CN109942490A

CN109942490A - 一种米库氯铵的对照品及其制备方法

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Publication number: CN109942490A
Application number: CN201910289266.5A
Authority: CN
Inventors: 王世峰; 周峰; 黄美花; 赵婵; 钟昌茂
Original assignee: SIDA PHARMACEUTICAL CO Ltd HAINAN
Current assignee: SIDA PHARMACEUTICAL CO Ltd HAINAN
Priority date: 2019-04-11
Filing date: 2019-04-11
Publication date: 2019-06-28

Abstract

本发明提供了一种米库氯铵的对照品，涉及医药化工技术领域。本发明提供的对照品具有式I或式II所示结构。本发明提供的对照品与米库氯铵性质接近且更加稳定，同时成本低，可满足米库氯铵质量研究的要求。实施例结果表明，与以米库氯铵纯品为对照品进行米库氯铵含量检测的方法相比，本发明提供的对照品性质稳定，测出的供试品中米库氯铵的含量合理，数值稳定，完全满足作为对照品的检测要求。本发明提供了一种米库氯铵的对照品的制备方法。本发明提供的制备方法稳定性和重复性好，产物纯度高，并可适量放大制备，制备成本相对较低(3000元/克)，可很好地满足米库氯铵质量研究的需求。

Description

一种米库氯铵的对照品及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药化工技术领域，特别涉及一种米库氯铵的对照品及其制备方法。

背景技术

米库氯铵(Mivacurium Chloride)由Abbott lab开发，于1992年在美国首次上市。米库氯铵是一种短效苄基异喹啉类非去极化型肌松药，起效快，作用时间短，恢复迅速，无蓄积作用，对植物神经和心血管的不良反应少，可作为全麻辅助药，便于气管插管，在手术或机械换气时使骨骼肌松弛。米库氯铵的结构如式一所示：

米库氯铵分子呈对称结构，其中季铵盐的氮原子存在手性构型，因此米库氯铵是由A、B、C三种单体化合物组成的混合物。

在米库氯铵的质量研究中，需要用到性质稳定、数量充足的对照品，对米库氯铵进行鉴别、含量测定及有关物质标定等。目前，国内外尚不能采购到米库氯铵原料药对照品。

在实际研究中，对照品应当具有与供试品相同性质的特性，通常情况下选用供试品的精制品；此外，均一性及稳定性也是对照品的重要特征。米库氯铵为非单体物质，是非对映异构体化合物A、B、C三者的混合，获得某个高纯度的单体作为对照品，具有相当大的难度。首先，通过定向合成途径获得时，每个单体的定向合成都缺乏原料来源，合成成本极高(制备成本达200000元/克)；另一方面，三个单体在液相图谱中出峰极为接近，若通过分离纯化途径也具有相当大的难度；并且，米库氯铵分子中含有对称的酯基结构，在稳定性研究中发现其具有较强的水解特性，缺乏足够的化学稳定性，不利于当作对照品。可见，由于米库氯铵单体自身缺乏化学稳定性，并且样品来源受限，将其作为对照品对米库氯铵进行质量研究存在很大的困难。

因此，寻找一种性质稳定、与米库氯铵性质相近、并能方便制备的高纯度物质作为对照品，对米库氯铵进行质量研究显得尤为必要。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种米库氯铵的对照品及其制备方法。本发明提供的对照品与米库氯铵性质接近且更加稳定，成本低，可满足米库氯铵质量研究的要求。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种米库氯铵的对照品，具有式I或式II所示结构：

其中，X为不存在或独立地为F^－，Cl^－，Br^－，I^－，OH^－，HCO₃ ^－，CO₃ ^2－，HSO₄ ^－，SO₄ ^2－，NO₃ ^－，PO₄ ^3－，HPO₃ ^2－，H₂PO₃ ^－，HCOO^－，CH₃COO^－，CF₃COO^－，CH₃SO₃ ^－或CF₃SO₃ ^－；n为1～3的整数。

