KR102401083B1 - 항산화용 화장료 조성물 및 이를 포함하는 기능성 화장품 - Google Patents

Abstract

본 발명은 알로에로부터 유래된 식물 엑소좀을 유효성분으로 하는 기능성 화장료 조성물 및 이를 함유한 기능성 화장품에 관한 것이다. 알로에 엑소좀은 이중지질막 구조로서 피부 세포에 흡수되며, 흡수된 알로에 엑소좀은 피부 세포 내에서 활성산소를 제거하고 다양한 항산화 신호기전을 자극하여 항산화 효능을 나타내므로 피부 노화 방지, 피부 미백, 주름 개선 및 피부 세포 재생을 위한 기능성 화장품 제조에 유용하게 사용할 수 있다.

Description

항산화용 화장료 조성물 및 이를 포함하는 기능성 화장품{Antioxidant cosmetic composition and functional cosmetics comprising the same}

본 발명은 항산화용 화장료 조성물 및 이를 포함하는 기능성 화장품에 관한 것이다.　

엑소좀은 세포 간 커뮤니케이션의 중요한 매개체 역할을 하는 나노소포체이다. 엑소좀은 모세포에서 유래한 단백질 및 유전물질, 지질 등 다양한 생체활성인자를 이중지질막 내외부에 담지하고 있으며, 주변 세포로 전달되어 세포의 생존, 증식, 분화, 이동 및 사멸을 조절한다고 알려져 있다. 최근 엑소좀의 생체활성 기능을 이용하여 다양한 의약품 및 기능성 화장품이 개발되고 있다.

종래 기술의 경우 대부분 인간 세포로부터 유래된 엑소좀을 이용하여 연구하였으며, 동물 이외의 세포로부터 유래한 엑소좀에 대한 연구는 비교적 한정적이다. 최근 연구에 따르면, 식용 식물에서 분리된 엑소좀은 동물 세포에서 분비되는 엑소좀에 비해 안전하고 체내 환경에서의 안정성이 매우 높다고 알려져 있다. 뿐만 아니라 동물의 조직 혹은 동물 세포와 비교하여 엑소좀을 생산할 수 있는 원료 식물을 쉽게 대량으로 얻을 수 있다는 장점이 있다. 그러나 현재까지 식물 유래 엑소좀의 표식 마커 및 내부 인자에 대해 연구된 바가 거의 없고 크기나 형태로 엑소좀을 확인하고 있다.

본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.

대한민국 공개특허공보 제10-2017-0038383호

일부 식물 유래 엑소좀의 경우 멜라닌 생성 효소 및 콜라겐 분해 효소를 억제하고, 탈모방지 및 모발 성장 등 다양한 기능을 갖는 것으로 보고되어 있지만, 식물 엑소좀이 항산화 효능을 가질 수 있는지 여부에 대해서는 알려진 바가 없다.

이러한 상황 하에서 본원발명자들은 알로에 엑소좀의 현저한 항산화 효능을 밝혀내었는바, 본 발명의 목적은 항산화 기능을 갖는 알로에 엑소좀을 유효성분으로 하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 조성물을 화장품 원료로서 사용하여 제조한, 피부 보호, 주름 개선 및 피부 미백 등의 기능성 화장품을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 알로에 엑소좀을 포함하는 화장료 조성물을 대상체에 적용하는 것을 포함하는, 피부 항산화 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 알로에 엑소좀을 포함하는 화장료 조성물의 피부 항산화를 위한 화장품 용도를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 알로에 엑소좀을 포함하는 화장료 조성물의 피부 미백, 주름 개선 및 피부 세포 재생을 위한 화장품 용도를 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.

본 발명의 하나의 관점은 알로에 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 항산화용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명에서 사용된 용어, "알로에 엑소좀"이란 알로에에서 추출된 50 ~ 300 nm 정도의 크기, 바람직하게는 50~200 nm의 크기를 갖는 엑소좀 혹은 엑소좀 유사 세포외소포체를 통칭한다. 알로에 엑소좀은 이중지질막으로 이루어진 형태의 50 내지 200 nm의 균일한 크기의 입자를 형성하고 있다.

