CN108243837A - 一种富硒食用菌的培养基及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本申请公开了一种富硒食用菌的培养基，包括以下重量份的原料：构树基料100‑1000重量份；基质辅料0‑800重量份；复合添加剂10‑100重量份；水100‑1000重量份；其中，基质辅料为牧草、秸秆、棉籽壳、米糠、麸皮、玉米芯中的一种或多种，复合添加剂含有氮、磷、硫、钙、镁、锌、铬、钴、硒与膨润土。本申请还提供上述培养基的制备方法。本申请提供的培养基，原料来源广泛、营养丰富、能促进食用菌生长，所生产的食用菌富含有机营养元素、对人体具有确实的营养保健功能。

Description

一种富硒食用菌的培养基及其制备方法

技术领域

本申请涉及食用菌栽培技术领域，特别是涉及一种富硒食用菌的培养基及其制备方法。

背景技术

食用菌(食用蘑菇)营养丰富，味道鲜美，自古以来被列为上等佳肴。食用菌富含人体必需的氨基酸、矿物质、糖类等营养成分，是高蛋白、低脂肪的健康食品。经常食用蘑菇能很好地协调人体对其他食物的吸收和转运，增加食物的营养利用效率。同时，食用菌还含有多种维生素，利于人体摄取维生素D、维生素A等营养物质。此外，很多食用菌中都含有胡萝卜素，在人体内可转变为维生素A，因此食用菌还有“维生素A宝库”之称。

食用菌的代料栽培，是指利用各种有机物制成培养基，以替代传统的木材栽培食用菌。代料栽培可以使用各种农副产品，如木屑、蔗渣、农作物秸秆等原料，还可添加麦皮、米糠等作为辅料，为食用菌提供碳源、氮源、矿物质等生长必须的营养元素。代料栽培的所使用的原料，对产出的食用菌质量有很大影响。如何提供一种营养丰富、利于食用菌生长的培养基质是本领域技术人员亟待解决的问题。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的第一个目的为提供一种富硒食用菌的培养基；本发明的第二个目的为提供一种富硒食用菌的培养基的制备方法。本发明的培养基，原料来源广泛、营养丰富、能促进食用菌生长，所生产的食用菌富含营养元素、对人体有益。

本发明提供的技术方案如下：

一种富硒食用菌的培养基，包括以下重量份的原料：

其中，基质辅料为牧草、秸秆、棉籽壳、米糠、麸皮、玉米芯中的一种或多种，复合添加剂含有氮、磷、硫、钙、镁、锌、铬、钴、硒与膨润土。

优选地，上述培养基，包括以下重量份的原料：

优选地，所述构树基料为构树木屑、构树枝、构树叶中的一种或多种。

优选地，所述构树基料、基质辅料、复合添加剂经粉碎后使用。

优选地，所述复合添加剂包括以下重量份的原料：

优选地，所述复合添加剂包括以下重量份的原料：

本发明还提供上述培养基的制备方法，包括以下步骤：

1)亚硒酸钠、硫酸锌、硫酸镁、三氯化铬、硫酸钴、过磷酸钙、硫酸钙、磷酸二氢钾、尿素、膨润土按重量份称量后，粉碎、混匀，制得复合添加剂；

2)将构树基料、基质辅料粉碎后干燥，按重量份称量，加入复合添加剂，混匀；

3)按重量份加水，搅拌均匀，发酵；

4)装袋，蒸汽灭菌，即得培养基成品。

优选地，步骤1)或步骤2)中，粉碎至0.1-15cm后使用。

优选地，步骤3)中，在15-45℃下发酵3-15天。

优选地，步骤4)中，在95-105℃下常压蒸汽灭菌10-24h，或在0.1-0.5MPa压力下进行高压蒸汽灭菌1-10h。

构树(Broussonetiapapyrifera)，别名褚桃，为落叶乔木，不易裂，全株含乳汁。为强阳性树种，适应性特强，抗逆性强。构树具有速生、适应性强、抗污染性强、分布广、易繁殖、热量高、轮伐期短的特点。其根系浅，侧根分布很广，生长快，萌芽力和分蘖力强，耐修剪。构树在中国的温带、热带均有分布，在平原、丘陵或山地都能生长。构树除含有丰富的纤维素及其他碳水化合物外，蛋白质含量高达20％以上，还含有维生素及矿物元素等营养成分。经科学加工后即可作于生产复合营养蘑菇的主要培养基料。本发明提供的富硒食用菌的培养基，使用构树作为基料，利用其营养成分丰富、蛋白质含量高等优点，促进食用菌的生长，产出高质量、营养丰富的食用菌。同时，由于构树生长快、分布广泛、耐修剪，使用构树作为基料，原料来源广泛、成本低廉，利于食用菌栽培的产业化。

