KR100519154B1 - 천연물을 이용한 항노화 및 미백 화장료 - Google Patents

Abstract

본 발명은 동과자, 행인 및 도인중 1종 이상의 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 동과자, 행인 및 도인중 1종 이상의 추출물을 함유하여, 강력한 미백효과 및 콜라겐 생합성 촉진효과, 주름개선효과, 세포재생효과에 의한 우수한 피부 노화방지용 화장료 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 미백 효과 및 항노화 효과가 우수한 동과자, 행인 및 도인을 극성 용매에서 저극성 용매로 순차적으로 추출하여 유효성분의 함량을 높이고 안전성을 극대화하여 피부 활성효과 및 안전성이 월등한 특징을 갖는다.

본 발명에 의한 활성물질은 외부환경에 의해 손상된 피부의 회복 및 예방에 쓰일 수 있고, 피부에 자극이 없는 물질로서, 피부 노화방지 및 미백용 화장료 조성물로 사용 가능하다.

Description

천연물을 이용한 항노화 및 미백 화장료 {Antiageing and whitening cosmetics containing natural extracts}

본 발명은 얼굴의 기미, 주근깨 개선 효과 및 주름개선, 탄력증진 효과가 우수한 생약 추출물을 함유한 항노화/미백 화장료에 관한 것으로 보다 상세하게는 멜라닌 생성 억제 효과 및 콜라겐 생합성 촉진효과가 우수한 동과자, 행인 및 도인을 극성 용매에서 저극성 용매로 순차적으로 추출한 것을 유효성분으로 함유하는 우수한 피부용 의약품 및 화장료에 관한 것이다.

피부는 인체의 일차 방어막으로서 체내의 제기관을 온도 및 습도 변화와 자외선, 공해물질 등 외부환경의 자극으로부터 보호해 주며, 체온조절 등의 생체 항상성 유지에 중요한 역할을 하고 있다. 그러나 세포 외부로부터 가해진 과도한 물리적, 화학적 자극 및 스트레스, 영양결핍, 자외선, 환경오염물질, 급격한 기온의 변화 등과 같은 세포손상자극 들은 세포내의 다양한 생화학적 변화를 유도하여 세포 손상 반응을 일으킨다. 이 중 피부의 노화는 부분적으로는 이런 외부적 스트레스들에 의해 유발되는 산화적 손상 반응의 결과 나타나는 피부의 생리학적 기능 변화에 기인하는 것으로 인정되고 있다. 즉, 피부 세포의 세포막이 활성산소나 다른 라디칼에 의해 지속적으로 손상을 입게 되면 단백질이나 지질단백질(lipoprotein)의 가교(cross-linkage)가 증가하거나 또는 분해가 되며, 과산화 지질의 양도 증가하게 된다. 이처럼 세포와 세포막이 손상되면, 세포막의 투과성이 변화하여 세포 내의 이온 균형이 깨지게 되고, 이런 변화는 세포내 대사물의 배출을 막고, 이 대사물을 제독하는 세포의 기능을 감퇴 시킨다. 이와 같은 세포 수준의 변화가 지속되면, 피부 조직의 구조(tissue structure)가 규칙성을 잃게 된다. 그리고, 진피(dermis)에 국소적인 상흔이 나타나고, 콜라겐 섬유(collagen fiber)나 탄력섬유(elastic fiber)의 감소로 진피 두께가 줄어든다. 콜라겐 섬유끼리의 가교도 증가하며 탄력섬유의 미세한 구조도 손상되어 전체적으로 피부의 탄력 저하가 나타난다. 이러한 영향을 미치는 요인으로는 과산화수소(H₂O₂), superoxide anion, 수산화라디칼 (hydroxy radical) 등이 있으며, 이런 유해 활성 산소종들은 진피의 탄력을 저하시킴과 동시에 피부의 흑화에도 관여한다. 다시 말해 외부 자극원에 의한 피부 세포의 산화적 손상은 궁극적으로 피부의 노화 및 흑화를 촉진시키게 된다.

결국 피부 외관에 기미, 주근깨, 잡티, 탄력손실, 각질화, 주름생성 등의 피부 문제와 노화현상을 촉진시키게 되는데, 이러한 현상을 방지하고 보다 건강하고 탄력 있는 피부를 유지하기 위하여 종래 각종 동물, 식물, 미생물 및 유기합성등에 의해 얻은 생리 활성 물질들이 함유된 화장품을 사용함으로써 피부의 고유기능을 유지시키고 피부세포를 활성화시켜 피부노화를 효과적으로 억제하기 위한 노력이 있어 왔다.