기존 다양한 식물 추출물이 항산화 물질을 포함하는 것으로 알려져 있지만, 수용성 추출물 형태로는 피부 장벽 통과가 어렵고, 또한 유효성분인 항산화 물질이 외부에 노출되어 쉽게 변질되므로 화장품 산업에 적용이 어려운 문제점이 있었다. 반면에 엑소좀은 이중지질막으로 이루어진 나노 입자로서 receptor-mediated endocytosis 및 membrane fusion에 의해 피부 세포로 흡수되며, 또한 내부에 포함되어 있는 유효성분들이 외부에 직접 노출되지 않아 쉽게 변질되지 않고 생물학적 활성을 장기간 유지할 수 있어 화장품 산업에 상업적으로 이용하기에 대단히 유리하다.

본 발명에서 알로에 엑소좀은 원료 식물인 알로에에서 유래한 항산화 성분에 의해 피부 노화, 색소 침착 및 염증의 원인이 되는 활성산소를 억제하는 기능을 가진다. 구체적으로, 폴리페놀 및 항산화 효소 촉진제 등이 함유된 알로에 엑소좀은 피부 세포에 축적된 활성산소를 억제하여 피부 재생, 주름 개선, 미백 및 염증 완화 등의 효능을 나타낸다.

본 발명의 원료 식물인 알로에는 Aloe 속(Genus)에 속하는 여러해살이　다육식물로서, 알로에 베라(Aloe vera), 알로에 아보레센스(Aloe arborescens), 알로에 사포나리아(Aloe saponaria), 알로에 페록스(Aloe ferox) 등을 포함하며, 바람직하게는 알로에 베라이다.　원료 식물 부위로는 알로에 식물 전체 또는 과육, 껍질, 씨앗, 줄기, 뿌리, 열매, 꽃 등을 포함하는 1개 이상의 부위를 사용할 수 있다.

본 발명에서 알로에에서 추출한 알로에 엑소좀은 조성물 1 mL의 단위부피 당 1 × 10⁶ 내지 1 × 10¹² 개, 바람직하게는 1 × 10⁷ 내지 1 × 10¹² 개 입자의 함량으로 포함될 수 있다.

알로에 엑소좀은 자체적으로 Superoxide dismutase(SOD)와 유사한 항산화 기능을 갖으며, 이는 세포외부에 존재하는 활성산소와 세포내부에 축적된 활성산소의 분해를 촉진시킨다.

특히, 항산화 기능을 갖는 알로에 엑소좀은 receptor-mediated endocytosis 및 membrane fusion에 의해 피부 세포로 흡수되며, 흡수된 알로에 엑소좀은 피부 세포 내 항산화 신호기전을 자극하여 SOD, catalases(CAT) 등의 유전자 발현을 증가시키고 항산화 효능을 나타낸다.

일 구현예에서, 본 발명의 알로에 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 항산화용 화장료 조성물은 수용액, 현탁액, 유화액, 크림, 동결 용액, 분무건조 분말 및 동결건조 분말로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형으로 제공될 수 있다.

본 발명의 다른 관점은 알로에 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 항산화용 화장료 조성물을 포함하는 화장품을 제공하는 것이다.

상기 화장품은 일반 피부 화장품 제조에 사용되는 일반적인 성분, 예를 들면 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 필요한 만큼 적용 배합할 수 있다. 또한, 상기 화장품은 미스트, 세럼, 영양화장수, 유연화장수, 유연수, 유액, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 파우더, 메이크업베이스, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 세안제, 트리트먼트, 미용액, 미용팩, 연고제, 겔제, 리니멘트제, 액제, 패치, 분무제, 입욕제, 선스크린제, 선오일 및 헤어제품으로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형으로 제조될 수 있으며, 이들 각 제형에 적합하고 당업계에 주지된 각종의 통상적인 담체와 첨가제를 포함할 수 있다.

