KR20160036119A - 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 추출물을 유효 성분으로 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 나노 에멀전 추출물을 유효 성분으로 함유하여 피부 미백 개선 효과, 세포 재생 효과, 주름 개선 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 마린콜라겐(hydrolyzed collagen), 다시마(Laminaria japonica Areschong), 모즈쿠(Cladosiphon okamuranus), 클로렐라(chlorella spp.), 모자반(Sargassum fulvellum), 연어알(salmon egg extract), 캐비어(caviar extract)를 주원료로 하여 나노 에멀전 추출하여 얻은 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백 개선 효과, 세포 재생 효과, 주름 개선 효과가 우수한 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

Description

마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 추출물을 유효 성분으로 함유하는 화장료 조성물 { Cosmetic composition containing extracts consisting of hydrolyzed collagen, Laminaria japonica Areschong, Cladosiphon okamuranus, chlorella spp., Sargassum fulvellum, salmon egg extract and caviar extract }

본 발명은 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 추출물을 유효 성분으로 함유하는 피부 미백 개선 효과, 세포 재생 효과, 주름 개선 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 마린콜라겐(hydrolyzed collagen), 다시마(Laminaria japonica Areschong), 모즈쿠(Cladosiphon okamuranus), 클로렐라(chlorella spp.), 모자반(Sargassum fulvellum), 연어알(salmon egg extract), 캐비어(caviar extract)를 주원료로 하여 나노 에멀전 추출하여 얻은 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백 개선 효과, 세포 재생 효과, 주름 개선 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.

특허문헌 : 한국 출원번호 10-2010-0002424 호

본 발명자들은 상기 종래 기술보다 유효 성분을 최대한 높은 수율로 수득할 수 있는 방법을 찾고 이를 화장료에 적용하기 위해 노력한 결과, 본원 발명의 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 나노 에멀전 추출물을 제조하는 방법이 항산화 성분을 포함한 유효 성분을 풍부하게 선택적으로 농축하고 있으며 이를 화장료에 적용하여 본 발명의 피부 미백 개선 효과, 세포 재생 효과, 주름 개선 효과를 나타내는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 목적 및 장점은 하기의 발명의 실시를 위한 구체적인 내용 및 청구범위에 의해 보다 명확하게 된다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해 본 발명은 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 복합체의 나노 에멀전 추출을 통하여 얻은 복합 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명은 통상의 화장료 조성물에 있어서, 0.1 중량% 내지 10 중량%, 보다 바람직하게는 5 중랑% 범위 내의 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 복합체의 나노 에멀전 추출물을 함유하여 종래의 화장료가 갖고 있는 피부 미용 증진 효과 이외에 피부 미백 개선 효과, 세포 재생 효과, 주름 개선 효과가 우수한 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 사용되는 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 복합체는 나노 에멀전 추출물 형태로 가공되기 위해서 바람직하게 추출 단계 및 여과 단계, 나노 에멀젼 단계를 거친다. 나노 에멀젼 단계에서는 1 나노미터 내지 500 나노미터 크기를 가지도록 하여 피부에 도포시 피부 진피층 상층부까지 침투, 확산 될 수 있도록 제조한다.

참고로 입자 크기가 1 나노미터보다 작게 되면, 피부 침투는 용이하게 일어나지만, 지나치게 피부 깊숙히 침투되어 외부로의 배출이 어려움이 있다. 또한 입자 크기가 500 나노미터보다 크게 되면 피부 내로의 침투가 비효율적인 문제점이 있다.

본 발명에 사용되는 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 복합체를 나노 입자 형태로 제조하기 위하여 고압, 고전단력을 이용한다. 그리하여 유화물을 균일한 나노크기의 입자로 만들어 줄 수 있으며, 이 때 사용하는 압력은 500 bar 내지 2,000 bar를 적용하며, 유속은 20 ml/min 내지 150ml/min으로 조절하여 작동한다.

나노 에멀전을 제조하는 단계에서 계면활성제를 사용할 수 있다. 이때 사용 가능한 계면활성제에는 음이온계 계면활성제, 비이온성 계면활성제, 양이온계 계면활성제 및 양쪽성 계면활성제 등이 있으며, 폴리비닐알코올, 카르복시메틸셀룰로오스, 레시틴, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈, 저분자 알코올류의 보조계면활성제와의 혼합하여 사용하는 것도 가능하다.