이러한 물질로는 레티놀 및 아스코르빈산 등의 비타민류, 각종 동식물에서 추출한 단백질 및 플라보노이드, 아미노산, 표피성장인자 (Epidermal growth factor), 알파 히드록시산 등이 알려져 있으며, 현재 화장료 등에 응용되어 사용되고 있다. 그러나 이러한 성분들 대부분이 그 자체가 불안정하거나, 피부에 어느 정도 자극을 유발하는 것으로 알려져 있다.

그 외 효과가 있다고 민간에서 널리 알려진 천연 추출물은 활성성분이 미량 함유되어 있으며 산지나 수확시기에 따라 함량 변화가 심해 품질의 균질성을 갖기가 어려운 실정이다. 또한 각종의 화합물이 함께 추출됨으로 인해 피부 부작용 및 색상등에서의 단점을 지니고 있다. 이러한 점을 극복하기 위해 정제가 필요하나 소요되는 비용이 높아 실제 대량 생산으로 응용되지 못하는 문제점을 갖고 있다.

따라서, 피부 부작용을 유발하지 않으면서 피부 노화방지 및 미백효과를 갖는 원료에 대한 연구가 활발히 진행되었고, 본 발명자들은 종래부터 생약 등으로 사용되어 오던 여러 가지 천연물을 대상으로 종래의 물질들이 갖는 문제점을 극복하고 효능이 월등한 항노화/미백제를 개발하고자 연구를 거듭한 결과 동과자, 행인 및 도인 추출물이 항노화/미백효과가 있음을 밝혀내고 이의 안전성 및 효능을 극대화하기 위한 정제법을 개발함과 동시에 이들을 적절한 비로 조합 시 상승효과가 있음을 알고 본 발명을 완성하게 되었다. 따라서 본 발명은 항노화/미백효과가 우수한 동과자와 행인 및 도인을 용매의 극성변화에 의해 순차적으로 추출한 것을 유효성분으로 함유하는 피부 노화방지 및 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 목적은 활성성분으로서 동과자와 행인 및 도인 추출물을 함유하는 화장품 조성물을 제공하는 것이다. 또 다른 면으로, 본 발명의 목적은 피부 개선 및/또는 활성화 효과를 지닌 화장품 조성물을 제공하는 것이다. 또 다른 면으로 본 발명의 목적은 주름개선효과, 콜라겐 생합성 촉진효과, 미백효과를 지닌 화장품 조성물을 제공하는 것이다

따라서, 본 발명은 미백효과 및 주름개선효과가 우수한 동과자와 행인 및 도인을 극성 용매에서 저극성 용매로 순차적으로 추출한 것을 유효성분으로 함유하는 피부 노화방지/미백 조성물을 제공한다.

동과자(冬瓜子)(학명: Benincasa Hispida)는 박과(科)에 속하는 한해살이 덩굴식물이며, 가을에 박과 같은 커다란 열매가 생겨 그것을 식용으로 하는 동아의 종자로서 성분은 Urease를 함유하였고 화담소옹이수 (化痰消癰利) 작용이 있어서 코와 얼굴의 주사비와 피부의 검버섯을 없애주고 (중약대사전) 열을 내리고 담을 식히며 고름을 빨아내고 이뇨를 시킨다.

행인은 일반적으로 장미과에 속하는 살구나무의 성숙한 과실을 채취하여 과목 및 종피를 제거하고 종자만을 건조한 후 분말을 내어 사용하는데, 성분은 지방유, amygdalin3%, emusin 30-50% 등이며 urokinase활성 촉진, 진통효과, 소담효과, 항종양 활성 진해효과등의 약리 효능이 있다.

도인은 Persicae Semen Amygdalin 복숭아 씨로 혈결(血結) 어혈 소염 진통 월경불순 변비에 효과 있고 혈액순환을 좋게 하는 작용도 있다. 일반적으로 장미과에 속하는 복사나무의 과실이 성숙한 후 채취하며 과육과 핵곡을 제거하고 종인만 취하여 건조한 후 분말을 내어 사용하는데, 성분은 지방유 40∼50%, 청산 배당체 amygdalin 3.49%, prunasin 0.38%, emusin, 그리고 항응혈 활성 물질 등으로 되어 있으며, 항 응혈작용(抗凝血作用)과 약한 용혈작용(弱溶血作用)이 있어 피가 굳는 것을 풀어주므로 어혈을 풀어주고 건조한 것을 부드럽게 함으로써 타박상이나 어혈종통(瘀血腫痛)을 풀어주고(중약대사전, p1788)피를 잘 돌게 하는 효과가 있다. 또한 파혈, 거담 및 윤활장작용 등의 약리 작용을 한다.