이와 같은 본 발명의 화장품은 피부 노화 방지, 피부 미백, 주름 개선 및 피부 세포 재생으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상의 효능을 갖는 기능성 화장품일 수 있다.

본 발명의 또 다른 관점은 상기 알로에 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 항산화용 화장료 조성물의 제조방법으로서, 알로에를 파쇄하는 단계; 원심분리를 수행하는 단계; 및 접선흐름여과(tangential-flow filtration, TFF)를 수행하는 단계를 포함하는 제조방법을 제공하는 것이다.

상기 원료 식물을 파쇄하는 과정은 원료 식물과 버퍼 용액을 무게비로 1:1 내지 1:10 범위로 섞은 혼합물을 기계적 분쇄하는 과정을 포함하는 것일 수 있으며, 이는 10 내지 1,000 rpm의 속도로 회전하는 칼날에 의해 기계적으로 식물 혼합물을 분쇄하는 것에 의하여 수행될 수 있다.

상기 원심분리 방법은 저속 원심분리(low-speed centrifugation), 고속 원심분리(high-speed centrifugation), 초원심분리(ultracentrifugation) 및 이들의 조합으로부터 선택될 수 있는데, 바람직하게는 초원심분리(ultracentrifugation)를 포함하는 것일 수 있다. 저속 원심분리는 6,000 rpm (6,000 xg) 이하의 속도를 낼 수 있고 주로 세포나 핵 등과 같이 쉽게 침전되는 시료의 원심 분리에 이용되고, 고속 원심분리는 최고속도가 20,000-25,000 rpm (60,000 xg) 정도이며, 초원심분리는 최고속도가 40,000-80,000 rpm (600,000 xg) 정도인 원심분리법을 의미한다.

상기 접선흐름여과법(tangential-flow filtration, TFF)은 용액이 여과 막의 직각 방향으로 흘러가며, 용액 내에 존재하는 작은 크기의 불순물을 걸러내고 큰 크기의 엑소좀을 분리하는 여과 방식이다. 종래 여과 방식보다 여과필터의 기공에 엑소좀의 흡착 혹은 막 기공의 막힘을 최소화할 수 있으며, 이에 따른 공정 스케일업(process scale-up) 및 GMP 공정 응용에 용이하다. 상기 접선흐름여과는 한외여과를 수행할 수 있는 중공 섬유(Hollow fiber) TFF 및 막(membrane) TFF로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상일 수 있으며, 바람직하게는 분자량 컷오프(Molecular weight cutoff; MWCO)가 100,000 Da 내지 500,000 Da인 TFF 필터를 사용하는 것일 수 있다.

이와 같이 본 발명에 따른 알로에 엑소좀은 기계적인 분쇄, 단계적인 초원심분리 및 접선유동여과(tangential flow filtration, TFF)법을 통해 알로에로부터 분리될 수 있으며, 이들 엑소좀은 항산화 기능을 갖는 폴리페놀 등을 다량 함유하고 있다.

알로에 엑소좀은 자체적으로 항산화 기능을 갖으며, 이는 세포외부에 존재하는 활성산소와 세포내부에 축적된 활성산소의 분해를 촉진시킨다. 특히, 알로에 엑소좀은 이중지질막 구조로서 피부 세포에 흡수되며, 흡수된 알로에 엑소좀은 피부 세포 내에서 활성산소를 제거하고 항산화 신호기전을 자극하여 다양한 항산화 유전자 발현을 증가시키는 것에 의하여 항산화 효능을 나타낸다. 또한, 알로에 엑소좀의 우수한 안정성은 수용액, 동결액 및 동결건조 파우더 등 다양한 형태로 기능성 화장품에 활용 가능하다.