本发明提供了以上技术方案所述米库氯铵的对照品的制备方法，当X为不存在时，所述制备方法包括以下步骤：

(1)将具有式Ⅲ所示结构的化合物与3-氯丙醇在碳酸钠的催化作用下进行第一季铵化反应，得到第一季铵化产物；

(2)将所述第一季铵化产物通过制备液相色谱进行分离，分别得到具有式I所示结构的对照品和具有式II所示结构的对照品；

当X为I^－时，所述制备方法包括以下步骤：

(A)将具有式Ⅲ所示结构的化合物与3-氯丙醇和碘化钠在碳酸钠的催化作用下进行第二季铵化反应，得到第二季铵化产物；

(B)将所述第二季铵化产物通过制备液相色谱进行分离，分别得到具有式I所示结构的对照品和具有式II所示结构的对照品。

当X为F^－，Cl^－，Br^－，OH^－，HCO₃ ^－，CO₃ ^2－，HSO₄ ^－，SO₄ ^2－，NO₃ ^－，PO₄ ^3－，HPO₃ ^2－，H₂PO₃ ^－，HCOO^－，CH₃COO^－，CF₃COO^－，CH₃SO₃ ^－或CF₃SO₃ ^－时，所述制备方法包括以下步骤：

(一)将具有式Ⅲ所示结构的化合物与3-氯丙醇和碘化钠在碳酸钠的催化作用下进行第三季铵化反应，得到第三季铵化产物；

(二)将所述第三季铵化产物进行离子交换，得到离子交换产物；

(三)将所述离子交换产物通过制备液相色谱进行分离，分别得到具有式I所示结构的对照品和式II所示结构的对照品；

优选地，所述步骤(1)中具有式Ⅲ所示结构的化合物、3-氯丙醇和碳酸钠的摩尔比为1:(0.5～5):(0.1～1)。

优选地，所述步骤(1)中第一季铵化反应的温度为60～100℃，时间为1～24h。

优选地，所述步骤(A)中具有式Ⅲ所示结构的化合物、3-氯丙醇、碘化钠和碳酸钠的摩尔比为1:(0.5～5):(0.5～5):(0.1～1)。

优选地，所述步骤(A)中第二季铵化反应的温度为60～100℃，时间为1～24h。

优选地，所述步骤(一)中具有式Ⅲ所示结构的化合物、3-氯丙醇、碘化钠和碳酸钠的摩尔比为1:(0.5～5):(0.5～5):(0.1～1)。

优选地，所述步骤(一)中第三季铵化反应的温度为60～100℃，时间为1～24h。

优选地，所述制备液相色谱的色谱条件为：色谱柱Phenomennx Lux Cellulose-2300*50I.D.,10μm；流动相：质量分数90％的乙醇；流速：200mL/min；检测波长：220nm；柱温：38℃；进样量：15mL。

本发明提供了一种米库氯铵的对照品，具有式I或式II所示结构。本发明提供的对照品母环结构与米库氯铵完全一致，只是侧链部分为羟丙基，与米库氯铵的酯结构侧链相比，式I或式II所示结构的性质更加稳定，不易降解；同时，米库氯铵与式I或式II所示结构的物理化学性质非常接近，因此将具有式I或式II所示结构的化合物用作米库氯铵对照品符合质量研究的技术要求。即本发明提供的对照品与米库氯铵性质接近且更加稳定，同时成本低，可满足米库氯铵质量研究的要求。实施例结果表明，与以米库氯铵纯品为对照品进行米库氯铵含量检测的方法相比，本发明提供的对照品性质稳定，测出的供试品中米库氯铵的含量合理，数值稳定，完全满足作为对照品的检测要求。

本发明提供了以上所述米库氯铵的对照品的制备方法。本发明提供的制备方法稳定性和重复性好，产物纯度高，并可适量放大制备，制备成本相对较低(3000元/克)，可很好地满足米库氯铵质量研究的需求。