본 발명은 동과자와 행인 및 도인을 무수 또는 함수의 저급 알코올, 아세톤에서 1차 추출한 후 에틸아세테이트, 디에틸에테르, 벤젠, 메틸렌클로라이드, 클로로포름, 헥산등의 저극성 용매로 2차 추출하여 활성 성분의 함량을 증대시키고 불순물을 제거하여 안정도가 향상됨과 동시에 효능이 극대화된 추출물을 화장료, 다시 말하면 유연화장수(스킨), 영양화장수(로숀), 영양크림, 마사지크림, 엣센스, 팩 등에 첨가하는 것이다.

본 발명을 좀 더 상세하게 설명하면 다음과 같다. 생약재로 시판되는 동과자와 행인 및 도인을 구입하여 잘게 분쇄하고 분쇄물 건조 중량에 대하여 추출용매로서 물, 저급 알코올(메탄올, 에탄올), 물과 저급 알코올의 혼합물, 아세톤, 1,3-부틸렌 글리콜(Butylene glycol), 노말 프로판올(n-Propanol), 이소 프로판올(iso-Propanol), 노말 부탄올(n-Butanol) 등의 극성용매와 이것들의 혼합용매를 5-20배 부피량을 가하여 침적추출하여 여과한 후 여액을 감압 농축한다. 농축액에 물을 가하여 분산 시킨 후 분산액에 동량의 저극성 유기 용매, 즉 에틸 아세테이트, 디에틸에테르, 벤젠, 클로로포름 등을 가하고 진탕한다. 유기층을 분리한 후 활성탄을 처리하고 감압 농축하여 활성이 우수한 추출물을 얻는다. 추출방법으로는 탄소수 1-4개의 무수 또는 함수 저급 알코올을 용매로 하여 4-25℃ 상온에서 3-20일 방치 숙성시켜서 유효성분을 추출하거나 또는 사용하는 용매의 환류 온도에 가까운 온도로 5-24시간 정도 가열환류 한다. 추출이 완료된 후 여과포로 여과한 후 잔사를 같은 방법으로 1회 이상씩 더 추출한다. 이 1차 추출액을 물에 분산 시킨 후 저극성 용매로 2회 추출한다. 추출된 유기층을 합하여 활성탄으로 처리한 후 무수 황산나트륨으로 건조하고 감압 농축한 후 동결건조나 분무 건조하여 건조추출물을 얻는다. 건조된 동과자와 행인 및 도인 추출물은 기존의 극성 용매에서 추출한 것에 비해, 매우 강력한 콜라겐 합성 촉진 효과 및 인체 티로시나제에 활성 저해효과를 나타낸다.

상기와 같이 얻어진 동과자와 행인 및 도인 추출물은 피부 외용연고나 로션 등의 화장료로 제조되어 사람의 피부에 도포되었을 때 피부 주름개선 효과 및 미백 효과가 매우 우수하다. 또한 어떤 부작용도 발생하지 않아 동과자와 행인 및 도인 추출물이 안전하고 효과가 매우 뛰어난, 피부 주름 개선 및 기미나 주근깨 개선제임을 알 수 있다.

또한 본 발명의 동과자와 행인 및 도인 추출물의 조합물에 있어서 동과자와 행인 및 도인추출물의 조합비는 1:1:1 내지 2:1:1 이 바람직하다. 피부외용 연고나 화장료 제조시에 함유되는 동과자와 행인 및 도인 추출물의 함량은 건조 중량으로 0.0001-10.0중량, 바람직하게는 0.0005-5.0중량이 적당하다. 0.0001중량이하의 농도에서는 뚜렷한 효과를 기대할 수 없었고, 5중량이상의 농도에서는 함유량의 증가에 따라 뚜렷한 효과의 증가가 나타나지 않았다.

본 발명에 따른 조성물은 화장품학 및 피부과학적으로 허용 가능한 매질 및/또는 기제를 함유한다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면 용액, 겔, 또는 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀) 및/또는 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적 방법에 따라 제조될 수 있다. 또한 본 발명에 따른 조성물은 포말(foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 이들 보조제는 화장품학 또는 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다.

다음으로 실시예에 의거하여 본 발명을 자세히 설명한다 그러나, 본 발명은 실시예에 의해서 한정되지 않는다는 것은 명백하다.

[실시예 1]

동과자 가루 50g을 50% 에탄올 수용액 1리터에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 12시간 끓여서 추출한 후 300메쉬 여과포로 여과하고, 상기 여과액을 4-15℃ 에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 여과한다. 상기 추출물을 냉각 콘덴서가 달린 증류 장치를 이용하여 60℃ 에서 감압 농축한다. 이를 물 50㎖에 분산한 후 에틸아세테이트 100㎖로 다시 추출한 후 활성탄 10g을 넣고 실온에서 1시간 교반하고 여과한다. 여액을 무수황산나트륨을 넣어 건조한 후 여과하고 감압 농축하고 건조하여 건조중량 3.1g을 얻었다.