이러한 계면활성제의 양은 0.01 중량% 내지 20 중량%으로 사용할 수 있으며 바람직하게는 0.5 중량% 내지 5 중량% 범위에서 사용한다.

이하의 비교예와 실시예를 들어 상세하게 설명하지만, 본 발명의 기술적 범위가 이들 실시예에 한정하는 것은 아니다.

또한, 바람직하게는 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 복합체의 추출 단계에서는 40 내지 90℃의 온도로 1 내지 24 시간 동안 처리하여 얻는 것을 특징으로 한다.

또한, 바람직하게는 상기 추출이 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄, 클로로포름, 에틸에테르, 부틸렌글리콜, 헥산 및 이의 혼합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 용매를 사용하여 추출하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 바람직하게는 상기 화장료 조성물이 피부 미백 개선 효과, 세포 재생 효과, 주름 개선 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 의한 화장료 조성물은 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 복합체의 나노 에멀전 추출물을 유효 성분을 함유하며 피부 자극이 없고, 화장료용의 각종 기제 및 첨가제, 유기용제 등에 대한 용해성, 친화성 및 안정성이 좋았다.

본 발명은 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 복합체의 나노 에멀전 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 따르면 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 복합체의 나노 에멀전 추출물은 피부 미백 개선 효과, 세포 재생 효과, 주름 개선 효과가 매우 우수하였다.

따라서, 이러한 피부 미백 개선 효과, 세포 재생 효과, 주름 개선 효과를 가진 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 복합체의 나노 에멀전 추출물을 유효성분으로 포함하는 본 발명의 화장료 조성물은 피부 미용에 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 본 발명에 따른 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 복합체의 나노 에멀전 추출물의 농도에 따른 피부 미백 개선 효과를 나타내는 티로시나제 저해 효과를 나타내는 그래프,
도 2는 본 발명에 따른 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 복합체의 나노 에멀전 추출물의 농도에 따른 피부 재생 효과를 나타내는 실험을 보여주는 그래프,
도 3은 본 발명에 따른 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 복합체의 나노 에멀전 추출물의 농도에 따른 주름 개선 효과를 나타내는 엘라스타아제 활성 억제 실험을 보여주는 그래프

본 발명은 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 복합체의 나노 에멀전 추출물을 함유하는 피부 미백 개선 효과, 세포 재생 효과, 주름 개선 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것으로 더욱 상세하게는 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 복합체를 나노 에멀전 추출기술을 적용하여 제조한 유효 성분을 함유하는 피부 미백 개선 효과, 세포 재생 효과, 주름 개선 효과가 우수한 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기와 같이 본 발명의 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 복합체의 나노 에멀전 추출물은 피부 미백 개선 효과, 세포 재생 효과, 주름 개선 효과가 우수하여 화장료 조성물의 원료로 사용하는데 적합하다.

본 발명자는 다양한 효능을 가지고 있는 생리활성물질을 특히 여과 공정을 통한 최대한 높은 수율로 수득할 수 있는 방법을 찾을 찾기 위해 아래 기재한 방법과 같이, 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 복합체를 나노 에멀전 추출공정을 적용하여 유효성분의 함량이 증가됨을 확인하였고, 이를 화장료에 적용하여 피부 미백 개선 효과, 세포 재생 효과, 주름 개선 효과가 있음을 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 복합체를 건조중량 기준으로 마린콜라겐 1 내지 50 중량%, 다시마 1 내지 50 중량%, 모즈쿠 1 내지 50 중량%, 클로렐라 1 내지 50 중량%, 모자반 1 내지 50 중량%, 연어알 1 내지 50 중량%, 캐비어 1 내지 50 중량%의 배합비율로 구성되는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 사용되는 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어를 충분히 세척한 다음 건조 분쇄한 후 300 메시 크기를 통과할 수 있도록 미세한 분말로 제조하여 추출 공정에 사용한다.

또한 바람직하게는, 상기 추출 공정에서 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄, 클로로포름, 에틸에테르, 부틸렌글리콜, 헥산 및 이의 혼합물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 추출용매를 사용할 수 있으며, 보다 바람직하게는 에탄올, 70% 에탄올 수용액 또는 물을 추출 용매로 사용하며, 가장 바람직하게는 70% 에탄올 수용액을 사용하여 추출한다.