附图说明

图1为实施例3制备的季铵化产物(X为Cl^－)的HPLC图谱。

具体实施方式

其中，X为不存在或独立地为F^－，Cl^－，Br^－，I^－，OH^－，HCO₃ ^－，CO₃ ^2－，HSO₄ ^－，SO₄ ^2－，NO₃ ^－，PO₄ ^3－，HPO₃ ^2－，H₂PO₃ ^－，HCOO^－，CH₃COO^－，CF₃COO^－，CH₃SO₃ ^－或CF₃SO₃ ^－；n为1～3的整数。在本发明中，当X为不存在时或为上述负一价离子时，n＝1；当X为上述负二价离子时，n＝2；当X为上述负三价离子时，n＝3。在本发明中，当式I和式II中X同为不存在或X为同种离子基团时，与之对应的式I和式II所示结构的化合物互为手性异构体。其中，当X为不存在时，与之对应的式I和式II所示结构分别为：

(2)将所述第一季铵化产物通过制备液相色谱进行分离，分别得到式I所示的对照品和式II所示的对照品。

当X为不存在时，本发明将具有式Ⅲ所示结构的化合物与3-氯丙醇在碳酸钠的催化作用下进行第一季铵化反应，得到第一季铵化产物。在本发明中，所述第一季铵化产物为X不存在时两种手性构型的化合物的混合物；季铵化反应的反应式如式a所示，其中式IV所示结构表示第一季铵化产物：

在本发明中，所述具有式Ⅲ所示结构的化合物、3-氯丙醇和碳酸钠的摩尔比优选为1:(0.5～5):(0.1～1)，更优选为1:(2～3):(0.4～0.6)；所述第一季铵化反应的温度优选为60～100℃，更优选为80～90℃，时间优选为1～24h，更优选为18h。在本发明中，所述第一季铵化反应的溶剂优选为2-丁酮。本发明优选将所述溶剂、具有式Ⅲ所示结构的化合物、3-氯丙醇和碳酸钠混合后再加热至上述所需温度进行第一季铵化反应；在本发明具体实施例中，所述混合优选按照先将具有式Ⅲ所示结构的化合物溶于2-丁酮中，再加入3-氯丙醇，最后加入碳酸钠的顺序进行；所述混合优选在搅拌的条件下进行，本发明对所述搅拌的转速和时间没有特别的要求，保证各组分充分混合即可。

在本发明中，所述第一季铵化反应优选在回流的条件下进行；本发明对所述回流的装置没有特别的要求，采用本领域熟知的回流装置即可。第一季铵化反应后，本发明优选对得到的第一季铵化反应液进行后处理。在本发明中，所述后处理的方法优选包括以下步骤：

(a)将所述第一季铵化反应液进行热滤，得到滤液；

(b)将所述滤液减压浓缩至干，得粘稠物；

(c)将所述粘稠物加水溶解后，用二氯甲烷提取，得到水相；

(d)所述水相加入盐析试剂后，用二氯甲烷提取，得到有机相；

(e)将所述有机相干燥后过滤，将所得滤液减压浓缩至干，得到第一季铵化产物。

在本发明中，所述步骤(a)中热滤的温度优选为50～60℃，所述滤液的颜色为淡红色；本发明优选将所述第一季铵化反应液冷却至热滤的温度范围内，进行热滤。本发明通过热滤除去第一季铵化产物中的无机盐。本发明对所述步骤(b)中的减压浓缩的方法没有特别的要求，采用本领域熟知的方法即可。本发明通过步骤(c)中的二氯甲烷提取，除去季铵化产物中的2-丁酮等有机杂质。在本发明中，所述步骤(d)中的盐析试剂优选为碳酸钠，所述二氯甲烷提取的次数优选为2次，本发明通过加入碳酸钠进行盐析再用二氯甲烷提取的方法，得到含所需季铵化产物的有机相。在本发明中，所述步骤(e)中干燥用干燥剂优选为无水硫酸镁；所得第一季铵化产物为黄色固体。

