，外泌体样囊泡在碘克沙醇中的浮力密度可为1.00g/ml至1.20g/ml、1.03g/ml至1.20g/ml、或1.06g/ml至1.20g/ml。该浮力密度是指通过密度梯度离心法测量的密度。

另一方面，例如，外泌体样囊泡可以具有化学或物理改性的膜组分，从而有效地在目标细胞中传导期望的功能。例如，外泌体样囊泡的膜组分可以通过化学方法使用硫醇基(-SH)或胺基(-NH₂)进行修饰，或者可以通过将目标诱导物质、细胞膜融合物质和聚乙二醇化学结合至外泌体样囊泡进行化学改性。

在示例性实施例中，可以通过使用选自超速离心、差速离心、平衡密度离心、密度梯度、过滤、透析和自由流电泳的一种或多种方法分离外泌体样囊泡，但是分离外泌体样囊泡的方法不限于此。

密度梯度是区别具有不同密度的材料的最常用方法，并且由于外泌体样囊泡具有可区分的密度，所以根据本说明书的外泌体样囊泡可以通过密度梯度来分离。该方法的具体实例可以使用密度梯度分离材料如ficoll、甘油、蔗糖、氯化铯或碘克沙醇进行，但是该方法不限于此。一方面，密度梯度可以与超速离心等一起使用。另一方面，凝胶过滤或超滤可用于筛选外泌体样囊泡。又一方面，可以使用透析来代替过滤以去除小分子。再一方面，可以使用自由流电泳。

在示例性实施例中，人参衍生的外泌体样囊泡可以通过以下步骤获得：(1)从人参获得含有人参细胞外液的汁液；(2)将汁液离心以去除残渣并获得上清液；并且(3)将上清液超速离心以获得外泌体样囊泡。

在示例性实施例中，步骤(1)中的汁液是从人参中挤出的液体，并且可以通过适当使用诸如机械分解和用化学物质处理的方法来获得。一方面，可以通过压榨人参来获得汁液，并且可以由本领域技术人员根据本领域已知的方法适当地选择和执行压榨过程。

在示例性实施例中，步骤(2)中的离心可以以500×g至3,000×g进行10至30分钟。此时，可以通过改变速度或时间来分步进行离心。

在示例性实施例中，步骤(3)中的超速离心可以使用蔗糖垫密度梯度和碘克沙醇密度梯度进行超速离心。

在示例性实施例中，步骤(3)中的超速离心可以以100,000×g至200,000×g进行2至6小时。此时，超速离心可以通过改变速度或时间来分步进行。

在示例性实施例中，步骤(3)中的超速离心可以通过一系列超速离心过程进行，包括使用蔗糖垫密度梯度以100,000×g至200,000×g超速离心2至6小时并且使用碘克沙醇密度梯度进行超速离心。

在示例性实施例中，可以通过分离由超速离心然后分馏上清液获得的且浮力密度为1.00g/ml至1.20g/ml的部分来获得步骤(3)中的外泌体样囊泡。此时，分离的部分可以进一步用缓冲溶液稀释并进行超速离心，具体地，可以将分离的部分以100,000×g超速离心2小时以分离直径为20纳米至500纳米的粒状外泌体样囊泡。

另一方面，本说明书提供一种预防脱发或促进毛发生长的方法，该方法包括将有效量的衍生自人参的外泌体样囊泡给药至有需要的受试者，以预防脱发或促进毛发生长。

另一方面，本说明书提供了用于预防受试者脱发或促进受试者毛发生长的人参衍生的外泌体样囊泡。

另一方面，本说明书提供了人参衍生的外泌体样囊泡在制备用于预防受试者脱发或促进受试者毛发生长的含有人参衍生的外泌体样囊泡的组合物中的用途。

在示例性实施例中，人参衍生的外泌体样囊泡可以以药物组合物、化妆品组合物或食物组合物的形式施用或给药至受试者。

在示例性实施例中，可以将人参衍生的外泌体样囊泡施用或给药至受试者的皮肤或头皮。

在示例性实施例中，该组合物可以是冻干剂型。该组合物可以是即用型密封包装或包装容器中的冻干剂型。

本说明书还提供一种预防脱发的试剂盒或促进毛发生长的试剂盒，该试剂盒包括组合物和无菌水或纯净水，该组合物含有衍生自人参的外泌体样囊泡作为活性成分并具有冻干剂型。该试剂盒可以为即用型密封包装或包装容器中的试剂盒。