[실시예 2]

시판되는 행인을 구입하여 분쇄한 분쇄물 100g을 80% 메탄올용액 2L에 넣고, 실온에서 24시간 침적,추출하여 여과한 후 잔사를 같은 방법으로 1회 더 추출하였다. 각각의 추출액을 합하여 정치 후 여과하여 불용성 물질을 제거하고 감압농축 한다. 이를 물 100ml에 분산한 후 에틸 아세테이트200ml로 다시 추출한 후 유기층을 농축하고 동결건조하여 건조 중량 5.8g을 얻었다.

[실시예 3]

시판되는 도인을 구입하여 분쇄한 분쇄물 100g을 80% 메탄올용액 2L에 넣고, 실온에서 24시간 침적하여 추출한 후 여과한 후 잔사를 같은 방법으로 1회 더 추출하였다. 각각의 추출액을 합하여 여과하여 불용성물질을 제거한 후, 냉각 콘덴서가 달린 증류장치에서 감압농축 한다. 이를 물 50ml에 분산한 후 에틸 아세테이트 200ml로 다시 추출한 후 유기층을 농축하고 동결건조하여 건조 중량 5g을 얻었다.

[실시예 4]

동과자와 행인을 세말화한 가루 각각 50g을 50% 에탄올 수용액 2리터에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 12시간 끓여서 추출한 후 여과하고, 상기 여과액을 4-15℃ 에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 여과한다. 상기 추출물을 80 ℃ 에서 감압 농축하고 이를 물 200㎖에 분산한 후 3리터들이 분액 깔대기에 넣고 여기에 에틸아세테이트 1.5리터를 가한 뒤 흔들어서 잘 섞어준 다음 두층으로 완전히 분리된 후 상층(에틸아세테이트층)을 취한다. 하층(물층)을 다시 분액 깔대기에 넣고 에틸아세테이트로 두 번 더 추출한다. 분리된 상층을 모두 합한 뒤 활성탄 10g을 넣고 실온에서 1시간 교반하고 여과한다. 여액을 무수황산나트륨을 넣어 건조한 후 여과하고 여액을 감압 농축하고 건조하여 건조중량 5.7 g을 얻었다.

[실시예 5]

동과자와 행인을 세말화한 가루 각각 50g을 50% 에탄올 수용액 2리터에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 12시간 끓여서 추출한 후 여과하고, 상기 여과액을 4-15℃ 에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 여과한다. 상기 추출물을 80 ℃ 에서 감압 농축하고 이를 물 200㎖에 분산한 후 3리터들이 분액 깔대기에 넣고 여기에 메틸렌클로라이드 1.5리터를 가한 뒤 흔들어서 잘 섞어준 다음 두층으로 완전히 분리된 후 하층(메틸렌클로라이드층)을 취한다. 상층(물층)을 다시 분액 깔대기에 넣고 메틸렌클로라이드로 두 번 더 추출한다. 분리된 하층을 모두 합한 뒤 활성탄 10g을 넣고 실온에서 1시간 교반하고 여과한다. 여액을 무수황산나트륨을 넣어 건조한 후 여과하고 여액을 감압 농축하고 건조하여 건조중량 4.4g을 얻었다.

[실시예 6]

동과자와 도인을 세말화한 가루 각각 50g을 50% 에탄올 수용액 2리터에 넣고 냉각콘덴서가 달린 추출기에서 12시간 끓여서 추출한 후 여과하고, 상기 여과액을 4-15℃ 에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 여과한다. 상기 추출물을 80 ℃ 에서 감압 농축하고 이를 물 200㎖에 분산한 후 3리터들이 분액 깔대기에 넣고 여기에 에틸아세테이트 1.5리터를 가한 뒤 흔들어서 잘 섞어준 다음 두층으로 완전히 분리된 후 상층(에틸아세테이트층)을 취한다. 하층(물층)을 다시 분액 깔대기에 넣고 에틸아세테이트로 두 번 더 추출한다. 분리된 상층을 모두 합한 뒤 활성탄 10g을 넣고 실온에서 1시간 교반하고 여과한다. 여액을 무수황산나트륨을 넣어 건조한 후 여과하고 여액을 감압 농축하고 건조하여 건조중량 4.8g을 얻었다.