도 1은 알로에 엑소좀의 분리 방법에 대한 공정 모식도이다.
도 2는 알로에 엑소좀의 형태분석(TEM) 결과이다.
도 3은 알로에 엑소좀의 특성분석(DLS 및 NTA) 결과이다.
도 4는 알로에 엑소좀의 단백질 및 폴리페놀 함량 분석 결과이다.
도 5는 알로에 엑소좀의 HaCaT 세포 독성 평가 결과이다.
도 6은 알로에 엑소좀의 항산화 활성도 분석 결과이다.
도 7은 알로에 엑소좀의 HaCaT 세포 내부 활성산소 억제 분석 결과이다.
도 8은 알로에 엑소좀에 의한 HaCaT 세포의 활성산소 억제 관련 유전자 발현 결과이다.
도 9는 알로에 엑소좀에 의한 HaCaT 세포의 활성산소 억제 관련 단백질 발현 결과이다.
도 10은 알로에 및 생강 유래 엑소좀의 SOD 유사활성을 측정한 결과이다.
도 11은 알로에 엑소좀의 액상, 동결 및 동결건조 제형 사진이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명 하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

실시예

< 실시예 1> 알로에 베라 유래 엑소좀 분리

알로에 엑소좀은 원료 식물인 알로에 베라로부터 초원심분리와 접선유동여과(TFF) 방법을 이용하여 분리하였다.

구체적으로, 알로에 베라 껍질을 인산완충식염수(Phosphate-buffered saline, PBS)와 1:1(w/w) 내지 1:10(w/w)의 무게비를 맞추어 블랜더에 넣은 후 분쇄하였다. 1,000 ×g로 10분 동안 원심 분리하여 상층액을 수거하고, 상층액은 2000 ×g 20분, 3,000 ×g 30분, 그리고 10,000 ×g로 60분 동안 순차적으로 원심 분리하였다. 이후 상층액은 4℃에서 100,000 ×g로 70분 동안 초원심분리하였고, 이 과정을 통해 액포(vacuole)를 제거하였다. 최종적으로 상층액은 버리고 남은 pellet을 현탁시킨 후 TFF 시스템을 통해 엑소좀을 분리하였다. 구체적으로, TFF 시스템 내 100 내지 500 kDa의 molecular cut off를 갖는 필터를 사용하여 여과하였으며, 필터의 기공보다 작은 기타 불순물 입자들을 제거하고 엑소좀을 함유한 용액을 농축하였다. 분리된 엑소좀은 사용하기 전까지 -70 ℃ 이하 냉동보관 하였다.

< 실시예 2> 알로에 엑소좀의 특성 평가

상기 실시예 1에서 분리된 알로에 껍질 유래 엑소좀은 다음의 방법을 통하여 엑소좀 특성 평가를 진행하였다. 엑소좀의 모양은 주사전자현미경(TEM)을 통해 200 nm 이하 구형의 미세구조를 확인하였다(도면 2). 미세입자 크기는 동적광산란광도계(DLS)를 통해 분석하였으며, 50 내지 300 nm 의 크기를 갖는 것을 확인하였다(도면 3a). 나노입자추적분석(NTA)을 통해 1 mL의 단위부피당 1 × 10⁸ 내지 1 × 10¹²의 엑소좀 농도를 확인하였다(도면 3b).

< 실시예 3> 알로에 엑소좀의 폴리페놀 함량 평가

상기 실시예 1에서 분리한 알로에 엑소좀은 다음의 방법을 통하여 폴리페놀 함량 평가를 진행하였다. BCA protein assay을 통해 알로에 엑소좀에 50 ~ 300 μg/mL의 단백질이 함유되어 있음을 확인하였다. Total phenolic assay를 통해 알로에 엑소좀 내부에 함유된 폴리페놀의 함량이 30 ~ 50 μg/mg (polyphenol/protein)임을 확인하였다(도 4).