根据示例性实施例，该组合物可以是药物组合物。

除了人参衍生的外泌体样囊泡之外，该药物组合物可以另外含有防腐剂、稳定剂、湿润剂或乳化促进剂、药物佐剂(比如用于控制渗透压的盐和/或缓冲剂)，以及其它治疗上有用的物质。根据常规方法，该药物组合物可以配制成各种形式的口服或胃肠外给药试剂。

口服给药试剂的实例可以包括片剂、丸剂、硬胶囊和软胶囊、液体、悬浮剂、乳剂、糖浆、粉剂、粉剂药物、极微粒剂、颗粒和球团，并且除了活性成分外，这些剂型还可以含有表面活性剂、稀释剂(例如，乳糖、右旋葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素、甘氨酸等)和润滑剂(例如，二氧化硅、滑石、硬脂酸及其镁或钙盐、和聚乙二醇)。该片剂还可以含有粘合剂，如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和聚乙烯吡咯烷，该片剂可以任选含有药物添加剂，比如淀粉、琼脂、崩解剂(比如海藻酸或其钠盐)、吸收剂、着色剂、风味剂和甜味剂。该片剂可以通过常规混合、制粒或包衣方法来制备。

另外，胃肠外给药形式的剂型可以是透皮给药形式的剂型，例如，该剂型可以是这样的剂型：比如注射剂、滴剂、软膏剂、洗液、凝胶、霜剂、喷雾剂、悬浮液、油、栓剂或贴剂，但不限于此。

该活性成分的剂量在本领域技术人员的水平内，并且药物的日剂量取决于各种因素，比如待给药的受试者的疾病进展、发病时间、年龄、健康状况和并发症。但该组合物一方面可以以1μg/kg至200mg/kg的量进行给药，并且另一方面每天可以以50μg/kg至50mg/kg的量通过分成一次到三次进行给药，并且该剂量不以任何方式限制本发明的范围。

所述药物组合物可以是用于皮肤的外用制剂，并且用于皮肤的外用制剂可以为通用术语，包括在皮肤外部施用的任何制剂，并且可以包括药物的各种剂型。

根据示例性实施例，所述组合物可以为化妆品组合物。

除了人参衍生的外泌体样囊泡之外，所述化妆品组合物还可以含有功能添加剂和待包含在一般化妆品组合物中的组分。该功能添加剂可以包括选自水溶性维生素、油溶性维生素、聚合肽、聚合多糖、鞘脂和海藻提取物的组分。除了这些以外，待混入该化妆品组合物中的组分可以包括油和脂组分、保湿剂、润肤剂、表面活性剂、有机或无机颜料、有机粉末、紫外线吸收剂、防腐剂、杀菌剂、抗氧化剂、植物提取物、pH调节剂、醇、色素、香料、血液循环促进剂、保冷剂、止汗剂、纯净水等。

所述化妆品组合物的剂型没有特别限制并且可以根据目的适当选择。例如，所述化妆品组合物可以制备成一种或多种选自以下的剂型：润肤液、皮肤柔软剂、皮肤调理液、收敛剂、洗液(lotions)、乳白洗液(milky lotions)、保湿乳液、滋养乳液、按摩霜、营养霜、保湿霜、护手霜、粉底、精华液、滋养精华、面膜(packs)、肥皂、洁面泡沫、洁面乳、清洁霜、沐浴露和洁肤露，但是该剂型不限于此。