本发明中，基料可以完全采用构树，也可以加入部分基质辅料共同作为培养基料。基质辅料可以使用农作物秸秆(如玉米秸秆、小麦秸秆等)、牧草、棉籽壳、米糠、麸皮、玉米芯等原料。农作物秸秆的纤维含量高，且来源广泛、成本低廉，与其他物质配合制备食用菌培养基，成本低、效益高，并且利用秸秆制备培养基，可以减少秸秆焚烧等处理方式带来的污染，是变废为宝的工作，是农作物秸秆开发利用的有效方式。牧草生长期短、分布广泛、再生能力强，用于食用菌培养基辅料可降低成本，同时生产的食用菌品质较好。棉籽壳具有高持水性、溶氧量较高，菌种接种成活率较高，当需要增加培养基水分含量时，可以加入棉籽壳作为基质辅料。此外，使用米糠、麸皮、玉米芯等作为基质辅料，也可起到降低成本、提高食用菌产量和质量的效果。本发明提供的培养基是否采用基质辅料，辅料的选择与配比，根据食用菌种类、生产条件等因素进行选择。

本发明还向食用菌培养基中加入复合添加剂，复合添加剂为含有氮、磷、硫、钙、镁、锌、铬、钴、硒与膨润土。氮、磷、硫、钙、镁、锌、铬、钴、硒等元素的添加可采用饲料级或食品级的化合物，以膨润土为载体，制备食用菌培养基的复合添加剂。膨润土是以蒙脱石为主的含水黏土矿，具有孔隙率高、孔体积大、堆积密度小、比表面积大等特点。膨润土具有强吸湿性和膨胀性，对各种气体、液体、有机物质有一定的吸附能力。在饲料中应用，能为畜禽提供多种常量元素和微量元素，改善消化机能，提高饲料营养的利用率，并能促进生长，提高日增重。它的主要化学成分为：SiO₂ 65～75％、AiO₃ 13～14％、Fe₂O 1.0～1.5％、P₂O₃0.01％、CaO 2.0～3.0％、MgO 2.5～3％、K₂O 0.1～0.5％；其中含有微量元素：硒1.2、铜1.5、锌32、钴16ppm；我们在食用菌培养基中应用主要是利用其吸附性与离子交换性，使其尿素及其他添加剂成分缓慢释放，降低其毒性同时提高其生物利用与转化率。根据以往的应用结果，在培养基中添加膨润土后通常能够提高食用菌产量高达10％左右。

使用膨润土配合氮、磷、硫、钙、镁、锌、铬、钴、硒等营养元素添加剂，制备的食用菌添加剂，可为食用菌的生长持续提供营养成分，并能维持食用菌生长过程的湿度、温度等参数的稳定。

同时，本发明通过向食用菌培养基中添加氮、磷、硫、钙、镁、锌、铬、钴、硒等元素，可以实现对食用菌的复合营养强化，使生产的食用菌营养全面，利于人体健康。通过后续处理可以制备具有保健功能的食品。现有的技术中，一般营养强化的食用菌通常是富硒或富锌的食用菌，同时富含三种以上元素的复合营养强化的食用菌很少。本发明向食用菌培养基中加入了氮、磷、硫、钙、镁、锌、铬、钴、硒九种营养元素，并通过加入膨润土，并精心调配各元素的配比，实现对食用菌多种营养元素的强化，并能促进食用菌的生长。本发明提供的培养基复合添加剂既能有效调控和确保产品中多种营养素的含量和矿物元素的有机转化率，又能及时提供菌丝生长与子实体发育所必需的营养素。复合添加剂中，矿物质元素中的钙含量达到8-10g/100g，磷的含量为13-16g/100g，有机硒的含量达到80-120mg/kg左右(硒的有机化率高达95％以上)，有机锌的含量为50-70mg/kg，有机铬含量达到3-10mg/kg左右，能为食用菌的生长提供丰富营养。本发明培养基培养的食用菌，鲜菇的产量能够达到普通蘑菇产量的90-120％左右。干燥脱水处理后的菇粉的蛋白质含量可达到25-35g/100g，脂肪为10-15g/100g，碳水化合物为13-15g/100g，粗纤维素为6-7g/100g，灰分为15-17g/100g。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本申请中的技术方案，下面对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本申请保护的范围。