[실시예 7]

동과자와 도인을 세말화한 가루 각각 50g을 50% 에탄올 수용액 2리터에 넣고 냉각콘덴서가 달린 추출기에서 12시간 끓여서 추출한 후 여과하고, 상기 여과액을 4-15℃ 에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 여과한다. 상기 추출물을 80 ℃ 에서 감압 농축하고 이를 물 200㎖에 분산한 후 3리터들이 분액 깔대기에 넣고 여기에 메틸렌클로라이드 1.5리터를 가한 뒤 흔들어서 잘 섞어준 다음 두층으로 완전히 분리된 후 하층(메틸렌클로라이드층)을 취한다. 상층(물층)을 다시 분액 깔대기에 넣고 메틸렌클로라이드로 두 번 더 추출한다. 분리된 하층을 모두 합한 뒤 활성탄 10g을 넣고 실온에서 1시간 교반하고 여과한다. 여액을 무수황산나트륨을 넣어 건조한 후 여과하고 여액을 감압 농축하고 건조하여 건조중량 4.1 g을 얻었다.

[실시예 8]

동과자와 행인 및 도인을 세말화한 가루 각각 50g을 50% 에탄올 수용액 2리터에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 12시간 끓여서 추출한 후 여과하고, 상기 여과액을 4-15℃ 에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 여과한다. 상기 추출물을 80℃ 에서 감압 농축하고 이를 물 200㎖에 분산한 후 3리터들이 분액 깔대기에 넣고 여기에 에틸아세테이트 1.5리터를 가한 뒤 흔들어서 잘 섞어준 다음 두층으로 완전히 분리된 후 상층(에틸아세테이트층)을 취한다. 하층(물층)을 다시 분액 깔대기에 넣고 에틸아세테이트로 두 번 더 추출한다. 분리된 상층을 모두 합한 뒤 활성탄 10g을 넣고 실온에서 1시간 교반하고 여과한다. 여액을 무수황산나트륨을 넣어 건조한 후 여과하고 여액을 감압 농축하고 건조하여 건조중량 8.2g을 얻었다.

[실시예 9]

동과자와 행인 및 도인을 세말화한 가루 각각 50g을 50% 에탄올 수용액 2리터에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 12시간 끓여서 추출한 후 로 여과하고, 상기 여과액을 4-15℃ 에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 여과한다. 상기 추출물을 80℃ 에서 감압 농축하고 이를 물 200㎖에 분산한 후 3리터들이 분액 깔대기에 넣고 여기에 메틸렌클로라이드 1.5리터를 가한 뒤 흔들어서 잘 섞어준 다음 두층으로 완전히 분리된 후 하층(메틸렌클로라이드층)을 취한다. 상층(물층)을 다시 분액 깔대기에 넣고 메틸렌클로라이드로 두 번 더 추출한다. 분리된 상층을 모두 합한 뒤 활성탄 10g을 넣고 실온에서 1시간 교반하고 여과한다. 여액을 무수황산나트륨을 넣어 건조한 후 여과하고 여액을 감압 농축하고 건조하여 건조중량 7.5g을 얻었다.

[비교예 1]

동과자 가루 50g을 에탄올 1리터에 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 12시간 끓여서 추출한 후 여과하고, 상기 여과액을 4-15 ℃ 에서 7일간 방치하여 숙성시킨 후 여과한다. 상기 추출물을 감압 농축하고 건조하여 건조중량 4.3g을 얻었다.

[비교예 2]

시판되는 행인을 구입하여 분쇄한 분쇄물 100g을 80% 메탄올용액 5L에 넣고, 실온에서 24시간 침적하여 추출한 후 여과한다. 잔사를 같은 방법으로 1회 더 추출하였다. 각각의 추출액을 합하고 불용성물질을 제거한 후, 감압농축하고 건조하여 건조 중량 8.5g을 얻었다.

[비교예 3]

시판되는 도인을 구입하여 분쇄한 분쇄물 100g을 80% 메탄올용액 5L에 넣고, 실온에서 24시간 침적하여 추출한 후 여과한다. 잔사를 같은 방법으로 1회 더 추출하였다. 각각의 추출액을 합하여 상온에서 여과하여 불용성물질을 제거한 후, 감압농축 하여 건조 중량 7.8g을 얻었다

본 발명자들은 동과자와 행인과 도인 추출물에 대하여 피부안전성 및 개선/또는 활성화 효과에 대한 실험을 수행하였다. 동과자와 행인과 도인 추출물이 주름개선효과, 콜라겐 생합성 촉진효과, 인체 티로시나제 활성 저해효과를 갖는다는 것은 하기 실험에 의해 나타냈다.

[시험예 1] 동과자와 행인 및 도인 추출물의 안전성

화장료의 원료는 인체에 사용되기 때문에 무엇보다도 인체에 대한 안전성이 중요하다. 본 발명자는 동과자와 행인 및 도인 추출물의 인체에 대한 독성 및 자극성 유무를 아래와 같은 실험을 거쳐 화장료로서 독성과 자극이 없는 원료임을 확인하였다. 안전성 실험은 실시예 4의 물질을 스쿠알란에 10% 농도로 만든 용액을 가지고 수행하였다.

