CN108218856A - 左旋四氢巴马汀粗品的纯化方法 - Google Patents

左旋四氢巴马汀粗品的纯化方法 Download PDF

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    • C07D455/00—Heterocyclic compounds containing quinolizine ring systems, e.g. emetine alkaloids, protoberberine; Alkylenedioxy derivatives of dibenzo [a, g] quinolizines, e.g. berberine
    • C07D455/03—Heterocyclic compounds containing quinolizine ring systems, e.g. emetine alkaloids, protoberberine; Alkylenedioxy derivatives of dibenzo [a, g] quinolizines, e.g. berberine containing quinolizine ring systems directly condensed with at least one six-membered carbocyclic ring, e.g. protoberberine; Alkylenedioxy derivatives of dibenzo [a, g] quinolizines, e.g. berberine

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Abstract

本发明涉及一种左旋四氢巴马汀粗品的纯化方法，涉及制药领域。该左旋四氢巴马汀粗品的纯化方法包括：将粗品经80～95vt％的第一乙醇回流提取至少一次，每次乙醇回流提取后抽滤，合并每次经抽滤得到的滤液，浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的晶体采用80～95vt％的第二乙醇洗涤至少一次后，铺设厚度为2～3cm的晶体层，于50～55℃的热风条件下干燥3.8～4.2h，冷却。其有效纯化左旋四氢巴马汀粗品，纯化后左旋四氢巴马汀的含量高达99.8％以上，同时有效降低有害杂质巴马汀和去除右旋四氢巴马汀。

Description

左旋四氢巴马汀粗品的纯化方法
技术领域
本发明涉及制药领域，且特别涉及一种左旋四氢巴马汀粗品的纯化方法。
背景技术
山乌龟，别名地不容，防己科，金藤属。常生长于石山，为云南著名传统中草药。其块根发达，通常浮露地面，同时块根富含生物碱，山乌龟中的生物碱含量高达3-4％，其中主要为异喹啉类生物碱，其中含量最高以及镇痛效果最佳成分为2,3,9,10-四甲氧基-5,8,13,13a-四氢-6H-二苯并[a，g]喹嗪，又名左旋四氢巴马汀。
研究表明，左旋四氢巴马汀具有镇痛、镇静、催眠及安定作用。其镇痛作用弱于哌替啶，强于一般解热镇痛药。在治疗剂量下无呼吸抑制作用，亦不引起胃肠道平滑肌痉挛。对慢性持续性疼痛及内脏钝痛效果较好，对急性锐痛(如手术后疼痛，创伤性疼痛等)、晚期癌症痛效果较差。在产生镇痛作用的同时，可引起镇静及催眠。现有的左旋四氢巴马汀的粗品含有少量的杂质，例如巴马汀和右旋四氢巴马汀，现有工艺纯化工艺提取的产品纯度不够、不能有效降低有害杂质巴马汀和去除右旋四氢巴马汀，应用该原料做成制剂存在临床安全风险，同时现有的工艺对有效成分和杂质的选择性较差、成本高及不适合大规模工业化生产。
发明内容
本发明的目的在于提供一种左旋四氢巴马汀粗品的纯化方法，其有效纯化左旋四氢巴马汀粗品，纯化后左旋四氢巴马汀的纯度高达99.8％以上,有效降低有害杂质巴马汀和去除右旋四氢巴马汀。
本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
本发明提出一种左旋四氢巴马汀粗品的纯化方法，其包括：
