CN108205033A - 一种同步提取、分离、测定龙葵青果中龙葵碱和龙葵多糖的方法 - Google Patents

一种同步提取、分离、测定龙葵青果中龙葵碱和龙葵多糖的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种同步提取、分离、测定龙葵青果中龙葵碱和龙葵多糖的方法，本方法将超声破壁、双水相萃取和高效液相联用，通过超声破壁实现龙葵青果中龙葵碱和龙葵多糖的同步提取，利用双水相萃取完成龙葵碱和龙葵多糖的分离，利用高效液相和苯酚‑硫酸法检测龙葵碱和龙葵多糖的含量。本方法简单、易操作、可重现性好，可用于龙葵青果中龙葵碱和龙葵多糖的同步提取分离，并为龙葵全草中龙葵有效成分的提取分离提供了一种新的技术手段。

Description

一种同步提取、分离、测定龙葵青果中龙葵碱和龙葵多糖的 方法
技术领域
本发明涉及龙葵有效成分提取分离领域，具体的说涉及一种同步提取、分离、测定龙葵青果中龙葵碱和龙葵多糖的方法。
背景技术
龙葵属茄科植物，是一味传统的中草药，其性寒味苦，具有清热解毒，活血消肿等功效。龙葵全草可药用,能治疗疮肿毒、气管炎、癌肿、膀胧炎、小便不利、痢疾、咽喉肿痛等多种疾病。龙葵是一种良好的药用植物，其主要的有效成分为龙葵碱和龙葵多糖。。
龙葵碱(Solanine)作为一种糖苷生物碱，于19世纪初首次被Desfososses发现。龙葵碱是从龙葵的全草或未成熟的果实中提取分离出的一种生物总碱，包含澳洲茄碱、边缘茄碱、澳洲茄边碱、茄微碱和茄达碱等多种生物碱，其中最主要的是澳洲茄碱和澳洲茄边碱。至今，已从350多种植物中分离鉴定出100多种这类化合物，如马铃薯、番茄、茄子、龙葵、藜芦等植物。龙葵碱具有抗肿瘤、强心、抗过敏、抗菌等作用。龙葵碱对癌细胞活性具有重要的抑制作用，有降低癌细胞扩散速度、抗转移、抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡的作用。
龙葵多糖是一种水溶性多糖，具有降低血管透性及透明质酸酶的生物活性,促使抗体的形成，降低血液的凝固性,对心脏的兴奋有抑制作用等免疫功能。国内学者通过大量的实验证明,龙葵多糖对金葡球菌、伤寒杆菌、变形杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、猪霍乱杆菌、志贺菌属有一定的抑制作用。
龙葵碱和龙葵多糖作为龙葵中的两种重要有效成分，具有非常重要的研究及生产价值，因此，加强对龙葵碱和龙葵多糖提取分离方法的研究成为必然。目前，对于龙葵有效成分的提取都是单一的提取龙葵碱或龙葵多糖，未能实现两种有效成分的同时提取和分离。本发明旨在同步提取龙葵青果中的两种主要成分，并实现两种成分的分离。
发明内容：
本发明的目的在于提供一种同步提取、分离龙葵青果中两种主要有效成分龙葵碱和龙葵多糖的方法，该方法通过高效液相和紫外分光光度计进行龙葵碱和龙葵多糖的测定，可以同时提取出龙葵青果中的两种有效成分，并实现分离和测定，该方法简单、稳定、重现性好，可用于龙葵碱和龙葵多糖的同步提取分离和测定。
本发明的目的是这样实现的：利用超声破壁和双水相萃取同步提取分离龙葵青果中的有效成分龙葵碱和龙葵多糖，利用高效液相测定龙葵碱，通过苯酸-硫酸法显色，利用紫外分光光度计测定龙葵多糖，具体步骤如下：
(1)、龙葵碱对照品溶液的制备：精密称取澳洲茄碱和澳洲茄边碱对照品，分别置于5mL容量瓶中，加入3mL乙醇溶解，定容至刻度，制得浓度为5mg·mL-1的澳洲茄碱和澳洲茄边碱的单个对照品储备液。再精密吸取两种单个对照品储备液各2mL，置于同一10mL容量瓶中，定容至刻度，即得龙葵碱混合对照品溶液。