上述所得第一季铵化产物(具有式Ⅳ所示结构)实为两种手性构型的化合物的混合物，即所述第一季铵化产物为X不存在时具有式I所示结构的化合物和具有式II所示结构的化合物的混合物。得到第一季铵化产物后，本发明将所述第一季铵化产物通过制备液相色谱进行分离，分别得到具有式I所示结构的对照品和具有式II所示结构的对照品。在本发明中，所述通过制备液相色谱进行分离的步骤优选具体为：

将所述第一季铵化产物溶于水，得到水溶液；

使用制备液相色谱对所述水溶液进行分离，收集不同保留时间的组分，分别得到含式I所示化合物的流出液和含式II所示化合物的流出液；

分别对所得流出液进行后处理，得到具有式I所示结构的对照品和具有式II所示结构的对照品。

在本发明中，所述水溶液的质量浓度优选为0.05～10％，更优选为0.5～5％。

在本发明中，所述制备液相色谱的色谱条件优选为：色谱柱Phenomennx LuxCellulose-2300*50I.D.,10μm；流动相：质量分数90％的乙醇；流速：200mL/min；检测波长：220nm；柱温：38℃；进样量：15mL；式I所示化合物保留时间优选为9～12min，更优选为10min，式II所示化合物保留时间优选为12～15min，更优选为13min。

在本发明中，所述后处理优选为：将分离所得流出液进行浓缩，得到油状物；将所述油状物溶于二氯甲烷后用氯化钠溶液洗涤，得到洗涤产物；将所述洗涤产物经无水硫酸钠干燥后浓缩至干，得到泡沫状固体，即为具有式I或式II所示结构的对照品。本发明对所述浓缩的方法没有特别的要求，采用本领域熟知的浓缩方法即可。在本发明中，所述氯化钠溶液的质量浓度优选为15％。

当X为I^－时，所述制备方法包括以下步骤：

当X为I^－时，本发明将具有式Ⅲ所示结构的化合物与3-氯丙醇和碘化钠在碳酸钠的催化作用下进行第二季铵化反应，得到第二季铵化产物。在本发明中，所述第二季铵化产物为X为I^－时两种手性构型的化合物的混合物，反应式如式b所示，其中式V所示结构表示第二季铵化产物：

在本发明中，所述具有式Ⅲ所示结构的化合物、3-氯丙醇、碘化钠和碳酸钠的摩尔比优选为1:(0.5～5):(0.5～5):(0.1～1)，更优选为1:(2～3):(2～3):(0.4～0.6)；所述第二季铵化反应的温度优选为60～100℃，更优选为80～90℃，时间优选为1～24h，更优选为18h。在本发明中，所述第二季铵化反应的溶剂优选为2-丁酮。本发明优选将所述溶剂、具有式Ⅲ所示结构的化合物、3-氯丙醇、碘化钠和碳酸钠混合后再加热至上述所需温度进行第二季铵化反应；在本发明具体实施例中，所述混合优选按照先将具有式Ⅲ所示结构的化合物溶于2-丁酮中，再加入3-氯丙醇和碘化钠，最后加入碳酸钠的顺序进行；所述混合优选在搅拌的条件下进行，本发明对所述搅拌的转速和时间没有特别的要求，保证各组分充分混合即可。

在本发明中，所述第二季铵化反应优选在回流的条件下进行；本发明对所述回流的装置没有特别的要求，采用本领域熟知的回流装置即可。第二季铵化反应后，本发明优选对得到的第二季铵化反应液进行后处理；所述后处理过程同于上述(a)～(e)的步骤，只将盐析试剂改为碘化钠即可，在此不再赘述；经过后处理，得到第二季铵化产物。

