CN108246264B - 一种dna免疫吸附剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种DNA免疫吸附剂及其制备方法。该制备方法包括如下步骤：1)含有醛基的聚苯乙烯基大孔吸附树脂的制备：2)DNA配基接枝固载。通过该方法制备的DNA免疫吸附剂直接采用大孔吸附树脂作为载体，用大孔吸附树脂替代活性炭或碳化树脂，由于生产过程中减少了炭化和活化工艺，保留了树脂骨架的韧性，大幅降低了微粒脱落的风险；另外，本发明采用化学接枝法，直接将DNA配基固载到大孔吸附树脂上，通过化学键连接的DNA配基固载牢固，不易脱落；此外，由于没有火棉胶等包膜材料的包埋和掩盖，固载在树脂表面及孔道内部的DNA可以发挥出最大的吸附作用。

Description

一种DNA免疫吸附剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及血液净化领域，具体涉及一种能用于吸附系统性红斑狼疮患者体内致病物质的DNA免疫吸附剂及其制备方法。
背景技术
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是一种较常见的累及多系统多器官的自身免疫性疾病。由于体内有大量致病性自身抗体和免疫复合物而造成组织损伤，临床上可出现各个系统和脏器损伤的表现，如皮肤、关节，浆膜、心脏、肾脏，中枢神经系统、血液系统等等，该病在世界范围内均有出现，患病率为4/10万～25/10万，亚洲及黑人患病率较高，我国的患病率为70/10万～75/10万。女性发病明显多于男性，约为10∶1，育龄妇女为发病高峰，老人及儿童也可患病。其中，抗双链DNA抗体(抗ds-DNA抗体)是参与SLE发病的主要抗体，其特异性可达90％，是SLE特异性抗体。
近年来，在血浆置换基础上发展了一种新的疗法，即免疫吸附。这是通过吸附除去内源性和外源性致病因子，净化血液，从而达到治疗目的。免疫吸附是通过抗原抗体免疫反应或物理化学作用除去致病因子，主要是血浆吸附，从而避免了离心式和一次膜血浆分离大量丢弃血浆的弊端，因此利用血液直接吸附和血浆吸附，能特异地选择性地吸附血浆中特定的病因物质。
根据吸附剂与被吸附物质之间的作用原理，可以将吸附剂分为生物亲和型和物化亲和型。前者包括：①抗原固定型：将抗原固定在载体上，吸附除去相应的抗体或免疫复合物；②抗体固定型：将抗体固定在载体上，吸附除去相应的抗原；③补体固定型：将C1q固定在载体上，吸附除去免疫复合物；④蛋白A固定型：将蛋白A固定在载体上，吸附除去相应的免疫球蛋白；后者包括：①静电结合型：通过吸附剂和被吸附物之间的静电作用而相互结合；②疏水结合型：靠吸附剂侧链的疏水基团与被吸附物之间的疏水作用力而结合。
其中应用比较广泛的是DNA免疫吸附，采用免疫吸附疗法可以特异性的吸附和清除抗ds-DNA抗体，从而对SLE患者进行有效的治疗。
欧洲专利EP 0272792A1披露了基于活性炭或者碳化树脂的DNA免疫吸附剂制备方法，它们以活性炭或碳化树脂为载体，以小牛胸腺DNA为配基，利用火棉胶包膜固载DNA。但是，无论是活性炭还是碳化树脂，均存在碳颗粒易脱落的问题，即使通过火棉胶包膜，仍然无法解决微粒脱落的问题，因而使用之前需要增加时间进行充分预冲至无微粒，从而避免治疗时微粒随血液循环进入人体而导致发生血栓、过敏、刺激等严重的不良反应；此外，DNA采用火棉胶包埋方式固载还存在两个缺点：(1)部分DNA会由于包埋不充分，在后续生产过程中可能发生脱落，导致DNA固载量下降；(2)部分被包埋过深的DNA又无法与抗体接触；无论是DNA固载量下降还是包埋过深都会影响吸附剂的吸附性能。