(2)、葡萄糖对照品溶液的制备：精密称取葡萄糖10mg，置于100mL容量瓶中，加入20mL纯净水溶解，定容至刻度，制得浓度为0.1mg·mL-1的葡萄糖对照品储备液。
(3)、超声破壁提取：称取龙葵青果10g～500g，按比例加入60％的乙醇溶液，将上述混合物放入打碎机，使龙葵青果充分打碎；将打碎后的混合溶液放入超声破壁仪中，超声破壁50min；然后将混合液离心10min，取上清液，向残渣再加入60％的乙醇，超声破壁50分钟后，离心后取上清液，合并上清液过滤，得龙葵果提取液，记为样品A。
(4)、双水相分离：取5mL～50mL样品A与碳酸钾溶液混合，充分振荡后，静置10分钟，溶液分成上下两相，分离上、下两相溶液，记为样品B和样品C；将样品B与碳酸钾溶液混合，充分振荡后，静置10分钟，溶液分成上下两相，分离上、下两相溶液，记为样品D和样品E；合并样品C和样品E，记为样品F。
(5)、高效液相测定龙葵碱：利用高效液相测定步骤1制得的龙葵碱混合对照品溶液的峰面积，龙葵碱的浓度与峰面积呈现良好的线性关系；检测样品D和样品F中的龙葵碱，检测结果：样品D中富含龙葵碱，样品F中没有检测出龙葵碱。
(6)、紫外分光光度计测定龙葵多糖：根据苯酚-硫酸法，利用紫外分光光度计检测样品D和样品F中的龙葵多糖，具体方法如下：精密吸取步骤2制得的葡萄糖对照品储备液0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL，分别置于10mL容量瓶中，向每个容量瓶中分别加入1mL浓度为5％的苯酚，充分摇匀后，迅速加入5mL浓度大于70％的浓硫酸，充分摇匀后，置于沸水浴中显色25min，取出加水定容；利用紫外分光光度计测定标准溶液的吸光度，绘制标准曲线；精密吸取供试品1mL，置于10mL容量瓶中，加入1mL浓度为5％的苯酚，充分摇匀后，迅速加入5mL浓度大于70％的浓硫酸，充分摇匀后，置于沸水浴中显色25min，取出加水定容，利用紫外分光光度计测定供试品溶液的吸光度，根据标准曲线计算供试品溶液的吸光度；检测结果：样品F中的富含龙葵多糖，样品D中的未检测出龙葵多糖。
步骤(3)中所述加入60％的乙醇溶液比例为：每克龙葵青果加入10mL的60％的乙醇溶液。
步骤(4)中所述碳酸钾溶液的浓度为0.45g·mL-1。
步骤(4)中所述样品A与碳酸钾溶液的混合比例为等体积混合；样品B与碳酸钾溶液的混合比例亦为等体积混合。
步骤(5)中所述龙葵碱指的是澳洲茄碱和澳洲茄边碱。
步骤(5)中所述高效液相检测条件：色谱柱：TC-C18(4.6mm×25mm,5μm)；紫外检测波长203nm；流动相：0.5％磷酸-乙腈＝70％-30％；进样量：10uL；流速：1.0mL·min-1；柱温：25℃。在此色谱条件下，色谱峰分离良好，澳洲茄碱和澳洲茄边碱的浓度与峰面积呈现良好的线性关系。
本发明具有以下优点和积极效果：
1、本发明所述方法简单、重现性和稳定性好，为龙葵中的有效成分的提取分离提供了一种新的技术手段。
2、本发明将超声破壁和双水相萃取联用，能够实现龙葵中的两种主要有效成分的同步提取和分离。
附图说明
图1为实施例1中龙葵碱对照品和实际样品的高效液相谱图。
具体实施方式
通过下述实施例对本发明作以进一步的阐述，以便本领域的技术人员更了解本发明，但并不以此限制本发明。
实施例1
1、仪器与药品