在本发明剂型为糊剂、霜剂或凝胶的情况下，动物纤维、植物纤维、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、有机硅(silicone)、膨润土、二氧化硅、滑石、氧化锌等可以用作载体组分。

在本发明的剂型为粉剂或喷雾剂的情况下，可以使用乳糖、滑石、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉末作为载体组分，并且特别是在剂型为喷雾剂的情况下，该剂型可以另外含有推进剂如氯氟烃、丙烷/丁烷或二甲醚。

在本发明的剂型为溶液或乳液的情况下，将溶剂、溶解剂或乳化剂用作载体组分，其实例可以包括水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁基乙二醇油、甘油脂肪酸酯、聚乙二醇的脂肪酸酯或失水山梨醇。

在本发明的剂型为悬浮液的情况下，液体稀释剂(比如水、乙醇或丙二醇)，悬浮剂(比如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇酯或聚氧乙烯失水山梨醇酯)、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂、tracant等可用作载体组分。

在本发明的剂型为含表面活性剂的清洁剂的情况下，脂肪族醇硫酸盐、脂肪族醇醚硫酸盐、磺基琥珀酸单酯、羟乙基磺酸盐、咪唑啉衍生物、牛磺酸甲酯、肌氨酸盐、脂肪酸酰胺醚硫酸盐、烷基酰胺甜菜碱、脂肪族醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、亚麻酸衍生物、乙氧基化甘油脂肪酸酯等可用作载体组分。

根据示例性实施例，所述组合物可以是食物组合物。

所述食物组合物可以是液体或固体形式的剂型，所述食物组合物的实例可以包括各种食物、饮品、胶、茶、维生素复合物和保健食品，并且所述食物组合物可以以粉剂、颗粒、片剂、胶囊或饮品的形式使用。本领域技术人员可根据剂型或使用目的毫无困难地选择本领域常用的组分，并将其混入各剂型的食物组合物中，并且在所述活性成分与其他原料同时施用的情况下可获得协同效应。

除了本说明书中公开的活性成分外，对食物组合物中可能含有的液体组分没有特别限制，并且可以在普通饮品中加入各种风味剂或天然碳水化合物作为附加组分。天然碳水化合物的实例可包括单糖、二糖(比如葡萄糖和果糖)、多糖(比如麦芽糖和蔗糖)、常见的糖(比如糊精和环糊精)、和糖醇(比如木糖醇、山梨醇、赤藓糖醇)。关于风味剂，可以有利地使用天然风味剂(索马甜(tau martin)、甜菊提取物(例如莱鲍迪甙A和甘草甜素)以及合成风味剂(例如糖精和阿斯巴甜)。该天然碳水化合物的比率通常可以为约1克至20克，并且一方面，在每100毫升本说明书中公开的组合物中，该天然碳水化合物的比率通常可以为约5克至12克。

一方面，该食物组合物可含有各种营养素、维生素、矿物质(电解质)、风味剂(比如合成风味剂和天然风味剂)、着色剂和增稠剂(干酪、巧克力等)、果胶酸及其盐、海藻酸及其盐、有机酸、保护胶体增稠剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、醇和用于碳酸饮品中的碳酸化剂。另一方面，所述食物组合物可以含有用于生产天然果汁和蔬菜饮品的果肉。这些组分可以独立使用或组合使用。该添加剂的比例可以变化，但通常以占每100重量份的本说明书中公开的组合物的0.001重量份至约20重量份来选择。

实施例

在下文中，将参照实施例更详细地描述本发明。本领域技术人员应该清楚，这些实施例仅用于说明的目的，并且不能将本发明的范围解释为受限于这些实施例。

实施例1.人参衍生的外泌体样囊泡的分离

(步骤1)首先，准备并压榨4年生人参根，以制备含有人参根细胞外液的汁液。

(步骤2)在4℃下将汁液以500×g离心10分钟以获得上清液，并且在4℃下再次将上清液以3,000×g离心20分钟以获得上清液。

(步骤3)向35ml超速离心管中依次加入0.5ml的2.0M蔗糖，1ml的0.8M蔗糖和32ml去除了异物的上清液，并在4℃下以100,000×g超速离心2小时。在超速离心后，通过密度将人参根外泌体样囊泡置于2.0M蔗糖层和0.8M蔗糖层之间。此后，从管的顶部去除溶液，以分离含有人参根外泌体样囊泡的层。