因此，提供一种吸附性能好的，微粒脱落率低的DNA免疫吸附剂成为亟待解决的问题。
发明内容
本发明所要解决的首要技术问题在于提供一种新型DNA免疫吸附剂的制备方法。该方法直接采用大孔吸附树脂作为载体，更安全、更有效、同时生产工艺更为简单。
本发明所要解决的另一技术问题在于提供一种根据上述方法制备的DNA免疫吸附剂。
为了实现上述发明目的，本发明提供一种新型DNA免疫吸附剂的制备方法，包括如下步骤：
1)含有醛基的聚苯乙烯基大孔吸附树脂的制备：
以乙烯基苯甲醛单体和苯乙烯类单体为原料，以多乙烯基单体为交联剂，再加入致孔剂和引发剂，混合均匀，制成混合有机相，将混合有机相加入到分散介质中，机械搅拌，待混合有机相在分散介质溶液中形成一定大小的均匀液滴后，进行悬浮聚合，反应结束后，水洗至水洗液澄清，用丙酮抽提12-36h，再水洗至无丙酮味，抽滤，得到含有醛基的聚苯乙烯基大孔树脂；
其中，所述乙烯基苯甲醛单体占单体总重量的5％-40％；所述苯乙烯类单体占单体总重量的5-40％；所述多乙烯基单体占单体总重量的55-80％；所述致孔剂的用量为单体总重量的70％-250％；所述引发剂的用量为单体总重量的0.5％-1.5％；所述分散介质与混合有机相的体积比为1-3∶1；所述分散介质由分散剂和水组成；所述分散剂占分散介质质量百分比为0.5％-2％；
具体操作时，悬浮聚合过程为：加热升温至70-75℃，聚合3-6小时，升温至78-82℃反应5-8小时，再升温至85-90℃，继续反应4-8小时后停止反应；悬浮聚合反应总时间优选为14-18小时；
2)DNA配基接枝固载：
取小牛胸腺DNA溶解于0.2mol/L pH＝7.5-8.0的Tris-HCl缓冲溶液中，配制成浓度为0.5-2mg/mL DNA溶液，将步骤1)所得的含醛基的聚苯乙烯基大孔吸附树脂加入到相当于树脂质量1-5倍的上述DNA溶液中，在60-80℃下反应5-18h，得到接枝DNA配基的大孔吸附树脂。
其中，所述大孔树脂的粒径范围为0.4-2mm，优选为0.6-1.2mm。
所述乙烯基苯甲醛单体为3-乙烯基苯甲醛或4-乙烯基苯甲醛中的一种或者两种，优选为4-乙烯基苯甲醛。
当乙烯基苯甲醛单体为两种的混合物时，二者间以任意比例混合。
所述的苯乙烯类单体选自苯乙烯、甲基苯乙烯、乙基苯乙烯的一种或两种，优选为苯乙烯、乙基苯乙烯。
当苯乙烯类单体为两种的混合物时，二者间以任意比例混合。
所述的交联剂为多乙烯基单体，如二乙烯基苯(DVB)、二乙烯基甲苯，优选为二乙烯基苯。
所述致孔剂为芳烃、高级醇、烷烃、酯类中的一种或两种或三种。其中，所述芳烃为甲苯或二甲苯，所述高级醇为丁醇、己醇或环己醇，所述烷烃为正庚烷，所述酯类为乙酸丁酯、乙酸乙酯或丁酸丁酯，优选为甲苯、环己醇、液体石蜡。
当致孔剂为两种或三种的混合物时，彼此间以任意比例混合。
所述引发剂为有机过氧化物，如：过氧化苯甲酰、过氧化-2-乙基己酸叔丁酯或过氧化-2-乙基己酸叔戊酯，优选为氧化苯甲酰。
所述分散剂为明胶、聚乙烯醇或羧甲基纤维素，优选为明胶。
所述大孔吸附树脂的比表面为300-1100m2/g，优选为450-800m2/g；平均孔径为4-20nm，优选为8-15nm；醛基含量为0.5-4mmol/g，优选为1.5-3.0mmol/g。
步骤2)中所得固载DNA配基的大孔吸附树脂中DNA的固载量为0.3-4mg/mL，优选为1.0-3.0mg/mL。
经实验证明，过低的DNA的固载量会影响吸附剂的吸附性能，同时过高的固载量要求树脂中含有更多醛基，但是过多的乙烯基苯甲醛单体会影响树脂的孔结构及树脂强度等性能指标。