将粗品经80～95vt％的第一乙醇回流提取至少一次，每次乙醇回流提取后抽滤，合并每次经抽滤得到的滤液，浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的晶体采用80～95vt％的第二乙醇洗涤至少一次后，铺设厚度为2～3cm的晶体层，于50～55℃的热风条件下干燥3.8～4.2h，冷却。
本发明实施例的左旋四氢巴马汀粗品的纯化方法的有益效果是：
1)本发明提供得方法有效纯化左旋四氢巴马汀的粗品，该方法对有效成分和杂质的选择性高，使得纯化后左旋四氢巴马汀的纯度高达99.8％及以上，同时左旋四氢巴马汀的收率大于43.8％，有效提高纯化效率以及收率。
2)操作简单，适宜工业化生产。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明提供的左旋四氢巴马汀的核磁共振氢谱图；
图2为本发明提供的左旋四氢巴马汀的核磁共振氢谱图；
图3为本发明提供的左旋四氢巴马汀的核磁共振碳谱(13C-NMR)图；
图4为本发明提供的左旋四氢巴马汀的核磁共振碳谱图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的左旋四氢巴马汀粗品的纯化方法进行具体说明。
一种左旋四氢巴马汀粗品的纯化方法，其包括：
S1.将粗品经80～95vt％的第一乙醇回流提取至少一次，每次乙醇回流提取后抽滤，合并每次经抽滤得到的滤液，浓缩，静置结晶，得晶体。
需要说明的是：粗品为山乌龟经酸提取后强碱溶液进行沉淀，将得到的沉淀进行乙醇回流后过滤，于滤液中析出粗品。其中，粗品满足《罗通定质量标准/QS-CP220》粗品质量标准检验。
其中，每次乙醇回流提取1-2h，该时间下，80～95vt％的第一乙醇的提取效果佳，将有效成分随第一乙醇浸出，通过抽滤有效去除粗品含有的杂质。同时在考虑提取的时间等条件的影响，为了提高粗品经第一乙醇回流提取的最大效率，优选粗品的添加量与第一乙醇的添加量的体积比为1：4～5。
第一乙醇回流提取至少一次，例如至少两次，充分提取有效成分，去除杂质。
浓缩包括：将合并后的滤液浓缩至合并后的滤液的体积的0.48～0.52倍。优选地，浓缩在-0.05～-0.07Mpa的条件下进行，在微负压的条件下快速有效浓缩。例如将合并后的滤液吸入旋转蒸发器中减压浓缩，通过减压，使得滤液在较低的温度保持沸腾状态，提高效率，同时不破坏有效成分的结构。
可选地，于合并每次经抽滤得到的滤液与浓缩之间，还包括经大孔树脂吸附后，经80～95vt％的第三乙醇洗脱后，得乙醇洗脱液。通过与第一乙醇的浓度范围相同的第三乙醇，降低洗脱的误差。同时，经大孔树脂洗脱，有效去除左旋四氢巴马汀粗品中含有的其他生物碱。将得到的乙醇洗脱液进行浓缩，静置结晶。
可选地，由于旋转蒸发器中减压浓缩，得到的第二浓缩液温度较高，因此第二次浓缩后将得到的第二浓缩液趁热放入结晶桶中，放置24小时，便于析出结晶，同时有效降低成本。
S2.将抽滤后将得到的晶体采用80～95vt％的第二乙醇洗涤至少一次后，铺设厚度为2～3cm的晶体层，于50～55℃的热风条件下干燥3.8～4.2h，冷却。
优选地，晶体铺设为晶体层前，还包括至少一次晶体精制，晶体精制包括：将晶体经第一乙醇回流提取至少一次，每次乙醇回流提取后抽滤，合并每次经抽滤得到的滤液，浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的精制晶体采用80～95vt％的第二乙醇洗涤至少一次后，即的纯化后的左旋四氢巴马汀。
可选地，晶体的添加量与第二乙醇的添加量的体积比为1：0.2～0.3，便于去除第二乙醇。
同时为了提高乙醇的利用率，可选地，还包括通过减压回收第一乙醇，通过减压回收第二乙醇，以及通过减压回收第三乙醇。
铺设厚度为2～3cm的晶体层，于50～55℃的热风条件下干燥3.8～4.2h，充分干燥晶体，干燥效果佳，同时有效去除第二乙醇。由于不锈钢盘中进行铺设以及干燥。冷却至室温，此处的室温为10-25℃。得到的纯化后的左旋四氢巴马汀为白色至微黄色的结晶；无臭，无味。
可选地，冷却后，将纯化得到的左旋四氢巴马汀装于聚乙烯袋中，扎紧，贴物料标示卡，取样按《罗通定质量标准/QS-CP220》干燥品质量标准检验，检验合格后，备用；不合格者按上法继续精制，直至合格为止。按此法将各单元粗品精制，检验合格后，取各单元精制合格品，混合均匀即得成品，进入下一工序。