(步骤4)将如此分离的含有人参根外泌体样囊泡的层进行密度梯度超速离心。具体地，将由此分离的0.42ml的含有人参根外泌体样囊泡的层和2.08的60％碘克沙醇混合，最终制备2.5ml的50％碘克沙醇，将2.5ml的50％碘克沙醇置于12ml超速离心管中，将2.5ml的35％碘克沙醇、2.5ml的20％碘克沙醇和2.5ml的150mM NaCl/20mM HEPES依次置于其上，并在4℃下以200,000×g超速离心4小时。此后，从管顶部获得量为1ml的部分，并测量其密度以获得与外泌体样囊泡密度对应的部分3(1.08g/ml)(参见图1)。

(步骤5)将如此获得的部分3用60ml的HBS(HEPES-缓冲盐水)稀释，置于容量为70ml的超速离心管中，并在4℃下以100,000×g超速离心2小时以获得粒状人参衍生的外泌体样囊泡。

测试实施例1.人参衍生的外泌体样囊泡的透射电子显微镜分析

使用透射电子显微镜(TEM)分析实施例1中获得的人参衍生的外泌体样囊泡的尺寸和形状。

图2展示了使用透射电子显微镜拍摄的人参衍生的外泌体样囊泡的图像，并且证实人参衍生的外泌体样囊泡的直径为50纳米至100纳米并且通常为球形。

测试实施例2.毛囊细胞的增殖效果

用不同浓度的实施例1中分离的人参根提取的外泌体样囊泡处理原代人毛乳头细胞(hDPC)，并检测人参衍生的外泌体样囊泡对毛囊细胞增殖的效果。

具体地，将hDPCs(第6,7代)以2×10⁴个细胞/孔在96孔板中培养24小时(5％CO₂，37℃)，并用不同浓度(0.1μg/ml至100μg/ml)的人参衍生的外泌体样囊泡处理。此后，将如此处理的hDPCs培养48小时，改变培养基，然后通过MTT测定法(每孔100μg，测量570nm下的吸光度)评估增殖效果。

图3展示了当使用低浓度范围(0.1μg/ml至20μg/ml)的外泌体样囊泡处理原代人毛乳头细胞时，毛囊细胞增殖的结果；图4展示了当使用高浓度范围(10μg/ml至100μg/ml)的外泌体样囊泡处理原代人毛乳头细胞时，毛囊细胞增殖的结果。在图3和图4中，纵轴表示毛囊细胞增殖(相对于对照(CTL)的百分比)的结果，并且使用5％FBS阳性对照进行比较。结果发现，当用人参衍生的外泌体样囊泡处理原代人毛乳头细胞时，获得使毛囊细胞增殖的效果。

测试实施例3.毛干伸长效果

用各种浓度的实施例1中分离的人参根提取的外泌体样囊泡处理毛囊器官培养物，并检测人参衍生的外泌体样囊泡对毛干伸长的效果。

具体地，从43岁和63岁男性受试者的枕区的头皮组织中逐一分离毛囊器官，并在威廉氏E培养基(L-谷氨酰胺(2mM)、胰岛素(10μg/ml)、氢化可的松(10ng/ml)、抗生素(1％)和抗真菌剂(1％))中培养。将未用药物处理但已经生长的毛囊组织作为对照，用50μM的MNX(米诺地尔)处理的组和用20ppm的人参主成分处理的组作为阳性对照。用10μg/ml的实施例1中分离的人参提取的外泌体样囊泡处理实验组。在处理后的第3天和7天，分别测量长度并拍照。