本发明实施例提供一种富硒食用菌的培养基，包括以下重量份的原料：

其中，基质辅料为牧草、秸秆、棉籽壳、米糠、麸皮、玉米芯中的一种或多种，复合添加剂含有氮、磷、硫、钙、镁、锌、铬、钴、硒与膨润土。

构树(Broussonetiapapyrifera)，别名褚桃，为落叶乔木，不易裂，全株含乳汁。为强阳性树种，适应性特强，抗逆性强。构树具有速生、适应性强、抗污染性强、分布广、易繁殖、热量高、轮伐期短的特点。其根系浅，侧根分布很广，生长快，萌芽力和分蘖力强，耐修剪。构树在中国的温带、热带均有分布，在平原、丘陵或山地都能生长。构树除含有丰富的纤维素及其他碳水化合物外，蛋白质含量高达20％以上，还含有维生素及矿物元素等营养成分。经科学加工后即可作于生产复合营养蘑菇的主要培养基料。本发明提供的富硒食用菌的培养基，使用构树作为基料，利用其营养成分丰富、蛋白质含量高等优点，促进食用菌的生长，产出高质量、营养丰富的食用菌。同时，由于构树生长快、分布广泛、耐修剪，使用构树作为基料，原料来源广泛、成本低廉，利于食用菌栽培的产业化。

本发明中，基料可以完全采用构树，也可以加入部分基质辅料共同作为培养基料。基质辅料可以使用农作物秸秆(如玉米秸秆、小麦秸秆等)、牧草、棉籽壳、米糠、麸皮、玉米芯等原料。农作物秸秆的纤维含量高，且来源广泛、成本低廉，与其他物质配合制备食用菌培养基，成本低、效益高，并且利用秸秆制备培养基，可以减少秸秆焚烧等处理方式带来的污染，是变废为宝的工作，是农作物秸秆开发利用的有效方式。牧草生长期短、分布广泛、再生能力强，用于食用菌培养基辅料可降低成本，同时生产的食用菌品质较好。棉籽壳具有高持水性、溶氧量较高，菌种接种成活率较高，当需要增加培养基水分含量时，可以加入棉籽壳作为基质辅料。此外，使用米糠、麸皮、玉米芯等作为基质辅料，也可起到降低成本、提高食用菌产量和质量的效果。本发明提供的培养基是否采用基质辅料，辅料的选择与配比，根据食用菌种类、生产条件等因素进行选择。

培养基中水分的含量应该为60％左右，水分的添加量取决于培养基原料的含水量。

本发明还向食用菌培养基中加入复合添加剂，复合添加剂为含有氮、磷、硫、钙、镁、锌、铬、钴、硒与膨润土。氮、磷、硫、钙、镁、锌、铬、钴、硒等元素的添加可采用饲料级或食品级的化合物，以膨润土为载体，制备食用菌培养基的复合添加剂。膨润土是以蒙脱石为主的含水黏土矿，具有孔隙率高、孔体积大、堆积密度小、比表面积大等特点。膨润土具有强吸湿性和膨胀性，对各种气体、液体、有机物质有一定的吸附能力。使用膨润土配合氮、磷、硫、钙、镁、锌、铬、钴、硒等营养元素添加剂，制备的食用菌添加剂，可为食用菌的生长持续提供营养成分，并能维持食用菌生长过程的湿度、温度等参数的稳定。

同时，本发明通过向食用菌培养基中添加氮、磷、硫、钙、镁、锌、铬、钴、硒等元素，可以实现对食用菌的复合营养强化，使生产的食用菌营养全面，利于人体健康。通过后续处理可以制备具有保健功能的食品。现有的技术中，一般营养强化的食用菌通常是富硒或富锌的食用菌，同时富含三种以上元素的复合营养强化的食用菌很少。本发明向食用菌培养基中加入了氮、磷、硫、钙、镁、锌、铬、钴、硒九种营养元素，并通过加入膨润土，并精心调配各元素的配比，实现对食用菌多种营养元素的强化，并能促进食用菌的生长。本发明提供的培养基复合添加剂既能有效调控和确保产品中多种营养素的含量和矿物元素的有机转化率，又能及时提供菌丝生长与子实体发育所必需的营养素。复合添加剂中，矿物质元素中的钙含量达到8-10g/100g，磷的含量为13-16g/100g，有机硒的含量达到80-120mg/kg左右(硒的有机化率高达95％以上)，有机锌的含量为50-70mg/kg，有机铬含量达到3-10mg/kg左右，能为食用菌的生长提供丰富营养。本发明培养基培养的食用菌，鲜菇的产量能够达到普通蘑菇产量的90-120％左右。干燥脱水处理后的菇粉的蛋白质含量可达到25-35g/100g，脂肪为10-15g/100g，碳水化合物为13-15g/100g，粗纤维素为6-7g/100g，灰分为15-17g/100g。

优选地，上述培养基，包括以下重量份的原料：

优选地，所述构树基料为构树木屑、构树枝、构树叶中的一种或多种。

本发明的构树基料可以采用构树木屑、构树枝、构树叶，或其中多种的混合物，根据实际生产需要进行选择。通常，构树基料的收集配合构树枝叶修剪同时进行，收集修剪下来的构树枝、叶，作为培养基的构树基料，同时构树本身可以继续生长，持续提供原料。当食用菌栽培所需构树基料数量很大，或根据构树的规模、树龄等需要进行调整时，也可砍伐构树，将构树粉碎成木屑，作为培养基的构树基料使用。