상기와 같이 추출된 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 추출물을 최종 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #2 여과지로 여과한다.

여과가 완료되면 본 발명의 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 추출물을 나노 에멀전을 제조하기 위하여 고압, 고전단력을 이용하여 유화물을 균일한 나노크기의 입자로 만들어 준다.

나노 에멀전을 제조하기 위하여 계면활성제를 사용할 수 있다. 이때 사용 가능한 계면활성제에는 음이온계 계면활성제, 비이온성 계면활성제, 양이온계 계면활성제 및 양쪽성 계면활성제 등이 있으며, 폴리비닐알코올, 카르복시메틸셀룰로오스, 레시틴, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈, 저분자 알코올류의 보조계면활성제와의 혼합하여 사용하는 것도 가능하다.

이러한 계면활성제의 양은 0.01 중량% 내지 20 중량%으로 사용할 수 있으며 바람직하게는 0.5 중량% 내지 5 중량% 범위에서 사용한다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기 유효성분 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당 업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클린징 제형은 클렌징폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 화장료 조성물은 피부 미백 개선 효과, 세포 재생 효과, 주름 개선 효과를 기대하는 화장료에 적용될 수 있다.

본 발명의 화장 방법은 본 발명의 화장료 조성물을 이용하는 모든 화장 방법을 일컫는다. 즉, 화장료 조성물을 이용하는 당업계에 공지된 모든 방법이 본 발명의 화장 방법에 속한다.

또한, 본 발명은 상기 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 나노 에멀전 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 화장료 조성물을 인간의 피부에 도포하는 모든 화장 방법을 일컫는다. 즉, 화장료 조성물을 피부에 도포하는 당업계에 공지된 모든 방법이 본 발명의 화장 방법에 속한다.

본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복 도포하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복 도포하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 피부 미백 개선 효과, 세포 재생 효과, 주름 개선 효과가 우수한 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

<실시예 1> 본 발명에 따른 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 나노 에멀전 추출물의 제조

마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어를 건조중량 기준으로 각각 20g, 20g, 15g, 15g, 10g, 10g, 10g으로 계량하여 300 메시 체를 통과할 수 있도록 분쇄물을 미세하게 제조하여 최종 70%(V/V) 에탄올 수용액이 되도록 에탄올을 첨가하여 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #2 여과지로 여과하였다. 여과가 완료되면 본 발명에서는 상기 추출단계에서 얻어진 추출 여과액을 농축하여 다시 나노 에멀전 단계를 적용하여 추출물 10g 을 제조하였다.

<실시예 2> 본 발명에 따른 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 나노 에멀전 추출물을 함유한 영양 크림의 제조

정제수 부분을 80℃로 가온하여 용해하는 단계와 80℃로 가온 용해한 유상부분을 첨가하여 유화를 실시하는 단계와 60℃에서 가온 용해한 증점제를 첨가 혼합하는 단계와 냉각하여 미용성분을 첨가하여 혼합하는 단계와 30℃까지 냉각하여 탈포, 여과하는 단계와 50℃에서 숙성 제조하는 단계를 실시하여 표 1에서와 같이 영양 크림을 제조하였다.

분류	원료명	무게(중량%)
정제수부분	정제수	60.36
	프로필렌글리콜	5.0
	글리세린	6.0
	산탄검	0.1
	트리에탄올아민	0.7
	메칠파라벤	0.2
	페녹시에탄올	0.1
	본 발명의 나노에멀전 추출물	2.0
유상 성분	스쿠알란	8.0
	세틸알콜	2.2
	사이클로펜타실록산	2.0
	스테아린산	1.5
	글리세릴모노스테아레이트	1.0
	마이크로크리스탈린왁스	0.6
	피이지-100	0.3
	초산토코페롤	1.0
	쉬이버터	1.0
	프로필파라벤	0.1
	오리자놀	0.1
	비사보롤	0.2
	디메치콘	0.5
	모노스테아린산폴리옥시에칠렌소르비탄	0.8
증점제	카보머	0.24
	정제수	2.4
미용 성분	아스코르빈산나트륨	0.1
	인지질	1.0
	프라센타엑기스	0.5
	알로에엑기스	0.5
	토코페롤아세테이트	0.5
	알로에 추출물	1.0
합계		100.00

<실험예 1> 본 발명에 따른 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 나노 에멀전 추출물을 함유한 영양 크림의 피부 자극성 및 보호 효과 확인