1-1] 급성경구 독성실험 (Acute oral toxicity test in mice) : 시험물질 1ml/Kg을 암수 각 5마리씩 10마리의 쥐에 투여한 결과 사망동물은 관찰되지 않았고 투여 전후의 체중변화도 유의할 차이가 관찰되지 않았다.

1-2] 급성경피 독성실험 ( Acute dermal toxicity test in mice and rabbits) : 시험물질 0.2mL/Kg 을 암수 각 5마리씩 10마리의 쥐에 1회 경피투여하고 2주간 일반 증상, 체중변화를 관찰한 결과 전 투여 군에서 이상증상이 관찰되지 않았다. 같은 방법으로 토끼에게 실시한 결과 이상이 관찰되지 않았다.

1-3] 피부1차 자극실험 (Primary skin irritation test) : 토끼 12마리에 시험물질 적용 24시간 전에 등 부위의 털을 제거하고 2.5cm×2.5cm 넓이에 0.1 mL 씩 24 시간 동안 도포하여 관찰하였다. 관찰 결과 자극이 없는 것으로 판정되었다.

1-4] 안점막 자극 시험 ( Eye irritation test) : 토끼 9마리에 2% 농도로 saline 에 희석하여 동물 1마리당 0.1 mL 씩 눈에 투여하였다. 실험 결과 각막, 홍채, 결막에 대한 특별한 안점막 자극반응을 나타내지 않았다.

1-5] 피부 감작성 실험 (Skin sensitization test) : Gunea pig 암수 각 3마리씩 6마리에 Magnusson 과 Kligman 의 시험방법에 따라 실시한 결과 홍반, 부종, 가피 형성 등의 피부이상 증상은 관찰할 수 없었다.

1-6] 인체 첩포 실험 (Human patch test) : 20-28세의 건강한 여성 30명을 대상으로 CTFA Guideline (The Cosmetic Toiletry and Fragrance Association, INC, Washington, D. C. 20036, 1991) 에 따라 실시하였다. 결과 피부일차 자극 반응은 나타나지 않았다.

1-7] 누적 자극성 실험 (Repeat Insult Human Patch Test) : 인체 첩포 실험 대상자에게 CTFA Guideline 에 따라 실험한 결과 누적 자극 반응 및 감작 반응이 나타나지 않았다.

이상의 독성 및 피부에 대한 안전성 실험에서 동과자와 행인 및 도인 추출물은 피부 외용제로서 안전한 물질임을 확인할 수 있었다.

[시험예 2] 주름개선효과

동과자와 행인 및 도인 추출물의 주름개선효과로서는 피부 세포(skin cell) 증식효과를 보기위해 인체 정상섬유아세포(Human Nomal Fibroblast)를 96-웰 마이크로 플레이트(96-well microplate)의 각 웰(Well)에 1×10⁴ 세포가 되도록 접종하여 디엠이엠(DMEM : Dulbecco's Modified Eagle's Medium)배지에서 24시간 배양한다. 배양후 상기에서 제조한 실시예 1-7과 비교예 1-3을 최종 농도 250㎕/㎖ 되도록 조정한 시럼(Serum)이 없는 디엠이엠(DMEM) 배지로 교체한 후 24시간 더 배양한다. 3-(4,5-디메틸리아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸리움(MTT : (3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)2,5-diphenyl tetrazolium : 5mg/㎖) 10㎕씩 첨가하고 4시간 방치 후, 배지 부분을 버린다. 각 웰당 100㎕의 디메틸 설폭시드(DMSO : Dimethyl sulfoxide)용액을 가하여 마이크로 플레이트 리더(Microplate Reader)로 570nm 에서의 흡광도를 측정하였다. 상기과정을 실시하여 하기식으로부터 세포증식효과를 구해 그 결과를 표 1 에 나타내었다

세포증식효과(%)={(추출물처리시의 흡광도-대조군의 흡광도)/대조군의 흡광도} X 100

[표 1] 세포증식효과

상기 표 1 과 같이, 본 발명의 동과자와 행인 및 도인 추출물이 첨가된 인체 정상 섬유아세포에서 세포증식효과가 우수함을 알 수 있다.