优选地，所述构树基料、基质辅料、复合添加剂经粉碎后使用。

本发明中，构树基料、基质辅料、复合添加剂经粉碎，达到尺寸的要求后使用。原料经粉碎后使用，更易于称量、混合工序的进行，也有利于菌种的生长。

优选地，所述复合添加剂包括以下重量份的原料：

本发明的复合添加剂，可以使用过磷酸钙与磷酸二氢钾提供磷元素，使用硫酸锌、硫酸钴主要是提供锌、钴元素，使用过磷酸钙、硫酸钙主要是供钙元素，使用硫酸镁提供镁元素，使用三氯化铬提供铬元素，硫酸盐提供硫元素，使用亚硒酸钠提供硒元素，采用尿素作为氮素的补充剂。本发明也可使用其他物质提供上述营养元素。

优选地，所述复合添加剂包括以下重量份的原料：

本发明还提供上述培养基的制备方法，包括以下步骤：

1)亚硒酸钠、硫酸锌、硫酸镁、三氯化铬、硫酸钴、过磷酸钙、硫酸钙、磷酸二氢钾、尿素、膨润土按重量份称量后，粉碎、混匀，制得复合添加剂；

2)将构树基料、基质辅料粉碎后干燥，按重量份称量，加入复合添加剂，混匀；

3)按重量份加水，搅拌均匀，发酵；

4)装袋，蒸汽灭菌，即得培养基成品。

优选地，步骤1)或步骤2)中，粉碎至0.1-15cm后使用。

优选地，步骤3)中，在15-45℃下发酵3-15天。

优选地，步骤4)中，在95-105℃下常压蒸汽灭菌10-24h，或在0.1-0.5MPa压力下进行高压蒸汽灭菌1-10h。

本发明还提供上述富硒食用菌的培养基的制备方法。本发明的方法，先制备复合添加剂，按重量份称取原料后，需要进行粉碎，必要时需在粉碎步骤前或后加入干燥的过程，以控制各原料的水分含量，便于原料混合以及后续调配工作的进行。混合通常使用搅拌的方式混匀，可以采用其他方式，只要能使各物质均匀分散的混合方式均可使用。

然后，将构树基料、基质辅料粉碎后，干燥，按重量份称量，加入上述复合添加剂，混匀。构树基料、基质辅料、及复合添加剂中的各原料通常粉碎至0.1-15cm后使用。根据实际需要，也可将部分或全部原料粉碎至更细的细度，如过2-100目筛等。

根据培养培养基主要原料的含水量，按重量份加水使其培养基的含水量达到60％左右。接着，进行均匀搅拌并采用堆积方法对食用菌培养基进行发酵处理。

在堆积发酵过程中，培养基的温度可以达到40-65℃，通常这个发酵过程需要7-15天。发酵可以为有高温微生物提供适合的生态环境，促进其生长繁殖，以利用培养基中的无机态元素转化为有机态元素，如有机硒、有机锌、有机铬；并将产生和蓄积一些有利于食用菌菌丝吸收利用的必须营养物质，如菌多糖、维生素、氨基酸等。同时，在高温发酵过程中还有利于杀死培养基中的一些病微生物，起到一定的消毒杀菌作用。

在高温发酵过程完成后，就对食用菌培养进行装袋与蒸汽灭菌。蒸汽灭菌可采用常压蒸汽灭菌，在95-105℃下常压蒸汽灭菌10-24h；也可以采用加压蒸汽灭菌，或在0.1-0.5MPa压力下蒸汽灭菌1-10h。本发明提供的富硒食用菌的培养基，经发酵和蒸汽灭菌双重灭菌处理，是培养基的灭菌更为彻底，同时也能节省能源。