FA104N万分之一分析天平(上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂制造)；日本岛津紫外分光光度计UV2500；美国安捷伦1100高效液相色谱仪；HN99-IID超声波细胞破壁仪(上海汉诺仪器有限公司)。
澳洲茄碱和澳洲茄边碱均由郑州阿尔法化工有限公司提供，纯度高于99.9％；无水乙醇(色谱纯)、乙腈(色谱纯)、无水乙醇(分析纯)和碳酸钾(分析纯)均购于国药集团化学试剂有限公司。
2、具体步骤如下：
(1)龙葵碱对照品溶液的制备：精密称取澳洲茄碱和澳洲茄边碱对照品，分别置于5mL容量瓶中，加入3mL无水乙醇(色谱纯)溶解，定容至刻度，制得浓度为5mg·mL-1的澳洲茄碱和澳洲茄边碱的单个对照品储备液。再精密吸取两种单个对照品储备液各2mL，置于同一10mL容量瓶中，定容至刻度，即得混合对照品溶液。
(2)葡萄糖对照品溶液的制备：精密称取葡萄糖10mg，置于100mL容量瓶中，加入20mL纯净水溶解，定容至刻度，制得浓度为0.1mg·mL-1的葡萄糖对照品储备液。
(3)超声破壁提取：称取龙葵青果10g，加入60％的乙醇溶液100mL，将上述混合物放入打碎机，使龙葵青果充分打碎；将打碎后的混合溶液放入超声破壁仪中，超声破壁50min；然后将混合液离心10min，取上清液，向残渣再加入60％的乙醇50mL，超声破壁50min后，离心后取上清液，合并上清液过滤，定容至250mL，得龙葵果提取液，记为样品A。
(4)双水相分离：取10mL样品A与10mL浓度为0.45g·mL-1的碳酸钾溶液混合，充分振荡后，静置10分钟，溶液分成上下两相，上、下相的体积分别为8mL和12mL，分离上、下两相溶液，记为样品B和样品C；将样品B与8mL浓度为0.45g·mL-1的碳酸钾溶液混合，充分振荡后，静置10分钟，溶液分成上下两相，分离上、下两相溶液，记为样品D和样品E；合并样品C和样品E，记为样品F。
(5)高效液相测定龙葵碱：利用高效液相检测样品A、样品D和样品F中的龙葵碱，高效液相检测条件：色谱柱：TC-C18(4.6mm×25mm,5μm)；紫外检测波长203nm；流动相：0.5％磷酸-乙腈＝70％-30％；进样量：10uL；流速：1.0mL·min-1；柱温：25℃。在此色谱条件下，色谱峰分离良好，澳洲茄碱和澳洲茄边碱的浓度与峰面积呈现良好的线性关系。检测结果：样品A中的龙葵碱含量为49.5ug·mL-1，澳洲茄边碱的含量为56.7ug·mL-1；样品D中澳洲茄碱的含量为70.8ug·mL-1，澳洲茄边碱的含量为82.1ug·mL-1；样品F中没有检测出澳洲茄碱和澳洲茄边碱。附图1为龙葵碱对照品和实际样品的的高效液相谱图。
(6)紫外分光光度计测定龙葵多糖：根据苯酚-硫酸法，利用紫外分光光度计检测样品A、样品D和样品F中的龙葵多糖，具体方法如下：精密吸取葡萄糖对照品储备液0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL，分别置于10mL容量瓶中，加入1mL浓度为5％的苯酚，充分摇匀后，迅速加入5mL浓硫酸，充分摇匀后，置于沸水浴中显色25min，取出加水定容。利用紫外分光光度计测定标准溶液的吸光度，绘制标准曲线。精密吸取供试品1mL，置于10mL容量瓶中，加入1mL浓度为5％的苯酚，充分摇匀后，迅速加入5mL浓硫酸，充分摇匀后，置于沸水浴中显色25min，取出加水定容。利用紫外分光光度计测定供试品溶液的吸光度，根据标准曲线计算供试品溶液的吸光度。检测结果：样品A中的龙葵多糖含量为3.12mg·mL-1；样品F中的龙葵多糖含量为1.47mg·mL-1；样品D中未检测出龙葵多糖。