< 실시예 4> 알로에 엑소좀의 세포 독성 평가

알로에 엑소좀의 인간 피부 각질 세포(HaCaT)에 처리한 후 세포 독성 평가를 수행하였다.

구체적으로, 세포 배양 웰 플레이트(48-well plate)의 한 개의 well 당 10,000개의 HaCaT 세포를 접종한 후 1, 5, 10 × 10⁸ 개의 알로에 엑소좀을 배양액에 처리하였다. 엑소좀이 처리된 HaCaT 세포는 10% 우태아혈청(fetal bovine serum) 및 1% 페니실린/스트렙토마이신(penicillin/streptomycin)을 포함한 고농도 글루코오스 delbecco’s modified eagle’s medium(DMEM)에서 24 시간 동안 배양하였다. 엑소좀 처리로부터 24시간 경과 후, WST-1 assay를 통해 HaCaT 세포의 생존율을 확인하였다. 이 때, 대조군으로 엑소좀을 처리하지 않은 HaCaT 세포의 수를 확인하였다.

HaCaT 세포에 알로에 엑소좀을 처리한 실험군과 하지 않은 그룹과 처리하지 않은 대조군 사이의 세포수 변화는 차이가 없었다. 이를 통해 알로에 엑소좀의 세포 독성은 없는 것으로 평가된다(도 5).

< 실시예 5> 알로에 엑소좀의 항산화능 평가

알로에 엑소좀의 항산화능은 Superoxide Dismutase(SOD) Colorimetric Activity Kit를 이용하여 평가하였다. 구체적으로, xanthine이 xanthine oxidase에 의해 uric acid와 과산화수소로 분해되는 과정에서 위험도가 높은 활성산소(2O₂ ^-)를 생성하게 된다. 생성된 활성산소는 활성산소에 의해 산화되어 색을 나타내는 chromagen을 사용하여 활성산소의 유무를 확인할 수 있다. 활성산소를 억제 혹은 분해시키는 항산화능을 평가하기 위해, xanthine oxidase에 의해 활성산소가 발현된 버퍼에 1, 5, 10 × 10⁸ 개의 알로에 엑소좀을 처리하고 UV-visible spectrophotometer를 이용하여 450 nm 파장에서의 흡광도를 측정하였다. 항산화능은 다음과 같은 식에 의해 계산하였다.

SOD activity (%) = (OD_{negative control} - OD_sample)/(OD_{negative control}) ×100

알로에 엑소좀의 농도가 증가함에 따라 항산화능이 증가하는 것을 확인하였으며, 1 × 10⁹ 개의 알로에 엑소좀은 43% 이상의 항산화능을 가지고 있음을 확인하였다(도 6).

< 실시예 6> 알로에 엑소좀의 세포 내 활성산소 억제능 평가

알로에 엑소좀의 HaCaT 세포 내 존재하는 활성산소의 억제 능력을 평가하기 위해, 과산화수소(H₂O₂)로 HaCaT 세포 내 활성산소를 유도한 후 알로에 엑소좀을 처리하여 세포 내 활성산소 억제 정도를 확인하였다.

세포 내 활성산소는 2,7-Dichlorofluorescin Diacetate(DCFH-DA)를 처리한 후 형광 발현량을 측정하여 확인하였다. 구체적으로, HaCaT 세포에 처리된 DCFH-DA는 세포 내부에 존재하는 cellular esterase와 반응하여 2,7-Dichlorodihydrofluorescein(DCFH)로 분해된다. 분해된 DCFH는 활성산소와 반응하여 강한 형광신호를 내는 2,7-Dichlorofluorescein(DCF)로 합성되며, 형광 발현량 측정을 통해 세포 내 활성산소를 확인할 수 있다. 반면 SOD 등 항산화제를 처리할 경우 DCFH와 활성산소간의 반응을 억제하여 상대적으로 낮은 형광신호를 내며, 형광신호의 세기 감소를 통해 세포 내 활성산소의 억제능을 평가할 수 있다. 알로에 엑소좀의 항산화능 평가를 위해, 강한 항산화능을 갖는 Quercetin을 양성대조군으로 사용하였다.