所得第二季铵化产物(具有式Ⅴ所示结构的产物)为X为I^-时两种手性构型的化合物的混合物。得到第二季铵化产物后，本发明将所述第二季铵化产物通过制备液相色谱进行分离，分别得到具有式I所示结构的对照品和具有式II所示结构的对照品；所述通过制备液相色谱进行分离的条件以及对分离所得组分的后处理步骤和上述方案相同，在此不再赘述。

当X为F^－，Cl^－，Br^－，OH^－，HCO₃ ^－，CO₃ ^2－，HSO₄ ^－，SO₄ ^2－，NO₃ ^－，PO₄ ^3－，HPO₃ ^2－-，H₂PO₃ ^－，HCOO^－，CH₃COO^－，CF₃COO^－，CH₃SO₃ ^－或CF₃SO₃ ^－时，所述制备方法包括以下步骤：

(三)将所述离子交换产物通过制备液相色谱进行分离，分别得到具有式I所示结构的对照品和具有式II所示结构的对照品。

在本发明中，所述步骤(一)中的第三季铵化反应的条件和上述方案所述第二季铵化反应相同，在此不再赘述。在本发明中，所述第三季铵化反应所得产物和第二季铵化反应所得产物相同，为X为I^-时两种手性构型的化合物的混合物。

在经过第三季铵化反应之后，本发明对所得第三季铵化产物进行离子交换，将其中的I^-替换为其他目标离子。

在本发明中，所述离子交换优选包括以下步骤：将第三季铵化产物溶于水，将所得水溶液过装有强碱性阴离子树脂的交换柱，进行离子交换。在本发明中，所述强碱性阴离子树脂的类型与X表示的离子基团保持一致，例如当X为F^－时，所述强碱性阴离子树脂为氟型；在本发明中，所述离子交换用洗脱液优选为去离子水。

离子交换完成后，本发明优选将所得离子交换液进行减压浓缩，得到离子交换产物(即X为上述离子基团的季铵化产物)。本发明通过离子交换，将季铵化产物中的碘离子转变为其他相应离子基团(F^－，Cl^－，Br^－，OH^－，HCO₃ ^－，CO₃ ^2－，HSO₄ ^－，SO₄ ^2－，NO₃ ^－，PO₄ ^3－，HPO₃ ^2－，H₂PO₃ ^－，HCOO^－，CH₃COO^－，CF₃COO^－，CH₃SO₃ ^－或CF₃SO₃ ^－)。

所得离子交换产物为X为F^－，Cl^－，Br^－，OH^－，HCO₃ ^－，CO₃ ^2－，HSO₄ ^－，SO₄ ^2－，NO₃ ^－，PO₄ ^3－，HPO₃ ^2－，H₂PO₃ ^－，HCOO^－，CH₃COO^－，CF₃COO^－，CH₃SO₃ ^－或CF₃SO₃ ^－时两种手性构型的化合物的混合物。得到离子交换产物后，本发明将所述离子交换产物通过制备液相色谱进行分离，分别得到具有式I所示结构的对照品和具有式II所示结构的对照品；所述通过制备液相色谱进行分离的条件以及对分离所得组分的后处理步骤和上述方案相同，在此不再赘述。

本发明提供的制备方法稳定性和重复性好，产物纯度高，并可适量放大制备，制备成本相对较低(3000元/克)，有效地降低米库氯铵质量研究的成本。

下面结合实施例对本发明提供的米库氯铵的对照品及其制备方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

季铵化产物(X为不存在)的制备：

0.3mol化合物III溶于500mL的2-丁酮中，加入0.6mol的3-氯丙醇，搅拌溶解后，最后加入碳酸钠0.12mol。开启加热，80℃下回流保温18小时。反应结束后，冷却至内温50～60℃，热滤，得淡红色滤液。减压浓缩至干，得粘稠物。加入纯化水搅拌溶解后，二氯甲烷提取，取水相。水相加入碳酸钠后，用二氯甲烷提取两次，合并有机相，无水硫酸镁干燥后，过滤，滤液减压浓缩至干，得黄色固体IV(X为不存在)。ESI(-)：m/z 446.2。