内包装：按《电子天平标准操作规程/SOP-SB114》操作，将聚乙烯袋打开放在电子天平上，将左旋四氢巴马汀待包装精品装入聚乙烯袋中，调节装量至规定范围，每袋装1000克。按《FR-600连续式印字封口机标准操作规程/SOP-SB029》操作，将装好左旋四氢巴马汀的聚乙烯袋封口。照《取样标准管理规程/SMP-QC008》对成品进行取样，送检。
外包装：外包装前，对生产区及设备进行检查，确认生产线已清场，清洁在有效期内。核对待包装产品的产品名称、规格、瓦楞纸箱的产品名称应与外包装指令相符(包装过程中也应对以上产品或物料进行复核)。由QA计数发放产品合格证，每一箱产品附一张合格证。将纸箱放平，用封箱胶带封好底部，放上衬垫。取上述包装好的聚乙烯袋装入瓦楞纸箱中，抽查包装是否完整，封箱，打包。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
一种左旋四氢巴马汀粗品的纯化方法，其包括：
将粗品经95vt％的第一乙醇回流提取三次，每次回流提取1h，其中，粗品的添加量与第一乙醇的添加量的体积比为1：4。粗品为山乌龟经酸提取后强碱溶液进行沉淀，将得到的沉淀进行乙醇回流后过滤，于滤液中析出的粗品。
每次乙醇回流提取后抽滤，合并每次经抽滤得到的滤液，在-0.06Mpa的条件下，将合并后的滤液浓缩至合并后的滤液的体积的0.5倍，静置24h结晶，将抽滤后将得到的晶体采用95vt％的第二乙醇洗涤三次，其中，晶体的添加量与第二乙醇的添加量的体积比为1：0.2。
晶体采用第二乙醇洗涤后铺设厚度为3cm的晶体层，于55℃的热风条件下干燥4h，冷却。
晶体铺设为晶体层前，还包括三次晶体精制，晶体精制包括：将晶体经第一乙醇回流提取至少一次，每次乙醇回流提取后抽滤，合并每次经抽滤得到的滤液，浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的精制晶体采用95vt％的第二乙醇洗涤后所得。
通过减压回收第一乙醇，通过减压回收第二乙醇。
实施例2
一种左旋四氢巴马汀粗品的纯化方法，其包括：
将粗品经95vt％的第一乙醇回流提取三次，每次回流提取1h，其中，粗品的添加量与第一乙醇的添加量的体积比为1：4。粗品为山乌龟经酸提取后强碱溶液进行沉淀，将得到的沉淀进行乙醇回流后过滤，于滤液中析出的粗品。
每次乙醇回流提取后抽滤，合并每次经抽滤得到的滤液后将滤液经大孔树脂吸附后，经95vt％的第三乙醇洗脱后，得乙醇洗脱液。在-0.06Mpa的条件下，将乙醇洗脱液浓缩至合并后的乙醇洗脱液的体积的0.5倍，静置24h结晶，将抽滤后将得到的晶体采用95vt％的第二乙醇洗涤三次，其中，晶体的添加量与第二乙醇的添加量的体积比为1：0.2。
晶体采用第二乙醇洗涤后铺设厚度为3cm的晶体层，于55℃的热风条件下干燥4h，冷却。
晶体铺设为晶体层前，还包括三次晶体精制，晶体精制包括：将晶体经第一乙醇回流提取至少一次，每次乙醇回流提取后抽滤，合并每次经抽滤得到的滤液，浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的精制晶体采用95vt％的第二乙醇洗涤后所得。
通过减压回收第一乙醇，通过减压回收第二乙醇以及减压回收第三乙醇。
实施例3
一种左旋四氢巴马汀粗品的纯化方法，其包括：
将粗品经95vt％的第一乙醇回流提取三次，每次回流提取1h，其中，粗品的添加量与第一乙醇的添加量的体积比为1：4。粗品为山乌龟经酸提取后强碱溶液进行沉淀，将得到的沉淀进行乙醇回流后过滤，于滤液中析出的粗品。
每次乙醇回流提取后抽滤，合并每次经抽滤得到的滤液后将滤液经大孔树脂吸附后，经95vt％的第三乙醇洗脱后，得乙醇洗脱液。在-0.06Mpa的条件下，将乙醇洗脱液浓缩至合并后的乙醇洗脱液的体积的0.5倍，静置24h结晶，将抽滤后将得到的晶体采用95vt％的第二乙醇洗涤三次，其中，晶体的添加量与第二乙醇的添加量的体积比为1：0.2。
晶体采用第二乙醇洗涤后铺设厚度为3cm的晶体层，于55℃的热风条件下干燥4h，冷却。