도 7에서는 600 μM/mL의 과산화수소(H₂O₂)를 처리한 HaCaT 세포(5 × 10³ cells/well)에 1, 5, 10 × 10⁸ 개의 알로에 엑소좀을 처리하여 DCFH-DA assay 분석에 따른 형광 발현량을 확인하였다. 형광 신호 발현은 485 nm excitation 및 535 nm emission 조건에서 측정하였다. 과산화수소 처리에 의한 형광발현이 알로에 엑소좀 처리 농도에 따라 감소되는 것을 확인하였다.

< 실시예 7> 알로에 엑소좀에 의한 HaCaT 세포의 활성산소 억제 유전자 및 단백질 발현 분석

1 × 10⁹ 개의 알로에 엑소좀을 처리한 HaCaT 세포(1 × 10⁵ cells)에 150 μM/mL의 과산화수소(H₂O₂)를 처리한 후 qPCR과 western blotting을 통해 HaCaT 세포에서 발현되는 활성산소 억제 유전자 및 단백질 발현을 확인하였다(도 8 및 도 9).

구체적으로, HaCaT 세포는 활성산소 자극에 의해 활성산소를 분해하는 유전자가 발현된다고 알려져 있다. 이중 SOD, CAT는 각각 활성산소인 Heme 및 2O₂ ^-, H₂O₂를 분해하여 활성산소를 억제한다고 잘 알려져 있다. 도 8과 같이 아무것도 처리 하지 않은 HaCaT 세포는 활성산소 억제 유전자인 SOD 및 CAT가 낮게 발현되었고, 알로에 엑소좀을 처리하지 않고 과산화수소를 처리한 HaCaT 세포에서는 소량 증가하는 경향을 보였다. 알로에 엑소좀을 처리한 HaCaT 세포는 과산화수소 자극에 SOD 및 CAT 유전자 발현이 2배 이상 증가하였다. 도 9에서도 과산화수소를 처리한 HaCaT 세포에서는 활성산소를 분해 단백질이 소량 증가하였지만 알로에 엑소좀을 처리한 HaCaT 세포는 SOD 및 CAT 단백질이 많이 발현되었다.

< 실시예 8> 알로에 및 생강 추출물의 총 폴리페놀 함량 평가

알로에 껍질 및 생강을 깨끗이 세척한 후 각각 진탕 항온수조에서 증류수 또는 70%(v/v) 에탄올을 추출용매로 사용하여, 70℃의 온도와 110 rpm의 속도로 진탕교반하면서 4시간 동안 추출한 후 여과하였다. 여과한 추출액을 동결 건조하여 분말화하는 방법에 의하여, 알로에 및 생강의 물 추출물 및 에탄올 추출물을 각각 제조하였다.

총 폴리페놀 함량은 Folin-Denis법을 응용하여 측정하였다. 구체적으로 상기 준비한 물 추출물 또는 에탄올 추출물 시료 0.1 g을 증류수 1mL에 녹이고, 시료 희석액 0.1 mL에 Folin-ciocalteu's 50 μL를 첨가하여 혼합한 후 4분간 실온에서 반응시킨 다음, 20% sodium carbonate 무수 포화용액 1.5 mL를 첨가하여 2분간 반응시키고 마이크로플레이트 리더(VERSAmax, Molecular Device, Sunnyvale, CA, USA)를 이용하여 760 nm에서 흡광도를 측정하였다. 총 폴리페놀 함량은 chlorogenic acid를 이용하여 작성한 표준곡선으로부터 산출하고 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

식물	추출용매	총 폴리페놀 (μg/mg)
알로에	증류수	38
	70% 에탄올	41
생강	증류수	40
	70% 에탄올	58

실험결과, 물 추출물 및 에탄올 추출물 모두에서 항산화 물질인 총 폴리페놀 함량이 생강에서 더 높은 것으로 확인되었다.