本发明首先制备能与小牛胸腺DNA分子发生化学反应的大孔吸附树脂，在苯乙烯、二乙烯基苯体系中引入乙烯基苯甲醛单体，通过自由基聚合制备含有醛基的聚苯乙烯基大孔吸附树脂；再利用DNA上的碱基与大孔吸附树脂上的醛基发生接枝反应从而成功地将小牛胸腺DNA分子固载到大孔吸附树脂上。
本发明通过在聚苯乙烯系列树脂的合成中引入乙烯基苯甲醛单体，成功地在大孔吸附树脂的骨架上引入醛基；再利用DNA分子中的碱基与大孔吸附树脂骨架上的醛基之间的化学反应，成功地在树脂骨架上接枝DNA分子，从而获得了新型的DNA免疫吸附剂。
该新型DNA免疫吸附剂具有以下优点：
(1)与活性炭或碳化树脂相比，聚苯乙烯系列大孔吸附树脂骨架强度高，微粒脱落少，可以缩短预冲时间、减少预冲液用量，节约资源，同时提高免疫吸附柱的使用安全性。
(2)以大孔吸附树脂作为DNA免疫吸附剂的载体，吸附剂具有更加可控的孔结构，通过调整孔径大小，使大孔吸附树脂的内表面也能固载DNA配基，有利于提高吸附剂的吸附性能。
(3)通过化学接枝法固载DNA分子，DNA配基不会脱落，吸附剂性能稳定。
(4)直接接枝法固载DNA配基，DNA分子链段可与致病物质充分接触，可最大化发挥DNA分子对抗ds-DNA抗体的特异性结合能力。
(5)采用DNA溶液直接接枝固载，DNA溶液浓度不会被火棉胶等包膜液稀释，可以获得DNA固载量更高的吸附剂。
(6)采用直接接枝法而不是常规的DNA包膜法，还可避免由于包膜而导致树脂部分孔径被堵塞而造成的吸附性能下降等问题。
本发明提供一种新型DNA免疫吸附剂及其制备方法，直接采用大孔吸附树脂作为载体，用大孔吸附树脂替代活性炭或碳化树脂，由于生产过程中减少了炭化和活化工艺，保留了树脂骨架的韧性，大幅降低了微粒脱落的风险；另外，本发明采用化学接枝法，直接将DNA配基固载到大孔吸附树脂上，通过化学键连接的DNA配基固载牢固，不易脱落；此外，由于没有火棉胶等包膜材料的包埋和掩盖，固载在树脂表面及孔道内部的DNA可以发挥出最大的吸附作用。因此，本发明提供的以大孔吸附树脂为载体、采用接枝法直接固载DNA配基的新型免疫吸附剂具有使用更加安全、吸附性能更加可靠等显著优势。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。其中所用的小牛胸腺DNA购买自美国sigma公司；其中Tris-HCl缓冲溶液的配方依据三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液的浓度与对应量盐酸混匀配制而成；其它化学试剂均为常见化学药品，可从普通化学商品市场采购。
实施例1：
(1)含有醛基的聚苯乙烯基大孔吸附树脂的制备：
在1000mL三颈烧瓶中加入含1.5wt％明胶的水溶液500mL，加入含7.5g 4-乙烯基苯甲醛、10.5g乙基苯乙烯、42g二乙烯基苯、120g环己醇、0.6g过氧化苯甲酰的混合有机相，在机械搅拌下，升温至75℃聚合反应3h，升温至80℃继续反应7小时，再升温至85℃反应5h，反应结束后，水洗至水洗液澄清后，用丙酮抽提20h，再水洗至无丙酮味，抽滤，获得含醛基的聚苯乙烯基大孔吸附树脂，筛选出粒径在0.5-1.2mm的树脂备用。
经氮气吸附法测试比表面积、孔结构等数据，得知所得树脂的比表面积为760m2/g；孔体积为1.71cm3/g；平均孔径为8.89nm；经电导滴定法测得树脂中醛基含量为0.75mmol/g
(2)DNA配基接枝固载：
取0.1g小牛胸腺DNA溶解于100mL的0.2mol/L pH＝7.6的Tris-HCl缓冲溶液中，配制成浓度为1mg/mL DNA Tris-HCl(pH＝7.6)溶液100mL。