通过减压回收第一乙醇，通过减压回收第二乙醇以及减压回收第三乙醇。
实施例4
一种左旋四氢巴马汀粗品的纯化方法，其包括：
将粗品经85vt％的第一乙醇回流提取两次，每次回流提取1h，其中，粗品的添加量与第一乙醇的添加量的体积比为1：4。粗品为山乌龟经酸提取后强碱溶液进行沉淀，将得到的沉淀进行乙醇回流后过滤，于滤液中析出的粗品。
每次乙醇回流提取后抽滤，合并每次经抽滤得到的滤液，在-0.07Mpa的条件下，将合并后的滤液浓缩至合并后的滤液的体积的0.52倍，静置24h结晶，将抽滤后将得到的晶体采用95vt％的第二乙醇洗涤三次，其中，晶体的添加量与第二乙醇的添加量的体积比为1：0.2。
晶体采用第二乙醇洗涤后铺设厚度为2.5cm的晶体层，于53℃的热风条件下干燥4.2h，冷却。
晶体铺设为晶体层前，还包括四次晶体精制，晶体精制包括：将晶体经第一乙醇回流提取四次，每次乙醇回流提取后抽滤，合并每次经抽滤得到的滤液，浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的精制晶体采用80vt％的第二乙醇洗涤后所得。
通过减压回收第一乙醇，通过减压回收第二乙醇。
实施例5
一种左旋四氢巴马汀粗品的纯化方法，其包括：
将粗品经85vt％的第一乙醇回流提取三次，每次回流提取2h，其中，粗品的添加量与第一乙醇的添加量的体积比为1：5。粗品为山乌龟经酸提取后强碱溶液进行沉淀，将得到的沉淀进行乙醇回流后过滤，于滤液中析出的粗品。
每次乙醇回流提取后抽滤，合并每次经抽滤得到的滤液，在-0.05Mpa的条件下，将合并后的滤液浓缩至合并后的滤液的体积的0.48倍，静置24h结晶，将抽滤后将得到的晶体采用80vt％的第二乙醇洗涤两次，其中，晶体的添加量与第二乙醇的添加量的体积比为1：0.3。
晶体采用第二乙醇洗涤后铺设厚度为3cm的晶体层，于55℃的热风条件下干燥3.9h，冷却。
晶体铺设为晶体层前，还包括三次晶体精制，晶体精制包括：将晶体经第一乙醇回流提取两次，每次乙醇回流提取后抽滤，合并每次经抽滤得到的滤液，浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的精制晶体采用95vt％的第三乙醇洗涤后所得。
通过减压回收第一乙醇，通过减压回收第二乙醇。
对比例1
将粗品用热水溶解后采用乙醚萃取，蒸干得到的乙醚萃取液，于残留物中加入三氯甲烷-乙醇的混合液结晶，过滤，得片状的左旋四氢巴马汀。
试验例
1)左旋四氢巴马汀的检测
以本发明提供的左旋四氢巴马汀为样品，其制作方法为：将山乌龟饮片经2wt％的盐酸冷浸提取三次，每次盐酸冷浸提取后第一次过滤，合并每次经第一次过滤得到的第一滤液，缓慢加强碱溶液调节至pH值为9，静置分离，得沉淀；将沉淀经95vt％的第一乙醇回流提取三次，每次乙醇回流提取后第二次过滤，合并每次经第二次过滤得到的第二滤液后第一次浓缩，结晶，抽滤，得粗品；将粗品经95vt％的第二乙醇回流提取三次，每次乙醇回流提取后第三次过滤，合并每次经第三次过滤得到的第三滤液，第二次浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的晶体采用95vt％的第三乙醇洗涤至少两次后，铺设厚度为3cm的晶体层，于55℃的热风条件下干燥4h，冷却。
以中国药品生物制品检定所；批号为100452-200301的左旋四氢巴马汀为对照组。
采用本发明提供的左旋四氢巴马汀作为样品，进行元素分析、红外吸收光谱、紫外吸收光谱、高效液相色谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱、质谱(MS)以及热分析。以中国药品生物制品检定所；批号为100452-200301的罗通定为对照组。
①元素分析：采用仪器型号：美国热电IRIS1000ICP-AES型元素分析仪，测试方法：燃烧法，进行元素分析，结果如表1所示。
表1元素分析测试数据
结论：样品的三次元素分析测定值基本一致,且与理论值基本相符。元素分析结果表明，样品中各元素的含量与按分子式所计算的左旋四氢巴马汀的理论值基本一致。