[실험예 2] 콜라겐 생합성 촉진효과

동과자와 행인 및 도인 추출물의 피부에 대한 효과를 살펴보기 위하여 in vitro 방법으로 collagen 생합성 촉진 효과를 검토하였다. 시험방법은 인체 정상 섬유아세포(Human Nomal Fibroblast)를 24well 에 well 당 10⁵개씩 seeding 하여 90% 정도까지 발전할 때까지 배양한다. 이를 PBS로 한번 씻어낸 후, 상기의 후 상기에서 제조한 실시예 1 내지 6 및 비교예 1-3 의 동과자와 행인 및 도인 추출물을 처리하고 24시간 동안 CO₂ 배양기에서 배양한다. 이들의 상층액을 떠내어 procollagen type (I) C-Peptide(PICP)양을 여 ELISA kit 를 이용하여 procollagen의 증감여부를 보았다. 시험결과를 하기 표 2 에 나타내었다. 합성능은 control (비처리군)을 100으로 하여 대비한 것이다.

콜라겐은 피부의 결합조직의 대부분을 차지하는 생체물질로서 피부의 탄력과 관계가 있으며 노화와 더불어 그 양이 감소한다. 따라서 콜라겐의 생합성 양을 증가시키면 피부의 탄력성을 증가시킬 수 있다.

[표 2] 콜라겐 생합성 촉진효과

[실험예 3] 인체 피부색소 세포 티로시나제 활성 저해 효과

효소 티로시나제는 인체 티로시나제를 사용하였다. 효소의 활성도는 L-DOPA의 갈변 생성물인 DOPA chrome이 생성되는 정도를 475nm에서 측정한다. 50mM Tris-HCl완충용액(pH 7.5)760ul을 시험관에 넣어 37℃를 유지시키고 20mM L-DOPA 190ul와 효소액 50ul, 미백활성 측정 대상 시료 40ul를 가하고 잘 혼합하여 475nm에서 흡광도 변화를 측정한다. 이 때 대상 시료를 넣지 않고 측정한 것을 control로 한다. control의 효소 활성을 100으로 보았을 때 control과 비교하여 각각의 효소 저해 활성을 %로 표시하였다. 이때 동과자와 행인 및 도인 추출물의 티로시나제 저해 활성의 상대적인 강도를 관찰하기 위하여 미백 화장료에 널리 이용되는 알부틴과의 상대적인 활성을 비교하였다.

대상 시료에 의한 Tyrosinase 저해 활성(%) = (시료 첨가시의 흡광도/Control의 흡광도) × 100

[표 3] 티로시나제 억제 활성

표 3 에서 보는 바와 같이 동과자와 행인 및 도인 추출물은 인체 티로시나제 활성억제효과를 보였다.

상기와 같은 화장품적 효능이 있는 동과자와 행인 및 도인 추출물을 가용화 제형과 유화제형에 각각 도입하여 아래와 같은 제형을 만드는 것을 예시함으로써 본 발명을 보다 상세히 설명하지만, 본 발명이 이들 제조예에만 한정되는 것은 아니다.

[조성물 제조예]

[제조예 1 내지 3] 유화 제형

[표 4] 유화제형의 조성

[제조예 4 내지 6]가용화 제형

[표 5] 가용화제형의 조성

상기에서 제조한 제조예 1 내지 6 의 제형에 대하여 화장품으로서 보존 안정성을 평가하였다. 보존 안정성을 확인하기 위하여 온도별 변화에 따른 안정성을 조사하고, 그 결과를 표 6 에 나타내었다.