实施例1培养基的制备

培养基按以下重量份配置：

构树木屑、构树枝叶粉 768kg

牧草 192kg

水 450kg

复合添加剂按以下重量份配置：

培养基按以下方法制备：

1)亚硒酸钠、硫酸锌、硫酸镁、三氯化铬、硫酸钴、过磷酸钙、硫酸钙、磷酸二氢钾、尿素、膨润土按上述重量份称量后，粉碎、混匀，制得复合添加剂；

2)将构树基料、基质辅料粉碎至1.5cm后，干燥，按上述重量份称量，加入复合添加剂，混匀；

3)按上述重量份加水，搅拌均匀，25℃发酵7天；

4)装袋，95-105℃下常压蒸汽灭菌10-24h，即得培养基。

实施例2培养基的制备

培养基按以下重量份配置：

构树木屑、构树枝叶粉 517kg

牧草 423kg

水 400kg

复合添加剂按以下重量份配置：

培养基按以下方法制备：

1)亚硒酸钠、硫酸锌、硫酸镁、三氯化铬、硫酸钴、过磷酸钙、硫酸钙、磷酸二氢钾、尿素、膨润土按上述重量份称量后，粉碎、混匀，制得复合添加剂；

2)将构树基料、基质辅料粉碎至8cm后，干燥，按上述重量份称量，加入复合添加剂，混匀；

3)按上述重量份加水，搅拌均匀，15℃发酵10天；

4)装袋，0.1-0.5MPa压力下蒸汽灭菌1-10h，即得培养基。

实施例3复合添加剂分析

复合添加剂中，矿物质元素中的钙含量达到8-10g/100g，磷的含量为13-16g/100g，采用分子荧光法检测本发明培养基培养的食用菌中有机硒的含量达到80-120mg/kg左右(硒的转化率高达95％以上)，采用原子分光光度法检测食用菌中有机锌的含量为50-70mg/kg，有机铬含量达到3-10mg/kg左右。

实施例4食用菌抗氧化及免疫增强活性实验

食用菌的栽培：菌种的营养诱导-菌种的分级培养；栽培基料与复合矿物营养添加剂的混配—加水搅拌与堆积发酵—装袋灭菌—接种—菌丝培养—出菇管理。其中，培养基采用的本发明的富硒食用菌培养基。

菌种的营养诱导，我们选择的菌种是属于侧耳科，侧耳属的一种无毒可食的食用蘑菇(Pleurotus sp.)，为使菌种能够适应含有高水平无机态元素化合物的栽培环境，采取循序渐进、逐步提高培养基中无机元素的含量的营养诱导工艺，使菌种在这种高水平无机态元素的栽培环境中能够生存和发育。

出菇管理，由于采收的鲜硒菇主要用于加工成干燥脱水菇粉，所以采菇前6小时不能喷洒自来水，而且采收的鲜菇不能夹带栽培基料或其他杂质。

对食用菌进行抗氧化及免疫增强作用的研究表明：食用菌各剂量组的SOD及GSH-Px活性显著提高，MDA含量显著降低；碳廓清指数、HC50水平和DTH程度显著提高；并且随剂量增加，作用加强，有明显的剂量依赖性。

1材料与方法

1.1动物 昆明种小鼠，体重20±2g，雌雄兼用，合格证号为：京动管质字(1994)第061号,由贵阳医学院实验动物中心提供。

1.2药品与试剂 食用菌,为淡黄色粉末，有蘑菇香味，含硒120μg.g^-1，临用时用蒸馏水配制成一定浓度的悬液,由贵州大学生物技术学院危克周教授提供。亚硒酸钠,天津市东丽区天大化学试剂厂生产，批号20000725(AP)，含硒0.29g.g^-1。MDA，GSH-P_X，SOD试剂盒，南京聚力公司提供。

1.3饲料 自制小鼠玉米-大豆型全价低硒饲料，含硒量为0.11ppm(普通饲料含硒量为0.28ppm)。

1.4实验方法

1.4.1低硒模型造模 除正常对照组小鼠用普通饲料和自来水喂养外，其余小鼠均采用自制低硒饲料和蒸馏水喂养，造成小鼠低硒模型。

1.4.2分组及给药 小鼠96只，随机取16只小鼠作正常对照组，其余小鼠于实验环境适应低硒饲料一周后，随机分为5组，每组16只。即低硒模型组、本发明培养基培养的食用菌低剂量组(SEM低)(70mg·kg^-1·d^-1)、食用菌中剂量组(SEM中)(140mg·kg^-1·d^-1)、食用菌高剂量组(SEM高)(280mg·kg^-1·d^-1)三个剂量组及亚硒酸钠阳性对照组(57.6μg·kg^-1·d^-1)。正常对照组及低硒模型组给予等体积蒸馏水，每天灌胃给药一次，连续给药30d。

1.4.3食用菌的抗氧化能力测定 制备1％小鼠肝脏匀浆，采用黄嘌呤氧化法测定SOD活性，采用二硫代双硝基苯甲酸直接法测定GSH-Px活性。制备10％小鼠肝脏匀浆，采用硫代巴比妥酸显色法测定MDA含量。

1.4.4小鼠碳廓清水平的测定^[5] 雄性小鼠，体重20±2g，分组及给药同上。连续给药30d后，由小鼠尾静脉按每0.1ml/10g体重注入用生理盐水稀释5倍的印度墨汁。并于注入后2min、10min两次由小鼠眼眶静脉采血20μl于2ml 1％NaCO₃溶液中，充分摇匀后于721分光光度计600nm处比色，计算碳廓清指数K。解剖小鼠称取肝、脾称重并计算吞噬指数(吞噬指数α＝脾重+³√k×体重/肝重)。