向500mL的三颈烧瓶中加入30g上述所得的含醛基的聚苯乙烯基大孔吸附树脂，再加入配制好的100mL浓度为1mg/mL的小牛胸腺DNA Tris-HCL(pH＝7.6)溶液，开动机械搅拌器，并加热升温至70℃反应12h；反应结束后冷却至室温，将大孔吸附树脂滤出，再用pH＝7.6的Tris-HCL缓冲溶液洗去大孔吸附树脂上未参与反应的DNA分子，再把大孔吸附树脂水洗至中性，即获得在大孔吸附树脂上接枝固载DNA分子的免疫吸附剂。
采用磷钼铵酸显色法测定DNA固载量为0.55mg/mL。
实施例2：
(1)含有醛基的聚苯乙烯基大孔吸附树脂的制备：
在1000mL三颈烧瓶中加入含1wt％聚乙烯醇的水溶液500mL，再加入含15g3-乙烯基苯甲醛、9g乙基苯乙烯、36g二乙烯基苯、120g甲苯、0.6g过氧化苯甲酰的混合有机相，在机械搅拌下，升温至75℃聚合反应3h，升温至80℃固化7小时，再升温至85℃反应5h，反应结束后，蒸出致孔剂甲苯后，水洗至水洗液澄清后，用丙酮抽提12h，再水洗至无丙酮味，抽滤，获得含醛基的聚苯乙烯基大孔吸附树脂，选取粒径在0.5-1.2mm的树脂备用。
经氮气吸附法测试比表面积、孔结构等数据，得知所得树脂的比表面积为620m2/g；孔体积为1.63cm3/g；平均孔径为10.53nm；经电导滴定法测得树脂中醛基含量为1.36mmol/g
(2)DNA配基接枝固载：
取0.15g小牛胸腺DNA溶解于150mL的0.2mol/L pH＝7.6的Tris-HCl缓冲溶液中，配制成浓度为1mg/mL DNA Tris-HCl(pH＝7.6)溶液150mL。
向500mL的三颈烧瓶中加入30g上述所得的含醛基的聚苯乙烯基大孔吸附树脂，加入150mL浓度为1mg/mL的DNATris-HCL(pH＝7.6)溶液，开动机械搅拌器，并加热升温至70℃反应14h；反应结束后冷却至室温，将大孔吸附树脂滤出，再用pH＝7.6的Tris-HCL缓冲溶液洗去大孔吸附树脂上未参与反应的DNA分子，再把大孔吸附树脂水洗至中性，即获得在大孔吸附树脂上接枝固载DNA分子的免疫吸附剂。
采用磷钼铵酸显色法测定DNA固载量为0.93mg/mL。
实施例3：
(1)含有醛基的聚苯乙烯基大孔吸附树脂的制备：
在1000mL三颈烧瓶中加入含0.1wt％羧甲基纤维素的水溶液500mL，加入20g 4-乙烯基苯甲醛、8g乙基苯乙烯、32g二乙烯基苯、90g甲苯、60g液体石蜡、0.6g过氧化苯甲酰的混合有机相，在机械搅拌下，升温至75℃聚合反应5h，升温至80℃继续反应6小时，再升温至85℃继续反应5h，反应结束后，蒸出致孔剂中的甲苯后，水洗至水洗液澄清后，用丙酮抽提12h，再水洗至无丙酮味，抽滤，获得含醛基的聚苯乙烯基大孔吸附树脂，选取粒径在0.5-1.2mm的树脂备用。
经氮气吸附法测试比表面积、孔结构等数据，得知所得树脂的比表面积为480m2/g；孔体积为1.45cm3/g；平均孔径为12.08nm；经电导滴定法测得树脂中醛基含量为2.16mmol/g
(2)DNA配基接枝固载：
取0.15g小牛胸腺DNA溶解于150mL的0.2mol/L pH＝7.6的Tris-HCl缓冲溶液中，配制成浓度为1mg/mL DNA Tris-HCl(pH＝7.6)溶液150mL。
向500mL的三颈烧瓶中加入30mL上述所得的含醛基的聚苯乙烯基大孔吸附树脂，加入150ml浓度为1mg/mL的DNA Tris-HCL(pH＝7.6)溶液，开动搅拌器，升温至70℃反应15h；反应结束后冷却至室温，将大孔吸附树脂滤出，再用pH＝7.6的Tris-HCL缓冲溶液洗去大孔吸附树脂上未参与反应的DNA分子，再把大孔吸附树脂水洗至中性，即获得在大孔吸附树脂上接枝固载DNA分子的免疫吸附剂。