实施例2

季铵化产物(X为I^－)的制备：

0.3mol化合物III溶于800mL的2-丁酮中，加入0.9mol的3-氯丙醇和0.9mol的碘化钠，搅拌溶解后，最后加入0.18mol的碳酸钠。开启加热，76℃下回流保温18小时。反应结束后，冷却至内温50～60℃，热滤，得橙红色滤液。减压浓缩至干，得粘稠物。加入纯化水搅拌溶解后，二氯甲烷提取，取水相。加入碘化钠，搅拌溶解后，用二氯甲烷提取两次，合并有机相，无水硫酸镁干燥后，过滤，滤液减压浓缩至干，得黄色固体V(X为I^－)。ESI(-)：m/z446.2。

实施例3

季铵化产物(X为Cl^－)的制备：

0.3mol化合物III溶于650mL的2-丁酮中，加入0.75mol的3-氯丙醇和0.75mol的碘化钠，搅拌溶解后，最后加入0.15mmol碳酸钠。开启加热，88℃下回流保温18小时。反应结束后，冷却至内温50～60℃，热滤，得橙红色滤液。减压浓缩至干，得粘稠物。加入纯化水搅拌溶解后，二氯甲烷提取，取水相。水相过强碱性阴离子树脂(201×7氯型)，用去离子水洗脱，收集含产物的水溶液。该水液用二氯甲烷洗涤两次，取水相。加入氯化钠，搅拌溶解后，用二氯甲烷提取两次，合并有机相，无水硫酸镁干燥后，过滤，滤液减压浓缩至干，得淡黄色固体Ⅵ(X为Cl^－)。HPLC检测，式I：式II约为2.5：1；季铵化产物Ⅵ的HPLC图谱见图1。ESI(-)：m/z446.2。

实施例4

季铵化产物(X为F^－，Br^－，OH^－，HCO₃ ^－，CO₃ ^2－，HSO₄ ^－，SO₄ ^2－，NO₃ ^－，PO₄ ^3－，HPO₃ ^2－，H₂PO₃ ^－，HCOO^－，CH₃COO^－，CF₃COO^－，CH₃SO₃ ^－，CF₃SO₃ ^－)的制备：

将实施例2制备的化合物V溶于水中，水液过强碱性阴离子树脂，用去离子水洗脱，收集含产物的水溶液；水液减压浓缩至干，得黄色固体，即为季铵化产物。阴离子交换树脂的类型如表1所示：

表1不同离子基团的季铵化产物所用阴离子交换树脂的类型

实施例5

化合物I(X为不存在)的制备：

将实施例1制备的化合物IV(X为不存在)溶于水中，通过液相制备柱进行分离，乙醇洗脱，取式I(X为不存在)组分，合并后浓缩，得到油状物。加入二氯甲烷溶解，用15％的氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥后，浓缩至干，得到泡沫状固体式I化合物(X为不存在)。

HPLC纯度99.5％。ESI(-)：m/z 446.2。¹HNMR：(400MHz，D₂O)δ＝6.98(s,1H)，6.27(s,2H)，5.83(s,1H)，4.63-4.65(m,1H)，4.01-4.05(m,1H)，3.85(s,3H)，3.79(s,3H)，3.72-3.77(m,7H)，3.65-3.68(m,1H)，3.58-3.62(m,2H)，3.45-3.49(t,2H)，3.42(s,3H)，3.41(s,3H)，3.26-3.29(m,2H)，2.98-3.04(t,1H)，2.04-2.16(m,2H)。