1.4.5小鼠血清半数溶血值的测定^[5] 雄性小鼠，分组及给药同上。给药3周后，每只小鼠ip 20％SRBC悬液0.2ml免疫。继续给药7天后，摘眼球取血,离心分离血清。取稀释血清1ml，依次加入10％SRBC 0.5ml，10％补体1ml。置37℃恒温箱内保温15min后，冰水浴终止反应。离心，取上清液1ml加都氏液3ml充分混匀，放置10min后于721分光光度计540nm比色。半数溶血管用0.25ml 10％SRBC加都氏液至4ml。另设不加补体而以生理盐水代替的空白对照管。计算样品HC₅₀。

1.4.6对小鼠超敏迟发反应的影响^[5] 雄性小鼠，分组及给药同上。给药3周后，以7％2,4-二硝基氯苯-丙酮溶液每只0.02ml皮下注射免疫小鼠。继续给药10天后，以1％2,4-二硝基氯苯-甘油溶液每只0.03ml涂布于小鼠右耳正反面攻击。于攻击后16小时，将小鼠颈椎脱臼处死，剪下双侧耳片后用打孔器在两耳相同位置打下耳片称重，并以两耳片重量的差值进行比较。

1.4.6 SEM最大耐受量测定 采用最大耐受量实验法。用蒸馏水将SEM配制成15％糊状物(用注射器灌胃针头抽取的最大浓度)。小鼠20只，体重18～22g，雌雄各半，禁食(不禁水)3h，灌胃给药，灌胃量0.4ml/10g，每4h灌胃给药一次，连续给药3次，观察7天。

1.5统计方法 结果以表示，用组间t检验进行显著性检验。

2结果

2.1食用菌对小鼠抗氧化能力的影响

食用菌各剂量组均能提高模型小鼠SOD、GSH-Px活性，降低脂质过氧化物MDA含量，且作用随剂量的增高而增强。亚硒酸钠组与低硒模型组比较也有显著性差异，但提高GSH-Px活性作用明显弱于相同含硒量的SEM中剂量组,见表1。

表1 SEM对低硒小鼠抗氧化能力的影响

与正常对照组比较#<0.05,##<0.01,###<0.001；与低硒模型组比较*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001；与SEM中剂量组比较ΔP<0.05(下同)

2.2食用菌对低硒小鼠免疫功能的影响

食用菌各剂量组均能显著提高模型动物的吞噬指数及HC₅₀水平，SEM中、高剂量组能显著提高小鼠的DTH程度,且作用随剂量的增高而增强。亚硒酸钠组吞噬指数与模型组比较无显著性差异，HC₅₀和DTH虽有显著性差异，但作用也较相同含硒量的SEM中剂量组弱,结果见表2。

表2食用菌对低硒小鼠免疫功能的影响

食用菌最大耐受量测定小鼠一日内三次灌胃给药后未出现中毒症状，无一死亡。SEM小鼠经口最大耐受量为18g·kg^-1。本品成人口服量为13.8mg·kg^-1·d^-1,故小鼠最大耐受量相当于人用剂量的1304倍，表明本品剂量是安全的。

实施例5驱铅实验

在进行的驱铅试验中发现：各食用菌治疗组均能对抗铅中毒引起的体重减轻，能明显改善铅中毒大鼠的生长状况；各治疗组(除EDTA组外)均能明显缩短大鼠定位航行实验成绩、增加空间探索实验成绩，能明显改善铅中毒引起的学习记忆功能障碍；各治疗组均能明显增加尿中铅含量，促进尿铅的排泄；各治疗组均能明显降低大鼠血中铅含量；光镜下观察，模型对照组海马区可见大量神经元出现变性、坏死，而治疗组(除EDTA组外)海马神经元形态基本正常，排列整齐；各治疗组(除EDTA组外)的凋亡阳性细胞数明显减少，透光率明显增高；同时还发现本发明培养基培养的蘑菇能显著提高脑组织GSH-Px和SOD活性、降低MDA含量。因此可以得到以下结论：本发明培养基培养的蘑菇具有驱铅作用，能明显改善铅中毒大鼠的学习记忆障碍。其作用机制包括：1，促进尿铅排出，降低血铅含量。2，减少海马凋亡神经细胞，减轻其凋亡程度。3，提高GSH-Px、SOD活性，减少MDA含量，抑制神经细胞内脂质过氧化作用。

实验动物采用哺乳的4周龄SD大鼠，经Morris水迷宫筛选出学习记忆正常鼠62只，随机分为空白对照组(10只)和染铅组(52只)，染铅组大鼠以80mg.L^-1醋酸铅溶液喂饮，连续8周。第三周通过Morris水迷宫试验确定造模成功后，将染铅组大鼠随机为5组：模型对照组、阳性对照组(EDTA50mg.kg^-1.d^-1)、食用菌组(250mg.kg^-1.d^-1)、刺梨组(5ml.kg^-1.d^-1)、食用菌加刺梨组(5ml.kg^-1.d^-1，S食用菌250mg.kg^-1.d^-1)，同时给予上述药物治疗，连续治疗6周，第8周末停药。实验中检测下列指标：1.分别于实验零周及第二、四、六、八周末称大鼠体重。2.喂饮铅2周后以及药物治疗3、6周后，用Morris水迷宫试验检测药物对铅中毒大鼠空间辨别学习记忆能力的影响。3.双硫腙比色法测第二、四、六、八周末大鼠尿中铅含量。4.原子吸收光谱法测第八周末大鼠血中铅含量。5.HE染色法光镜下观察海马神经元形态变化。6.原位末端标记法(TUNEL)观察药物对神经细胞凋亡的影响。7.光化学法检测脑组织GSH-Px、SOD活性及MDA含量。