图5和图6展示了用10μg/ml的外泌体样囊泡处理毛囊器官培养物时毛干伸长的结果。结果发现，当用10μg/ml的外泌体样囊泡处理毛囊器官培养物时，由于与对照相比，观察到毛干伸长，因此人参衍生的外泌体样囊泡具有毛干伸长效果。

下文描述了根据本说明书的一个方面的组合物的剂型实施例，但该组合物也适用于各种其他剂型，并且旨在仅用于说明而非限制本发明。

[剂型实施例1]软胶囊

将50mg的实施例1的人参衍生的外泌体样囊泡、80mg至140mg左旋肉碱、180mg大豆油、2mg棕榈油、8mg硬化植物油、4mg黄梨和6mg卵磷脂混合，并按照常规方法将混合物按每个胶囊填充400mg来制备软胶囊。

[剂型实施例2]片剂

将50mg的实施例1的人参衍生的外泌体样囊泡、200mg低聚半乳糖、60mg乳糖和140mg麦芽糖混合，使用流化床干燥器将混合物造粒，向颗粒加入6mg糖酯然后使用压片机将混合物压片以制备片剂。

[剂型实施例3]颗粒

将50mg的实施例1的人参衍生的外泌体样囊泡、250mg无水结晶葡萄糖和550mg淀粉混合，使用流化床造粒机将混合物造粒，然后将颗粒装入袋中以制备颗粒。

[剂型实施例4]饮品

将50mg的实施例1的人参衍生的外泌体样囊泡、10g葡萄糖、0.6g柠檬酸和25g液态低聚糖混合，向混合物中加入300ml纯净水，并在每个瓶中填充200ml由此获得的混合物。填充于瓶中的混合物在130℃下灭菌4至5秒以制备饮料饮品。

[剂型实施例5]软膏剂

通过常规方法根据下面的表1中提供的组合物制备软膏剂。

表1

[剂型实施例6]化妆液制剂

通过常规方法根据下面的表2中提供的组合物制备化妆液制剂。表2

成分	含量(重量百分比)
		实施例1的人参衍生的外泌体样囊泡	2.00
羟乙基纤维素(2％水溶液)	12.00
		黄原胶(2％水溶液)	2.00
1,3-丁二醇	6.00
		浓甘油	4.00
透明质酸钠(1％水溶液)	5.00
		纯净水	余量
总计	100.00

[剂型实施例7]洗发水

通过常规方法根据下面的表3中提供的组合物制备洗发水。

表3

成分	含量(重量百分比)
		实施例1的人参衍生的外泌体样囊泡	2.00
月桂基硫酸钠	10.00
		椰油酰胺丙基甜菜碱	3.00
羧基乙烯基聚合物	0.30
		聚季铵盐-10	0.20
十六烷基三甲基氯化铵	0.10
		纯净水	余量
总计	100.00

[剂型实施例8]洗剂

通过常规方法根据下面的表4提供的组合物制备洗剂。

表4

成分	含量(重量百分比)
		实施例1的人参衍生的外泌体样囊泡	2.00
鲸蜡醇	2.00
		硬脂醇	2.50
二十二烷醇	0.50
		有机硅乳液	0.40
环甲基硅氧烷	1.00
		二甲基二硬脂酰氯化铵	0.10
纯净水	余量
		总计	100.00

尽管已经详细描述了本发明的具体部分，但是本领域技术人员将会理解，这些具体描述仅仅是优选实施例，并且本发明的范围不限于此。因此，本发明的实际范围将由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (6)

1.自人参分离的纳米级外泌体样囊泡在制备用于预防脱发或促进毛发生长的组合物中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述纳米级外泌体样囊泡从人参根分离。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述纳米级外泌体样囊泡的直径为20纳米至500纳米。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，通过以100,000×g或更高的离心力对人参细胞外液进行超速离心而使纳米级外泌体样囊泡沉淀。

5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述纳米级外泌体样囊泡在碘克沙醇中的浮力密度为1.00g/ml至1.20g/ml。

6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述纳米级外泌体样囊泡激活毛乳头细胞(DPCs)，以诱导毛发生长。

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