实施例6

化合物I(X为Cl^－)的制备：

将实施例3制备的化合物Ⅵ(X为Cl^－)溶于水中，通过液相制备柱进行分离，乙醇洗脱，取式I(X为Cl^－)组分，合并后浓缩，得到油状物。加入二氯甲烷溶解，用15％的氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥后，浓缩至干，得到泡沫状固体式I(X为Cl^－)。

HPLC纯度99.6％。ESI(-)：m/z 446.2。¹HNMR：(400MHz，D₂O)δ＝7.00(s,1H)，6.28(s,2H)，5.79(s,1H)，4.62-4.65(m,1H)，4.00-4.07(m,1H)，3.86(s,3H)，3.78(s,3H)，3.71-3.76(m,7H)，3.64-3.68(m,1H)，3.58-3.61(m,2H)，3.45-3.48(t,2H)，3.43(s,3H)，3.40(s,3H)，3.25-3.29(m,2H)，2.98-3.03(t,1H)，2.02-2.17(m,2H)。

实施例7

化合物I(X为F^－，I^－，Br^－，OH^－，HCO₃ ^－，CO₃ ^2－，HSO₄ ^－，SO₄ ^2－，NO₃ ^－，PO₄ ^3－，HPO₃ ^2－，H₂PO₃ ^－，HCOO^－，CH₃COO^－，CF₃COO^－，CH₃SO₃ ^－，CF₃SO₃ ^－)的制备：

方法同于实施例6，得到的各离子基团的化合物I的HPLC纯度如表2所示：

表2各离子基团的化合物I的HPLC纯度

实施例8

化合物II(X为不存在)的制备：

将实施例1制备的化合物IV(X为不存在)溶于水中，通过液相制备柱进行分离，乙醇洗脱，取式II(X为不存在)组分，合并后浓缩，得到油状物。加入二氯甲烷溶解，用15％的氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥后，浓缩至干，得到泡沫状固体。

HPLC纯度99.3％。ESI(-)：m/z 446.2。¹HNMR：(400MHz，D₂O)δ＝7.01(s,1H)，6.27(s,2H)，5.78(s,1H)，4.67-4.71(m,1H)，3.95-4.00(m,1H)，3.86-3.91(m,6H)，3.79(s,3H)，3.66-3.75(m,8H)，3.59-3.62(m,1H)，3.43(s,3H)，3.27-3.32(m,2H)，3.13(s,3H)，2.95-2.98(t,1H)，2.29-2.37(m,2H)。

实施例9

化合物II(X为Cl^－)的制备：

将实施例3制备的化合物Ⅵ(X为Cl^－)溶于水中，通过液相制备柱进行分离，乙醇洗脱，取式II(X为Cl^－)组分，合并后浓缩，得到油状物。加入二氯甲烷溶解，用15％的氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥后，浓缩至干，得到泡沫状固体。

HPLC纯度99.2％。ESI(-)：m/z 446.2。¹HNMR：(400MHz，D₂O)δ＝7.00(s,1H)，6.26(s,2H)，5.77(s,1H)，4.67-4.70(m,1H)，3.96-4.02(m,1H)，3.85-3.90(m,6H)，3.78(s,3H)，3.65-3.74(m,8H)，3.58-3.62(m,1H)，3.41(s,3H)，3.25-3.32(m,2H)，3.11(s,3H)，2.94-2.98(t,1H)，2.28-2.37(m,2H)。

实施例10

化合物II(X为F^－，I^－，Br^－，OH^－，HCO₃ ^－，CO₃ ^2－，HSO₄ ^－，SO₄ ^2－，NO₃ ^－，PO₄ ^3－，HPO₃ ^2－，H₂PO₃ ^－，HCOO^－，CH₃COO^－，CF₃COO^－，CH₃SO₃ ^－，CF₃SO₃ ^－)的制备：