采用磷钼铵酸显色法测定DNA固载量为1.26mg/mL。
对照例1：
取30ml干燥后的球形活性碳，加入到100ml质量分数为0.75％的火棉胶丙酮溶液，启动搅拌后，滴加20ml浓度为1mg/mL的小牛胸腺DNATris-HCL(pH＝7.6)溶液，滴加完毕后，搅拌30分钟中，过滤，干燥即得到DNA火棉胶包膜活性碳的免疫吸附剂。
采用磷钼铵酸显色法测定DNA固载量为0.42mg/mL。
对照例2：
取30mL干燥后的碳化树脂，加入到100mL质量分数为0.75％的火棉胶丙酮溶液，启动搅拌后，滴加20mL浓度为1mg/mL的小牛胸腺DNA Tris-HCL(pH＝7.6)溶液，滴加完毕后，搅拌30分钟中，过滤，干燥即得到DNA火棉胶包膜碳化树脂的免疫吸附剂。
采用磷钼铵酸显色法测定DNA固载量为0.45mg/mL。
评价试验：
(1)吸附剂吸附性能评价试验
取实施例1、实施例2、实施例3、对照样1、对照样2为待测样品。分别取制备的新型DNA免疫吸附剂和市售DNA免疫吸附剂2mL，各加入SLE病人血浆20mL，在37℃振荡下吸附两小时，取吸附前后血浆检测。采用酶联免疫吸附法对抗双链DNA抗体进行定量检测，试剂盒为上海科新生物技术股份有限公司生产，仪器为深圳爱康全自动酶免仪Uranus AE120。结果参见表1。
DNA固载量 抗ds-DNA抗体的吸附率
实施例1 0.55mg/mL 63.3％
实施例2 0.93mg/mL 76.5％
实施例3 1.26mg/mL 84.7％
对照样1 0.42mg/mL 52.6％
对照样2 0.45mg/mL 54.1％
表1：实施例及对照例对抗ds-DNA抗体的吸附性能
根据表1的数据，发现采用本发明方法制备的新型DNA免疫吸附剂具有更高的DNA固载量和更加优异的吸附性能，说明采用DNA接枝的方式可以提高配基固载量和提升吸附剂吸附性能。
(2)吸附剂微粒脱落测试
取实施例1、实施例2、实施例3、对照样1、对照样2为待测样品。根据YY0464-2009行业标准对微粒脱落情况进行测试。结果参见表2。
15-25μm微粒数量 ＞25μm微粒数量
实施例1 43个/100mL 28个/100mL
实施例2 52个/100mL 26个/100mL
实施例3 35个/100mL 31个/100mL
对照样1 180个/100mL 78个/100mL
对照样2 120个/100mL 65个/100mL
表2：实施例及对照例的微粒脱落数据
根据表2的数据，发现采用本发明方法制备的新型DNA免疫吸附剂比采用活性碳或碳化树脂为载体的吸附剂，在微粒脱落方面具有显著的优势。
从上述实施例和对比例可以看出，本发明提供的DNA免疫吸附剂及其制备方法采用大孔吸附树脂代替碳化树脂或活性炭，减少了工艺步骤，提高了DNA的固载量，同时降低了颗粒脱落的风险，具有使用更加安全、吸附性能更好的优势。
上面对本发明所提供的DNA免疫吸附剂及其制备方法进行了详细的说明。对本领域的一般技术人员而言，在不背离本发明实质精神的前提下对它所做的任何显而易见的改动，都将构成对本发明专利权的侵犯，将承担相应的法律责任。

Claims (11)

1.一种DNA免疫吸附剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
1）含有醛基的聚苯乙烯基大孔吸附树脂的制备：
以乙烯基苯甲醛单体和苯乙烯类单体为原料，以多乙烯基单体为交联剂，再加入致孔剂和引发剂，混合均匀，制成混合有机相，将混合有机相加入到分散介质中，机械搅拌，待混合有机相在分散介质溶液中形成一定大小的均匀液滴后，进行悬浮聚合；反应结束后，水洗至水洗液澄清，用丙酮抽提12-36h，再水洗至无丙酮味，抽滤，得到含有醛基的聚苯乙烯基大孔树脂；