附图1为实施例1中龙葵碱对照品和实际样品的高效液相谱图。
从对照品和实际样品的高效液相谱图可以看出，色谱峰分离良好，实际样品和对照品的出峰时间一致。
实施例2
1、仪器与药品
FA104N万分之一分析天平(上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂制造)；日本岛津紫外分光光度计UV2500；美国安捷伦1100高效液相色谱仪；HN99-IID超声波细胞破壁仪(上海汉诺仪器有限公司)。
澳洲茄碱和澳洲茄边碱均由郑州阿尔法化工有限公司提供，纯度高于99.9％；无水乙醇(色谱纯)、乙腈(色谱纯)、无水乙醇(分析纯)和碳酸钾(分析纯)均购于国药集团化学试剂有限公司。
2、具体步骤如下：
(1)龙葵碱对照品溶液的制备：精密称取澳洲茄碱和澳洲茄边碱对照品，分别置于5mL容量瓶中，加入3mL无水乙醇(色谱纯)溶解，定容至刻度，制得浓度为5mg·mL-1的澳洲茄碱和澳洲茄边碱的单个对照品储备液。再精密吸取两种单个对照品储备液各2mL，置于同一10mL容量瓶中，定容至刻度，即得混合对照品溶液。
(2)葡萄糖对照品溶液的制备：精密称取葡萄糖10mg，置于100mL容量瓶中，加入20mL纯净水溶解，定容至刻度，制得浓度为0.1mg·mL-1的葡萄糖对照品储备液。
(3)超声破壁提取：称取龙葵青果10g，加入60％的乙醇溶液100mL，将上述混合物放入打碎机，使龙葵青果充分打碎；将打碎后的混合溶液放入超声破壁仪中，超声破壁50min；然后将混合液离心10min，取上清液，向残渣再加入60％的乙醇50mL，超声破壁50min后，离心后取上清液，合并上清液过滤，定容至250mL，得龙葵果提取液，记为样品A。
(4)双水相分离(碳酸钾浓度的影响)：向六个试管中分别加入10mL样品A，然后向试管中加入适量的碳酸钾溶液和水，使溶液总体积为25mL，其中碳酸钾的浓度分别为0.17mg·mL-1、0.19mg·mL-1、0.21mg·mL-1、0.23mg·mL-1、0.25mg·mL-1、和0.27mg·mL-1。将混合溶液充分振荡后，静置10分钟，溶液分成上下两相，分离上、下两相溶液，记为样品B和样品C；将样品B与等体积的浓度为0.45g·mL-1的碳酸钾溶液混合，充分振荡后，静置10分钟，溶液分成上下两相，分离上、下两相溶液，记为样品D和样品E；合并样品C和样品E，记为样品F。
(5)高效液相测定龙葵碱：利用高效液相检测样品A、样品D和样品F中的龙葵碱，高效液相检测条件：色谱柱：TC-C18(4.6mm×25mm,5μm)；紫外检测波长203nm；流动相：0.5％磷酸-乙腈＝70％-30％；进样量：10uL；流速：1.0mL·min-1；柱温：25℃。在此色谱条件下，色谱峰分离良好，澳洲茄碱和澳洲茄边碱的浓度与峰面积呈现良好的线性关系。双水相体系中碳酸钾浓度梯度变化对龙葵碱提取分离的影响如表1所示。
表1双水相体系中碳酸钾浓度梯度变化对龙葵碱提取分离的影响