方法同于实施例9，得到的各离子基团的化合物II的HPLC纯度如表3所示：

表3各离子基团的化合物II的HPLC纯度

实施例11

式I化合物作为对照品用于米库氯铵含量的测定：

按照高效液相色谱法(中国药典2015版通则0512)进行测定。测定条件如表4所示：

表4含量测定条件

仪器	液相色谱仪
		色谱柱	WelchUltimateSiO<sub>2</sub>,4.6*300mm，5μm
柱温	30℃
		流动相系统	乙腈：水：磷酸(85％)＝89:10:1(v/v)
流速	1.0mL/min
		检测波长	279nm
进样量	10μL
		运行时间	35min
溶剂	乙腈：水：磷酸(85％)＝89:10.75:0.25(v/v)

测定方法：取米库氯铵原料药适量，精密称定，加溶剂稀释并制成1mg/mL的溶液，作为供试品溶液；另取式I对照品适量，同法配制，作为对照品溶液。取供试品和对照品溶液各10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，按以下公式分别计算出供试品中米库氯铵各异构体的量，再计算米库氯铵异构体总量。米库氯铵各异构体含量的计算公式如式1所示：

式1中：Ws为式I对照品的取样量；

As为式I对照品的峰面积；

At为供试品溶液中米库氯铵单个异构体对应的峰面积；

W为供试品的称样量；

1100.17为米库氯铵异构体的分子量；

M为式I的分子量；

f为以式I化合物的响应值为1，米库氯铵异构体的相对响应值。供试品中米库氯铵含量的检测结果如表5所示：

表5供试品中米库氯铵含量的检测结果

实施例12

式II化合物作为对照品用于米库氯铵含量的测定：

测定方法同于实施例11，将式I对照品替换为式II对照品即可。供试品中米库氯铵含量的检测结果如表6所示：

表6供试品中米库氯铵含量的检测结果

对比例

式A化合物作为对照品用于米库氯铵含量的测定：

测定方法同于实施例11，将式I对照品替换为式A对照品即可。测得的供试品中米库氯铵的含量为105.96％。

通过以上实施例可以看出，与以米库氯铵纯品(式A对照品)为对照品进行米库氯铵含量检测的方法相比，本发明提供的对照品性质稳定，测出的供试品中米库氯铵的含量合理，数值稳定，完全满足作为对照品的检测要求；并且本发明提供的制备方法得到的对照品纯度高，成本低，有效地降低了米库氯铵质量研究的成本。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种米库氯铵的对照品，其特征在于，具有式I或式II所示结构：

2.权利要求1所述米库氯铵的对照品的制备方法，其特征在于，当X为不存在时，所述制备方法包括以下步骤：

当X为I^－时，所述制备方法包括以下步骤：

(B)将所述第二季铵化产物通过制备液相色谱进行分离，分别得到具有式I所示结构的对照品和具有式II所示结构的对照品；

(三)将所述离子交换产物通过制备液相色谱进行分离，分别得到具有式I所示结构的对照品和具有式II所示结构的对照品；

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中具有式Ⅲ所示结构的化合物、3-氯丙醇和碳酸钠的摩尔比为1:(0.5～5):(0.1～1)。

4.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中第一季铵化反应的温度为60～100℃，时间为1～24h。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(A)中具有式Ⅲ所示结构的化合物、3-氯丙醇、碘化钠和碳酸钠的摩尔比为1:(0.5～5):(0.5～5):(0.1～1)。

6.根据权利要求2或5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(A)中第二季铵化反应的温度为60～100℃，时间为1～24h。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(一)中具有式Ⅲ所示结构的化合物、3-氯丙醇、碘化钠和碳酸钠的摩尔比为1:(0.5～5):(0.5～5):(0.1～1)。

8.根据权利要求2或7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(一)中第三季铵化反应的温度为60～100℃，时间为1～24h。

9.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述制备液相色谱的色谱条件为：色谱柱Phenomennx Lux Cellulose-2 300*50 I.D.,10μm；流动相：质量分数90％的乙醇；流速：200mL/min；检测波长：220nm；柱温：38℃；进样量：15mL。