건강한 성인 남녀 40명(남자 20명, 여자 20명)의 전박부에 상기 실시예 3에서 제조한 영양 크림을 일정량(10m/5cm²)씩 도포하고, 그외의 부위를 알루미늄 호일로 차폐하여 30분 후에, 자외선 조사기를 이용하여 장파장 자외선을 10.2J/cm2의 용량으로 조사하고 24시간 후에 피부 상태(홍반, 부종, 구진 등)를 관찰하였다. 관찰 결과 피부에 홍반 등의 부작용이 발생되지 않아 상기 영양 크림은 광독성이 없으며 피부 보호 효과가 있다는 것을 확인할 수 있었다. 또한 건강한 성인 남녀 40명(남자 20명, 여자 20명)을 2개 그룹으로 나누어 상기 실시예 2에서 제조한 영양 크림을 일정량(10m/5cm²)씩 도포한 실험군과 본 발명에 따른 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 나노 에멀전 추출물을 함유하지 않고 실시예 2를 제조하여 대조군으로 하여 1시간, 3시간, 6시간 후 피부 탄력성을 지름 10mm 테두리로 구성된 속이 비어있는 원통형으로 약 5N의 힘을 주어 자국이 사라지는 시간을 재어 비교해 본 결과 대조군에 비하여 각 시간별로 약 17% 수준으로 실험군에서 사라지는 것으로 보아 본 발명의 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 나노 에멀전 추출물을 함유한 영양 크림의 사용에 의해 피부 탄력성이 개선되는 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

<실험예 2> 본 발명에 따른 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 나노 에멀전 추출물을 함유한 영양 크림의 피부 자극성 확인 시험

건강한 성인 남녀 40명(남자 20명, 여자 20명)의 전박부에 상기 실시예 2에서 제조한 영양 크림을 인체 첩포 시험을 실시하였다. 시험대상자의 전박부를 70% 에탄올로 잘 닦은 다음 그 부위에, 통상의 화장료 기제에 상기 실시예 2에서 제조한 영양 크림을 20㎕씩 담은 핀 챔버를 점착 테이프를 이용하여 24시간 폐쇄 부착시켰다. 24시간 후에 점착 테이프와 핀 챔버를 제거하고, 가제로 피부에 잔존된 시료를 가볍게 닦아 제거한 뒤에 피부 상태를 관찰하고 다시 24시간 후에 한번 더 관찰하였다. 실험 결과, 본 발명에 따른 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 나노 에멀전 추출물을 함유한 영양 크림의 피부 자극성을 확인하기 위한 인체 첩포 시험에서 양성 반응을 보이지 않아 인체 피부에 자극성이 전혀 없는 것으로 확인되었다.

<실험예 3> 본 발명의 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 나노 에멀전 추출물을 농도에 따른 피부 미백 효과를 확인하는 티로시나제 저해 효과 실험

티로시나제 효소는 버섯류(Mushroom)로부터 추출된 것으로 시그마(SIGMA)사d서의 판매하는 제품을 사용하였다. 먼저 기질인 티로신을 증류수에 용해시켜 0.3mg/ml의 용액으로 만들고 그 용액을 1.0ml씩 시험관에 넣은 다음, 여기에 포타슘-포스페이트 완충용액(0.1mol 농도, pH 6.8) 1.0ml 및 증류수 0.7ml를 첨가하였다.

제조예 1~2 및 비교제조예 1~2의 추출물을 에탄올 용액에 적당농도로 혼합하여 준비한 각 시료액 0.2ml를 반응액에 넣은 다음 37℃ 항온조에서 10분 동안 반응시켰다. 이때 대조군은 각 시료액 대신 용매만을 0.2ml 넣은 것으로 준비하였고, 양성대조군으로는 아스코르브산을 사용하였다. 이 반응액에 2500unit/ml의 티로시나제 용액0.1ml씩을 넣고 다시 37℃ 항온조에서 10분 동안 반응시켰다. 이 반응액이 든 시험관을 얼음물속에 넣어서 급냉시켜 반응을 중지시키고 광전분광분석계로 파장 475nm에서의 흡광도를 측정하였으며, 그 결과를 하기 도 1에 나타내었다. 각각의 티로시나제 저해 효과는 하기 수학식으로 산출하였다.