(6)紫外分光光度计测定龙葵多糖：根据苯酚-硫酸法，利用紫外分光光度计检测样品A、样品D和样品F中的龙葵多糖，具体方法如下：精密吸取葡萄糖对照品储备液0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL，分别置于10mL容量瓶中，加入1mL浓度为5％的苯酚，充分摇匀后，迅速加入5mL浓硫酸，充分摇匀后，置于沸水浴中显色25min，取出加水定容。利用紫外分光光度计测定标准溶液的吸光度，绘制标准曲线。精密吸取供试品1mL，置于10mL容量瓶中，加入1mL浓度为5％的苯酚，充分摇匀后，迅速加入5mL浓硫酸，充分摇匀后，置于沸水浴中显色25min，取出加水定容。利用紫外分光光度计测定供试品溶液的吸光度，根据标准曲线计算供试品溶液的吸光度。双水相体系中碳酸钾浓度梯度变化对龙葵多糖提取分离的影响如表2所示。
表2双水相体系中碳酸钾浓度梯度变化对龙葵多糖提取分离的影响
实施例3
1、仪器与药品
FA104N万分之一分析天平(上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂制造)；日本岛津紫外分光光度计UV2500；美国安捷伦1100高效液相色谱仪；HN99-IID超声波细胞破壁仪(上海汉诺仪器有限公司)。
澳洲茄碱和澳洲茄边碱均由郑州阿尔法化工有限公司提供，纯度高于99.9％；无水乙醇(色谱纯)、乙腈(色谱纯)、无水乙醇(分析纯)和碳酸钾(分析纯)均购于国药集团化学试剂有限公司。
2、具体步骤如下：
(1)龙葵碱对照品溶液的制备：精密称取澳洲茄碱和澳洲茄边碱对照品，分别置于5mL容量瓶中，加入3mL无水乙醇(色谱纯)溶解，定容至刻度，制得浓度为5mg·mL-1的澳洲茄碱和澳洲茄边碱的单个对照品储备液。再精密吸取两种单个对照品储备液各2mL，置于同一10mL容量瓶中，定容至刻度，即得混合对照品溶液。
(2)葡萄糖对照品溶液的制备：精密称取葡萄糖10mg，置于100mL容量瓶中，加入20mL纯净水溶解，定容至刻度，制得浓度为0.1mg·mL-1的葡萄糖对照品储备液。
(3)超声破壁提取：称取龙葵青果10g，加入60％的乙醇溶液100mL，将上述混合物放入打碎机，使龙葵青果充分打碎；将打碎后的混合溶液放入超声破壁仪中，超声破壁50min；然后将混合液离心10min，取上清液，向残渣再加入60％的乙醇50mL，超声破壁50min后，离心后取上清液，合并上清液过滤，定容至250mL，得龙葵果提取液，记为样品A。
(4)双水相分离(乙醇浓度的影响)：向六个试管中分别加入10mL样品A，然后向试管中加入适量的碳酸钾溶液、无水乙醇和水，使溶液总体积为25mL，其中乙醇的浓度分别为24％、28％、32％、36％、40％和44％。将混合溶液充分振荡后，静置10分钟，溶液分成上下两相，分离上、下两相溶液，记为样品B和样品C；将样品B与等体积的浓度为0.45g·mL-1的碳酸钾溶液混合，充分振荡后，静置10分钟，溶液分成上下两相，分离上、下两相溶液，记为样品D和样品E；合并样品C和样品E，记为样品F。
(5)高效液相测定龙葵碱：利用高效液相检测样品A、样品D和样品F中的龙葵碱，高效液相检测条件：色谱柱：TC-C18(4.6mm×25mm,5μm)；紫外检测波长203nm；流动相：0.5％磷酸-乙腈＝70％-30％；进样量：10uL；流速：1.0mL·min-1；柱温：25℃。在此色谱条件下，色谱峰分离良好，澳洲茄碱和澳洲茄边碱的浓度与峰面积呈现良好的线性关系。双水相体系中乙醇浓度梯度变化对龙葵碱提取分离的影响如表3所示。
表3双水相体系中乙醇浓度梯度变化对龙葵碱提取分离的影响