②红外光谱测试：采用仪器型号：岛津FTIR-7600/BV0190红外光谱仪，测试条件：KCl压片法，进行本发明提供的罗通定红外光谱测试，结果如表2所示。
表2样品红外光谱测试数据
由表2可得，该样品中含有叔胺、与叔胺相连的亚甲基、苯环、甲氧基等特征结构，与罗通定分子结构信息一致。接着，对上述样品进行红外吸收光谱数据的验证，结果如表3所示：
表3验证结果
验证结果进一步表明，样品的红外特征谱带与罗通定一致。
③紫外光谱分析：制备测试样品，采用北京谱析TU1810紫外可见分光光度计进行紫外光谱分析。具体测试样品包括中性溶液：称取适量样品以95％乙醇溶液配制成适量浓度的溶液。含量项下的流动相溶液：称取适量样品以含量项下的流动相配制成适量浓度的溶液。酸性溶液：称取适量样品以0.1mol/L盐酸配制成适量浓度的溶液。碱性溶液：称取适量样品以0.1mol/L氢氧化钠、甲醇溶液配制成适量浓度的溶液。结果如表4所示。
表4紫外光谱数据
在四种溶剂中，本发明提供的样品均与罗通定对照品一致，在210nm和281nm附近有吸收峰。
④高效液相色谱：采用仪器型号：安捷伦1100系列高效液相色谱仪，采用测试方法：(方法编号：XEA-QC-006)在含量测定项下记录的色谱图中，比较供试品溶液主峰的保留时间应与罗通定对照品溶液主峰的保留时间是否一致。
结论：采用罗通定对照品进行试验，在含量测定项下记录的色谱图中，罗通定对照品溶液的保留时间为12.999分钟，供试品溶液主峰的保留时间为12.927分钟，保留时间一致。
⑤核磁共振氢谱测试：以测试仪器：BRUKER-400M，测试条件：溶剂：CDCl3；内标：TMS，进行核磁共振氢谱测试，结果如表5以及图1-2所示。
为了便于对核磁共振氢谱和核磁共振碳谱的信息进行解析，对罗通定分子中的氢原子和碳原子位置和归属进行说明，特将罗通定结构式中各骨架原子进行了编号，结构式：(非系统命名，仅供结构确证)
表51H-谱数据及解析结果
由表5以及图2可得，分子式：C21H25NO4，18-位、19-位、20-位及21-位甲氧基氢质子具有相似的化学环境，其化学位移应相距很近；7-位、10-位芳氢质子均无相邻氢原子，应呈现出单峰；1-位、2-位氢质子相邻，均应呈现出2重峰，分子结构中所有的氢质子均应在1H-核磁共振谱中出峰。
经过对1H-核磁共振谱的解析，我们确认样品分子含有25个氢质子，与罗通定分子式一致；6.621～6.894ppm为苯环芳氢质子，共4个；4.229～4.268ppm为1个次甲基氢质子；3.848～3.890ppm为甲氧基氢质子，共4个甲氧基，12个氢质子；其他峰为亚甲基氢质子，我们对每个质子峰进行了归属，其结果符合罗通定钠的分子结构信息。
⑥核磁共振碳谱(13C-NMR)
测试仪器：BRUKER-400M
测试条件：溶剂：CDCl3；内标：TMS
为了便于对核磁共振氢谱和核磁共振碳谱的信息进行解析，结果如表6以及图3-4所示。对罗通定分子中的氢原子和碳原子位置和归属进行说明，特将罗通定结构式中各骨架原子进行了编号，结构式：(非系统命名，仅供结构确证)
表613C-谱数据及解析结果
碳序号 化学位移(ppm) 碳序号 化学位移(ppm)
12 28.977 1 111.238
4 36.192 2 123.794
13 51.419 15 126.655
14 53.894 11 127.584
21 55.749 3 128.495
18 55.774 6 129.523
19 55.987 17 144.950
20 59.220 8 147.332
5 60.098 9 147.387
10 108.477 16 150.181
7 110.853 - -
经过对13C-核磁共振谱的解析，我们确认样品分子含有21个碳原子，其所处化学环境与罗通定结构一致。6.621～6.894ppm为苯环芳氢质子，共4个；4.229～4.268ppm为1个次甲基氢质子；3.848～3.890ppm为甲氧基氢质子，共4个甲氧基，12个氢质子；其他峰为亚甲基氢质子，我们对每个质子峰进行了归属，其结果符合罗通定钠的分子结构信息。
⑦质谱(MS)