结果与模型对照组比较：1.各治疗组均能对抗铅中毒引起的体重减轻，能明显改善铅中毒大鼠的生长状况。2.各治疗组(除EDTA组外)均能明显缩短大鼠定位航行实验成绩、增加空间探索实验成绩，能明显改善铅中毒引起的学习记忆功能障碍。3.各治疗组均能明显增加尿中铅含量，促进尿铅的排泄。4.各治疗组均能明显降低大鼠血中铅含量。5.光镜下观察，模型对照组海马区可见大量神经元出现变性、坏死；各治疗组(除EDTA组外)海马神经元形态基本正常，排列整齐。6.各治疗组(除EDTA组外)的凋亡阳性细胞数明显减少，透光率明显增高。7.食用菌、刺梨能显著提高脑组织GSH-Px和SOD活性、降低MDA含量。

实施例6小鼠精子活性实验

在研究本发明培养基培养的蘑菇对小鼠睾丸脂质过氧化和精子活力的影响研究中发现：蘑菇使小鼠睾丸硒含量增加，MDA和一氧化氮含量减少，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性增高，小鼠精子活率及运动能力加强。说明了：本发明培养基培养的蘑菇具有提高含硒酶GSH-Px活性、减轻睾丸自由基损害和增强小鼠精子活力的作用。

1.1材料

1.1.1动物 雄性昆明种小鼠，体重(20±2)g。由贵阳医学院实验动物中心提供，合格证号:SCXK(黔)2002-0001。

1.1.2低硒饲料 主粮玉米和大豆产自我省低硒地区威宁中水区，按Younger公司超级配方软件精确计算必需营养成分，按比例添加配制而成，含硒量0111μg·kg^-1。普通饲料为我院实验动物中心供应的小鼠标准饲料，含硒量0128μg·kg^-1。

1.1.3药物及试剂

1材料与方法

食用菌由贵州大学生物技术学院危克周教授提供，批号010506，为淡黄色粉末，有天然蘑菇香味，含硒量120μg·g^-1，临用时用蒸馏水配制成所需浓度的混悬液，4℃保存待用。亚硒酸钠(分析纯)为天津市东丽区天大化学制剂厂产品，含硒量0.3g·g^-1，批号20000725。按所需浓度用蒸馏水配制，4℃保存备用。GSH-px、SOD、MDA检测试剂盒由南京聚力公司生产。

1.1.4精子运动能力测定 采用北京THJY-29000天海彩色计算机辅助精子运动分析系统及摄像装置完成。

1.2方法

1.2.1分组 实验分成6组，分别为：低硒对照组(Se-de)，给与SEM组等容积蒸馏水；食用菌低剂量组(SEML)，用140mg·kg^-1d^-1灌胃；食用菌中剂量组(SEMM)，用280mg·kg^-1d^-1灌胃；食用菌高剂量组(SEMH)，用560mg·kg^-1d^-1灌胃；亚硒酸钠阳性对照组(Se)用112μgkg^-1d^-1灌胃；普通饲料的正常对照组(NC)用等容积蒸馏水灌胃。其中，SEMM组含硒量与Se组相同(均为33.60μg·kg^-1d^-1)。以上各组连续给药45d。全部小鼠均用低硒饲料喂养(NC组除外)，饮用蒸馏水。

末次给药24h颈动脉放血处死动物，称体重，按各检测项目需要处置标本。

1.2.2小鼠睾丸指数测定 小鼠处死后，取出两侧睾丸称重，按下列公式计算睾丸指数。

睾丸指数＝[睾丸重量(g)/体重(g)]×100.