其中，所述乙烯基苯甲醛单体占单体总重量的5%-40%；
所述苯乙烯类单体占单体总重量的5-40%；
所述多乙烯基单体占单体总重量的55-80%；
所述致孔剂的用量为单体总重量的70%-250%；
所述引发剂的用量为单体总重量的0.5%-1.5%；
所述分散介质与混合有机相的体积比为1-3∶1；
所述分散介质由分散剂和水组成；其中分散剂占分散介质质量百分比为0.5%-2%；
具体操作时，悬浮聚合过程为：加热升温至70-75℃，聚合3-6小时，升温至78-82℃反应5-8小时，再升温至85-90℃，继续反应4-8小时后停止反应；
2）DNA配基接枝固载：
取小牛胸腺DNA溶解于0.2mol/L pH＝7.5-8.0的Tris-HCl缓冲溶液中，配制成浓度为0.5-2mg/mLDNA溶液，将步骤1）所得的含醛基的聚苯乙烯基大孔吸附树脂加入到相当于树脂质量1-5倍的上述DNA溶液中，在60-80℃下反应5-18h，得到接枝DNA配基的大孔吸附树脂。
2.如权利要求1所述的DNA免疫吸附剂的制备方法，其特征在于：
步骤1）所述含有醛基的聚苯乙烯基大孔树脂的粒径范围为0.4-2mm。
3.如权利要求1所述的DNA免疫吸附剂的制备方法，其特征在于：
步骤1）所述乙烯基苯甲醛单体为3-乙烯基苯甲醛或4-乙烯基苯甲醛中的一种或者两种。
4.如权利要求1所述的DNA免疫吸附剂的制备方法，其特征在于：
步骤1）所述苯乙烯类单体选自苯乙烯、甲基苯乙烯、乙基苯乙烯的一种或两种。
5.如权利要求1所述的DNA免疫吸附剂的制备方法，其特征在于：
步骤1）所述多乙烯基单体为二乙烯基苯或二乙烯基甲苯。
6.如权利要求1所述的DNA免疫吸附剂的制备方法，其特征在于：
步骤1）所述致孔剂为芳烃、高级醇、烷烃、酯类中的一种或两种或三种，其中，所述芳烃为甲苯或二甲苯，所述高级醇为丁醇、己醇或环己醇，所述烷烃为正庚烷，所述酯类为乙酸丁酯、乙酸乙酯或丁酸丁酯。
7.如权利要求1所述的DNA免疫吸附剂的制备方法，其特征在于：
步骤1）所述引发剂为有机过氧化物；所述分散剂为明胶、聚乙烯醇或羧甲基纤维素。
8.如权利要求7所述的DNA免疫吸附剂的制备方法，其特征在于：
所述有机过氧化物为过氧化苯甲酰、过氧化-2-乙基己酸叔丁酯或过氧化-2-乙基己酸叔戊酯。
9.如权利要求1所述的DNA免疫吸附剂的制备方法，其特征在于：
步骤1）所述含有醛基的聚苯乙烯基大孔树脂的比表面为300-1100m2 /g、平均孔径为4-20nm，醛基含量为0.5-4mmol/g。
10.如权利要求1所述的DNA免疫吸附剂的制备方法，其特征在于：
步骤2）所得固载DNA配基的大孔吸附树脂中DNA的固载量为0.3-4mg/mL。
11.一种根据权利要求1-10中任意一项所述制备方法制备的DNA免疫吸附剂。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2343511A (en) * 1998-06-08 2000-05-10 Univ Nankai A method for preparing a carbonized resin DNA immunoadsorbent
CN105085829A (zh) * 2015-08-17 2015-11-25 珠海健帆生物科技股份有限公司 用于毒素物质吸附的大孔吸附树脂的制备方法
CN105289538A (zh) * 2015-11-04 2016-02-03 珠海健帆生物科技股份有限公司 Dna免疫吸附剂及其制备方法

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