(6)紫外分光光度计测定龙葵多糖：根据苯酚-硫酸法，利用紫外分光光度计检测样品A、样品D和样品F中的龙葵多糖，具体方法如下：精密吸取葡萄糖对照品储备液0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL，分别置于10mL容量瓶中，加入1mL浓度为5％的苯酚，充分摇匀后，迅速加入5mL浓硫酸，充分摇匀后，置于沸水浴中显色25min，取出加水定容。利用紫外分光光度计测定标准溶液的吸光度，绘制标准曲线。精密吸取供试品1mL，置于10mL容量瓶中，加入1mL浓度为5％的苯酚，充分摇匀后，迅速加入5mL浓硫酸，充分摇匀后，置于沸水浴中显色25min，取出加水定容。利用紫外分光光度计测定供试品溶液的吸光度，根据标准曲线计算供试品溶液的吸光度。双水相体系中乙醇浓度梯度变化对龙葵多糖提取分离的影响如表4所示。
表4双水相体系中乙醇浓度梯度变化对龙葵碱提取分离的影响
实施例4
1、仪器与药品
FA104N万分之一分析天平(上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂制造)；日本岛津紫外分光光度计UV2500；美国安捷伦1100高效液相色谱仪；HN99-IID超声波细胞破壁仪(上海汉诺仪器有限公司)。
澳洲茄碱和澳洲茄边碱均由郑州阿尔法化工有限公司提供，纯度高于99.9％；无水乙醇(色谱纯)、乙腈(色谱纯)、无水乙醇(分析纯)和碳酸钾(分析纯)均购于国药集团化学试剂有限公司。
2、具体步骤如下：
(1)龙葵碱对照品溶液的制备：精密称取澳洲茄碱和澳洲茄边碱对照品，分别置于5mL容量瓶中，加入3mL无水乙醇(色谱纯)溶解，定容至刻度，制得浓度为5mg·mL-1的澳洲茄碱和澳洲茄边碱的单个对照品储备液。再精密吸取两种单个对照品储备液各2mL，置于同一10mL容量瓶中，定容至刻度，即得混合对照品溶液。
(2)葡萄糖对照品溶液的制备：精密称取葡萄糖10mg，置于100mL容量瓶中，加入20mL纯净水溶解，定容至刻度，制得浓度为0.1mg·mL-1的葡萄糖对照品储备液。
(3)超声破壁提取：称取龙葵青果10g，加入60％的乙醇溶液100mL，将上述混合物放入打碎机，使龙葵青果充分打碎；将打碎后的混合溶液放入超声破壁仪中，超声破壁50min；然后将混合液离心10min，取上清液，向残渣再加入60％的乙醇50mL，超声破壁50min后，离心后取上清液，合并上清液过滤，定容至250mL，得龙葵果提取液，记为样品A。
(4)双水相分离(温度的影响)：向四个试管中分别加入10mL样品A，然后向试管中加入10mL浓度为0.45g·mL-1的碳酸钾溶液，将混合溶液充分振荡后，分别置于温度为15℃、25℃、35℃、45℃的恒温水浴中静置10分钟，溶液分成上下两相，分离上、下两相溶液，记为样品B和样品C；将样品B与等体积的浓度为0.45g·mL-1的碳酸钾溶液混合，充分振荡后，静置10分钟，溶液分成上下两相，分离上、下两相溶液，记为样品D和样品E；合并样品C和样品E，记为样品F。
(5)高效液相测定龙葵碱：利用高效液相检测样品A、样品D和样品F中的龙葵碱，高效液相检测条件：色谱柱：TC-C18(4.6mm×25mm,5μm)；紫外检测波长203nm；流动相：0.5％磷酸-乙腈＝70％-30％；进样量：10uL；流速：1.0mL·min-1；柱温：25℃。在此色谱条件下，色谱峰分离良好，澳洲茄碱和澳洲茄边碱的浓度与峰面积呈现良好的线性关系。双水相体系中温度梯度变化对龙葵碱提取分离的影响如表5所示。
表5双水相体系中温度梯度变化对龙葵碱提取分离的影响