1.2.3测定小鼠精子运动参数 处死小鼠，快速在37℃恒温箱内取一侧附睾置0.5ml 37℃生理盐水中，剪碎混匀，取悬液1滴置于37℃恒温MACRO记数板上，以10倍或50倍显微镜观察，摄像装置记录精子运动轨迹，通过计算机精子运动检测系统采集分析精子运动速度和方向性参数。速度参数包括平均路径速度(VAP)，曲线速度(VCL)，直线速度(VSL)，精子运动方向性参数包括直线性(LIN)，前向性(STR)，和摆动性(WOB)。根据精子运动速度和方向性判定精子活力，并将精子活力分4级：A级，表示快速前向运动的精子(V>25μm/s)；B级，表示慢速或呆滞前向运动的精子(10μm/s<V<25μm/s)；C级，表示非前向性运动的精子(0<V<10μm/s)；D级，表示不动的精子(V＝0)。根据A、B、C三级精子所占精子总数的百分率计算精子活率。

1.2.4饲料及小鼠睾丸硒含量测定 采用荧光分光光度测定。

表3 SEM对低硒小鼠睾丸指数和硒含量的影响

Tab.3Effect ofSEM on the indexes and selenium level ofthe testis inselenium-deficent mice

与Se-de组比较，⁽¹⁾p＜0.05；与NC组比较，⁽²⁾p＜0.05，

2.2小鼠精子活力及活率见表4。与低硒组比较，NC组、Se组和SEM各组A级和B级精子数量和精子活率大幅度提高。与NC组比较，SEMH组A级精子数，SEMM、SEMH组精子活率均明显增加，说明睾丸应有一定硒含量才能保证精子具有最大的活力，此后精子活性并不随硒浓度的增高而增加。

表4 SEM对小鼠精子活力和活率的影响

Tab 4The effect ofSEM on grade ofsperm vitality and viability ofmice

与NC组比较，⁽¹⁾p＜0.05，⁽²⁾p＜0.01；与Se-de组比较，⁽³⁾p＜0.01；与Se组比较，⁽⁴⁾p＜0.05

2.3小鼠精子运动径速度和方式 NC组、SEM各组和Se组VCL、VSL、L I N、WOB、STR明显高于Se-de组，SEM各组、Se组与正常组相比，以上各指标无显著差异。SEM各组间无显著性差异。Se组值略低于SEM组，但差异无显著性。综合评价以上各运动参数，表明SEM可提高小鼠精子活性(见表5)。

表5 SEM对小鼠精子运动速度和方式的影响

Tab 5Effect ofSEM on sperm motive velocity and pattern ofmice

与NC组比较，⁽¹⁾p＜0.05，⁽²⁾p＜0.01；与Se-de组比较，⁽³⁾p＜0.01，⁽⁴⁾p＜0.05

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (10)

1.一种富硒食用菌的培养基，其特征在于，包括以下重量份的原料：

构树基料 100-1000重量份

基质辅料 0-800重量份

复合添加剂 10-100重量份

水 100-1000重量份

其中，基质辅料为牧草、秸秆、棉籽壳、米糠、麸皮、玉米芯中的一种或多种，复合添加剂含有氮、磷、硫、钙、镁、锌、铬、钴、硒与膨润土。

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，包括以下重量份的原料：

构树基料 500-900重量份

基质辅料 100-500重量份

复合添加剂 20-80重量份

水 300-900重量份。

3.根据权利要求1或2所述的培养基，其特征在于，所述构树基料为构树木屑、构树枝、构树叶中的一种或多种。

4.根据权利要求3所述的培养基，其特征在于，所述构树基料、基质辅料、复合添加剂经粉碎后使用。

5.根据权利要求1或2所述的培养基，其特征在于，所述复合添加剂包括以下重量份的原料：

亚硒酸钠 0.20-1.20重量份

硫酸锌 0.05-1.00重量份

硫酸镁 0.10-1.00重量份

三氯化铬 0.01-1.00重量份

硫酸钴 0.001-0.010重量份

过磷酸钙 1-10重量份

硫酸钙 5-12重量份

磷酸二氢钾 1-10重量份

尿素 1-15重量份

膨润土 10-40重量份。

6.根据权利要求5所述的培养基，其特征在于，所述复合添加剂包括以下重量份的原料：

亚硒酸钠 0.35-0.85重量份

硫酸锌 0.10-0.50重量份

硫酸镁 0.30-0.60重量份

三氯化铬 0.04-0.08重量份

硫酸钴 0.001-0.005重量份

过磷酸钙 3-7重量份

硫酸钙 7-9重量份

磷酸二氢钾 1-5重量份

尿素 1-7重量份

膨润土 15-25重量份。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)亚硒酸钠、硫酸锌、硫酸镁、三氯化铬、硫酸钴、过磷酸钙、硫酸钙、磷酸二氢钾、尿素、膨润土按重量份称量后，粉碎、混匀，制得复合添加剂；

2)将构树基料、基质辅料粉碎后干燥，按重量份称量，加入复合添加剂，混匀；

3)按重量份加水，搅拌均匀，发酵；

4)装袋，蒸汽灭菌，即得培养基成品。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤1)或步骤2)中，粉碎至0.1-15cm后使用。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤3)中，在15-45℃下发酵3-15天。

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤4)中，在95-105℃下常压蒸汽灭菌10-24h，或在0.1-0.5MPa压力下进行高压蒸汽灭菌1-10h。