制备方法：将罗通定成品适量放入的圆底烧瓶中，加入4倍量95％乙醇，回流提取2小时，过滤，合并滤液。将滤液吸入旋转蒸发器中减压浓缩至液体体积的0.48～0.52倍后，室温放置24小时，析出结晶，抽滤，并用0.2～0.3倍95％乙醇洗涤结晶，将得到的精制品放于不锈钢盘中，在50～55℃条件下，热风循环干燥4小时，放冷至室温后，装于洁净塑料袋中检验合格后即得结构确认样品。测试仪器：BRUKER-400M。测试方法：ESI源，正离子模式在ESI-MS正离子质谱图中，质荷比(m/z)356处的离子峰为样品的[M+H]+峰，推导样品的分子量为355，与罗通定分子量一致。
⑧热分析(TG，DCS)测试单位：兵器工业自然环境试验中心，测试仪器：Q600SDT同步热分析仪，测试条件：在高纯氮气氛保护下，升温速率10℃/min，温度范围为室温至400℃。解析：
热重检测结果：室温至120℃失重3.9％，室温至140℃失重4.8％，室温至200℃失重4.9％，热重检测结果与罗通定的水分、熔点相呼应。
差示扫描量热检测结果：在升温过程中，依次出现3个吸热峰，峰顶温度分别为109.7℃、126.0℃、145.3℃。
综上，分子式推断本发明提供的样品为：C21H25NO4，分子量为355.43的左旋四氢巴马汀。由1H-NMR、1H-1Hcosy、13C-NMR、HMQC、HMBC对谱图中所有的C、H峰都给出具体的归属，对C-H关联关系给出了充分合理的解析，结合红外光谱紫外光谱中给出的官能团特征吸收峰，由质谱，元素分析推出的分子式，由TG、DSC给出的性状描述可以推出所测样品的结构为：
2)依据《中国药典》2010版二部及《罗通定质量标准》为依据，首先进行试验组1-5的合格度检测。结果如表7所示。
表7试验结果
本发明提供的左旋四氢巴马汀按罗通定放行标准检验，各检验项结果均符合规定，同时也表明该生产工艺下，连续生产样品质量稳定、一致性较好。
3)重复实施例1-5，进行左旋四氢巴马汀粗品的纯化，作为试验组1-5，3)将通过《罗通定质量标准/QS-CP220》粗品质量标准检验的粗品，随机均分为5份，通过实施例1-5提供的方法进行提纯，计算每组得到的左旋四氢巴马汀的产率，以及以左旋四氢巴马汀(中国药品生物制品检定所；批号为100452-200301)为对照组，经HPLC检测，试验组1-5中左旋四氢巴马汀的纯度，结果如表8所示。
表8试验结果
纯度％ 收率％
试验组1 99.95 43.8
试验组2 99.98 44.5
试验组3 99.97 45
试验组4 99.90 44.3
试验组5 99.88 43.8
由表8可得，本发明提供的纯化方法制得的左旋四氢巴马汀的纯度高，同时收率高，具体为纯化后左旋四氢巴马汀的含量高达99.8％以上，同时得到，左旋四氢巴马汀的收率大于43.8％，有效提高纯化效率以及收率。
4)巴马汀检测试验
色谱条件及测定方法如下：
色谱条件:色谱柱：Kromasil100-5C18250x4.6mm5μm；流动相：(0.05mol/L磷酸二氢钾溶液和0.05mol/L庚烷磺酸钠溶液(1:1)，含0.2％三乙胺，用磷酸调PH至6.5±0.05)-甲醇(35:65)；检测波长：280nm；流速：1ml/min；进样量：20μl；柱温：35℃；运行时间：30分钟。
溶液配制:空白溶液：甲醇：流动相(1:9，v:v)。
供试品溶液：取实施例1-5以及对比例各约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加入10ml甲醇超声处理5分钟使溶解，用流动相稀释到刻度，混匀滤过即得。(供试品浓度：0.2mg/ml)。对照溶液：精密量取1ml上述供试品溶液置于200ml容量瓶中，用流动相稀释到刻度，混匀滤过即得。(罗通定浓度：0.001mg/ml)，对实施例1-5以及对比例1进行巴马汀检测，结果如表10所示。
表9巴马汀检测试验结果
由表10所示，本发明采用的方法制得的左旋四氢巴马汀，有效降低巴马汀含量。
5)右旋四氢巴马汀检测试验
色谱条件及测定方法如下：
色谱条件：色谱柱：KcromasilCellucoat(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：无水乙醇；测波长：230nm；流速：0.5ml/min；进样量：20μl；柱温：30℃