< 실시예 9> 알로에 및 생강 유래 엑소좀의 SOD 유사활성

알로에 및 생강 엑소좀의 항산화능은 실시예 5와 같이 Superoxide Dismutase(SOD) Colorimetric Activity Kit를 이용하여 평가하였다. 구체적으로, xanthine이 xanthine oxidase에 의해 uric acid와 과산화수소로 분해되는 과정에서 위험도가 높은 활성산소(2O₂ ^-)를 생성하게 된다. 생성된 활성산소는 활성산소에 의해 산화되어 색을 나타내는 chromagen을 사용하여 활성산소의 유무를 확인할 수 있다. 활성산소를 억제 혹은 분해시키는 항산화능을 평가하기 위해, xanthine oxidase에 의해 활성산소가 발현된 버퍼에 1 × 10⁹ 개의 알로에 및 생강 엑소좀을 처리하고 UV-visible spectrophotometer를 이용하여 450 nm 파장에서의 흡광도를 측정하고 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다. 항산화능은 다음과 같은 식에 의해 계산하였다.

SOD activity (%) = (OD_{negative control} - OD_sample)/(OD_{negative control}) ×100

실험결과, 추출물의 경우 생강 추출물의 총 폴리페놀 함량이 알로에 추출물보다 더 높았음에도 불구하고(실시예 8 참조), 엑소좀의 경우 알로에 엑소좀(SOD activity 23.3%)의 항산화능이 생강 엑소좀(SOD activity 19.3%) 보다 현저하게 높은 것으로 확인되었다(도 10)

< 실시예 10> 알로에 엑소좀 제형

상기 실시예 1에서 추출된 알로에 엑소좀은 액상, 동결 및 동결건조 제형으로 생산하였다(도 11). 알로에 엑소좀은 액상, 동결 및 동결건조 제형으로의 제조가 용이하고 제형에 따른 안정성이 우수하다. 제형에 따라 보관 온도 및 보관 기간이 달라지며, 화장품 특성에 따라 액상은 0 내지 10 ℃, 동결 제형은 -20 내지 -80 ℃, 동결건조 제형은 실온에서 보관이 가능하였다.

Claims (8)

1. 알로에 체세포(somatic cells)로부터 분리된(isolated) 알로에 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 항산화용 화장료 조성물로서,
   상기 알로에 엑소좀은 50 ~ 300 μg/mL의 단백질을 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 알로에 엑소좀은 조성물 1 mL의 단위부피 당 10⁶ 개 내지 10¹² 개의 함량으로 포함되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 수용액, 현탁액, 유화액, 크림, 동결 용액, 분무건조 분말 및 동결건조 분말로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 알로에 엑소좀은 폴리페놀을 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 하나의 항에 따른 화장료 조성물을 포함하는 화장품.
6. 제5항에 있어서, 상기 화장품은 미스트, 세럼, 영양화장수, 유연화장수, 유연수, 유액, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 마사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 파우더, 메이크업베이스, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 세안제, 트리트먼트, 미용액, 미용팩, 연고제, 겔제, 리니멘트제, 액제, 패치, 분무제, 입욕제, 선스크린제, 선오일 및 헤어제품으로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형인 것인 화장품.
7. 제5항에 있어서, 상기 화장품은 피부 노화 방지, 피부 미백, 주름 개선 및 피부 세포 재생으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상의 효능을 갖는 기능성 화장품인 것을 특징으로 하는 화장품.
8. 알로에 과육, 껍질 및 줄기로부터 선택되는 1 이상의 알로에 원료를 파쇄하는 단계;
   원심분리를 수행하는 단계; 및
   접선흐름여과(tangential-flow filtration, TFF)를 수행하는 단계
   를 포함하는, 제1항 내지 제4항 중 어느 하나의 항에 따른 화장료 조성물의 제조방법.
   

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