[표 6] 온도별 보존 안정성

표 6 으로부터, 본 발명에 따른 제형은 보존 안정성이 우수함을 알 수 있었다.실험예 4 ; 멜라닌 합성량 저해 효과Cell을 6 well plate에 2 X 10⁴ cells가 되도록 깔고 37℃, 5% CO₂ 인큐베이이터에서 24시간 배양한다. 배양후 배지를 제거하고 10% FBS, 2mm theophylline이 함유된 DMEM 배지를 새로운 배지로 사용하고 시험 시료를 첨가하여 3일간 매일 처리한다. 배양액을 제거하고 0.25% trypsin-EDTA용액을 처리하여 세포를 수확한다. 원심분리후 상등액을 제거하고 1N NaOH 100ul를 넣어 세포내 멜라닌을 녹인다. 이 용액을 PBS로 희석시킨 다음 Elisa reader로 475 nm에서 흡광도를 측정하여 시료의 멜라닌 생성저해율을 구한다. Blank는 시료를 처리하지 않고 B-16/F10 melanoma cell을 배양한 것을 사용하였다.[표 4] 멜라닌 생성 억제 효과상기 표 4으로 부터 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 미백효과가 우수함을 알 수 있다.시험예 5 : 인체 피부에 대한 미백 효과 시험[실험 방법] 건강한 20명의 남자를 대상으로 피검자의 윗 팔뚝 부위에 직경1.5cm의 구멍6개가 뚫린 불투명 테이프를 부착한 뒤 각 피검자의 최소 홍반량의 1.5-2배정도의 자외선(UVB)을 조사하여 피부의 흑화를 유도한 뒤 시험물질들을 발라서 두달 후에 색차계를 이용하여 피부의 명암을 측정하였다. 각 시험물질 들은 프로필렌글리콜/에탄올(8/2)의 비이클에 각각이 1%의 농도가 되게 녹여 하루에 2회씩(아침, 저녁) 매일 바르게 하였다.피부의 명암은 'L'값으로 표현되며 0(검정)에서 100(순백색) 사이의 값을 나타낸다(한국인은 일반적으로 50-70의 값을 나타냄).시험물질을 도포하면 효과가 있는 경우는 L값이 점차 증가하게 되며 시험물질들 사이의 비교는 ΔL(최종 L값 - 시험물질도포를 바르기 직전의 값)으로 표현 하였다.[표 5] 인체 피부에 대한 미백 효과[조성물 제조예][제조예 1 내지 3] 유화 제형제조방법:1) 1 내지 9 의 원료의 혼합물을 65도～70도로 가열하였다.2) 10 의 원료를 상기 1) 의 혼합물에 투입하였다.3) 11 내지 13 의 원료의 혼합물을 65도～70도로 가열하여 완전히 용해시켰다.4) 65도～70도로 가열하면서 상기 2) 의 혼합물을 상기 3) 의 혼합물에 서서히 첨가하면서 rpm 8,000에서 2～3분간 유화시켰다.5) 14 의 원료를 소량의 물에 용해시킨 후 상기 4) 의 혼합물에 첨가하고2분간 더 유화시켰다.6) 15 내지 17 의 원료를 각각 평량한 후 상기 5) 의 혼합물에 넣고 30초간 더 유화시켰다.7) 상기 6) 의 혼합물을 유화 후 탈기과정을 거쳐 25도～35도로 냉각시켜, 유화제형을 제조하였다.[제조예 4 내지 6]가용화 제형제조방법:1) 2 내지 6의 원료를 상기 1의 정제수에 넣고 아지 믹서를 이용하여 용해시켰다.2) 8 내지 11의 원료를 상기 7의 알코올에 넣고 완전 용해시켰다.3) 상기 2)의 혼합물을 상기 1)의 혼합물에 서서히 첨가하면서 가용화시켰다.상기에서 제조한 제조예 1 내지 6 의 제형에 대하여 화장품으로서 보존 안정성을 평가하였다. 보존 안정성을 확인하기 위하여 온도별 변화에 따른 안정성을 조사하고, 그 결과를 표 8 에 나타내었다.[표 8] 온도별 보존 안정성표 8 로부터, 본 발명에 따른 제형은 보존 안정성이 우수함을 알 수 있었다.

상기에서 설명한 바와 같이, 본 발명의 동과자와 행인 및 도인 추출물을 함유한 화장품은 주름개선효과, 콜라겐 생합성 촉진효과, 미백효과가 우수하며 피부에 안전하다.

또한 본 발명의 동과자와 행인 및 도인 추출물을 함유한 화장품은 수용성 화장품 또는 유화 화장품 제형으로 제공될 수 있고, 제형화된 경우에 보존 안정성도 우수하였다.

Claims (4)

1. 활성성분으로서 동과자와 행인 및 도인추출물을 조성물의 총중량을 기준으로 0.0001-10 중량 %를 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료
2. 제1항에 있어서, 상기 동과자와 행인 및 도인 추출물이 동과자와 행인 및 도인을 분쇄한 다음 탄소수 1-4개의 무수, 또는 함수 저급 알코올(메탄올, 에탄올), 물과 저급 알코올의 혼합물, 아세톤, 1,3-부틸렌 글리콜(Butylene glycol), 노말 프로판올(n-Propanol), 이소 프로판올(iso-Propanol), 노말 부탄올(n-Butanol) 등의 극성용매와 이것들의 혼합용매를 5-20배 부피량을 가하여 침적 추출하여 여과한 후 감압 농축하고 이를 다시 에틸아세테이트(Ethyl acetate), 또는 메틸렌클로라이드(Methylenechloride)를 용매로 하여 하여 얻은 추출물을 활성탄으로 처리한 후 냉각 콘덴서가 달린 증류장치에서 적정온도로 강압 농축하여 동과자와 행인과 도인 추출물을 포함하는 화장료 조성물.
3. 제1항에 있어서,주름개선 효과, 콜라겐 생합성 효과를 나타내어 피부 활력을 증가시킴을 특징으로 하는 화장료 조성물
4. 제1항에 있어서,멜라닌 합성을 저해하여 피부색을 밝게 하는 효과를 갖는 화장료 조성물