(6)紫外分光光度计测定龙葵多糖：根据苯酚-硫酸法，利用紫外分光光度计检测样品A、样品D和样品F中的龙葵多糖，具体方法如下：精密吸取葡萄糖对照品储备液0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL，分别置于10mL容量瓶中，加入1mL浓度为5％的苯酚，充分摇匀后，迅速加入5mL浓硫酸，充分摇匀后，置于沸水浴中显色25min，取出加水定容。利用紫外分光光度计测定标准溶液的吸光度，绘制标准曲线。精密吸取供试品1mL，置于10mL容量瓶中，加入1mL浓度为5％的苯酚，充分摇匀后，迅速加入5mL浓硫酸，充分摇匀后，置于沸水浴中显色25min，取出加水定容。利用紫外分光光度计测定供试品溶液的吸光度，根据标准曲线计算供试品溶液的吸光度。双水相体系中温度梯度变化对龙葵多糖提取分离的影响如表6所示。
表6双水相体系中温度梯度变化对龙葵碱提取分离的影响

Claims (6)

1.一种同步提取、分离、测定龙葵青果中龙葵碱和龙葵多糖的方法，其特征在于：该方法将超声破壁、双水相萃取和高效液相联用，同步分离检测龙葵青果中的龙葵多糖和龙葵碱，具体步骤如下：
(1)、配制60％的乙醇溶液，即乙醇和蒸馏水体积比为60：40；称取龙葵青果10g～500g，按比例加入60％的乙醇溶液，将上述混合物放入打碎机，使龙葵青果充分打碎；将打碎后的混合溶液放入超声破壁仪中，超声破壁50min；然后将混合液离心10min，取上清液，向残渣再加入60％的乙醇，超声破壁50min后，离心后取上清液，合并上清液过滤，得龙葵果提取液，记为样品A；
(2)、取5mL～50mL样品A与碳酸钾溶液混合，充分振荡后，静置10分钟，溶液分成上下两相，分离上、下两相溶液，记为样品B和样品C；将样品B与碳酸钾溶液混合，充分振荡后，静置10分钟，溶液分成上下两相，分离上、下两相溶液，记为样品D和样品E；合并样品C和样品E，记为样品F；
(3)、利用高效液相检测样品D和样品F中的龙葵碱，检测结果：样品D中富含龙葵碱，样品F中没有检测出龙葵碱；
(4)、根据苯酚-硫酸法，利用紫外分光光度计检测样品D和样品F中的龙葵多糖，检测结果：样品F中的富含龙葵多糖，样品D中的未检测出龙葵多糖。
2.根据权利要求1所述的一种同步提取、分离、测定龙葵青果中龙葵碱和龙葵多糖的方法，其特征在于：步骤1中所述，按比例加入60％的乙醇溶液，比例为：每克龙葵青果加入10mL的60％的乙醇溶液。
3.根据权利要求1所述的一种同步提取、分离、测定龙葵青果中龙葵碱和龙葵多糖的方法，其特征在于：步骤2中所述碳酸钾溶液的浓度为0.45g·mL-1。
4.根据权利要求1所述的一种同步提取、分离、测定龙葵青果中龙葵碱和龙葵多糖的方法，其特征在于：步骤2中所述样品A与碳酸钾溶液的混合比例为等体积混合；样品B与碳酸钾溶液的混合比例亦为等体积混合。
5.根据权利要求1所述的一种同步提取、分离、测定龙葵青果中龙葵碱和龙葵多糖的方法，其特征在于：步骤3中所述龙葵碱指的是澳洲茄碱和澳洲茄边碱。
6.根据权利要求1所述的一种同步提取、分离、测定龙葵青果中龙葵碱和龙葵多糖的方法，其特征在于：步骤3中所述高效液相检测条件：色谱柱：TC-C18(4.6mm×25mm,5μm)；紫外检测波长203nm；流动相：0.5％磷酸-乙腈＝70％-30％；进样量：10uL；流速：1.0mL·min-1；柱温：25℃；在此色谱条件下，色谱峰分离良好，澳洲茄碱和澳洲茄边碱的浓度与峰面积呈现良好的线性关系。
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