溶液配制：系统适用性溶液：精密称取左旋四氢巴马汀对照品和右旋四氢巴马汀对照品适量，加入流动相溶解稀释制成左旋四氢巴马汀浓度为0.3mg/ml、右旋四氢巴马汀浓度为0.45μg/ml的混合溶液。
供试品溶液：分别取实施例1-5以及对比例1的产品各约15mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入流动相溶解并稀释到刻度，混匀滤过即得。(供试品浓度：0.3mg/ml)
自身对照溶液：精密量取3ml上述供试品溶液置于100ml容量瓶中，用流动相稀释到刻度，混匀；再取1ml置于20ml容量瓶中，用流动相稀释到刻度，混匀滤过即得，(罗通定浓度：0.45μg/ml)，测试结果参见表10：
表10右旋四氢巴马汀测试结果
由表10可得，本发明提供的方法有效去除右旋四氢巴马汀。
综上，本发明实施例的左旋四氢巴马汀的纯化方法，操作方便，有效提高左旋四氢巴马汀的提取率，提高原料的利用率，同时得到的左旋四氢巴马汀的纯度高，同时有效降低有害杂质巴马汀和去除右旋四氢巴马汀，有效解决现有的纯度不高导致的存在临床安全风险的问题。
综上，本发明实施例的提供的左旋四氢巴马汀粗品的纯化方法，操作简单，适宜工业化生产，同时对有效成分和杂质的选择性高，纯化效率高，有效提高左旋四氢巴马汀的收率。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

Claims (10)

1.一种左旋四氢巴马汀粗品的纯化方法，其特征在于，包括：
将所述粗品经80～95vt％的第一乙醇回流提取至少一次，每次乙醇回流提取后抽滤，合并每次经抽滤得到的滤液，浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的晶体采用80～95vt％的第二乙醇洗涤至少一次后，铺设厚度为2～3cm的晶体层，于50～55℃的热风条件下干燥3.8～4.2h，冷却。
2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述晶体铺设为晶体层前，还包括至少一次晶体精制，所述晶体精制包括：将所述晶体经所述第一乙醇回流提取至少一次，每次第一乙醇回流提取后抽滤，合并每次经抽滤得到的滤液，浓缩，静置结晶，将抽滤后将得到的精制晶体采用80～95vt％的第二乙醇洗涤至少一次后所得。
3.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，每次乙醇回流提取1-2h。
4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，浓缩包括：将合并后的所述滤液浓缩至合并后的所述滤液的体积的0.48～0.52倍。
5.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，浓缩在-0.05～-0.07Mpa的条件下进行。
6.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述粗品的添加量与所述第一乙醇的添加量的体积比为1：4～5。
7.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述晶体的添加量与所述第二乙醇的添加量的体积比为1：0.2～0.3。
8.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，于合并每次经抽滤得到的滤液与浓缩之间，还包括经大孔树脂吸附后，经80～95vt％的第三乙醇洗脱后，得乙醇洗脱液。
9.根据权利要求8所述的纯化方法，其特征在于，还包括通过减压回收所述第一乙醇，通过减压回收所述第二乙醇，以及通过减压回收所述第三乙醇。
10.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述粗品为山乌龟经酸提取后强碱溶液进行沉淀，将得到的沉淀进行乙醇回流后过滤，于滤液中析出所述粗品。
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