티로시나제 저해율(%)=100-(시험물질의 반응흡광도/대조군의 반응흡광도*100)

도 1에서와 같이 농도 기울기에 따라 티로시나제 저해율이 감소하는 것을 확인하였으며, 그리하여 본 발명에 따른 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 나노 에멀전 추출물의 농도가 증가함에 따라 피부 미백 효과가 증가하는 것을 확인할 수 있었다.

<실험예 4> 본 발명에 따른 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 나노 에멀전 추출물을 농도에 따른 피부 재생 효과를 확인하는 실험

시험 물질의 세포 재생 효과를 알아보기 위해 HaCaT 세포를 1×10⁴세포수/well, 정상 인간 섬유아세포(normal human fibroblast)를 6×10³ 세포수/well로　각각 96 웰 플레이트에 접종하였다. 물질을 처리하기 전에 배지를 FBS가 첨가되지 않은 배지로 교환하고 1시간 동안 배양하였다. 이후 배지를 제거하고 FBS가 1% 함유된 배지에 추출물을 0.1, 1, 5,10, 50, 100ppm의 농도별로 녹인 후 처리하였다. 10% FBS는 양성 대조군, NO FBS 는 대조군, 1% FBS 는 음성대조군, 1%FBS+ 추출물은 비교군으로 사용하였다.

추출물을 처리한 상기 배지의 세포를 48시간 동안 배양한 후, WST-1을 100㎕/웰로 처리하였다.　WST-1을 처리하고 3시간 동안 37℃ 5% CO₂ 배양기에서 반응시켰다. 3시간 동안 배양 후 마이크로플레이트 리더기(microplatereader)(BioTek Instruments, Inc, 미국)를 를 이용하여 450nm 에서 흡광도를 측정하여 세포 재생　효과를 확인하였다.

그 결과를 도 2에 나타내었으며, 본 발명에 따른 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 나노 에멀전 추출물은 세포를 증식하고 재생시킬 수 있음을 확인하였다.

<실험예 5> 본 발명에 따른 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 나노 에멀전 추출물을 농도에 따른 항주름 개선 효과를 보여주는 엘라스타아제 활성 억제 효능 실험

96 웰 플레이트에서 10mg/L Tris-HCL 완충액(pH 8.0)에 시험물질 50μL 및 20㎍/mL 엘라스타아제·타입 III 용액 50μL를 혼합하였다. 포스포라미돈 10ug/ml 은 양성 대조군으로 사용하였으며 음성 대조군인 비처리군은 증류수를 사용하였다. 그 후, 상기 완충액으로 조제한 0.4514㎎/mL N-SUCCINYLALA-ALA-ALA-p-NITROANILIDE 100μL를 첨가하고, 25℃에서 15분 반응시켰다. 반응종료 후, 파장 415㎚에 있어서의 흡광도를 측정하였다. 동일한 방법으로 공시험을 행하여 보정하였다.

엘라스타아제 활성 저해율(%)={1-(c-d)/(a-b)}×100

도 3에서와 같이 테스트 농도에 따라 엘라스타아제 활성이 저해되는 것을 보여주고 있으며, 이에 따라 항주름 효과가 있는 것으로 확인할 수 있었다.

본 발명은 상기에서 언급한 바람직한 실시예와 관련하여 설명됐지만, 본 발명의 범위가 이러한 실시예에 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 범위는 이하의 특허 청구범위에 의하여 정하여지는 것으로 본 발명과 균등 범위에 속하는 다양한 수정 및 변형을 포함할 것이다.

Claims (6)

1. 마린콜라겐, 다시마, 모즈쿠, 클로렐라, 모자반, 연어알, 캐비어로 구성된 나노 에멀전 추출물을 함유한 화장료 조성물
2. 청구항 1에 있어서, 상기 나노 에멀전 추출물은 건조중량 기준으로 0.01 내지 10 중량% 양으로 함유되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물
3. 청구항 1에 있어서, 상기 나노 에멀전 추출물을 포함한 화장료 조성물은 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물
4. 청구항 1에 있어서, 상기 나노 에멀전 추출물이 피부 미백 개선 효과를 가지는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물
   
5. 청구항 1에 있어서, 상기 나노 에멀전 추출물이 세포 재생 효과를 가지는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물
6. 청구항 1에 있어서, 상기 나노 에멀전 추출물이 주름 개선 효과를 가지는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물
   

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